published_or_final_version / Paediatrics and Adolescent Medicine / Doctoral / Doctor of Philosophy

La propolis est une substance résineuse collectée par les abeilles sur certaines parties des végétaux. Sa composition en métabolites secondaires est alors variable puisqu’elle dépend notamment de la flore locale près du site de collecte. Dans cette étude, la caractérisation chimique d’un échantillon représentatif de la propolis française de l’entreprise ‘‘Ballot-Flurin Apiculteurs’’ a conduit, au moyen d’analyses HPLC/DAD/MS et RMN 1D & 2D, à l’identification de 51 composés dont deux sont originaux. Les acides et esters phénoliques ainsi que les flavonoïdes identifiés dans cette propolis indiquent qu’elle appartient au type "peuplier". L’évaluation des activités biologiques de différents extraits et composés isolés a montré que cette propolis, qui possède une bonne activité antioxydante (DPPH et ORAC) associée à un potentiel antiglycant (anti-AGEs) très intéressant, représente un bon candidat pour la prévention des maladies, telles que le diabète, impliquant les AGEs. Elle montre également de bonnes activités antifongiques, sur deux levures du genre Candida, et antibactériennes sur Staphylococcus aureus et ses souches résistantes et sensibles à la méticilline, ces dernières étant responsables, à l’heure actuelle, de nombreuses infections nosocomiales. Une étude de variabilité inter-lots ainsi qu’un travail d’optimisation du procédé d’extraction industriel par plan d’expériences ont également été réalisés (partie confidentielle). Enfin, l’analyse de trois autres propolis, provenant d’Amérique Latine (Mexique) et d’Afrique (Côte d’Ivoire et Ouganda), a montré de grandes diversités de résultats en termes de compositions chimiques et d’activités biologiques. / Propolis is a resinous substance collected by honeybees from various plant sources. Its secondary metabolites composition depends on the local flora around the collection site. During this study, the chemical characterization of a representative sample of a French propolis produced by ‘‘Ballot-Flurin Apiculteurs’’ led, through structural identifications involving HPLC/DAD/MS as well as 1D & 2D NMR, to the identification of 51 compounds, two of them being new. Phenolic acids and esters and flavonoids identified in this propolis indicate that it belongs to the so-called "poplar" type. The evaluation of the biological activities of different extracts or isolated compounds showed that this propolis, which exhibits a significant antioxidant activity (DPPH and ORAC) associated with a very interesting anti-glycation (anti-AGEs) potential, would represent a good candidate for the prevention of diseases involving AGEs such as diabetes. These extracts or compounds also exhibit antifungal and antibacterial activities towards two Candida yeasts on the one hand, and Staphylococcus aureus and its methicillin-resistant and susceptible strains on the other hand, the latter being nowadays responsible for many nosocomial infections. A study dealing with the inter-batch variability accompanied by an optimization of the industrial extraction process using experimental design were also carried out (Confidential part). Finally, the analysis of three propolis originating from Latin America (Mexico) and Africa (Ivory Coast and Uganda), revealed a great diversity of results in relation to chemical compositions and biological activities.

La periodontitis es una enfermedad con alta prevalencia a nivel mundial, que produce gran destrucción de tejidos blandos y duros del diente, y pérdida de piezas dentarias. Se ha asociado con patologías sistémicas como diabetes, enfermedades cardiovasculares, parto prematuro y bajo peso en niños recién nacidos. Es una enfermedad infecciosa polimicrobiana, uno de cuyos agentes etiológicos más importantes es Porphyromonas gingivalis, especie de bacterias anaeróbicas estrictas, Gram negativo. Por otra parte, el uso de antibióticos sistémicos está indicado sólo en ciertos tipos de periodontitis, y no siempre el tratamiento es exitoso. Hoy en día, tanto en medicina general como odontológica, se está investigando nuevas alternativas de tratamientos antimicrobianos, dado el continuo aumento de la resistencia bacteriana a los antibióticos convencionales y por las reacciones adversas que estos producen en algunos pacientes. Propolis es un producto natural fabricado por la abeja Apis mellífera con variadas propiedades medicinales, entre ellas la antimicrobiana. Dichas propiedades dependen del origen botánico que utilizó Apis mellífera para su fabricación. En el presente estudio se investigó la actividad biocida in vitro del propolis chileno Apiherbal®, frente a 35 aislados de P.gingivalis provenientes de pacientes chilenos con periodontitis, mediante la técnica de dilución en agar. Se obtuvo un valor de CIM de 83,2mg/ml, como necesario para inhibir el desarrollo del 75% de los aislados probados. El análisis del origen botánico del propolis permitió determinar un origen mixto, dentro del cual no se detectó la presencia del género Populus. Se sugiere que la CIM más alta determinada para este propolis, en comparación con otros, se puede deber a su composición química, a las características morfológicas y fisiológicas de P.gingivalis, y a diferencias en las metodologías utilizadas en la determinación de la concentración inhibitoria mínima.

O desenvolvimento de novos materiais com fonte renovável, baixo custo, melhores propriedades físico-mecânicas e biodegradáveis tem se tornado o principal objetivo de muitas empresas e grupos de pesquisa. O objetivo deste trabalho foi preparar e caracterizar física, química e biologicamente um biocompósito à base de membrana de celulose com própolis. Foram preparadas membranas de celulose com própolis nas concentrações de 1,2%, 2,4% e 3,6%, secas e úmidas, realizados testes de caracterização através de Espectroscopia Vibracional na Região Infra-Vermelho, Difratometria de Raios-X, Microscopia Eletrônica de Varredura, Análise Térmica [Calorimetria Exploratória Diferencial e Termogravimetria] e análise microbiológica para S. aureus. A presença de concentrações diferentes de própolis nas membranas foi identificada nos diversos métodos utilizados e através do ensaio antimicrobiano, a concentração mínima de 0,34% de própolis foi ativo à S. aureus. Portanto, os resultados obtidos são promissores para trabalhos futuros in vivo e possíveis aplicações médicas. / The development of new materials with renewable, low cost, better physical and mechanical properties and biodegradable has become the main goal of many companies and research groups. The aim of this work was prepare and characterize physical, chemical and biologically biocomposites based at a cellulose membrane with propolis. Cellulose membranes were prepared with propolis at concentrations of 1.2%, 2.4% and 3.6%, wet and dry tests performed characterization using vibrational spectroscopy Infra-Red, X-ray Diffraction, Microscopy Scanning Electron, thermal analysis [differential scanning calorimetry and thermogravimetric] and microbiological analysis for S. aureus. The presence of different concentrations of propolis in the membranes was identified in various methods used by testing and antimicrobial, the minimum concentration of 0.34% propolis was active at St. aureus. Therefore, the results are promising for future studies in vivo and potential medical applications.

Estima-se que os EUA gastem por ano cerca de 100 milhões de dólares anuais para tratar e reabilitar pacientes com doenças na coluna vertebral. Aproximadamente 15% dos pacientes que são operados da coluna vertebral, não obtêm melhora clínica e irão necessitar de outros procedimentos cirúrgicos. Entre as principais causas de insucesso nos procedimentos cirúrgicos da coluna vertebral está a fibrose epidural, também chamada de peridural, e a utilização de um de material inibidor desta fibrose, nesse tipo de cirurgia, vem sendo pesquisada, mas até o momento não existe nenhum produto comercial, nacionalmente produzido, destinado à prevenção desta fibrose. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento e caracterização químico-física e microbiológica de um hidrogel à base de Carboximetilcelulose de sódio (NaCMC) e própolis. Foram preparados 4 géis de NaCMC e própolis (1%, 2% e 8% e ausência de própolis) e caracterizados através da espectroscopia vibracional na região infravermelho, microscopia eletrônica de varredura e também teste microbiológico. A espectroscopia vibracional da região do infravermelho identificou a formação de banda característica da ligação própolis com carboximetilcelulose de sódio. A estrutra microscópica manteve-se inalterada, mesmo na concentração de 8% de própolis. O gel de NaCMC própolis 8% demostrou possuir excelente atividade antimicrobiana em relação aos demais géis e abre novas possibilidades de trabalhos futuros in vivo que poderão fornecer informações sobre a eficácia antiaderente e sua possível aplicação em procedimentos neurocirúrgicos. / It is estimated that the United States annually spend around 100 million dollars annually to treat and rehabilitate patients with spinal diseases. Approximately 15% of patients who are operated on the spine, does not obtain clinical improvement and will require other surgical procedures. Among the main causes of failure in surgical procedures of spinal epidural fibrosis is also called the epidural and the use of an inhibitor material of fibrosis in this type of surgery, has been researched, but so far there is no commercial product, nationally produced, for the prevention of fibrosis. The objective of this work was the development and characterization and chemical-physical microbiological analysis of a hydrogel made of NaCMC and propolis. Gels were prepared in four NaCMC and propolis (1%, 2% and 8% and the absence of propolis) and characterized by infrared vibrational spectroscopy, scanning electron microscopy and also microbiological testing. The vibrational spectroscopy identify the characteristic of propolis connection with carboxymethylcellulose. The structure microscopic remained unchanged, even at a concentration of 8% propolis. The NaCMC gel 8% propolis have demonstrated excellent antimicrobial activity compared to other gels and opens new possibilities for future work in vivo that might provide information on the effectiveness nonstick and its possible application to neurosurgical procedures.

O desenvolvimento de novos materiais com fonte renovável, baixo custo, melhores propriedades físico-mecânicas e biodegradáveis tem se tornado o principal objetivo de muitas empresas e grupos de pesquisa. O objetivo deste trabalho foi preparar e caracterizar física, química e biologicamente um biocompósito à base de membrana de celulose com própolis. Foram preparadas membranas de celulose com própolis nas concentrações de 1,2%, 2,4% e 3,6%, secas e úmidas, realizados testes de caracterização através de Espectroscopia Vibracional na Região Infra-Vermelho, Difratometria de Raios-X, Microscopia Eletrônica de Varredura, Análise Térmica [Calorimetria Exploratória Diferencial e Termogravimetria] e análise microbiológica para S. aureus. A presença de concentrações diferentes de própolis nas membranas foi identificada nos diversos métodos utilizados e através do ensaio antimicrobiano, a concentração mínima de 0,34% de própolis foi ativo à S. aureus. Portanto, os resultados obtidos são promissores para trabalhos futuros in vivo e possíveis aplicações médicas. / The development of new materials with renewable, low cost, better physical and mechanical properties and biodegradable has become the main goal of many companies and research groups. The aim of this work was prepare and characterize physical, chemical and biologically biocomposites based at a cellulose membrane with propolis. Cellulose membranes were prepared with propolis at concentrations of 1.2%, 2.4% and 3.6%, wet and dry tests performed characterization using vibrational spectroscopy Infra-Red, X-ray Diffraction, Microscopy Scanning Electron, thermal analysis [differential scanning calorimetry and thermogravimetric] and microbiological analysis for S. aureus. The presence of different concentrations of propolis in the membranes was identified in various methods used by testing and antimicrobial, the minimum concentration of 0.34% propolis was active at St. aureus. Therefore, the results are promising for future studies in vivo and potential medical applications.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

O gênero Acanthamoeba compreende protozoários que pertencem ao grupo das amebas de vida livre e estão amplamente dispersos na natureza. São conhecidos por causarem duas graves doenças, a Encefalite Amebiana Granulomatosa, em pacientes imunodeprimidos e a Ceratite Amebiana, principalmente em usuários de lentes de contatos imunocompetentes. A própolis verde é uma substância resinosa e balsâmica, conhecida na medicina alternativa por apresentar diversas atividades biológicas. Neste trabalho foi avaliada a atividade amebicida de um extrato aquoso de própolis verde contra trofozoítos e cistos de A. castellanii . Nas concentrações de 10 e 20 mg/mL, o extrato foi capaz de inativar 100% dos trofozoítos em 24 e 48 horas. A dose de 5 mg/mL inativou 100% dos trofozoítos em 72 horas. Os cistos foram inativados na concentração de 40 mg/mL após 24 horas de exposição ao extrato. O efeito citotóxico do extrato foi avaliado sobre células VERO e HCE através do ensaio MTT. O extrato não causou efeito citotóxico significativo nas concentrações 0,312, 0,625, 1,25 e 2,5 mg/mL sobre as células HCE e nas concentrações 2,5 e 5 sobre as células VERO. O ensaio de adesão realizado mostrou que a ligação de Acanthamoeba às células HCE possui comportamento dose-dependente em relação ao extrato de própolis verde. Assim, o presente estudo demonstrou a atividade antiparasitária da própolis verde frente a ambas às formas de Acanthamoeba, mostrando-se uma substância promissora para o desenvolvimento de fármaco alternativo, bem como para utilização na composição de soluções de limpeza de lentes de contato ou superfícies. Entretanto, mais estudos são necessários para compreender seus mecanismos de ação. / The genus Acanthamoeba comprises protozoa belonging to the group of free-living amoebas and it is widely scattered in nature. These protozoa are known to cause two serious diseases, Granulomatous Amebic Encephalitis in immunocompromised patients and amebic keratitis, especially in immunocompetent contact lens wearers. Green Propolis is a resinous and balsamic substance, known in alternative medicine because of its several biological activities. In this study we evaluated the amoebicide activity of an aqueous extract of propolis against trophozoites and cysts of A. castellanii. At concentrations of 10 and 20 mg/mL, the extract was able to inactivate 100% of trophozoites within 24 and 48 hours. The dose of 5 mg/mL inactivated 100% of trophozoites within 72 hours. The cysts were inactivated at a concentration of 40 mg/mL after 24 hours of exposure to the extract. The cytotoxic effect of the extract was evaluated on VERO and HCE cells by MTT assay. The extract had no significant cytotoxic effect at concentrations of 0.312, 0.625, 1.25 and 2.5 mg/ml about HCE cells and at concentrations of 2.5 and 5 on VERO cells. The adhesion test performed showed that the attachment of Acanthamoeba to HCE cells have dose-dependent behavior in relation to the propolis extract. Thus, this study demonstrated the antiparasitic activity of propolis against both forms of Acanthamoeba and proved to be a promising substance for the development of an alternative drug, as well as its use in the formulation of cleaning solutions for contact lenses or surfaces. However, more studies are needed to understand their mechanisms of action.

Kidney disease remains a public health problem worldwide, where there is an increase in the number of incidence of Acute Kidney Injury (AKI) in hospitalized patients. The AKI is characterized by an abrupt decrease in renal function, resulting in the inability of the kidneys to perform itÂs basics functions. The Ischemia/Reperfusion (I/R) injury can be defined as all changes resulting from the deprivation and the re-establishment of the oxygen supply to tissues and organs. It is a complex process that results in the production of reactive oxygen species (ROS) and oxidative stress damage. The Brazilian Red Propolis is a complex mixture collected and produced by Apis mellifera bees, and seems to be promising in this context, attenuating the oxidative and nephrotoxic effect in the kidney. This experimental study aims to replicate and standardize a framework of AKI by Ischemia/reperfusion (I/R) in rats, and analyze the possible protective renal effects of Red Propolis Alcohol Extract (RPAE) at a dose of 150mg/kg on markers and pathological variables. Wistar rats, adult males, were divided into 4 groups, using an induction and treatment regimen. We evaluated biochemical parameters indicative of renal function (creatinine, urea, creatinine clearance) tubular function (FENa+ and FEK+), oxidative profile through MDA (malondialdehyde) and activity of antioxidant enzyme GSH, in addition to histological analysis and immunohistochemistry. The RPAE significantly altered almost all parameters investigated. The results demonstrated the protective effect of the extract in the dose used against the nephrotoxicity: decreased serum levels of creatinine (1.8  0.5 vs 2,7Â0,9) and urea (181.1  65.6 vs 274,3Â91,81), reversed the increase in FENa+ (0,58Â0,30 vs 1,03Â0,39) and FEK+ (64,74Â52,44 vs 134,4Â54,94), reversed the decrease of creatinine clearance (0,41Â0,14 vs 0,073Â0,048), decreased MDA levels (90,22Â20,82 vs 133,9Â23,36) and increased GSH (1784Â297,4 vs 1267Â229,5), decreased the rate of acute tubular necrosis (2,0Â0,7 vs 3,6Â0,5), increased the expression of eNOS (2,20,4 vs 0,60,5) and Heme-oxygenase (2,60,5 vs 1,40,5). Therefore, occurred protection of renal function, protection of the tubular damage and oxidative stress. These results describe for the first time the effect of Red Propolis on a model of AKI induced by I/R, suggesting the protective effect of the extract against this type of injury. / As doenÃas renais apresentam um problema de saÃde pÃblica mundial, aonde hà um aumento nos nÃmeros de incidÃncia de LesÃo Renal Aguda (LRA) em pacientes hospitalizados. A LRA caracteriza-se por uma reduÃÃo abrupta da funÃÃo renal, resultando na incapacidade dos rins em exercer suas funÃÃes bÃsicas. A lesÃo por isquemia/reperfusÃo (I/R) pode ser definida como as alteraÃÃes resultantes da privaÃÃo seguida do re-estabelecimento do fornecimento de oxigÃnio para tecidos e ÃrgÃos. à um processo complexo, que resulta na produÃÃo espÃcies reativas de oxigÃnio (EROs) e dano por estresse oxidativo. A PrÃpolis Vermelha brasileira à uma mistura complexa coletada e produzida pelas abelhas Apis mellifera, e parece ser promissor nesse contexto, atenuando assim o efeito oxidativo e nefrotÃxico no rim. Este estudo experimental tem como objetivo reproduzir e padronizar um quadro de LRA por Isquemia/ReperfusÃo (I/R) em ratos, e analisar os possÃveis efeitos protetores renais do Extrato AlcoÃlico de PrÃpolis Vermelha (EAPV) na dose de 150mg/kg, sobre os marcadores e variÃveis desse quadro patolÃgico. Foram utilizados ratos Wistar, adultos machos, divididos em 4 grupos, utilizado um esquema de induÃÃo e de tratamento. Foram avaliados os parÃmetros bioquÃmicos indicativos da funÃÃo renal (creatinina, ureia, Clearence de creatinina) funÃÃo tubular (FENa+ e FEK+), o perfil oxidativo atravÃs do MDA (Malonaldeido) e atividade da enzima antioxidante GSH, alÃm da anÃlise histolÃgica e imunohistoquÃmica. O EAPV alterou significativamente quase todos os parÃmetros investigados. Os resultados demonstraram efeito protetor do extrato na dose de utilizada diante dos parÃmetros de nefrotoxicidade: diminuiu os nÃveis sÃricos creatinina (1,8Â0,5 vs 2,7Â0,9) e urÃia (181,1Â65,6 vs 274,3Â91,81), reverteu o aumento da FENa+ (0,58Â0,30 vs 1,03Â0,39) e da FEK+(64,74Â52,44 vs 134,4Â54,94), reverteu a diminuiÃÃo do clearence de creatinina (0,41Â0,14 vs 0,073Â0,048), diminuiu os nÃveis de MDA (90,22Â20,82 vs 133,9Â23,36) e aumentou o de GSH (1784Â297,4 vs 1267Â229,5), diminuiu o Ãndice de necrose tubular aguda (2,0Â0,7 vs 3,6Â0,5) a aumentou a expressÃo de eNOS (2,20,4 vs 0,60,5) e Heme-oxigenase (2,60,5 vs 1,40,5). Portanto, ocorreu proteÃÃo da funÃÃo renal, do dano tubular e do estresse oxidativo. Estes resultados relatam pela primeira vez o efeito da PrÃpolis Vermelha sobre um modelo de LRA induzido por I/R, demonstrando o efeito protetor do extrato na LRA.

A prÃpolis, produto de apiÃrios comercializado em paralelo ao mel, Ã um material resinoso de consistÃncia viscosa elaborado pelas abelhas que coletam matÃria-prima de diversas partes de plantas como brotos, cascas e exsudatos de Ãrvores. O presente trabalho teve como objetivo a investigaÃÃo fitoquÃmica de uma amostra de prÃpolis de Passa Quatro â MG, onde foram isolados sete constituintes: o Ãcido (E)-3-(4-(3-fenilpronanoiloxi)-3,5-bis(3-metilbut-2-enil) acrÃlico (PRO-1), o Ãcido 3,5-diprenil-4-hidroxicinÃmico (PRO-2), uma mistura de flavonÃis (Ramnocitrina e Eupalitina) (PRO-3) em uma proporÃÃo de 34,5% e 65,5%, respectivamente; os triterpenos lupeol (PRO-4), a mistura de α,β-amirina (PRO-5), um flavonÃide, a acacetina (PRO-6) e o Ãcido 3-prenil-4-hidroxinÃmico (PRO-7). A elucidaÃÃo estrutural das substÃncias isoladas foi realizada atravÃs do uso de tÃcnicas espectromÃtricas como infravermelho (IV), espectrometria de massas (EM e EM-IES) e ressonÃncia magnÃtica nuclear de hidrogÃnio (RMN 1H) e carbono-13 (RMN 13C), incluindo tÃcnicas bidimensionais (COSY, HSQC E HMBC) e comparaÃÃo com dados descritos da literatura. / Propolis, a product marketed in parallel apiaries honey is a viscous resin material prepared by bees that collect raw material from different parts of plants such as buds, bark and tree exudates. The present study aimed to phytochemical investigation of a sample of propolis Passa Quatro - MG, where seven constituents were isolated: the (E)-3-(4-(3-phenylenylpronanoyloxy)-3,5-bis(3-methylbut-2-enyl)acrylic acid (PRO-1), the 3,5-diprenyl-4-hydroxycinnamic acid (PRO-2), a mixture of flavonols (Ramnocitrin and Eupalitin) (PRO-3) in a ratio of 34 5% and 65.5 % respectively; the triterpene lupeol (PRO-4), the mixture of α,β-amyrin (PRO-5), a flavonoid, a acacetin (PRO-6) and the 3-prenyl-4-hydroxycinnamic (PRO-7) . The structural elucidation of the isolated compounds was performed by using spectroscopic techniques such as infrared (IR), mass spectrometry (MS and ESI-MS) and nuclear magnetic resonance of hydrogen (1H NMR) and carbon-13 (13C-NMR), techniques including two dimensional (COSY, HSQC and HMBC) and comparison with the data described in the literature.