Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:46:18Z : No. of bitstreams: 1 000843662.pdf: 3263526 bytes, checksum: 3834c7b8c2dd7d42cbcbd22ff55f8632 (MD5) / Células-tronco da polpa dentária humana são promissoras no tratamento endodôntico, porém antes de utilizá-las clinicamente, deve-se entender suas propriedades biológicas em resposta a estímulos, como o ácido lipoteicóico (LTA) bacteriano. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento de células SHED (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth) após exposição ao LTA bacteriano, verificando os efeitos na proliferação e metabolismo celular, atividade da fosfatase alcalina, deposição de cálcio, expressão de genes associados à mineralização, e liberação de citocinas. Foram utilizadas células SHED tratadas com LTA em diferentes concentrações, sem e com indutores da mineralização (IM). O metabolismo e a proliferação celular foram avaliados pelos ensaios de XTT e SRB. As células foram submetidas a um ensaio enzimático da atividade de fosfatase alcalina, para observação da ativação de processos de mineralização. E foi analisada qualitativamente a presença de deposição de cálcio pelas células pelo ensaio de alizarin vermelho (ARS). A expressão dos genes DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) e DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) foi avaliada pela técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction). O teste ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) foi realizado para detectar e quantificar as citocinas IL-1ß (Interleucina-1ß), IL-6 (Interleucina-6), TNF-α (Fator de Necrose Tumoral-α). Os dados obtidos nos ensaios quantitativos foram analisados estatisticamente por ANOVA complementada pelo teste de Tukey (p<0,05). Foi observado um aumento no metabolismo e proliferação celular com o tempo, não havendo diferenças entre os grupos testados em cada período. Nos grupos sem IM, observou-se um aumento da atividade da fosfatase alcalina das células expostas ao LTA comparados ao controle. Os grupos com indutores de mineralização apresentaram maiores quantidades... / Dental pulp stem cells are promising in endodontics, but before clinical treatment it should be studied to understand its biological properties in response to stimuli such as lipoteichoic acid (LTA). The aim of this study was to evaluate the behavior of Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth (SHED) exposed to LTA, analyzing cell proliferation and metabolism, alkaline phosphatase activity, calcium deposition, gene expression, cytokines production. SHED cells were treated with LTA, in different concentrations, without and with mineralization induction (MI). Cell metabolism and proliferation were evaluated by XTT and SRB. Alkaline phosphatase activity was performed to indicate mineralization process. Also, calcium deposition was observed qualitatively by alizarin red. Gene expression of DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) and DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) was evaluated by PCR (Polymerase Chain Reaction). Cytokines IL-1ß (Interleukin-1ß), IL-6 (Interleukin-6), TNF-α (Tumor Necrosis Factor-α) were detected and quantified by ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Statistical analysis of quantitative tests were performed by ANOVA and Tukey test (p<0,05). Metabolism and cell proliferation increased with time and no differences were observed between groups in each period. In groups without MI, there was an increase in alkaline phosphatase activity of cells exposed to LTA compared to control. Groups with mineralization induction showed more calcium deposition, compared to the groups without MI. After 3 days, cells treated with LTA showed more areas of calcification compared to control, and after periods of 7 and 14 days were similar. All groups tested expressed genes DSPP and DMP-1, being slightly higher in groups with MI. The expression of IL-1ß and TNF-α by cells of the tested groups were similar, and IL-6 concentration was expressive, with differences between groups and time periods. According to the methodology and analysis ...l

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Co-orientador: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Marcia Carneiro Valera Garakis / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Resumo: Células-tronco da polpa dentária humana são promissoras no tratamento endodôntico, porém antes de utilizá-las clinicamente, deve-se entender suas propriedades biológicas em resposta a estímulos, como o ácido lipoteicóico (LTA) bacteriano. O objetivo deste estudo foi avaliar o comportamento de células SHED (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth) após exposição ao LTA bacteriano, verificando os efeitos na proliferação e metabolismo celular, atividade da fosfatase alcalina, deposição de cálcio, expressão de genes associados à mineralização, e liberação de citocinas. Foram utilizadas células SHED tratadas com LTA em diferentes concentrações, sem e com indutores da mineralização (IM). O metabolismo e a proliferação celular foram avaliados pelos ensaios de XTT e SRB. As células foram submetidas a um ensaio enzimático da atividade de fosfatase alcalina, para observação da ativação de processos de mineralização. E foi analisada qualitativamente a presença de deposição de cálcio pelas células pelo ensaio de alizarin vermelho (ARS). A expressão dos genes DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) e DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) foi avaliada pela técnica do PCR (Polymerase Chain Reaction). O teste ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) foi realizado para detectar e quantificar as citocinas IL-1ß (Interleucina-1ß), IL-6 (Interleucina-6), TNF-α (Fator de Necrose Tumoral-α). Os dados obtidos nos ensaios quantitativos foram analisados estatisticamente por ANOVA complementada pelo teste de Tukey (p<0,05). Foi observado um aumento no metabolismo e proliferação celular com o tempo, não havendo diferenças entre os grupos testados em cada período. Nos grupos sem IM, observou-se um aumento da atividade da fosfatase alcalina das células expostas ao LTA comparados ao controle. Os grupos com indutores de mineralização apresentaram maiores quantidades... / Abstract: Dental pulp stem cells are promising in endodontics, but before clinical treatment it should be studied to understand its biological properties in response to stimuli such as lipoteichoic acid (LTA). The aim of this study was to evaluate the behavior of Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth (SHED) exposed to LTA, analyzing cell proliferation and metabolism, alkaline phosphatase activity, calcium deposition, gene expression, cytokines production. SHED cells were treated with LTA, in different concentrations, without and with mineralization induction (MI). Cell metabolism and proliferation were evaluated by XTT and SRB. Alkaline phosphatase activity was performed to indicate mineralization process. Also, calcium deposition was observed qualitatively by alizarin red. Gene expression of DSPP (Dentin Sialophosphoprotein) and DMP-1 (Dentin Matrix Protein-1) was evaluated by PCR (Polymerase Chain Reaction). Cytokines IL-1ß (Interleukin-1ß), IL-6 (Interleukin-6), TNF-α (Tumor Necrosis Factor-α) were detected and quantified by ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay). Statistical analysis of quantitative tests were performed by ANOVA and Tukey test (p<0,05). Metabolism and cell proliferation increased with time and no differences were observed between groups in each period. In groups without MI, there was an increase in alkaline phosphatase activity of cells exposed to LTA compared to control. Groups with mineralization induction showed more calcium deposition, compared to the groups without MI. After 3 days, cells treated with LTA showed more areas of calcification compared to control, and after periods of 7 and 14 days were similar. All groups tested expressed genes DSPP and DMP-1, being slightly higher in groups with MI. The expression of IL-1ß and TNF-α by cells of the tested groups were similar, and IL-6 concentration was expressive, with differences between groups and time periods. According to the methodology and analysis ...l / Mestre

Orientador: Samira Esteves Afonso Camargo / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Mônica Ghislaine Oliveira Alves / Banca: Cristina Pacheco Soares / Banca: Cacio de Moura Netto / Resumo: O peptídeoLL-37 (catelicidina derivada de humano), é liberado por algumas células humanas e capaz de neutralizar os tecidos com lipopolissacarídeo (LPS), além de atrair células da polpa, e induzir a angiogênese, características que o tornam um possível adjunto para a regeneração do complexo dentino-pulpar. O objetivo desse trabalho foi avaliar in vitro a biocompatibilidade do peptídeo LL-37 nas concentrações de 5 e 10 µg/mL, e sua possível atuação na diferenciação de células-tronco da polpa dentária (DPSC) para odontoblastoslike. Com esse propósito, foram avaliados: (a) a citotoxicidade, pelo teste MTT; (b) a genotoxicidade, através do ensaio do micronúcleo; (c) a produção e quantificação de óxido nítrico; (d) as fases do ciclo celular, por citometria; (e) a expressão de alguns genes associados à formação de tecido mineralizado, através do teste qRT-PCR; (f) o conteúdo de proteína total; (g) a atividade de fosfatase alcalina (ALP); e (h) a produção de sialofosfoproteína dentinária (DSPP), pelo ensaio imunoenzimático ELISA. Foi observado que as concentrações de 5 e 10 µg/mL de LL-37 não foram citotóxicas e ainda aumentaram, em geral, a viabilidade celular (p<0,05), sendo que os maiores valores de absorbância foram observados no 3° dia de contato. As concentrações testadas também não induziram genotoxicidade, após 7 dias de contato, tendo sido genotóxico apenas o grupo controle positivo (EMS) (p<0,05). Ainda, não foi observado diferença estatisticamente significativa na produção de nitrito, pelas células expostas ao LL-37 após 7 dias, em ambas as concentrações. A análise do ciclo celular, evidenciou maior porcentual de células na fase G0/G1, em todos os grupos (p<0,05). Quando estes foram comparados, foi observado maior quantidade de células na fase G0/G1 na concentração de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : The LL 37 peptide (human derived cathelicidin) is released by some human cells and able of neutralizing the tissues that present lipopolysaccharide (LPS), as well as, attracts pulp cells and induces angiogenesis; characteristics that makes it a possible adjunct for regeneration of the dentin-pulp complex. The aim of this study was evaluate in vitro the biocompatibility of LL-37 in the concentrations of 5 and 10 µg/mL, and its possible performance in the differentiation of dental pulp stem cells (DPSC) into odontoblasts-like cells. For this purpose, it was evaluated: (a) the cytotoxicity by MTT assay; (b) the genotoxicity by the micronucleus test; (c) the production and quantification of nitric oxide; (d) the cell cycle, by flow cytometry; (e) the expression of genes associated with the mineralization by qRT-PCR; (f) the total protein content; (g) the alkaline phosphatase activity (ALP); and (h) the production of dentine sialofosfoprotein (DSPP) by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). It was observed that the concentrations of 5 and 10 µg/ml of LL-37 were not cytotoxic, in addition to they increased, in general, the cell viability (p<0,05). Moreover, higher absorbance values were observed on 3rd day of contact. After 7 days, the tested concentrations also did not induce genotoxicity, (p<0,05); only the positive control group (EMS) was genotoxic (p<0.05). Furthermore, there was not statistical significance in the nitrite production by the cells exposed to LL-37 for 7 days, in both concentrations. The cell cycle test showed higher percentage of cells in the phase G0/G1 in all groups (p<0.05). When they were compared, it was noticied that concentration of 10 ug/ml of LL-37 arrested the cells in G0/G1 compared to the control group (p<0.05). On the other hand, the control group, exhibited higher amount of cells in G2 and mitosis...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Mário Tanomaru Filho / Banca: Léa Assed Bezerra da Silva / Banca: Igor Prokopowitsch / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do emprego do curativo de demora à base de hidróxido de cálcio na reparação apical e periapical após tratamento endodôntico de dentes de cães sem vitalidade pulpar, com ou sem lesão periapical visível radiograficamente. Os canais radiculares de 80 raízes de pré-molares superiores e inferiores foram submetidos ao método de indução experimental de lesões periapicais ou mantidos expostos ao meio bucal por 30 dias para contaminação. Realizado o preparo biomecânico, os canais radiculares foram obturados em única sessão ou receberam curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio por 15 dias, quando foram obturados com cimento AH Plus. Após o período de 180 dias os animais foram mortos e as peças submetidas ao processamento histológico e coradas pelo HE e Tricrômico de Mallory para avaliação da influência da presença da lesão periapical radiográfica e do emprego do curativo de demora na reparação apical e periapical. Os resultados obtidos demonstraram que o curativo de demora à base de hidróxido de cálcio foi de fundamental importância para a reparação dos tecidos apicais e periapicais, com diferença significante com relação aos grupos obturados em sessão única (p<0,05). / Abstract: The aim of this study was to evaluate the apical and periapical repair after endodontic treatment of teeth with pulp necrosis, with or without radiographic chronic periapical lesion in mongrel dogs. Eighty root canals of premolars teeth were used. Half of them was submitted to the experimentally induced chronic lesions method and the others was opened to the oral environment for 30 days for contamination. After biomechanical preparation, the root canals were filled in a single visit or they received a root canal dressing with calcium hydroxide for 15 days before root canal filling with AH Plus sealer. The animals were killed, after 180 days, by anesthetic overdose, and the histological sections were stained with H/E and Mallory Trichromic for microscopic evaluation of the influence of radiographic periapical lesion and the use of root canal dressing in the apical and periapical repair. The obtained results showed that the intracanal dressing based on calcium hydroxide was essential to the repair of the apical and perapical tissues, with significant difference to the groups filled in a single visit (p<0,5). / Mestre

Orientador: Fernanda Gonçalves Basso / Banca: Adriano Fonseca de Lima / Banca: Ana Paula Dias Ribeiro / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Elisa Maria ASparecida Giro / Resumo: O objetivo geral da presente pesquisa foi avaliar o efeito do LED 850 nm sobre diferentes processos metabólicos de células-tronco da polpa dentária in vitro. Para todos os estudos, células originárias da polpa de dentes decíduos humanos hígidos foram caracterizadas por imunofluorescência utilizando os anticorpos STRO-1, CD44, CD146, Nanog e OCT3/4, antes da realização dos protocolos experimentais. No estudo 1, células foram cultivadas em placas de acrílico, estimuladas à diferenciação odontoblástica e irradiadas com LED (850 nm) em diferentes doses de energia (DE - 0, 2, 4, 8, 15 ou 30 J/cm2, 40 mW/cm2), n=9. Após 12 h e 72 h da irradiação, foram avaliados o metabolismo celular (MTT), a formação de nódulos mineralizados (NM - Alizarin Red) e o número de células viáveis (Trypan Blue). Os dados foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (p<0,05). Para o estudo 2, o mesmo protocolo experimental foi realizado, porém utilizando apenas as doses de 2 e 4 J/cm2 e o tempo de avaliação de 72 h pós-irradiação. Foram avaliados a atividade de fosfatase alcalina (ALP), a produção de proteína total (PT), produção de colágeno total (Sircol), bem como a expressão gênica (qPCR) de ALP, colágeno tipo I (Col I), sialoproteína da dentina (DSPP) e proteína da matriz dentinária (DMP-1), n=8. Os mesmos testes estatísticos foram utilizados. Para o estudo 3, as células foram semeadas sobre a superfície pulpar de discos de dentina com 0,2 mm de espessura (n=72), submetidas ao mesmo protocolo de irradiação do estudo 2, aplicada sobre a superfície oclusal dos discos de dentina (n=8, ação transdentinária). Os testes incluíram viabilidade celular (MTT), atividade de ALP, produção de PT, expressão gênica de ALP, Col I, DSPP e DMP-1 e morfologia celular (MEV) e os dados foram submetidos aos mesmos testes estatísticos. Para o estudo 1, quando comparadas ao ...(Resumo completo, clique acesso eletrônico) / Abstract: The overall aim of this study was to evaluate in vitro the effect of 850 nm LED irradiation on different metabolic processes of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs). For all studies, pulp cells originated from sound deciduous teeth were characterized by immunofluorescence using STRO-1, CD44, CD146, Nanog and OCT3/4 antibodies, before experimental protocols. In the first experiment, cells were seeded in 24 well-plates, submitted to ondontoblastic differentiation and irradiated with different energy doses (ED - 0, 2, 4, 8, 15 or 30 J/cm2, 40 mW/cm2) n=9. After 12 h and 72 h post irradiation, cell viability (MTT), mineralized nodule formation (MN - Alizarin Red) and number of viable cells (Trypan Blue) were evaluated. Data were submitted to Kruskal Wallis and Mann-Whitney tests (p<0.05). In the second experiment, the same protocol was performed, however, using only 2 and 4 J/cm2, considering 72 h post irradiation as period of evaluation. Alkaline phosphatase (ALP) activity, total protein (TP) production, total collagen production (Sircol Assay), as well as gene expression (qPCR) of ALP, collagen type I (Col I), dentin sialophosphoprotein (DSPP) and dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP-1) were assessed, n=8. For the third experiment, cells were seeded on the pulp surface of 0.2 mm-thick dentin discs (n=72) and submitted to the same protocol of irradiation as experiment 2, applied on the occlusal surface of the dentin discs (n=8, transdentinal action). The assays included cell viability (MTT), ALP activity, TP production, ALP, Col I, DSPP and DMP-1 gene expression and cell morphology (SEM). Again, the same statistical tests were applied to data. In the first study, when compared with the control group, cells submitted to 2 or 4 J/cm2 showed higher cell viability after 72 h and all EDs increased the number of viable cells after 12 h. For MN formation... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2018-07-05T13:46:48Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Ferreira de Lima - 2018.pdf: 1515890 bytes, checksum: 736f331258ea1df6d5252354ed3ae965 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-07-06T12:41:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lorena Ferreira de Lima - 2018.pdf: 1515890 bytes, checksum: 736f331258ea1df6d5252354ed3ae965 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-06T12:41:03Z (GMT). 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Materials and methods: This was a randomized, triple blind clinical trial, in which the initial sample consisted of 80 patients aged 18 to 27 years, 160 central incisors healthy upper randomly allocated into 4 groups: G1 - Office bleaching with two applications hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) at 35% for 20 minutes each, followed by home bleaching with carbamide peroxide 10% for 2 hours a day for 16 days; G2 - Protocol used in G1, with the use of a desensitizer in the dentifrice; G3 - Office bleaching with application of H 2 O 2 at 35% and one placebo gel, both for 20 minutes, followed by application to home bleaching with carbamide peroxide 10% for 2 hours a day for 16 days; G4 - Protocol used in G3, with use of desensitizer in the dentifrice. The measurement at SaO 2 of the pulp was performed on the upper central incisors before (T0) and immediately after (T1) the office bleaching; in the 5 th (T2), 8 th (T3), 12 th (T4) and 16 th day of home bleaching (T5); and after 7 (T6) and 30 (T7) days of completion of procedures. The mean level of SaO 2 pulp was described by mean and standard deviation. times and the average values ​​of saturation in groups by Estimations Generalized Equations model were compared (GEE) and used the Student t test for paired samples for analysis of overall average initial time (T0) and after thirty days after the end of tooth bleaching (T7) (p &lt;0.05). Outcomes: The final sample consisted of 60 patients (n = 120 teeth), G1 (n = 28), G2 (n = 40), G3 (n = 26) and G4 (n = 26). The results showed a mean pulp SaO 2 level at G0 of 84.29%, G2 of 84.38%, G3 of 84.79% and G4 of 85.83%. There was a reduction of T0 for T1, 81.96%, 82.06%, 82.19% and 81.15% for G1, G2, G3 and G4, respectively, with difference in G4 (p = 0.006). During home bleaching, there was returned of the pupal oxygen saturation level in all groups, with mean values in T7 of 86.55%, 86.60%, 85.71%, 87.15% for G1, G2, G3 and G4, respectively, with difference in G2 (p = 0.004). Conclusion: The average level of initial pulp oxygen saturation for central upper incisors was 84.76%, with changes in saturation during the combined technique of tooth bleaching and final mean level, after 30 days, of 86.52%. / Objetivo: Avaliar o nível de saturação de oxigênio (SaO 2 ) da polpa de incisivos centrais superiores hígidos antes, durante e após a realização da técnica combinada de clareamento dentário, por meio de oximetria de pulso. Materiais e métodos: Tratou-se de um ensaio clínico randomizado triplo-cego, no qual a amostra inicial constituiu-se de 80 pacientes entre 18 e 27 anos, 160 incisivos centrais superiores hígidos, alocados aleatoriamente em 4 grupos: G1 - Clareamento de consultório com duas aplicações de peróxido de hidrogênio (H 2 O 2 ) a 35% por 20 minutos cada, seguido de clareamento caseiro com peróxido de carbamida a 10% por 2 horas ao dia, durante 16 dias; G2 - Protocolo empregado no G1, com uso de dessensibilizante no dentifrício; G3 - Clareamento de consultório com uma aplicação de H 2 O 2 a 35% e outra de gel placebo, ambos por 20 minutos, seguido de clareamento caseiro com aplicação de peróxido de carbamida a 10% por 2 horas ao dia, durante 16 dias; G4 - Protocolo empregado no G3, com uso de dessensibilizante no dentifrício. A mensuração da SaO 2 pulpar foi realizada nos incisivos centrais superiores antes (T0) e imediatamente após (T1) o clareamento de consultório; no 5º (T2), 8º (T3), 12º (T4) e 16º dia de clareamento caseiro (T5); e após 7 (T6) e 30 (T7) dias do término dos procedimentos. O nível médio da SaO 2 pulpar foi descrito pela média e desvio padrão. Foram comparados os tempos e os valores médios desta saturação nos grupos pelo modelo de Equações de Estimações Generalizadas (GEE) e utilizado o teste t de Student de amostras pareadas para análise da média geral do tempo inicial (T0) e após trinta dias do término do clareamento dentário (T7) (p&lt;0,05). Resultados: A amostra final foi constituída por 60 pacientes (n=120 dentes), G1 (n=28), G2 (n=40), G3 (n=26) e G4 (n=26). Os resultados mostraram nível médio de SaO 2 pulpar em T0 no G1 de 84,29%, G2 de 84,38%, G3 de 84,79% e G4 de 85,83%. Observou-se redução de T0 para T1, 81,96%, 82,06%, 82,19% e 81,15%, para G1, G2, G3 e G4, respectivamente, com diferença em G4 (p=0,006). Durante o clareamento caseiro, houve retorno ao nível de saturação de oxigênio pupar em todos os grupos, com valores médios em T7 de 86,55%, 86,60%, 85,71%, 87,15% para G1, G2, G3 e G4, respectivamente, com diferença em G2 (p=0,004). Conclusão: O nível médio da saturação de oxigênio pulpar inicial para incisivos centrais superiores hígidos foi de 84,76%, com variações desta saturação durante a técnica combinada de clareamento dentário e nível médio final, após 30 dias, de 86,52%.

A busca por um material de enxertia que se adapte às necessidades do cirurgião bucomaxilofacial e também que proporcione ao paciente retorno de sua função com menores danos possíveis, tem sido incessante. O enxerto autógeno é ainda hoje considerado padrão ouro devido suas propriedades, porém, ele apresenta algumas desvantagens, sendo que as maiorias de suas complicações estão associadas ao leito doador. Atualmente, a engenharia de biomateriais trabalha com o desenvolvimento de novos materiais e recursos principalmente na área de regeneração tecidual. Neste contexto, scaffolds de origem natural ou sintética com o propósito de promover a regeneração de tecidos tem sido amplamente estudados. O objetivo desse estudo foi avaliar in vitro o comportamento biológico quanto à viabilidade, proliferação celular, adesão e potencial de diferenciação de células tronco de polpa dentária humana cultivadas sobre amostras de scaffold composto por uma nova blenda de poli ?-caprolactona/poli (rotaxano). Células tronco de polpa dentária de molares humanos (hDPSCs) foram cultivadas a partir de amostras congeladas e re-caracterizadas. As células foram semeadas sobre amostras dos scaffolds e sob lamínulas de vidro e cultivadas em diferentes meios: clonogênico, mineralizante e condicionado pelo extrato do biomaterial por 1,3,7,14 e 21 dias. Foram avaliadas as curvas de crescimento e viabilidade celulares, a atividade de fosfatase alcalina, a formação de nódulos de mineralização. A adesão celular foi observada por microscopia eletrônica de varredura até o cultivo de 7 dias. Os scaffolds eram lisos, flexíveis e mostraram-se anfifílicos com características físicas de fibras dispostas aleatoriamente e poros interconectados com diâmetro médio de 13,5?m e abertura com área média de 87,14µm2. As hDPSCs expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais. Não houve inibição de crescimento celular na interface com o biomaterial. As curvas de crescimento e viabilidade mostraram-se mais significativas (p<0.01), especialmente em 7 dias, para as culturas sobre os scaffolds em meio clonogênico. Resultados semelhantes foram observados com o meio mineralizante (p<0.05). Houve maior formação de nódulos de mineralização nas culturas com a presença dos scaffolds, ou seja, o biomaterial estimulou a diferenciação celular. Em microscopia eletrônica de varredura as células mostraram-se aderidas até o período de 7 dias com formação de lençóis sobre os scaffolds. A blenda de poli £-caprolactona/poli (rotaxano) apresentou biocompatibilidade in vitro, revelando aspectos promissores de serem funcionalizadas por células tronco derivadas de polpa dentária humana com potencial de uso como biomaterial bioativo para bioengenharia de tecido ósseo. / The search for a graft material that provides patient with rehabilitation with little damage and also suits maxillofacial surgeon needs has been incessant. Autogenous bone is still considered the gold standard for grafting because of its properties, although it has some disadvantages and the majority of its complications are associated with the donor site. Currently, bioengineering develops new materials and resources primarily for tissue regeneration area. In this context, scaffolds of natural or synthetic origin with the purpose of promoting tissue regeneration have been widely studied. The aim of this study was to evaluate in vitro biological behavior as viability, cell proliferation, adhesion and potential of stem cell differentiation of human dental pulp grown on scaffold samples composed of a new blend of poly £-caprolactone/poly(rotaxano). Dental pulp stem cells obtained from human molars (hDPSCs) were grown from frozen samples and re-characterized. Cells were seeded onto scaffolds samples or glass coverslips and cultured in different media: clonogenic, mineralizing and conditioned by the biomaterial extract per 1,3,7,14 and 21 days. Cells growth curves and viability, alkaline phosphatase activity, formation of mineralized nodules were assessed. Cell adhesion was observed by scanning electron microscopy up to 7 days cultures. Scaffolds were flat, flexible and proved to be amphiphilic with physical characteristics of randomly arranged fibers and pores interconnected with an average diameter of 13,5?m and aperture average area of 87,14µm2. The hDPSCs expressed typical levels of mesenchymal stem cell surface markers. There was no inhibition of cell growth at the biomaterial interface. The growth rates and viability were more significant (p <0.01), especially in 7 days, to cultures over scaffolds in clonogenic medium. Similar results were observed with the mineralizing medium (p <0.05). There formation of mineralized nodules was increased in the cultures in the presence of scaffolds, in other words, the biomaterial stimulated cell differentiation. In scanning electron microscopy the cells were shown to be attached until 7-day period with formation of sheets over the scaffolds. The blend of poly ?-caprolactone/poly(rotaxano) shows biocompatibility in vitro, revealing promising aspects to be functionalized by stem cells derived from human dental pulp with potential to be used as bioactive biomaterials for bone tissue bioengineering.

Orientador: Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T06:09:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_JoseFlavioAffonsode_D.pdf: 2803790 bytes, checksum: 523bf1872c348721161eafd32bb6f736 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Este estudo teve como objetivos identificar por técnica de imunohistoquímica linfócitos T4, linfócitos T8, linfócitos B, macrófagos e mastócitos em tecidos pulpares normais e inflamados de dentes humanos e correlacionar a presença dessas células com os sinais e sintomas apresentados pelos pacientes e aspectos clínicos dos dentes. Após a determinação do diagnóstico clínico das condições pulpares, 24 polpas normais e 18 polpas inflamadas foram coletadas de dentes extraídos clivados ou por extirpação em dentes que foram submetidos à endodontia. As polpas foram processadas histologicamente, sendo que uma secção tecidual de cada amostra foi corada por hematoxilina e eosina e as demais foram utilizadas para a imunohistoquímica. As lâminas foram analisadas em microscopia de luz. Cinco campos com maior intensidade de marcação foram capturados, tiveram suas áreas mensuradas e o número de células contado. Em polpas normais, os linfócitos T8 apresentaram maior número de células marcadas, seguidos pelos linfócitos T4, macrófagos, linfócitos B e mastócitos. Diferenças significantes foram encontradas, com maior número de linfócitos T8 quando comparados aos linfócitos B e mastócitos (Kruskal-Wallis - p< 0,05). Em polpas inflamadas, os macrófagos apresentaram maior número de células positivas seguidos dos linfócitos T8, T4, B e mastócitos. Não houve diferença estatística significante entre as densidades das células estudadas em polpas inflamadas (Kruskal-Wallis - p> 0,05). Dessa forma, concluiu-se que os linfócitos T4, T8 e B, macrófagos e mastócitos podem ser identificados em diferentes proporções nos tecidos pulpares normais e inflamados. Entretanto, não houve correlação entre a sintomatologia apresentada pelos pacientes e o aumento do número dessas células em todos os tecidos pulpares classificados clinicamente como inflamados / Abstract:The aim of this study was to identify by immunohistochemical technique T4 lymphocytes, T8 lymphocytes, B lymphocytes, macrophages and mast cells in normal and inflamed human dental pulps and to correlate the presence of these cells to the signals and symptoms presented by the patients and the teeth clinical aspects. After the clinical diagnoses, 24 normal dental pulps and 18 inflamed dental pulps were collected from extracted teeth or by extirpation during endodontic procedures. After dental pulp histological procedures, one tissue section from each specimen was stained with hematoxylin and eosin and the other sections were used to immunohistochemical analyses. The slides were analyzed by light microscopy. Five fields with more intensive immunostaining were captured, measured and the positive cells were counted. In normal pulps, T8 lymphocytes presented more positive cells followed by T4 lymphocytes, macrophages, B lymphocytes and mast cells. Statistical significance was founded with more T8 lymphocytes than B lymphocytes and mast cells (Kruskal-Wallis ¿ p< 0.05). In inflamed dental pulps, macrophages presented more positive cells, followed by T8, T4, B lymphocytes and mast cells. These data were not statistically significant (Kruskal-Wallis ¿ p> 0.05). It was concluded that T4, T8 and B lymphocytes, macrophages and mast cells could be identified with different rates in normal and inflamed dental pulps. However, no correlation was detected between the patient¿s symptomatology and these cells increase in all inflamed dental pulps / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Orientadores: Alexandre Augusto Zaia, Sergio Roberto Peres Line / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_ThaisAccorsi_D.pdf: 1140557 bytes, checksum: edc0e3c618eed2eddfe927042cc99ba1 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: As metaloproteinases de matriz (MMPs) são enzimas zinco dependentes secretadas por diversas células e que possuem uma importante função no remodelamento da matriz extracelular tanto em processos fisiológicos quanto patológicos. Essas enzimas são secretadas na forma inativa (zimógeno) e sua atividade pode ser modulada por inibidores teciduais endógenos (TIMPs). As MMPs são subdivididas de acordo com seu substrato, sendo as MMPs -2 e -9 conhecidas como gelatinases por degradar gelatina, ou seja, colágeno denaturado. Em uma inflamação pulpar intensa ocorre degradação tecidual similar à qualquer outro processo inflamatório. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar polpas dentais humanas sadias e inflamadas quanto à expressão gênica de MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 utilizando o PCR em tempo real; valores proteicos de TIMP-2 através do ELISA e atividade gelatinolítica de MMP-2 e MMP-9 por meio da técnica zimográfica. A técnica de quantificação de mieloperoxidase (MPO) também foi realizada em todas as amostras para identificar e quantificar a presença de células neutrofílicas na polpa. Foram utilizadas polpas sadias (n=20) de terceiros molares inclusos e polpas inflamadas (n=20), caracterizadas clinicamente. Os resultados mostraram uma expressão gênica 9 vezes maior para MMP-9 em polpas inflamadas quando comparadas a polpas sadias. Para a quantificação proteica, os valores absolutos evidenciaram maiores valores de TIMP-2 em polpas inflamadas quando comparadas com polpas sadias (p<0,0039). A atividade gelatinolítica para o grupo sadio evidenciou maior presença de bandas para pro-MMP-2, com ausência de MMP-9. Em polpas inflamadas, a proteína que apresentou maior atividade foi a MMP-9, com atividade significantemente maior (p=0,00081) quando comparada com MMP-2 ativa. O resultado da quantificação da proteina MPO evidenciou para algumas amostras inflamadas, caracterizadas clinicamente, um padrão similar ao encontrado para polpas sadias. E em amostras inflamadas com alto índice de MPO, caracterizando assim presença de muitos neutrófilos, houve presença de atividade gelatinolítica para MMP-9. Assim, pode-se concluir que a proteína MMP-2, em polpas inflamadas, tornou-se ativa mesmo com o aumento da produção de TIMP-2. Entretanto, o aumento em níveis proteicos para TIMP-2 na inflamação, não foi acompanhado do aumento do RNAm para este gene. Em processos inflamatórios, MMP-2 e MMP-9 foram encontradas de forma ativa, o que não ocorreu em polpas sadias. Não houve correlação entre sintomatologia e presença da proteína mieloperoxidase ou atividade gelatinolítica em polpas inflamadas / Abstract: Matrix Metalloproteinases (MMPs) are members of a family of zinc-dependent endopeptidases which are involved in the degradation of extracellular matrix but also in a number of other biologic processes. Such as any other inflammatory process, the pulp inflammation is associated with tissue degradation which can be mediated by MMPs. MMP-2 and MMP-9, named gelatinases, are secreted in latent form (zymogen) and their activity can be modulated by tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). The aim of this study was evaluated the role of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 in inflammatory human dental pulp tissues. Twenty dental pulp clinically diagnosed as inflammatory tissues and twenty healthy pulp tissues from enclosed third molars were harvested and evaluated to: gene expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 by real-time PCR; protein quantification of TIMP-2 by ELISA; gelatinolytic activity (MMP-2 and MMP-9) assessed by zymography technique, and neutrophils quantification by mieloperoxidase protein (MPO) assay. Data analysis showed an increased mRNA levels of MMP-9. Protein level of TIMP-2 in inflammatory pulp tissues was higher than healthy tissues (p<0,0039). The gelatinolytic activity for the healthy pulp tissues revealed a greater presence of bands for pro-MMP-2, with absence of MMP-9 bands. In inflammatory pulp tissues, MMP-9 demonstrated higher activity (p=0.00081) compared to MMP-2. Finally, the inflammatory pulp tissues with increased MPO protein levels were associated to the MMP-9 gelatinolityc activity. Taken together, these data suggest that MMP-2 in inflammatory pulp tissues was activated even at the presence of high levels of TIMP-2. However, the increased protein levels of TIMP-2 in inflammatory pulps were not followed by an increase of corresponding mRNA levels. During inflammatory process, MMP-2 and MMP-9 were found active, which did not occur in healthy pulps. Besides, it was not observed correlation between pain and the presence of mieloperoxidase protein or gelatinolytic activity in inflammatory pulp tissues / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

A retina é composta por células neuronais especializadas, que quando danificadas são incapazes de se regenerar. CTIPD são uma promissória fonte para substituir o tecido lesado pois são capazes de se diferenciar em quase todos os tipos celulares. O objetivo do estudo é avaliar o potencial de diferenciação das CTIPD em neurônios retinais. As CTIPD foram submetidas a formação de neuroesfera, a qual foi avaliada pela expressão de nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6. A partir da neuroesfera foi realizada a indução da diferenciação em neurônios retinais, a qual foi avaliada pela expressão dos marcadores específicos da diferenciação retinal. Observou-se a reação positiva com nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin e Pax-6 na esfera, sugerindo um comprometimento com a linhagem neural/retinal. Nas células diferenciadas observamos uma maior expressão de Chx-10 e Crx e menor de Nrl, Calbindin, Recoverin e Rhodopsin. Este estudo sugere que CTIPD apresentam potencial de desenvolvimento em neurônios retinais. Entretanto, estudos adicionais são necessários para elucidar a formação da retina neural. / Retina is composed of specialized neuronal cells, which in case of damage are unable to regenerate. CTIPD is a promissory source to replace the injured tissue because they can differentiate into almost all cell types. The aim of the study was to evaluate the differentiation potential of CTIPD in retinal neurons. CTIPD were submitted to neurosphere formation and evaluated by the expression of nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6. From the neurosphere was performed the induction of differentiation into retinal neurons, which was assessed by the expression of specific markers of retinal differentiation. We observed a positive reaction with nestin, <font face=\"Symbol\">b-III-tubulin and Pax-6 in the sphere, suggesting a commitment to the neural/retinal lineage. In differentiated cells we found a higher expression of Chx-10 and Crx and a lower expression of Nrl, Calbindin, Recoverin and Rhodopsin. This study suggests that CTIPD show potential development into retinal neurons. However, additional studies are needed to elucidate the formation of the neural retina.