Thesis (Ph. D.)--University of North Carolina at Chapel Hill, 1999. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Georgia, 1996. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of North Carolina at Chapel Hill, 1999. / eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Georgia, 1996. / Includes bibliographical references.

Memoria para optar el título de Bioquímico / La periodontitis crónica es una enfermedad de etiología infecciosa, caracterizada por la respuesta inflamatoria e inmune exacerbada por parte del hospedero que produce la destrucción de tejidos de soporte del diente. Actualmente, se postula que para el establecimiento de esta patología se produce una sucesión ecológica desde una comunidad microbiana asociada a salud hacia una asociada a enfermedad periodontal. En esta sucesión es imprescindible la presencia de ciertos patógenos que faciliten el remodelamiento de la microbiota oral y la progresión hacia enfermedad, siendo Porphyromonas gingivalis un patógeno clave en este proceso. P. gingivalis es una bacteria anaerobia estricta capaz de invadir y permanecer al interior de células epiteliales gingivales. Interesantemente, la infección por P. gingivalis produce una mayor viabilidad celular, mediante la modulación de proteínas relacionadas con apoptosis. Se ha sugerido que la proteína inhibidora de la apoptosis, survivina, podría contribuir a la inhibición de la apoptosis mediada por P. gingivalis; sin embargo, su participación en este proceso no está completamente dilucidada. En esta memoria de título se estudió si P. gingivalis es capaz de modular los niveles de survivina en la línea celular de epitelio gingival OKF6/TERT2 y si esta modulación está relacionada con el grado de virulencia de la bacteria. Para ello, se infectaron células OKF6/TERT2 utilizando dos cepas de referencia y un aislado clínico, cada una con diferente virulencia. Luego, se determinaron los niveles de proteína y transcrito de survivina a tiempos tempranos y tardíos post-invasión, mediante Western blot y RT-PCR. Los resultados obtenidos indican que P. gingivalis es capaz de disminuir los niveles de survivina y que esta modulación podría estar relacionada con la virulencia de la bacteria. Sin embargo, la disminución de survivina no estaría relacionada directamente con la inhibición de apoptosis que genera la infección por P. gingivalis / Chronic periodontitis is an infectious disease characterized by an exacerbated inflammatory and immune response by the host, which causes the destruction of the tooth supporting tissues. Nowadays, it is assumed that for the onset of this pathology an ecological succession from a bacterial community associated to health, to one associated with periodontal disease is produced. In this succession, the presence of certain pathogens facilitate the remodeling of the oral microbiota and the consequent progression to disease, being Porphyromonas gingivalis a key pathogen in this process. P. gingivalis is a strict anaerobic bacterium capable of invading and persisting within gingival epithelial cells. Interestingly, infection by P. gingivalis produce an increase in the viability of these cells by modulation of apoptosis related proteins. It has been suggested that the apoptosis inhibitory protein, survivin, could contribute to the inhibition of apoptosis mediated by P. gingivalis; however, its participation in this process is still unknown. In this work, we studied whether P. gingivalis is capable of modulate survivin levels in gingival epithelial cells OKF6/TERT2 and if this modulation is related to bacterial virulence. To achieve this goals we infected OKF6/TERT2 cells with two reference strains and one clinical isolate, each with different virulence. Survivin protein and transcript levels were determined at early and late post-infection times by Western blot and RT-PCR. The results of this work indicated that P. gingivalis is capable of decreasing survivin levels and this modulation could be related to virulence features of the bacterium. Nevertheless, survivin decrease would not be directly related to the inhibition of apoptosis induced by P. gingivalis

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas / INTRODUCCIÓN: Especies bacterianas anaeróbicas potencialmente patogénicas constituyen un porcentaje significativo de la microbiota normal de la cavidad bucal y hoy se sabe que su capacidad de colonizar y sobrevivir durante la niñez temprana, depende de las condiciones medioambientales que ofrezca el hospedero. Sin embargo, se desconoce la edad en que estas especies bacterianas comienzan a colonizar la cavidad bucal de los niños, como es el caso de Porphyromonas gingivalis, considerado uno de los periodontopatógenos más importantes. Esta especie posee múltiples factores de virulencia, entre los cuales se ha destacado la expresión de fimbrias, apéndices externos que juegan un rol determinante en la adhesión e invasión de los tejidos periodontales. Las fimbrias están constituidas por una subunidad proteica denominada fimbrilina (FimA), codificada por el gen fimA. Se han descrito 6 tipos de genes fimA en base a su secuencia de nucleótidos, codificando cada uno un tipo de fimbria diferente, las que se han asociado con distintos grados de salud y enfermedad periodontal. OBJETIVO: Investigar la presencia de Porphyromonas gingivalis, genotipos fimA-I, II, III y IV, en la microbiota bucal de niños de 4 a 8 años de edad. METODOLOGÍA: Se tomo muestras de hisopado de dorso lingual de 92 niños, de 4 a 8 años de edad, a quienes se les realizó un examen en búsqueda de signos clínicos de gingivitis y se distribuyeron según edad. La presencia de Porphyromonas gingivalis se investigó mediante cultivo microbiológico, pruebas bioquímicas y Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). La detección de los genotipos fimA se llevó a cabo mediante PCR. RESULTADOS: Se detectó Porphyromonas gingivalis en el 11,95% de los niños (n=11), mediante cultivo y PCR, y 3 sujetos resultaron positivos a la presencia del genotipo fimA-IV de esta especie. Los 8 sujetos restantes no presentaron ninguno de los otros genotipos analizados en este estudio. CONCLUSIONES: Porphyromonas gingivalis puede ser miembro de la microbiota comensal de niños de 4 a 8 años de edad. La detección del genotipo fimA-IV podría indicar una colonización preferencial a edades tempranas por parte de este genotipo, lo que ameritaría una revisión en el tiempo, para evaluar su permanencia, reemplazo o asociación con la aparición de patologías periodontales

Porphyromonas gingivalis is a keystone periodontopathogen and its lipopolysacharide (LPS) is strongly associated with periodontal disease. A long-standing controversy occurs on the role of P. gingivalis LPS in induction of innate host response in different cell types. It has recently been found that P. gingivalis LPS displays remarkable heterogeneity with both tetra- (LPS1435/1449) and penta-acylated (LPS1690) lipid A structures. However, the potential effects of heterogeneous structures of P. gingivalis LPS on modulating host innate responses in human gingival fibrobalsts (HGFs) - the most abundant cells in gingiva remain unclear. To fulfill this research gap, a comprehensive study on the P. gingivalis LPS-HGFs interations was undertaken. The effects of P. gingivalis LPS1435/1449 and LPS1690 on the expression profiles of pro-inflammatory cytokines were investigated (Chapter III). P. gingivalis LPS1690 (not LPS1435/1449) significantly upregulated the expression of IL-6, IL-8 and TNF-α, suggesting that P. gingivalis LPS may differentially modulate the expression of pro-inflammatory cytokines. The effects of P. gingivalis LPS on the expression of MMPs 1-3 and TIMP-1, and regulation of MMP-3 were then determined (Chapter IV). P. gingivalis LPS1690 markedly induced MMP-3 expression through p38 MAPK and ERK signal pathways, whereas TIMP-1 was greatly upregulated by P. gingivalis LPS1435/1449. These findings suggest that P. gingivalis LPS heterogeneity may differentially modulate the expression and regulation of MMP-3. Based on these findings, the involvements of TLR2/4 and the downstream signaling pathways were explored (Chapter V). P. gingivalis LPS1690 induced TLR4 expression, whereas TLR2 was upregulated by P. gingivalis LPS1435/1449. NF-κB pathway played a dominant role in P. gingivalis LPS1690-induced expression of IL-6 and IL-8. These findings suggest that the two isoforms of P. gingivalis LPS critically interact with TLR2 and TLR4, and may determine the subsequent activation of signal transduction cascades that differentially modulate immuno-inflammatory response. P. gingivalis could thereby evade innate host defense and contribute to periodontal pathogenesis. To obtain a holistic profile of heterogeneous P. gingivalis LPS-HGFs interactions, a systems biology-based study through proteomics, metabolomics and bioinformatics approaches was undertaken (Chapter VI). Pro-inflammatory proteins (e.g. Cyclophilin, Annexins, IL-6 and Cathepsins) were induced by P. gingivalis LPS1690. In contrast, anti-inflammatory proteins (e.g. ANXA1, ANXA2 and Gal-1) were upregulated by P. gingivalis LPS1435/1449. P. gingivalis LPS1690 also induced antioxidant defense molecules like MnSOD and PRDXs. Secretomic analysis showed that immuno-inflammatory mediators, extra-cellular proteases and matrix proteins were differentially modulated by the two isoforms of P. gingivalis LPS as well. These findings demonstrate that host responses such as immuno-inflammatory activity, oxidative stress and anti-oxidant defense may be differentially modulated and regulated by the heterogeneous P. gingivalis LPS. Further study shows that P. gingivalis LPS1435/1449 and LPS1690 differentially modulate oxidative stress response and antioxidant expression, and differential regulation of MnSOD could be a critical determinant of periodontal homeostasis (Chapter VII). The present findings may bring new insight into the molecular mechanisms of periodontal pathogenesis. Targeting the mechanisms of shift in lipid A structures of P. gingivalis LPS may be a potential strategy to develop novel approaches to control and prevent periodontal diseases. / published_or_final_version / Dentistry / Doctoral / Doctor of Philosophy

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Las periodontitis son un conjunto de enfermedades infecciosas, caracterizadas por la destrucción de los tejidos de inserción de los dientes, cuya causa es el biofilm subgingival. Porphyromonas gingivalisy Aggregatibacter actinomycetemcomitansson bacterias periodonto-patógenas del biofilm subgingival que han sido ampliamente asociadas al inicio, progresión y severidad de la enfermedad.Sobre la base de la cápsula extracelular de P. gingivalis y del Opolisacárido del LPS de A. actinomycetemcomitans se han descrito distintos serotipos bacterianos, denominados K1-K6 y a-f, respectivamente. En distintas poblaciones afectadas de periodontitis, se ha establecido que los serotipos bacterianos más frecuentemente detectados son los serotipos K5 y K6de P. gingivalisy b-cde A. actinomycetemcomitans. En Chile no existen estudios que hayan analizado la frecuencia de detección de estos serotipos bacterianos. Objetivos: Cuantificar la frecuencia de detección de los distintos serotipos de P. gingivalis y A.actinomycetemcomitans en pacientes afectados de periodontitis crónica o periodontitis agresiva. Metodología:Muestras microbiológicas del biofilm subgingival fueron obtenidas de 25 sitios periodontales distintos en pacientes con periodontitis crónica o agresiva. La presencia de P. gingivaliso A. actinomycetemcomitans se estableció identificando las características de las colonias microbianas en cultivo en agar sangre hemina/menadiona o agar TSVB,pruebas bioquímicas de metanol o catalasay por identificación mediante PCR de la subunidad 16Sdel RNA ribosomal (rRNA). Purificados bacterianos fueron aislados y la caracterización del serotipo de P. gingivalis y de A. actinomycetemcomitans se realizó mediante PCR utilizando partidores específicos. Resultados:P. gingivalisfue identificado en el 40% de los pacientes afectados de periodontitis, tanto crónica como agresiva, y A. actinomycetemcomitans en un 16%. Cuando P. gingivalis fue detectado, el 60% fue serotipo K3 y el 50% K2 o K5. En el caso deA. actinomycetemcomitans, el 75% fue serotipo b y el 25% c. 6 Conclusión:En los pacientes con periodontitis existe una frecuencia variable de detección de los distintos serotipos bacterianos. En P. gingivalis los serotipos más frecuentemente detectados fueron el serotipo K3, K2y K5 y en A. actinomycetemcomitans el serotipo b.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / La Periodontitis Apical Asintomática (PAA) corresponde a una patología periapical de origen infeccioso que se caracteriza por la respuesta negativa a los tests de sensibilidad pulpar del diente afectado y por presentar, al examen radiográfico, un área radiolúcida peri y/o pararadicular. Histológicamente se puede clasificar como quiste radicular inflamatorio (QRI) o granuloma periapical (GP). Las comunidades microbianas asociadas a la PAA se caracterizan por infectar el sistema de canales radiculares (SCR) de los dientes y son muy variables en su composición, existiendo diferencias entre diferentes poblaciones geográficas, así como también dentro de una misma población. Porphyromonas gingivalis y Porphyromonas endodontalis, son especies bacterianas que se han visto asociadas a este tipo de infección, por medio de la interacción de sus factores de virulencia con las células del hospedero. Dentro de estos factores de virulencia está el lipopolisacárido (LPS), constituyente de la membrana externa de la pared celular más abundante de la superficie de ambas especies bacterianas y que podría explicar los efectos deletéreos en la destrucción del ligamento periodontal y del hueso, influyendo así en el aumento del tamaño de las lesiones apicales de origen endodóntico (ALEO). En este trabajo, realizamos una caracterización del perfil estructural del LPS de Porphyromonas gingivalis y Porphyromonas endodontalis y analizamos la variabilidad de éste entre los aislados obtenidos. Con este objetivo, inicialmente analizamos macromorfológicamente los cultivos en medio líquido y sólido de aislados clínicos de P. gingivalis y P. endodontalis, obtenidos de exudado periapical proveniente de dientes con diagnóstico de Periodontitis Apical Asintomática y luego caracterizamos el perfil electroforético del LPS en geles de SDS-poliacrilamida teñido con Nitrato de Plata de ambas especies bacterianas y las comparamos con sus respectivas cepas de referencia. Nuestros resultados mostraron una baja cantidad de canales radiculares infectados con P. gingivalis y P. endodontalis. Las características macromorfológicas de dichos microorganismos resultaron bastante similares a las de las cepas de referencia, sin embargo, se observaron diferencias entre ambas. En cuanto al perfil electroforético del LPS de ambas especies, pese a tener pocos aislados clínicos positivos para ambas, si hubo diferencias en el perfil electroforético de sus LPS, siendo más marcadas en las colonias de P. endodontalis. En síntesis, nuestros resultados indican que P. gingivalis y P. endodontalis están presentes en canales radiculares de dientes diagnosticados con PAA y que existen diferencias en las especies bacterianas estudiadas, tanto en sus características macromorfológicas, como en las características de sus LPS. / OD59MMIC2015 / OD59MPER2015

Thesis (Ph.D.) -- University of Adelaide, Dental School, 2003. / "December, 2002" Includes bibliographical references (leaves 211-238).