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Ecologia química de insetos parasitóides de ovos (Hymenoptera: Scelionidae) e sua aplicação no controle biológico de pragasVieira, Cecília Rodrigues 30 August 2010 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-05-27T16:07:18Z
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2010_CeciliaRodriguesVieira.pdf: 3218541 bytes, checksum: bb23d57ec7ea110a4f14801748b2b385 (MD5) / A manipulação da abundância e distribuição de inimigos naturais por semioquímicos tem
potencial para melhorar as estratégias de controle biológico. Entretanto, estudos em
ambientes complexos (campo), voltados para estabelecer a ação cairomonal de semioquímicos e sua influência na distribuição e abundância de parasitóides ainda são escassos. Esses conhecimentos são fundamentais para estabelecer bases científicas sólidas que permitam a aplicação dos semioquímicos no manejo integrado de pragas. Nesse trabalho foram avaliadas duas estratégias de uso de semioquímicos para manejo comportamental de parasitóides de ovos de percevejos, visando estabelecer o efeito da sua aplicação na abundância e distribuição dos parasitóides e o impacto nas populações de percevejos através do parasitismo de ovos. Uma das estratégias testadas foi o uso de (E)-2-hexenal, componente do feromônio de alarme de percevejos, que também é um constituinte dos voláteis verdes de plantas. Esse composto tem ação cairomonal em parasitóides de ovos comprovada previamente em laboratório. A liberação por septos de borracha com diferentes doses (4 mg, 10 mg e 5 mg) de (E)-2-hexenal em áreas de cultivo de soja, mostrou que a abundância de parasitóides foi maior em parcelas com aplicação do composto na concentração de 4 mg e esse efeito ocorreu principalmente nos estágios de enchimento dos grãos de soja até a maturidade fisiológica da planta. No entanto, em parcelas tratadas com (E)-2-hexenal a intensidade e a ocorrência de parasitismo em ovos e o nível populacional de percevejos fitófagos não diferiu de parcelas controle. Uma segunda estratégia testada foi a utilização de cis-jasmone, um fitormônio que atua como indutor de voláteis componentes da defesa indireta da soja. Experimentos em campo foram realizados pulverizando 6 ml de solução de cis-jasmone (250 mg cis-jasmone + 100 mg de tween 20, em 1 l de água) sobre plantas de soja no início do estágio reprodutivo. A estrutura da comunidade (riqueza e equidade) foi similar, em geral, entre parcelas tratamento e controle. Entretanto, o número total de
Scelionidae, parasitóides de ovos de percevejos, principalmente Telenomus podisi e
Trissolcus basalis foi significativamente maior em parcelas tratadas durante as três semanas posteriores a aplicação do composto. Essa atração não gerou resposta de aumento na
ocorrência e intensidade de parasitismo em ovos e o nível populacional de percevejos-praga não foi diferente entre parcelas tratamento e controle. O controle de percevejos em culturas de soja pode ser incrementado pelo adensamento de parasitóides Scelionidae em áreas tratadas, aumentando assim a probabilidade de localização de ovos do hospedeiro. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The manipulation of the abundance and distribution of natural enemies by semiochemicals can improve strategies for biological control. However, studies in complex environments (field), aimed to establish the kairomonal action of semiochemicals and their influence on the
distribution and abundance of parasitoids are scarce. Such knowledge is fundamental to
establish a solid scientific basis for applying the semiochemicals in integrated pest management. In this study we evaluated two strategies for use of semiochemicals for
management of behavioral egg parasitoids of stink bugs, to establish the effect of its
application in the abundance and distribution of parasitoids and the impact on populations of stink bugs through the egg parasitism. One strategy was tested using (E)-2-hexenal, an alarm pheromone component of stink bugs, which is also a green leaf volatile produced by plants. This compound showed a kairomonal effect on egg parasitoids in laboratory. The release by
rubber septa of different doses (4 mg, 10 mg and 5 mg) of (E)-2-hexenal in soybean crops
indicated that the abundance of parasitoids was higher in plots treated with a concentration of 4 mg of (E)-2-hexenal and this effect occurred mainly in the grain filling stages of soybeans to physiological maturity of plants. However, in plots treated with (E)-2-hexenal intensity
and occurrence of egg parasitism and population level of phytophagous bugs did not differ from control. We also investigated the use of cis-jasmone, a plant phytormone that induces indirect defenses in soybean. Field experiments were performed by spraying 6 ml of cisjasmone (250 mg cis-jasmone + 100 mg of tween 20 in 1 l of water) on soybean plants, during the early reproductive stage. The community structure (richness and equity) was similar, in general, between treatment and control plots. However, the total number of
Scelionidae, stink bug’s egg parasitoids, mainly Telenomus podisi and Trissolcus basalis, was significantly higher in treated plots during the three weeks after the application of the compound. This attraction did not increase the occurrence and intensity of egg parasitism and the abundance of stink bugs did not differ between treatment and control plots. The stink bug control in soybean can be increased by the high density of parasitoid Scelionidae in treated areas, thereby increasing the probability of location of host eggs.
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Evolução in vitro de moléculas cry ativas contra Anthonomus grandis e Spodoptera frugiperdaOliveira, Gustavo Ramos de January 2008 (has links)
Bacillus thuringiensis é uma bactéria gram-positiva que produz cristais protéicos durante a fase de esporulação. Os cristais, são formados por proteínas Cry e apresentam atividade tóxica específica a determinadas classes de insetospraga, sendo o seu uso bastante difundido na agricultura. O presente trabalho teve como objetivo gerar uma biblioteca de variantes, do gene cry8Ha1, isolado da estirpe S811 de B. thuringiensis e selecionar variantes com atividade melhorada para pragas do algodoeiro. A biblioteca foi construída por meio da técnica de DNA shuffling e selecionada contra os insetos-praga Anthonomus grandis e Spodoptera frugiperda pela técnica de Phage display. As variantes foram selecionadas pela afinidade aos receptores presentes nas membranas dos intestinos do bicudo-do-algodoeiro (A.grandis) e da lagarta-do-cartucho (S. frugiperda), principais pragas do algodoeiro. Após expressão em fago, proteínas variantes foram testadas em bioensaios contra larvas dos insetos-alvo (A. grandis e S. frugiperda) e seqüenciadas. Os resultados de atividade, mostraram variantes mais efetivas para as duas pragas-alvo, quando comparado com a proteína original Cry8Ha1. O mutante Cry/BI-25 (ativo contra A. grandis) foi selecionado, por diferir estatisticamente do controle, e subclonado no vetor de expressão em bactéria. A proteína foi purificada e utilizada em bioensaio contra larvas de A. grandis. Os resultados indicaram um aumento de atividade entomotóxica de 333% da proteína mutante (Cry/BI-25) quando comparada com a proteína original (Cry8Ha1). A nova molécula, Cry/BI-25, está sendo utilizada em programas de melhoramento de plantas de algodão visando a obtenção de plantas resistentes à praga-alvo. / Bacillus thuringiensis is a gram-positive bacterium that produces protein crystals during its sporulation phase. These crystals are formed by Cry proteins that show specific toxicity to some insect-pest classes, which makes their use very common in agriculture. This work aimed at obtaining a library of cry8Ha1 gene variants, isolated from B. thuringiensis S811 and the selection of gene variants, whose products would have an improved insecticidal activity against cotton insect-pests. The library was constructed using DNA shuffling and selected against the insectpests Anthonomus grandis and Spodoptera frugiperda using Phage display. The variants were selected by affinity to Brush Border Membrane Vesicles (BBMVs) of A. grandis and S. frugiperda midguts. After phage expression, variant proteins were tested in bioassays against the target insects and their genes sequenced. The mutant Cry/BI-25 showed higher insecticidal activity against A. grandis and was subcloned to a bacterium expression vector. The purified expressed protein Cry/BI-25 is 333% more active when compared with protein original (Cry8Ha1). Gene variants selected against S. frugiperda are still under analysis. The new improved protein Cry/BI-25 will be used in cotton plant transformation experiments, with the purpose of developing insect-pest resistant GM cotton plants.
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Controle associado de isolados do complexo de espécies de Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC) e extrato de mastruz visando o controle da Cochonilha do CarmimVELEZ, Bruno Augusto de Alencar 26 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / A palma forrageira (Opuntia ficus-indica) é uma planta originária do México, porém, se encontra bem adaptada e distribuída na região semiárida brasileira e é uma das principais espécies utilizadas na alimentação de bovinos, caprinos e ovinos. Essa cultura tem sido comprometida pela proliferação exacerbada da cochonilha do carmim (Dactylopius opuntiae), chegando a perdas de 100% de produtividade em alguns casos, logo, se faz necessário à elaboração de métodos que controle a praga. O controle microbiano por fungos entomopatogênicos e extratos vegetais tem se mostrado importante nesse sentido. O presente trabalho objetivou avaliar a eficiência da associação de extrato de mastruz e de isolados do complexo de espécies Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC) no controle da cochonilha do carmim in vitro e em casa de vegetação. Foi avaliada a compatibilidade entre os isolados FIESC 20-b com os extratos aquoso e hidroetanólico de mastruz através do Indice Biológico. Os bioensaios in vitro e em casa de vegetação foram realizados através de palmas infestadas com fêmeas adultas crescidas após 30 dias, a mortalidade corrigida foi determinada através da fórmula de Abbott (1925) e a confirmação do agente causal foi baseada no crescimento fúngico sobre os insetos em placas de Petri. A compatibilidade entre os fungos e os extratos revelou que os isolados URM6778, URM6779 e URM6782 foram os selecionados para bioensaios contra a cochonilha combinado ao extrato aquoso e os isolados URM6777, URM6778 e URM6779 foram os mais indicados para a porção hidroetanólica. Os melhores resultados dos bioensaios realizados em laboratório foram registrados pelo isolado URM6779 e seu uso combinado com os extratos aquoso (10%) e hidroetanólico (5%), tanto para a mortalidade corrigida quanto para a confirmada. Já para o bioensaio em casa de vegetação os tratamentos envolvendo o extrato aquoso (10%) e o isolado URM6779 em conjunto com este extrato apresentaram os melhores resultados para estudos em campo, 66,25 e 44,5 respectivamente. / The prickly pear (Opuntia ficus-indica) is native plant from Mexico, but it is well adapted and distributed in the Brazilian semiarid region and is one of the main species used to feed cattle, goats and sheep, being directly related to life and income source of local people. On the other hand, this culture has been compromised by excessive proliferation of cochineal carmine (Dactylopius opuntiae), reaching losses of 100% productivity in some cases. Therefore, the development of methods that control the pest and does not compromise the environment and people are necessary. The microbial control by entomopathogenic fungi and plant extracts have shown to be important in this regard. Thus, this study aimed to evaluate the efficiency of mastruz extract association and isolates of Fusarium incarnatum-equiseti (FIESC) in control of cochineal scale in vitro and in the greenhouse. Compatibility between isolated FIESC 20-b with aqueous extracts and hydroethanol of mastruz through the Biological Index was evaluated. The laboratory bioassays and greenhouse were carried through infested palms with grown adult females after 30 days, the corrected mortality was determined by Abbott's formula (1925) and confirmation of the causative agent was based on fungal growth on insects in Petri dishes. Compatibility between fungi and extracts revealed that the isolated URM6778, URM6779 and URM6782 were selected for bioassay against cochineal combined with the aqueous extract and isolated URM6777, URM6778 and URM6779 were the most suitable for the portion hydroethanol. The best results of the laboratory bioassays were recorded by the 6779 URM isolated and with its combination with aqueous (10%) and hydroethanolic (5%), both for corrected and established mortality. As for the bioassay in greenhouse treatments involving the aqueous extract (10%) and isolated URM6779 together with this extract showed the best results for field studies.
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Indução abiótica de genes de resistência em cana-de-açúcar relacionadas à defesa contra Sporisorium scitameneumOLIVEIRA, Louise Melo de Souza 24 October 2012 (has links)
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-27T22:14:16Z
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Previous issue date: 2012-10-24 / CNPq / Nos diferentes ambientes onde é cultivada a cana-de-açúcar, a cultura é submetida às mais diversas condições e exposta a uma ampla variedade de fatores, capazes de reduzir sua produtividade, sendo as doenças um deles. O carvão é uma das principais doenças da cana-de-açúcar que provoca a restrição do uso de variedades suscetíveis altamente produtivas. A indução de resistência consiste na ativação de mecanismos naturais de defesa das plantas contra patógenos por meio de indutores bióticos e abióticos. Este método alternativo de controle é uma proposta promissora para o controle de doenças, reduzindo a dependência aos produtos químicos e possibilitando, em algumas culturas, a utilização de cultivares com alto potencial agrícola e reduzida resistência a determinadas doenças. A expressão de genes e proteínas de resistência tem sido usada como uma importante abordagem experimental para conhecer função gênica e compreender os mecanismos moleculares que estão relacionados com processos de tolerância. A técnica de Reverse Transcription Poylemrase Chain Reaction (RT-PCR) é uma ferramenta útil na identificação de genes de defesa em plantas a estresse biótico. Este trabalho teve como objetivo analisar a diferença de expressão de genes e proteínas em cana-de-açúcar induzidas com elicitores abióticos para controle do carvão utilizando a técnica RT-PCR. Plantas da variedade SP 791011 (suscetível) com três meses de idade foram tratadas com: ASM (10 g do p.c./ 100 litros de água); Silicato de potássio (24g/l), Extrato alcoólico de Allamanda blanchetti (1000ppm) e plantas controle, não tratadas tiveram seus tecidos coletados com 0, 24, 48 e 72 horas após a indução de resistência e imediatamente acondicionado em nitrogênio líquido para a extração de RNA e proteínas totais, os quais foram extraídos da folha utilizando o reagente Trizol e o cDNA obtido utilizando o Kit SuperScriptII. Foram desenhados primers de genes de resistência da cana-de-açúcar ao carvão, e realizada a análise de expressão. As proteínas totais foram extraídas, solubilizadas e separadas por eletroforese bidimensional (2-DE) para posterior identificação via espectrometria de massas. Foram observadas mudança de expressão gênica e protéica nos diferentes tratamentos, principalmente na expressão dos genes de quitinase, glucanase e peroxidase. Foi possível verificar a eficiência dos diferentes indutores de resistência e estes resultados são muito úteis para ajudar a elucidar a base molecular dos mecanismos que as plantas utilizam para tolerar a presença de fungos fitopatogênicos. / In different environments where it is grown in sugar cane, the culture is subjected to various conditions and is exposed to a wide variety of factors that can reduce productivity, illness being one of them. Coal is a major disease of cane sugar that causes the restriction of the use of susceptible varieties highly productive. The induction of resistance is the activation of natural defense mechanisms of plants against pathogens through biotic and abiotic inducers. This alternative method of control is a promising proposal for the control of diseases, reducing dependence on chemicals and allowing, in some cultures, the use of cultivars with high agricultural potential and reduced resistance to certain pathogens. The expression of resistance genes and proteins has been used as an important experimental approach to gene function knows and understand the molecular mechanisms that are related to processes tolerance. The Reverse Transcription Poylemrase Chain Reaction (RT-PCR) technique has been effective in the idetification of defense genes in plants to biotic stress. This study aimed to analyze the difference in expression of genes and proteins in sugarcane induced with abiotic elicitors to control coal using RT-PCR technique. Plants of the variety SP 791011 (susceptible) with three months of age were treated with: ASM (10 g pc / 100 liters of water); Potassium silicate (24g / l), alcoholic extract of Allamanda blanchetti (1000ppm) and control plants Untreated their tissues were collected with 0, 24, 48 and 72 hours after induction of resistance and immediately stored in liquid nitrogen for RNA extraction and total proteins, which were extracted from the leaf using the Trizol reagent and the cDNA Kit obtained using SuperScriptII. Primers were designed for resistance genes from sugar cane to coal, and performed expression analysis. The total protein were extracted, solubilized and separated by two-dimensional electrophoresis (2-DE) for identification via mass spectrometry. We observed a change in gene and protein expression in the different treatments, especially in the expression of genes for chitinase, glucanase and peroxidase. It was possible to verify the effectiveness of different inducers of resistance and these results are very useful to help elucidate the molecular basis of the mechanisms that plants use to tolerate the presence of pathogenic fungi.
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Manejo de Agrotis ipsilon (hufnagel) (lepidoptera: Noctuidae) com EntomopatógenosKAISER, I. S. 01 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-01 / A lagarta rosca, Agrotis ipsilon (Hufnagel) (Lepidoptera: Noctuidae), é uma praga encontrada em todo mundo, que ataca diversas culturas e plantas invasoras. É considerada de difícil controle devido ao seu hábito noturno e ficar enterrada abaixo do solo ou abaixo dos restos culturais durante o dia. Desta forma, devem ser estudados métodos de manejo que auxiliem no controle dessa praga e que reduzam a aplicação de agrotóxicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar métodos alternativos de manejo da praga com entomopatógenos, por meio de produtos à base de Bacillus thuringiensis (Berliner) (Bt) e Nematoides Entomopatogênicos (NEPs) Steinernema carpocapsae (Weiser) (Rhabditida: Steinernematidae) e Steinernema feltiae (Filipjev) (Rhabditida: Steinernematidae). Pode se observar que as lagartas de foram suscetíveis aos produtos de Bt, Agree® e Dipel®, e o Agree® teve maior efeito sobre as lagartas de 48-72 horas comparado ao Dipel®. Não houve diferença entre as CL50 e CL90 entre os produtos e o Agree® apresentou maior inclinação da curva resposta (concentração x mortalidade). As espécies de NEPs foram eficientes no controle de A. ipsilon, e permaneceram patogênicos no solo por oito dias após a aplicação. A principal forma de manejo tem sido o tratamento de sementes, ou a aplicação direta com inseticidas, sendo que estes métodos podem ocasionar uma série de problemas ao meio ambiente e ao homem. Desta forma, devem ser estudados métodos alternativos de manejo de A. ipsilon.
Palavras-chave: Lagarta rosca. Controle biológico. Manejo integrado de Pragas.
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Biologia de Liriomyza sativae Blanchard, 1938 (Diptera: Agromyzidae) em tomateiros submetidos à aplicação de silícioBARROS, A. P. 29 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-29 / O tomateiro é sensível ao ataque da mosca-minadora, Liriomyza sativae. As injúrias provocadas pela mosca-minadora comprometem a sanidade do vegetal, uma vez que, tanto as puncturas para alimentação quanto as galerias confeccionadas pelas larvas favorecem a entrada de patógenos, além de reduzir a área fotossintética. O uso de silício na cultura do tomateiro pode ser um excelente aliado no manejo de L. sativae, podendo reduzir e até dispensar o uso de inseticidas sintéticos que provocam desequilíbrios ambientais, entre os quais, morte de insetos benéficos, polinizadores, predadores e parasitoides. Portanto objetivou-se analisar a biologia e o comportamento de L. sativae em tomateiros submetidos à aplicação de silício. Os tratamentos foram com silicato de potássio e dióxido de silício, em duas formas de aplicação, foliar e drench. Aplicou-se nos tomateiros as fontes de silício, 24 horas após, realizou-se os ensaios. No ensaio de biologia analisou-se a duração e viabilidade das fases imaturas, a razão sexual, longevidade e a sobrevivência dos adultos. Já no ensaio de livre escolha avaliou-se o comportamento alimentar e reprodutivo das fêmeas. No ensaio de tabela de vida e fertilidade, ovos e larvas de duas gerações de L. sativae foram desenvolvidos em tomateiros submetidos à aplicação de silício, e avaliou-se os a prole F1. Com os dados biológicos confeccionou-se as Tabelas de Vida de Fertilidade (TVF) e calculou-se os parâmetros de crescimento populacional pela estimativa de Jacknife, com adultos da prole F1 analisou-se a sobrevivência e a fertilidade. A pulverização de silicato de potássio e dióxido de silício confere proteção aos tomateiros, afetando a sobrevivência da fase imatura, o comportamento alimentar e de oviposição, além de comprometer a fertilidade e a sobrevivência de fêmeas F1. Em síntese, o silício aplicado afeta negativamente a biologia de L. sativae.
Palavras-chave: Mortalidade. Manejo de pragas. Mosca-minadora. Solanum lycopersicum. Silicato de potássio. Dióxido de silício.
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Ecologia aplicada de pectinophora gossypiella (Saunders, 1843) : lepidoptera, gelechiidaeFernandes, Wedson Desiderio 18 February 1986 (has links)
Orientador : Mohamed E.M. Habid / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T08:53:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1985 / Resumo: No presente trabalho a flutuação populacional de P. gossypiella foi estudada, em diferentes campos e épocas com diferentes condições de controle. Foram avaliadas também, iscas e armadilhas feromônicas para o uso em monitoramentos além da atividade sexual circadiana de P. gossypella. Os dados de captura nas armadilhas instaladas durante o ano todo, mostraram um comportamento repetido ciclicamente durante todo o período de estudo. Em áreas de controle químico, os maiores índices de captura ocorreram nos meses de fevereiro, março e abril. Os índices de maças atacadas pela lagarta rosada aumentaram de acordo com a maior disponibilidade de recursos alimentares; e o número de larvas / maça aumentou de acordo com o aumento populacional da praga e a baixa disponibilidade de maças viáveis no final do ciclo. Foram observados picos distintos de captura de adultos de P. gossypiella nos meses de setembro e novembro, período de entre safra. Esta geração é denominada de ¿geração suicida¿, pois a maioria dos indivíduos não chega a completar seu ciclo de vida. As três aplicações aéreas de feromônio, mantiveram a população de adultos e larvas de P. gossypiella, em níveis relativamente baixos na safra de 1981/82. A atração de mariposas de campos adjacentes tratados convencionalmente, diminuiu no final do ciclo o nível de controle da praga, nos campos tratados com o feromônio. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In the present work the populational fluctuation of P. gossypiella was studied in different fields and seasons under different control conditions. Also, pheromonic baits and traps as well as sexual circadian activity were evaluated. Utilizing delta traps, a cyclic behavior was detected during our observations. In fields treated conventionally in February, March and April. However, in fields treated by sexual pheromone, high levels were reached, at least, a month later. The boll infestation increased according to the food resources abundance, and the number of larvae per boll increased according to the reduction in the quantity of bolls present during the end of the season. High capture levels were observed during September and November. This population is called ¿Suicidal generation¿, since the adults fail to complete their life cycle. Three aerial applications of the sexual pheromone were sufficient to maintain the adults and larvae populations of P. gossypiella at relatively low levels during the 1981 / 82 cotton season. Moths were attracted from adjacent fields conventionally treated, decreasing the pest control efficiency in the end of the cotton season. Comparisons between ¿male confusion¿, ¿attract¿n kill¿ and chemical conventional methods, showed that there wasn¿t significant difference among the two first methods in suppressing P. gossypiella populations. Chemical control method showed to be less effective. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Ecologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Variabilidade em linhagens de Metarhizium anisopliae var anisopliae (Metsch) Sorokin quanto a germinação de conidios, conteudo proteico e atividade enzimaticaAguiar, Neiva Tinti de Oliveira 08 April 1991 (has links)
Orientador : Claudio Luiz Messias / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1991 / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas
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Metodo de purificação do virus de granulose de Diatraea saccharalis (Fabr., 1974) (VGDs) e caracterização de seu principal componente proteicoCavallaro, Angela Cristina 29 April 1988 (has links)
Orientador: Octavio Henrique de Oliveira Pavan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:37:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1988 / Resumo: Este trabalho objetivou a padronização de técnicas visando a caracterlzação de proteínas do Vírus de Granulose de Diatraea saccharalis (VGDs). Várias metodologias de purificação foram testadas para oVGDs, até a definição do padrão ideal a ser seguido, para se obter o vírus livre de contaminantes. Algumas variações experimentadas mostraram-se ineficientes, pois não oi obtido o vírus puro. A purificação do VGDs através de centrifugação diferencial apresentou, como contaminantes, restos de tecidos e células de lagartas e, algumas vezes, bactérias.O emprego de triton X-100, como detergente, fez com que a cápsula protéica do VGDs se solubiliasse durante os passos de sua purificação. O esquema de purificação que se mostrou mais eficiente foi aquele em que o macerado de lagartas passou por um ciclo de centrifugação diferencial, seguida de centrifugação em colchão e gradiente de sacarose e, neste último, coletando-se a banda mais próxima à concentração de 58 %. A observação das amostras de VGDs em microscópio eletrônico mostrou que estas, quando ressuspendidas em tampão Tris-HCI 0,1 M pH 7,8, apresentavam as partículas virais agregadas, e separadas e nítidas quando ressuspendidas em água destilada. O emprego de soluções alcalinas na solubilização da cápsula protéica do VGDs não apresentou o resultado esperado, ou seja, a obtenção da granulina. Mesmo variando-se o tempo e a temperatura de lncubação das amostras, a concentração de proteínas apresentou-se sempre muito baixa.A solubilização do VGDs com TCA apresentou uma concentração de proteínas maior, possibilitando o reconhecimento da granulina, quando as amostras foram corridas em eletroforese. Foi testada a solubilização com TCA em vírus que já tinham o peso molecular de suas respectivas proteínas da matriz conhecido através de solubilização alcalina (VPNAc, VPNAg, VPNHz e VPNTn). Houve uma pequena variação que não pode ser atribuída ao método de obtenção destas, e sim à variabilidade de metodologias empregadas em eletroforese. Dessa forma, pode-se concluir que com o emprego de TCA é possível obter-se as proteínas do vírus e também determinar o seus pesos moleculares. Em relação à metodologia de eletroforese, a que mostrou melhor resolução foi a de poliacrilamida e SDS sem o emprego de uréia. Através da análise de padrões eletroforéticos pode-se obter um padrão das proteínas do VGDs apresentando a granulina como principal componente com um peso molecular de 31500 d / Abstract: This study aimed a padronization of methodology envisaging the characterization of the proteins of the Diatrea saccharalis Granulosis Vírus (DsGV). Several methodologies for the purification of DeGV were tested, to obtain vírus free of contaminants. Some variations in the protocol experimented were not efficient resulting in contaminated preparatlons. The purification of DsGV through differential centrifugation showed tissue and cells debris and bacteria as contaminants. The use of triton X-100 as detergent solubilized the proteic capsule of DsGV during the purification steps. The most effective metodologiy for purification was the homogenization of larvae followed by a cicle of differential centrifugation and by centrifugation in a sucrose cushion and gradient. The vírus band is found at the sucrose concentration of 58 %. The observation of the DsGV samples in eletron microscope showed that the samples in Tris-HCI buffers formed bundles wich were not formed when the samples where mantained in water. The use of alkaline solutions to dissolve the proteic capsule of DsGV did not presented the expected results in different Incubation times and temperatures resulting in all cases in lows concentration of the proteins. Better results were obtained with TCA which results in much higher yelds of total protein. To evaluate the method, a series of other baculoviruses were treated with TCA and the resulting protein profiles compared to those obtained by other authors using the alkaline treatment. The results were very similar showing that the method is a viable alternative procedure. The electrophoresis metodology showing the best resolution of the proteins was that with polyacrilamide and SDS without urea. The eletrophoretic profile of DsGV proteins has been obtained and the main component can be identifired as granulin having a molecular weight of 31500 d / Mestrado / Genetica / Mestre em Biologia
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Identificação de isolados de Fusarium verticillioides micotoxigênicos em grãos de milho no Estado de PernambucoCHANG, Susane Cavalcanti 27 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-27 / CAPES / Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=Fusarium moniliforme Sheldon) é um fungo parasita não obrigatório, micotoxigênico em potencial, de ocorrência comum em culturas de milho, causando podridão da raiz, colmo, espiga e deterioração de grãos armazenados. É considerado mundialmente um dos mais importantes produtores de fumonisina em cereais utilizados na dieta humana e em rações animais, que uma vez contaminados, são prejudiciais aos homens e animais que os ingerem. Sendo o milho uma das principais fontes de carboidratos nas culturas ocidentais, este estudo propôs a identificação polifásica de isolados de F. verticillioides micotoxigênicos em grãos de milho de diferentes regiões de Pernambuco (Brasil), um importante produtor de milho da Região Nordeste do Brasil, a análise da variabilidade genética por marcadores moleculares ISSR e a detecção da presença de fumonisinas B1 e B2 pelo uso da técnica de MALDI-TOF MS. Foram analisados 60 isolados de F. verticillioides obtidos de três diferentes regiões de Pernambuco, identificados pela taxonomia clássica, biologia molecular, bioquímica (análise de fumonisinas B1 e B2 por MALDI-TOF MS) e por perfis proteômicos por MALDI-TOF ICMS. Todos os isolados apresentaram amplificação para o gene FUM1, demonstrando a capacidade para produzir fumonisina, sendo a detecção das fumonisinas B1 e B2 confirmadas posteriormente pela técnica de MALDI-TOF MS. As amplificações com os primers (GTG)5 e (GACA)4 não evidenciaram agrupamento dos isolados quanto a região de origem e também evidenciaram baixa variabilidade genética intraespecífica. Isto foi confirmado mais tarde pelo uso da técnica de MALDI-TOF ICMS, que se mostrou eficiente quanto à identificação de fungos filamentosos e à detecção de micotoxinas, embora haja necessidade de ampliação das informações no banco de dados para este tipo de micro-organismo. / Fusarium verticillioides Sacc. Niremberg (=Fusarium moniliforme Sheldon) is a potential mycotoxigenic and non-obligatory parasite fungus that commonly infects corn, causing damage to the roots, stem, and cobs and deterioration of stored seeds. It is considered one of the most important global producer of fumonisin in grains used for food or feed production. It makes them as potential prejudicial to both humans and animals. Corn is one of the principal source of carbohydrates in the western cultures. The present study established a polyphasic approach to identify 60 isolates of potential mycotoxigenic strains of F. verticillioides in corn kernels from different regions of Pernambuco State (Brazil), an important corn producer in the northest region of Brazil. All isolates were obtained from three different regions of Pernambuco State and identified by classical taxonomy, biochemical assays (fumonisins B1 and B2 analysis by MALDI-TOF MS), proteomic profiles by MALDI-TOF ICMS and molecular biology, using ISSR molecular markers. For all isolates it was possible to amplify the FUM1 gene from, demonstrating their capacity to produce fumonisin, which was later confirmed by MALDI-TOF MS analysis. Amplifications using the primers (GTG)5 and (GACA)4 did not demonstrate any differences between isolates from different regions, indicating little intraspecific genetic variability. It was later confirmed through the fungal proteomic profiles by MALDI-TOF ICMS. MALDI-TOF ICMS was effective for mycotoxin detection and for the fungal identification at species level, although there is need to expand the information in the database for this fungal species.
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