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Orientador : Raphael Lucio Andreatti Filho / Abstract: Native intestinal lactic acid bacteria from poultry and mammals provide an adverse environment to development of pathogenic microorganisms. Recently, beyond its use as probiotics, the application in food conservation has been researched. Species like Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Pediococcus e Leuconostocs are used in fermented food, presenting antagonistic properties to same species and/or pathogenic bacterias. Lactobacillus spp. species used in probiotics and competitive exclusion products have benefic effects due direct action on particular groups of pathogenic microorganisms. Just by these advantages, lactic acid bacteria have been exhaustively studied allowing the detection of antibiose promoters substances as organic acids, bacteriophags, hydrogen peroxide, and bacteriocins. In the present study, 474 lactic acid bacteria from Lactobacillus species were isolated from the crop and ceca of chicken. Two hundred sixty five samples presented inhibitory activity against indicator microorganisms (Gram-positive and Gram-negative bacterias) using the spot-on-the-lawn assay. Fifty three samples identified as Lactobacillus reuteri, L. salivary and L. spp. confirmed inhibition of Enterococcus faecalis, E. faecium, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and Salmonella spp. but not on Lactobacillus casei, L. delbrureckii, L. fermentum and L. helveticus by bacteriocins action by antagonistic the simultaneons methods of well diffusion assay on anaerobiosis. The antagonism was detected by inhibition zones to various indicators microorganisms. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T18:06:46Z : No. of bitstreams: 1 lima_et_me_botfmvz.pdf: 1900368 bytes, checksum: 0ed40eb2152ee863edc771400939912f (MD5) / Native intestinal lactic acid bacteria from poultry and mammals provide an adverse environment to development of pathogenic microorganisms. Recently, beyond its use as probiotics, the application in food conservation has been researched. Species like Lactobacillus, Lactococcus, Streptococcus, Pediococcus e Leuconostocs are used in fermented food, presenting antagonistic properties to same species and/or pathogenic bacterias. Lactobacillus spp. species used in probiotics and competitive exclusion products have benefic effects due direct action on particular groups of pathogenic microorganisms. Just by these advantages, lactic acid bacteria have been exhaustively studied allowing the detection of antibiose promoters substances as organic acids, bacteriophags, hydrogen peroxide, and bacteriocins. In the present study, 474 lactic acid bacteria from Lactobacillus species were isolated from the crop and ceca of chicken. Two hundred sixty five samples presented inhibitory activity against indicator microorganisms (Gram-positive and Gram-negative bacterias) using the spot-on-the-lawn assay. Fifty three samples identified as Lactobacillus reuteri, L. salivary and L. spp. confirmed inhibition of Enterococcus faecalis, E. faecium, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes and Salmonella spp. but not on Lactobacillus casei, L. delbrureckii, L. fermentum and L. helveticus by bacteriocins action by antagonistic the simultaneons methods of well diffusion assay on anaerobiosis. The antagonism was detected by inhibition zones to various indicators microorganisms.

Uma das complicações que levam o paciente terminal de câncer à morte é a imunossupressão. Por sua vez, a superprodução de prostaglandinas ciclopentenônicas (CP-PGs) no plasma desses indivíduos é um fator de risco para depressão imunológica já que as CP PGs bloqueiam inúmeras interações entre células imunológicas. Estudos de nosso grupo revelaram que células tumorais apresentam alta atividade da ATPase bomba GS X/MRP que exporta conjugados sulfidrila, inclusive CP PG na forma de S-conjugados de glutationa. A glutationa é uma das, ou a mais importante substância para manutenção do estado redox celular. Como o acúmulo de proteínas de choque térmico (HSP) induzidas pelas CP PGs em células imunológicas é indicativo do grau de estresse ao qual cada célula está sendo submetida, neste trabalho, buscamos determinar qual a influência da MRP1/bomba GS-X na presença de estresse celular causado por desbalanço redox e os parâmetros de estresse celular necessários para influenciar a expressão e/ou a atividade da MRP1/bomba GS-X. Nossos resultados sugerem que linfócitos respondem bem a transfecção por eletroporação com o gene da MRP1/bomba GS-X e que a presença desta proteína possa conferir resistência ao tratamento com substâncias eletrofílicas de maneira a ajustar o estado redox celular mais rapidamente, o que impede o efeito citotóxico destas substâncias.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5199_1.pdf: 1035498 bytes, checksum: d8abd52c3fde68ba11f48955570219c8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / Levanas, compostas por resíduos D-frutofuranosil unidos por ligações β-2,6 podem ser produzidas por diversas espécies de plantas e bactérias. Aplicações para estes polissacarídeos têm sido sugeridas na indústria alimentícia, farmacêutica e na medicina. As partículas magnéticas são largamente estudadas para suas aplicações nas áreas biológica e biomédica. As lectinas são proteínas amplamente distribuídas entre plantas, animais e microorganismos. Cramoll 1 é uma lectina glicose/manose e sua purificação é feita através de um extrato das sementes de Cratylia mollis a 10 % (p/v), posteriormente uma precipitação com sulfato de amônio a 40 a 60 % de saturação (F40-60). Esta foi então cromatografada em Sephadex G-75 (Cramoll 1,4), seguida por uma cromatografia de troca iônica em CM-cellulose (Cramoll 1 e Cramoll 4). Esta lectina tem uma grande variedade de aplicações biotecnológicas. Cramoll 3, lectina galactose específica, também purificada a partir do extrato das sementes de C. mollis e fracionamento com sulfato de amônio a 0 a 40 % de saturação (F0-40), foi cromatografada por exclusão molecular em Sephadex G-100. A Ressonância Magnética Nuclear já é referência mundial para a análise de estruturas moleculares em diversas áreas do conhecimento, sendo utililizada frequentemente para polissacarídeos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de levana de Zymomonas mobilis insolubilizada na sua forma magnetizada (FMZAG-12) para purificar lectinas fructose específicas usando preparações de lectinas de sementes de C. mollis. Testes de inibição da Atividade Hemaglutinante (AH) foram utilizados para avaliar a ligação específica de Cramoll 1, Cramoll 1,4, Cramoll 3 e Con A às levanas (ZAG-12, na sua forma nativa e fracionadas por etanol, Z-1-81, ZAP e CP-50). Estas mesmas lectinas e a F40-60 foram incubadas com a FMZAG-12 que foi usada como um suporte de afinidade; as proteínas adsorvidas foram eluídas com seus carboidratos específicos. Métodos eletroforéticos e AH foram utilizados para avaliar as lectinas obtidas. As levanas inibiram diferentemente a AH das lectinas. Con A e Cramoll 1,4 ligadas a FMZAG-12 foram eluídas com glicose, a eluição de Cramoll 1,4 mostrou o mesmo padrão eletroforético (duas bandas polipeptídicas). Cramoll 3 não se ligou ao suporte magnetizado. Quando a F40-60 foi incubada apenas a Cramoll 1 foi purificada, revelando uma banda polipeptídica (padrão). Levanas então inibiram diferentemente a AH das lectinas testadas e FMZAG-12 foi eficiente em purificar Cramoll 1 através de um protocolo mais rápido

Orientador: Jaime Amaya-Farfan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T20:59:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tassi_ErikaMariaMarcondes_M.pdf: 3208716 bytes, checksum: 62edc7df5feb41a3f7d65d80c6e2d615 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: As proteínas parcialmente hidrolisadas vêm sendo empregadas na formulação de produtos especiais, tais como alimentos para fins clínicos e esportistas. Para a nutrição clínica, esses produtos são empregados devido à sua facilitada digestão e absorção, porém em produtos para esportistas o uso é atribuído somente às suas propriedades funcionais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de dietas contendo proteolisados de ?-lactoalbumina como fonte protéico-energética, em relação à proteína intacta e em condições de alto dispêndio energético no rato, visando o desenvolvimento de dietas de desempenho superior para esportistas. Foram elaboradas dietas isoenergéticas/isoprotéicas, com 16% de proteína, sendo esta ?-lactoalbumina (L), proteolisado de ?-lactoalbumina (H) ou caseína (C). As demais características foram de acordo com as especificações do American Institute Nutrition (AIN-93G). Os ratos, de acordo com seu nível de atividade foram divididos em grupos treinados (T) e sedentários (S). O treinamento físico consistiu em sessões de lh diária (cinco dias/semana) de natação, durante quatro semanas. No final do período de treinamento, os animais foram submetidos a teste de resistência. Após atingido o ponto de exaustão, os ratos foram sacrificados e deles retiradas amostras de sangue, fígado e músculo gastrocnêmio. Determinações analíticas de glicose sérica, ácidos graxos livres sérico, lactato, albumina e proteínas totais séricas, glicogênio hepático, glicogênio e proteínas musculares foram realizadas por técnicas rotineiras. Observou-se que, por razão do treinamento, o ponto de exaustão dos animais da categoria T foi atingido após um tempo três vezes superior ao dos animais da categoria S (152±8min x 48±10min), enquanto que as diferenças entre as dietas não foram significativas. Por outro lado, análise de variância das médias dos parâmetros bioquímicos mostrou diferenças significativas (p<0.05) entre as glicemias dos ratos, tanto em função do nível de atividade quanto em função do tipo de dieta. Dentre os ratos treinados e sedentários, os grupos H finalizaram com índices glicémicos aceitáveis de 56 e 78mg/dL, respectivamente; sendo estes 74 e 61% maiores que os correspondentes aos grupos TL e SL (p<0.05). Observou-se ainda que as glicemias destes últimos não diferiram das dos grupos TC e SC. As dietas SH e TH resultaram em níveis de albumina sérica 81 e 52% superiores àqueles correspondentes às dietas TL e SL, enquanto que os níveis de lactato não mostraram qualquer dependência do tipo de fonte protéica. Tanto nos animais treinados como os sedentários, a dieta H resultou em níveis finais significativamente maiores (p<0.05) no conteúdo de glicogênio muscular, não havendo diferença significativa entre as dietas C e L. Diferença significativa (p<0.05) também foi encontrada para os níveis de glicogênio muscular, mas não para o glicogênio hepático, entre os grupos TH e TL. Os resultados sugerem que o proteolisado da ?-lactoalbumina, apesar de não melhorar os tempos de chegada dos animais à exaustão física, permitiu que os mesmos finalizassem o teste com índices significativamente superiores de glicogênio muscular, e de glicose e albumina sérica. Os resultados também sugerem que o hidrolisado de ?-lactoalbumina pode ser usado com vantagem na formulação de produtos para esportistas / Abstract: The utilization of protein hydrolyzates as ingredients for special, medical or sports foods has been considered, but mostly on the basis of better functional properties or facilitated absorbability. In this study we report the evaluation of diets in which partly hydrolyzed ?-lactoalbumin was fed to exercising rats as a source of protein and energy, in comparison with the intact protein. Three isoenergetic, isoproteic diets containing 16% protein, either as ?-lactoalbumin (L), hydrolyzed ?-lactoalbumin, (H) or whole casein (C, also as assay control) were prepared according to specifications of the American Institute of Nutrition (AIN)-93G. Thirty adult Wistar rats were segregated into two groups: one undergoing l hr daily, 5-day-a-week swimming (T or trained) and another exempted from physical activity (S or sedentary). Physical activity was extended for four weeks, after which the animals from both groups were subjected to a swimming resistance test. At exhaustion, the animals were killed and samples of blood, liver and gastrochnaemius were collected for analysis. Analytical determinations of serum glucose, lactate, free fatty acids, albumin and total proteins, in addition to liver glycogen and muscle glycogen and proteins were accomplished by standard techniques. It was observed that, as a result of training, exhaustion was reached by the animals of group T at a time three times greater than that of rats of group S (152±8 vs 48±l0min), while the diets had no appreciable influence on this parameter. On the other hand, analysis of variance of the data for the biochemical parameters showed significant differences (p<0.05) between the blood glucose levels, both as a function of training and the type of diet. Regardless of the level of activity, the H-diet subgroups finalized the test with glycemic values (56 and 78mg/dL for the T and S groups, respectively) that were 74 and 61% higher than subgroups TL and SL, whereas no significant difference was found between subgroups TC and SC. Feeding the diets TH and SH also resulted in serum albumin levels in the rat that were 81 and 52% greater than those feeding on diets TL and SL, correspondingly, but no effect on serum lactate concentration was found from the type of protein. Diet H was observed to allow for greater final reserves of muscle glycogen in both groups, while those of subgroups C and L were essentially the same. Significant differences (p<0.05) were also found for muscle, but not for liver glycogen between subgroups TH and TL. Our results demonstrate that feeding the ?-lactoalbumin hydrolyzate, in spite of not altering the end-point of physical exercise, guarantees significantly higher levels of serum glucose and albumin, as well as muscle glycogen to the rat. Data also suggest that ?-lactoalbumin hydrolyzates could be used, with advantage, in the formulation of sport foods / Mestrado / Mestre em Ciência da Nutrição

Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Borges_JulioCesar_D.pdf: 17156188 bytes, checksum: e2f1c0a8fbb9107a01472bb1172baa8d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A função de uma proteína depende da estrutura nativa obtida a partir de sua estrutura primária de aminoácidos por um processo denominado de enovelamento protéico. Falhas neste processo podem levar à formação de agregados protéicos que têm relação com doenças humanas; como as doenças amilóides. Durante a evolução, as células têm desenvolvido mecanismos de prevenção e controle de qualidade para evitar a agregação de proteínas. Um destes mecanismos é através da síntese das chaperones moleculares. Dentre as várias proteínas desta categoria, destaca-se o sistema Hsp70 que desempenha funções essenciais no metabolismo de proteínas, pois age como um pivô, recebendo e distribuindo proteínas desenoveladas ou substratos entre as demais chaperones moleculares. Assim, o estudo do mecanismo de ação desta maquinaria é importante para compreender o enovelamento protéico no meio intracelular. Como muitas das informações disponíveis para o sistema Hsp70 são do sistema bacteriano, este estudo pretendeu a obtenção de proteínas da família Hsp70: Hsp70-1A e suas co-chaperones Hsp40 (DjA 1 e DjB4) e GrpE (GrpE#1 e GrpE#2) de origem humana. Os cDNAs destas proteínas foram clonados e as proteínas foram expressas, purificadas e caracterizadas quanto à relação estrutura e função. Para tanto, foram utilizadas técnicas como: dicroísmo circular, fluorescência, calorimetria, ultracentrifugação analítica e espalhamento de raios X a baixos ângulos. Os resultados principais mostraram que: 1) a Hsp70-1 A sofre pequenas mudanças conformacionais induzidas pelos nucleotídeos adenosina tri-fosfato ou adenosina di-fosfato; 2) as duas representantes humanas das subfamílias A e B das Hsp40, a DjA 1 e DjB4, respectivamente, possuem atividade chaperone e estrutura quaternária distintas uma da outra; e 3) as GrpEs humanas possuem estrutura quaternária similar, porém diferem na disposição espacial de alguns domínios e em outras propriedades biofísicas, indicando funções específicas ou especializadas no interior da mitocôndria. Estes resultados podem ajudar na compreensão sobre a relação estrutura-função desta importante maquinaria celular / Abstract: The role of a protein depends on its three-dimensional structure, which is acquired from its amino acid sequence through a process called protein folding. However, mistakes on this process cause protein aggregation, which may be related to some human illness; like amyloids diseases. During the evolution, the cells have developed mechanisms to prevent and to control quality in order to avoid protein aggregation. One of these mechanisms is the molecular chaperones. Among the several proteins from this category, the Hsp70 system has essential functions in the protein metabolism, because it acts as a pivot, receiving and handing out unfolded proteins or substrates among the others molecular chaperones. Thus, the study of the action mechanism of the Hsp70 machinery is important to understand the protein folding process inside the cells. Since, there is a large amount of information available about the Hsp70 system from bacteria, this study intended the characterization of proteins from human Hsp70 system: Hsp70-1A and its co-chaperones Hsp40 (DjA1 and DjB4) and GrpE (GrpE#1 and GrpE#2). The cDNA from those proteins were cloned and the proteins were expressed, purified, and characterized concerning their structure-function relation. In such effort, several techniques were used, like: circular dichroism, fluorescence, calorimetry, analytical ultracentrifugation and small angle X-ray scattering. The main results are: 1) the Hsp70-1A underwent little conformational changes induced by the nucleotides adenosine triphosphate or adenosine di-phosphate; 2) the two representatives of human Hsp40 proteins DjA 1 and DjB4, from subfamily A and B, respectively, possess distinct chaperone activities and quaternary structures; and 3) the human GrpEs possess similar quaternary structure, but with discrete differences in the spatial disposition of some domains and with dissimilar biophysical properties, implying in specific or specialized functions inside the mitochondria. These results may help the further understanding of the structure-function relation of that important cell machinery / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Paulo Arruda / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T02:13:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ottoboni_LauraMariaMariscal_D.pdf: 6659288 bytes, checksum: ba717d49a715af04e12989c18fe70d85 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: As proteinas da semente do Coix lacryma-jobi L. var. Adlay foram extraidas e caracterizadas. O endosperma do Adlay contem aproximadamente 21% de proteina. A principal fração proteica do endosperma do Adlay e uma prolamina denominada coixina, cuja porcentagem varia de 10,8% a 77,8%, dependendo da concentração de 2-ME utilizado no solvente de extração. As analises de aminoacidos revelaram que albuminas e globulinas (F1) do endosperma do Adlay são ricas Acido glutamico, Acido aspartico, glicina e alanina. As prolaminas (F2) são ricas em Acido glutamico, alanina, leucina prolina. As prolaminas não são completamente extraidas, mesmo quando 20% de 2-ME e utilizado no solvente de extração, e permanecem como uma contaminação das proteinas residuais (F3), o que faz com que a composição de aminoacidos da F3 seja similar A da F2. Analise das frações proteicas do Adlay atraves de eletroforese em SDS-PAGE demonstrou que a F1 e F3 possuem um padrão bastante complexo de bandas, enquanto que a F2 se subdividiu em apenas cinco bandas de pesos moleculares distintos. Estas cinco bandas foram denominadas de C1, C2, C3, C4 e C5. Anticorpos policlonais foram produzidos contra as bandas de coixina C2 e C3. Os anticorpos contra C2 reagiram com a banda C2 e apresentaram reação cruzada com proteinas de peso molecular mais elevado que o das coixinas e que so foram extraidas quando 20% de 2-ME foram utilizados no solvente de extração. Anticorpos contra C3 reconheceram a banda C3 e apresentaram reação cruzada com uma proteina de 40.5 kDa extraida quando 2-ME era utilizado no solvente de extração.Da analise das coixinas em focalização isoeletrica (IEF) revelou a presença de sete bandas principais. Quando as bandas individuais de IEF foram submetidas a SDS-PAGE, subdividiram-se em mais de uma classe de peso molecular distinto. As bandas de pI 7,26, 6.91, 6,55, 6,34 e 6,20 apresentaram reaçãoo com ambos os antisoros. As proteinas do endosperma do Adlay foram comparadas com as do Zea mays L. var. Maya. Foi constatado que o Maya possui um total de 8,7% de proteina no endosperma, sendo que 51,7% desta proteina são representados por prolaminas que, no caso do milho, são denominadas de zeina. A analise de aminoacidos da Fl, F2 e F3 do Maya revelou que existe uma similaridade na composição de aminoacidos das frações proteicas do Maya e do Adlay. Quando submetidas a SDS-PAGE, a F1 e F3 do Maya apresentaram um complexo padrão de bandas, sendo que algumas das bandas tinham o mesmo peso molecular de bandas encontradas nos padrões de Fl e F3 do Adlay. A F2 do Maya, do mesmo modo que a F2 do Adlay, apresentou uma baixa heterogeneidade em SDS-PAGE. As sete bandas encontradas no padrão de SDS-PAGE do Maya foram denominadas de Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6 e Z7. As prolaminas do Maya não apresentaram reação cruzada com o antisoro contra a classe de coixina C2. Contudo, o antisoro contra C3 apresentou reação cruzada com Z1 e com proteInas de 40,5 e 50 kDa extraIdas na presenCa de 2-ME. Em IEF, a zeina do Maya apresentou oito bandas principais que, quando foram submetidas a SDS-PAGE, revelaram ser principalmente do tipo Z2 e/ou Z3. Apesar da dificil visualização no gel de SDS-PAGE, bandas do tipo Z1 se encontram nos mesmos pis das bandas Z2 e Z3, como foi detectado atraves de analise imunologica com o antisoro contra C3. Os DNAs genomicos do Adlay e do Maya foram digeridos com as enzimas de restrição Eco RI, Bam HI e Hind III e submetidos a hibridizações com as sondas de cDNA da zeina pZ 22,3 e pZ 19,1. Enquanto que o DNA do Maya apresentou homologia com ambas as sondas de zeina, o DNA do Adlay so apresentou homologia com a sonda pZ 22,3. As proteinas do endosperma do Coix lacryma-jobi var. Acre, da linhagem de milho L1038 e dos teosintes Zea mays mexicana e Zea luxurians foram comparadas com as do Adlay e do Maya. Ficou constatado que os padrões de SDS-PAGE da Fl, F2 e F3 do Adlay e do Acre são praticamente iguais. Os padrões de SDS-PAGE da Fl, F2 e F3 dos milhos e teosintes tambem são praticamente iguais. Quando submetida a reações imunologicas, a F2 do Acre apresentou reação cruzada com os antisoros contra as classes de coixina C2 e C3 do Adlay. Da mesma forma que havia sido observado para F2 do Maya, as F2 da L1038, Zea mays mexicana e Zea luxurians nAo apresentaram reação cruzada com o antisoro contra a classe de coixina C2 do Adlay, mas apresentaram reação cruzada com o antisoro contra C3. Da homogeneidade encontrada nos padrões de SDS-PAGE da F2 do Adlay e do Acre e da F2 do Maya, L1038, Zea mays mexicana e Zea luxurians fez com que estas proteinas fossem submetidas a focalização isoeletrica e, subsequentemente, comparadas com os padrões de IEF de prolaminas de outras linhagens de milho e variedades de Coix e teosinte, onde se observou um padrão individual de bandas para cada um dos materiais analisados. Os DNAs genomicos do Zea mays mexicana, Zea luxurians, L1038 foram digeridos com as enzimas de restrição Eco RI e Bam HI e submetidos a hibridizações com as sondas pZ 22,3 e pZ 19,1. Foi constatado que existe homologia entre os DNAs dos milhos e teosintes e ambas as sondas de cDNA da zeina / Abstract: The seed proteins of Coix lacryma-jobi L. var. Adlay were extracted and characterized. The endosperm of Adlay contains ca. 21% of proteins. The major protein fraction of the endosperm of Adlay is a prolamin, known as coixin. The amount of coixin extracted ranges from 10.8% to 77.8%, depending upon the concentration of 2-mercaptoethanol in the extraction solvent. Amino acid analysis revealed that albumins and globulins (F1) from Adlay endosperm are rich in glutamic acid, aspartic acid, glycine and alanine. The prolamine (F2) are rich in glutamic acid, alanine, leucine, and proline. The prolamins are not completely extracted, even when 20% of the 2-ME is used in the extraction solvent. They remain as a contamination of residual proteins(F3). Because of the incomplete extraction of coixin, the amino acid content of F3 proteins is similar to that of F2. SDS-PAGE analysis of Adlay protein fractions showed that F1 and F3 have a complex pattern of bands, while F2 has only five bands. Those five bands were denominated C1, C2, C3, C4, and C5. Polyclonal antibodies were raised against the C2 and C3 protein bands. The C2 antibodies recognized the C2 band and cross-reacted with proteins of higher molecular weight that were extracted only when 20% of 2-ME were used in the extraction solvent. The C3 antibodies recognized the C3 band and cross-reacted with a 40.5 kDa protein, extracted when 2-ME was included in the extraction solvent. Isoelectric focusing (IEF) analysis of coixin revealed the presence of seven major bands. When individual IEF bands were submitted to SDS-PAGE, they subdivided into more than one molecular weight class. The IEF bands with pI 7.26, 6.91, 6.55, 6.34, and 6.20 reacted with both antibodies. The endosperm proteins of Adlay were compared with those of Zea mays L. var. Maya. It was observed that Maya has 8.7% of protein in the endosperm. Aproximately 51.7% of that protein are prolamins, which are called zein in corn. Amino acid analysis of Maya F1, F2, and F3 showed that there is a similarity between the amino acid composition of the protein fractions of Maya and Adlay.When submitted to SDS-PAGE, the F1 and F3 of Maya gave a complex band pattern. Some of the bands observed the F1 and F3 of Maya had the same molecular weight of bands found in the F1 and F3 of Adlay. Like the F2 of Adlay, the F2 of Maya showed low heterogeneity in SDS-PAGE. The seven bands observed in Maya F2 SDS-PAGE pattern were named Z1, Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, and Z7. No cross-reaction was observed between the prolamins of Maya and C2 antibody. However, a cross-reaction was observed between C3 antibody and Z1. Proteins extracted in the presence of 2-ME with 40.5 and 50 kDa a1so cross-reacted with C3 antibodies. A total of eight major bands were observed for Maya in IEF. When submitted to SDS-PAGE, those bands revealed to be mostly Z2 and Z3. Bands Z1 were detected in SDS-PAGE with C3 antibody in the same pI of Z2 and Z3 bands.The genomic DNAs of Adlay and Maya were digested with the restriction enzymes Eco RI, Bam HI, and Hind III and submitted to hybridizations with zein cDNA probes pZ 22.3 and pZ 19.1. While the DNA of Maya showed homology with both probes, the DNA of Adlay showed homology only with pZ 22.3. The endosperm proteins of Coix lacryma-jobi var. Acre, corn inbred 1ine 1038, and of the teosintes Zea mays mexicana and Zea luxurians were compared with the ones of Adlay and Maya. It was observed that the SDS-PAGE patterns of the F1, F2, and F3 of Adlay and Acre were practically the same. The SDS-PAGE patterns of the F1, F2, and F3 of the corn and teosintes were also practically the same. When submitted to immunological reactions, a cross-reaction was observed between Acre F2 and C2 and C3 antibodies. As it was found for Maya F2, no cross-reaction was observed for L1038, Zea mays mexicana, and Zea luxurians F2 and C2 antibody. However, a cross-reaction was observed for the F2 of those materials and C3 antibody. The lack of heterogeneity observed for the SDS-PAGE pattern of the F2 of Adlay and Acre and the F2 of Maya, L1038, Zea mays mexicana, and Zea luxurians was the reason why those proteins were submitted to isoelectric focusing and after that were compared with the IEF pattern of the prolamins of other corn inbred lines and Coix and teosinte varieties. Those comparisons showed an individual pattern for each material analysed. The genomic DNA of Zea mays mexicana, Zea luxurians, L1038, and Maya were digested with the restriction enzymes Eco RI and Bam HI and submitted to hibridization with pZ 22.3 and pZ 19.1. It was observed that there is a homology between the DNAs of corn and teosinte and both probes / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientadores: Eliana Cotta de Faria, Helena Coutinho Franco de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kaplan_DeniseBeheregaray_D.pdf: 10733880 bytes, checksum: 7bc4dedce9618f10fead35e537386b71 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Em inúmeros estudos prospectivos observa-se uma associação inversa entre a concentração da lipoproteína de alta densidade (HDL) e risco de doença arterial coronariana (DAC). Uma das propriedades antiaterogênicas da HDL é sua participação no transporte reverso de colesterol (TRC). A proteína de transferência dos ésteres de colesterol (CETP) promove a troca de ésteres de colesterol (EC) e triacilglicerol (TAG) entre HDL e outras lipoproteínas, aumentando o colesterol das lipoproteínas apoB. Mutações/polimorfismos no gene da CETP foram detectados em várias populações, especialmente asiáticas. Apesar da menor atividade de CETP e hiperalfaliporpteinemia (HALP), interroga-se quanto a prevalência de doença cardiovascular (DCV) nestes indivíduos. o objetivo deste trabalho foi avaliar, em população de brasileiros HALP, a prevalência de mutações/polimorfismos do gene da CETP e manifestações bioquímicas e ateroscleróticas deste fenótipo. Foram determinados lípides, lipoproteínas e parâmetros metabólicos plasmáticos marcadores de DCV, numa população de 291 a 294 indivíduos HALP (HDL-C ~ 68mg/dl) e 139 controles (HDL-C < 68mg/dl). A prevalência das mutações Int14A e D442G e dos polimorfismos Taqill e 1405V,no gene da CETP, foi investigada por análise genôrnica. Aterosclerose nos pacientes com mutações/polimorfismos foi avaliada clinicamente e por medida da espessura íntima-média arterial (IMT) pela ultra-sonografia das carótidas. Na população HALP, HDL-C apresentou valor 1.5 maior do que controles. A prevalência da mutação Int14A no grupo HALP foi de 4%, baixa, porém maior do que a descrita em caucasianos, e de 0,7% na D442G, muito baixa e menor do que emjaponeses/asiáticos. No grupo HALP, verificou-se aumento das atividades de lipoproteína lipase (LPL) e da proteína de transferência de fosfolípides (pLTP) e redução de CETP e lipase hepática (HL). O grupo de mutantes (7 indivíduos) comparado ao controle, evidenciou tendência semelhante. A paciente homozigótica Int14A, apresentou atividade indetectável de CETP e reduzida de HL, além de HALP severa. Um dos pacientes, heterozigótico D442G, mostrou aumento do IMT em relação aos controles, e um dos heterozigóticos Int14A, DCV estabelecida. genótipo BIB2, do polimorfismo TaqIB, apresentou prevalência de 45% e o IV de I405V, 49%. Comparando os genótipos entre S4em B2B2 de TaqIB, encontrou-se aumento do IMT, diminuição de auto-anticorpos anti lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDL-oxidada) e menor atividade de CETP. A atividade de CETP mostrou-se aumentada no genótipo II de I405V, com redução da HDL-C. As lipoproteínas, apolipoproteínas e lípides, foram semelhantes entre os diversos genótipos, bem como LPL, HL e PLTP. o fenótipo HALP caracterizado neste estudo por dimuição das atividades de CETP e HL e aumento de LPL e PLTP não demonstrou associação com a presença das mutaões e/ou polimorfismos estudados. É possível que a baixa fteqüência das mutações de CETP não nao tenha permitido caracterizar estatisticamente esta associação. Mutações de outras proteínas, como por exemplo de HL, poderiam explicar este fenótipo. Os indivíduos HALP, portadores de mutações, não mostraram diferença quanto a aterosclerose clínica e IMT em relação aos controles, apesar de alguns pacientes isoladamente apresentarem sinais clínicos de DCV. Estes resultados não permitiram caracterizar a condição de HALP como cardioprotetora ou não. Estudos complementares necessitam ser realizados para uma melhor compreensão do fenótipo de hiperalfalipoproteinernia no contexto do risco cardiovascular aterosclerótico / Abstract: There is an inverse association between the concentration of high density lipoprotein (HDL) and the risk of a coronary arterial disease (CAD). One ofthe HDL anti-atherogenic properties is its participation in the reverse cholesterol transport (RCT). The cholesteryl ester transfer protein (CETP) facilitates the cholesteryl esters (CE) and triglycerides (TAG) exchange between HDL and others lipoproteins, increasing the cholesterol content of apoB lipoproteins. Mutations and polymorphisms of the CETP gene were detected in several populations, especially among Asiatic. In spite of a lower activity of the CETP and an increase of the HDL-C leveI in hyperalphalipoproteinemia (HALP), there are some doubts in regard to the prevalence ofthe cardiovascular disease (CVD) in these population groups. The aim of this work was to evaluate the prevalence of HALP and its relationship to the presence ofmutations and polymorphisms ofthe CETP gene, in a Brazilian population, and its relation with the arteriosclerosis.We determined lipid, lipoproteins, metabolic plasmatic parameters and markers of CVD, in a population of 291 to 294 HALP individuaIs (HDL-C 2: 68mg/dl) and 139 controls (HDL-C < 68mg/dl). The prevalence of the mutations Int14A and D442G, and the polymorphisms TaqIB and 1405V, was investigated by molecular methods. The presence of atherosclerosis in those patients with mutations and polymorphisms and in controls, was evaluated by clínical analyzes and measurements of the arterial intima-media thickness (IMT) by ultrasound method was performed. HDL-C was 1.5 higher in the HALP when compared to controls. A very low prevalence equal to 0.7% was found for D442G mutations, lower than in the Asiatic and Japanese population, and 4% for Int14A mutations, higher than the one described in the Caucasians. On HALP, the activities of lipoprotein lipase (LPL) and phospholipid transfer protein (PLTP) were higher and activities of CETP and hepatic lipase (HL) were lower than in controls. The seven mutants presented similar tendencies. The homozygous Int14A, showed indetectable activity of CETP and a reduction of HL, besides very high values of HDL-C. The BIB2 TaqIB genotype presented a :&equencyequal to 45%, and the IV I405V to 49%. Comparing all genotypes, B2B2 TaqIB presented higher IMT, lower autoantibodies against oxidized low density lipoprotein (LDLox) and lower CETP activity. The II I405V showed a highest CETP activity and a lowest HDL-C value. The lipoproteins, lipids and apolipoproteins were equal among all genotypes, as well as activities of LPL, HL and PLTP. The HALP phenotype was characterized by lower CETP and HL activities and higher LPL and PLTP activities when compared with controls but with no association with mutations or polymorphisms studied. It is possible that the low :&equencyof CETP mutations made impossible this statistic association. Perhaps other mutations, like in HL gene, could explain this phenotype. The HALP mutants did not show a difference in c1inical atherosc1erosis and IMT as compared with controls, although some individuaIs presented clinical signs ofCVD. These results did not discard the possibility ofthe HALP phenotype as a cardioprotector or not. Complementary studies will have to done to amplify the investigation of other mutations and polymorphisms of CETP and or HL and to try to establish a relationship between HALP and atherosclerosis / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador : Arthur E. Humphrey / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-17T16:31:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sadir_Ricardo_D.PDF: 2292020 bytes, checksum: f9b71f4a34d69ee25059c4a465791b39 (MD5) Previous issue date: 1969 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos