A nutrição é um dos principais fatores que afetam a eficiência reprodutiva por influenciar o crescimento, maturação e capacidade ovulatória do folículo bem como o perfil e estado metabólico do animal, gerando cenários que prejudicam ou corroboram o desenvolvimento e estabelecimento da prenhez. Diferentes fontes energéticas utilizadas na nutrição são capazes de alterar os padrões de fermentação ruminal e causar respostas endócrinas distintas. A partir disso, os objetivos desse estudo foram avaliar de que forma duas fontes energéticas da dieta influenciam a produção embrionária, a expressão gênica de enzimas hepáticas que metabolizam progesterona (P4) e a insulinemia. Em um delineamento em crossover, 22 vacas holandesas não lactantes e não gestantes foram distribuídas em dois grupos: um recebendo milho e outro polpa cítrica como fonte de energia da dieta. A quantidade de alimento fornecida foi de 1,3% do peso corporal em matéria seca por dia. O estudo foi composto por dois períodos de 71 dias de duração e em cada um deles foram realizadas duas superovulações (aos 35 e aos 70 dias) e uma biópsia hepática (aos 71 dias). Amostras sanguíneas foram colhidas imediatamente antes do fornecimento do alimento e 4 horas após, em dias pré-determinados, para dosagem de glicose, insulina e P4. Ao final do estudo as vacas passaram por teste de tolerância à glicose (TTG). Foi quantificada a expressão gênica de enzimas que metabolizam a P4 por RT-qPCR. A análise estatística foi realizada por meio de regressão logística pelo Proc MIXED do SAS 9.3. Os dados de expressão gênica foram avaliados por meio de delta CT. Imediatamente antes do fornecimento do alimento, a insulina circulante foi maior para o grupo milho (P < 0,01) e a P4 circulante foi maior para o grupo polpa cítrica (P < 0,01). Quatro horas após a alimentação, a P4 foi igual entre os tratamentos. A relação da P4 circulante na hora 4 e 0 foi maior para o grupo milho (P < 0,01). Tanto a glicose basal como o Homa-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) foram maiores para o grupo milho. No TTG, o grupo milho apresentou maior pico de glicose no momento 5 minutos, maior taxa de decaimento da glicose (P = 0,01) e menor tempo de meia vida da glicose (P = 0,05). Não houve efeito de tratamento na resposta superestimulatoria, superovulatória, produção de embriões e na expressão gênica das enzimas que metabolizam a P4, mas as superovulações realizadas aos 70 dias produziram embriões de qualidade inferior em relação às realizadas aos 35 dias, independente de tratamento. Conclui-se que, embora tenha sido possível alterar a insulina circulante através da dieta, a quantidade e qualidade de embriões produzidos não foram alteradas. O aumento pós-prandial da P4 circulante não foi relacionado a menor expressão gênica das enzimas hepáticas que metabolizam a P4. / Nutrition is one of the main factors affecting reproductive efficiency by influencing the growth, maturation and ovulatory capacity of the follicle and metabolic status of the animal, leading to scenarios that impair or corroborate the development and establishment of pregnancy. Different energy sources in the composition of the diet can alter ruminal fermentation patterns and cause different endocrine responses. The objectives of this study were to evaluate how two different energy sources in the diet can influence embryo production, gene expression of liver enzymes that metabolize progesterone (P4) and circulating insulin. In a crossover design, 22 non-lactating and non-pregnant Holstein cows were allocated into two groups: one receiving corn and other receiving citrus pulp as the energy supply of the diet. The amount of feed provided was 1.3% of body weight of dry matter per day. The study consisted of two 71-days periods and cows were superovulated twice on each period (at 35 and 70 days). Liver biopsy was performed after 71 days from the beginning of each replicate. Blood was sampled immediately before feeding and 4 hours later, at predetermined days, for measurement of glucose, insulin and P4. At the end of the study cows underwent a glucose tolerance test (GTT). Gene expression of liver enzymes that metabolize P4 was quantified by RT-qPCR. Statistical analysis was performed using logistic regression of Proc Mixed of SAS 9.3. Gene expression data were evaluated using delta CT. Immediately before feeding, the circulating insulin was greater for the corn group (P < 0.01) and circulating P4 was greater for the citrus pulp group (P < 0.01). Four hours after feeding, circulating P4 was similar. The relationship of circulating P4 between hour 4 and 0 was greater for the corn group (P < 0.01). Both basal circulating glucose and HOMA-IR (Homeostasis model assessment of insulin resistance) were greater for the corn group. The corn group had also greater glucose peak at the time 5 minutes of the GTT, greater glucose rate of decay (P = 0.01) and a shorter half-life of glucose (P = 0.05). There was no treatment effect on superstimulatory and superovulatory response, on embryo production and on gene expression of liver enzymes that metabolize P4. However, superovulations performed at 70 days produced lower embryo quality compared to those performed at 35 days, regardless of treatment. In conclusion, although it was possible to change circulating insulin by feeding different diets, the quantity and quality of embryos produced were not affected by the diets. The postprandial increase in circulating P4 was not associated with altered gene expression of hepatic enzymes that metabolize P4.

As receptoras de embriões bovinos devem possuir um ambiente uterino adequado para o desenvolvimento do embrião, estabelecimento da gestação e nascimento de um bezerro saudável. Apesar dos avanços tecnológicos, a perda embrionária ainda permanece elevada, resultando em taxas de prenhez reduzidas após a transferência de embriões (TE). A progesterona (P4) apresenta papel importante nos processos de estabelecimento e manutenção de gestação em fêmeas bovinas. Diversos estudos evidenciaram que o tratamento com P4 injetável de longa ação (P4LA) após a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) pode favorecer o estabelecimento da gestação e aumentar as taxas de concepção. Assim, o objetivo do presente estudo foi verificar se o tratamento com P4LA após a ovulação sincronizada em receptoras de embriões produzidos in vitro (PIV) resultará em aumento na concentração de P4 e na taxa de prenhez, sem comprometer o desenvolvimento do corpo lúteo (CL). Para isso, o presente estudo foi dividido em dois experimentos. O Experimento 1 foi realizado no Brasil com 41 vacas Bos indicus (Nelore) tratadas com um dispositivo intravaginal de P4 e 2 mg de benzoato de estradiol (BE) i.m. no D-10. No D-2, o dispositivo foi removido e as vacas receberam 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) e 0,530 mg de cloprostenol sódico (PGF). No D-1, foi administrado 1 mg de BE para a indução da ovulação. Das 41 vacas, 36 (87,8%) ovularam e foram aleatoriamente distribuídas em três grupos experimentais: Controle (n = 13), sem tratamento adicional; P4D4 (n = 11), administração de 150 mg de P4LA i.m no D4; e P4D7 (n = 12), administração de 150 mg de P4LA i.m. no D7. Foram realizadas avaliações ultrassonográficas Color Doppler para verificar a perfusão do CL e colheitas de sangue para análise da concentração de P4 do D4 ao D7 a cada 24 h e do D7 ao D25 a cada 48 h. Verificou-se interação tratamento*tempo (P = 0,004) para concentração plasmática de P4, com aumento transitório na concentração de P4 24h após a administração de P4LA no D4 e D7. Entretanto, não ocorreu interação tratamento*tempo para o diâmetro do CL (P = 0,59) e tampouco efeito dos tratamentos no fluxo sanguíneo central (FSC; P = 0,97) e periférico (FSP) do CL (P = 0,97). No experimento 2, o mesmo protocolo de sincronização descrito no experimento 1 foi empregado em 787 receptoras mestiças sincronizadas para TE na República Dominicana. Destas, 69,9% apresentaram CL &gt; 14 mm no D4 e foram distribuídas aleatoriamente nos 3 grupos experimentais: Controle (n = 168), P4D4 (n = 201) e P4D7 (n = 181). A TE de embrião PIV foi realizada no D7 e o diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia no D30 e D60. A taxa de concepção aos 30 dias [Controle: 41,4% (70/168); P4D4: 42,3% (89/201); P4D7: 41,2% (80/181); P = 0,41], aos 60 dias [Controle: 36,3% (61/168); P4D4: 39,8% (80/201); P4D7: 38,1% (69/181); P = 0,49] e a perda gestacional [Controle: 5,4% (9/168); P4D4: 4,5% (9/201); P4D7: 6,1% (11/181); P = 0,73] não diferiram entre os tratamentos. Em conclusão, apesar do aumento da concentração plasmática de P4 após os tratamentos com P4LA no D4 ou D7, não foi observado efeito positivo desses tratamentos na taxa de prenhez e na perda gestacional de receptoras de embriões bovinos. Além disso, os tratamentos com P4LA não comprometeram o desenvolvimento do CL. / The recipients of bovine embryos must have a suitable uterine environment for embryo development, establishment of gestation and birth of a healthy calf. Despite technological advances, embryo loss remains high, resulting in reduced pregnancy rates after embryo transfer (ET). Progesterone (P4) plays an important role in the processes of establishing and maintaining gestation in bovine females. Several studies have shown that treatment with long-acting injectable progesterone (P4LA) after timed artificial insemination (TAI) can help the establishment of pregnancy and increase conception rates. Thus, the aim of the present study was to verify whether treatment with P4LA after synchronized ovulation in recipients of in vitro produced (IVP) embryos would increase P4 plasmatic concentration and pregnancy rate, without interfering with the development of corpus luteum (CL). The study was divided in two experiments. Experiment 1 was conduced in Brazil with 41 Bos indicus cows (Nelore) synchronized with a P4 intravaginal device and 2 mg of estradiol benzoate (EB) i.m. on D-10. On D-2, the device was removed and cows received 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) and 0.530 mg of sodium Cloprostenol (PGF) i.m. On D-1, 1 mg of EB was administered to induce ovulation. From the 41 cows, 36 (87.8%) ovulated and were randomly distributed in three experimental groups: Control (n = 13), without any additional treatment; P4D4 (n = 11) administration of 150 mg of P4LA i.m on D4; and P4D7 (n = 12), administration of 150 mg of P4LA i.m. on D7. The CL blood flow was evaluated using Color Doppler ultrasonography and blood sampling was collected for analysis of P4 concentration from D4 to D7 every 24 h and from D7 to D25 every 48 h. Interaction Treatment*Time (P = 0.004) was found for plasma P4 concentration, with a transient increase of P4 concentration 24h after treatments with P4LA on D4 and D7. However, there was neither an interaction Treatment*Time for CL diameter (P = 0.59), nor an effect of CL central (P = 0.97) and peripheral blood flow (P = 0.97). In experiment 2, the same synchronization protocol described in experiment 1 was used in 787 recipients synchronized for ET in Dominican Republic. From those, 69.9% had CL &gt; 14 mm on D4 and were randomly assigned to the following experimental groups: Control (n = 168), P4D4 (n = 201), and P4D7 (n = 181). The IVP embryos were transferred on D7 and the gestation diagnosis was performed on D30 and D60 by ultrasonography. The conception rate at 30 days [Control: 41.4% (70/168); P4D4: 42.3% (89/201); P4D7: 41.2% (80/181); P = 0.41] at 60 days [Control: 36.3% (61/168); P4D4: 39.8% (80/201); P4D7: 38.1% (69/181); P = 0.49] and gestational loss [Control: 5.4% (9/168); P4D4: 4.5% (9/201); P4D7: 6.1% (11/181); P = 0.73] did not differ between treatments. In conclusion, despite the increase in plasma P4 concentration after treatment with P4LA on D4 and D7, no positive effect of using P4LA was observed on conception rate and gestational loss of bovine embryo recipients. In addition, P4LA treatments did not compromise the development of CL.

Os esteroides ovarianos modulam a expressão de importantes moléculas no endométrio de fêmeas bovinas, incluindo os eicosanoides. Os eicosanoides sintetizados pelo endométrio controlam uma gama de eventos reprodutivos. A hipótese do presente estudo é que a síntese de eicosanoides pelo endométrio no sétimo dia pós-estro é regulada pelo ambiente endócrino periovulatório. Objetivou-se mensurar a expressão gênica de 23 proteínas envolvidas na síntese, transporte e sinalização de eicosanoides e quantificar uma série de eicosanoides no útero de vacas de corte com diferentes perfis hormonais peri-ovulatórios no início do diestro. O crescimento folicular foi farmacologicamente manipulado para que resultassem grupos apresentando folículo pré-ovulatório e corpo lúteo grande (F/CLG; n=11) ou pequeno (F/CLP; n=11). Vacas Nelores multíparas, não lactantes, pré-sincronizadas, receberam (F/CLG) ou não (F/CLP) uma dose de PGF2&#945; e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol. A remoção dos dispositivos de liberação de progesterona e aplicação de PGF2&#945; foi realizada 60 a 42 horas antes da indução da ovulação no grupo F/CLG e entre 48 a 30 horas no grupo F/CLP. A ovulação foi induzida (GnRH; 10g) no D0. Amostras de sangue foram obtidas entre os dias D-2 a D0 e D0 a D7 para mensuração das concentrações de estradiol os dias progesterona, respectivamente. No dia 7, tecidos e lavados uterinos foram coletados. Em comparação ao grupo F/CLG, os animais do grupo F/CLP apresentaram folículos pré-ovulatórios e CL menores que resultaram em menores concentrações de estradiol e progesterona, respectivamente (P<0,5). A quantificação dos transcritos foi feita por qPCR. A abundância dos genes PTGES, AKR1C3, AKR1C4, CBR1, PTGIS e ALOX12, foi maior para os animais do grupo F/GLG, e PLA2G10 foi menor no mesmo grupo quando comparado com o grupo F/CLP (P<0,10). A concentração de metabólitos foi mensurada no tecido endometrial (pg/g) e lavado uterino (ng/mL) por espectrometria de massas. Maiores concentrações do metabolito 9-HETE foram encontradas no tecido endometrial do grupo F/CLP (P<0,05). Comparações entre médias foram determinadas pelo teste t de Student. Conclui-se que diferentes concentrações de estradiol (proestro) e progesterona (início do diestro) foram capazes de modular a expressão de genes relativos à síntese de eicosanoides, sem influenciar as concentrações dos eicosanoides no endométrio e lavado uterino de fêmeas bovinas no sétimo dia do ciclo. / Ovarian steroids modulate the expression of important molecules on bovine endometrium, including eicosanoids. The eicosanoids synthetized by the endometrium control many reproductive processes. The hypothesis of this study is that the eicosanoids synthesis by the endometrium on day seven after the estrous is regulated by the periovulatory endocrine milieu. The aims of this study were (1) to measure the expression of 23 genes that encode proteins involved in eicosanoids synthesis, transport and signaling and (2) to quantify eicosanoids on beef cows uterus exposed to different periovulatory hormonal profiles. Follicular growth was pharmacologically manipulated to generate two groups presenting large or small preovulatory follicle and corpus luteum (LF/CL and SF/CL respectively; n=11/group). Cyclic, non-lactating Nelore cows received two injections of cloprostenol (PGF2&alpha; 0.5mg; i.m.) 14 days apart. Ten days later (D-10), cows received a P4-releasing device along with estradiol benzoate (2mg; i.m.). To modulate the growth of the preovulatory follicles, on D-10, animals received PGF2&alpha; (LF/CL) or not (SF/CL). The P4-releasing devices were removed and PGF2&alpha; injected 60 to 42 hours before the ovulation induction in the LF/CL group and 48 to 30 hours before the ovulation induction in the SF/CL group. Ovulation was induced with buserelin (GnRH; 10&#181;g; i.m.) on D0. Plasma was obtained for measurement of estradiol concentrations from D-2 to D0 and from D0 to D7 for progesterone measurements. On D7, the animals that ovulated in response to GnRH were slaughtered and uterus flushing and endometrium were collected. Differences between group means were determined by students t test. Animals from LF/CL group presented larger preovulatory follicles, corpus luteum, estradiol and progesterone levels when compared to animals from SF/CL group (P<0.1). The quantification of the transcripts was performed by qPCR. PTGES, AKR1C3, AKR1C4, CBR1, PTGIS and ALOX12 were more abundant and PLA2G10 was less expressed in the endometrium from animals from LF/CL when compared to SF/CL (P<0.10). Metabolites concentration was measured by mass spectrometry in endometrial tissue (pg/g) and uterine flushings (ng/mL). The metabolite 9-HETE was more abundant on uterine flushings from animals with SF/CL (P<0.05). Different concentrations of estradiol (proestrous) and progesterone (beginning of diestrous) modulated the expression of genes related to eicosanoids synthesis, but it did not affect eicosanoids levels in the endometrium and uterine flushing in beef cattle on day 7 of the estrous cycle.

Apesar de inúmeros estudos desenvolvidos no Brasil e no mundo, a utilização das biotecnologias de superovulação (SOV) e transferência de embriões (TE) em bubalinos ainda apresenta resultados inconsistentes, associados à principalmente à baixa taxa de recuperação de embriões. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da utilização de dispositivo de P4 (para promover diminuição da contratilidade do trato genital, Capitulo 1) ou da administração de PGF2&#945; (para promover aumento da atividade da fímbria e da frequência do batimento ciliar, Capítulo 2) durante o período periovulatório na captação dos oócitos pelas fímbrias e no aumento da produção de embriões em búfalas superovuladas. No Experimento 1 (Capítulo 1), doadoras bubalinas foram homogeneamente divididas em dois grupos: controle (G-C; n=8) e tratamento com progesterona (P4) durante o período periovulatório (G-P4; n=8). A emergência da onda de crescimento folicular foi sincronizada com um dispositivo intravaginal de P4 e a administração de 2 mg i.m. de benzoato de em dia aleatório do ciclo estral (Dia 0; D0). A partir do D4, todas as búfalas receberam 200 mg i.m. de FSH duas vezes ao dia, em 8 doses decrescentes. Foram administrados 530&micro;g i.m. de PGF2&#945; no D6 e no D7. A P4 foi removida do G-C no D7 e do G-P4 no D10. No D8, todas as búfalas receberam 25 mg i.m. de pLH. As inseminações foram realizadas 12 e 24 h após o tratamento com pLH. Foram realizadas colheitas de sangue a cada 12h do D7 ao D11 para posterior dosagem de progesterona. As estruturas embrionárias (oócitos/embriões) foram coletadas pelo método não cirúrgico de lavagem uterina seis dias após a segunda IA (D14). Avaliações ultrassonográficas dos ovários foram realizadas no D8 e no D14 para aferir respectivamente as respostas superestimulatória e superovulatória. As variáveis foram analisadas pelo procedimento GLIMMIX do SAS®. As búfalas do G-P4 apresentaram menor taxa de ovulação (13,5±4,9 vs. 71,5±16,1%; P=0,002) e, consequentemente, maior taxa de folículos &ge; 8 mm (87,8±10,6 vs. 34,3±9,8 %; P=0,06) e menor número de CLs no D14 (1,1±0,3 vs. 8,0±2,8; P=0,04) que as búfalas do G-C. O número de estruturas embrionárias (1,9±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,03), de embriões transferíveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) e congeláveis (1,6±0,7 vs. 0,0±0,0; P=0,04) foram inferiores para o G-P4. A concentração sérica de progesterona foi maior nos animais do G-P4 (1,87±0,13) que nos do G-C (0,48±0,10; P<0,0001). No Experimento 1 (Capítulo 2), as doadoras foram divididas aleatoriamente em 2 grupos: controle (G-C; n=22) e tratamento com prostaglandina F2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF; n=22). Os animais do G-C foram submetidos ao protocolo de superovulação descrito no capítulo 1. No G-PGF todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam quatro doses de PGF2&#945; (0,53 mg i.m. de cloprostenol sódico) do D8 ao D10 com intervalo de 12h. Foi verificado maior número de estruturas embrionárias recuperadas em búfalas superovuladas tratadas com PGF2&#945; durante o período periovulatório (G-PGF=3,5±0,6) comparado ao grupo controle (G-C=2,3±0,5; P=0,02). Além disso, houve aumento no número de embriões transferíveis (G-PGF=2,7±0,6 vs. G-C=1,8±0,5; P=0,05). No Experimento 2 (Capítulo 2), os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos experimentais: Grupo Controle (GC; n=22), Grupo PGF injetável (G-PGF-INJ; n=22) e Grupo PGF Bomba Osmótica (G-PGF-BO; n=22). Os animais pertencentes aos grupos: G-C e G-PGF-INJ foram submetidos aos mesmos protocolos descritos para seus grupos correspondentes no Experimento 1 (Capítulo 2). No GPGF- BO, todas as búfalas receberam protocolo de superovulação semelhante ao G-C e, adicionalmente, receberam a partir do D8 a inserção subcutânea de uma mini-bomba osmótica, contendo PGF2&#945; (2,12 mg de Cloprostenol sódico). A bomba osmótica retirada no D10. Não foram verificadas diferenças no número de estruturas totais recuperadas nas búfalas tratadas com PGF&#945; durante o período periovulatório (G-C=2,1±0,8 vs. G-PGF-INJ=2,1±0,6 vs. GPGF- BO=1,4±0,4; P=0,58). Os tratamentos no período periovulatório com dispositivo intravaginal de P4 (Capítulo 1) e com PGF2&#945; (Capítulo 2) não foram eficientes em aumentar a recuperação de estruturas embrionárias de búfalas superovuladas. / Despite numerous studies conducted in Brazil and world-wide, the use of superovulation (SOV) and embryo transfer (ET) biotechnologies in buffaloes still shows inconsistent results, particularly in terms of low embryos recovery rate. Thus, the aim of this study was to evaluate the use of a P4 device (to decrease contractility of the genital tract, Chapter 1) or PGF2&alpha; administration (to increase activity of the fimbriae and ciliary beat frequency, Chapter 2) during the periovulatory period in the uptake of oocytes by fimbriae and in the increase of embryo production in superovulated buffaloes. In Experiment 1 (Chapter 1), buffalo donors were homogeneously assigned into 2 groups: Control (C-G; n=8) and progesterone (P4) treatment during the periovulatory period (P4-G; n=8). Follicular growth wave emergence was synchronized with an intravaginal P4 device and the injection of 2 mg i.m. of estradiol benzoate at random stage of the estrous cycle (Day 0; D0). From D4 on, all buffaloes received 200 mg i.m. of FSH twice-daily, in 8 decreasing doses. A dose of PGF2&alpha; was given on D6 PM and on D7. The P4 was removed from the C-G on D7 and from the P4-G on D10. On D8, all buffaloes received 25 mg i.m. of pLH. Inseminations were done 12 and 24 h after the pLH treatment. Blood samples were collected every 12h from D7 to D11 for further progesterone assay. The embryonic structures (ova/embryos) were collected by nonsurgical uterine flush 6 days after the second timed AI (D14). Ovarian ultrasound examinations were performed on D8 and on D14 to verify respectively the superestimulation and the superovulatory response. Variables were analyzed by GLIMMIX procedure of SAS®. Buffaloes from P4-G showed lower ovulation rate (13.5±4.9 vs. 71.5±16.1%; P=0.002) and, consequently, higher follicles &ge; 8 mm rate (87.8±10.6 vs. 34.3±9.8 %; P=0.06) and lower number of CLs on D14 (1.1±0.3 vs. 8.0±2.8; P=0.04) than buffaloes from C-G. The total number of embryonic structures (1.9±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.03), transferable (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) and freezable embryos (1.6±0.7 vs. 0.0±0.0; P=0.04) were lower for P4-G. The serum progesterone concentration was greater for animals in P4-G (1.87±0.13) than in the C-G (0.48±0.10; P<0.0001). In Experiment 1 (Chapter 2), donors were randomly assigned into two groups: control (C-G; n=22) and prostaglandin F2&alpha; treatment during the periovulatory period (G-PGF; n=22). Animals from C-G were subjected to the superovulation protocol described on chapter 1. In G-PGF all buffaloes received similar superovulation protocol from the C-G and, additionally, received four doses of PGF2&alpha; (0.53 mg i.m. of sodic cloprostenol) from D8 to D10, 12h apart. A greater number of embryonic structures were recovered from superovulated buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (PGF-G=3.5±0.6) compared to control group (C-G=2.3±0.5; P=0.02). Furthermore, increased number of transferable embryos were found in treated animals (PGF-G=2.7±0.6 vs. C-G=1.8±0.5; P=0.05). In Experiment 2 (Chapter 2), animals were randomly assigned into three experimental groups: Control group (CG; n=22), Injectable PGF group (INJ-PGF-G; n=22) and Osmotic pump PGF group (BO-PGF-G; n=22). The animals from C-G and INJ-PGF-G group were subjected to the same protocols described for their correspondent groups in Experiment 1 (Chapter 2). In BO-PGF-G, all buffaloes received the superovulation protocol similar to C-G and, additionally, received from D8, a subcutaneous insertion of a mini osmotic pump, containing PGF2&alpha; (2.12 mg de sodic cloprostenol). The osmotic pump was removed on D10. No differences were found on the total number of recovered structures in buffaloes treated with PGF2&alpha; during the periovulatory period (C-G=2.1±0.8 vs. INJ-PGF-G=2.1±0.6 vs. BO-PGF-G=1.4±0.4; P=0.58). Treatments on the peri- ovulatory period with intravaginal P4 device (Chapter 1) and PGF2&alpha; (Chapter 2) were not efficient in increasing the recovery of embryonic structures in superovulated buffalo.

As receptoras de embriões bovinos devem possuir um ambiente uterino adequado para o desenvolvimento do embrião, estabelecimento da gestação e nascimento de um bezerro saudável. Apesar dos avanços tecnológicos, a perda embrionária ainda permanece elevada, resultando em taxas de prenhez reduzidas após a transferência de embriões (TE). A progesterona (P4) apresenta papel importante nos processos de estabelecimento e manutenção de gestação em fêmeas bovinas. Diversos estudos evidenciaram que o tratamento com P4 injetável de longa ação (P4LA) após a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) pode favorecer o estabelecimento da gestação e aumentar as taxas de concepção. Assim, o objetivo do presente estudo foi verificar se o tratamento com P4LA após a ovulação sincronizada em receptoras de embriões produzidos in vitro (PIV) resultará em aumento na concentração de P4 e na taxa de prenhez, sem comprometer o desenvolvimento do corpo lúteo (CL). Para isso, o presente estudo foi dividido em dois experimentos. O Experimento 1 foi realizado no Brasil com 41 vacas Bos indicus (Nelore) tratadas com um dispositivo intravaginal de P4 e 2 mg de benzoato de estradiol (BE) i.m. no D-10. No D-2, o dispositivo foi removido e as vacas receberam 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) e 0,530 mg de cloprostenol sódico (PGF). No D-1, foi administrado 1 mg de BE para a indução da ovulação. Das 41 vacas, 36 (87,8%) ovularam e foram aleatoriamente distribuídas em três grupos experimentais: Controle (n = 13), sem tratamento adicional; P4D4 (n = 11), administração de 150 mg de P4LA i.m no D4; e P4D7 (n = 12), administração de 150 mg de P4LA i.m. no D7. Foram realizadas avaliações ultrassonográficas Color Doppler para verificar a perfusão do CL e colheitas de sangue para análise da concentração de P4 do D4 ao D7 a cada 24 h e do D7 ao D25 a cada 48 h. Verificou-se interação tratamento*tempo (P = 0,004) para concentração plasmática de P4, com aumento transitório na concentração de P4 24h após a administração de P4LA no D4 e D7. Entretanto, não ocorreu interação tratamento*tempo para o diâmetro do CL (P = 0,59) e tampouco efeito dos tratamentos no fluxo sanguíneo central (FSC; P = 0,97) e periférico (FSP) do CL (P = 0,97). No experimento 2, o mesmo protocolo de sincronização descrito no experimento 1 foi empregado em 787 receptoras mestiças sincronizadas para TE na República Dominicana. Destas, 69,9% apresentaram CL &gt; 14 mm no D4 e foram distribuídas aleatoriamente nos 3 grupos experimentais: Controle (n = 168), P4D4 (n = 201) e P4D7 (n = 181). A TE de embrião PIV foi realizada no D7 e o diagnóstico de gestação foi realizado por ultrassonografia no D30 e D60. A taxa de concepção aos 30 dias [Controle: 41,4% (70/168); P4D4: 42,3% (89/201); P4D7: 41,2% (80/181); P = 0,41], aos 60 dias [Controle: 36,3% (61/168); P4D4: 39,8% (80/201); P4D7: 38,1% (69/181); P = 0,49] e a perda gestacional [Controle: 5,4% (9/168); P4D4: 4,5% (9/201); P4D7: 6,1% (11/181); P = 0,73] não diferiram entre os tratamentos. Em conclusão, apesar do aumento da concentração plasmática de P4 após os tratamentos com P4LA no D4 ou D7, não foi observado efeito positivo desses tratamentos na taxa de prenhez e na perda gestacional de receptoras de embriões bovinos. Além disso, os tratamentos com P4LA não comprometeram o desenvolvimento do CL. / The recipients of bovine embryos must have a suitable uterine environment for embryo development, establishment of gestation and birth of a healthy calf. Despite technological advances, embryo loss remains high, resulting in reduced pregnancy rates after embryo transfer (ET). Progesterone (P4) plays an important role in the processes of establishing and maintaining gestation in bovine females. Several studies have shown that treatment with long-acting injectable progesterone (P4LA) after timed artificial insemination (TAI) can help the establishment of pregnancy and increase conception rates. Thus, the aim of the present study was to verify whether treatment with P4LA after synchronized ovulation in recipients of in vitro produced (IVP) embryos would increase P4 plasmatic concentration and pregnancy rate, without interfering with the development of corpus luteum (CL). The study was divided in two experiments. Experiment 1 was conduced in Brazil with 41 Bos indicus cows (Nelore) synchronized with a P4 intravaginal device and 2 mg of estradiol benzoate (EB) i.m. on D-10. On D-2, the device was removed and cows received 300 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) and 0.530 mg of sodium Cloprostenol (PGF) i.m. On D-1, 1 mg of EB was administered to induce ovulation. From the 41 cows, 36 (87.8%) ovulated and were randomly distributed in three experimental groups: Control (n = 13), without any additional treatment; P4D4 (n = 11) administration of 150 mg of P4LA i.m on D4; and P4D7 (n = 12), administration of 150 mg of P4LA i.m. on D7. The CL blood flow was evaluated using Color Doppler ultrasonography and blood sampling was collected for analysis of P4 concentration from D4 to D7 every 24 h and from D7 to D25 every 48 h. Interaction Treatment*Time (P = 0.004) was found for plasma P4 concentration, with a transient increase of P4 concentration 24h after treatments with P4LA on D4 and D7. However, there was neither an interaction Treatment*Time for CL diameter (P = 0.59), nor an effect of CL central (P = 0.97) and peripheral blood flow (P = 0.97). In experiment 2, the same synchronization protocol described in experiment 1 was used in 787 recipients synchronized for ET in Dominican Republic. From those, 69.9% had CL &gt; 14 mm on D4 and were randomly assigned to the following experimental groups: Control (n = 168), P4D4 (n = 201), and P4D7 (n = 181). The IVP embryos were transferred on D7 and the gestation diagnosis was performed on D30 and D60 by ultrasonography. The conception rate at 30 days [Control: 41.4% (70/168); P4D4: 42.3% (89/201); P4D7: 41.2% (80/181); P = 0.41] at 60 days [Control: 36.3% (61/168); P4D4: 39.8% (80/201); P4D7: 38.1% (69/181); P = 0.49] and gestational loss [Control: 5.4% (9/168); P4D4: 4.5% (9/201); P4D7: 6.1% (11/181); P = 0.73] did not differ between treatments. In conclusion, despite the increase in plasma P4 concentration after treatment with P4LA on D4 and D7, no positive effect of using P4LA was observed on conception rate and gestational loss of bovine embryo recipients. In addition, P4LA treatments did not compromise the development of CL.

As dosagens de estradiol e progesterona são utilizadas em grande número de pesquisas em reprodução animal. Vários métodos e anticorpos para quantificação vêm sendo desenvolvidos, porém cada metodologia analítica possui vantagens e limitações. O radioimunoensaio é o mais utilizado, mas tem como principal desvantagem o envolvimento de material radioativo. A preocupação neste setor aliada às exigências das legislações em questões ambientais, têm aumentado a necessidade do desenvolvimento de novas técnicas sem a utilização de material radioativo. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a técnica xMAP-Multiplex&reg; para dosagem de estradiol e progesterona em vacas, ovelhas e búfalas. Foram utilizados cinco animais de cada espécies. O ciclo estral dos animais foi sincronizado com a utilização de prostaglandina e amostras sanguíneas foram coletadas durante o ciclo estral. As concentrações séricas de progesterona e estradiol dos animais do estudo foram obtidas pelo MILLIPLEX&reg; MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Nas condições em que este experimento foi realizado, os resultados mostraram que esta técnina é viável para a avaliação do perfil progesterônico destas espécies, mas não para avaliar o perfil estrogênico. / Quantification of estradiol and progesterone are used in a big number of animal´s reproduction´s researches. Several methods and antibodies to quantify them have been developed, but each analytical methodology has advantages and limitations. Radioimmunoassay is the most widely used method, but it has as major disavantage the use of radioactive material. The concerns at this area added to the requirements of legislations about environmental topics have increased the need to development techniques without the use of radioactive material. The aim of this research was to evaluate the xMAP-Multiplex&reg; technique to quantify progesterone and estradiol in ovines, bovines and bubalins. Five animals of each species were used. The estrous cycle of the animals was synchronized by prostaglandin and blood samples were collected during the estrous cycle. The seric concentrations of progesterone and estradiol were obtained by MILLIPLEX&reg; MAP Multi Species Steroid kit (STTHMAG-21K; Millipore, Billerica, MA). Under the conditios of this experiment the results showed that this technique is practicable to evaluate progesterone´s profile in those animals, but not to evaluate their estradiol´s profile.

Quatro experimentos foram realizados para avaliar as concentrações plasmáticas de progesterona ([P4]) e as taxas de fertilidade na inseminação artificial em tempo fixo (IATF) após o uso de diferentes dispositivos de liberação lenta de progesterona (DP). No primeiro experimento foram utilizadas 4 novilhas ovariectomizadas. Esses animais receberam 5 diferentes tipos de DP, nos quais se variou a superfície de contato (50cm&sup2; ou 100 cm&sup2; e a dose de progesterona (0,5g; 1,0g e 2,0g) Os dispositivos foram inseridos aos pares durante 7 dias e se estabeleceu um intervalo entre tratamentos de pelo menos 30 dias. Com os dados de [P4] 24 horas e sete dias após a inserção do DP obtiveram-se as seguintes equações de regressão, respectivamente: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(área) + 0,513(dose); (R&sup2;=0,94) e [P4] 7d = 0,331+ 0,0056(área) + 0,329(dose); (R&sup2;=0,71). No segundo experimento foram comparados dois dos dispositivos testados no primeiro estudo: P50-1,0 (50 cm2 área; 1,0g dose P4) e P50-1,5 (50 cm&sup2; área; 1,5g dose P4) com dois dispositivos comerciais: CIDR (120 cm&sup2; área; 1,9g P4 dose) e DIB (120 cm&sup2; área; 1,0g P4 dose). Os dispositivos foram inseridos em 15 novilhas Nelore pré-puberes para avaliação das [P4] obtendo-se, após 24 horas de inserção, para CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectivamente: 7,7&plusmn;2,8&ordf; ; 4,5&plusmn;0,75b; 5,9&plusmn;2,5b e 2,1&plusmn;0,5c ng/ml e após 8 dias, respectivamente: 3,3&plusmn;0,7&ordf; ; 2,6&plusmn;2,0&ordf;; 3,0&plusmn;2,4&ordf; e 1,1&plusmn;0,27bng/ml. As regressões obtidas no primeiro experimento não foram eficientes para estimar as [P4] obtidas no estudo 2. Nos experimentos 3 e 4 comparou-se a eficiência dos dispositivos DIB e P50-1,5 em 431 vacas de corte zebuínas e cruzadas, com bezerros ao pé e multíparas, após uso em um programa de IATF no qual os dispositivos permaneciam nos animais durante 8 dias; quando da colocação desses dispositivos, eram aplicados 2mg de benzoato de estradiol (BE) e, na retirada, 400UI de eCG. Uma última dose de BE foi administrada 24 horas após a retirada dos DP, e a IATF foi realizada 54 horas após a retirada dos DP. Não foram encontradas diferenças nas taxas de concepção da IATF entre dispositivos. As taxas de concepção variaram entre 30 e 51,6% nos lotes tratados. O tratamento diminuiu o intervalo tratamento-parto de 365 para 317 dias, comparado à monta natural. / Four studies have been made to evaluate the plasmatic progesterone concentration ([P4]) of different intravaginal low delivery progesterone devices (PD) and the fertility rates after their use in timed artificial insemination (TAI). In the first study there were used 4 ovariectomized heifers. These animals received 5 kinds of prototypes PD on which varied the contact surface (50 or 100 cm&sup2;) and the progesterone doses (0,5; 1,0 or 2g). These PD were inserted in the vaginas in pairs and the interval between treatments was higher than 30 days. With the data of [P4] there were found the fallowing regressive equations for the days 1 and 7 after the insertion , respectively: [P4]24h = 0,238 + 0,0343(surface) + 0,513(dose); (R&sup2;=0,94) and [P4]7d = 0,331+ 0,0056(surface) + 0,329(dose); (R&sup2;=0,71). In the second study there were compared 2 prototypes PD based on the first study: P50-1,0 (50 cm&sup2; surface; 1,0g dose P4) and P50-1,5 (50 cm&sup2; surface; 1,5g dose P4) with two commercial PD: CIDR (120 cm&sup2; surface; 1,9g P4 dose) and DIB (120 cm&sup2; surface; 1,0g P4 dose). These PD were inserted in 15 prepuberal Nelore heifers to evaluate the [P4] The [P4] (in ng/ml) found after 24 hours were for CIDR, DIB, P50-1,5 e P50-1,0, respectively: 7.7&plusmn;2.8&ordf; ; 4.5&plusmn;0.75b; 5.9&plusmn;2.5b e 2.1&plusmn;0.5c ng/ml and after 8 days, respectively: 3.3&plusmn;0.7&ordf; ; 2.6&plusmn;2.0&ordf;; 3.0&plusmn;2.4&ordf; e 1.1&plusmn;0.27b ng/ml. The regressive equations found in the first study were not efficient to estimate the [P4] for the prototypes PDs. In the studies 3 and 4 there were compared the PD DIB and P50-1.5 for TAI in 431 Nelore and cross-breed lactating postpartum beef cows. The TAI protocol was: PD insertion per 8 days, administration of 2 mg estradiol benzoate (EB) in the insertion day - 400 UI of eCG in the PD removal - 1mg EB 24 hours after PD removal- TAI 54 hours after the PD removal. There were no differences in TAI conception rates between PD. The TAI conception rates ranged from 30 to 51.6% in the treated herds. The treatment has decreased the treatment-partum interval from 365 to 317 days on animals submitted to natural mating.

Vários autores já enfatizaram a importância do monitoramento do ciclo estral em cadelas e citaram exemplos de como ele pode ser feito. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de dosagem de progesterona salivar para monitorar o ciclo estral da espécie. Para composição do grupo experimental, foram utilizadas 13 cadelas. As amostras de sangue e saliva foram colhidas paralelamente em todos os animais, a partir dos primeiros sinais de proestro. As amostras salivares foram obtidas com o uso de dispositivo específico para coleta Salivette®, método que se mostrou eficaz, visto que foi possível obter volume suficiente para dosagem de progesterona na grande maioria das amostras. As concentrações de progesterona no soro foram determinadas pela técnica de RIE e na saliva por EIE. Embora haja uma relação linear crescente e positiva entre a progesterona sérica e salivar (r=0,704; p<0,0001), não é possível utilizar o parâmetro salivar para determinar o momento da ovulação. / Several authors have already emphasized the importance of monitoring estrous cycle in bitches and mentioned examples of how it can be done. The aim of this study was to evaluate the salivary progesterone quantification technique in order to monitor the estrous cycle in this species. To compound the experimental group, 13 bitches were used. Blood and saliva samples were collected simultaneously in all animals, starting about the first day of proestrus signs. Salivary samples were collected with a specific device: Salivette®. This method was effective, since it was possible to obtain enough volume in almost all samples to quantify progesterone. Serum progesterone was quantified by radioimmunoassay and salivary progesterone by enzyme immunoassay. Although there is an increasing, linear and positive correlation between salivary and serum progesterone (r=0,704; p<0,0001), it is not possible to use the salivary parameter to set the moment of ovulation.

Pouco se conhece acerca dos aspectos fisiológicos da reprodução de ranfastídeos, sendo estas informações importantes para sua conservação e criação em cativeiro. Métodos não-invasivos permitem análises a longo prazo e em espécies pequenas, além de facilitar estudos em vida livre e minimizar o estresse causado aos animais. Este trabalho teve por intuito a dosagem de metabólitos de testosterona (machos e fêmeas), progesterona e estradiol (somente fêmeas) nas excretas de 3 casais de tucano-toco (Ramphastos toco) e 3 casais de tucano-de-bico-verde (Ramphastos dicolorus), dentro e fora da estação reprodutiva. Dados de observações comportamentais mostraram que os animais foram mais ativos durante a estação reprodutiva, porém comportamentos sociais e proximidade entre o casal se mostraram raros nas duas fases durante as seções de observação. Concentrações de metabólitos de progesterona foram obtidos para as duas espécies na Fase Reprodutiva, mas não foram detectados nos ensaios para a Fase Não-reprodutiva. Metabólitos de testosterona puderam ser dosados em ambas as espécies, nas duas fases, tanto em machos quanto em fêmeas; sendo que os resultados mostraram para a maioria dos indivíduos concentrações maiores na Fase Reprodutiva. Aumentos acima de variações basais de metabólitos de testosterona foram associados à ocorrência de posturas, que ocorreram durante a Fase Reprodutiva numa das fêmeas de R. toco. Não foram obtidos resultados de metabólitos de estradiol em nenhuma das duas espécies, possivelmente pela falha do anticorpo utilizado em reconhecer os metabólitos. No entanto, este trabalho mostrou que a técnica utilizada foi eficaz para dosagem de metabólitos de testosterona e progesterona nas excretas destas espécies, evidenciando variações sazonais nas concentrações hormonais e indicando uma relação entre a concentração de metabólitos de testosterona e as posturas. / Little is known about reproductive physiology in Ranfastidae and this knowledge is needed for the development of conservation programs and for successful captive breeding. Non-invasive methods allow long-term analysis in small animals, facilitate studies with free-living animals and minimize the handling stress. The purpose of this work was to measure the testosterone (males and females), progesterone and oestrogen (females) metabolites concentrations in the droppings of Toco-toucan (Ramphastos toco) and Red-billed-toucan (Ramphastos dicolorus), inside and outside the reproductive season. Three captive couples of each species were studied. Collected behavioural data showed that the animals were more active during reproductive season, but social behaviours and the couple proximity were rare in the two phases during the observation sessions. Progesterone metabolites concentrations could be obtained in the Reproductive Phase for both species, but weren`t detected in the Nonreproductive Phase. Testosterone metabolites could be measured for both species in the two phases, in males and females; and the results showed higher concentrations in most of individuals in the Reproductive Phase. Concentrations of testosterone metabolites above basal levels were associated to egg laying, which occurred during Reproductive Phase in one of the R. toco females. Results of oestrogen metabolites concentrations could not be obtained in both species, probably because the fail of the antibody in detecting these metabolites. However, this work showed that the utilized technique was efficient to measure testosterone and progesterone metabolites in those species droppings, evidencing seasonal variations in hormonal concentrations and indicating a relationship between testosterone concentrations and oviposition.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de diferentes condições nutricionais (suplementação e não suplementação) na atividade cíclica reprodutiva (ACR) em ovelhas das raças Santa Inês (SI), Romney Marsh (RM) e Suffolk (SU) mantidas sob pastejo, e submetidas ao efeito macho, durante época de anestro sazonal sob fotoperíodo natural no Estado de São Paulo. Avaliou-se também os efeitos destes tratamentos nas concentrações plasmáticas de melatonina (MEL) e na duração (horas) da secreção noturna deste hormônio. Todos animais foram mantidos sob pastejo, sendo que metade de cada raça recebeu suplementação e a outra não, caracterizando os tratamentos de suplementação e não suplementação, respectivamente. O tratamento de suplementação forneceu de 100 a 110% dos requerimentos protéicos (PB) e de 130 a 140% dos requerimentos energéticos (NDT), enquanto que o tratamento de não suplementação forneceu de 60 a 70% de PB e 100% de NDT. Os tratamentos nutricionais iniciaram 21 dias antes da introdução dos machos, e continuaram por todo o período de permanência dos mesmos (45 dias). Para o efeito macho, foram utilizados três machos (rufiões), impregnados com tinta na região prepucial para detecção do estro, os quais permaneceram isolados das fêmeas por um período de 60 dias. Colheitas de sangue foram realizadas antes (a cada 3 dias) e após (a cada 2 dias) a introdução dos machos, para dosagem de progesterona plasmática, a fim de monitorar a ACR das fêmeas. Foram também realizadas colheitas de sangue para dosagem de MEL plasmática: antes do início do experimento, antes da introdução dos machos e no final do experimento, em período de 24 horas, a cada 2 (noite) ou 4 (dia) horas. Os parâmetros avaliados foram: ganho de peso, ACR após introdução dos machos nos animais que se encontravam em anestro, dias para retorno da ACR, concentrações plasmáticas de MEL, duração da secreção de MEL. Estes parâmetros foram analisados utilizando o procedimento GLM no SAS, seguido pelo teste de ukey para estabelecer a comparação entre médias. O tratamento nutricional teve efeito no ganho de peso (P<0,001), no número de dias para retorno da ACR (P<0,1), nas concentrações de MEL (P<0,1) e na duração da secreção deste hormônio (P<0,1). Animais suplementados apresentaram em média, maior ganho de peso, maiores concentrações de MEL plasmática, e maior duração da secreção deste hormônio. Diferenças raciais foram encontradas para ganho de peso, retorno da ACR e concentrações plasmáticas de MEL. Fêmeas SI, perderam peso, enquanto que as RM mantiveram e as SU ganharam peso durante todo o período experimental, independente do tratamento nutricional. Todas as fêmeas SI retornaram à ACR em média 5 dias após a introdução dos machos, já as fêmeas SU suplementadas não retornaram à ACR, enquanto que as não suplementadas retornaram em 23 dias. Nenhuma ovelha RM retornou à ACR. Assim, conclui-se que para a raça SI só efeito macho é eficiente em ativar o retorno da ACR, e para a raça SU, deve-se aliar esta prática com um bom manejo nutricional, e para a RM, o efeito macho mesmo associado à nutrição não são capazes de amenizar a estacionalidade da ACR. E por fim, a nutrição afeta a duração da secreção de MEL. / This study evaluated the effects of different nutritional conditions (suplementation and no suplementation) in reproductive cyclic activity (RCA) for Santa Inês (SI), Romney Marsh (RM) and Suffolk (SU) breeds, in pasture, submitted to the male effect, during seasonal anoestrus, under natural photoperiod in São Paulo State. It was also evaluated the effects of nutritional treatments for plasmatic melatonin (MEL) concentration and for the duration of MEL secretion. All ewes were mainted in pasture, receiving food supplementation or not, distinguishing the supplementation or not supplementation treatments. The supplementation treatment supplied 100-110% of protein requeriments (CP) and 130-140% of energy requeriments (TDN). The no supplementation treatment supplied 60-70% CP and 100% TDN requeriments. The nutritional treatments were started 21 days before the rams introduction and lasted throughout the permanence period (45 days). To the male effect, it used three vasectomized rams impregnated with ink at the prepucial area in order to facilitate the estrus verification, isolated from the females for 60 days. Blood samples were collected before (every 3 days) and after (every 2 days) the rams introduction to determine de plasmatic progesterone to follow up the ewes reproductive cyclic activity (RCA). Blood samples were also collected to determine the plasmatic MEL dosage: before the beginning of the experiment, before the rams introduction and in the end of the experiment, during 24 hours, every 2 dark hours or 4 light hours. There was evaluated the following parameters: weight gain, RCA after male introduction for the ewes in anoestrus, days to RCA return, MEL concentration and MEL secretion duration. The parameters were analyzed by analisis of variance using the GLM (General Linear Procedure) of the Statistical System (SAS) software. Tukey test was used to compare means. The nutritional treatment resulted efficient for weight gain (P<0,001), days to return RCA (P<0,1), MEL concentration (P<0,1) and the duration of its hormone secretion (P<0,1). Supplemented ewes showed higher weight gain, higher MEL plasmatic concentration and higher hormone secretion duration in average. There was verified breed differences for weight gain, RCA return and MEL plasmatic concentration. SI ewes lost weight in average, RM ewes maintained it and SU ewes gained weight during the whole experimental period not taking into account the nutritional treatment. SI ewes had, in average, their RCA returned 5 days after the rams introduction not taking into account the nutritional treatment. However, SU ewes presented different behaviours due treatments: the ones that received supplementation did not return the RCA while, the non supplemented ones returned the RCA within 23 days. RM ewes did not return RCA no matter which treatment had received. Therefore, one may conclude that for SI ewes the male effect is enough for the RCA return. For SU breed one should combine this practice to good nutritional management. And for RM neither the male effect nor the nutrition are capable to diminish the RCA seasonally. Finally, one may conclude that the nutrition affects the amount and duration of MEL secretion.