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Aspectos estruturais do efeito vasorelaxante de lectinas de leguminosas / Structural aspects of the vasorelaxant effect of legume lectins

Barroso Neto, Ito Liberato January 2014 (has links)
BARROSO NETO, I. L. Aspectos estruturais do efeito vasorelaxante de lectinas de leguminosas. 2014. 116 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T18:18:04Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_ilbneto.pdf: 7270817 bytes, checksum: 5f31a968576e4b5bf59d3781f6d09559 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-29T21:25:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_ilbneto.pdf: 7270817 bytes, checksum: 5f31a968576e4b5bf59d3781f6d09559 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T21:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_ilbneto.pdf: 7270817 bytes, checksum: 5f31a968576e4b5bf59d3781f6d09559 (MD5) Previous issue date: 2014 / Lectins are multiactive proteins that have at least one domain capable of recognizing specific carbohydrates reversibly without changing them. The legume lectin family is a group of this protein class further studied, in particular highlighted the subtribe Diocleinae. These lectins have a high degree of structural similarity, but it does not follow the biological activities. This variability must reside in details, small differences that can be analyzed in studies based in structures. The primary sequence of C. grandiflora lectin (ConGF) shows great similarity with lectins of the same genus, but it has the largest number of mutations representative of the genus Dioclea, characterizing it as the Canavalia subgenus closest to Dioclea, and it is the most primitive among the canavalias. ConGF presented relaxing effect on smooth muscles of endothelial aortas of rats; however, the effects are weak against other Diocleinae lectins. The justification for this does not lie in a low structural similarity but in small changes in the orientation of key amino acids residues, which become responsible for biological diversity in action presented here, as required in other phenomena elicited by lectins. For Cymbosema roseum lectin (CRLI), the relaxing effect was also evaluated and the role of extracellular calcium was observed for this activity. Surprisingly, the calcium was not definitive for determining CRLI mechanism as dependent or independent of calcium ions. Our research has led to the construction of a theory which this lectin has dual mechanism of nitric oxide synthase (eNOS) activation. The first path is based on a specific membrane endothelial receptor able to activate eNOS by calmodulin. The second path relies on the ability of CRLI binding to the glycocalyx heparano sulfate at a domain different from the CRD demonstrated by molecular docking, which explain mechanical activation of eNOS. This proteoglycan is the main mechanoreceptor candidate of shear stress and this phenomenon is the major agent of maintenance of vascular tone by NO production. A lectin from gender Dioclea was also evaluated to increase the range of legume proteins tested. As other lectins of this work, D. sclerocarpa presented the ability to relax smooth muscle of the aorta dependent on the endothelium nitric oxide production. Both its effect and its structure have a high degree of similarity with lectins of the same genus. A feature set corroborates with its low relaxant effect. DSL has a CRD design less favorable for this activity. In addition, the presence of a glutamate at position 205 proved to be a decisive factor in the activity regulation and it negatively modulates Dioclea lectins relaxant effect. / As lectinas são proteínas multiativas que apresentam pelo menos um sítio capaz de reconhecer de maneira reversível carboidratos específicos sem modificá-los. A família das lectinas de leguminosas representa o grupo desta classe proteica mais bem estudada, em especial destaque a subtribo Diocleinae. As lectinas de Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade estrutural, porém o mesmo não se observa quanto às atividades biológicas. Esta variabilidade reside em detalhes que podem ser analisados em estudos baseados em estruturas. A sequência primária da lectina de C. grandiflora (ConGF) apresenta grande similaridade com lectinas do mesmo gênero, porém concentra o maior número de mutações representativas do gênero Dioclea, caracterizando-o como o subgênero de Canavalia mais próximo de Dioclea, e dentre as canavalias é a mais primitiva. A ConGF apresentou efeito relaxante em músculo liso de aortas de ratos endotelizadas, no entanto, os efeitos mostram-se fracos frente a outras lectinas de Diocleinae. A justificativa para este fato não reside em uma baixa similaridade estrutural, mas em pequenas mudanças na orientação de aminoácidos-chave, que se tornam responsáveis pela diversidade na ação biológica apresentada aqui, como deve ocorrer em outros fenômenos elicitados por lectinas. Para a lectina de Cymbosema roseum (CRLI), além de avaliado o efeito relaxante, foi observado o papel do cálcio extracelular nesta atividade. Surpreendentemente, o cálcio não foi definitivo para determinar o mecanismo de CRLI como dependente ou independente deste íon. Nossa investigação permitiu a formulação de uma hipótese em que esta lectina apresenta um duplo mecanismo de ativação da óxido nítrico sintetase endotelial (eNOS). A primeira via é baseada em um receptor específico na membrana do endotélio capaz de ativar a eNOS através da calmodulina. A segunda via é baseada na habilidade de ligação de CRLI ao heparano sulfato do glicocálice em um sítio diferente do CRD demonstrada por docking molecular, o que justifica a ativação mecânica da eNOS. Este proteoglicano é o principal candidato a mecanoreceptor da tensão de cisalhamento, principal fenômeno da manutenção do tônus vascular pela produção de NO. Dentre as proteínas de Diocleinae, foi ainda avaliada uma lectina do gênero Dioclea. D. sclerocarpa apresentou, como as outras lectinas deste trabalho, a habilidade de relaxar músculos lisos de aortas. Fenômeno que ocorreu com a dependência do endotélio via produção de óxido nítrico e com a participação do CRD de DSL. Tanto seu efeito como sua estrutura apresentam alto grau de semelhança com lectinas do mesmo gênero e um conjuntos de características corrobora para seu baixo efeito relaxante. DSL apresenta um desenho de CRD pouco favorável para esta atividade e, além disso, a presença de um glutamato na posição 205 demonstrou ser um fator determinante na regulação desta atividade. Este resíduo modula negativamente a capacidade relaxante frente a lectinas que do mesmo gênero que possuem um resíduo de aspartato nesta mesma posição.
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Aspectos bioquímicos, toxicológicos e alergênicos do látex da planta Calotropis procera (Ait.) R. BR. / Biochemical, Toxicological and Allergenic Aspects of the Latex from the Plant Calotropis procera (Ait.) R. Br.

Aguiar, Valéria Cavalcanti de January 2006 (has links)
AGUIAR, Valéria Cavalcanti de. Aspectos bioquímicos, toxicológicos e alergênicos do látex da planta Calotropis procera (Ait.) R. BR. 2006. 182 f. Tese (Doutorado em bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2006. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-07-28T14:13:28Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_vcaguiar.pdf: 2761351 bytes, checksum: d8feb2c818b400fccdafa1af61997ce7 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T14:46:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_vcaguiar.pdf: 2761351 bytes, checksum: d8feb2c818b400fccdafa1af61997ce7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T14:46:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_vcaguiar.pdf: 2761351 bytes, checksum: d8feb2c818b400fccdafa1af61997ce7 (MD5) Previous issue date: 2006 / The latex of the lactiferous plant Calotropis procera (Ait.) R. Br. is an important biologically active compound that displays relevant properties like antiinflammatory and antidiarrhea activities, although the latex has previously been shown to produce considerable toxic effects on animals. Another question is that it is not known yet whether the latex proteins from C. procera induce allergenic effects, just like the latex proteins from Hevea brasiliensis. The potential of the latex as a pharmaceutical, therefore, depends on separating the curative properties from the toxic and allergenic properties, but there has been a lack of scientific investigation in this area. The objective of the present study was to investigate biochemical, toxicological and allergenic aspects of the latex from the plant C. procera, through the study of in vitro and in vivo digestibility, evaluation of acute and subchronic toxicity by oral route, and analysis of immune response induction by subcutaneous and oral route of its fractions. The latex was fractionated into three distinct fractions according to their water solubility and molecular size. The fractions were named as: latex proteins (LP), corresponding to the major latex proteins; dialysis proteins (DP), representing low molecular size substances; and rubber latex (RL), which was highly insoluble in water. LP fraction was investigated in some biochemical aspects, like its protein profile by SDS-PAGE analysis and its amino acid composition determination. Latex proteins were also subjected to in vitro digestion with trypsin, chemotrypsin, pepsin and Streptomyces griseus protease and in vitro digestibility was evaluated by gel filtration and SDS-PAGE analysis. The in vivo digestibility of LP was analyzed when experimental animals ingested this fraction for 35 days. The volume uptake of LP was recorded daily and samples of fecal material from animals were collected, treated and submitted to SDS-PAGE analysis and radial double immunodifusion assays, with polyclonal antibodies raised against LP. In relation to toxicological aspects, LP fraction was orally administered to experimental animals for 35 days, to allow subchronic toxicity evaluation. Increases in body mass were recorded and blood samples were analyzed weekly. After the test period, the animals were sacrificed and a number of biochemical and physiological parameters determined. These included sera determinations of blood glucose, total cholesterol, HDL-cholesterol, triglycerides, hepatic function tests (total proteins, albumin, alanine aminotransferase – ALT and aspartate aminotransferase – AST), renal function tests (urea and creatinin), total and differential leukocyte counts in blood and peritoneal fluid and analysis of sera proteins by SDS-PAGE. Animals had internal key organs (liver, kidneys, spleen, small intestine, large intestine, pancreas and stomach) dissected and the relative fresh masses were determined. In the acute toxicity evaluation, LP fraction was administered by oral route to experimental animals and behavioral changes in animals were also monitored. With reference to allergenic aspects, immunological responses of latex from C. procera were investigated by oral and subcutaneous routes in mice. Anti-sera against LP, DP and RL fractions were assayed for IgG and IgA titration by ELISA, while IgE and IgG1 were accessed by passive cutaneous anaphylaxis (PCA) in rats and mice, respectively. Protein profiles of LP and RL fractions were analyzed by SDS-PAGE. Concerning biochemical aspects results, LP fraction possesses appreciable amount of protein, low content of sulphurated amino acids (methionine and cysteine) and a considerable number of amino acids (arginine, lysine, phenylalanine and tyrosine) that represent cleavage sites to animal proteolytic enzymes studied. LP fraction was digested by the action of pepsin, trypsin and chemotrypsin as revealed by gel filtration and SDS-PAGE analyses. The full LP digestion was easily achieved by S. griseus protease treatment. Rabbit polyclonal antibodies raised against LP failed to detect cross-reactive molecules in faeces of experimental rats. Similar patterns of electrophoresis were observed for the negligible amounts of protein observed in the fecal materials of control and test animals. With relation to subchronic toxicity evaluation results, no death was observed during the experiment. Experimental and control animals presented similar growth rate and key organs exhibited similar relative fresh masses. Hepatic and renal functions, sera glycemic and lipidemic parameters were determined to be at normal levels. Likewise, the electrophoretic protein patterns of sera from untreated and treated animals exhibited quite similar profiles. Uptake of latex proteins did not induce acute inflammation into peritoneal cavity of rats as determined by the total and differential leukocytes counts. The most relevant result discovered was an apparent proliferative effect of the latex proteins upon blood lymphocytes that tended to increase, whilst neutrophils remained at normal level. It should be emphasized that the experimental rats were normal in their behavior, morphological and biochemical aspects, indicating that it is unlikely that they were under any pathological or infectious condition. Therefore, the increment of lymphocytes population in the blood serum should be attributed to the staking effect of the latex proteins rather than any harmful event. LP fraction was unable of presenting acute toxicity in experimental animals, because no behavioral changes in animals were observed. Concerning allergenic aspects results, none of the fractions induced antibodies level increases when mice received latex fractions by oral route and thus, did not develop allergy. Nonetheless, anti-sera of mice sensitized with LP and RL by subcutaneous administration displayed considerable immunological response, while DP did not induce antibodies synthesis. IgG level augmented consistently against LP and RL, while IgA response was detected to LP solely. LP and RL induced very strong PCA reactions suggesting that both fractions would contain latex substances involved in allergenicity. Furthermore, protein analysis of LP and RL suggests that RL still retain residual proteins, co-precipitated with rubber, abundantly found in LP, that could explain its similar allergenicity. No IgG1 reaction was detected in any of the anti-sera tested. It can be concluded that latex proteins were partially susceptible to digestive proteolysis when accessed by in vitro assays, and were digested and absorbed, or were absorbed in its intact form, when ingested and analyzed by in vivo tests. Toxic events or lethality associated with latex, as described in the literature, are not related to LP fraction. Latex proteins produced partial proliferative effect upon mononuclear cells, mainly lymphocytes and did not induce an acute inflammatory response, when administered by oral route. Allergenic effects could be detected, by subcutaneous route, with LP and RL fractions, and were not observed by oral route. Evidences for an inducible tolerance acquired to latex proteins by oral route were provided. Latex proteins may act as immune stimulants. The proteins from the latex remain an interesting source of biologically active molecules that should be studied in detail for their structural, functional and applicative properties. / O látex da planta lactífera Calotropis procera (Ait.) R. Br. é um composto biologicamente ativo importante que apresenta propriedades relevantes como as atividades antiinflamatória e antidiarréica, embora já tenha sido previamente mostrado que esse látex produz efeitos tóxicos consideráveis em animais. Um outro fato é que não é sabido, ainda, se as proteínas do látex de C. procera produzem efeitos alergênicos, assim como as proteínas do látex de Hevea brasiliensis. O potencial do látex como um fármaco, por essa razão, depende da separação das propriedades curativas das propriedades tóxicas e alergênicas, mas não existe investigação científica nessa área. O presente estudo teve como objetivo investigar aspectos bioquímicos, toxicológicos e alergênicos do látex da planta C. procera, através do estudo da digestibilidade in vitro e in vivo, avaliação da toxicidade subcrônica e aguda por via oral e análise da indução de resposta imune pelas vias subcutânea e oral das suas frações. O látex foi fracionado em três frações distintas de acordo com a sua solubilidade em água e tamanho molecular. As frações foram assim denominadas: proteínas do látex (PL), correspondendo às principais proteínas do látex; proteínas da diálise (PD), representando as substâncias de baixa massa molecular; e borracha do látex (BL) que é altamente insolúvel em água. A fração PL foi investigada, com relação a alguns aspectos bioquímicos, como seu perfil protéico por PAGE-SDS e análise da composição de seus aminoácidos. As proteínas do látex também foram submetidas à digestão in vitro com as enzimas proteolíticas pepsina, tripsina, quimiotripsina e protease de Streptomyces griseus e a digestibilidade in vitro foi avaliada por cromatografia de filtração em gel ou PAGE-SDS. A digestibilidade in vivo de PL foi analisada quando animais experimentais ingeriram essa fração por 35 dias. O volume de PL consumido foi registrado diariamente e amostras das fezes dos animais coletadas, tratadas e submetidas à PAGE-SDS e ensaios de imunodifusão radial dupla de Ouchterlony, com anticorpos policlonais contra PL. Com relação aos aspectos toxicológicos, a fração PL foi oralmente administrada a animais experimentais por 35 dias, para a avaliação da toxicidade subcrônica. Aumentos na massa corpórea foram registrados e amostras sangüíneas foram analisadas semanalmente. Após o período experimental, os animais foram sacrificados e um número de parâmetros bioquímicos e fisiológicos foram determinados. Esses incluíram determinações séricas de glicose sangüínea, colesterol total, HDL-colesterol, triglicerídeos, testes da função hepática (proteínas totais, albumina, alanina aminotransferase – ALT e aspartato aminotransferase – AST), testes da função renal (uréia e creatinina), contagens total e diferencial de leucócitos sangüíneos e do fluido peritonial e análise das proteínas séricas por PAGE-SDS. Os animais tiveram seus órgãos vitais (fígado, rins, baço, intestino delgado, intestino grosso, pâncreas e estômago) dissecados e as massas frescas relativas foram determinadas. Na avaliação da toxicidade aguda, a fração PL foi administrada por via oral a animais experimentais e a monitoração de alterações comportamentais desses animais também foi realizada. Quanto aos aspectos alergênicos, respostas imunológicas do látex de C. procera foram investigadas pelas vias oral e subcutânea em camundongos. Anti-soros contra as frações PL, PD e BL foram analisados quanto a IgG e IgA por ELISA, enquanto IgE e IgG1 foram monitoradas por anafilaxia cutânea passiva (PCA) em ratos e camundongos, respectivamente. Os perfis protéicos das frações PL e BL foram analisados por PAGE-SDS. Com relação aos resultados dos aspectos bioquímicos, a fração PL possui uma quantidade apreciável de proteínas, baixo conteúdo de aminoácidos sulfurados (metionina e cisteína) e um número considerável de aminoácidos (arginina, lisina, fenilalanina e tirosina) que representam sítios de clivagem para as enzimas proteolíticas animais usadas. A fração PL foi digerida pela ação da pepsina, tripsina e quimiotripsina como revelado por análises de filtração em gel e PAGE-SDS. A digestão completa das proteínas do látex foi facilmente obtida pelo tratamento com a protease de S. griseus. Anticorpos policlonais de coelho produzidos contra PL não apresentaram reação cruzada com as moléculas presentes nas fezes dos ratos experimentais. Padrões semelhantes de eletroforese foram observados para as quantidades desprezíveis de proteína observadas nos materiais fecais dos animais controle e experimentais. Quanto aos resultados da avaliação da toxicidade subcrônica, nenhuma morte foi observada durante o experimento. Animais controle e experimentais apresentaram taxa de crescimento semelhante e os órgãos vitais exibiram massas frescas relativas similares. As funções hepática e renal, parâmetros glicêmicos e lipidêmicos séricos situaram-se em níveis normais. Os padrões protéicos eletroforéticos dos soros dos animais controle e experimental exibiram perfis muito similares. A fração PL não induziu inflamação aguda na cavidade peritonial dos ratos, como determinado pelas contagens total e diferencial de leucócitos. O resultado mais relevante detectado foi um aparente efeito proliferativo das proteínas do látex sobre os linfócitos sangüíneos que tenderam a aumentar, enquanto os neutrófilos permaneceram em nível normal. Deve ser enfatizado que os animais experimentais exibiram comportamento, aspectos morfológicos e bioquímicos normais, indicando ser improvável que os mesmos estivessem sob qualquer condição patológica ou infecciosa. Portanto, o incremento da população de linfócitos no soro sangüíneo deve ser atribuído a um efeito notável das proteínas do látex e não a qualquer evento prejudicial. A fração PL foi incapaz de induzir toxicidade aguda, pois nenhuma mudança comportamental foi observada nos animais experimentais. Com relação aos resultados dos aspectos alergênicos, nenhuma das frações induziu aumentos nos níveis de anticorpos, quando os camundongos receberam as frações do látex por via oral e, portanto, não desenvolveram alergia. Entretanto, anti-soros de camundongos sensibilizados com PL e BL por administração subcutânea apresentaram resposta imunológica considerável, e PD não induziu síntese de anticorpos. O nível de IgG aumentou consistentemente contra PL e BL, enquanto a resposta de IgA foi detectada unicamente contra PL. PL e BL induziram reações de PCA muito fortes, sugerindo que ambas as frações contêm substâncias do látex envolvidas na alergenicidade. Além disso, a análise protéica de PL e BL sugere que BL ainda retém proteínas residuais, co-precipitadas com a borracha, abundantemente encontradas na fração PL, que poderiam explicar as alergenicidades semelhantes. Nenhuma reação de IgG1 foi detectada em quaisquer dos anti-soros testados. Conclui-se que as proteínas do látex foram parcialmente susceptíveis à proteólise em ensaios in vitro e, ou foram digeridas e absorvidas, ou foram absorvidas íntegras, quando ingeridas em ensaios in vivo. Eventos tóxicos ou letalidade associados ao látex, como descritos na literatura, não estão relacionados com a fração PL. A fração PL produziu efeito proliferativo parcial sobre as células mononucleadas, principalmente linfócitos e não induziu resposta inflamatória aguda, quando administrada pela via oral. Efeitos alergênicos puderam ser detectados, por via subcutânea, com as frações PL e BL, e não foram observados por via oral. Evidências para uma possível tolerância sistêmica às proteínas do látex por via oral foram fornecidas. As proteínas do látex podem atuar como imunoestimulantes. As proteínas do látex permanecem uma fonte interessante de moléculas biologicamente ativas que devem ser estudadas em detalhe quanto às suas propriedades estruturais, funcionais e aplicativas.
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Mudanças na expressão de proteínas induzidas por estresses isolados e combinados de seca e temperatura elevada de folhas de cajueiro. / Protein expression changes as induced by specific and combined heat and drought stressess in cashew leaves

Lima, Cristina Silva de January 2009 (has links)
LIMA, C. S. Mudanças na expressão de proteínas induzidas por estresses isolados e combinados de seca e temperatura elevada de folhas de cajueiro. 2009. 76 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-24T20:08:53Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_cslima.pdf: 1663813 bytes, checksum: bd93079c0a6fc8144b2f383072066d5c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-15T18:20:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_cslima.pdf: 1663813 bytes, checksum: bd93079c0a6fc8144b2f383072066d5c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-15T18:20:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_cslima.pdf: 1663813 bytes, checksum: bd93079c0a6fc8144b2f383072066d5c (MD5) Previous issue date: 2009 / An important mechanism for survival cell, carried out by the plant species response to adverse or stressful situations, is the accumulation of proteins,especially the soluble proteins as well as amino acids and other nitrogen compounds. In this study, was determined distribution of nitrogen compounds during heat stress in different parts of the plant. It can be observed that with increasing temperature of 25 °C to 45 °C, there was greater accumulation of soluble fraction in leaves (40%), while the increase in the insoluble fraction was approximately 20% while the accumulation of proline was about five times in the leaves of cashew while this increase in the roots was only once. The concentration of total free amino acids was high both in leaves (5%) and roots (9%). The content of ammonium has increased both in roots (30%) and leaves (60%) with increasing temperature of 25 °C to 45 °C. Increasing the protein content in the cashew leaves, induced by heat is related to the mobilization of nitrogen reserves from roots and stems and/or protein synthesis in leaf tissue. Based on these observations, in addition to protein deposition during heat stress, we identified specific patterns of protein expression of cashew against specific and combined to abiotic stresses. The protein pattern in cashew leaves was compared by twodimensional electrophoresis (2D) after to the treatments: control conditions, irrigated with Hoagland & Arnon solution diluted to ¼, or subjected to drought by suspension of irrigation for 20 days, and then both the control seedlings as the pre-exposed to drought were subjected to 25 °C or 45 °C. The protein expression changes were in 80 proteins leaves of cashew. In the condition of heat, 7 protein increased the expression and 3 proteins were apparently synthesized de novo. In dry condition, 10 proteins increased their expression and 2 proteins were identified as plastocyanin and ferredoxin. The analysis also showed that 17 proteins were altered by the effect of the stress combination and as well as heat stress, 14 increased expression and 2 were found only in the stress combination. Thus, our results suggest that the stresses combination should be considered as a new state of abiotic stress in plants, and not only as a combination of abiotic factors. / Um importante mecanismo de sobrevivência celular, realizada pelas espécies vegetais em resposta a situações adversas ou estressantes, é o acúmulo de proteínas, principalmente as solúveis, além de aminoácidos e outros compostos nitrogenados. Nesse estudo, foi determinada distribuição de compostos nitrogenados durante o estresse térmico nas diversas partes da planta. Pode-se observar que com o aumento da temperatura de 25 °C para 45 °C, houve maior acumulo da fração solúvel em folhas (40%), enquanto que o aumento na fração insolúvel foi de aproximadamente 20% ao passo que o acúmulo de prolina foi de cerca de cinco vezes nas folhas de cajueiro enquanto que nas raízes este aumento foi de apenas uma vez. A concentração de aminoácidos livres totais foi elevada tanto nas folhas (5%) como nas raízes (9%). O conteúdo de amônio sofreu acréscimo tanto nas raízes (30%) como nas folhas (60%) com a elevação da temperatura de 25 °C para 45 °C. O aumento do conteúdo de proteínas de folhas de cajueiro, induzido pelo calor está relacionado com a mobilização de reservas nitrogenadas a partir de raízes e caules e/ou com síntese protéica no tecido foliar. Baseado nessas observações, além da deposição protéica durante o estresse térmico, nós identificamos padrões específicos de expressão protéica do cajueiro frente aos estresses abióticos isolados e combinados. O padrão protéico de folhas de cajueiro foi comparada por eletroforese bi-dimensional (2D) após os tratamentos: condição controle, irrigadas com solução Hoagland & Arnon diluída a ¼, ou submetidas à seca por suspensão da rega por 20 dias, e posteriormente tanto as plântulas controle como as pré-expostas à seca foram submetidas a 25 °C ou 45 °C. As mudanças na expressão de proteínas foram observadas em 80 proteínas de folhas de cajueiro. Na condição de calor, 7 proteínas aumentaram sua expressão e 3 foram aparentemente sintetizadas de novo. Na condição de seca, 10 proteínas aumentaram sua expressão e 2 proteínas foram identificadas como plastocianina e ferredoxina. A análise também mostrou que 17 proteínas foram modificadas pelo efeito da combinação dos estresses e assim como no estresse térmico, 14 proteínas aumentaram sua expressão e 2 foram encontradas somente na combinação dos estresses. Assim, nossos resultados sugerem que a combinação dos estresses deve ser considerada como um novo estado de estresse abiótico em plantas, e não simplesmente uma combinação de fatores abióticos.
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Análise Proteômica da Deposição de Proteínas em Sementes em Desenvolvimento e Suspensões Celulares Embriogênicas de Feijão-de-Corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.] / Proteomic Analysis of Protein Deposition in Developing Seeds and Embryogenic Cell Suspensions of Cowpea (Vigna unguiculata)

Nogueira, Fábio César Sousa January 2007 (has links)
NOGUEIRA, F. C. S. Análise Proteômica da Deposição de Proteínas em Sementes em Desenvolvimento e Suspensões Celulares Embriogênicas de Feijão-de-Corda [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. 2007. 115 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2015-01-20T17:44:07Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_fcsnogueira.pdf: 6829018 bytes, checksum: 30255479dbcd955131fd948802974d2e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-27T19:30:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_fcsnogueira.pdf: 6829018 bytes, checksum: 30255479dbcd955131fd948802974d2e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-27T19:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_fcsnogueira.pdf: 6829018 bytes, checksum: 30255479dbcd955131fd948802974d2e (MD5) Previous issue date: 2007 / Cowpea (Vigna unguiculata) is a leguminous plant highly utilized by low-income earners of Northeastern Brazil. However, proteins found in the crop are highly deficient in sulfur-containing amino acids. In line with this, improvement of nutritional quality of cowpea seeds has been one of the major goals of breeding programs of the crop. A starting point in this respect is a concerted effort to study the basic biochemical and physiological aspects of the development of cowpea seed. Besides determining the protein deposition pattern during the development of zygotic embryos and somatic embryos of the species, we set out to identify genes with specific pattern of expression during the two processes which will be of immense importance in cowpea breeding. Using the technique of two-dimensional electrophoresis (2D-PAGE), we compared the protein deposition pattern of developing cowpea seeds with 10 days after anthesis (DAA) and mature seeds and embryogenic cell suspension (ECS). From each developmental stage and for ECS, we obtained proteomic reference maps that were highly reproducible within the pH of 3-10 and 4-7. Various spots were selected based on quantity or relative volume and rate of expression. About 800 (for seeds development) and 130 (for ECS) proteins spots up- or down-regulated, remained constantly expressed and were specific for each developmental stage. The spots were removed from the 2-D gels, processed, and subjected to mass spectrometry. Some strategies like peptide mass fingerprinting (PMF) and non-processed data search (MS/MS ion search) were employed for protein identification. Over 400 proteins in seeds and over 70 proteins in ECS were identified. A large number of these proteins were found to be primary metabolism proteins, energy, protein destination and storage and defense proteins and others related to stress. / O feijão-de-corda (Vigna unguiculata) é uma leguminosa bastante utilizada na alimentação de famílias de baixa renda da região nordeste do Brasil. Embora suas sementes sejam ricas em proteínas, estas são deficientes em aminoácidos sulfurados na sua composição. Dessa forma, um aumento na qualidade nutricional dessas sementes tem sido um dos principais objetivos dos programas de melhoramento genético para essa espécie. Além de determinar o padrão de deposição de proteínas durante o desenvolvimento de embriões zigóticos e somáticos, nós pretendemos identificar genes com padrões específicos de expressão durante a embriogênese com a finalidade de utilizá-los em programas de melhoramento genético. Utilizando a técnica de eletroforese bidimensional (2D-PAGE) foi comparado o padrão protéico de sementes em desenvolvimento com 10 dias após a antese (DAA), sementes maduras e de suspensões celulares embriogênicas (SCE) obtidas de calos embriogênicos friáveis (CEF) de feijão-de-corda. Para cada estágio de desenvolvimento da semente e para as SCE foram obtidos mapas de referência proteômicos altamente reprodutíveis numa faixa de pH de 3-10 e 4-7. Vários “spots” foram selecionados baseando-se na quantidade ou volume relativo de cada “spot” e na taxa de expressão. Cerca de 800 (para sementes em desenvolvimento) e 130 (para SCE) “spots” protéicos regulados para cima, para baixo, que se mantêm constantes ou que são específicos durante o desenvolvimento foram retirados dos géis 2D para análise por espectrometria de massa. Algumas estratégias foram utilizadas para a identificação das proteínas, como: PMF (peptide mass fingerprinting) e busca através de dados não processados (MS/MS ion search). Dessa forma, cerca de 400 proteínas foram identificadas em sementes e cerca de 70 proteínas foram identificadas para SCE. A maioria das proteínas fram classificadas como proteínas do metabolismo primário, energético, proteínas de destinação/proteínas de reserva e proteínas de defesa ou relacionadas a algum tipo de estresse.
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Potencial anti-helmíntico de extratos proteicos de Leucaena leucocephala (Linn.) (Fabaceae) e Spigelia anthelmia (Linn.) (Loganiaceae) contra Haemonchus contortus (Rudolphi, 1803) / Anti-helminth potential of protein extracts of Leucaena leucocephala (Linn.) (Fabaceae) and Spigelia anthelmia (Linn.) (Loganiaceae) against Haemonchus contortus (Rudolphi, 1803)

ARAÚJO, Sandra Alves de 04 April 2017 (has links)
Submitted by Daniella Santos (daniella.santos@ufma.br) on 2017-08-07T12:56:26Z No. of bitstreams: 1 Sandra Alves.pdf: 2374477 bytes, checksum: bf34f6a346f4775e29afabb54e505859 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T12:56:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra Alves.pdf: 2374477 bytes, checksum: bf34f6a346f4775e29afabb54e505859 (MD5) Previous issue date: 2017-04-04 / CAPES / FAPEMA / Haemonchus contortus (RUDOLPHI, 1803) is a species of gastrointestinal nematode of great importance due to the damages caused in livestock. Natural products have been studied as an alternative to the use of commercial anthelmintics, responsible for the development of resistance in parasites. This study has as main objective to verify the anthelmintic activity of protein extracts of Leucaena leucocephala (Linn.) and Spigelia anthelmia (Linn.) against the nematode H. contortus. The present work was divided in two chapters. In chapter 1, L. leucocephala seeds were ground and the resulting flour, homogenized in 100 mM sodium phosphate buffer, pH 7. The suspension obtained was centrifuged (15,000 x g at 4 ° C for 30 min). After centrifugation, the obtained supernatant was denominated: Total extract (TE), cotyledon extract (CE) and shell extract (SE). The protein content, proteolytic, protease inhibitory, chitinolytic and anthelmintic activity of L. leucocephala extracts on H. contortus were verified. For each treatment, the effective concentration (EC) of the samples on the nematode was calculated. The extracts TE and CE presented a high protein content, besides having proteolytic, chitinolytic and protease inhibitory activity and inhibiting egg hatching (EC50 0.33 and 0.48 mg mL -1, respectively). However, L. leucocephala samples did not inhibit the larvae of H. contortus. It is concluded that proteins are correlated with the action of L. leucocephala on H. contortus. In Chapter 2, the parts of S. anthelmia were separated into leaves, roots and stem and, washed with distilled water, lyophilized and subsequently crushed. Subsequently the proteins were solubilized in 100 mM sodium phosphate buffer, pH 7. The suspension was centrifuged (15,000 x g at 4 ° C for 30 min) and the supernatant collected for analysis. From the ammonium sulfate precipitation (0-90%) of S. anthelmia extracts and membrane dialysis with 14 kDa molecular exclusion, protein fractions were obtained and denominated: Leaf protein fraction (LPF), stem protein fraction (SPF), root protein fraction (RPF). The samples were submitted to analysis by high performance liquid chromatography for the detection of compounds of secondary metabolism and mass spectrometry to identify possible bioactive proteins present. The protein content, proteolytic, protease inhibitory, chitinolytic, haemagglutinating and anthelmintic action of S. anthelmia protein fractions on H. contortus were verified. For each treatment, the effective concentration (EC) of the samples on the nematode was calculated. Fractions of S. anthelmia had an inhibitory effect on egg hatching, and this effect was more pronounced by LPF (EC50 0.17 mg mL -1). In addition, greater inhibition of larvae by LPF and RPF (EC50 0.27 and 0.25 mg mL -1, respectively) was observed. The protein fractions of root, stem and leaf of S. anthelmia were effective on the inhibition of larval migration (EC50 0.11, 0.14 and 0.21 mg mL -1, respectively). No secondary metabolite compounds were detected in the S. anthelmia fractions, while several proteins with anthelmintic potential were identified by mass spectrometry. It is concluded that proteins are correlated with the action of S. anthelmia on H. contortus, having potential for the development of anthelmintic products. Thus, the bioactive proteins present in L. leucocephala and S. anthelmia have promising pharmacological properties for the control of the H. contortus nematode. / Haemonchus contortus (RUDOLPHI, 1803) é uma espécie de nematoide gastrintestinal de grande importância devido aos prejuízos que causa na pecuária. Produtos naturais vêm sendo estudados como alternativa ao uso de anti-helmínticos comerciais, responsáveis pelo desenvolvimento de resistência nos parasitos. Este estudo tem como principal objetivo verificar a atividade anti-helmíntica de extratos proteicos de Leucaena leucocephala (Linn.) e Spigelia anthelmia (Linn.) contra o nematoide H. contortus. O presente trabalho foi dividido em dois capítulos. No capítulo 1, sementes de L. leucocephala foram trituradas e a farinha resultante, homogeneizada em tampão fosfato de sódio 100 mM, pH 7. A suspenção obtida foi centrifugada (15.000 x g a 4 ºC por 30 min). Após centrifugação, o sobrenadante obtido foi denominado: Extrato total (TE), extrato de cotilédone (CE) e extrato de casca (SE). O teor de proteínas, atividade proteolítica, inibitória de protease, quitinolítica e ação anti-helmíntica dos extratos de L. leucocephala sobre H. contortus foram verificados. Para cada tratamento foi calculada a concentração efetiva (EC) das amostras sobre o nematoide. Os extratos TE e CE apresentaram elevado teor proteico, além de possuírem atividade proteolítica, quitinolítica e inibitória de protease e inibirem a eclosão dos ovos (EC50 0,33 e 0,48 mg mL-1, respectivamente). No entanto, amostras de L. leucocephala não inibiram o desembainhamento larvar de H. contortus. Conclui-se que proteínas estão correlacionadas com a ação de L. leucocephala sobre H. contortus. No capítulo 2, as partes de S. anthelmia foram separadas em folhas, raízes e caule e, lavadas com água destilada, liofilizadas e subsequentemente trituradas. Posteriormente as proteínas foram solubilizadas em tampão fosfato de sódio 100 mM, pH 7. A suspensão foi centrifugada (15.000 x g a 4 ºC por 30 min) e o sobrenadante recolhido para análises. A partir da precipitação com sulfato de amônio (0-90%) dos extratos de S. anthelmia e diálise em membrana com exclusão molecular de 14 kDa, frações proteicas foram obtidas e denominadas: Fração proteica de folha (LPF), fração proteica de caule (SPF), fração proteica de raiz (RPF). As amostras foram submetidas a análise por cromatografia líquida de alta eficiência para detecção de compostos do metabolismo secundário e, espectrometria de massas para identificação de possíveis proteínas bioativas presentes. O teor de proteínas, atividade proteolítica, inibitória de protease, quitinolítica, hemaglutinante e ação anti-helmíntica das frações proteicas de S. anthelmia sobre H. contortus foram verificados. Para cada tratamento foi calculada a concentração efetiva (EC) das amostras sobre o nematoide. As frações de S. anthelmia apresentaram efeito inibitório sobre a eclosão dos ovos, sendo este efeito mais pronunciado pela LPF (EC50 0,17 mg mL-1). Além disso, foi verificada maior inibição do desembainhamento larvar por LPF e RPF (EC50 0,27 e 0,25 mg mL-1, respectivamente). As frações proteicas de raiz, caule e folha de S. anthelmia foram efetivas sobre a inibição da migração larvar (EC50 0,11; 0,14 e 0,21 mg mL-1, respectivamente). Não foram detectados compostos do metabolismo secundário nas frações de S. anthelmia, enquanto diversas proteínas com potencial anti-helmíntico foram identificadas por espectrometria de massas. Conclui-se que proteínas estão correlacionadas com a ação de S. anthelmia sobre H. contortus, tendo potenciais para o desenvolvimento de produtos anti-helmínticos. Assim, as proteínas bioativas presentes em L. leucocephala e S. anthelmia possuem propriedades farmacológicas promissoras para o controle do nematoide H. contortus.
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Concentrado proteico de semente de abóbora (Cucurbita moschata) na nutrição do jundiá / Protein concentrate pumpkin seed (Cucurbita moschata) in silver catfish nutrition

Lovatto, Naglezi de Menezes 20 February 2015 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This study aimed to evaluate the effects of adding protein sources coming from the pumpkin seed in growth, activity of proteolytic digestive enzymes and metabolic responses of silver catfish (Rhamdia quelen) fed with increasing replacement of fishmeal by pumpkin seed meal (PSM) or phosphorylated protein concentrate of pumpkin seed (PPCPS). For the development of protein concentrate, the method was optimized by statistical methodology of response surface (MRS) and central composite rotational design (CCRD). The CCRD pointed as the highest yield 50.04%, using 4% sodium trimetaphosphate (STMP) at pH 4.5. Those same experimental conditions the protein content was 62.56%. Subsequently, the PSM and PPCPS were used as substitutes in silver catfish protein diets. For eight experimental weeks, 400 silver catfish, with a body mass of 24 ± 0.46 g were divided into 24 fiber glass, fed five experimental diets in four replicates. For the data, four orthogonal contrasts were applied: Control Diet vs. PSM Diets, Control Diet vs. PPCPS Diets, Control Diet vs. Other Diets and PSM Diets vs. PPCPS Diets. Treatment groups replaced 25 to 50 percent protein fishmeal by PSM and PPCPS. Silver catfishes were evaluated for growth parameters, digestive indices, activities of digestive enzymes trypsin and chymotrypsin, as well as metabolic parameters in plasma and liver. The fish growth parameters showed a significant difference (P <0.05) for final body weight at the end of the trial period in contrast Control Diet vs. PSM Diets. Feed conversion was higher for fish that received 25% or 50% PPCPS than those that received PSM (P <0.05). The fish receiving the Control Diet had the lowest digestive-somatic index in contrasts Control Diet vs. PPCPS Diets and Control Diets vs. Other Diets. The control fish treatments showed lower activity of trypsin and chymotrypsin enzymes than fish fed the PSM diet (P <0.05). Also, less chymotrypsin activity was observed in the fish that received the PSM diet (P <0.05), in contrast PSM Diets vs. PPCPS Diets. The fish that received the PPCPS Diets had higher protein efficiency rate than fish fed the FSA (P <0.01). For albumin in plasma, low contents were found in fish that received Control Diet (P <0.05). The ALAT activity was high in fish that received Control Diet (P <0.05), in contrasts Control Diet vs. PSM Diets, Control Diet vs. PPCPs Diets and Control Diet vs. Other Diets. The ALP was most active in fish that received the PPCPS diets (P <0.05), in contrasts Control Diet vs. PPCPS Diets and Control Diet vs. Other Diets. Thus, it can be concluded that the replacement of fishmeal protein by 25 or 50% PPCPS not alter growth and improve the feed conversion catfish and protein efficiency ratio, without affecting the activity of digestive enzymes, metabolic parameters intermediate and liver of silver catfish, can be used in silver catfish nutrition. / O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da adição de fontes proteicas advindas da semente de abóbora no crescimento, atividade de enzimas digestivas proteolíticas e respostas metabólicas de jundiás (Rhamdia quelen) alimentados com substituições crescentes de farinha de peixe por farelo de semente de abóbora (FSA) ou concentrado proteico fosforilado de semente de abóbora (CPPFSA). Para o desenvolvimento do concentrado proteico, o método foi otimizado pela metodologia estatística de superfície de resposta (MSR) e delineamento central composto rotacional (DCCR), que apontou como maior rendimento 50,04%, utilizando 4% de trimetafosfato de sódio (STMP) em pH 4,5. Cujo conteúdo proteico foi 62,56%. Posteriormente, o FSA e o CPPFSA foram utilizados como substitutos proteicos nas dietas de jundiás. Durante oito semanas experimentais, 400 jundiás, com massa corporal de 24 ± 0,46 g foram distribuídos em 24 caixas, alimentados com cinco dietas experimentais em quatro repetições. Para análise dos dados, quatro contrastes ortogonais foram aplicados: Dieta Controle vs.. Dietas FSA, Dieta Controle vs.. Dietas CPPFSA, Dieta Controle vs.. Demais dietas e Dietas FSA vs.. Dietas CPFFSA. Os grupos de tratamento substituíam 25 e 50 por cento de proteína da farinha de peixe pelo FSA e CPPFSA. Foram avaliados parâmetros de crescimento, índices digestórios, atividades das enzimas digestivas tripsina e quimotripsina, bem como parâmetros metabólicos em plasma e fígado. Os parâmetros de crescimento dos peixes mostraram diferença significativa (P < 0,05) para massa corporal final ao final do período experimental no contraste Controle vs. dietas FSA. A conversão alimentar foi superior para os peixes que receberam 25% ou 50% CPFFSA em comparação àqueles que receberam FSA (P < 0,05). Os peixes que receberam a dieta Controle apresentaram menor índice digestivo-somático nos contrastes Controle vs. dietas CPFFSA e Controle vs. demais dietas. A atividade das enzimas tripsina e quimotripsina foram menores nos peixes do tratamento Controle, quando comparada aos peixes que receberam as dietas FSA (P < 0,05). Menor atividade de quimotripsina também foi observada nos peixes que receberam as dietas FSA (P< 0,05), no contraste dietas FSA vs. dietas CPFFSA. Os peixes que receberam as dietas CPPFSA apresentaram maior taxa de eficiência proteica do que os peixes que receberam dietas contendo FSA (P< 0.01). Para albumina no plasma, os menores conteúdos foram encontrados nos peixes da dieta Controle (P<0.05). A atividade da enzima ALAT foi maior nos peixes que receberam a dieta Controle (P<0.05), nos contrastes dieta Controle vs. dietas FSA, dieta Controle vs. dietas CPFFSA e dieta Controle vs. demais dietas. A ALP apresentou maior atividade nos peixes que receberam as dietas CPFFSA (P<0.05), considerando os contrastes dieta Controle vs. dietas CPFFSA e dieta Controle vs. demais dietas. Dessa maneira, pode-se concluir que a substituição da proteína da farinha de peixe por 25% ou 50% de CPFFSA não altera o crescimento e promove melhoria na conversão alimentar de jundiá e taxa de eficiência proteica, sem prejudicar atividade de enzimas digestivas, parâmetros metabólicos intermediários e hepáticos dos jundiás, podendo ser utilizado na nutrição do jundiá.
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Caracterização bioquímica e funcional de isolados proteicos e genótipos de excelência de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] / Biochemical characterization and functional protein isolates and genotypes of excellence cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp.]

Medeiros, Jackeline Lima de January 2013 (has links)
MEDEIROS, Jackeline Lima de. Caracterização bioquímica e funcional de isolados proteicos e genótipos de excelência de feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.]. 95 f. : Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-05-25T12:56:25Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jlmedeiros.pdf: 790389 bytes, checksum: 4fadbf512e230d0abc973e12db6c63af (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-05T19:55:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jlmedeiros.pdf: 790389 bytes, checksum: 4fadbf512e230d0abc973e12db6c63af (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T19:55:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jlmedeiros.pdf: 790389 bytes, checksum: 4fadbf512e230d0abc973e12db6c63af (MD5) Previous issue date: 2013 / The cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp) is an important plant due to their nutritional potential, revealed to mainly high protein content. The highlight proteins present in the functional properties (technological) and interest in new sources of protein at affordable costs leads to increasing interest in studying the legume. Thus, the present study aimed to obtain protein isolates from bean cowpea genotypes, as the biochemical and functional characterization of these isolates and their seeds. The results showed the seeds are good sources of protein (23.19 to 24.02%), fiber (17.75 to 19.78%) and have a low lipid content (1.67%). The protein isolated obtained showed high purity (above 90%) and yield (35.11 and 38.12%). Both isolated as seeds not proved toxic but exhibited trypsin inhibitor (24.2 to 28.2 IU), chymotrypsin (26.66 to 32.17 IU) and lectin (80.000-320.000 IU). The digestibility of isolated (63.23 and 63.81%) was higher than the seeds (50.07 to 54.37%). The predominant proteic fraction was globulin, with the highest concentration in the isolates. The seeds and isolated solubilities presents U-shaped, with lower solubility at the isoelectric point. The isolated protein showed greater capacity for absorb water (2.41 to 2.44 ml/g sample), oil (from 2.38 to 2.81 ml / g sample) and gel concentrations (8-10%). Already seeds showed higher foaming (52.66 to 57.89%). / O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] é uma importante leguminosa devido ao seu potencial nutricional, revelado principalmente pelo alto teor de proteínas. As proteínas apresentam destaque nas propriedades funcionais (tecnológicas) e o interesse por novas fontes proteicas a custos acessíveis, leva ao crescente estudo das leguminosas. Assim, o presente trabalho objetivou a obtenção de isolados proteicos de dois genótipos de feijão-caupí (Cauamé e Tumucumaque), bem como a caracterização bioquímica e funcional destes isolados e de suas sementes. Os resultados mostraram que as sementes dos genótipos estudados são boas fontes de proteínas (23,19 a 24,02%), fibras (17,75 a 19,78%) e apresentam baixo teor de lipídeos (1,67%). Os isolados proteicos obtidos apresentaram elevado teor proteico (> 90%) e rendimento (35,11 e 38,12%, respectivamente Tumucumaque e Cauamé). Tanto os isolados como as sementes não se mostraram tóxicos, mas apresentraram inibidores de tripsina (24,2 a 28,2 UI/ µg de proteína), quimiotripsina (26,66 a 32,17 UI/ µg de proteína) e lectina (80.000 a 320.000 UI/ µg de proteína). A digestibilidade dos isolados (63,23 a 63,81%) foi superior a das sementes (50,07 a 54,37%). A fração proteica predominante foi a globulina, com maior concentração nos isolados. A solubilidade das sementes e isolados apresenta-se em formato de U, com menor solubilidade no ponto isoelétrico. Os isolados proteicos apresentaram melhor capacidade de absorção de água (2,41 a 2,44 ml/g de amostra), de óleo (2,38 a 2,8 1ml/g de amostra) e formação de gel (8 a 10%). Já as sementes apresentaram maior formação de espuma (52,66 a 57,89%). Assim, pode-se concluir que os isolados proteicos obtidos desse genótipo são promissores para aplicação nutricional, por apresentarem elevado teor proteico (> 90%), razoável digestibilidade (>60%) e perfil de aminoácidos. Da mesma forma, são promissores para a aplicação tecnológica, uma vez que se destacaram nas propriedades de solubilidade, capacidade de absorção de água e de óleo e formação de gel. Assim, os isolados proteicos podem ser utilizados como ingredientes de produtos alimentícios, contribuindo com o aumento do valor nutricional dos alimentos e agregando valor aos genótipos melhorados do feijão-caupi.
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Concentrado proteico de farelo de arroz como substituto da farinha de peixe em dietas para juvenis de jundiá (rhamdia quelen) / Rice meal protein concentrate as replacement of fish meal in diets for silver catfish juvenile (Rhamdia quelen)

Loureiro, Bruno Bianch 24 February 2016 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Our study tested the inclusion of rice meal protein concentrate (RMPC) in diets containing fish meal, to reduce their use in silver catfish (Rhamdia quelen) nutrition. Were evaluated growth parameters, body composition, deposition of nutrients, metabolic responses and digestive enzymes activities. RMPC was obtained from the Fish Farming Laboratory of the Federal University of Santa Maria, RS. During 45 days, 500 silver catfish juvenile with initial weight of 6.28 ± 0.12 g were average and randomly divided into 20 cylindrical tanks (280 L, each), connected tothermoregulated water recirculation system, two biological filters and ultraviolet filter. The fish were fed three times daily at 9: 00, 13h: 00 to 17h: 00 at apparent satiety, with diets increasing levels of inclusion of RMPC (10, 15, 20, and 30%). At end of the study, we evaluated growth parameters, body composition, nutrient deposition, digestive indices, activities of trypsin and chymotrypsin enzymes, blood parameters and liver. The data were submitted to normality test and analysis of variance and the means were compared with the Control diet by Dunnett test, except weight gain (WG) and specific growth rate (SGR), which were calculated by analysis of cubic regression. Differences were considered significant at probability level of P <0.05. There were no mortalities during the experimental period. Significant differences in body composition, feed conversion, activity of digestive enzymes and plasma parameters of the fish fed with the experimental diets were observed. Significant differences were found for lower final weight and condition factor in fish fed the RMPC10 and RMPC15 diets, as well as lower body protein deposition and daily feed intake in RMPC10 diet. WG and SGR parameters (P = 0.003 and P = 0.004) set up to the cubic regression model, indicating the optimal level of inclusion of RMPC in the diet for maximum growth (25.01% and 25.07% respectively). Fish fed the RMPC30 diet had lower protein efficiency ratio (PER) and hepatossomatic index (HSI) as well as increased activity enzyme alanine aminotransferase. Based on the results obtained, it can be seen that the inclusion of 20% RMPC in diet did not change any of the parameters analyzed in this study, showing growth performance numerically superior to the control and the other diets, demonstrating significant nutritional quality of RMPC. Therefore, adding 20% of RMPC can be used in diets for silver catfish, as an alternative protein ingredient to reduce the use of fishmeal. / Nosso estudo testou a inclusão do concentrado proteico de farelo de arroz (CPFA) em dietas contendo farinha de peixe, visando reduzir seu uso na alimentação de jundiás (Rhamdia quelen). Foram avaliados parâmetros de crescimento, composição corporal, deposição de nutrientes, respostas metabólicas e atividades de enzimas digestivas. O CPFA foi obtido do Laboratório de Piscicultura da Universidade Federal de Santa Maria, RS. Durante 45 dias, 500 juvenis de jundiá com peso médio inicial de 6,28 ± 0,12 g foram distribuídos aleatoriamente em 20 tanques circulares de polietileno (280 L cada), conectados a um sistema de recirculação de água termorregulado dotado de tanque de decantação, dois filtros biológicos, reservatório de água e filtro ultravioleta. Os peixes foram alimentados três vezes ao dia às 9h:00, 13h:00 e 17h:00, até a saciedade aparente com dietas contendo níveis crescentes de inclusão do CPFA (10, 15, 20, e 30%). Ao final do estudo, foram avaliados parâmetros de crescimento, composição corporal, deposição de nutrientes, índices digestórios, atividades das enzimas tripsina e quimotripsina, parâmetros plasmáticos e hepáticos. Os dados foram submetidos a teste de normalidade e análise de variância e as médias foram comparadas com o controle por teste de Dunnett, exceto para ganho de peso (GP) e taxa de crescimento específico (TCE) que foram calculados por análise de regressão cúbica. As diferenças foram consideradas significativas a um nível de probabilidade de P<0,05. Não foram observadas diferenças significativas para composição corporal, conversão alimentar aparente, atividade de enzimas digestivas e parâmetros plasmáticos dos peixes alimentados com as dietas experimentais. Foram encontrados menor peso final e fator de condição nos peixes alimentados com as dietas CPFA10 e CPFA15, além da menor deposição de proteína corporal e consumo diário de ração na dieta CPFA10. Os parâmetros de crescimento GP e TCE ajustaram-se (P = 0,003 e P = 0,004) ao modelo de regressão cúbica, indicando o nível ideal de inclusão do CPFA na dieta para o máximo crescimento (25,01% e 25,07%, respectivamente). Os peixes alimentados com a dieta CPFA30 apresentaram menor taxa de eficiência proteica e índice hepatossomático, além de maior atividade da enzima alanina aminotransferase. Com base nos resultados obtidos, é possível observar que a inclusão de 20% de CPFA na dieta não alterou nenhum dos parâmetros analisados neste estudo, demonstrando desempenho de crescimento numericamente superior ao controle e as demais dietas, demonstrando a significativa qualidade nutricional do CPFA. Portanto, a inclusão de 20% de CPFA pode ser utilizada em dietas para jundiás, como ingrediente proteico alternativo para reduzir o uso da farinha de peixe.

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