Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-01-03T10:15:16Z No. of bitstreams: 1 jairobarrosweiss.pdf: 2866288 bytes, checksum: 6a66e32be09e44bc95cfaeb7a5534cb2 (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2017-01-31T10:23:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 jairobarrosweiss.pdf: 2866288 bytes, checksum: 6a66e32be09e44bc95cfaeb7a5534cb2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T10:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jairobarrosweiss.pdf: 2866288 bytes, checksum: 6a66e32be09e44bc95cfaeb7a5534cb2 (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / A polpa dentária é considerada uma fonte de células-tronco mesênquimais adultas, e o interesse na obtenção da polpa dentária e na sua estocagem aumentou substancialmente nos últimos anos. As variações na forma de obtenção da polpa mudam drasticamente a característica final do material removido, sendo que manualmente a polpa é obtida em partes maiores, mais estruturada. Já na forma mecanizada, se obtém um material macerado, semi-triturado. A remoção do tecido pulpar por via endodôntica caracteriza uma forma pouco conhecida de se coletar este importante tecido sem a necessidade de extração dentária. Em face das possibilidades de variação na técnica, foi observada a necessidade da elaboração de um estudo para elucidar as variações na coleta dos tecidos pulpares. Trinta polpas dentárias foram colhidas e divididas em dois grupos, sendo quinze polpas removidas por instrumentação mecanizada e outras quinze por instrumentação manual. Após Isolar células-tronco da polpa dentária de dentes permanentes humanos, estas foram caracterizadas quanto à sua viabilidade celular e plasticidade: diferenciação osteogênica e adipogênica. Através da análise dos resultados obtidos observou-se que a técnica de remoção manual da polpa permitiu o estabelecimento de cultura de células-tronco derivadas de polpa dentária de dentes permanentes humanos em 53% das amostras. Não se estabeleceu cultura de células-tronco derivadas de polpa dentária de dentes permanentes humanos, a partir de nenhuma das amostras obtidas pela instrumentação rotatória. / The dental pulp is considered a source of adult mesenchymal stem cells, and the interest in obtaining the dental pulp and its storage has increased substantially in recent years. Variations in the way of obtaining the pulp drastically change the final characteristic of the material removed, and the pulp is obtained manually in larger parts, more structured. In the mechanized mode, obtaining a macerated material, semi-milled. The removal of the pulp tissue via endodontic features a little known form of collecting this important tissue without the need for tooth extraction. Given the range of possibilities in technique, we observed the need to prepare a study to elucidate the changes in the collection of pulp tissues. Thirty dental pulps were collected and divided into two groups, fifteen pulps removed by mechanical instrumentation and fifteen other for manual instrumentation. After isolate stem cells from human dental pulp of permanent teeth, they were characterized as to their cell viability and plasticity: osteogenic differentiation and adipogenic. Through analysis of the results was observed that manual removal technique allowed pulp stem cell culture property derived from human dental pulp of permanent teeth in 53% of samples. Any stem cell culture was established from human dental pulp of samples obtained by rotary instrumentation.

O hidróxido de cálcio (HCa), o agregado de trióxido mineral (MTA) e o óleo-resina de copaíba (COP) isoladamente apresentam características biológicas do material de capeamento pulpar direto mais apropriado. Com o pressuposto que associados poderiam originar materiais mais apropriados para serem aplicados em capeamento pulpar direto, este estudo objetivou analisar in vitro proliferação, diferenciação e migração de células-tronco de polpa de dente decíduo humano esfoliado (SHEDs) em resposta a substâncias liberadas pelo COP isolado ou associado ao HCa ou ao MTA. Proliferação, diferenciação e migração de SHEDs (Linhagem PDH3) foram analisadas através do ensaio de redução do MTT; da atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de nódulos mineralizados pelo ensaio de Vermelho de Alizarina e expressão dos genes (BGLAP, DSPP, DMP1 e HSP-27) pelo qRT-PCR; e, do ensaio do Scratch, respectivamente. As células foram submetidas à ação de meios condicionados pelos biomateriais, de acordo com os seguintes grupos experimentais: COP isolado (COP); HCa isolado (HCa); HCa associado ao COP (HCa+COP); MTA isolado (MTA) e MTA associado ao COP (MTA+COP). Células crescidas em meio de cultura fresco serviram de controle. Os dados foram comparados utilizando ANOVA complementado pelo teste de Tukey (p 0,05). O grupo HCa apresentou número de células viáveis significativamente menor que o dos demais grupos, inclusive o do grupo HCa+COP (p<0,01) em todos os tempos experimentais. A atividade de ALP em 14 dias foi similar em todos os grupos experimentais. Em 21 dias, o grupo COP apresentou quantidade maior de mineralização que os demais grupos (p<0,01) e o grupo HCa+COP maior que o grupo HCa (p<0,01). O gene DMP1 não foi expresso pelas células em nenhum grupo experimental. O grupo COP apresentou as menores expressões dos genes BGLAP, DSPP e HSP-27. As SHEDs do grupo MTA+COP apresentaram superexpressão dos genes BGLAP, DSPP e HSP-27, e as do grupo HCa+COP superexpressão dos genes BGLAP e HSP-27. O grupo HCa foi o único que não apresentou células em migração em todos os tempos experimentais. Os demais grupos apresentaram migração similar à do grupo Controle, exceto o grupo MTA em 12 e 24 horas. As SHEDs dos grupos HCa+COP e MTA+COP migraram significativamente mais que as dos grupos HCa e MTA, respectivamente. O COP, isolado ou em associação aos demais biomateriais, não interfere na proliferação de SHEDs e quando associado ao HCa é capaz de anular a citotoxicidade deste biomaterial isolado. O COP, isoladamente ou em associação, não interfere na atividade de fosfatase alcalina. Isoladamente, o COP induz a maior diferenciação funcional e quando associado ao HCa melhora substancialmente a diferenciação induzida por este biomaterial isolado. Os biomateriais isolados ou associados não são capazes de induzir expressão de DMP1. O COP associado aos biomateriais induz superexpressão de genes relacionados à formação de matriz extracelular e de diferenciação odontoblástica. O COP isoladamente não interfere na migração celular e, quando associado ao HCa, anula por completo a inibição de migração causada por esse biomaterial isolado. Quando associado ao MTA, o COP aumenta a velocidade de migração das células em relação ao MTA isolado. Óleo-resina de copaíba (COP) promove proliferação, diferenciação e migração de células-tronco de polpa dental sendo uma proposta de um biomaterial para capeamento pulpar. / The calcium hydroxide (CaH), the mineral trioxide aggregate (MTA) and the oil-resin copaiba (COP) by themselves have biological characteristics of the ideal direct pulp capping material. With the assumption that when associated they could originate materials more appropriated for direct pulp capping, this study aimed to analyze the in vitro proliferation, differentiation and migration of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) in response to substances leached from COP alone or associated with CaH or MTA. Proliferation, differentiation and migration of SHEDs (PDH3 lineage) were analyzed through the MTT reduction assay; alkaline phosphatase (ALP) activity, mineralized nodules formation using the Alizarin Red assay and gene expression (BGLAP, DSPP, DMP1 e HSP-27) using qRT-PCR; and the Scratch assay, respectively. The cells were submitted to the culture medium conditioned by the biomaterials according to the following experimental groups: COP alone (COP); CaH alone (CaH); CaH associated to COP (CaH+COP); MTA alone (MTA) and MTA associated to COP (MTA+COP). Cells grown in fresh culture medium served as control. Data were compared by ANOVA complemented by the Tukey´s test (p 0.05). The CaH group presented number of viable cells significantly smaller (p<0.01) than those of all other experimental groups, including the CaH+COP, during whole experimental time. The ALP activity in 14 days was similar in all experimental groups. In 21 days, the COP group presented the amount of mineralization higher (p<0.01) than those of all other groups. The gene DMP1 was not expressed by the cells in all experimental groups. The COP group presented the smallest expression (p<0.01) of BGLAP, DSPP and HSP-27 genes. The SHEDs of the MTA+COP group presented superexpression of the BGLAP, DSPP and HSP-27 genes, and in the CaH+COP group the cells superexpressed the BGLAP and HSP-27 genes. The CaH group was the only one where there was no cell migration during whole experiment. Migration of all other groups was similar to that of the control group, except by the MTA group in 12 and 24 hours. The CaH+COP and MTA+COP migrated significantly more than the CaH and MTA groups, respectively. COP, alone or in association to the other biomaterials, does not interfere with the proliferation of the SHEDs, and when associated to CaH is able to annul the cytotoxicity of the CaH alone. The COP, alone or in association to the other biomaterials, does not interfere with the ALP activity. The COP alone induces the highest functional differentiation of the SHEDs and when associated to the CaH substantively improves this differentiation. The biomaterials, alone or in association, are not able to induce the expression of the DMP1 gene. The COP associated to the biomaterials induces superexpression of the genes related to the extracellular matrix formation and odontoblastic differentiation. The COP alone does not interfere with the cell migration and, when associate to CaH, completely annuls the inhibition of migration caused by this material alone. When associated to MTA the COP increases the cell migration speed compared to the effect of the MTA alone. Oil-resin copaiba (COP) promotes proliferation, differentiation and migration of stem cells from dental pulp with a proposal for a biomaterial for pulp capping.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2018-04-20T13:11:28Z No. of bitstreams: 2 Giovani _Hartmann2018.pdf: 1083042 bytes, checksum: 4c6c31040314a6b8b1914db7eec998ac (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T13:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Giovani _Hartmann2018.pdf: 1083042 bytes, checksum: 4c6c31040314a6b8b1914db7eec998ac (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-01-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study analyzed sericin as a potential biomaterial in contact with dentin pulp, histologically comparing its response to direct pulp capping with calcium hydroxide. These are the first morphological and functional data derived from application of this protein directly on pulp exposure. 20 maxillary first molars from Wistar male mice were used, with 60 days of age, between 200 and 300 grams, which were divided in 4 groups (n=5): G1 and G3, controls, capped with calcium hydroxide in 7 and 30 days, respectively; G2 and G4, capped with sericin in 7 and 30 days, respectively. Circular cavities were prepared for pulp exposure, where capping materials were applied, being posteriorly restored with glass ionomer cement. At the end of the groups period, animals were euthanized and molars were histologically processed for analysis in light microscopy to evaluate presence of necrosis in pulp tissue, inflammatory cells infiltration and tertiary dentin formation. After 7 days, there was less necrosis and inflammatory cells infiltration in G1 when compared to G2 (p=0.007 and p=0.008, respectively). After 30 days, a sample of G3 induced tertiary dentin formation and G4 showed decrease in inflammation (p=0.041) compared to G2. Among the determined experiment conditions, it was concluded that sericin did not present to be viable to treatment as it did not induce tertiary dentin formation, although, its contact with pulp tissue has shown improve in inflammatory response during the treatment and new cells proliferation. / Este estudo analisou a sericina como potencial biomaterial em contato com a polpa dental comparando histologicamente sua resposta ao capeamento pulpar direto com hidróxido de cálcio. Estes são os primeiros dados morfológicos e funcionais procedentes da aplicação desta proteína diretamente sobre a exposição da polpa. Foram utilizados 20 primeiros molares superiores de ratos Wistar machos, com 60 dias de idade entre 200 e 300 gramas, os quais foram divididos em 4 grupos (n=5): G1 e G3, controles, capeados com hidróxido de cálcio em 7 e 30 dias, respectivamente; G2 e G4, capeados com sericina em 7 e 30 dias, respectivamente. Cavidades circulares foram preparadas para exposição pulpar, onde foram aplicados os materiais capeadores, sendo posteriormente restauradas com cimento de ionômero de vidro. Transcorridos os tempos dos grupos, os animais foram eutanasiados e os molares foram processados histologicamente para análise em microscopia de luz para avaliar presença de necrose no tecido pulpar, infiltração de células inflamatórias e formação de dentina terciária. Aos 7 dias, a necrose e a infiltração de células inflamatórias foram menores em G1 quando comparado ao G2 (p=0,007 e p=0,008, respectivamente). Aos 30 dias, uma amostra do G3 induziu formação de dentina terciária e G4 apresentou diminuição de inflamação (p=0,041) em relação ao G2. Dentro das determinadas condições experimentais, concluiu-se que a sericina não se mostrou viável ao tratamento por não induzir formação de dentina terciária, entretanto, seu contato com o tecido pulpar demonstrou melhora na resposta inflamatória ao longo do tratamento e proliferação de novas células.

A translação da regeneração pulpar com células tronco para a clinica requerirá o uso de scaffolds injetáveis. O objetivo foi estudar o comportamento de células tronco obtidas de dentes decíduos exfoliados (SHED) injetados em canais radiculares de pré-molares humanos com ápice aberto com scaffold de colágeno recombinante humano tipo I (rhC-I) e a base de nanofibras auto-organizáveis (SA). Para determinar a viabilidade e potencial de diferenciação de SHED in vitro, raízes nao instrumentadas foram posicionadas com o ápice em meio de cultura. SHED ressuspendida em rhC e SA foram injetadas nos canais (n=24, 5X105 células/mL). Os controles foram SHED e scaffolds sozinhos. Marcadores para diferenciação odontoblastica (DSPP, DMP-1 e MEPE) foram avaliados semanalmente por RT-PCR por 28 dias. Para avaliar a diferenciação odontoblástica e formação de tecido in vivo, SHED transuzida com GFP foram injetadas em canais radiculares (n=8, 106 célulass/mL) utilizando os mesmos grupos e implantadas subcutaneamente em camundongos imunodeprimidos. O controle (C+) foi um pré-molar humano extraído. Analise estatística foi feita com ANOVA (=0.05). Os marcadores de diferenciação odontoblástica aumentaram para SA e rhC-I mas nao nos controles. Crescimento de tecido pulpar-símile ( do que 60% do comprimento da raiz) foi observado em 75% dos implantes para SA e rhC-I e 0% nos controles. Analise de imunohistoquimica para GFP confirmou a origem tecidual a partir de SHED. PCNA e ensaio de TUNEL mostraram alta ativiade proliferativa e poucas células apoptóticas. Injeções de tetraciclina evidenciaram neoformação de dentina. A densidade microvascular e nomero de odontoblastos delineando a dentinta foi similar em rhC-I, SA e C+. A associação de SHED com scaffolds injetáveis foi capaz de originar um tecido pulpar capaz de produzir dentina e constitui um passo a mais frente ao objetivo de regeneração pulpar em pacientes humanos. / The translation of dental pulp regeneration with stem cells to the clinic will require the use of injectable scaffolds. The aim was to study the behavior of stem cells from exfoliated deciduous teeth (SHED) injected in the root canal of opened-apex human premolars with either recombinant human collagen I (rhC-I) or selfassembling nanofiber (SA) scaffolds. To assess in vitro SHED viability and differentiative potential, non-instrumented roots were set with the apex in culture media. SHED were mixed in rhC-I or SA and injected into canals (n=24, 5X105 cells/mL). Controls were SHED or scaffolds alone. Odontoblastic differentiation markers (DSPP, DMP-1 and MEPE) were assessed weekly by RT-PCR for 28 days. To evaluate odontoblast differentiation and tissue formation in vivo, SHED transduced with GFP were injected in canals (n=8, 106 cells/mL) using same groups and implanted subcutaneously in immunodeficient mice. Positive control (C+) was extracted premolar. Statistic was done with ANOVA (=0.05). Odontoblastic differentiation markers increased in SA and rhC-I but not in controls. Pulp-like tissue growth ( than 60% of root length) was observed in 75% of implants for SA and rhC-I and 0% in controls. GFP staining confirmed SHEDs tissue origin. PCNA staining and TUNEL assay showed high proliferative activity and few apoptotic cells. Tetracycline injections showed newly formed dentin. Microvessel density and odontoblastic-like cell number lining dentin were similar in rhC-I, SA and C+. Injectable scaffolds and SHED allowed for the engineering of a pulp-like tissue and constitute one step forward towards the goal of dental p ulp regeneration in human patients.

A polpa dentária pode responder a uma agressão pela produção de dentina reacional e reparativa. Osteopontina (OPN), proteína abundante no osso, e proteína da matriz dentinária 1 (DMP1) podem estar presentes nessas dentinas. O objetivo do trabalho foi examinar a ultra-estrutura e a presença da OPN e DMP1 na dentina induzida pela extrusão de incisivos. Os incisivos de ratos foram extruídos e depois reposicionados. Após períodos de tempo determinados, as maxilas foram processadas para MET, MEV e imunocitoquímica. Após extrusão, houve formação de dentina reacional e reparativa, as quais variaram em aspecto, espessura e células secretoras. A OPN foi observada apenas na dentina reparativa num padrão semelhante ao encontrado no osso. A DMP1 foi detectada na matriz em mineralização de todas as dentinas estudadas, mas praticamente não foi observada nas suas pré-dentinas, o que confirmou o seu papel na mineralização. Tais achados mostraram que a dentina reparativa e o osso primário, além de semelhantes morfologicamente, são também similares com relação às suas composições / Reactionary dentine (Rc) and (Rp) reparative dentine are two strategies used by the dentine?pulp complex to respond to injury. Osteopontin (OPN) and dentine matrix protein 1 (DMP1) may be present in the matrix secreted after tissue injury. The aim of the present study was to examine the ultrastructure, as well as the presence of OPN and DMP1 in Rc and Rp by provoking extrusion of the rat incisor. The right upper incisors of rats were extruded and then repositioned. After certain periods of time, the maxillae were processed for scanning and transmission electron microscopy and for immunocytochemistry. After extrusive trauma, there was formation of Rc and Rp, which varied in aspect and thickness. OPN was only detected in the Rp in a pattern similar to bone. DMP1 was immunodetected in all the dentine types, but rare colloidal gold particles were observed in predentin, that confirmed its role in mineralization. The present findings showed that Rp shares some compositional characteristics with primary bone, especially in relation to its OPN content

Orientador: Alan Roger dos Santos Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-23T07:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Faria_KarinaMorais_M.pdf: 4445653 bytes, checksum: 36b816cb52f434b02b350071fe5e34ea (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O tratamento do câncer de cabeça e pescoço está associado a uma série de toxicidades bucais. Neste contexto, evidências clínicas recentes demonstraram que a radioterapia em cabeça e pescoço provoca alterações na microvascularização e na inervação pulpar. Entretanto, estas alterações não foram demonstradas por meio de estudos morfológicos do tecido pulpar oriundo de pacientes oncológicos. Portanto, esta dissertação se propôs a investigar os efeitos diretos da radioterapia sobre a microvascularização, a inervação e a matriz extracelular da polpa de pacientes com câncer de cabeça e pescoço que foram submetidos à radioterapia. Foram utilizadas 40 amostras de polpa dental humana que foram divididas em dois grupos. No grupo irradiado, foram utilizadas 23 amostras de polpa obtidas de pacientes que haviam concluído radioterapia na região de cabeça e pescoço. O grupo controle foi composto por 17 amostras de polpas obtidas de pacientes sem histórico de radioterapia. Os espécimes dos dois grupos foram processados histologicamente e submetidos à coloração por meio da técnica da hematoxilina e eosina para avaliação morfológica da microvascularização, da inervação e da matriz extracelular das polpas. Adicionalmente, foi realizada análise da expressão imunoistoquímica (IHQ) de proteínas relacionadas à vascularização (CD-34 e actina músculo liso), à inervação (S-100; NCAM/CD56 e neurofilamento) e à matriz extracelular (vimentina) da polpa. O estudo morfológico identificou a presença e a preservação da microvasculatura, dos feixes neurais e da matriz extracelular em todas as amostras. A análise IHQ confirmou os achados morfológicos e demonstrou expressão preservada dos marcadores analisados em todas as amostras. Em conclusão, os efeitos diretos da radioterapia não são capazes de gerar alterações morfológicas na microvasculatura, na inervação e na matriz extracelular da polpa dental de pacientes com câncer de cabeça e pescoço / Abstract: The treatment of head and neck cancer is associated with a series of oral toxicities. In this context, recent clinical evidence demonstrated that head and neck radiotherapy causes changes in the microvasculature and innervation. However, such changes have not been demonstrated by morphological studies of the pulp tissue derived from cancer patients. Therefore, this essay aimed to investigate direct effects of radiation on the microvasculature, innervation and extracellular matrix of the pulp from patients with head and neck cancer who underwent radiotherapy. Forty samples of human dental pulp were used and were divided into two groups. In the irradiated group, 23 samples from patients who concluded head and neck radiotherapy were used. The control group was composed with 17 pulp samples obtained from patients without previous history of radiotherapy. Samples from both groups were histologically processed and stained with hematoxylin and eosin for a morphological evaluation of the microvasculature, innervation and extracellular matrix of the pulps. Subsequently, an immunohistochemical (IHC) analysis of proteins related to vascularization (CD-34 and smooth muscle actin), innervation (S-100, NCAM/CD56 and neurofilament) and extracellular matrix (vimentin) of the pulps was performed. The morphological study identified the presence and preservation of the microvasculature, nerve bundles and extracellular matrix of all studied samples. The IHC analysis confirmed the morphological findings and demonstrated a preserved expression for the studied markers in all samples. In conclusion, direct effects of radiotherapy are not able to generate morphological changes in the microvasculature, innervation or extracellular matrix of the dental pulp from patients with head and neck cancer / Mestrado / Estomatologia / Mestra em Estomatopatologia

Orientador: Francisco José de Souza Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T03:24:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marion_JeffersonJosedeCarvalho_D.pdf: 27665945 bytes, checksum: 849cd1484ec134422fbd4351ca11630e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O tratamento por meio de revitalização do canal radicular tem sido considerado para dentes com rizogênese incompleta e polpa necrosada. A revitalização do canal radicular compreende a descontaminação do canal e o preenchimento do mesmo com coágulo visando a invaginação do espaço do canal com tecido conjuntivo e consequente revitalização do espaço pulpar desvitalizado. O objetivo deste estudo foi analisar histologicamente os efeitos da ampliação do forame apical no procedimento de revitalização do canal radicular em dentes de cães, com polpa vital ou necrosada, e com ápices completamente formados. Foram utilizados 2 cães da raça Beagle, que foram divididos em 5 grupos: G.1 - necrose pulpar com coágulo sanguíneo; G.2 - necrose pulpar com medicação intracanal (associação de Ca(OH)2 com CLX gel 2%); G.3 - controle positivo polpa vital com coágulo sanguíneo; G.4 - controle positivo polpa vital com medicação intracanal (associação de Ca(OH)2 com CLX gel 2%); G.5 - controle negativo - canais radiculares com lesões apicais induzidas. Para a indução de necrose pulpar e desenvolvimento das lesões periapicais, os dentes foram mantidos abertos para contaminação dos canais radiculares pelo período de 180 dias. Os canais foram tratados pela técnica crown-down e os forames apicais ampliados até a lima K #40. Os resultados demonstraram que no grupo G.1 houve revitalização do canal radicular, total ou parcial, em 63,6% dos dentes. No grupo G.2 em 77,8% dos casos houve revitalização parcial ou total do canal radicular. No grupo G.3 houve revitalização do canal radicular, parcial ou total, em 100% dos casos. No grupo G4 não houve revitalização do canal radicular em 100% dos casos (houve selamento biológico apical). No grupo G.5 em 100% dos casos houve formação de lesão periapical. Desta forma, pode se concluir que a revitalização do canal radicular em dentes com necrose pulpar ocorreu em maior percentual no grupo com medicação intracanal, enquanto que, nos dentes com polpa vital a revitalização do canal radicular ocorreu em maior porcentagem no grupo com coágulo / Abstract: Treatment through revitalization of the root canal has been considered for teeth with incomplete root formation and necrotic pulp. The revitalization of root canal includes canal decontamination and filling with clot aiming the invagination of canal space with connective tissue and consequent revitalization of the devitalized pulp space. The aim of this study was to histologically analyze the effects of apical foramen enlargement in root canal revitalization procedure in dogs' teeth, with vital or necrotic pulp, with completely formed apices. Two Beagle dogs were divided into 5 groups: G.1 - pulp necrosis with blood clot; G.2 - pulp necrosis with intracanal medication (association of Ca(OH)2 with 2% chlorhexidine gel); G.3 - positive control vital pulp with blood clot; G.4 - positive control vital pulp with intracanal medication (association of Ca(OH)2 with 2% chlorhexidine gel); G.5 - negative control - root canals with induced apical lesions. For induction of pulp necrosis and periapical lesion development, the teeth were kept open to root canals contamination for a period of 180 days. The root canals were treated by crown-down technique and apical foramen was enlarged to #40 K file. The results showed that in G.1 group there was root canal revitalization, partial or total, in 63.6% of teeth. In G.2 group, partial or complete root canal revitalization occurred in 77.8% of cases. In G.3 group, partial or total revitalization of root canals occurred in 100% of cases. In G.4 there was no revitalization of the root canal in 100% of cases (there were biological apical sealing). In the group G.5, in 100% of cases there was formation of apical lesions. Therefore, it can be concluded that the revitalization of the root canal in teeth with pulp necrosis occurred in higher percentage in the group with intracanal medication, whereas in teeth with vital pulp, revitalization root canal occurred in higher percentage in the group with clot / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba. / Made available in DSpace on 2018-08-20T07:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_Antonio_D.pdf: 1732816 bytes, checksum: 096baa99c2c44691f13c84162ea4d4e4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar o poder de dissolução pulpar da solução de hipoclorito de sódio (NaOCl) em função da concentração e tempo de contato por meio de uma nova metodologia. Foram utilizados 120 dentes incisivos recém extraídos de bovinos armazenados em freezer à -20oC. O dente foi seccionado de modo a manter 15 mm da raiz a partir do ápice e, então inserido em alvéolo artificial confeccionado com silicona de adição. Removeu-se o dente do alvéolo e seccionou-o em duas partes. No fragmento apical (5 mm) a polpa foi mantida. No fragmento coronário (10 mm) a polpa foi removida e o canal radicular regularizado com brocas largo #3 e #4, onde seria preenchido com a solução irrigadora testada. Os dentes foram remontados no alvéolo artificial e os fragmentos unidos por meio do cimento resinoso autoadesivo RelyX U100 (3M ESPE). Foi utilizado o NaOCl 1% (n=30), 2.5% (n= 30) e 5.25% (n=30) em tempos de 10, 30 e 60 minutos de contato com a polpa do fragmento apical, renovando-a em intervalos de 10 minutos. Solução fisiológica foi utilizada como controle (n=30). Após os tempos, os dentes foram removidos dos alvéolos e os fragmentos separados. O fragmento coronário foi descartado e o apical colocado em tubo de ensaio contendo solução de formol 10% e submetido a processamento histológico onde cortes de 7mm foram obtidos. As lâminas foram fotografadas em microscópio óptico binocular em aumentos de 40X e com auxílio do programa ImageTools 3.0 analisou-se à area da polpa dissolvida. Análise estatística foi realizada utilizando o teste de Kruskal-Wallis (p<0,05) que mostrou não haver diferenças estatísticas significativas entre as concentrações de 1% e 2.5% nos tempos de 10 e 30 minutos, com dissolução pulpar de 8,31% (±4,69%) e 11,22% (±6,75%) e de 34,33% (±25,53%) e 32,92% (±33,02%) respectivamente. Observou-se que, tanto o NaOCl 1% quanto o 2.5% no tempo de 10 minutos, não apresentou diferenças estatísticas significativas em relação ao soro fisiológico (2,53% ± 2,10%). No tempo de 60 minutos é que foi observada diferença estatística significativa entre o NaOCl 1% e 2.5%, com dissolução pulpar de 64,23% (±24,46%) e 95,24% (±5,76%) respectivamente. Para o NaOCl 5.25% a dissolução pulpar foi maior que o NaOCl 1% e 2.5% nos tempos de 10 e 30 minutos com diferenças estatísticas significativas, porém, em 60 minutos não apresentou diferenças estatísticas signifativas em relação ao NaOCl 2.5%. Quando o NaOCl 5.25% permaneceu por 60 minutos de contato houve 100% de dissolução pulpar. Concluiu-se que a metodologia utilizada mostrou-se adequada em analisar a dissolução tecidual, e que esta foi maior à medida em que se aumentou a concentração e o tempo de contato do NaOCl / Abstract: This work aimed to assess the pulp dissolution capacity of sodium hypochlorite solution (NaOCl) according to concentration and contact time using a new methodology. One hundred and twenty recently extracted mandibular bovine incisors, stored in a freezer at -20oC, were used. Teeth were cut at 15 mm from the root apex and inserted in an artificial socket made of addition silicone impression material. The teeth were then removed from the socket and sectioned in two parts. Pulp was kept intact in the 5 mm apical fragment while in the coronal fragment (10 mm) the pulp was removed and the canal walls enlarged using # 3 and # 4 largo drills, so that it could be filled with the tested solutions. Teeth were rebuilt in the artificial socket and fragments bonded using the self-adhesive resin cement RelyX U100 (3M ESPE). NaOCI solution at 1% (n=30), 2.5% (n=30) and 5.25% (n=30) were tested at 10, 30, and 60 minutes contact with the pulp of the apical fragment, renewing the solution every 10 minutes. Saline solution irrigation was used as control. The teeth were then removed from the socket and the apical and coronal fragments separated. The coronal fragment was discarded and the apical fragment put into a test-tube containing formaldehyde solution 10% followed by histological processing. Sections of 7?m were obtained. Slides were photographed under an optic binocular 40X microscope and, the area dissolved by the action of irrigation solutions was analyzed using ImageTools 3.0 software. Statistical analysis was performed employing Kruskal-Wallis (p<0.05). Results showed that there were no significant statistical difference between 1% and 2.5% NaOCl in 10 and 30 minutes of contact, with pulp dissolution of 8,31% (±4,69%) and 11,22% (±6,75%) and 34,33% (±25,53%) and 32,92% (±33,02%), respectively. It was also observed that there were no significant statistical differences between both 1% and 2.5% NaOCl and saline solution (2,53% ± 2,10%) at 10 minutes of contact. Only at 60 minutes was there significant statistical difference between NaOCl 1% and 2.5%, with the dissolution of pulp at 64,23% (±24,46%) and at 95,24% (±5,76%), respectively. Pulp dissolution was greater for 5.25% than 1% and 2.5% NaOCI in 10 and 30 minutes contact with significant statistical difference, but at 60 minutes there were no difference for 2.5% NaOCl. Only when the NaOCl 5.25% remained in contact for 60 minutes there was 100% pulp dissolution. It is possible to conclude that the methodology employed was appropriate to examine bovine pulp tissue dissolution using NaOCl. Tissue dissolution increased with concentration and contact time / Doutorado / Doutor em Clínica Odontológica

A terapia celular com células-tronco (CT) surgiu nos últimos anos como uma esperança para o tratamento de doenças, sem tratamento efetivo, como a osteoartrite (OA) em joelho. Nesse trabalho utilizamos células-tronco imaturas de polpa dentária humana (CTPD) cultivadas ou não em associação com biomateriais para o tratamento de lesões osteoarticulares em joelhos de ovinos. As CTPD humanas foram transduzidas com o gene repórter, EGFP, facilitando o monitoramento das mesmas in vitro e in vivo, após o implante na articulação femorotibiopatelar de ovinos. A capacidade de adesão e acomodação das células de polpa dentária no biomaterial foi observada in vitro 24 horas e um mês após sua aplicação no mesmo, sendo a viabilidade celular semelhante em ambos os períodos, porém com uma maior dispersão celular no período mais longo, segundo as análises realizadas por técnicas de microscopia eletrônica de varredura e histologia. Ainda para a realização das análises histológicas, foram realizadas técnicas para padronizar os métodos de descalcificação e inclusão do tecido ósseo-articular, prévio aos cortes. Exames radiográficos, ultrassonográficos e artroscópicos foram feitos para acompanhar a evolução dos tratamentos. Os resultados revelaram que as CTPD humanas aderem bem ao biomaterial e que em associação possuem uma excelente capacidade aparente de reconstituição do tecido lesado. Com a realização deste trabalho, concluímos que o protocolo de terapia utilizado é um bom modelo para o estudo de OA e serve para futuras aplicações clínicas. / Cell therapy with stem cells (CT) has emerged in recent years as a hope for the treatment of diseases without effective treatment, such as osteoarthritis (OA) in knee. In this work we use stem cells from immature human dental pulp (hSCIDP) in association or not with biomaterials for the treatment of osteoarticular lesions in sheep´s kneef. The human hSCIDP were transduced with the reporter gene EGFP, thus making easier monitoring these in vitro and in vivo after implantation in sheep´s femorotibiopatelar joint. The capacity of adhesion and accommodation of dental pulp cells in the biomaterial in vitro was observed 24 h and one month after its application, resulting in similar cell viability in both periods, but with a greater cell dispersion in the longer, period, according to analysis performed by scanning electron microscopy and histology. Moreover, some histological techiniques were performed to standardize the methods for inclusion and decalcification of bone tissue joints. Radiographic, ultrasonographic and arthroscopic analyses were made to monitor the progress of treatment. The results revealed that the human hSCIDP adhere well to the biomaterial and have an excellent apparent reconstitution of damaged tissue. With this work, we conclude that the therapy protocol used is a good model for studying OA and useful for future clinical applications.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_marcus_cristian_muniz_conde.pdf: 3350332 bytes, checksum: a91e9eb1b05eba094cafdfee07a22a72 (MD5) Previous issue date: 2012-09-25 / Physicochemical properties and biological applicability of materials to be used in Tissue Engineering (TE) have great interest in the development of innovations in biotechnology. In dentistry research incomes every day and clarify the possibility to implement therapies for regeneration of dental pulp in clinical practice in a short time period. Such translation will require the ability to build a pulp tissue that completely fills the root canal dentin and produce appropriate vascularization to perform the metabolic exchanges needed for human tissues. To do it, we need achieve some advances; standardization of techniques and materials, which produce completely safe results, is essential to do the translation from the lab assays to RCT in humans. Based on that, the aim of this study was to perform a systematic review of the literature to analyze the knowledge regarding the importance of the interface between stem cells and scaffolds. Thereafter, we identify some gaps of knowledge in this field, as well as the techniques that have been employed today with potential to establish the transition from laboratory research to clinical. Among the obtained results, we have detected that the scaffold s physical properties, although imperative in determining cellular behavior were, little exploited since the advent of pulp stem cells. So, we carried out a study to evaluate the influence of the pore size on the proliferation and differentiation of Dental Pulp Stem Cells (DPSCs) in vitro. In order to obtain two different pore sizes (150-250μm and 251-450μm), sodium chloride was sieved and used as the porogen-inducer. Tooth slices (1-mm thickness) were obtained from recently extracted third molars and after pulp tissue removal, scaffolds with both porogen inducer sizes were prepared using PLLA (Poly-L-lactic acid) inside the pulp chamber. DPSCs (1 x 105 cells) were seeded in the scaffolds with different porosities, in 24-well plates with specific medium. The cell proliferation was evaluated using the WST1 assay at 3, 7, 14 and 21 days intervals. Also, after 21 days of culture, the RNA of seeded cells was extracted using Trizol and RT-PCR technique was used to assess the differentiation of the DPSCs in odontoblasts, using putative odontoblast markers (DSPP, DMP1 and MEPE). RNA from fresh odontoblasts was used as a control. Cell proliferation rate was similar in both scaffolds except for the 14 days period, when the cells seeded in the scaffolds with larger porosities showed higher proliferation (p<0.05). After 21 days DPSCs seeded into the dentin slices expressed the differentiation odontoblastic markers, independently of the pore sizes. The two different pore sizes tested allowed the DPSCs proliferation and differentiation / Propriedades físico-químicas e aplicabilidade biológica de materiais para aplicação em Engenharia Tecidual (ET) são de grande interesse e crescente importância no desenvolvimento de inovações na área de biotecnologia. Na odontologia as pesquisas avançam a cada dia e demonstram que no futuro será possível aplicar terapias para regeneração da polpa dental na prática clínica. Essa transição demandará a capacidade de construção de um tecido pulpar que preencha completamente o canal radicular, produza dentina e tenha uma vascularização suficiente para realização das trocas metabólicas teciduais. Para isso avanços ainda precisam acontecer; a padronização de técnicas e materiais que produzam resultados seguros é indispensável para que as terapias baseadas nos princípios da ET possam ser utilizadas em ensaios clínicos em humanos. O objetivo desse estudo foi realizar uma revisão sistemática da literatura para analisar as técnicas baseadas em Stem Cell-Based Therapy com potencial de estabelecer a transição das pesquisas laboratoriais para avalições clínicas em um futuro próximo. Após a revisão, algumas lacunas no conhecimento foram claras.. Assim, foi realizado um estudo para avaliar a influência do tamanho de poros de scaffolds, a base de PLLA, na proliferação e diferenciação de DPSCs. Para a obtenção de dois diferentes tamanhos de poros (150-250μm e 251-450μm), utilizamos cloreto de sódio como porógeno. Tooth Slices (1 mm de espessura) foram obtidos de terceiros molares humanos recém extraídos. O espaço correspondente à câmara pulpar foi preenchido com o sal, e então coberto com uma solução PLLA. Após a remoção a polimerização do PLLA e remoção do sal com água destilada foram semeadas DPSC (1 x 105 cells) nos scaffolds com diferentes porosidades. A proliferação celular foi avaliada após períodos específicos (3, 7, 14 e 21 dias) utilizando o método WST1. Após 21 dias em cultivo, realizamos o isolamento do RNA, do tecido produzido nos TS, utilizando Trizol®. Avaliamos a diferenciação odontoblástica através de RT-PCR através da expressão de marcadores odontoblásticos (DSPP, DMP1, MEPE), normalizados contra o GAPDH. O RNA de odontoblastos humanos foi o controle positivo. As taxas de proliferação celular foram similares nos dois grupos experimentais. Entretanto, após 14 dias de cultivo, as células cultivadas nos scaffolds com maiores porosidades apresentaram uma taxa de proliferação significativamente maior (p<0,05). Após 21 dias de cultivo nos TS, as DPSCs expressaram os três MO, independente do tamanho dos poros. Os tamanhos de poros aplicados por nós foram capazes de sustentar a proliferação e diferenciação das DPSC semeadas nos TS