Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4019_1.pdf: 511958 bytes, checksum: 744297095eb58a54dd383184bf6e315b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Este trabalho teve como objetivo: estudar, em ratos jovens, os efeitos da ingestão de Nutri Whey Protein® sobre alguns metabólitos e na composição corporal dos animais, como também em substituição à proteína convencional. A dissertação inclui dois artigos: um de revisão da literatura e outro original. O primeiro, composto por uma revisão sistemática da literatura, em periódicos especializados impressos e eletrônicos, onde identificou-se que é idéia corrente entre os praticantes de exercício físicos que é necessário consumir mais nutrientes do que o recomendado sendo destacado o consumo do whey protein. No segundo artigo, 108 ratos, com 60 dias de idade foram alimentados com três dietas: padrão (com 17% de proteínas) e suplementadas com 5 e 10% de whey protein (ambas com 22% de proteínas); e submetidos ou não ao exercício (sedentários, natação sem e com carga), divididos em nove grupos (n=12): S, sedentário-dieta padrão; E, exercitado-dieta padrão; EC, exercitado com carga-dieta padrão; S-5, sedentário-dieta suplementada com 5% de whey protein; E-5, exercitado-dieta suplementada com 5% de whey protein; EC-5, exercitado com carga-dieta suplementada com 5% de whey protein; S-10, sedentário-dieta suplementada com 10% de whey protein; E-10, exercitado-dieta suplementada com 10% de whey protein; EC-10, exercitado com carga-dieta suplementada com 10% de whey protein. Determinou-se: ganho de peso, ingestão alimentar, gordura da carcaça, uréia, creatinina, alanina (ALT) e aspartato aminotransferase (AST). Resultados: Tanto o exercício quanto a suplementação promoveram aumento significativo no consumo alimentar sendo mais pronunciado nos grupos exercitados com carga. Houve alteração nos pesos dos exercitados com carga (EC, EC5 e EC10), que se apresentaram significativamente menores que os demais grupos. Ocorreu interação entre a dieta e o exercício no sentido de diminuição no ganho de peso. No caso da gordura coporal os grupos E, E5 e E10, apresentaram aumento significativo, independentemente da dieta consumida. EC5 e EC10 apresentaram uma elevação significativa na concentração sérica da uréia (U) quando comparados ao grupo S, onde exercício e dieta interferiram significativamente no aumento da uréia. Quanto à creatinina (CR) foi verificado que as dietas suplementadas (5% e 10%) promoveram aumento significativo neste metabólito, independentemente da intensidade do exercício executado. A AST apresentou aumento significativo em todos os grupos submetidos ao exercício com carga (EC, EC5 e EC10), intensificado pela suplementação de 10% do whey protein. No caso da ALT, o comportamento em relação ao exercício físico foi semelhante nas três dietas, verificando-se aumento significativo nos grupos exercitados com carga (EC, EC5 e EC10) em comparação aos demais. Os resultados levam a concluir que: é de suma importância, para praticantes de atividades físicas, a ingestão de uma alimentação adequada; faz-se necessária a revisão do conceito de suplementos, como também alertar sobre os que apresentam risco ou ineficiência, devendo-se respeitar uma ingestão até 2,0g de proteína/kg de peso corporal/dia. É imprescindível a fiscalização, regulação da comercialização e publicidade dos suplementos pelo Ministério da Saúde, bem como a intervenção do nutricionista na prescrição e acompanhamento do seu uso. O whey protein foi pouco efetivo na melhoria da composição corporal, sendo contra-indicado para sedentários. Quanto aos parâmetros bioquímicos, tanto a suplementação quanto o exercício podem ter promovido um desequilíbrio no metabolismo, podendo causar danos à saúde

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8747_1.pdf: 869213 bytes, checksum: b4559aea1c1eb72f0c0ad9f8f7efa773 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Com o objetivo de avaliar o perfil inflamatório de hipertensas, foi estudada, no período de 07 de agosto a 02 de setembro de 2006, uma amostra de 99 mulheres &#8805;25 e &#8804;65 anos, de um hospital da rede pública do Estado de Pernambuco. O estudo foi do tipo série de casos, 36 mulheres hipertensas constituíram o grupo-caso, e 63 mulheres normotensas o grupo de comparação. Foram investigadas variáveis demográficas, socioeconômicas, bioquímicas, antropométricas, clínicas, dietéticas e outros fatores de risco (tabagismo, alcoolismo, atividade física). A idade média da amostra é de 50 anos e o nível de instrução 2o grau completo. As variáveis Pressão Arterial Sistólica/Pressão Arterial Diastólica, glicose e Proteína C - Reativa Ultra Sensível apresentaram distribuição assimétrica. Os níveis plasmáticos de Proteína C - Reativa Ultra Sensível nos pacientes hipertensos, estimados pela mediana, foram iguais a 1,75mg/L. O nível de Proteína C - Reativa Ultra Sensível nos pacientes normotensos, estimado pela mediana, foi igual a 1,53mg/L. Idade, níveis elevados de Lipoproteína de Baixa Densidade, colesterol total e circunferência abdominal aumentada se mostraram associados à hipertensão (p <0,05). Apesar do baixo consumo de vegetais, o de dois legumes (berinjela e pepino) se mostrou associado à pressão arterial. O perfil inflamatório, avaliado pela Proteína C - Reativa Ultra Sensível, não mostrou ser um possível fator de risco para essa população, embora 75% dos hipertensos apresentassem concentrações de Proteína C - Reativa Ultra Sensível >1mg/L. Os dados são indicativos da necessidade de um programa de intervenção primária mais efetivo, relativo aos fatores de risco avaliados na população estudada, principalmente voltado para o grupo sem diagnóstico de hipertensão. O papel da Proteína C - Reativa Ultra Sensível como um fator de risco para pacientes portadores de hipertensão merece ser melhor investigado

O principal problema no desenvolvimento de vacinas de segunda geração é a baixa resposta contra os antígenos, geralmente extremamente purificados. Isto tem levado à busca de novos adjuvantes que sejam mais eficientes e menos tóxicos. Este trabalho objetivava o estudo de uma proteína de choque térmico de Mycobacterium leprae - 18kDa-hsp - recombinante, produzida em levedura, veiculada em lipossomos, como modelo de proteína carregadora para antígenos fracos. Além de um estudo de estabilização de lipossomos por liofilização. A 18kDa-hsp apresenta certas características peculiares que levaram ao desenvolvimento de um método de dosagem próprio e extensível a outras proteínas com baixo teor em aminoácido cromóforos. Tendo uso potencial como proteína carregadora, a 18kDa-hsp é estável, suportando bem aquecimento, liofilização, acilação e associação com lipossomos de fosfolípides, sem perda significativa de sua atividade. Estudos paralelos de estabilização de lipossomos unilamelares mostraram que se pode usar trealose como crioprotetora no processo de liofilização-reidratação, sem perdas significativas do conteúdo dos lipossomos e com manutenção das estruturas das vesículas. Finalmente, o sistema lipossomos-18kDa-hsp mostra-se promissor como um sistema estável para veiculação de imunógenos fracos. / The major problem on development of second generation vaccines is the poor response against some immunogens. It has leading an intense research to find other substances non toxic and more efficient on enhancement of the immunological response. The aim of this work was the study of a heat-shock protein from Mycobacterium leprae - 18kDa-hsp - produced in yeast and vehiculated in liposomes, as a protein carrier model for weak immunogens. Furthermore, there was a study on stabilization of liposomes by lyophilization. The peculiar protperties of the 18kDa-hsp lead us to develop a new method for quantification that can be extended to other proteins with low chromophore content. Potentially a carrier protein, the 18kDa-hsp is very stab1e: it has no significant loss of its antigenic reactivity when heated, lyophilized, acylated and associated to liposomes. Parallel studies on liposomes stabilisation show trehalose as a good cryoprotector. The sugar can avoid the leakage of the entrapped marker (protein) and maintain the vesicles structures on the lyophilisation-rehydration processo Finally, the system liposomes-18kDa-hsp is promising for vehiculation of weak immunogens.

Orientador: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Jean leandro dos Santos / Banca: Alvaro Takeo Omori / Resumo: O presente trabalho teve como principal objetivo es tudar a atividade catalítica de soroalbumina bovina (BSA) em reações formadoras de uma nova ligação C-C: Reações aldólica, de Henry e Morita-Baylis-Hillman (MBH). Em todos os casos a BSA atuou como catalisador, visto que quando as rea ções foram realizadas sem sua presença, não houve formação dos produtos desejados . Os rendimentos obtidos para as reações aldólica (37%), Henry (80%) e MBH ( 73%), variaram de bons a moderados e não foi observada enantiosseletividade para nenhuma das reações estudadas. As soroalbuminas são proteínas que forma m muita emulsão dificultando os processos downstream na separação dos produtos e materiais de partida. Visando minimizar este inconveniente, a BSA foi sub metida à imobilização em M- CLEA ( magnetic cross-linking enzyme aggregates ) utilizando nanopartículas magnéticas de óxido de ferro. Nestes casos, o bioca talisador pôde ser facilmente retirado do meio reacional com aplicação de um camp o magnético externo. Esta metodologia afetou diretamente no rendimento da rea ção de Henry, passando de 80% para 89%. Porém, para as outras reações a melho ria no rendimento não foi tão expressiva. A imobilização também não foi eficaz pa ra o aumento dos excessos enantioméricos. Até o momento para a reação de MBH com os substratos utilizados, não há relatos na literatura para a síntese do adut o desejado catalisado pela BSA. Sendo assim, optamos por realizar um planejamento f atorial completo dessa reação visando otimizar as condições reacionais bem como o s rendimentos. As variáveis estudadas foram: temperatura, concentração do bioca talisador e condição do biocatalisador (livre ou imobilizado). Os resultado s obtidos mostraram que a variável com maior influência na reação, é a concentração do biocatalisador. A conversão obtida passou de 30% para 40% utilizando 2,2... / Abstract: This work aimed to study the catalytic activity of bovine serum albumin (BSA) in reactions that form a new C-C bond: aldol reactions, Henry and Morita-Baylis-Hillman (MBH). In all cases BSA served as the catalyst, whe reas when the reactions were carried out without their presence there was no for mation of the desired products. The yields obtained for aldol reactions (37%), Henr y (80%) and MBH (73%), ranged from good to moderate enantioselectivity and was no t observed for any of the studied reactions. The serum albumins are proteins that for m the much emulsion difficulting downstream processes in separation of the products and starting materials. To minimize this inconvenience, the BSA was subjected to immobilization in M-CLEA (magnetic cross-linking enzyme aggregates) using ma gnetic nanoparticles of iron oxide. In these cases the biocatalyst could be easi ly removed from the reaction medium by applying an external magnetic field. This methodology directly affect the yield of the Henry reaction, from 80% to 89%. Howev er, for other reactions the improvement of yields was less pronounced. The immo bilization was also not effective for improving the enantiomeric excess. So far for the MBH reaction with the worked substrates, there are no reports in the lite rature for the synthesis of the desired adduct catalyzed by BSA. So we decided to s tudy a full factorial design of this reaction to optimize the reaction conditions a nd yields. The variables studied were: temperature, the biocatalyst concentration an d biocatalyst conditions (free and immobilized). The concentration of biocatalyst was the major factor with interference in all reactions. The conversion increased from 30% to 40% using 2.2 μ mol of BSA. Then we perform a study of catalyst concentration t o optimize this parameter. The conversion increased to 73% when they were used 3.7 μ mol immobilized biocatalyst. To evaluate the retention... / Mestre

Orientador: Lucilene Arilho Ribeiro Bicudo / Resumo: A Síndrome de Microdeleção 22q11 (SD22q11), causada por uma deleção de aproximadamente 3Mb na região 22q11, apresenta uma frequencia média de 1 em 4000 a 9800 nascidos vivos sendo considera a síndrome de microdeleção mais frequente e a segunda causa mais comum de atraso no desenvolvimento e de doença congênita grave, após a síndrome de Down. De acordo com o tamanho e a localização da deleção, diferentes genes podem ser afetados e o principal gene considerado como responsável pelos sinais clássicos da síndrome é o TBX1. A SD22q11 caracteriza-se por um espectro fenotípico bastante amplo, com efeitos pleiotrópicos que resultam no acometimento de praticamente todos os órgãos e/ou sistemas, altamente variáveis com mais de 180 sinais clínicos já descritos, tanto físicos como comportamentais. Nesse trabalho aplicamos ferramentas de bioinformática com o intuito de descobrir padrões clínicos e sistêmicos da deleção 22q11, classificando casos sindrômicos em típicos e atípicos e estudando o impacto da deleção em redes de interação proteína-proteína (PPI). Para avaliação dos sinais clínicos que pudessem diferenciar pacientes sindrômicos foi aplicado uma metodologia baseada em aprendizado de máquina para classificar os casos em típico e atípico de acordo com os sinais clínicos através do algoritmo J48 (um algoritmo de árvore de decisão). As árvores de decisão selecionadas foram altamente precisas. Sinais clínicos como fissura oral, insuficiência velofaríngea, atraso no desenvolvimento de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The 22q11 Microdeletion Syndrome (22q11DS), caused by a deletion of approximately 3Mb in the 22q11 region, has an average frequency of 1 in 4000 to 9800 live births and is considered the most frequent microdeletion syndrome and the second most common cause of developmental delay and severe congenital disease after Down syndrome. According to the size and location of the deletion, different genes may be affected and the main gene considered to be responsible for the classic signs of the syndrome is TBX1. 22q11DS is characterized by a very broad phenotypic spectrum with pleiotropic effects that result in the involvement of variable organs and/or systems with more than 180 clinical signs already described, both physical and behavioral. In this work, we applied bioinformatics tools to detect clinical and systemic patterns of 22q11 deletion, classifying typical and atypical syndromic cases, and studying the impact of deletion on protein-protein interaction (PPI) networks. To evaluate clinical signs that could differentiate syndromic patients, a machine-learning based methodology was used to classify the cases into typical and atypical according to the clinical signs through the algorithm J48 (a decision tree algorithm). The selected decision trees were highly accurate. Clinical signs such as oral fissure, velopharyngeal insufficiency, speech and language development delay, specific learning disability, behavioral abnormality and growth delay were indicative for case classification... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais comum no mundo. Apesar dos avanços nos tratamentos convencionais, aproximadamente dois terços dos pacientes com CCR são submetidos à cirurgia potencialmente curativa. Entretanto, grande parte desses pacientes evolui mal, apresentando recidivas e/ou metástases. A busca de novos alvos moleculares para a terapia do CCR revelou a proteína celular Prion (PrPC) como um possível candidato. Trabalhos recentes sugerem participação direta ou indireta de PrPC no crescimento de tumores, na formação de metástases, na composição de complexos multiproteicos e na indução de vias de sinalização envolvidas em diversos processos biológicos, como proliferação. Além disso, PrPC foi descrito como um importante modulador do crescimento de tumor colorretal. Resultados prévios mostraram que a interação da proteína PrPC com a proteína HSP70/HSP90 Organizing Protein (HOP) induz proliferação em glioblastomas. HOP é uma proteína predominantemente citoplasmática, podendo também ser secretada associada às vesículas extracelulares. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o papel do complexo PrPC-HOP e das vesículas extracelulares no desenvolvimento e progressão dos tumores colorretais. Os nossos resultados mostram que HOP induziu migração e invasão em linhagens de CCR de maneira dependente de PrPC, uma vez que o uso do peptídeo sem atividade que compete pelo sítio ligação de HOP a PrPC inibiu estes processos. Além disso, nossos dados apontaram que o aumento de migração e invasão das células de CCR induzida pela interação PrPC-HOP é mediada pela ativação da via ERK1/2. Os achados in vitro estimularam a avaliação do perfil de expressão de PrPC e HOP por imuno-histoquímica em tecidos de pacientes com diferentes tipos de tumores colorretais. Nossos resultados sugeriram que essas proteínas são importantes no início do desenvolvimento tumoral e na transição de adenomas para adenocarcinomas, não havendo correlação entre a presença de HOP e/ou PrPC com metástase, linfonodos acometidos, estadiamento, sobrevida ou região tumoral versus tecido normal. Em relação ao papel das vesículas extracelulares na progressão dos tumores colorretais, nossos resultados mostraram que linhagens celulares que apresentam padrões parecidos de agressividade tumoral podem ter perfis de secreção de proteínas e vesículas extracelulares bastante diferentes, induzindo, portanto, processos biológicos com intensidades distintas. O meio condicionado e as vesículas extracelulares da linhagem WiDr apresentaram maior potencial de indução de migração quando comparado com a linhagem HCT8. Além disso, a modulação negativa da proteína VPS4, uma das responsáveis pela formação dos corpos multivesiculares, mostrou-se uma abordagem interessante no estudo da secreção de vesículas por células de CCR, uma vez que o dominante negativo de VPS4 promoveu diminuição do cargo proteico e da secreção de vesículas extracelulares, redução da proliferação celular e do efeito indutor do processo de migração na linhagem WiDr. Assim, em conjunto, o presente trabalho indicou que o complexo PrPC-HOP pode ser um bom alvo terapêutico nos processos de migração e invasão em CCR. Ainda, essas proteínas se mostraram importantes nos estágios iniciais da formação dos tumores. A modulação da secreção de vesículas extracelulares pode contribuir para retardar a progressão dos tumores colorretais. / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer in the world. Despite improvements in conventional treatments, approximately two-thirds of CRC patients undergo potentially curative surgery. However, most of these patients evolve poorly, showing recurrence and/or metastasis. Search of new molecular targets for CRC therapy revealed the cellular protein Prion (PrPC) as a putative candidate. Recent studies have shown that PrPC exhibit direct or indirect participation in tumor growth, formation of metastasis, composition of multiprotein complexes and induction of signaling pathways involved in many biological processes such as proliferation. Moreover, PrPC has been described as an important modulator of colorectal tumor growth. Previous findings showed that the interaction between PrPC and its ligand HSP70/90 heat shock organizing protein (HOP) induces gliobastoma proliferation. It is well known that HOP localizes mainly in the cytoplasm but HOP is also secreted associated with extracellular vesicles. In this way, the present study sought to evaluate the role of PrPC-HOP complex and extracellular vesicles in the development and progression of CRC. We demonstrate that HOP induces the migration and invasion of CRC cell lines in a PrPC-dependent manner because the use of HOP peptide, which is able to bind to PrPC, blocking PrPC-HOP complex formation, inhibited the migration and invasion processes. In addition, our data showed that the enhancement of migration and invasion induced by PrPC-HOP interaction is mediated by ERK1/2 pathway activation. These in vitro results lead us to evaluate the PrPC and HOP expression by immunohistochemistry in tissues from patients with different tumor types. Our data showed that these proteins could be important for the initial steps of tumor development, represented by the transition from adenoma to adenocarcinoma. No correlation was found among HOP and/or PrPC expression and metastasis, lymph node involvement, staging, survival or tumor area versus normal tissue. Regarding the role of extracellular vesicles in the progression of colorectal tumors, our results showed that cell lines exhibiting similar aggressive tumor behavior can have a different protein secretion pattern and a distinct profile of extracellular vesicles release, which could induce biological process with different intensities. The conditioned medium and the extracellular vesicles derived from WiDr cell line showed a higher potential to induce migration than HCT8 cell line. Moreover, the negative modulation of VPS4, one of the proteins responsible for multivesicular body formation, showed to be an interesting approach in the study of extracellular vesicles secretion secreted by CRC cells; the negative dominant of VPS4 promoted in the WiDr cell line a reduction in the protein cargo and secretion of the extracellular vesicles, a decrease of cell proliferation and induction of migration process. Therefore, taken together, our data highlights that PrPC-HOP complex can be considered a new therapeutic target in migration and invasion processes of CRC. Moreover, these proteins appeared to be important at onset of tumor formation. The modulation of extracellular vesicles secretion may contribute for delaying the progression of colorectal tumors.

A fome e a subnutrição estão entre os mais devastadores problemas sociais e de saúde pública nos países em desenvolvimento, estando relacionadas a problemas socioeconômicos como pobreza, miséria, baixo nível educacional, ausência de programas de saúde, déficit no saneamento básico e tabus alimentares. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da dieta básica da população de Moçambique (DM) e da renutrição proteica, nos componentes do plexo mioentérico dos segmentos proximal e distal do intestino grosso de ratos Wistar de 21 e 42 dias. Para tanto, os animais foram divididos em sete grupos: o controle, dieta AIN-93G com adição de 20% de caseína (NN21 e NN42); Dieta de Moçambique (DM21 e DM42); Dieta Moçambique suplementada, acrescida de 20% de caseína (NM21 e NM42) e o grupo renutrido (RM42), animais do grupo DM21 que, a partir do 22º dia, receberam a dieta NM até atingirem 42 dias de vida. As amostras dos segmentos proximal e distal do intestino grosso, foram coletadas e submetidas às técnicas histoquímicas da NADH-diaforase e NADPH-diaforase e imunohistoquímica (ChAT, Substância P e VIP), para avaliação qualitativa e quantitativa dos neurônios do plexo mioentérico. A estrutura, ultraestrutura e morfometria dos componentes ganglionares e da parede e mucosa intestinal, foram avaliadas com o uso de técnicas rotineiras de histologia (HE, Picro-sírius e Weigert) e de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e, dependendo do parâmetro a ser avaliado, utilizados dois ou três fatores (grupo, idade e segmento do intestino). Quando necessário, comparações múltiplas pelos métodos de Bonferroni ou Tukey foram aplicadas, com nível de significância p&lt;0,05. A análise qualitativa mostrou que todos os grupos experimentais, independentemente da idade (21 e 42 dias) e segmento intestinal (proximal e distal), apresentaram as camadas histológicas e seus constituintes preservados. Os animais do grupo DM apresentaram os menores valores para: peso e comprimento; dados metabólicos; área da parede e mucosa intestinal; comprimento e área do intestino. A renutrição não foi capaz de recuperar esses parâmetros. As fibras colágenas do tipo I predominaram no grupo DM e as do tipo III no grupo RM. As fibras elásticas não foram detectadas na cápsula dos gânglios mioentéricos do grupo DM aos 21 e 42 dias. A imunorreatividade dos neurônios mioentéricos à ChAT, SP e VIP, mostrou-se fraca no grupo DM. Sob o aspecto ultraestrutural, o grupo DM exibiu um atraso no desenvolvimento celular. A densidade de neurônios reativos à NADH-d e NADPH-d foi maior em todos os grupos de 21 em comparação aos grupos de 42 dias, independente do segmento. O grupo DM apresentou uma densidade numérica neuronal maior em relação aos outros grupos, independente do segmento e idade. Por outro lado, quando se avaliou a área do perfil neuronal, os grupos de 42 dias exibiram uma área maior em relação aos animais de 21 dias, independente do segmento. Entre os grupos da mesma faixa etária, independente do segmento, a área neuronal dos animais foi maior no grupo NN, e menor no grupo DM. O grupo RM não recuperou esse parâmetro. A estimativa do número total de neurônios da NADH-d aumentou com a idade em todos os grupos. Considerando a mesma faixa etária, não foram detectadas diferenças entre os grupos. Já a estimativa neuronal para a NADPH-d foi maior no grupo DM, independentemente da idade. / Hunger and malnutrition are among the most devastating social and public health problems in developing countries, being related to socioeconomic problems such as poverty, misery, poor education, absence of health programs, deficit in basics sanitation and food taboos. The aim of the present study was to evaluate the effects of Mozambique populations regular diet (DM) and the protein refeeding in the components of the myenteric plexus of proximal and distal segments of the large intestine of Wistar rats 21 and 42 days old. Animals were divided into seven groups: control, AIN-93G diet with 20% casein addition (NN21 and NN42); Diet Mozambique (DM21 and DM42) and Diet Mozambique supplemented with 20% casein (NM21 and NM42) and re-nourished group (RM42), animals from DM21 group, 22 days old, that received the NM diet until they reach 42 days old. Proximal and distal segments samples of the large intestine were collected and submitted to NADH-diaforase and NADPH-diaforase histochemical techniques and to immunohistochemistry (ChAT, Substance P and VIP), in order to demonstrate myenteric neurons. The structure and ultra-structure of ganglion components and intestinal wall were assessed using routine histology techniques (HE, Picrosirius and Weigert) and scanning and transmission electron microscopy. Data was analyzed by the analysis of variance (ANOVA) and, depending on the parameter to be assessed, two or three factors were used (group, age and bowel segment). When necessary, multiple comparisons by Bonferroni or Tukey methods were applied, considering p &lt;0.05 as significance level. Qualitative analysis showed that all groups, regardless of age (21 and 42 days), and intestinal segments (proximal and distal) showed histological layers and their constituents preserved. RM group did not recovered this parameter. DM group animals showed the smallest values for the following parameters: weight and length; metabolic data; intestinal mucosa and wall area; intestine length and area. Refeeding did not recovered these parameters. Type I collagen fibers were most frequent in DM group, whereas type III prevailed in RM group. Elastic fibers were not detected in the capsule of myenteric ganglion of DM group at 21 and 42 days. DM group showed low immune reactivity of myenteric neurons to ChAT, SP and VIP. As regards to ultrastructural aspects, DM group showed slow cellular development. Besides, NADH-d and NADPH-d analysis exhibited increased numeric neuronal density in 21 days old animals compared to 42 days old animals, despite segments. DM group showed higher neuronal numeric density than other groups, regardless of segment and age. On the other hand, when evaluating the neuronal profile area, 42 days groups showed greater area than 21 days animals, with both techniques and regardless of segment. Furthermore, DM group showed significantly lower neuronal area compared to the other groups, regardless of intestinal segment. RM group did not recovered this parameter. Total number of neurons directly increased according to age in all groups. No difference was found between groups of same age. NADPH-d neuronal estimative was higher in DM group, regardless of age.

O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais comum no mundo. Apesar dos avanços nos tratamentos convencionais, aproximadamente dois terços dos pacientes com CCR são submetidos à cirurgia potencialmente curativa. Entretanto, grande parte desses pacientes evolui mal, apresentando recidivas e/ou metástases. A busca de novos alvos moleculares para a terapia do CCR revelou a proteína celular Prion (PrPC) como um possível candidato. Trabalhos recentes sugerem participação direta ou indireta de PrPC no crescimento de tumores, na formação de metástases, na composição de complexos multiproteicos e na indução de vias de sinalização envolvidas em diversos processos biológicos, como proliferação. Além disso, PrPC foi descrito como um importante modulador do crescimento de tumor colorretal. Resultados prévios mostraram que a interação da proteína PrPC com a proteína HSP70/HSP90 Organizing Protein (HOP) induz proliferação em glioblastomas. HOP é uma proteína predominantemente citoplasmática, podendo também ser secretada associada às vesículas extracelulares. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o papel do complexo PrPC-HOP e das vesículas extracelulares no desenvolvimento e progressão dos tumores colorretais. Os nossos resultados mostram que HOP induziu migração e invasão em linhagens de CCR de maneira dependente de PrPC, uma vez que o uso do peptídeo sem atividade que compete pelo sítio ligação de HOP a PrPC inibiu estes processos. Além disso, nossos dados apontaram que o aumento de migração e invasão das células de CCR induzida pela interação PrPC-HOP é mediada pela ativação da via ERK1/2. Os achados in vitro estimularam a avaliação do perfil de expressão de PrPC e HOP por imuno-histoquímica em tecidos de pacientes com diferentes tipos de tumores colorretais. Nossos resultados sugeriram que essas proteínas são importantes no início do desenvolvimento tumoral e na transição de adenomas para adenocarcinomas, não havendo correlação entre a presença de HOP e/ou PrPC com metástase, linfonodos acometidos, estadiamento, sobrevida ou região tumoral versus tecido normal. Em relação ao papel das vesículas extracelulares na progressão dos tumores colorretais, nossos resultados mostraram que linhagens celulares que apresentam padrões parecidos de agressividade tumoral podem ter perfis de secreção de proteínas e vesículas extracelulares bastante diferentes, induzindo, portanto, processos biológicos com intensidades distintas. O meio condicionado e as vesículas extracelulares da linhagem WiDr apresentaram maior potencial de indução de migração quando comparado com a linhagem HCT8. Além disso, a modulação negativa da proteína VPS4, uma das responsáveis pela formação dos corpos multivesiculares, mostrou-se uma abordagem interessante no estudo da secreção de vesículas por células de CCR, uma vez que o dominante negativo de VPS4 promoveu diminuição do cargo proteico e da secreção de vesículas extracelulares, redução da proliferação celular e do efeito indutor do processo de migração na linhagem WiDr. Assim, em conjunto, o presente trabalho indicou que o complexo PrPC-HOP pode ser um bom alvo terapêutico nos processos de migração e invasão em CCR. Ainda, essas proteínas se mostraram importantes nos estágios iniciais da formação dos tumores. A modulação da secreção de vesículas extracelulares pode contribuir para retardar a progressão dos tumores colorretais. / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer in the world. Despite improvements in conventional treatments, approximately two-thirds of CRC patients undergo potentially curative surgery. However, most of these patients evolve poorly, showing recurrence and/or metastasis. Search of new molecular targets for CRC therapy revealed the cellular protein Prion (PrPC) as a putative candidate. Recent studies have shown that PrPC exhibit direct or indirect participation in tumor growth, formation of metastasis, composition of multiprotein complexes and induction of signaling pathways involved in many biological processes such as proliferation. Moreover, PrPC has been described as an important modulator of colorectal tumor growth. Previous findings showed that the interaction between PrPC and its ligand HSP70/90 heat shock organizing protein (HOP) induces gliobastoma proliferation. It is well known that HOP localizes mainly in the cytoplasm but HOP is also secreted associated with extracellular vesicles. In this way, the present study sought to evaluate the role of PrPC-HOP complex and extracellular vesicles in the development and progression of CRC. We demonstrate that HOP induces the migration and invasion of CRC cell lines in a PrPC-dependent manner because the use of HOP peptide, which is able to bind to PrPC, blocking PrPC-HOP complex formation, inhibited the migration and invasion processes. In addition, our data showed that the enhancement of migration and invasion induced by PrPC-HOP interaction is mediated by ERK1/2 pathway activation. These in vitro results lead us to evaluate the PrPC and HOP expression by immunohistochemistry in tissues from patients with different tumor types. Our data showed that these proteins could be important for the initial steps of tumor development, represented by the transition from adenoma to adenocarcinoma. No correlation was found among HOP and/or PrPC expression and metastasis, lymph node involvement, staging, survival or tumor area versus normal tissue. Regarding the role of extracellular vesicles in the progression of colorectal tumors, our results showed that cell lines exhibiting similar aggressive tumor behavior can have a different protein secretion pattern and a distinct profile of extracellular vesicles release, which could induce biological process with different intensities. The conditioned medium and the extracellular vesicles derived from WiDr cell line showed a higher potential to induce migration than HCT8 cell line. Moreover, the negative modulation of VPS4, one of the proteins responsible for multivesicular body formation, showed to be an interesting approach in the study of extracellular vesicles secretion secreted by CRC cells; the negative dominant of VPS4 promoted in the WiDr cell line a reduction in the protein cargo and secretion of the extracellular vesicles, a decrease of cell proliferation and induction of migration process. Therefore, taken together, our data highlights that PrPC-HOP complex can be considered a new therapeutic target in migration and invasion processes of CRC. Moreover, these proteins appeared to be important at onset of tumor formation. The modulation of extracellular vesicles secretion may contribute for delaying the progression of colorectal tumors.

A serina/treonina fosfatase do tipo 1 (PP1) é uma enzima ubíqua nas células e nos tecidos das várias espécies em que foi pesquisada e regula vários processos como metabolismo intermediário, processamento de mRNA, transcrição e apoptose. Geralmente a holoenzima PP1 é encontrada como um dímero constituído por uma subunidade catalítica conservada (PP1c) e uma ou mais subunidades reguladoras variáveis. Em mamíferos, já foram identificados mais de 50 polipeptídeos que se associam direta ou indiretamente a PP1c, gerando holoenzimas com localizações celulares e especificidades distintas. Entre estas proteínas estão inibidores citosólicos de PP1c, tais como o inibidor-1 (I-1), o inibidor-2 (I-2) e o inibidor nuclear da PP1 (NIPP-1). Ortólogos do I-2 foram descritos em microorganismos como Saccharomyces cerevisiae e Neurospora crassa. Neste trabalho nós demonstramos que o genoma da ameba social Dictyostelium discoideum possui uma única cópia do gene que codifica um ortólogo do I-2 (DdI-2). Análise através de Northern blot mostrou que o mRNA de DdI-2 é expresso durante o crescimento e ao longo de todo o ciclo de desenvolvimento, com níveis variáveis. Também demonstramos que o gene DdI-2 codifica uma verdadeira proteína inibidora da PP1c uma vez que seu produto recombinante em bactéria é capaz de inibir, com eficácia equivalente, as atividades de fosforilase fosfatase das PP1c recombinantes selvagem (DdPP1c) e mutante (DdPP1cF269C) de D. discoideum e NcPP1c de N. crassa in vitro. A proteína DdPP1cF269C apresenta características distintas da DdPP1c incluindo maior estabilidade, maior atividade de fosforilase fosfatase e maior sensibilidade frente ao inibidor caliculina A. Estas diferenças devem-se a substituição da cisteína conservada da posição 269 por uma fenilalanina, que é verificada na enzima selvagem. DdPP1c e DdPP1cF269C foram também ensaiadas na presença de INc-1L e INc-1 que são ortólogos de I-2 em N. crassa. Ambas as proteínas recombinantes purificadas exibiram efeito inibidor sobre a atividade de fosforilase fosfatase das DdPP1c recombinantes selvagem e mutante, sendo que INc-1 foi um inibidor duas vezes mais eficiente que INc-1L. Este efeito pode ser devido a um segmento de 38 aminoácidos codificado por um íntron em fase que é retido na isoforma INc-1L. Nossos dados indicam ainda que a mutação F269C não afetou a sensibilidade da DdPP1c recombinante a nenhum dos ortólogos de I-2 testados in vitro. Ensaios de duplo-híbrido utilizando a PP1c selvagem e mutante de D. discoideum (DdPP1c e DdPP1cF269C) e de N. crassa (NcPP1c) como iscas e DdI-2 como presa mostraram que estas proteínas interagiram in vivo. Quando a presa era o INc-1L ou INc-1 a interação ocorreu apenas com a NcPP1c, sendo mais forte no caso de INc-1. As regiões de DdI-2 envolvidas na interação física com a DdPP1c foram mapeadas através da expressão de proteínas truncadas no ensaio de duplo híbrido. Os experimentos apontaram que o carbóxi-terminal de ~100 aminoácidos não é essencial para a interação, mas que o somatório das diversas regiões responde pela integridade da interação. / The serine/threonine phosphatase of type-1 (PP1) is a ubiquous enzyme in the cells and tissues from several species studied and regulates numerous processes such as intermediate metabolism, mRNA splicing, transcription, and apoptosis. PP1 holoenzymes consist of a well-conserved catalytic subunit (PP1c) and one or more variable regulatory subunits. In mammals, more than fifty polypeptides that bind PP1c have been identified, originating holoenzymes with distinct cell locations and specificities. These proteins include cytosolic PP1c inhibitors such as inhibitor-1 (I-1), inhibitor-2 (I-2) and nuclear inhibitor of PP1 (NIPP-1). I-2 orthologs have also been described in Saccharomyces cerevisiae and Neurospora crassa. In the present work, we demonstrate that the genome of the social amoeba Dictyostelium discoideum has a single gene encoding for an I-2 ortholog (DdI-2). Northern blot analyses have shown that DdI-2 mRNA is expressed throughout Dictyostelium developmental cycle at variable levels. We also demonstrated that DdI-2 is a true PP1c inhibitor as its recombinant product is capable of inhibiting the phosphorylase phosphatase activity of wild-type PP1c (DdPP1c) and mutant (DdPP1cF269C) of D. discoideum and NcPP1c of N. crassa in vitro. DdPP1cF269C protein presents distint traits including higher stability, phosphorylase phosphatase activity and sensibility to calyculin A than the wild-type. These differences are originated from the replacement of a well conserved cisteine residue by a phenylalanine found in the wild-type. The wild-type and mutant DdPP1c have also been assayed in the presence of INc-1L and INc-1 which are orthologues to I-2 in N. crassa. Both purified recombinant proteins have shown inhibitory effects over phosphorylase phosphatase activities, with INc-1 being twice more potent than INc-1L. This might be due to the presence of an intron retention event in the latter that results in a insertion of 38 aminoacids. Our data also indicate that F269C mutation did not affect DdPP1c sensitivity to inhibition by all the three recombinant I-2 orthologues in vitro. Yeast two-hybrid assays using wild type (DdPP1c) and mutant (DdPP1cF269C) D. discoideum and N. crassa (NcPP1c) PP1c as preys and the putative inhibitor DdI-2 as a bait showed inequivocally that these proteins interacted in vivo. When the prey was INc-1 or INc-1L the interaction occured only with NcPP1c and was stronger with INc-1. The domains of DdI-2 involved in the interaction with DdPP1c were mapped by two-hybrid interaction assays with DdI-2 deleted mutants. These experiments have pointed out that the DdI-2 carboxi-terminus of ~100 aminoacids is not essential for the interaction but that the sum of all regions is responsible for the integrity of the interaction.

A fome e a subnutrição estão entre os mais devastadores problemas sociais e de saúde pública nos países em desenvolvimento, estando relacionadas a problemas socioeconômicos como pobreza, miséria, baixo nível educacional, ausência de programas de saúde, déficit no saneamento básico e tabus alimentares. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da dieta básica da população de Moçambique (DM) e da renutrição proteica, nos componentes do plexo mioentérico dos segmentos proximal e distal do intestino grosso de ratos Wistar de 21 e 42 dias. Para tanto, os animais foram divididos em sete grupos: o controle, dieta AIN-93G com adição de 20% de caseína (NN21 e NN42); Dieta de Moçambique (DM21 e DM42); Dieta Moçambique suplementada, acrescida de 20% de caseína (NM21 e NM42) e o grupo renutrido (RM42), animais do grupo DM21 que, a partir do 22º dia, receberam a dieta NM até atingirem 42 dias de vida. As amostras dos segmentos proximal e distal do intestino grosso, foram coletadas e submetidas às técnicas histoquímicas da NADH-diaforase e NADPH-diaforase e imunohistoquímica (ChAT, Substância P e VIP), para avaliação qualitativa e quantitativa dos neurônios do plexo mioentérico. A estrutura, ultraestrutura e morfometria dos componentes ganglionares e da parede e mucosa intestinal, foram avaliadas com o uso de técnicas rotineiras de histologia (HE, Picro-sírius e Weigert) e de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e, dependendo do parâmetro a ser avaliado, utilizados dois ou três fatores (grupo, idade e segmento do intestino). Quando necessário, comparações múltiplas pelos métodos de Bonferroni ou Tukey foram aplicadas, com nível de significância p&lt;0,05. A análise qualitativa mostrou que todos os grupos experimentais, independentemente da idade (21 e 42 dias) e segmento intestinal (proximal e distal), apresentaram as camadas histológicas e seus constituintes preservados. Os animais do grupo DM apresentaram os menores valores para: peso e comprimento; dados metabólicos; área da parede e mucosa intestinal; comprimento e área do intestino. A renutrição não foi capaz de recuperar esses parâmetros. As fibras colágenas do tipo I predominaram no grupo DM e as do tipo III no grupo RM. As fibras elásticas não foram detectadas na cápsula dos gânglios mioentéricos do grupo DM aos 21 e 42 dias. A imunorreatividade dos neurônios mioentéricos à ChAT, SP e VIP, mostrou-se fraca no grupo DM. Sob o aspecto ultraestrutural, o grupo DM exibiu um atraso no desenvolvimento celular. A densidade de neurônios reativos à NADH-d e NADPH-d foi maior em todos os grupos de 21 em comparação aos grupos de 42 dias, independente do segmento. O grupo DM apresentou uma densidade numérica neuronal maior em relação aos outros grupos, independente do segmento e idade. Por outro lado, quando se avaliou a área do perfil neuronal, os grupos de 42 dias exibiram uma área maior em relação aos animais de 21 dias, independente do segmento. Entre os grupos da mesma faixa etária, independente do segmento, a área neuronal dos animais foi maior no grupo NN, e menor no grupo DM. O grupo RM não recuperou esse parâmetro. A estimativa do número total de neurônios da NADH-d aumentou com a idade em todos os grupos. Considerando a mesma faixa etária, não foram detectadas diferenças entre os grupos. Já a estimativa neuronal para a NADPH-d foi maior no grupo DM, independentemente da idade. / Hunger and malnutrition are among the most devastating social and public health problems in developing countries, being related to socioeconomic problems such as poverty, misery, poor education, absence of health programs, deficit in basics sanitation and food taboos. The aim of the present study was to evaluate the effects of Mozambique populations regular diet (DM) and the protein refeeding in the components of the myenteric plexus of proximal and distal segments of the large intestine of Wistar rats 21 and 42 days old. Animals were divided into seven groups: control, AIN-93G diet with 20% casein addition (NN21 and NN42); Diet Mozambique (DM21 and DM42) and Diet Mozambique supplemented with 20% casein (NM21 and NM42) and re-nourished group (RM42), animals from DM21 group, 22 days old, that received the NM diet until they reach 42 days old. Proximal and distal segments samples of the large intestine were collected and submitted to NADH-diaforase and NADPH-diaforase histochemical techniques and to immunohistochemistry (ChAT, Substance P and VIP), in order to demonstrate myenteric neurons. The structure and ultra-structure of ganglion components and intestinal wall were assessed using routine histology techniques (HE, Picrosirius and Weigert) and scanning and transmission electron microscopy. Data was analyzed by the analysis of variance (ANOVA) and, depending on the parameter to be assessed, two or three factors were used (group, age and bowel segment). When necessary, multiple comparisons by Bonferroni or Tukey methods were applied, considering p &lt;0.05 as significance level. Qualitative analysis showed that all groups, regardless of age (21 and 42 days), and intestinal segments (proximal and distal) showed histological layers and their constituents preserved. RM group did not recovered this parameter. DM group animals showed the smallest values for the following parameters: weight and length; metabolic data; intestinal mucosa and wall area; intestine length and area. Refeeding did not recovered these parameters. Type I collagen fibers were most frequent in DM group, whereas type III prevailed in RM group. Elastic fibers were not detected in the capsule of myenteric ganglion of DM group at 21 and 42 days. DM group showed low immune reactivity of myenteric neurons to ChAT, SP and VIP. As regards to ultrastructural aspects, DM group showed slow cellular development. Besides, NADH-d and NADPH-d analysis exhibited increased numeric neuronal density in 21 days old animals compared to 42 days old animals, despite segments. DM group showed higher neuronal numeric density than other groups, regardless of segment and age. On the other hand, when evaluating the neuronal profile area, 42 days groups showed greater area than 21 days animals, with both techniques and regardless of segment. Furthermore, DM group showed significantly lower neuronal area compared to the other groups, regardless of intestinal segment. RM group did not recovered this parameter. Total number of neurons directly increased according to age in all groups. No difference was found between groups of same age. NADPH-d neuronal estimative was higher in DM group, regardless of age.