Orientador: Antonio Francisco Godinho / Resumo: O Benzoato de emamectina é um inseticida da classe das avermectinas, os quais apresentam seu mecanismo de ação através de interações com o receptor ácido gama aminobutírico (GABA), e também por alterações do estresse oxidativo em tecidos o qual tem sido associado a diversas doenças crônicas. O objetivo deste projeto foi o de avaliar as alterações geradas pela exposição subcrônica (28 dias) a baixas doses do benzoato de emamectina, sobre os parâmetros neurocomportamentais, do estresse oxidativo em cérebro e fígado e biomarcadores séricos da função hepática e renal. Foram utilizados 64 ratos Wistar adultos machos, os quais receberam oralmente (gavage), diariamente, por 28 dias um dos seguintes tratamentos: Água destilada (controle); benzoato de emamectina 0.5 mg/Kg (BE0.5); benzoato de emamectina 1 mg/Kg (BE1); benzoato de emamectina 2 mg/Kg (BE2). No dia após a última exposição aos tratamentos os animais foram avaliados para atividade neurocomportamental, com o auxilio dos seguintes equipamentos: labirinto em cruz elevada (LCE) teste da arena de campo aberto (ACA) e o hole-board. No dia seguinte os animais foram eutanasiados e coletadas amostras de fígado e cérebro para a avaliação do estresse oxidativo, via mensuração do hidroperóxido de lipídeo e da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GSHPx) e sangue para a obtenção do plasma para análise dos biomarcadores da função hepática e renal. Os animais expostos ao B... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by João Leandro Chaguri null (joaoleandro@ibb.unesp.br) on 2016-04-12T17:43:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação João Leandro.pdf: 2543552 bytes, checksum: 518f71110e7d2f26f7fab66e56f7a3b7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T18:42:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 chaguri_jl_me_bot.pdf: 2543552 bytes, checksum: 518f71110e7d2f26f7fab66e56f7a3b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T18:42:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 chaguri_jl_me_bot.pdf: 2543552 bytes, checksum: 518f71110e7d2f26f7fab66e56f7a3b7 (MD5) Previous issue date: 2016-03-04 / O fipronil é um inseticida fenilpirazol amplamente utilizado na Medicina Veterinária, na agricultura e domesticamente para o controle de pragas. O mecanismo responsável pela sua ação tóxica consiste na inibição seletiva dos receptores do ácido gama amino butírico GABA associado a canais de cloreto. Estudos recentes mostram que fipronil afeta organismos não-alvo, incluindo populações de espécies ambiental e, potencialmente, os seres humanos. O presente estudo verificou se a exposição a fipronil afeta a pressão arterial sistólica e biomarcadores relacionados. Assim, fipronil foi administrado oralmente a ratos (30 mg / kg / dia) durante 15 dias (grupo Fipronil) ou solução fisiológica (grupo controle). Fipronil aumentou significativamente a pressão arterial sistólica (158 ± 13 mmHg), em relação ao grupo controle (127 ± 3 mmHg). Significativamente, níveis mais elevados de fipronil no plasma foram observados no grupo Fipronil (0,46 ± 0.09μg / mL contra 0,17 ± 0.11μg / mL no grupo de controle). O grupo exposto ao Fipronil apresentou ganho de peso menor em comparação com o grupo controle. Enquanto o fipronil resultou num aumento das concentrações de endotelina-1, a redução da capacidade antioxidante e níveis menores de metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2) e Nitrito/Nitrato em relação ao grupo controle, não foram observadas alterações em marcadores séricos renal e hepáticos. Portanto, este estudo sugere que o fipronil provoca hipertensão e a endotelina-1 desempenha um papel importante. Além disso, estes resultados sugerem que as reduções de tanto a MMP-2 e NO podem contribuir com a elevação da pressão sanguínea sistólica observada com fipronil. / Recent reports show that fipronil affects non-target organisms, including environmental species populations and potentially humans. We aimed to examine if fipronil exposure affects the systolic blood pressure and related biomarkers. Thus, fipronil was orally administered to rats (30 mg/kg/day) during 15 days (Fipronil group) or physiological solution (Control group). While fipronil increased significantly the systolic blood pressure (158 ± 13 mmHg), no significant changes were observed in Control group (127 ± 3 mmHg). Significantly, higher levels of fipronil in plasma were observed in Fipronil group (0.46 ± 0.09 μg/mL versus 0.17 ± 0.11 μg/mL in Control group). Fipronil group showed lower weight gain compared with Control group. While fipronil resulted in higher concentrations of endothelin-1, reduced antioxidant capacity and lower levels of circulating matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and nitric oxide (NO) metabolites compared to Control group, no alteration was observed in serum biomarkers of renal and hepatic/biliary functional abilities. Therefore, this study suggests that fipronil causes hypertension and endothelin-1 plays a key role. Also, these findings suggest that reductions of both MMP-2 and NO may contribute with the elevation of systolic blood pressure observed with fipronil.

Orientador: Carlos Alan Dias-Junior / Resumo: O fipronil é um inseticida fenilpirazol amplamente utilizado na Medicina Veterinária, na agricultura e domesticamente para o controle de pragas. O mecanismo responsável pela sua ação tóxica consiste na inibição seletiva dos receptores do ácido gama amino butírico GABA associado a canais de cloreto. Estudos recentes mostram que fipronil afeta organismos não-alvo, incluindo populações de espécies ambiental e, potencialmente, os seres humanos. O presente estudo verificou se a exposição a fipronil afeta a pressão arterial sistólica e biomarcadores relacionados. Assim, fipronil foi administrado oralmente a ratos (30 mg / kg / dia) durante 15 dias (grupo Fipronil) ou solução fisiológica (grupo controle). Fipronil aumentou significativamente a pressão arterial sistólica (158 ± 13 mmHg), em relação ao grupo controle (127 ± 3 mmHg). Significativamente, níveis mais elevados de fipronil no plasma foram observados no grupo Fipronil (0,46 ± 0.09μg / mL contra 0,17 ± 0.11μg / mL no grupo de controle). O grupo exposto ao Fipronil apresentou ganho de peso menor em comparação com o grupo controle. Enquanto o fipronil resultou num aumento das concentrações de endotelina-1, a redução da capacidade antioxidante e níveis menores de metaloproteinase de matriz 2 (MMP-2) e Nitrito/Nitrato em relação ao grupo controle, não foram observadas alterações em marcadores séricos renal e hepáticos. Portanto, este estudo sugere que o fipronil provoca hipertensão e a endotelina-1 desempenha um papel importante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recent reports show that fipronil affects non-target organisms, including environmental species populations and potentially humans. We aimed to examine if fipronil exposure affects the systolic blood pressure and related biomarkers. Thus, fipronil was orally administered to rats (30 mg/kg/day) during 15 days (Fipronil group) or physiological solution (Control group). While fipronil increased significantly the systolic blood pressure (158 ± 13 mmHg), no significant changes were observed in Control group (127 ± 3 mmHg). Significantly, higher levels of fipronil in plasma were observed in Fipronil group (0.46 ± 0.09 μg/mL versus 0.17 ± 0.11 μg/mL in Control group). Fipronil group showed lower weight gain compared with Control group. While fipronil resulted in higher concentrations of endothelin-1, reduced antioxidant capacity and lower levels of circulating matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and nitric oxide (NO) metabolites compared to Control group, no alteration was observed in serum biomarkers of renal and hepatic/biliary functional abilities. Therefore, this study suggests that fipronil causes hypertension and endothelin-1 plays a key role. Also, these findings suggest that reductions of both MMP-2 and NO may contribute with the elevation of systolic blood pressure observed with fipronil. / Mestre

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Some chemicals have caused much damage to humans and the environment. Among these substances are chemical compounds like pesticides, often considered responsible for poisoning the workers, making it a public health problem. The aim of this study was to verify whether the organophosphate chlorpyrifos was influential in the vestibular system of guinea pigs in acute exposure. This was an experimental research. The research used 18 albino guinea pigs of the species Cavia porcellus, divided into three groups, with group I control the other, using distilled water and containing five animals. In Group II, six animals were administered 0.5 mg / kg / day of pesticide chlorpyrifos and group III, with seven animals at a dose of 1mg/kg/day of the same pesticide. The three groups were under experiment for 10 days. For analysis of the results was performed functional analysis of the vestibular system by electronystagmography (caloric test - with ice water) and histopathological analysis by scanning electron microscopy. The results showed no statistically significant difference for the variable frequency of appearance of nystagmus and angular velocity of the slow component in electronystagmography, and the number of ciliary tufts histologically by scanning electron microscopy. It was concluded that the organophosphate chlorpyrifos did not cause damage to the vestibular system of the guinea pigs at the doses tested in acute exposure. / Algumas substâncias químicas têm causado muitos danos ao ser humano e ao meio ambiente. Dentre estas substâncias encontram-se os compostos químicos do tipo agrotóxicos, frequentemente considerados como responsáveis por intoxicações a trabalhadores, tornando isto um problema de saúde pública. O objetivo geral deste estudo consistiu em verificar se o organofosforado clorpirifós teve influência no sistema vestibular de cobaias em exposição aguda. Tratou-se de uma pesquisa experimental. A pesquisa utilizou 18 cobaias albinas da espécie Cavia porcellus, divididas em três grupos; sendo o grupo I o controle dos demais, utilizando água destilada e contendo cinco animais. No grupo II, com seis animais, foi administrada a dose de 0,5mg/kg/dia de agrotóxico clorpirifós e no grupo III, com sete animais a dose de 1mg/kg/dia do mesmo agrotóxico. Os três grupos estiveram sob experimento durante 10 dias. Para análise dos resultados foi realizada a análise funcional do sistema vestibular através da eletronistagmografia (prova calórica com água gelada) e a análise histopatológica através da microscopia eletrônica de varredura. Os resultados não demonstraram diferença estatística significante para as variáveis frequência de aparecimento de nistagmo e velocidade angular da componente lenta na eletronistagmografia; e no número de tufos ciliares na análise histopatológica por microscopia eletrônica de varredura. Concluiu-se que o organofosforado clorpirifós não ocasionou dano ao sistema vestibular das cobaias nas doses testadas em exposição aguda.

O miclobutanil é fungicida quiral da família dos triazóis, comercializado como mistura racêmica. Apesar dos enantiômeros apresentarem as mesmas propriedades físico-químicas, estes podem diferir em termos de atividade, metabolismo, excreção e toxicidade. No presente trabalho, foram realizados estudos in vitro enantiosseletivos de metabolismo empregando microssomas hepáticos de humanos cujos objetivos foram determinar os parâmetros cinéticos das enzimas do citocromo P450 (CYP450) após metabolismo do miclobutanil (na forma de racemato e enantiômeros isolados), determinar quais isoformas do CYP450 são responsáveis pelo metabolismo do praguicida e também a capacidade deste praguicida em inibir as principais enzimas do CYP450. Os estudos foram realizados empregando a mistura racêmica e também os enantiômeros isolados. Para tanto, foi desenvolvido e validado um método para análise enantiosseletiva do miclobutanil em meio microssomal empregando a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas. A separação dos enantiômeros foi realizada na coluna Chiralpak AD® empregando metanol (100%) como fase móvel. Após a validação do método, os parâmetros cinéticos foram determinados, com valores de Vmáx, Km e CLint de 66,06 + 4,59 nmol min-1 mg-1, 3,61 + 0,88 ?mol L-1 e 18,30 mL min-1 mg-1 respectivamente, quando o substrato foi o racemato e de 305,50 + 18,39 nmol min-1 mg-1, 6,85 + 1,29 ?mol L-1 e 44,60 mL min-1 mg-1 respectivamente, quando o (+)-miclobutanil foi empregado como substrato. O (?)-miclobutanil não foi metabolizado pelas enzimas presentes nos microssomas hepáticos de humanos. As isoformas responsáveis pelo metabolismo do miclobutanil foram a CYP2C19 e a CYP3A4. Os estudos in vitro de inibição mostraram que o miclobutanil é um inibidor moderado das enzimas CYP2D6 e CYP2C9 um inibidor forte das enzimas CYP3A4/5 e CYP2C19. / Myclobutanil is a chiral triazole fungicide, sold as a racemic mixture. Although the enantiomers have the same physico-chemical properties, they may exhibit different bioactivity, metabolism, excretion and toxicity. In the present work, in vitro enantioselective metabolism studies were carried out by using human liver microsomes, aiming to determine the kinetic parameters of cytochrome P450 (CYP450) enzymes after myclobutanil metabolism and the main CYP450 isoforms involved in the metabolism. In addition, the myclobutanil inhibition capacity over the main CYP450 enzymes was evaluated. The studies were carried out with rac-myclobutanil as well as with the isolated enantiomers. To accomplish that, an enantioselective method for myclobutanil analysis was developed and validated by using high performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry. The separation of enantiomers was realized on a Chiralpak AD® column and methanol (100%) was used as mobile phase. The enzymatic kinetics, Vmáx, Km and CLint, were: 66.06 + 4.59 nmol min-1 mg-1, 3.61 + 0.88 ?mol L-1 and 18.30 mL min-1 mg-1, respectively, for rac-myclobutanil and 305.50 + 18.39 nmol min-1 mg-1, 6.85 + 1.29 ?mol L-1 and 44.60 mL min-1 mg-1, respectively, for the (+)-myclobutanil. The (?)-myclobutanil was not metabolized by CYP450 enzymes. The isoforms involved in myclobutanil metabolism were CYP2C19 and CYP3A4. In vitro inhibition studies showed that myclobutanil is a medium inhibitor of CYP2D6 and CYP2C9 enzymes and a strong inhibitor of CYP3A4/A5 and CYP2C19 enzymes.