O cultivo da videira no estado do Rio Grande do Sul é de grande importância, sendo responsável pela produção de mais da metade das uvas colhidas no país. A podridão da uva madura, causada pelo agente patogênico Glomerella cingulata (Colletotrichum gloeosporioides), tem provocado sérios prejuízos nos vinhedos da Serra Gaúcha nestes últimos anos. Para o controle desta doença tem-se usado intensivamente e indiscriminadamente agrotóxicos, os quais tem causado diversos danos ao meio ambiente. O objetivo do presente trabalho foi gerar conhecimento básico e aplicado sobre o controle da podridão da uva madura, enfocando aspectos relativos ao controle biológico com Trichoderma spp. e óleo essencial de Cymbopogum citratus. Para isso analisou-se in vitro o efeito antifúngico de diferentes concentrações do óleo essencial de capim-limão (Cymbopogon citratus), de isolados de Trichoderma spp. e de fungicidas, no controle do patógeno Glomerella cingulata (C. gloeosporioides). Com isso estabeleceu-se a concentração de 0,2% do óleo essencial, o isolado T8 de Trichoderma sp. e o fungicida Tebuconazole para serem aplicados nas videiras a fim de controlar a podridão da uva madura. Também avaliou-se, In Vivo, o biofungicida comercial Trichodel®, composto por células do fungo Trichoderma spp em diferentes dosagens. No momento de colheita, avaliou-se as características das uvas tratadas e determinou-se a eficiência dos diferentes tratamentos no controle da doença. No teste no vinhedo de Niágara Branca a produtividade foi menor no tratamento com o óleo essencial de C. citratus, não diferindo estatisticamente com a testemunha, sem aplicação de produtos com ação sobre a doença podridão da uva madura. Os demais tratamentos apresentaram produção entre 28 e 30,5 ton/ha. Em relação ao peso médio dos cachos, também não foram observadas grandes variações, sendo que não houveram diferenças significativas entre os tratamentos, inclusive no tratamento testemunha. O teor de sólidos solúveis totais foi de 14º Brix em todos os tratamentos. Quanto à incidência e a severidade da doença, todos os tratamentos diferiram com a testemunha. O tratamento com fungicida foi o que apresentou os melhores resultados, seguido dos tratamentos alternados entre o fungicida e o óleo essencial de C. citratus e do tratamento com o fungicida e o antaginista Trichoderma sp. O biofungicida Trichodel® testado em diferentes dosagens não demonstrou incremento na ação sobre a doença com o aumento da dosagem. O isolado T8 de Trichoderma sp. não diferiu com a biofungicida. Enquanto que a menor redução foi observada no tratamento com o óleo essencial de C. citratus. Conclue-se que o controle alternado entre o fungicida e o antagonista Trichoderma spp. é a melhor forma para se promover o controle da podridão da uva madura com menor impacto ambiental, ou seja reduzindo o número de aplicações de agrotóxicos. / The vine cultivation in Rio Grande do Sul state is of great importance, being responsible for producing more than half of the grapes harvested in the country. The rot of ripe grape, caused by the pathogen Glomerella cingulata (Colletotrichum gloeosporioides), has caused serious damage in the vineyards of the Gaucha Saw in recent years. To control this disease has been used intensively and indiscriminately pesticides, which has caused extensive damage to the environment. The objective of this study was to generate basic knowledge and applied on the control of the ripe grape rot, focusing on aspects of biological control using Trichoderma spp. and essential oil Cymbopogum citratus. To this was analyzed In Vitro antifungal effect of different concentrations of essential oil of lemongrass (Cymbopogon citratus), isolates of Trichoderma spp. and fungicides in controlling pathogen Glomerella cingulata (C. gloeosporioides). With this set is the concentration of 0.2% essential oil, isolated T8 Trichoderma sp. Tebuconazole and the fungicide to be applied on the vines to control grape ripe rot. Also it was evaluated in vivo commercial biofungicide Trichodel® consisting of Trichoderma spp cells at different dosages. At the time of harvest, it was evaluated the characteristics of the treated grapes and determined the effectiveness of different treatments in controlling the disease. In the test at the White Niagara vineyard productivity was lower in the treatment with the essential oil of C. citratus, did not differ statistically with the witness without application products acting on the rot of ripe grape disease. The other treatments showed production between 28 and 30,5ton/ha. Compared with the average weight of bunches also large variations were observed, and there were no significant differences between treatments, including the control treatment. The total soluble solids content was 14º Brix in all treatments. The incidence and severity of the disease, all treatments differed with the witness. Treatment with fungicide showed the best results, followed by alternate treatments between the fungicide and the essential oil of C. citratus and treatment with fungicide and antaginista Trichoderma sp. The Trichodel® biofungicide tested in different dosages showed no increase in action on the disease with increasing dosage. The isolated T8 Trichoderma sp. it did not differ with the biofungicide. While the smallest decrease was observed in the treatment with the essential oil of C. citratus. Concludes that the control alternated between the fungicide and the antagonist Trichoderma spp. it is the best way to promote control of the ripe grape rot with less environmental impact, ie reducing the number of pesticide applications.

O percevejo-bronzeado do eucalipto, Thaumastocoris peregrinus, é um inseto fitófago que ocasiona o amarelecimento das folhas de Eucalyptus e, em casos severos, a desfolha e morte das plantas. Buscam-se formas de controle natural e/ou biológico para o controle deste inseto. Nesta perspectiva, o controle biológico vem ganhando espaço e o emprego de fungos entomopatogênicos torna-se viável, uma vez que já ocorre naturalmente no ambiente. Nesse sentido, objetivou-se avaliar a ação do fungo entomopatogênico B. bassiana, isolado IBCB 66 sobre diferentes fases de desenvolvimento de T. peregrinus, em condições de laboratório. Os tratamentos foram: Água destilada esterilizada (ADE), Água destilada esterilizada + Tween® 80 (0,01%) (ADET) e B. bassiana isolado IBCB 66 (1,0 x 108 conídios. mL-1). Esses tratamentos foram avaliados em três bioensaios em delineamento inteiramente casualizado. 1- Ação de B. bassiana sobre ovos de T. peregrinus: Folhas de Eucalyptus benthamii foram recortadas em discos de 2,4cm Ø, alocados no interior de tubos de vidro chato (2,5cm Ø e 10 cm h). Cartelas contendo em média 10 ovos de T. peregrinus foram imersas na solução correspondente a cada tratamento e colocadas sobre os discos foliares, totalizando 20 repetições/tratamento, sendo mantidos em câmara climatizada BOD (27±2° C, 14 h de fotofase e UR de 70 ± 10%) (procedimento padrão para todos os bioensaios). Foram avaliados o período de incubação e a viabilidade dos ovos de T. peregrinus. 2- Ação de B. bassiana sobre ninfas de T. peregrinus: Discos de E. benthamii de 2,4cm Ø, previamente tratados foram alocados no interior de tubos de vidro que recebeu, na sequência, uma ninfa de 3° ínstar de T. peregrinus, totalizando 50 tubos/repetições por tratamento. Neste bioensaio foram avaliadas a duração e a viabilidade dos ínstares ninfais. 3- Ação de B. bassiana sobre adultos de T. peregrinus: este bioensaio foi realizado conforme metodologia descrita para ninfas. Cada tubo de vidro recebeu um adulto de T. peregrinus, totalizando 50 tubos/repetições por tratamento. Neste bioensaio foi avaliada a longevidade diariamente, até a mortalidade total dos insetos. Alguns exemplares de adultos mortos que entraram em contato com B. bassiana foram coletados, para análise histológica, conforme metodologia padrão. O fungo B. bassiana não interferiu no período de incubação e viabilidade de ovos de T. peregrinus. O mesmo foi observado sobre ninfas de 3° ínstar e adultos, que não foram afetados pelo fungo. A duração média e a viabilidade foram reduzidas em ninfas de 4° e 5° ínstar, demonstrando que o fungo B. bassiana é patogênico nessa fase de desenvolvimento. Na análise histológica de adultos de T. peregrinus verificou-se a presença de hifas, conídios e conidióforos nos tecidos do sistema digestivo e muscular. / The bronze bug of eucalyptus, Thaumastocoris peregrinus, is a phytophagous insect that causes yellowness of leaves of Eucalyptus, and in severe cases, death, and defoliation of plants. Forms of natural control and/or biological control for this insect are aimed. In this perspective, biological control has been increasing and the use of entomopathogenic fungi is feasible, as already occurs naturally in the environment. In this sense, it aimed to evaluate the action of entomopathogenic fungus B. bassiana, isolated IBCB 66 on different developmental stages of T. peregrinus in laboratory conditions. The treatments were: sterilized distilled water (SDW), Distilled water Tween 80 (0.01%) (DWT) and B. bassiana IBCB 66 (1.0 x 108 conidia mL-1). These treatments were evaluated in three bioassays in experimental design. 1: B. bassiana action on eggs of T. peregrinus: Eucalyptus benthamii leaves were cut into disks of 2.4 cm Ø, allocated within flat glass tubes (2.5 cm Ø and 10 cm h). Cards containing on average 10 eggs of T. peregrinus were immersed in the solution corresponding to each treatment and placed on leaf discs a total of 20 replications / treatment, and kept in a climatized chamber BOD (27 ± 2 ° C, 14 h photoperiod and RH 70 ± 10%) (standard procedure for all bioassays). They evaluated the incubation period and the viability of T. peregrinus eggs. 2: B. bassiana action on nymphs of T. peregrinus: E. benthamii discs of 2.4 cm Ø, pretreated were placed inside glass tubes that received following a nymph 3° instar T. peregrinus totaling 50 tubes / replications. In this bioassay were evaluated duration and viability of the nymphal instars. 3: B. bassiana action on adults of T. peregrinus: This bioassay was performed as described methodology for nymphs. Each glass tube received an adult T. peregrinus, totaling 50 tubes / replications per treatment. In this bioassay was assessed daily longevity to the total mortality of insects. Some adult specimens dead who came into contact with B. bassiana were collected for histologic analysis as standard methodology. B. bassiana did not affect the incubation period and viability of eggs of T. peregrinus. The same was observed on nymphs of 3° instar and adults who have not had the studied biological parameters affected by the fungus. The average duration and viability were reduced by 4 ° to 5 ° instar nymphs , indicating that the pathogen is B. bassiana this development phase. Histological examination of the adults of T. peregrinus verified the presence of hyphae, conidia and conidiophores in the digestive system and muscle tissues.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-05T18:50:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1802151 bytes, checksum: 55ced28e2e4f99399e06e35026253dfd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T18:50:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1802151 bytes, checksum: 55ced28e2e4f99399e06e35026253dfd (MD5) Previous issue date: 2005-06-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O interesse por métodos não-químicos de controle de pragas em grãos armazenados vem aumentando, uma vez que os consumidores estão menos tolerantes aos resíduos nos alimentos e há sucessivos relatos de resistência a inseticidas em muitas espécies de insetos de produtos armazenados. O controle biológico surge como uma das alternativas e existem vários casos de sucesso desse método, principalmente quando inserido em programas de manejo integrado de pragas. Pesquisas com o ácaro Acarophenax lacunatus (Cross & Krantz) vêm sendo desenvolvidas e demonstram que sua utilização no controle biológico de coleópteros-praga de produtos armazenados é promissora. Assim, esta pesquisa foi dividida em cinco etapas que abordam estudos básicos com este inimigo natural, visando fornecer subsídios para sua futura liberação em programas de controle biológico em ambientes de armazenamento. A primeira etapa está relacionada com a capacidade de A. lacunatus sobreviver à inanição sob diferentes temperaturas. Foram simuladas situações de escassez de alimento, sendo observado que A. lacunatus conseguiu sobreviver na ausência de alimento por até 108 horas, nas temperaturas de 20, 25 e 28 0C. A segunda etapa avaliou se este ácaro dispersa numa massa de grãos e consegue localizar o hospedeiro Rhyzopertha dominica (Fabricius). Constatou-se a habilidade de A. lacunatus em penetrar até 20 cm de profundidade e localizar ovos de R. dominica em diferentes regiões na massa de grãos, colonizando o ambiente de forma ativa. A terceira etapa consistiu no estudo da biologia de A. lacunatus sobre os hospedeiros Tribolium castaneum (Herbst) e Cryptolestes ferrugineus (Stephens) nas temperaturas 20, 25, 28, 30, 32 e 35 0C. A temperatura influenciou os parâmetros biológicos do ácaro, sendo a taxa intrínseca de crescimento (rm), a taxa líquida reprodutiva (Ro) e a razão sexual diretamente proporcionais ao aumento da temperatura. As maiores progênies (19 indivíduos/fêmea do ácaro em T. castaneum e 15 indivíduos/fêmea do ácaro em C. ferrugineus) foram observadas à temperatura de desenvolvimento. 30 A 0 C, demonstrando quarta que essa temperatura favorece seu etapa abordou um estudo de seleção de linhagens de A. lacunatus, que foram mantidas por sucessivas gerações, isoladamente, sobre os hospedeiros T. castaneum, C. ferrugineus e R. dominica. Teve como objetivo testar a preferência do ácaro por ovos desses coleópteros, em testes mensais, durante nove meses, na tentativa de detectar possíveis mudanças nessa preferência que possam indicar a seleção de linhagens desse ácaro com uma melhor performance sobre estes insetos. Houve uma influência significativa do tempo sobre a taxa de parasitismo, sendo R. dominica o hospedeiro mais parasitado em todas as situações, indicando que esta preferência parece estar fixada geneticamente, uma vez que A. lacunatus vem sendo mantido sobre este hospedeiro desde sua introdução no Brasil. Foi calculada a herdabilidade (h2) para T. castaneum e C. ferrugineus, sendo que este valor foi maior para T. castaneum. Isso indica que a seleção de linhagens desse ácaro com um melhor desempenho sobre T. castaneum pode ser realizada. Já a quinta etapa consistiu no estudo do potencial de parasitismo de A. lacunatus sobre o coleóptero T. castaneum, onde observou-se que o aumento da densidade do ácaro implicou no aumento do número de ovos parasitados, com conseqüente redução das populações desse inseto. Assim, novas informações sobre A. lacunatus são acrescentadas e indicam que sua utilização no controle biológico de T. castaneum, C. ferrugineus e R. dominica pode ser viável. / The interest for non-chemical control methods of stored grain pests is increasing since the consumers are less tolerant about insecticide residues on food and there are reports of insecticide resistance in insects of stored products. The biological control appears as an alternative and there are several success cases of the control method, mainly within integrated pest management programs. Studies with the mite Acarophenax lacunatus (Cross & Krantz) have been carried out and show the potential of its use in the biological control of stored grain beetles. Therefore the present study was divided in five phases encompassing basic investigations with this natural enemy aiming to provide support for its future use in biological control programs in storage facilities. The first phase is related with the capacity of A. lacunatus to survive under starvation at different temperatures. This mite species was able to survive for up to 108 hours at the temperatures of 20, 25 and 28 0C. The second phase focused on assessing the dispersal of this mite species in the grain mass and its ability to locate its host Rhyzopertha dominica (Fabricius). The mite was able to penetrate up to 20 cm deep and locate eggs of R. dominica in different regions of the grain mass efectivelly colonizing the environment. The third phase involved the biology of A. lacunatus on the hosts Tribolium castaneum (Herbst) and Cryptolestes ferrugineus (Stephens) at the temperatures 20, 25, 28, 30, 32 and 35 0C. The temperature affected the biological parameters of the mite with a proportional increase in the intrinsic growth rate (rm) net reproductive rate (Ro) and sex ratio with increased temperature. The greates progenies (19 individuals/female in T. castaneum and 15 individuals/female in C. ferrugineus) were observed at 30 0C temperature showing that this temperature favors the mite development. The fourth phase focused the selection of mite strains maintained for several generations in different hosts (T. castaneum, C. ferrugineus and R. dominica). The objective was to test the host egg preference of each selection line in monthly tests trying to detect changes in preference through time. There was a significant influence of time on the parasitism rate with R. dominica always being the preferred host and indicating that this preference was genetically fixed in the mite population. The heritability (h2) of egg preference for the hosts T. castaneum and C. ferrugineus was calculated and higher values were observed for T. castaneum. This indicates that selection for better performance in T. castaneum is possible. In the fifth phase of the present effort, we investigated the parasitism potential of A. lacunatus in the beetle T. castaneum where an increase in mite density led to an increase in the number of parasitized eggs with a consequent reduction of this insect population. Therefore, new information on A. lacunatus was obtained indicating the viability of its use in biological control programs against T. castaneum, C. ferrugineus and R. dominica.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-18T13:09:57Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 540926 bytes, checksum: 35b46faeddd9262f0eafa5a9b415af69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T13:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 540926 bytes, checksum: 35b46faeddd9262f0eafa5a9b415af69 (MD5) Previous issue date: 2005-02-03 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As interações entre plantas, herbívoros e inimigos naturais são complexas, mas um entendimento apropriado destas interações é importante para as dinâmicas das populações e ecossistemas. Diversas famílias de plantas apresentam adaptações morfológicas e químicas contra o ataque de herbívoros. Estas adaptações são constitutivas, ou podem ser induzidas após a alimentação dos herbívoros, e ambas podem ser diretas (tendo um efeito negativo na oviposição, crescimento ou sobrevivência de herbívoros) ou indiretas (tendo um efeito negativo nos herbívoros pelo efeito positivo nos inimigos naturais dos herbívoros). Tais defesas podem ainda ser induzidas pela aplicação de compostos químicos envolvidos na via bioquímica de defesa. Um tipo de defesa morfológica contra a herbivoria é a presença de domácias (pequenas cavidades ou tufos de pelos) no lado inferior das folhas. Estas estruturas promovem a presença de ácaros predadores e fungívoros e conseqüentemente reduzem a densidade de fungos patogênicos e herbívoros nas plantas e desta forma levando a redução dos danos à mesma. Ainda não se sabe se domácias somente são formadas constitutivamente ou se elas podem também ser induzidas. O objetivo deste trabalho foi verificar a possibilidade de indução de domácias e os efeitos desta indução sobre herbívoros. O sistema usado consistiu de plantas de café (Coffea arabica) e os ácaros fitófagos Oligonychus ilicis, uma importante praga de cafeeiros. Primeiro, as plantas de café foram infestadas durante um curto período com diferentes densidades de ácaros. Depois da indução da defesa prévia da planta, avaliou-se o efeito da infestação prévia na oviposição e sobrevivência de O. ilicis (efeito induzido direto) e na produção de domácias das plantas (efeito induzido indireto). No experimento seguinte, foi usado ácido jasmônico, um composto conhecido da via bioquímica de defesa das plantas, na tentativa de indução das domácias de folhas. Novamente, a indução de defesa direta e indireta das plantas foi verificada pela oviposição e sobrevivência de O. ilicis e pela produção de domácias em plantas induzidas e não induzidas. A indução das plantas com O. ilicis resultou em uma menor oviposição e sobrevivência de O. ilicis, mas não aumentou a produção das domácias. Ao contrário, a indução com 1,0 mg de ácido jasmônico por planta, não afetou a oviposição e sobrevivência dos ácaros fitófagos, mas resultou no aumento do número de domácias em folhas emitidas posteriormente. A aplicação de 0,5 mg de ácido jasmônico por planta não afetou os ácaros e nem a produção de domácias. Isto sugere que a aplicação de ácido jasmônico e a infestação de O. ilicis induz mecanismos diferentes de defesa e esta é a primeira demonstração da indução de domácias. Mais pesquisas são necessárias para elucidar a via bioquímica de ambos os mecanismos de defesa e para quantificar os custos e benefícios de defesa induzida em plantas. / The interactions among plants, herbivores and natural enemies are complex, but a proper understanding of these interactions is important for dynamics of populations and ecosystem. Several plant families show morphological and chemical adaptations to herbivore attacks. These adaptations are either constitutive, or can be induced by herbivore feeding, and are either direct (i.e. having a negative effect on oviposition, growht or survival of herbivores) or indirect (i.e. having a negative effect on herbivores through a positive effect on the natural enemies of the herbivores). It has been shown that such defence can also be induced by application of chemical precursors of the biosynthetic pathways of induced defence. One type of morphological defence against herbivory is the presence of domatia (small cavities or tufts of hair) on the underside of plant leaves. Such domatia promote the presence of fungivorous and predatory mites, that subsequently reduce densities of plant pathogenic fungi and herbivores on the plant, thus leading to a reduction of plant damage. It is as yet unknown whether such domatia are only formed constitutively, or whether they can be induced. The aim of this thesis is to verify the possibility of induction of domatia, as well as the effect of domatia on herbivores. The system used consisted of coffee plants, and the phytophagous mite species Oligonychus ilicis, an important pest of coffee. First, coffee plants were infested for a short period with various numbers of phytophagous mites, where after the induction of defence was verified by measuring the effect of previous infestation on oviposition and survival of O. ilicis (induced direct effect) as well as the effect of previous infestation on the number of domatia on the plants (induced indirect effect). In a subsequent experiment, the induction of plants using Jasmonic Acid, a known precursor of the defence pathway of plants, was attempted. Again, the induction of direct and indirect defence of plants was verified by quantifying oviposition and survival of O. ilicis as well as the production of domatia on induced and uninduced plants. Induction of plants with O. ilicis resulted in lower survival and oviposition of O. ilicis, but not in production of more domatia. To the contrary, induction with 1.0 mg Jasmonic Acid per plant did not affect oviposition and survival of the phytophagous mite, but resulted in an increase of the numbers of domatia on newly formed leaves. Application of 0.5 mg of Jasmonic Acid did not affect the mites or the number of domatia. This suggests that Jasmonic Acid and by O. ilicis induce different defence mechanisms, and is the first demonstration of the induction of the production of domatia. Further research is needed to elucidate the biochemical pathways of both defence mechanisms as well as to quantify the costs and benefits of induced defence in plants.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T16:55:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T16:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 232626 bytes, checksum: 3d71a89873b7240693ecafd0c807a8fd (MD5) Previous issue date: 2002-06-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Cento e dezessete actinomicetos, sendo 96 obtidos de diferentes amostras de rizosfera e rizoplano de tomateiro e 21 culturas pré-selecionadas por Moura (1996), pela ação contra Ralstonia solanacearum, foram avaliados no controle biológico de Pseudomona syringae pv. tomato e Alternaria solani através microbiolização de sementes de tomateiro (Santa Cruz 'Kada'), seguindo-se o plantio em solo não-tratado e inoculação como os patógenos. A seleção massal, realizada em casa de vegetação, permitiu selecionar, pela contagem do número de lesões, o antagonista mais promissor (RD-01). Paralelamente, foram conduzidos teste de colonização de raízes de tomateiro em tubos contendo ágar- água, não inclinados, e testes de antibiose com os 117 antagonistas contra os patógenos Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Alternaria solani, pelo método da sobre-camada. Cerca de 88% dos antagonistas não tiveram nenhum efeito inibitório contra os patógenos testados apesar de 70% destes terem sido capazes de colonizar raízes em condições gnotobióticas. Em testes para o controle de Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria e Ralstonia solanacearum em casa de vegetação, o isolado RD-01 demonstrou incapacidade em reduzir sintomas incitados pelo patógeno de solo, Ralstonia solanacearum, mas apresentou potencial como agente de biocontrole dos patógenos foliares. Através de um ensaio de promoção de crescimento, realizado em casa de vegetação com os cento e dezessete isolados, pode-se concluir a inexistência de uma relação entre o efeito de promoção de crescimento vegetal para os isolados testados com os resultados de biocontrole observados em experimento anterior. Em experimento de campo para o controle de Phytophthora infestans e Alternaria solani, dois actinomicetos pré-selecionados (RD-01 e SON-17) foram aplicados através da microbiolização de sementes de tomateiro e pela colonização do filoplano, respectivamente. Apesar de o controle químico ter sido mais efetivo que os actinomicetos, estes revelaram sua potencialidade como medida passível de utilização em procedimentos de manejo integrado, a qual precisa ser mais explorada. / One hundred and seventeen actinomycetes were used in the microbiolization of tomato seeds, followed by the sowing in non-treated soil. From these, 96 were isolated from samples of tomato rizosfere, and 21 cultures had been pre-selected by Moura (1996) for their action against Ralstonia solanacearum. At the same time, root colonization tests with tomato grown in test tubes containing water-agar and antibioses tests were conducted with the antagonists against the pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria and Alternaria solani. Nearly 88% of the antagonits had no inhibitory effect against the tested pathogens despite 70% of these had been able to colonize the roots in gnotobiotic conditions. Mass selection, to control P. s. pv. tomato and A. solani, allowed the selection of the most promising antagonist (RD-01), though the reduction of the number of lesions. In a greenhouse test for the control of Corynespora cassiicola, Stemphylium solani, X. c. pv. vesicatoria e R. solanacearum, the isolate RD-01 was unable to reduce symptoms incited by the soilborne pathogen, R. solanacearum, but presented potential as biocontrol agent of the foliar pathogens. A greenhouse essay was conducted to evaluate the plant-growth promotion by the 117 rhizobacteria, and no correlation could be observed between the effect of growth promotion and the biocontrol effect observed in a previous experiment. In a field experiment to control Phytophthora infestans and A. solani, two pre- selected actinomyces (RD-01 e SON-17) were applied through tomato seed microbiolization and phylloplan colonization, respectively. Even though the chemical control was more effective than the actinomycetes, these showed their potential of use in integrated disease management, which needs to be more explored. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T11:34:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589394 bytes, checksum: a51b7716ef15e4adbbdcd4469c379e41 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T11:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589394 bytes, checksum: a51b7716ef15e4adbbdcd4469c379e41 (MD5) Previous issue date: 2004-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Isolados pré-selecionados de rizobactérias foram empregados para microbiolização de diferentes substratos. A compatibilidade entre isolados foi determinada pelo método do antibiograma, enquanto o possível efeito sinérgico foi investigado pelo tratamento do substrato com os isolados de rizobactérias aplicados individualmente ou em misturas, empregando-se a mesma proporção de inóculo dos co- inoculantes. Considerando-se os clones de eucalipto responsivos ao tratamento do substrato com rizobactérias, o ganho médio para enraizamento e biomassa radicular foi de 20,4 e 73,0%, respectivamente. No entanto, levando-se em consideração a interação entre o(s) melhor(es) isolado(s) de rizobactéria e clone(s) de eucalipto, observou-se incremento médio de 21,4% e 78,0%, respectivamente para índice de enraizamento e biomassa de raízes. Os isolados mais promissores foram o VC2 e Ca para enraizamento e o VC2 e 3918 para biomassa radicular. Nos estudos envolvendo mistura de isolados não foram observados efeitos significativos de incremento de misturas sabidamente compatíveis e vice-versa. Além disso, constatou-se especificidade da interação entre isolados de rizobactérias e clones de eucalipto. Quanto à forma de veiculação, os resultados variaram de acordo com o clone, forma de aplicação e isolado empregado. Em uma última etapa, avaliou se in vitro e em casa de enraizamento o efeito de rizobactérias sobre o controle biológico de Cylindrocladium candelabrum e Rhizoctonia solani. Considerando o efeito dos meios de cultivo e para os dois patógenos, os isolados FL2, 3918, S1 e S2 foram os mais efetivos. Ao final de 25 dias, constatou-se ao observar as miniestacas mantidas em casa de enraizamento maior incidência de podridão (71%) causada por C. candelabrum em relação à mela de miniestacas causada por R. solani. Para o primeiro patógeno, o tratamento do substrato com a rizobactéria Ca foi responsável pela redução de 33 e 26,7% em termos médios, quando comparado aos tratamentos testemunha e imersão de miniestacas em calda fungicida (epoxyconazole + pyraclostrobin 0,6 mL/L do i.a.), respectivamente. Em relação à mela de miniestacas, não foram constatadas reduções significativas, embora para o isolado Ca observou-se tendência de menor intensidade da doença. O monitoramento periódico da população dos patógenos em substrato artificialmente infestado evidenciou para C. candelabrum diferenças significativas no tempo necessário para estabilização da população e no nível populacional atingido ao longo do tempo de incubação. A partir de 10 dias, notou-se maior população do patógeno no tratamento testemunha. Entre os tratamentos com rizobactérias, a partir de 15 dias de incubação, o isolado Ca destacou-se dos demais por suprimir a população do patógeno. Ao final de 30 dias, a diferença entre a população do patógeno no substrato rizobacterizado com este isolado em relação ao tratamento testemunha foi de 26,7%. No ensaio realizado in vitro, quando se avaliou a sensibilidade de isolados de rizobactérias a fungicidas, tebuconazole inibiu 80% dos isolados e a mistura dos fungicidas epoxyconazole e pyraclostrobin inibiu apenas o crescimento do isolado S1. O isolado mais sensível aos princípios ativos foi o S1, e os menos afetados, o 3918 e MF2. Verifica-se, diante desses resultados, que é necessário realizar estudos que viabilizem a produção e formulação do produto biológico à base de rizobactérias para seu emprego em escala comercial para o eucalipto. Os depósitos de patente foram feitos junto ao INPI (PI 0101400-5 e 001409). / Pre-selected rhizobacteria isolates were used for microbiolization of different substrates. The compatibility among isolates was determined by the antibiogram method, and the synergic effect was investigated by treating the substrate with isolates individually or mixed. The average increase in rooting and root biomass production were 20.4% and 73.0%, respectively, considering the clones responsive to the treatment with rhizobacteria. However, taking into consideration the interaction among the best isolates and eucalyptus clones, it was observed an increase of 21.4% and 78.0% on rooting and dry root biomass production, respectively. The most promising isolates were VC2 and Ca for rooting and VC2 and 3918 for root biomass production. In studies involving mixing of compatibles and non-compatibles isolates it was not observed any significant effect on increment, but it was observed a specificity of interaction among rhizobacteria isolates and eucalyptus clones. The response to the inoculation method varied according to the clone, the method of application and the isolate used. Finally, the effect of the rhizobacteria on the biological control of Cylindrocladium candelabrum and Rhizoctonia solani was evaluated in vitro and in greenhouse. Considering the effect of culture media for these pathogens, the isolates FL2, 3918, S1 and S2 were the most effective. After 25 days, the rotting caused by C. candelabrum (71%) on minicuttings grown in nurseries was higher than the web blight caused by R. solani. The treatment of minicuttings with the isolate Ca promoted an average reduction of 33% and 26.7% when compared to the non-inoculated treatment and to the treatment with immersion of the minicutting in fungicide broth (epoxyconazole + pyraclostrobin 0.6 mL/L of a.i.), respectively. It was not observed significant reduction on minicuttings web blight, although the isolate Ca have showed a tendency to reduce the disease intensity. The periodic monitoring of pathogen populations in artificially infested substrate showed significant differences in the time needed for stabilization of the population and in the population level of C. candelabrum along the incubation time. It was observed a greater pathogen population on the control treatment from 10 days after inoculation. After 15 days of incubation, the isolate Ca was the most effective in suppressing the pathogen population. After 30 days, the difference between the pathogen population in the substrate infested with C. candelabrum and the control treatment was 26.7%. In the in vitro assay, tebuconazole (Folicur) inhibited 80% of the isolates and the mixture of the fungicides epoxyconazole and pyraclostrobin (Opera) only inhibited the isolate S1. This isolate (S1) was the most sensitive to the active ingredients tested and 3918 and MF2 the least affected ones. These results indicate the need of studies to produce and formulate the bioproduct based on rhizobacteria at a commercial scale. Patent deposits were made at INPI (PI 0101400-5 e 001409). / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T18:33:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878289 bytes, checksum: 70c4ac466fdd682cb943dce260aec8df (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T18:33:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 878289 bytes, checksum: 70c4ac466fdd682cb943dce260aec8df (MD5) Previous issue date: 2004-08-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Experimentos foram conduzidos em laboratório e casa de vegetação objetivando o aprimoramento do método clássico de multiplicação de Pasteuria penetrans ‘in vivo’, proposto em 1980 por Stirling e Wachtel. No primeiro experimento comparou-se a produção de endósporos da P. penetrans em raízes de tomateiro de crescimento indeterminado cv. Santa Clara e determinado cv. TRural 1. Maiores pesos de matéria fresca e seca e número de endósporos foram observados em tomateiro cv. Santa Clara. O segundo experimento foi realizado para determinar a concentração ideal de endósporos de P. penetrans na suspensão e o tempo de agitação necessário para adesão adequada de endósporos aos nematóides para multiplicação da bactéria. Para que se obtenham seis endósporos, em média, por juvenil de segundo estádio (J2) de Meloidogyne javanica, verificou-se serem necessárias suspensões contendo 3,3 x 10 5 endósporos/mL, agitadas por 10 a 20 minutos, ou 3,3 x 10 4 endósporos/mL por 50 minutos. Em outro ensaio, comparou-se a multiplicação de P. penetrans em população pura de M. incognita ou em população composta de M. incognita e M. javanica oriunda de um campo de cultivo de tomate. A produção de endósporos de P. penetrans em tomateiro inoculado com M. incognita foi aproximadamente três vezes superior àquela em plantas inoculadas com população mista. Realizou-se também um teste de adesão de P. penetrans às duas populações do nematóide. Foi observado maior número de endósporos aderidos aos J2 de M. incognita. A produção de endósporos da P. penetrans em plantas de tomateiro cv. Santa Clara com 15, 30, 45 ou 60 dias de idade e inoculadas com 5.000, 15.000 ou 25.000 J2 foi avaliada. As plantas com 30 e 45 dias de idade inoculadas com 25.000 J2 permitiram a multiplicação de P. penetrans cerca de 19 vezes maior àquela obtida em plantas inoculadas com 5.000 J2. Com o objetivo de determinar se maiores níveis de matéria orgânica adicionada ao substrato provocavam alterações fisiológicas nos nematóides ou nas plantas de tomate, estudou-se a influência de diferentes proporções de solo, areia e esterco de curral (1:1:0, 2:2:1, 1:1:1 ou 1:1:2 (V:V:V), respectivamente) e três níveis de inóculo de espécies de Meloidogyne (3.000, 6.000 e 9.000 J2) sobre a concentração de fenóis em raízes de tomateiro, no teor de lipídios de espécies de Meloidogyne, e em possíveis alterações em células gigantes induzidas por esses nematóides. Não se observou efeito dos tratamentos no teor de lipídios dos nematóides. A concentração de fenóis nas raízes aumentou à medida que se acrescentou mais esterco de curral ao substrato ou quando as plantas foram inoculadas com mais nematóides (9.000 J2). As células gigantes em raízes de plantas cultivadas nos substratos 1:1:0 e 2:2:1 (solo:areia:esterco) foram mais numerosas, maiores e com maior número de núcleos. Por outro lado, as células gigantes de plantas cultivadas no substrato 1:1:1 e 1:1:2, além de menos numerosas, apresentaram alterações no tamanho e formato, demonstrando o efeito deletério das maiores doses de esterco sobre esses sítios de alimentação. O último ensaio foi conduzido para avaliar o efeito de crescentes quantidades de esterco de curral nos substratos e níveis de inóculo de espécies de Meloidogyne na reprodução de P. penetrans. Maior percentual de fêmeas infectadas por P. penetrans foi observado quando se utilizou o substrato 1:1:0 em relação aos substratos 1:1:1 e 1:1:2 ou quando as plantas foram inoculadas com 3.000 J2. O experimento foi repetido uma vez e na primeira condução do experimento, plantas cultivadas no substrato 1:1:0 ou inoculadas com 9.000 J2 apresentaram maior número de endósporos; entretanto, na segunda condução do experimento as plantas inoculadas com 9.000 J2 e cultivadas no substrato 2:2:1 foram as que permitiram maior reprodução de P. penetrans. / Greenhouse and laboratory experiments were conducted to improve the classical method of multiplying P. penetrans ‘in vivo’, proposed by Stirling & Wachtel in 1980. In the first experiment, the mass production of P. penetrans in tomatoes of indeterminated and determinated growth, cv. Santa Clara and Trural I, respectively, was compared. Higher fresh and dry root weight and endospore number were observed in ‘Santa Clara’ tomato. The second experiment was conducted to determine the best endospore concentration of P. penetrans in the aqueous suspension and the time of shaking necessary to obtain adequate attachment of endospores on the nematodes, as the first step for P. penetrans multiplication. To obtain an average of six endospores per second stage juvenile (J2) of M. javanica, it is necessary to shake suspension of 3,3 x 10 5 endospores/mL per 10 to 20 minutes or to shake 3,3 x 10 4 endospores/mL for 50 minutes. In another experiment, the reproduction of P. penetrans in pure population of M. incognita and in a mixed population of M. incognita and M. javanica, originated from the field, was studied. The endospore production of P. penetrans in tomato plants inoculated with M. incognita was approximately three times higher than in plants inoculated with the field population. An attachment test of P. penetrans on the two populations was performed and higher number of endospores attached to J2 of M. incognita was observed. The multiplication of P. penetrans in 15, 30, 45 or 60 day-old ‘Santa Clara’ tomato plants inoculated with 5,000, 15,000 or 25,000 J2, was also evaluated. The 30 and 45 days old plants inoculated with 25,000 J2 provided P. penetrans multiplication up to nineteen times more than plants inoculated with 5,000 J2 in the first experimental run. To determine if high cow manure levels added to substrate promote physiological changes on the nematodes or on the tomato plants, the influence of cow manure amendment to mixtures of soil and sand giving rates of 1:1:0; 2:2:1; 1:1:1 and 1:1:2 (V:V:V) of soil, sand and manure, respectively, and three inoculum levels of Meloidogyne species, i.e., 3,000; 6,000 and 9,000 J2 on the phenolic content in the tomato roots, changes in nematode lipid content and possible alterations in the giant cells induced by the nematodes, were studied. No conclusion could be drawn about the effect of manure on the nematode lipid content. The phenolic content in the roots increased as more cow manure was added to the substrate or when the plants were inoculated with more nematodes (9,000 J2). The giant cells in the roots of plants cultivated in the substrates 1:1:0 and 2:2:1 were more numerous, bigger and with more nuclei. On the other hand, the giant cells of plants cultivated on 1:1:1 and 1:1:2 substrates were less numerous, showed changes on their format and were smaller, demonstrating the deleterious effect of organic amendments to these feeding sites. A subsequent experiment was carried out to evaluate the effect of the interaction of increasing rates of cow manure in the substrates and of nematode levels on the reproduction of Pasteuria penetrans. Higher perceptual of infected females by P. penetrans was observed when the plants grew in the substrate 1:1:0 than in the substrates 1:1:1 and 1:1:2, or when plants were inoculated with 3,000 J2. The experiment was repeated once and in the first run, plants cultivated on substrate 1:1:0 or inoculated with 9,000 J2 had higher endospore number. However, in the second run, plants inoculated with 9,000 J2 and cultivated on substrate 2:2:1 yielded more endospores per root system. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-27T17:46:33Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 647098 bytes, checksum: b268e217f616628b33c7d54bc5890149 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-27T17:46:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 647098 bytes, checksum: b268e217f616628b33c7d54bc5890149 (MD5) Previous issue date: 2001-07-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Com a necessidade de buscar alternativas para o uso de agentes químicos em produtos armazenados, devido ao desenvolvimento de resistência em insetos-praga e à possibilidade de contaminação dos alimentos por resíduos, os programas de erradicação de pragas têm dado maior ênfase ao controle biológico. Em razão do exposto, este trabalho foi dividido em três etapas que abordaram o potencial de parasitismo do ácaro Acarophenax lacunatus (Prostigmata: Acarophenacidae) em cinco espécies de insetos de produtos armazenados. Na primeira etapa, avaliou-se a preferência deste ácaro por ovos dos insetos Rhyzopertha dominica (Coleoptera: Bostrichidae), Dinoderus minutus (Coleoptera: Bostrichidae), Tribolium castaneum (Coleoptera: Tenebrionidae) e Oryzaephilus surinamensis (Coleoptera: Silvanidae). A segunda etapa abordou o estudo do potencial de parasitismo do ácaro em D. minutus em mandioca seca armazenada, e a terceira etapa em R. dominica, T. castaneu m, O. surinamensis e Cryptolestes ferrugineus (Coleoptera: Cucujidae) em trigo parcialmente triturado. Todos os testes foram realizados a 28 o C e escotofase de 24 horas, em câmaras climáticas do tipo B.O.D. O estudo da preferência por ovos foi realizado em dois testes: um sem chance de escolha e outro com chance de escolha, utilizando-se placas de Petri (5 cm de diâmetro), as quais foram divididas em quatro quadrantes. No teste sem chance de escolha, foram colocados, em cada quadrante, cinco ovos de apenas um dos insetos e, no centro da placa, uma fêmea de A. lacunatus em processo de fisogastria. O experimento foi realizado com cada uma das espécies. No teste com chance de escolha, foram utilizados ovos de todas as espécies, que foram distribuídos de forma que cada quadrante só recebesse ovos de um dos insetos. Da mesma forma, no centro da placa foi liberada uma fêmea fisogástrica do ácaro. Em nenhum dos testes o ácaro A. lacunatus parasitou ovos de O. surinamensis. No teste sem chance de escolha não foi observada preferência de A. lacunatus por ovos de nenhum dos outros hospedeiros. Entretanto, no teste com livre escolha, A. lacunatus parasitou mais ovos de R. dominica e D. minutus que de T. castaneum. Nas outras etapas do trabalho, avaliou-se a população final dos insetos (larvas e adultos), o número de ovos parasitados e de ácaros em processo de fisogastria, a taxa instantânea de crescimento (r i ) de A. lacunatus e dos insetos, e a perda de peso dos produtos (mandioca e trigo). Foi observado que o ácaro apresenta potencial biótico maior que o dos hospedeiros R. dominica, D. minutus e T. castaneum. Desta forma, o número de larvas e adultos destes insetos sofreu reduções em relação à testemunha, o que também ocorreu com as perdas de matéria seca ocasionadas pelo ataque dos insetos. Também não foi observado parasitismo em populações do coleóptero O. surinamensis. Pelo número de ovos parasitados de R. dominica, D. minutus, T. castaneum e C. ferrugineus, conclui-se que o ácaro A. lacunatus é um inimigo natural eficaz destes insetos, não sendo, portanto, um parasita específico de R. dominica , como se imaginava. / With the necessity of searching for alternatives to the use of chemical control agents in stored products due to development of insecticide resistance in insect-pests and the possibility of foodstuff contamination by residue, pest eradication programs have been putting more emphasis on biological control. As a consequence, the present work was divided in three phases which aimed to assess the parasitism potential of the mite Acarophenax lacunatus (Prostigmata: Acarophenacidae) in five species of insects of stored products. In the first phase, the mite preference for eggs of Rhyzopertha dominica (Coleoptera: Bostrichidae), Dinoderus minutus (Coleoptera: Bostrichidae), Tribolium castaneum (Coleoptera: Tenebrionidae) and Oryzaephilus surinamensis (Coleoptera: Silvanidae) was assessed. In the second phase, the parasitism potential of the mote species of D. minutus attacking dried stored cassava was evaluated and in the third phase the parasitism potential of the same parasitic species was assessed in R. dominica, T. castaneum, O. surinamensis e Cryptolestes ferrugineus (Coleoptera: Cucujidae) infesting wheat. All of the experiments were carried out under controlled conditions of 28 o C and 24 hours scotophase in climatic chambers of the B.O.D. type. The study of egg preference was carried out in two tests: one without opportunity of choice and other with it using Petri dishes divided in four areas. On the non-choice test five eggs of only one species was placed in each different area and a physogastric female of A. lacunatus was placed in the centre of the Petri dish (5 cm diameter). On the choice test there was only eggs of a single species in each of the four areas within the Petri dish and the same procedure was used for each potential prey species. The mite A. lacunatus did not attack eggs of O. surinamensis in any of the tests. No preference of A. lacunatus by eggs of any host was observed on the non-choice test. However, A. lacunatus attacked more eggs R. dominica and D. minutus than of T. castaneum. In the other phases of the work the final insect population (adults and larvae), egg parasitism, number of mites in physogastry, the instantaneous rate of increase of the mite and the insect populations (r i ) and weight loss of the stored product (wheat or cassava). It was observed that the mite has higher biotic potential than the hosts R. dominica, D. minutus and T. castaneum. Therefore, the number of larvae and adults of these insect species were lower than in the control treatment, what was also observed with the losses in dried matter caused by insect infestation. Again, no parasitism on eggs of O. surinamensis was observed. Based on the egg parasitism of R. dominica, D. minutus, T. castaneum and C. ferrugineus, the mite A. lacunatus is an efficient natural enemy for all of this species and not only to R. dominica, as initially reported. / Dissertação importada do Alexandria

MORAIS, Vanessa Duarte de. Avaliação da expressão gênica da toxina da soja (SBTX) por indutores da defesa de plantas. 2012. 92 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-15T13:11:16Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_vdmorais.pdf: 9943329 bytes, checksum: 9b36af801a5a86f10c3a4153e39f1e80 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:24:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_vdmorais.pdf: 9943329 bytes, checksum: 9b36af801a5a86f10c3a4153e39f1e80 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_vdmorais.pdf: 9943329 bytes, checksum: 9b36af801a5a86f10c3a4153e39f1e80 (MD5) Previous issue date: 2012 / Soybean is a legume most commonly utilized in the world, whose use is justified by the high nutritional content of its grain, consisting mainly of proteins and lipids. The current estimate of global soybean production is 250,000 tons/year, but there are limiting factors of this production, such as the pest attack. The fungal diseases, for example, cause losses in soybeans around 4%, where 20% of these are derived from infection by Septoria glycines and Cercospora kikuchii. Thus, the search for alternative measures is increasing, particularly in reducing the use of pesticides, but for this it is important to understand the plant defense mechanisms. Soybean toxin (SBTX) is a protein purified from soybean seeds with activity against plant and human pathogenic fungi and neurotoxic action to rats and mice, hence the reason it received the name of toxin. SBTX shows a molecular mass of 44 kDa, composed of two subunits (17 and 27 kDa) encoded by distinct genes and it has been detected seeds, roots, stems and leaves. This study aimed to evaluate the gene expression profile of SBTX in soybean plants whose primary leaves were treated with elicitors (biotic and abiotic), using the real-time PCR technique, in an attempt to strength the physiological role of defense proposed for this protein. Therefore, salicylic acid, mechanic injury and Cercospora kikuchii spores were used as elicitors and it was measured the transcript levels of SBTX subunits. Induction responses were observed for both subunits of SBTX, but the gene expression profiles were different. For SBTX 27 kDa gene, the highest transcript level was detected when the treatment involved mechanic injury associated to salicylic acid, an increase of about 100 fold after 12 hours of treatment application. Nevertheless, for SBTX 17 kDa gene the induction response was much smaller, it was only around 10 times. The data together show that SBTX is an inducible protein by biotic and abiotic elicitors, reinforcing its physiological role of defense, which could eventually be used as biotechnological tool in order to mitigate losses caused by fungi. / A soja é uma das leguminosas mais utilizadas no mundo, sendo o uso justificado pelo elevado teor nutricional de seus grãos, constituídos, principalmente, por proteínas e lipídios. A estimativa atual da produção mundial de soja é de 250.000 toneladas/ano, porém há fatores limitantes dessa produção, como o ataque de pragas. As doenças causadas por fungos, por exemplo, causam na soja perdas em torno de 4%, sendo 20% destas causadas por Septoria glycines e Cercospora kikuchii. Assim, a busca por medidas alternativas de controle é crescente, particularmente em diminuição ao uso de agrotóxicos, mas, para isso, é importante o entendimento dos mecanismos de defesa vegetal. Das sementes de soja foi purificada uma proteína, denominada toxina da soja (SBTX), que é ativa contra diversos fungos de plantas e do homem e, também, é neurotóxica para ratos e camundongos, razão pela qual recebeu o nome de toxina. A SBTX apresenta massa molecular de 44 kDa, constituída por duas subunidades (17 e 27 kDa) codificadas por genes distintos e já foi identificada nas sementes, raízes, caules e folhas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressão gênica da SBTX em plantas cujas folhas primárias foram tratadas com elicitores (biótico e abiótico), usando a técnica de PCR em tempo real, na tentativa de reforçar o papel fisiológico de defesa proposto para proteína. Assim sendo, ácido salicílico, injúria mecânica e esporos do fungo Cercospora kikuchii foram utilizados como elicitores e os níveis de transcritos para as duas subunidades proteicas de SBTX avaliados. Respostas de indução foram verificadas para ambas as subunidades da SBTX, porém os perfis de expressão gênica foram diferenciados. Para o gene SBTX 27 kDa, o maior nível de transcritos foi detectado quando o tratamento envolveu injúria mecânica associada ao ácido salicílico, correspondendo a um aumento de cerca de 100 vezes após 12 horas de aplicação do tratamento. Já para o gene SBTX 17 kDa este aumento não foi verificado na mesma intensidade, tendo sido apenas em torno de 10 vezes. Os dados em conjunto mostram que SBTX é uma proteína passível de indução por elicitores bióticos e abióticos, reforçando o seu papel fisiológico de defesa, podendo vir a ser utilizada como ferramenta biotecnológica no sentido de amenizar as perdas causadas por fungos.

LIMA, G. P. G. Purificação, caracterização bioquímica e atividade biológica in vitro contra insetos praga de um novo inibidor de tripsina isolado de sementes de Sapindus saponaria L. (Sapindaceae). 2012. 122 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-03-12T15:00:00Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-03-29T17:18:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T17:18:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_gpglima.pdf: 2370771 bytes, checksum: 509ae0531057d53f967b325467f88d5c (MD5) Previous issue date: 2012 / Environmental toxicity, low biodegradability and increased resistance in agricultural pest insects and in insect vectors of diseases to insecticides traditionally used for their control have encouraged the development of chemical alternatives with greater specificity and biodegradability especially from plants. In this way, the present study aimed the purification, characterization and evaluation of activity towards pest insect digestive enzymes of a new trypsin inhibitor obtained from Sapindus saponaria seeds. This new trypsin inhibitor obtained from S. saponaria seeds (SSTI2) belongs to Potato I inhibitor family and was purified by protein precipitation with trichloroacetic acid, affinity chromatography and reverse phase chromatography using UFLC system. The native inhibitor and its fragments generated by enzymatic treatment with trypsin and pepsin were analyzed and sequenced by MALDI-TOF and ESI-TOF mass spectrometry, determining its accurate molecular mass (MM = 7571, 976 Da) and primary structure (64 of 69 amino acids). The SSTI2 showed an IC50 of 8.3 x 10-2 μmol.L-1 against bovine trypsin, and a much lower inhibitory activity on the enzymes chymotrypsin (13.24 ± 0.28%) and papain (5.28 ± 0 , 42%), but was unable to inhibit proteolysis promoted by bromelain. In spite to show moderate inhibition of total digestive enzymes (4.74 ± 0.45% to 56.06 ± 1.41%), the inhibitor was very effective upon trypsin-like enzymes present in Aedes aegypti (92.44 ± 0.99%), Anthonomus grandis (77.93 ± 0.12%), Anticarsia gemmatalis ( 32.21 ± 0.57%) and Spodoptera frugiperda (71.44 ± 1.23%) guts. This strong inhibitory effect of SSTI2 on the catalytic activity of trypsin-like peptidases of insect’s midguts suggests a possible suppressive effect on development and survival of insects fed with diets containing the inhibitor. Thus, future in vivo assays and evaluation of other biochemical properties will be important to establish the potential biotechnological application of SSTI2, especially for the combat of Ae. aegypti, A. grandis and An. gemmatalis. Furthermore, the sequence of SSTI2 elucidated in this study allows the chemical synthesis, cloning of coding gene sequence and heterologous expression of this potential new biotechnological tool. / A toxicidade ao meio ambiente, a baixa biodegrabilidade e a crescente resistência de insetos praga da agricultura e de insetos vetores de doenças aos inseticidas tradicionalmente utilizados tem estimulado o desenvolvimento de alternativas com maior biodegradabilidade e especificidade, especialmente de origem vegetal. Nesse sentido, o presente estudo consistiu na purificação, caracterização e avaliação do efeito biológico in vitro de um novo inibidor de tripsina obtido das sementes de Sapindus saponaria sobre as enzimas digestivas de insetos. Através de precipitação com ácido tricloroacético (TCA), cromatografia de afinidade à tripsina e cromatografia de fase reversa em sistema UFLC, foi purificado um novo inibidor de tripsina (SSTI2) pertencente ao grupo de inibidores do tipo Batata I, uma categoria de inibidores de peptidases serínicas com reconhecido efeito tóxico sobre insetos. O inibidor nativo e fragmentos desse gerados por tratamento enzimático com tripsina e pepsina foram analisados e sequenciados por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF e ESI-TOF, determinando assim a sua massa molecular acurada (MM = 7571, 976 Da) e elucidando a sua estrutura primária (64/69 aminoácidos). O inibidor apresentou uma IC50 de 8,3 x 10-2 μmol.L-1 contra a tripsina bovina, mas apresentou baixa atividade inibitória sobre as enzimas quimotripsina (13,24 ± 0,28%) e papaína (5,28 ± 0,42%), e não foi capaz de inibir a proteólise promovida pela bromelaína. O SSTI2 inibiu moderadamente a atividade catalítica das enzimas digestivas totais dos insetos, com percentual de inibição variando entre 4,74 ± 0,45% a 56,06 ± 1,41%. No entanto, o inibidor foi eficaz em atuar sobre as enzimas digestivas do tipo tripsina presentes nos intestinos dos insetos Aedes aegypti (92,44 ± 0,99%), Anthonomus grandis (77,93 ± 0,12%), Anticarsia gemmatalis (32,21 ± 0,57%) e Spodoptera frugiperda (71,44 ± 1,23%). Esse expressivo efeito inibitório do SSTI2 sobre a atividade catalítica das peptidases do tipo tripsina provenientes do intestino médio dos insetos sugere um possível efeito supressor no desenvolvimento e sobrevivência de insetos alimentados com dietas contendo o inibidor. Assim, futuros estudos in vivo e avaliações de outras propriedades bioquímicas do inibidor serão importantes para determinar a potencial aplicação biotecnológica do SSTI2, especialmente para o combate de A. aegypti, A. grandis e A. gemmatalis. Além disso, a sequência do SSTI2 elucidada nesse estudo possibilita a síntese, clonagem do gene codificante e expressão heteróloga dessa potencial ferramenta biotecnológica.