Orientador: Reinaldo Fernandes Cooke / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: David W. Boahnet / Resumo: Este experimento analisou os efeitos da administração do meloxicam nas respostas fisiológicas e no desempenho de bovinos na fase inicial do confinamento após serem transportados. Foram utilizados 84 bezerros Angus × Hereford, divididos por peso vivo (PV) no dia -10 do experimento e distribuídos em 21 baias de confinamento. Do d -10 ao d 0, todos os animais receberam uma dieta composta por feno de alfalfa a vontade e 2,4 kg/animal (base MS) de um concentrado a base de milho. No dia 0, todas as baias foram aleatoriamente atribuídas a receberem um dos seguintes tratamentos: 1) transporte por 1.440 km em um caminhão comercial e administração oral de meloxicam (1 mg/kg do PV) no carregamento (d 0), no descarregamento (d 1) e diariamente do d 2 ao d 7 no período inicial de confinamento (MEL; n = 7), 2) transporte e administração do tratamento nos mesmos dias do grupo MEL, porém com lactose monohidratada (1 mg/kg do PV) (TRANS; n = 7), 3) ausência de transporte e administração de lactose monohidratada (1 mg/kg do PV) nos mesmos dias dos tratamentos MEL e TRANS (CON; n = 7). Logo após o descarregamento (d 1), todos os animais dos tratamentos MEL e TRANS retornaram para suas respectivas baias para o período de 21 dias de confinamento, recebendo a mesma dieta oferecida do d -10 ao d 0. Nos dias 0 e 1, os tratamentos foram aplicados através de solução aquosa e administrados via oral, porém dos dias 2 ao 7, os tratamentos foram misturados no concentrado. Para o cálculo de ganho peso diário (GPD) foram utilizados as médias de ... / Abstract: This experiment evaluated the effects of meloxicam administration on physiological and performance responses of transported cattle during feedlot receiving. Eighty-four Angus × Hereford steers were ranked by BW on d -10, and assigned to 21 dry lot pens. From d -10 to 0, pens were fed Alfalfa-grass hay ad libitum and 2.4 kg/steer daily (DM basis) of a corn-based concentrate. On d 0, pens were randomly assigned to: 1) transport for 1,440 km in a livestock trailer and oral administration of meloxicam (1 mg/kg of BW) at loading (d 0), unloading (d 1), and daily from d 2 to 7 of feedlot receiving (MEL; n = 7), 2) same transportation and treatment schedule of MEL, but oral administration of lactose monohydrate (1 mg/kg of BW) instead of meloxicam (TRANS; n = 7), or 3) no transport and oral administration of lactose monohydrate (1 mg/kg of BW) concurrently with treatment administration to MEL and TRANS (CON; n = 7). Upon arrival (d 1), MEL and TRANS steers returned to their pens for a 21-d feedlot receiving with the same diet offered from d -10 to 0. Treatments were administered to steers via oral drench on d 0 and 1, or mixed daily with the concentrate from d 2 to 7. Full BW was recorded prior to (d -2, -1, and 0) treatment application and at the end of experiment (d 20, 21, and 22) for ADG calculation. Daily DMI was recorded from d 1 to 21. Blood samples were collected on d 0, 1, 3, 5, 7, 10, 14, and 21. During the initial 7 d of feedlot receiving, hay and total DMI were reduced (P ≤ 0.03) in TRANS vs. CON and MEL, similar between CON and MEL (P ≥ 0.26), whereas concentrate DMI did not differ (P = 0.16) among ... / Mestre

Orientador: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Antonio Carlos Paulillo / Banca: Adriano Sakai / Resumo: O Brasil possui a terceira maior produção mundial de perus, e é o segundo maior exportador desta ave. As proteínas de fase aguda são sintetizadas principalmente nos hepatócitos, porém, também há produção extra-hepática. Isto é causado por citocinas pró inflamatórias, tais como Interleucinas IL-1, IL-6 e fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), responsáveis pela indução da síntese e secreção dessas proteínas, principalmente pelo fígado, frente uma infecção ou inflamação. O principal propósito desta investigação é demonstrar como as proteínas de fase aguda podem servir de ferramenta para monitorar a eficácia da vacinação contra a doença de Newcastle, utilizando-se as cepas LaSota ativada e inativada em perus fêmeas em fase de produção, ao se comparar com um grupo controle não vacinado. Houve diferença significativa (p<0,05) para as concentrações da alfa-1 glicoproteína ácida entre o grupo vacinado com a cepa LaSota inativada e o grupo vacinado com a cepa LaSota ativada, na 36ª semana. Houve diferença significativa (p<0,05) para as concentrações de IgG cadeia pesada entre o grupo vacinado com a cepa LaSota inativada e o grupo vacinado com a cepa LaSota ativada, na 38ª semana. Na 46ª semana, as concentrações de proteínas totais apresentaram diferença significativa (p<0,05), entre o grupo vacinado com a cepa LaSota inativada e o grupo controle. Na 48ª semana foram observadas diferenças significativas (p<0,05) para as concentrações da ovotransferrina, entre o grupo vacinado com a cepa LaSota ativada e o grupo vacinado com a cepa LaSota inativada e as concentrações séricas da IgG de cadeia leve apresentaram diferença significativa (p<0,05) entre o grupo vacinado com a cepa LaSota inativada em relação ao grupo controle. Houve diferença significativa (p<0,05) para as concentrações da alfa-1 glicoproteína ácida entre o grupo controle e o grupo vacinado com cepa LaSota inativada, na ... / Abstract: Brazil has the third largest worldwide production of turkeys, and is the second largest exporter of this bird. The acute phase proteins are synthesized mainly in hepatocytes, but there is also an extrahepatic production. This is promoted by inflammatory cytokines, such as interleukins IL-1, IL-6 and tumor necrosis factor alpha (TNF-α), responsible for the induction of synthesis and secretion of these protein in response to an infection or inflammation. The purpose of this study is to demonstrate how the acute phase proteins could be used as tools to monitor the effectiveness of vaccination against Newcastle disease, using the LaSota activated and inactivated strains in female egg-laying turkeys when compared with a non-vaccinated control group. Significant differences (p<0.05) were found for the concentrations of alpha-1-acid glycoprotein between the group vaccinated with the LaSota inactivated strain and the group vaccinated with LaSota activated strain at 36 weeks. Significant differences (p<0.05) were found for the concentrations of IgG heavy chain from the group vaccinated with the LaSota inactivated strain and the group vaccinated with the LaSota activated strain at 38 weeks. In the 46th week, the total protein concentrations showed significant differences (p<0.05) between the group vaccinated with the LaSota inactivated strain and the control group. On week 48 significant differences (p<0.05) were found for the concentrations of ovotransferrin, between vaccinated birds with LaSota activated strain and the group vaccinated with the LaSota inactivated strain, and serum concentrations of IgG light chain showed a significant difference (p<0.05) between the group vaccinated with the LaSota inactivated strain in the control group. Significant differences (p<0.05) were found for the concentrations of alpha-1-acid glycoprotein between the control group and the group vaccinated with LaSota inactivated ... / Mestre

Resumo: Objetivo: O objetivo do estudo foi comparar os efeitos de uma dose-única de caseína micelar (MCa) com a ingestão de caseína micelar associada à proteína do soro do leite (whey protein) (1:1) sobre a resposta aminoacidêmica e a via de sinalização do alvo da rapamicina (mTOR) em músculos esqueléticos de ratos durante a fase de inatividade (período de luz ambiente). Métodos: Após 10h de jejum durante a fase ativa, os ratos foram alimentados com MCa ou PB (5,6g proteína por kg de massa corporal) por gavagem e a água foi usada como veículo (grupo controle, PLA). Em 30 e 450 min após a suplementação das proteínas, os animais foram sacrificados e as amostras de sangue e do músculo gastrocnêmio foram coletadas para análises bioquímicas. Resultados: Os níveis plasmáticos dos aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA) aumentaram após as suplementações de MCa (3 vezes) e PB (3,2 vezes). Ainda mais relevante, os níveis estimulatórios da fosforilação da mTOR e do seu alvo downstream p70S6K foram maiores 30 min após MCa (2,6 e 2,9 vezes, respectivamente) e PB (2,8 e 3,8 vezes, respectivamente) quando comparado com PLA. As concentrações plasmáticas de leucina forma correlacionadas com a ativação da mTOR (r = 0,60; p < 0,05) e p70S6K (r = 0,77; p < 0,05) em 30 min. Não existiu diferença para as concentrações plasmáticas de BCAA e a via de sinalização da mTOR em 450 min. Conclusão: Nós concluímos que a suplementação de MCa e PB resultaram em um efeito anabólico semelhante no músculo esquelético ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: The aim of the study was to compare the effects of single-dose supplementation of a protein blend (PB) composed of micellar casein and whey protein (1:1) with isolated micellar casein (MCa) on aminoacidemic response and the mammalian target of the rapamycin (mTOR) signaling pathway 30 and 450 min after the beginning of the inactive phase in Wistar rats. Methods: After 10h of fasting during the active phase, rats were fed with MCa or PB (5.6g protein per kg of body mass) by gavage and water was used as the vehicle (PLA, placebo group). At 30 and 450 min after protein supplementation, the animals were euthanized and blood and gastrocnemius muscle samples were collected for biochemical and immunoblot analysis. Results: Plasma BCAA levels increased after MCa (3-fold) and PB (3.2-fold) supplementations. More importantly, the stimulatory phosphorylation levels of mTOR and its downstream target ribosomal protein S6 kinase (p70S6K) were higher 30 min after MCa (2.6 and 2.9-fold, respectively) and PB (2.8 and 3.8-fold, respectively) when compared with PLA. Plasma leucine levels were correlated with activation of mTOR (r = 0.60, p < 0.05) and p70S6K (r = 0.77; p < 0.05) at 30 min. There were no differences for plasma amino acids levels and the mTOR signaling pathway at 450 min. Conclusions: MCa and PB supplementations resulted in a similar anabolic milieu in rat skeletal muscle by inducing a transient increase in BCAA plasma levels and activation of the mTOR/p70S6K axis. / Mestre

Orientadores: Everardo Magalhães Carneiro, Camila Aparecida Machado de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T15:32:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CostaJunior_JoseMaria_M.pdf: 1708636 bytes, checksum: 8f21b938177c9819646df6957696b6c4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Neste trabalho investigamos os efeitos do treinamento físico aeróbio de longa duração, associado ou não com a suplementação de leucina, sobre o metabolismo protéico e glicídico em músculo soleus de camundongos Swiss. Para isso, parte dos camundongos (T) realizou protocolo de 12 semanas de exercício de natação, com 1h de duração, 5 dias/semana, sem sobrecarga, e a outra parte permaneceu sedentária (C). Metade dos animais dos grupos C e T foram suplementados com leucina (1,5%) na água para beber (grupos CL e TL, respectivamente) ao longo do experimento. Os dados foram analisados pela ANOVA Two-Way (variáveis exercício e suplementação com leucina) e o teste post hoc de Newman-Keus foi empregado nos casos de interação das variáveis. Foi adotado um valor de p<0,05 como estatisticamente significativo. Resultados: A área abaixo da curva glicêmica durante o teste de tolerância à glicose foi maior nos grupos suplementados com leucina (CL e TL). Já a sensibilidade à insulina, estimada pelo kITT, foi maior por efeito do exercício. A fosforilação da AS160, etapa distal da cascata de sinalização que leva a captação de glicose no músculo, foi maior no grupo T em relação aos demais tanto na condição basal quanto estimulada com insulina, provavelmente via AMPK, cuja fosforilação foi maior por efeito do exercício em ambas as condições, mas diminuída por efeito da suplementação com leucina após estimulação com insulina. A fosforilação da Akt não foi afetada pelo exercício, mas foi menor no grupo CL em relação aos demais. Apesar do maior peso do músculo soleus por efeito do exercício, a síntese protéica não diferiu entre os grupos, mesmo com a maior fosforilação da mTOR na condição basal no grupo CL, e a redução por efeito do exercício após estimulação com insulina. A degradação protéica no referido músculo, contudo, foi reduzida por efeito do exercício. A expressão gênica de isoformas específicas de E2 e E3 ligases, integrantes da via proteolítica ubiquitina-proteossoma, também foi menor por efeito do exercício. Todos os indicadores de resposta ao treinamento aeróbio foram aumentados por efeito do exercício: tempo até a exaustão em teste de esforço, oconsumo máximo de oxigênio e atividade da enzima citrato sintase. Alguns destes indicadores também sofreram interferência da suplementação. Concluímos que a suplementação com leucina pode prejudicar a homeostase glicêmica e reduzir os efeitos positivos do exercício sobre a sinalização insulínica. O exercício aumentou o peso do músculo soleus ao diminuir a degradação protéica por inibição da via proteolítica ubiquitina-proteossomo, enquanto a síntese protéica não foi afetada por nenhum tratamento (exercício ou suplementação com leucina) / Abstract: We investigated the effects of chronic physical training, associated or not with leucine supplementation, on protein and glucose metabolism in soleus muscle of Swiss mice. Half of the mice (T) performed a 12 weeks protocol of swimming exercise, 1h/day, 5 days/week, bearing no overload, and the other half remained sedentary (C). Additionally, half of the C and T mice were supplemented with leucine (1,5%) into the drinking water (groups CL and TL, respectively) throughout the experiment. Data were analysed by Two-Way ANOVA (variables exercise and leucine supplementation) and the Newman-Keus post hoc test was used in the cases of interaction between the variables. A p<0,05 was considered statistically significant. Results: The area under glucose curve during glucose tolerance test was increased in the leucine supplemented groups (CL and TL). Insulin sensitivity, estimated by kITT, was higher as an effect of exercise. AS160 phosphorylation, a distal step in the signaling pathway which leads to muscle glucose uptake, was increased in the T group compared to the others in both basal and insulin-stimulated condition, probably via AMPK, whose phosphorylation was increased by exercise in both conditions, but it was reduced by an effect of leucine supplementation following insulin stimulation. Akt phosphorylation was not affected by exercise, but it was reduced in the CL group compared to the other groups. Despite the increased weight of soleus muscle caused by an effect of exercise, protein synthesis was similar among the groups, even with the increased mTOR phosphorylation at the basal condition in the CL group, and the reduction caused by exercise following insulin stimulation. Protein degradation in the soleus muscle was reduced by an effect of exercise. Gene expression of specific isoforms of E2 and E3 ligases, members of the ubiquitin-proteosome proteolytic pathway, was also reduced by an effect of exercise. All the indicators of response to aerobic training were increased by exercise: time to exhaustion in the effort test, maximal oxygen uptake and citrate synthase enzyme activity. Some of these indicators were also affected by leucine supplementation. We conclude that leucine supplementation may impair glucose homeostasis and reduce the positive effects of exercise on insulin signaling. Exercise increased soleus muscle weight by reducing protein degradation via an inhibition of the ubiquitin-proteasome proteolytic pathway, whereas protein synthesis was not affected by either of the treatments (exercise or leucine supplementation) / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Esse trabalho compreendeu a avaliação do impacto do jogo Sintetizando Proteínas sobre o processo de ensino-aprendizagem de alunos do ensino médio e sua compreensão conceitual a respeito do tema proteínas, fundamentados na teoria sócio-interacionista de Vygotsky. Os conceitos formulados pelos alunos foram coletados em três etapas diferentes: a primeira, anterior à aplicação do jogo, por meio de um questionário diagnóstico e uma pré-entrevista; a segunda, durante o jogo, por meio de gravações áudio-visuais; a terceira, posterior à aplicação do jogo, por meio de uma pós-entrevista. Os dados levantados pelo questionário diagnóstico permitiram detectar algumas tendências do pensar dos alunos com relação ao conceito de proteína: a) tendência em definir genericamente o papel das proteínas; b) tendência dos alunos em associar proteínas aos alimentos de origem animal; c) tendência em entenderem as proteínas apenas como construtoras de tecidos, portanto uma função prioritariamente estrutural. A análise e interpretação dos dados referentes às pré e pós-entrevistas e das transcrições das gravações áudio-visuais nos mostraram que as interações ocorridas durante o jogo tiveram um importante papel na evolução de alguns conceitos antes incompreendidos pelos alunos. Dessa forma o jogo, enquanto um modelo que simula o processo de síntese protéica dentro da célula, proporcionou aos alunos experiências que os permitiram vivenciar esse processo, estabelecendo uma ponte entre o abstrato e o concreto, possibilitando aos mesmos o alcance de níveis de desenvolvimento mais elevados e a evolução de conceitos antes incompreendidos. / The main goal of this study was evaluating the impact of the game Synthesizing Proteins on the teaching-learning process of high school students and their conceptual understanding on the subject proteins, based on Vygotskys sociointeractionist theory. The concepts of the students were collected in three different stages: before the application of the game, using a diagnostic questionnaire and a pre-interview; during the game, by means of audio-visual recordings; after the application of the game, by a post-interview. The data raised from the diagnostic questionnaire had allowed to detect some trends of students thinking with regard to the protein concept: a) the trend in generically defining the role of proteins to the organism (human) b) students trend in only associating proteins to foods of animal origin c) trend in only understanding proteins as tissue constructors, so a function primarily structural. The analysis and interpretation of data collected by pre- and post-interviews and the transcripts of the audio-visual recordings showed that the interactions occurred during the game had an important role in the evolution of some concepts that were previously misunderstood by students. Thus, the game as a model that simulates the process of protein synthesis inside the cell, allowed the students experience this process, establishing a bridge between the abstract and concrete and allowing them to achieve high levels of development.

Esse trabalho compreendeu a avaliação do impacto do jogo Sintetizando Proteínas sobre o processo de ensino-aprendizagem de alunos do ensino médio e sua compreensão conceitual a respeito do tema proteínas, fundamentados na teoria sócio-interacionista de Vygotsky. Os conceitos formulados pelos alunos foram coletados em três etapas diferentes: a primeira, anterior à aplicação do jogo, por meio de um questionário diagnóstico e uma pré-entrevista; a segunda, durante o jogo, por meio de gravações áudio-visuais; a terceira, posterior à aplicação do jogo, por meio de uma pós-entrevista. Os dados levantados pelo questionário diagnóstico permitiram detectar algumas tendências do pensar dos alunos com relação ao conceito de proteína: a) tendência em definir genericamente o papel das proteínas; b) tendência dos alunos em associar proteínas aos alimentos de origem animal; c) tendência em entenderem as proteínas apenas como construtoras de tecidos, portanto uma função prioritariamente estrutural. A análise e interpretação dos dados referentes às pré e pós-entrevistas e das transcrições das gravações áudio-visuais nos mostraram que as interações ocorridas durante o jogo tiveram um importante papel na evolução de alguns conceitos antes incompreendidos pelos alunos. Dessa forma o jogo, enquanto um modelo que simula o processo de síntese protéica dentro da célula, proporcionou aos alunos experiências que os permitiram vivenciar esse processo, estabelecendo uma ponte entre o abstrato e o concreto, possibilitando aos mesmos o alcance de níveis de desenvolvimento mais elevados e a evolução de conceitos antes incompreendidos. / The main goal of this study was evaluating the impact of the game Synthesizing Proteins on the teaching-learning process of high school students and their conceptual understanding on the subject proteins, based on Vygotskys sociointeractionist theory. The concepts of the students were collected in three different stages: before the application of the game, using a diagnostic questionnaire and a pre-interview; during the game, by means of audio-visual recordings; after the application of the game, by a post-interview. The data raised from the diagnostic questionnaire had allowed to detect some trends of students thinking with regard to the protein concept: a) the trend in generically defining the role of proteins to the organism (human) b) students trend in only associating proteins to foods of animal origin c) trend in only understanding proteins as tissue constructors, so a function primarily structural. The analysis and interpretation of data collected by pre- and post-interviews and the transcripts of the audio-visual recordings showed that the interactions occurred during the game had an important role in the evolution of some concepts that were previously misunderstood by students. Thus, the game as a model that simulates the process of protein synthesis inside the cell, allowed the students experience this process, establishing a bridge between the abstract and concrete and allowing them to achieve high levels of development.

Orientador: Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T11:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pertile_Tatiane_M.pdf: 1613871 bytes, checksum: 2d715c00e32e2a411050801a7a1ac95f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O câncer pode promover a morte do hospedeiro, pois durante sua evolução há modificações da homeostasia dos processos metabólicos, promovendo profundas alterações caracterizadas como caquexia, que por sua vez relaciona-se à diminuição da qualidade e do tempo de vida do hospedeiro. Assim, no presente estudo, analisamos os efeitos da evolução do crescimento de neoplasia - carcinossarcoma de Walker 256 - em ratos jovens e adultos e os efeitos modulatórios do tratamento desses animais com EPA (ácido eicosapentaenóico) sobre o processo de caquexia e a concentração de citocinas anti e proinflamatórias no músculo gastrocnêmio, pois o tecido muscular é o tecido mais afetado no processo de caquexia. Foram utilizados 108 ratos Wistar machos, com idade de 30 dias (jovens) e 100 dias (adultos), os quais foram distribuídos de acordo com o local de implante tumoral, intraperitônio e subcutâneo, e tratamento ou não com ácido eicosapentaenóico, 100?g/Kg de peso corpóreo. Os animais receberam gavagem diária do EPA (animais tratados) ou de óleo mineral (grupos sem tratamento) até a fase pré-agônica. A partir dos órgãos coletados, foram calculados o ganho de peso corpóreo, os pesos relativos de cada órgão, do tumor e da carcaça. Com o objetivo de identificarmos a via de degradação protéica predominante nos grupos experimentais, foram avaliados, no tecido muscular, o teor de proteína muscular total e as atividades das seguintes enzimas: chymotrypsin-like, catepsinas B e H, calpaína e fosfatase alcalina,. A partir do sangue desses animais foram feitas análises fluorimétricas do fator de crescimento semelhante à insulina (IGF) e das citocinas - interleucinas 4 (IL-4), 6 (IL-6) e 10 (IL-10), interferon gama (INF-?) e leptina, utilizando-se kits específicos para citômetro de fluxo de fluorescência (Luminex). Também foi analisada a expressão gênica, no tecido muscular, por reação em cadeia da polimerase em tempo real (PCR-RT), para a via proteossômica e também para os fatores eucarióticos de inicialização. Os dados indicam efeitos modulatórios do EPA sobre o tecido muscular (manutenção da proteína e do peso), principalmente para os grupos jovens, e também no processo inflamatório crônico (aumento de citocinas pró e antiinflamatórias). Entretanto, efeitos mais expressivos do EPA não foram verificados na prevenção da espoliação de gordura (gordura perirrenal e leptina), no processo de síntese protéica (manutenção da expressão gênica de fatores eucarióticos de inicialização) ou também sobre a via proteossômica / Abstract: Cancer can promotes the host death, because during its evolution there are modifications in metabolic processes of homeostasis, promoting deep changes characterized as cachexia, which in turn relates with reduction in quality and lifetime of the host. Thus, in this study, we analyze the effects of development in Walker 256 carcinoma evolution - in young and adults rats and the modulatory effect of treatment with EPA (eicosapentaenoic acid) in gastrocnemius muscle as this tissue is the most affected in the cachexia process. Wistar males rats were used (n=108 animals), 30 days-old (young) and 100 days-old (adults), which were distributed according to the tumour implant, intraperitoneally and subcutaneously and treatment or not with eicosapentaenoic acid, 100 ?g/Kg of body weight. The animals receive daily EPA by gavage (treated animals) or nujol (sham groups) and were cared up to pre-agonic state. The bodies weight were measured and the body weight gain was calculated, as well the relative weights of tissues, tumour, and carcass. In order to identify the predominant pathway of protein degradation the total muscle protein content and proteolytic enzymes activities (chymotrypsin-like, cathepsin B and H, calpain and alkaline phosphatase) were measured in gastrocnemius muscle. The blood samples were assessed to measure the insulin-like growth factor 1 (IGF-1), leptin and the cytokines - interleukins (IL-4), 6 (IL-6) and 10 (IL-10), gamma interferon (INF-?), using specific kits for cytometer fluorescence (Luminex). It was also examined gene expression, in the muscle tissue, by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), assessing keys of ubiquitin-proteasome pathway and also on the eukaryotic initiation factors. The data indicated some modulatory effects of EPA on the muscle tissue (maintenance of protein and weight), mainly for the young rats, and also the chronic inflammatory process. However, more expressive effects of EPA have not been verified as preventing fat wasting (perirenal fat and leptin), nor in the process of protein synthesis (maintenance of eukaryotic initiating factors gene expression) or also in the ubiquitin-proteasome via / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-10-04T17:24:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1726508 bytes, checksum: b215614a17770465d875d305244f584b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-04T17:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1726508 bytes, checksum: b215614a17770465d875d305244f584b (MD5) Previous issue date: 2018-06-29 / Os microrganismos ruminais têm um papel central na nutrição de ruminantes. Eles têm a capacidade de fermentar componentes do alimento para produzir ácidos graxos voláteis (AGV’s) e crescer (sintetizar proteína microbiana), os quais fornecem a maior parte da energia e aminoácidos exigidos pelos animais. No entanto, quando são fornecidos carboidratos em excesso, a eficiência de crescimento dos microrganismos torna-se baixa porque estes direcionam a energia para outras funções, ao invés de a utilizarem para o crescimento. Diferentes microrganismos respondem a esse excesso de maneiras diferentes. Certas espécies respondem armazenando energia (sintetizando carboidratos de reserva), mas outras espécies respondem dissipando a energia na forma de calor. Para determinar a importância relativa dessas respostas na comunidade microbiana do rúmen, este estudo foi cinduzido com o objetivo de quantificar como os protozoários ciliados e as bactérias responderam à glicose. Teve-se como hipótese que os protozoários ciliados direcionariam mais glicose para a síntese de carboidratos de reserva e desperdiçariam menos energia na forma de calor, em relação as bactérias. Ciliados e bactérias foram isolados do líquido ruminal por filtração e centrifugação, respectivamente. Posteriormente, os ciliados e as bactérias foram suspensos em tampão isento de nitrogênio para limitar o crescimento e dosados com 5 mM de glicose. As amostras foram coletadas ao longo do tempo e, posteriormente, divididas por centrifugação em pellets (células) e sobrenadante. Amostras de pellets foram analisadas quanto à reserva de carboidratos e proteínas, enquanto amostras de sobrenadante foram analisadas para glicose livre, ácido D-L lático, ácido acético, propionato e butirato. Adicionalmente, foi analisado a produção de calor e gases de fermentação (H 2 , CH 4 e CO 2 ). O metabolismo endógeno, a síntese de carboidratos de reserva e o desperdício na forma de calor foram calculados a partir dos dados das análises. A maior parte dos dados foi analisada usando o PROC GLIMMIX do SAS. Teste t de Student foi usado para separar as médias ou determinar se as médias diferiam de 100%. Regressão local (pacote LOCFIT de R; Loader, 1999) foi usada para ajustar os dados das séries no tempo. Em comparação com as bactérias, os ciliados consumiram três vezes mais glicose e sintetizaram carboidratos de reserva quatro vezes mais rápido. Eles incorporaram 53% da glicose em carboidratos de reserva, quase o dobro do valor (27%) obtido para as bactérias. Desperdício de energia na forma de calor não foi detectado para os ciliados, uma vez que toda a produção de calor foi contabilizada pela síntese de reserva de carboidratos e pelo metabolismo endógeno. Em bactérias, a síntese de carboidratos de reserva e o metabolismo endógeno representaram apenas 68% da produção total de calor, assim, elas desperdiçaram grande quantidade de energia por meio da produção de calor (32% da produção total de calor). Esses resultados sugerem que os protozoários ciliados ruminais alteram o curso do metabolismo de carboidratos no rúmen, consumindo glicose mais rapidamente, limitando o uso do excesso de carboidratos pelas bactérias. Essa ação dos ciliados no rúmen provavelmente maximiza a síntese carboidratos de reserva, enquanto minimiza a ocorrência de desperdício de energia na forma de calor. / Rumen microbes hold a central role in ruminant nutrition. They ferment feed components to produce volatile fatty acids (VFA) and grow (synthesize microbial protein), which supplies the greater part of energy and amino acids required by the animals. However, when given excess carbohydrate, microbes growth efficiency becomes low because microbes direct energy to non-growth functions, instead of using it for growth. Different microorganisms respond to this excess in different ways. Certain species respond by storing energy (synthesizing reserve carbohydrate), but other species respond by dissipating the energy as heat (spilling energy). To determine the relative importance of these responses in the microbial community of the rumen, this study aims to quantify how mixed ciliate protozoa and bacteria respond to glucose. It was hypothesized that ciliate protozoa would direct more glucose to synthesis of reserve carbohydrate and less to energy spilling than would bacteria. Ciliates and bacteria were isolated from rumen fluid using filtration and centrifugation, respectively. Posteriorly, ciliates and bacteria were resuspended in nitrogen-free buffer to limit growth and dosed with 5 mM glucose. Samples were collected over time and were subsequently divided in pellet (cells) and supernatant by centrifugation. Pellet samples were analyzed for reserve carbohydrate and protein, while supernatant sample were analyzed for free glucose, D- /L-lactic acid, acetic acid, propionate and butyrate. Additionally, were analyzed heat production and fermentation gases (H 2 , CH 4 and CO 2 ). Endogenous metabolism, reserve carbohydrate synthesis and energy spilling were calculated from the data obtained from the analysis data. Most data were analyzed using PROC GLIMMIX of SAS. Student’s t- test was used to separate means or determine if means differed from 100%. Local regression (LOCFIT package of R; Loader, 1999) was used to fit time-series data to smooth curves. Compared to bacteria, ciliates consumed glucose more than 3-fold faster and synthesized reserve carbohydrate 4-fold faster. They incorporated 53% of glucose carbon into reserve carbohydrate, nearly double the value (27%) for bacteria. Energy spilling was not detected for ciliates, as all heat production was accounted by synthesis of reserve carbohydrate and endogenous metabolism. For bacteria, reserve carbohydrate and endogenous metabolism accounted for only 68% of heat production, thus they spilled large amounts of energy (32% of total heat production). These results suggest that rumen ciliates protozoa alter the course of carbohydrate metabolism in the rumen by consuming glucose more rapidly and outcompeting bacteria for excess carbohydrate. This action of the ciliates in the rumen likely maximizes reserve carbohydrate synthesis while minimizing spilling.

Orientador: Nilson Ivo Tonin Zanchin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T15:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coltri_PatriciaPereira_D.pdf: 4564852 bytes, checksum: f11b831da981a8969c20f8f03ae8c617 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A síntese de ribossomos é um processo conservado em eucariotos e se inicia com a transcrição dos rRNAs no nucléolo. Mais de 170 fatores atuam de forma transitória no processamento dos precursores para gerar os rRNAs maduros que formarão as subunidades ribossomais no citoplasma. Entre as proteínas envolvidas na síntese de ribossomos está a Nip7p, uma proteína nucleolar de 21 kDa associada ao complexo pré-60S em Saccharomyces cerevisiae. Nip7p é conservada e possui ortólogas em eucariotos e em Archaea. A análise da seqüência primária revela a presença de um domínio conservado na região C-terminal, denominado PUA, encontrado em diversas proteínas associadas a modificações no RNA. Neste trabalho, foram realizadas análises estruturais e funcionais com o objetivo de investigar a função molecular da proteína Nip7 no processamento e modificação do rRNA. A estrutura tri-dimensional de PaNip7, ortóloga de Nip7p em Pyrococcus abyssi foi resolvida por difração de raios-X até 1,8Å de resolução, utilizando o método SIRAS. Comparação estrutural seguida por ensaios in vitro confirmaram o envolvimento do domínio PUA na interação com RNA. Além disso, tanto Nip7p como suas ortólogas PaNip7 e HsNip7 interagem com seqüências ricas em uridina, indicando que atuam de forma semelhante no processamento do rRNA. Essa preferência por uridina pode ainda explicar a afinidade da proteína Nip7p de S. cerevisiae pelo RNA da região ITS2, conforme observado em ensaios de interação utilizando UV-crosslinking. De fato, uma análise funcional realizada por primer extension comprovou que ocorre um bloqueio no processamento da região espaçadora ITS2 na ausência de Nip7p. Nip7p interage com várias proteínas do complexo pré-60S, entre as quais Nop8p e Nop53p, ambas associadas ao processamento do pré-27S. Embora os ensaios de co-purificação tenham confirmado a interação com as proteínas do complexo H/ACA box, deficiência em Nip7p não afeta a pseudo-uridinilação do rRNA. O duplo-híbrido realizado com a ortóloga humana de Nip7p, HsNip7, revelou interações com FTSJ3 e com a proteína SUMO-2. A interação direta de HsNip7 com estas proteínas foi confirmada por ensaios in vitro. HsNip7 e FTSJ3 colocalizaram na região nucleolar de células HEK293. FTSJ3 é uma proteína não caracterizada que possui o domínio FtsJ, descrito inicialmente para rRNA metiltransferases de procariotos. Além disso, FTSJ3 apresenta similaridade de sequência à proteína Spb1p de levedura, cuja função na metilação do rRNA 25S na posição Gm2922 já foi estabelecida. Embora a Nip7p não interaja com a Spb1p, estes dados indicam que FTSJ3 deve ser a ortóloga humana da Spb1p. As proteínas SUMO estão envolvidas na modificação pós-traducional (sumoylation) que regula a localização subcelular de proteínas. Em levedura, a provável ortóloga de SUMO, Smt3p, foi descrita na partícula pré-60S, portanto a interação HsNip7-SUMO-2 pode ser específica. Estes dados sugerem que as proteínas atuem no mesmo complexo da formação da subunidade 60S também em células humanas / Abstract: Ribosome biogenesis is conserved throughout eukaryotes and takes place in the nucleolus, a specialized nuclear compartment where the rRNA precursors are transcribed. More than 170 trans-acting factors coordinately interact to generate the mature rRNAs. Among the proteins identified in the pre-60S particle in Saccharomyces cerevisiae is Nip7p. Highly conserved Nip7p orthologues are found in all eukaryotes and Archaea. The analysis of Nip7p sequence reveals a conserved C-terminal domain named PUA, also found in a number of RNA-interacting proteins. In this work, we performed structural and functional analysis to investigate Nip7p molecular role on rRNA processing and modification. The structure of Pyrococcus abyssi Nip7p ortholog, PaNip7, was solved using X-ray diffraction data to 1,8Å resolution. Structural analysis followed by in vitro assays confirmed the involvement of PUA domain in RNA interaction. S. cerevisiae Nip7p and its archaeal and human counterparts show preference for binding uridine-rich sequences, indicating conserved functional features among the orthologues. The preference for uridine can explain the higher affinity of S. cerevisiae Nip7p for ITS2 sequence, as observed by UV-crosslinking assays. Consistently, functional analysis revealed pre-rRNA processing in the ITS2 region is seriously impaired. Yeast two-hybrid analysis confirmed by pull down assays revealed Nip7p interacts with Nop8p and Nop53p, two nucleolar proteins involved in pre-27S processing and components of pre-60S particle. Although yeast two-hybrid and pull down assays indicated that Nip7p interacts with H/ACA box core proteins, pseudouridylation is not affected under conditions of Nip7p depletion. In addition, yeast two-hybrid analysis confirmed by GST-pull down revealed HsNip7 interaction with FTSJ3 and SUMO-2. Both HsNip7 and FTSJ3 showed nucleolar subcellular localization in HEK293 cells. FTSJ3 is an uncharacterized protein containing the FtsJ domain, initially described in prokaryotic rRNA methyl-transferases. FTSJ3 shows sequence similarity to yeast Spb1p, an rRNA methyl-transferase involved in methylation of Gm2922, indicating that FTSJ3 may be the human orthologue of Spb1p. Sumoylation is a post-transcriptional covalent modification involved in regulation of protein subcellular localization. Putative yeast orthologues of SUMO, such as Smt3p, have been described in the pre-60S ribosomal particle, suggesting that SUMO-2 might play a specific role in 60S subunit biogenesis / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Rosana Moreira (rosanapsm@outlook.com) on 2018-08-07T17:49:12Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EnsinoSinteseProteinas.pdf: 1047503 bytes, checksum: e4afcb6f26e240307a2056f86608cb9c (MD5) Produto_EnsinoSinteseProteinas.pdf: 1617044 bytes, checksum: 544239a99fde6257fa2c106b98bcd80f (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2018-12-19T14:49:06Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EnsinoSinteseProteinas.pdf: 1047503 bytes, checksum: e4afcb6f26e240307a2056f86608cb9c (MD5) Produto_EnsinoSinteseProteinas.pdf: 1617044 bytes, checksum: 544239a99fde6257fa2c106b98bcd80f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-19T14:49:06Z (GMT). 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Foram oito os sujeitos que participaram desta pesquisa, os quais foram eleitos a partir dos seguintes critérios: a assiduidade em todos os encontros do minicurso e a produção de informações significativas referentes à pergunta de pesquisa e aos objetivos traçados. Como instrumento investigativo, fiz uso de questionário para obter informações sobre a afinidade dos participantes com o tema em estudo e com o uso das tecnologias, além do questionário também utilizei um diário, onde foram registradas minhas percepções e reflexões a respeito desta pesquisa; e os registros em áudio e vídeo. Com intenção de produzir novas compreensões sobre o fenômeno investigado, lanço mão da Análise Textual Discursiva como metodologia de análise do material empírico. Após realizar intensas leituras e me impregnar do material empírico, tais análises permitiram a construção de dois eixos temáticos de análise: Estudando síntese de proteína: produção de significados discentes e O ensino da síntese proteica visando o conhecimento socialmente relevante. Os resultados demonstram que os estudantes não estão satisfeitos diante das práticas vivenciadas nas instituições de ensino, manifestaram necessidade de ampliar suas perspectivas de estudo por meio da atribuição de significado aos conteúdos estudados. A tecnologia, por meio do uso da internet, estimulou os estudantes a ir em busca de elementos capazes de possibilitar a construção de seu conhecimento, permitindo a responsabilização por sua aprendizagem. Apesar das potencialidades dessa ferramenta, os estudantes manifestaram que ela é pouco utilizada nas escolas. Os estudantes também apontaram que a pesquisa aliada a momentos de discussões possibilitou o estabelecimento entre conhecimentos cotidianos e conhecimentos científicos, auxiliando no entendimento de novos conceitos e na resolução de problemas vivenciados em seu cotidiano. Essa proposta torna-se eficiente e potencialmente válida por promover discussão e reflexão sobre questões sociais, oportunizar a relação entre o conhecimento cotidiano e o conhecimento científico, além de contribuir para a tomada de atitude dos estudantes. Como contribuição deste estudo para a sociedade, será disponibilizado um vídeo, que apresenta recortes das filmagens feitas no decorrer do desenvolvimento da sequência didática, com o objetivo de oferecer aos professores de Biologia novas formas de ensinar e aprender síntese de proteínas. / This is a qualitative research in the narrative mode, which is based on teaching experiences with students of the first year of high school, at a public state school, lived during a mini-course, in the context of a didactic sequence, developed in the spaces of the computer lab and the multidisciplinary laboratory. With the aim of investigating in which terms practices of teaching Biology, which favor digital technologies and the active participation of students, contribute to the construction of socially relevant knowledge. There were eight subjects who participated in this research, who were chosen from the following criteria: attendance at all mini-course meetings and the production of significant information regarding the research question and the objectives outlined. As an investigative instrument, I used a questionnaire to obtain information about the affinity of the participants with the topic under study and with the use of the technologies. In addition to the questionnaire, I also used a diary - where my perceptions and reflections on this research were recorded -, audio and video records. With the intention of producing new understandings about the investigated phenomenon, I used Discursive Textual Analysis as a methodology for analyzing the empirical material. After performing intense readings and impregnating myself with the empirical material, such analyses allowed the construction of two thematic axes of analysis, named: “Studying protein synthesis: production of student meanings” and “Teaching of protein synthesis aiming socially relevant knowledge”. The results show that students are not satisfied with the practices experienced in educational institutions. They expressed the need to broaden their study perspectives by assigning meaning to the contents studied. Technology, through the use of the Internet, has stimulated students to go in search of elements capable of building their knowledge, allowing them to be responsible for their learning. Despite the potential of this tool, the students expressed that it is little used in schools. The students also pointed out that the research together with moments of discussions allowed the establishment of everyday knowledge and scientific knowledge, helping in the understanding of new concepts and in the resolution of problems experienced in their daily life. This proposal becomes efficient and potentially valid for promoting discussion and reflection on social issues, enabling the relationship between everyday knowledge and scientific knowledge, as well as contributing to student attitudes. As a contribution of this study to society, a video which presents clippings made during the development of the didactic sequence will be available, aiming to offer Biology teachers new ways to teach and learn protein synthesis.