Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-06T09:58:53Z No. of bitstreams: 2 Tese - Delcides Ferreira de Paula Junior - 2016.pdf: 3045862 bytes, checksum: ec1107b61eb7ef431ad86459dd4edade (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-02-06T09:59:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Delcides Ferreira de Paula Junior - 2016.pdf: 3045862 bytes, checksum: ec1107b61eb7ef431ad86459dd4edade (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-06T09:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Delcides Ferreira de Paula Junior - 2016.pdf: 3045862 bytes, checksum: ec1107b61eb7ef431ad86459dd4edade (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-22 / The objective of this study was to evaluate the prevalence of malocclusion, the need for orthodontic treatment and dentofacial changes in girls with Precocious Puberty (PP). This work gave rise to two distinct studies and data analyzes including descriptive statistics, Pearson's correlation analysis, paired t-test and t-test for one sample: 1- the cross-sectional study included 39 girls (6 to 11 years old) with confirmed PP diagnosis. The Dental Aesthetic Index (DAI) and the Index of Orthodontic Treatment Need (IOTN) were used for malocclusion evaluation and need for orthodontic treatment. Cephalometric analyzes were performed for the diagnosis of facial growth abnormalities. There was a high prevalence (64.1%) of severe and very severe malocclusion (DAI grades 3 and 4) and 82.1% of cases requiring moderate to high treatment (IOTN grades 3 and 4). 2- the control case study included 39 girls (6 to 11 years old) with confirmed PP diagnosis (case group). In this group, dental panoramic and hand and wrist radiographs were made. The control group consisted in 78 panoramic radiographs of girls without PP, randomly selected. Each panoramic radiograph of the 39 from case group was compared with two radiographs from control group, that is, a ratio of 1: 2. The chronological chart of dental mineralization of Nicodemus was used to identify the dental age. A significant difference (p <0.001) was found between chronology and bone age. Dental age (mean = 117) was lower than bone age (mean = 123) in girls with PP, but higher than dental age (mean = 111.5) in the control group. There was a significant correlation between chronological age and dental age. It was concluded that PP can have an impact on the development of dentition and craniofacial growth, a relevant factor for the diagnosis and the choice of the best moment for orthopedic / orthodontic intervention in malocclusion. / O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência de maloclusão, necessidade de tratamento ortodôntico e alterações dentofaciais em meninas com Puberdade Precoce (PP). Este trabalho deu origem a dois estudos distintos e as análises dos dados incluíram estatística descritiva, análise de correlação de Pearson, teste t pareado e teste t para uma amostra: 1- o estudo transversal incluiu 39 meninas (6 a 11 anos) com diagnóstico confirmado de PP. O Dental Aesthetic Index (DAI) e o Index of Orthodontic Treatment Need (IOTN) foram utilizados para a avaliação da maloclusão e necessidade de tratamento ortodôntico. Análises cefalométricas foram realizadas para o diagnóstico de anormalidades do crescimento facial. Foi observada alta prevalência (64,1%) de maloclusão grave e muito grave (DAI graus 3 e 4) e 82,1% dos casos com necessidade de tratamento moderada a alta (IOTN graus 3 e 4). 2- o estudo caso controle incluiu 39 meninas (6 a 11 anos) com diagnóstico confirmado de PP (grupo caso). Foram feitas, nesse grupo, radiografias panorâmicas e de mão e punho. O grupo controle foi composto por 78 radiografias panorâmicas de meninas sem PP, selecionadas aleatoriamente. Cada radiografia panorâmica das 39 do grupo caso foi comparada com duas radiografias do grupo controle, ou seja, uma razão de 1:2. A tabela cronologica de mineralização dental de Nicodemo foi utilizada para identificação da idade dentária. Foi encontrada uma diferença significativa (p<0,001) entre a idade cronologia e óssea. A idade dentária (média=117) foi menor que a idade óssea (média=123) nas meninas com PP, mas foi maior que a idade dentária (média= 111,5) do grupo controle. Houve correlação significativa entre a idade cronológica e a idade dentária. Concluiu-se que a PP pode ter impacto sobre o desenvolvimento da dentição e crescimento craniofacial, fator relevante para o diagnóstico e escolha do melhor momento para a intervenção ortopédica/ortodôntica da maloclusão

Resumo não disponível.

Objetivou-se no presente estudo, avaliar o efeito da nutrição proteica no terço final da gestação de vacas Nelore, seguido de estratégias de suplementação e/ou alimentação de suas crias fêmeas sobre a idade à puberdade até os 18 meses. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x2x2; constituindo-se de: 2 manejos suplementar das vacas no pré-parto (Fase I); 2 manejos suplementar das crias (Fase II) e 2 manejos alimentar na recria (Fase IIIA). Na Fase I, 241 vacas foram suplementadas com farelos de soja na proporção de 0,5kg/vaca/dia (Tratamento 1) e 258 vacas foram mantidas sem acesso a suplementação Tratamento 2 (controle - Fase I). Cerca de metade do número de vacas e suas crias fêmeas, nascidas na Fase I, foram distribuídas em dois tratamentos na Fase II-(suplementação das crias) aos 110 dias de idade das crias, as quais passaram receber ou não uma mistura mineral proteica energética em creep-feeding, constituindo assim, os tratamentos suplementação de bezerras em creep-feeding (n =119) e controle (sem suplementação, n =122 ) na Fase II até os 205 dias de idade (desmama). Na fase III A, metade das bezerras de cada grupo na fase II foram manejados em confinamentos (n=119) e a outra metade permaneceu no pasto (Grupo controle, n = 122), até os 320 dias de idade. Na fase IIIB, todas as novilhas foram manejados juntos a pasto e submetidas a estação de monta a partir dos 440 dias aos 560 dias de idade. Os sistemas de suplementação das vacas e bezerras na fase de cria não afetaram o peso corporal, concentração de IGF-1 e percentual de peso adulto das novilhas no início da estação de monta (P > 0,05). O manejo das novilhas em confinamento na fase IIIA, aumentou o número de novilhas púberes (31,9% vs 13,9%; P < 0,01), para as novilhas alimentadas ou não em confinamento, respectivamente. Entretanto, a alimentação em confinamento não ocasionou diferença na idade que estas atingiram a puberdade. Considerando apenas as novilhas que atingiram à puberdade (n = 55) houve efeito de interação entre as fases de suplementação/alimentação e a idade à puberdade (P < 0,05). Para as vacas manejadas na Fase I, a suplementação influenciou a ciclicidade das mesmas no momento da IATF (68,9% vs 55,4%; P < 0,05), porém não ocasionou diferença no número de vacas prenhes (60,1 vs 55,3%; P > 0,05), vacas suplementadas e não suplementadas, respectivamente. Similarmente, a suplementação das novilhas em creep-feeding, não influenciou a taxa de prenhez das vacas (P > 0,05). Em conclusão, a suplementação das vacas com fontes proteicas não influenciou a idade a puberdade de novilhas até os 18 meses, sendo que o manejo alimentar em confinamento aumentou o número de novilhas púberes em relação com as manejadas no pasto. / The aim of the present study was to evaluate the effect of protein nutrition in the final third of gestation of Nelore cows, followed by supplementation strategies and / or feed their young females over the age of puberty until 18 months. The experimental design was a completely randomized factorial 2x2x2; constituting of: 2 suplementary managements of cows in pre-partum (Phase I); 2 supplementary managements of offspring (Phase II) and 2 alimentary managements during rearing (Phase IIIA). In Phase I, 241 cows were supplemented with soybean meal at the rate of 0.5 kg / cow / day (Treatment 1) and 258 cows were kept without access to supplemental Treatment 2 (control - phase I). About half of the cows and their female offspring, born in Phase I, were assigned to two treatments in Phase-II (supplementation of cubs) at 110 days of age of the offsprings, which now receive or not a mineral mix protein energy in creep-feeding, constituting, treatments supplementation in calves creep-feeding (n = 119) and control group (without supplementation, n = 122) in Phase II until 205 days of age (weaning). In phase III A, half of each group of calves in phase II were managed in feedlots (n = 119) and the other half remained in the pasture (control group, n = 122), up to 320 days of age. In stage IIIB, all heifers were managed together and submitted to the pasture breeding season from 440 days to 560 days old. Supplementation systems of cows and calves during the growing period did not affect body weight, concentration of IGF-1 and percentage of mature weight of heifers at the beginning of the breeding season (P> 0.05). The management of heifers in the feedlot phase IIIA, increased the number of pubertal heifers (31.9% vs 13.9%, P <0.01) for heifers fed in confinement or not, respectively. However, feeding in confinement caused no difference in age they reached puberty. Considering only heifers reached puberty (n = 55) there was an interaction effect between phases of supplementation / nutrition and age at puberty (P <0.05). For cows managed in Phase I, supplementation influenced the cyclicality of the same at the time of TAI (68.9% vs 55.4%, P <0.05), but caused no difference in the number of pregnant cows (60.1 vs 55.3%, P> 0.05), supplemented and nonsupplemented cows, respectively. Similarly, the addition of heifers in creep-feeding did not influence the rate of pregnancy in cows (P> 0.05). In conclusion, supplementation of cows with protein sources did not influence the age at puberty in heifers up to 18 months, and feeding management in confinement increased the number of pubertal compared with those managed on pasture.

Avanços recentes na etiologia da puberdade precoce foram obtidos a partir da análise do genoma por sequenciamento global. Mutações inativadoras do gene MKRN3 representam uma causa importante de puberdade precoce central (PPC) familial (33-46% dos casos). O objetivo do estudo foi a análise do DNA genômico de pacientes com PPC de origem familial ou esporádica sem mutações deletérias no gene MKRN3. Foram selecionados 68 indivíduos com PPC (37 com a forma familial e 31, aparentemente, esporádicos). O DNA genômico foi extraído do sangue periférico ou da saliva dos pacientes com PPC. A técnica de sequenciamento genômico em larga escala (ILLUMNA -Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) foi usada na busca de novos genes implicados com o desenvolvimento puberal prematuro em seis indivíduos, sendo três afetados e três não afetados, pertencentes a uma grande família brasileira com PPC (Família 1). Mutações em um gene candidato foram pesquisadas em 64 pacientes por sequenciamento automático direto (método de Sanger). Em um subgrupo de pacientes, foi realizada a técnica de MLPA com sondas customizadas na busca de deleções. Por sequenciamento genômico global, foi identificado um novo complexo rearranjo no gene DLK1, caracterizado por uma deleção de, aproximadamente, 14.000 pb na região 5\' não traduzida (5\'UTR), englobando o início do exon 1, associada a uma duplicação de uma região do intron 3 de 269 pb. O gene DLK1 está localizado no braço longo do cromossomo 14 (14q32.2) e sofre imprinting materno. Este lócus está associado à síndrome de Temple, uma doença complexa com múltiplas manifestações, incluindo puberdade precoce central em até 90% dos casos. Para investigar o efeito dessa deleção genômica, as concentrações séricas da proteína DLK1 pelo método ELISA foram medidas nas pacientes afetadas da Família 1. Valores indetectáveis de DLK1 foram encontrados nestas pacientes. O fenótipo das pacientes afetadas da Família 1 caracterizou-se por uma PPC típica, sem sinais sindrômicos (excluída a síndrome de Temple). Posteriormente, por meio do sequenciamento direto, duas novas mutações inativadoras no gene DLK1 foram identificadas (p.Val272Cysfs*14 e p.Pro160Leufs*50) em duas famílias (Famílias 2 e 3) com PPC ou história de menarca precoce. O estudo de segregação nas Famílias 1 e 2 confirmou o padrão de herança autossômico dominante com penetrância completa e transmissão exclusiva pelo alelo paterno. A média de idade de início da puberdade nas pacientes afetadas do sexo feminino foi de 5,4 anos. A técnica de MLPA com sondas customizadas para o gene DLK1 não encontrou outras deleções no subgrupo estudado. Em conclusão, foram identificadas três mutações inativadoras no gene DLK1 associadas à PPC familial de origem paterna. O DLK1 é o segundo gene imprintado associado a distúrbios puberais em humanos. Este achado sugere um papel dos genes imprintados no controle da puberdade. O mecanismo pelo qual esse gene afeta a puberdade ainda é desconhecido / Recent advances in the etiology of precocious puberty were obtained from the whole-genome sequencing analysis. Inactivating mutations of the MKRN3 gene represent a major cause of familial central precocious puberty (CPP) (33%- 46% of the cases). The objective of the study was to analyze the genomic DNA of patients with familial or sporadic CPP without deleterious mutations in the MKRN3 gene. Sixty-eight individuals with CPP (37 with familial form and 31 apparently sporadic cases) were selected. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood or saliva of patients with CPP. We used the whole-genomic sequencing technique (ILLUMNA - Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) searching for a new candidate genes implicated in premature pubertal development in 6 individuals, 3 affected and 3 non-affected, belonging to a large Brazilian family with CPP (Family 1). Mutations in one candidate gene were investigated in 64 patients through automatic sequencing (Sanger\'s method). In a subgroup of patients, MLPA using synthetic MLPA probes was performed to search for deletions. A new complex rearrangement in the DLK1 gene characterized by a deletion of approximately 14.000pb in the 5\' untranslated (5\'UTR), encompassing the start of exon 1, associated with a duplication of a region of intron 3 of 269 bp was identified by whole-genomic sequencing. The DLK1 gene is located on the long arm of chromosome 14 (14q32.2) and it is maternally imprinted gene. This locus is associated with Temple syndrome, a complex disorder with multiple alterations, including central precocious puberty in up to 90% of cases. To investigate the effect of this genomic deletion, a serum measurement of DKL1 protein using ELISA method was performed in the affected patients from Family 1. Undetectable serum DLK1 levels were found in these patients. The phenotype of affected patients from Family 1 was characterized by a typical CPP, without syndromic signs (excluding Temple syndrome). Posteriorly, two new inactivating mutations in the gene DLK1 were identified (p.Val272Cysfs*14 and p.Pro160Leufs*50) through direct sequencing in two families (Families 2 and 3) with CPP or precocious menarche history. The segregation studies in Families 1 and 2 confirmed the pattern of dominant autosomal inheritance with complete penetrance and exclusive transmission by the paternal allele. The average age of puberty onset in the affected female patients was 5.4 years. The MLPA technique with synthetic MLPA probes for the DLK1 gene did not find other deletions in the studied subgroup. In conclusion, we identified 3 paternally inherited inactivating mutations in the DLK1 gene associated with familial CPP. The DLK1 is the second imprinted gene associated with pubertal disorders in humans. This finding suggests a role of the imprinted genes in puberty control. The mechanism through which this gene affects puberty is still unknown

Avanços recentes na etiologia da puberdade precoce foram obtidos a partir da análise do genoma por sequenciamento global. Mutações inativadoras do gene MKRN3 representam uma causa importante de puberdade precoce central (PPC) familial (33-46% dos casos). O objetivo do estudo foi a análise do DNA genômico de pacientes com PPC de origem familial ou esporádica sem mutações deletérias no gene MKRN3. Foram selecionados 68 indivíduos com PPC (37 com a forma familial e 31, aparentemente, esporádicos). O DNA genômico foi extraído do sangue periférico ou da saliva dos pacientes com PPC. A técnica de sequenciamento genômico em larga escala (ILLUMNA -Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) foi usada na busca de novos genes implicados com o desenvolvimento puberal prematuro em seis indivíduos, sendo três afetados e três não afetados, pertencentes a uma grande família brasileira com PPC (Família 1). Mutações em um gene candidato foram pesquisadas em 64 pacientes por sequenciamento automático direto (método de Sanger). Em um subgrupo de pacientes, foi realizada a técnica de MLPA com sondas customizadas na busca de deleções. Por sequenciamento genômico global, foi identificado um novo complexo rearranjo no gene DLK1, caracterizado por uma deleção de, aproximadamente, 14.000 pb na região 5\' não traduzida (5\'UTR), englobando o início do exon 1, associada a uma duplicação de uma região do intron 3 de 269 pb. O gene DLK1 está localizado no braço longo do cromossomo 14 (14q32.2) e sofre imprinting materno. Este lócus está associado à síndrome de Temple, uma doença complexa com múltiplas manifestações, incluindo puberdade precoce central em até 90% dos casos. Para investigar o efeito dessa deleção genômica, as concentrações séricas da proteína DLK1 pelo método ELISA foram medidas nas pacientes afetadas da Família 1. Valores indetectáveis de DLK1 foram encontrados nestas pacientes. O fenótipo das pacientes afetadas da Família 1 caracterizou-se por uma PPC típica, sem sinais sindrômicos (excluída a síndrome de Temple). Posteriormente, por meio do sequenciamento direto, duas novas mutações inativadoras no gene DLK1 foram identificadas (p.Val272Cysfs*14 e p.Pro160Leufs*50) em duas famílias (Famílias 2 e 3) com PPC ou história de menarca precoce. O estudo de segregação nas Famílias 1 e 2 confirmou o padrão de herança autossômico dominante com penetrância completa e transmissão exclusiva pelo alelo paterno. A média de idade de início da puberdade nas pacientes afetadas do sexo feminino foi de 5,4 anos. A técnica de MLPA com sondas customizadas para o gene DLK1 não encontrou outras deleções no subgrupo estudado. Em conclusão, foram identificadas três mutações inativadoras no gene DLK1 associadas à PPC familial de origem paterna. O DLK1 é o segundo gene imprintado associado a distúrbios puberais em humanos. Este achado sugere um papel dos genes imprintados no controle da puberdade. O mecanismo pelo qual esse gene afeta a puberdade ainda é desconhecido / Recent advances in the etiology of precocious puberty were obtained from the whole-genome sequencing analysis. Inactivating mutations of the MKRN3 gene represent a major cause of familial central precocious puberty (CPP) (33%- 46% of the cases). The objective of the study was to analyze the genomic DNA of patients with familial or sporadic CPP without deleterious mutations in the MKRN3 gene. Sixty-eight individuals with CPP (37 with familial form and 31 apparently sporadic cases) were selected. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood or saliva of patients with CPP. We used the whole-genomic sequencing technique (ILLUMNA - Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) searching for a new candidate genes implicated in premature pubertal development in 6 individuals, 3 affected and 3 non-affected, belonging to a large Brazilian family with CPP (Family 1). Mutations in one candidate gene were investigated in 64 patients through automatic sequencing (Sanger\'s method). In a subgroup of patients, MLPA using synthetic MLPA probes was performed to search for deletions. A new complex rearrangement in the DLK1 gene characterized by a deletion of approximately 14.000pb in the 5\' untranslated (5\'UTR), encompassing the start of exon 1, associated with a duplication of a region of intron 3 of 269 bp was identified by whole-genomic sequencing. The DLK1 gene is located on the long arm of chromosome 14 (14q32.2) and it is maternally imprinted gene. This locus is associated with Temple syndrome, a complex disorder with multiple alterations, including central precocious puberty in up to 90% of cases. To investigate the effect of this genomic deletion, a serum measurement of DKL1 protein using ELISA method was performed in the affected patients from Family 1. Undetectable serum DLK1 levels were found in these patients. The phenotype of affected patients from Family 1 was characterized by a typical CPP, without syndromic signs (excluding Temple syndrome). Posteriorly, two new inactivating mutations in the gene DLK1 were identified (p.Val272Cysfs*14 and p.Pro160Leufs*50) through direct sequencing in two families (Families 2 and 3) with CPP or precocious menarche history. The segregation studies in Families 1 and 2 confirmed the pattern of dominant autosomal inheritance with complete penetrance and exclusive transmission by the paternal allele. The average age of puberty onset in the affected female patients was 5.4 years. The MLPA technique with synthetic MLPA probes for the DLK1 gene did not find other deletions in the studied subgroup. In conclusion, we identified 3 paternally inherited inactivating mutations in the DLK1 gene associated with familial CPP. The DLK1 is the second imprinted gene associated with pubertal disorders in humans. This finding suggests a role of the imprinted genes in puberty control. The mechanism through which this gene affects puberty is still unknown

Introdução: A puberdade é considerada precoce quando ocorre antes dos 8 anos nas meninas. É classificada como puberdade precoce central (PPC) quando decorre da ativação prematura do eixo gonadotrófico e é considerada idiopática quando não há alteração no sistema nervoso central. O bloqueio puberal com análogos de GnRH é o tratamento de escolha da PPC e visa a regressão ou estabilização dos caracteres sexuais secundários, desaceleração da velocidade de crescimento e da maturação óssea com melhora do prognóstico de estatura adulta e promoção do ajuste psicossocial da criança e dos familiares. Poucos estudos avaliaram o impacto psicológico da PPC e o benefício resultante do bloqueio puberal. Objetivos: (1) Comparar o escore de estresse entre pacientes com PPC idiopática antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. (2) Avaliar a dinâmica da personalidade por meio do teste projetivo HTP-F (house-tree-person-family) em meninas com PPC idiopática, antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. (3) Comparar a prevalência dos indicadores de personalidade obtidos no HTP-F entre pacientes com PPC idiopática antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. Pacientes e Métodos: As pacientes foram agrupadas em pré-tratamento (n=12) e em tratamento (n=22), sendo 11 do grupo pré-tratamento reavaliadas 1 ano após início do tratamento (corte longitudinal) e 11 avaliadas em uma ocasião durante o tratamento (corte transversal). O grupo controle foi constituído de 8 meninas com desenvolvimento puberal em idade adequada, pareadas por estadiamento puberal. A avaliação psicológica incluiu entrevista semiestruturada, questionário psicossocial, aplicação da Escala de Stress Infantil (ESI) e do teste projetivo House-Tree-Person-Family (HTP-F). Os resultados estão expressos em média e desvio padrão e comparados entre os grupos por métodos estatísticos apropriados. Resultados: No grupo pré-tratamento, 6/12 (50%) pacientes encontravam-se estressadas, 4/12 (33%) na fase de alerta e 2/12 (17%) na fase de resistência. No grupo em tratamento (braço longitudinal), 3/11 (27%) pacientes encontravam-se estressadas e na fase de alerta. No grupo em tratamento (corte transversal) foram verificadas que 4/11 (36%) pacientes encontravam-se estressadas e na fase de alerta. No grupo controle somente 2/8 (25%) encontraram-se estressadas e situadas na fase alerta. Houve diferença significativa da média de escore total de estresse entre o grupo pré-tratamento, comparados ao grupo longitudinal e ao grupo controle (p <0,05). No teste HTP-F, os indicadores psicológicos significativos no grupo pré-tratamento foram sentimento de introversão comparado ao grupo em tratamento (longitudinal), sexualidade aflorada comparado ao grupo em tratamento (transversal) e sentimento de inferioridade comparado ao grupo controle (p < 0,05). Os indicadores psicológicos prevalentes, embora sem significância estatística no grupo pré-tratamento foram: ansiedade, sexualidade aflorada, esquema corporal inadequado, interação social inadequada e sentimento de inferioridade comparado aos demais grupos. No grupo em tratamento (longitudinal) foram significativos traços depressivos (luto) e sentimento de extroversão comparado ao grupo pré-tratamento (p < 0,05). No grupo em tratamento (transversal) os indicadores psicológicos prevalentes foram aceitação da mudança corporal e traços agressivos comparados aos demais grupos, embora sem significância estatística. Conclusão: O bloqueio puberal apresentou impacto significativo na redução do escore de estresse em pacientes com PPC. A aplicação do HTP-F em meninas com PPC apontou indicadores valiosos na dinâmica da personalidade, e poderá ser de grande utilidade na avaliação inicial, bem como na intervenção de meninas com precocidade sexual / Introduction: Puberty is considered premature when it occurs before 8 years of age in girls. It is classified as central precocious puberty (CPP) when it is caused by premature activation of the gonadotropic axis and idiopathic when there is no change in the central nervous system. Pubertal block with GnRH analogues is the treatment of choice for CPP and aims to achieve regression or stabilization of secondary sexual characteristics, slowing growth velocity and bone maturation with improved adult height prognosis and promoting the child\'s and family\'s psychosocial adjustment. Few studies have assessed the psychological impact of CPP and the resulting benefits of pubertal block. Objectives: (1) Compare the stress score among patients with idiopathic CPP before and during pubertal block with GnRH analogues and a control group. (2) To assess personality dynamics through the projective HTP-F (house-tree-person-family) test in girls with idiopathic PPC, before and during pubertal block with GnRH analogues and in a control group. (3) To compare the prevalence of personality indicators obtained in the HTP-F test in patients with idiopathic CPP before and during pubertal block with GnRH analogues and a control group. Patients and Methods: Patients were grouped at pre-treatment (n = 12) and treatment (n = 22) groups, with 11 from the pretreatment group being reassessed 1 year after the start of treatment (longitudinal section) and 11 being assessed on one occasion during treatment (cross-section). The control group consisted of 8 girls with appropriate pubertal development for age, matched by pubertal stage. Psychological assessment included semi-structured interviews, psychosocial questionnaire, application of the Child Stress Scale (CSS) and the projective House-Tree-Person-Family (HTP-F) test. The results are expressed as mean and standard deviation and compared between groups through appropriate statistical methods. Results: In the pre-treatment group, 6/12 (50%) patients were stressed, 4/12 (33%) in the alert phase and 2/12 (17%) in the resistance phase. In the treatment group (longitudinal arm), 3/11 (27%) patients were stressed and in the alert phase. In the treatment group (cross-section), 4/11 (36%) patients were stressed and in the alert phase. In the control group only 2/8 (25%) were stressed and in the alert phase. Significant differences were observed in the mean total stress score of the pre-treatment group when compared to the longitudinal and the control groups (p < 0.05). In the HTP-F test, significant psychological indicators in the pre-treatment group were: feelings of introversion compared to the treatment group (longitudinal), emergence of sexuality, when compared to the treatment group (cross-sectional) and feelings of inferiority when compared to the control group (p < 0.05). The prevalent psychological indicators, although not statistically significant in the pre-treatment group were: anxiety, emergence of sexuality, inadequate body schema, inadequate social interaction and feelings of inferiority when compared to the other groups. In the treatment group (longitudinal) the following indicators were significant: depressive traits (bereavement) and feeling of extroversion, when compared to pre-treatment group (p < 0.05). In the treatment group (cross-sectional) the prevalent psychological indicators were acceptance of body changes and aggressive traits when compared to other groups, although not statistically significant. Conclusions: The pubertal block had significant impact on stress score reduction in patients with CPP. The use of the HTP-F test in girls with CPP disclosed valuable indicators in personality dynamics and can be very useful in the initial assessment and intervention of girls with sexual precocity

Introdução: A puberdade é considerada precoce quando ocorre antes dos 8 anos nas meninas. É classificada como puberdade precoce central (PPC) quando decorre da ativação prematura do eixo gonadotrófico e é considerada idiopática quando não há alteração no sistema nervoso central. O bloqueio puberal com análogos de GnRH é o tratamento de escolha da PPC e visa a regressão ou estabilização dos caracteres sexuais secundários, desaceleração da velocidade de crescimento e da maturação óssea com melhora do prognóstico de estatura adulta e promoção do ajuste psicossocial da criança e dos familiares. Poucos estudos avaliaram o impacto psicológico da PPC e o benefício resultante do bloqueio puberal. Objetivos: (1) Comparar o escore de estresse entre pacientes com PPC idiopática antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. (2) Avaliar a dinâmica da personalidade por meio do teste projetivo HTP-F (house-tree-person-family) em meninas com PPC idiopática, antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. (3) Comparar a prevalência dos indicadores de personalidade obtidos no HTP-F entre pacientes com PPC idiopática antes e durante o bloqueio puberal com análogos de GnRH e um grupo controle. Pacientes e Métodos: As pacientes foram agrupadas em pré-tratamento (n=12) e em tratamento (n=22), sendo 11 do grupo pré-tratamento reavaliadas 1 ano após início do tratamento (corte longitudinal) e 11 avaliadas em uma ocasião durante o tratamento (corte transversal). O grupo controle foi constituído de 8 meninas com desenvolvimento puberal em idade adequada, pareadas por estadiamento puberal. A avaliação psicológica incluiu entrevista semiestruturada, questionário psicossocial, aplicação da Escala de Stress Infantil (ESI) e do teste projetivo House-Tree-Person-Family (HTP-F). Os resultados estão expressos em média e desvio padrão e comparados entre os grupos por métodos estatísticos apropriados. Resultados: No grupo pré-tratamento, 6/12 (50%) pacientes encontravam-se estressadas, 4/12 (33%) na fase de alerta e 2/12 (17%) na fase de resistência. No grupo em tratamento (braço longitudinal), 3/11 (27%) pacientes encontravam-se estressadas e na fase de alerta. No grupo em tratamento (corte transversal) foram verificadas que 4/11 (36%) pacientes encontravam-se estressadas e na fase de alerta. No grupo controle somente 2/8 (25%) encontraram-se estressadas e situadas na fase alerta. Houve diferença significativa da média de escore total de estresse entre o grupo pré-tratamento, comparados ao grupo longitudinal e ao grupo controle (p <0,05). No teste HTP-F, os indicadores psicológicos significativos no grupo pré-tratamento foram sentimento de introversão comparado ao grupo em tratamento (longitudinal), sexualidade aflorada comparado ao grupo em tratamento (transversal) e sentimento de inferioridade comparado ao grupo controle (p < 0,05). Os indicadores psicológicos prevalentes, embora sem significância estatística no grupo pré-tratamento foram: ansiedade, sexualidade aflorada, esquema corporal inadequado, interação social inadequada e sentimento de inferioridade comparado aos demais grupos. No grupo em tratamento (longitudinal) foram significativos traços depressivos (luto) e sentimento de extroversão comparado ao grupo pré-tratamento (p < 0,05). No grupo em tratamento (transversal) os indicadores psicológicos prevalentes foram aceitação da mudança corporal e traços agressivos comparados aos demais grupos, embora sem significância estatística. Conclusão: O bloqueio puberal apresentou impacto significativo na redução do escore de estresse em pacientes com PPC. A aplicação do HTP-F em meninas com PPC apontou indicadores valiosos na dinâmica da personalidade, e poderá ser de grande utilidade na avaliação inicial, bem como na intervenção de meninas com precocidade sexual / Introduction: Puberty is considered premature when it occurs before 8 years of age in girls. It is classified as central precocious puberty (CPP) when it is caused by premature activation of the gonadotropic axis and idiopathic when there is no change in the central nervous system. Pubertal block with GnRH analogues is the treatment of choice for CPP and aims to achieve regression or stabilization of secondary sexual characteristics, slowing growth velocity and bone maturation with improved adult height prognosis and promoting the child\'s and family\'s psychosocial adjustment. Few studies have assessed the psychological impact of CPP and the resulting benefits of pubertal block. Objectives: (1) Compare the stress score among patients with idiopathic CPP before and during pubertal block with GnRH analogues and a control group. (2) To assess personality dynamics through the projective HTP-F (house-tree-person-family) test in girls with idiopathic PPC, before and during pubertal block with GnRH analogues and in a control group. (3) To compare the prevalence of personality indicators obtained in the HTP-F test in patients with idiopathic CPP before and during pubertal block with GnRH analogues and a control group. Patients and Methods: Patients were grouped at pre-treatment (n = 12) and treatment (n = 22) groups, with 11 from the pretreatment group being reassessed 1 year after the start of treatment (longitudinal section) and 11 being assessed on one occasion during treatment (cross-section). The control group consisted of 8 girls with appropriate pubertal development for age, matched by pubertal stage. Psychological assessment included semi-structured interviews, psychosocial questionnaire, application of the Child Stress Scale (CSS) and the projective House-Tree-Person-Family (HTP-F) test. The results are expressed as mean and standard deviation and compared between groups through appropriate statistical methods. Results: In the pre-treatment group, 6/12 (50%) patients were stressed, 4/12 (33%) in the alert phase and 2/12 (17%) in the resistance phase. In the treatment group (longitudinal arm), 3/11 (27%) patients were stressed and in the alert phase. In the treatment group (cross-section), 4/11 (36%) patients were stressed and in the alert phase. In the control group only 2/8 (25%) were stressed and in the alert phase. Significant differences were observed in the mean total stress score of the pre-treatment group when compared to the longitudinal and the control groups (p < 0.05). In the HTP-F test, significant psychological indicators in the pre-treatment group were: feelings of introversion compared to the treatment group (longitudinal), emergence of sexuality, when compared to the treatment group (cross-sectional) and feelings of inferiority when compared to the control group (p < 0.05). The prevalent psychological indicators, although not statistically significant in the pre-treatment group were: anxiety, emergence of sexuality, inadequate body schema, inadequate social interaction and feelings of inferiority when compared to the other groups. In the treatment group (longitudinal) the following indicators were significant: depressive traits (bereavement) and feeling of extroversion, when compared to pre-treatment group (p < 0.05). In the treatment group (cross-sectional) the prevalent psychological indicators were acceptance of body changes and aggressive traits when compared to other groups, although not statistically significant. Conclusions: The pubertal block had significant impact on stress score reduction in patients with CPP. The use of the HTP-F test in girls with CPP disclosed valuable indicators in personality dynamics and can be very useful in the initial assessment and intervention of girls with sexual precocity

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Puberdade precoce central em meninas à definida como desenvolvimento puberal causado pela ativaÃÃo do eixo hipotÃlamo-hipÃfise-gonadal antes de 8 anos de idade. Nestas condiÃÃes, a estimulaÃÃo das gonadotrofinas produz aumento dos ovÃrios e a secreÃÃo de estrogÃnio resulta em aumento uterino. O exame de ultra-som pÃlvico prova ser um mÃtodo preciso e nÃo invasivo na investigaÃÃo da genitÃlia interna de pacientes do sexo feminino. Ultra-sonografia pÃlvica foi sistematicamente realizada em 18 meninas com diagnÃstico de puberdade precoce central idiopÃtica para avaliar o impacto do tratamento com anÃlogo de GnRH na genitÃlia interna feminina. Antes e, em mÃdia, 3 meses apÃs o inÃcio do tratamento, foram avaliados os volumes uterino e ovarianos, o diÃmetro longitudinal do Ãtero, eco endometrial e grau de maturidade de Tanner. Os nossos dados demonstraram que o Ãtero e os ovÃrios estÃo aumentados na Ãpoca do diagnÃstico. ApÃs, aproximadamente 3 meses de terapia, ambos os volumes, uterino e ovarianos, reduziram seus valores, o comprimento do Ãtero diminuiu e houve uma regressÃo quanto ao estÃgio puberal de Tunner. Quanto ao eco endometrial nÃo houve mudanÃa significativa. Os nossos resultados confirmam a ecografia pÃlvica como uma ferramenta confiÃvel para investigaÃÃo da genitÃlia interna em meninas com puberdade precoce e como valioso mÃtodo para avaliaÃÃo da eficÃcia do tratamento com anÃlogo de GnRH. / Central precociuos puberty in girls is defined as pubertal development caused by activation of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis before 8 years old. In this condition, gonadotropin stimulation produces ovarian enlargement and estrogen secretion results in uterine enlargement. Pelvic ultrasound has proven to be an accurate and noninvasive technique for investigation of internal genitalia in female patients. Pelvic ultrasonography was systematically perfomed on 18 girls with idiopathic central precociuos puberty to investigate the impact of treatment with gonadotropin-releasing hormone analogues on female internal genitalia. Before and after three months of treatment were evaluated ovarian and uterine volumes, uterine lenght, endometrial stripe and Tanner staging. Our data demonstrated that ovaries and uterus are enlarged at the time of diagnosis. Later, average 3 months of treatment, both ovarian and uterine volumes decreased, the uterine lenght decreased and the Tanner staging regressed. The endometrial echogenicity did not showed changes. Ours results confirmed pelvic ultrasonography as a reliable tool for investigation of internal genitalia in girls with precociuos puberty and as a valid method for evaluation of the efficacy of treatment with gonadotropin-releasing hormone analogues.

A kisspeptina, codificada pelo gene KISS1, é um neuropeptídeo crucial na regulação do início da puberdade. A kisspeptina estimula a secreção hipotalâmica do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) após se ligar ao seu receptor GPR54. Mutações inativadoras do GPR54 são atualmente consideradas como uma causa rara de hipogonadismo hipogonadotrófico isolado (HHI) normósmico. Recentemente, uma mutação ativadora no receptor GPR54 foi implicada na patogênese da puberdade precoce dependente de gonadotrofinas (PPDG). Com base nesses achados, levantamos a hipótese de que alterações no gene KISS1 poderiam contribuir para a patogênese de distúrbios puberais centrais. O objetivo do presente estudo foi investigar a presença de variantes no gene KISS1 em pacientes com PPDG e HHI. Sessenta e sete crianças brasileiras com PPDG (63 meninas e 4 meninos) e 61 pacientes com HHI (40 homens e 21 mulheres) foram selecionados, incluindo casos esporádicos e familiares em ambos os grupos. A população controle consistiu de 200 indivíduos com história de desenvolvimento puberal normal. A região promotora e os 3 exons do gene KISS1 foram amplificados e submetidos a sequenciamento automático. Duas novas variantes no gene KISS1, p.P74S e p.H90D, foram identificadas em duas crianças não relacionadas, portadoras de PPDG idiopática. Ambas as variantes estão localizadas na região amino-terminal da kisspeptina-54 e estavam ausentes em 400 alelos controles. A variante p.P74S foi identificada em heterozigose em um menino que desenvolveu puberdade com um ano de idade. Sua mãe e avó materna, que apresentavam história de desenvolvimento puberal normal, eram portadoras da mesma variante em heterozigose, sugerindo penetrância incompleta e/ou herança sexo-dependente. A variante p.H90D foi identificada em homozigose em uma menina com PPDG, que desenvolveu puberdade aos seis anos de idade. Sua mãe, com história de menarca aos dez anos de idade, era portadora da mesma variante em heterozigose. Células transfectadas estavelmente com GPR54 foram estimuladas com concentrações crescentes de kisspeptina-54 (kp-54) humana selvagem ou contendo as mutações (kp-54 H90D e kp-54 P74S) e o acúmulo de fosfato de inositol (IP) foi medido. Nos estudos in vitro, a kp-54 P74S apresentou uma capacidade de ativação do receptor GPR54 semelhante à kp-54 selvagem. A kp-54 p.H90D mostrou uma ativação da sinalização do receptor significativamente mais potente que a kp-54 selvagem, sugerindo que essa é uma mutação ativadora. No grupo de HHI, uma nova variante (c.588-589insT) foi identificada em heterozigose na região 3 não traduzida do gene KISS1 em um paciente do sexo masculino. O papel dessa variante no fenótipo de HHI permanece indeterminado. Em conclusão, duas mutações no gene KiSS1 foram descritas pela primeira vez em associação com PPDG. / Kisspeptin, encoded by the KISS1 gene, is an important regulator of puberty onset. After binding to its receptor GPR54, kisspeptin stimulates gonadotropin-releasing hormone secretion by the hypothalamic neurons. Inactivating GPR54 mutations are a rare cause of normosmic isolated hypogonadotropic hypogonadism (IHH). Recently, a unique GPR54 activating mutation was implicated in the pathogenesis of gonadotropin dependent precocious puberty (GDPP). Based on these observations, we hypothesized that mutations in the KISS1 gene might be associated with central pubertal disorders. The aim of this study was to investigate KISS1 mutations in idiopathic GDPP and normosmic IHH. Sixty-seven Brazilian children (63 girls and 4 boys) with idiopathic GDPP and 61 patients with normosmic IHH (40 men and 21 women) were selected. Familial and sporadic cases were included in both groups. The control population consisted of 200 individuals who had normal timing of puberty. The promoter region and the 3 exons of the KISS1 gene were amplified and automatically sequenced. Two novel KISS1 missense mutations, p.P74S and p.H90D, were identified in two unrelated children with idiopathic GDPP. Both mutations were absent in 400 control alleles and are located in the amino-terminal region of kisspeptin-54. The p.P74S mutation was identified in the heterozygous state in a boy who developed puberty at 1 yr of age. His mother and maternal grandmother, who had normal pubertal development, were also heterozygous for the p.P74S mutation, suggesting incomplete penetrance and/or sex-dependent inheritance. The p.H90D mutation was identified in the homozygous state in a girl with GDPP, who developed puberty at 6 yr of age. Her mother, who had menarche at 10 yr of age, carried the p.H90D mutation in the heterozygous state. CHO cells stably transfected with GPR54 were stimulated with different concentrations of synthetic human wild type or mutant kisspeptin-54 (KP54) and inositol phosphate (IP) accumulation was measured. In vitro studies revealed that the capacity of the p.P74S mutant KP54 to stimulate IP production was similar to the wild type. The p.H90D kisspeptin-54 showed a significantly more potent activation of GPR54 signaling in comparison to the wild type in vitro, suggesting a gain-of-function mutation. In the IHH group, a heterozygous variant in the 3 UTR of the KISS1 gene (c.588-589insT) was identified. The role of this variant in the IHH phenotype remains to be determined. In conclusion, two KiSS1 mutations were described for the first time in association with GDPP.

A maioria dos casos de puberdade precoce central (PPC) em meninas permanece idiopática. A hipótese de uma causa genética vem se fortalecendo após a descoberta de alguns genes associados a este fenótipo, sobretudo aqueles implicados com o sistema kisspeptina (KISS1 e KISS1R). Entretanto, apenas casos isolados de PPC foram relacionados à mutação na kisspeptina ou em seu receptor. Até recentemente, a maioria dos estudos genéticos em PPC buscava genes candidatos selecionados com base em modelos animais, análise genética de pacientes com hipogonadismo hipogonadotrófico, ou ainda, nos estudos de associação ampla do genoma. Neste trabalho, foi utilizado o sequenciamento exômico global, uma metodologia mais moderna de sequenciamento, para identificar variantes associadas ao fenótipo de PPC. Trinta e seis indivíduos com a forma de PPC familial (19 famílias) e 213 casos aparentemente esporádicos foram inicialmente selecionados. A forma familial foi definida pela presença de mais de um membro afetado na família. DNA genômico foi extraído dos leucócitos do sangue periférico de todos os pacientes. O estudo de sequenciamento exômico global realizado pela técnica ILLUMINA, em 40 membros de 15 famílias com PPC, identificou mutações inativadoras em um único gene, MKRN3, em cinco dessas famílias. Pesquisa de mutação no MKRN3 realizada por sequenciamento direto em duas famílias adicionais (quatro pacientes) identificou duas novas variantes nesse gene. O MKRN3 é um gene de um único éxon, localizado no cromossomo 15 em uma região crítica para a síndrome de Prader Willi. O gene MKRN3 sofre imprinting materno, sendo expresso apenas pelo alelo paterno. A descoberta de mutações em pacientes com PPC familial despertou o interesse para a pesquisa de mutações nesse gene em 213 pacientes com PPC aparentemente esporádica por meio de reação em cadeia de polimerase seguida de purificação enzimática e sequenciamento automático direto (Sanger). Três novas mutações e duas já anteriormente identificadas, incluindo quatro frameshifts e uma variante missense, foram encontradas, em heterozigose, em seis meninas não relacionadas. Todas as novas variantes identificadas estavam ausentes nos bancos de dados (1000 Genomes e Exome Variant Server). O estudo de segregação familial em três dessas meninas com PPC aparentemente esporádica e mutação no MKRN3 confirmou o padrão de herança autossômica dominante com penetrância completa e transmissão exclusiva pelo alelo paterno, demonstrando que esses casos eram, na verdade, também familiares. A maioria das mutações encontradas no MKRN3 era do tipo frameshift ou nonsense, levando a stop códons prematuros e proteínas truncadas e, portanto, confirmando a associação com o fenótipo. As duas mutações missenses (p.Arg365Ser e p.Phe417Ile) identificadas estavam localizadas em regiões de dedo ou anel de zinco, importantes para a função da proteína. Além disso, os estudos in silico dessas duas variantes demonstraram patogenicidade. Todos os pacientes com mutação no MKRN3 apresentavam características clínicas e hormonais típicas de ativação prematura do eixo reprodutivo. A mediana de idade de início da puberdade foi de 6 anos nas meninas (variando de 3 a 6,5) e 8 anos nos meninos (variando de 5,9 a 8,5). Tendo em vista o fenômeno de imprinting, análise de metilação foi também realizada em um subgrupo de 52 pacientes com PPC pela técnica de MS-MLPA, mas não foram encontradas alterações no padrão de metilação. Em conclusão, este trabalho identificou um novo gene associado ao fenótipo de PPC. Atualmente, mutações inativadoras no MKRN3 representam a causa genética mais comum de PPC familial (33%). O MKRN3 é o primeiro gene imprintado associado a distúrbios puberais em humanos. O mecanismo preciso de ação desse gene na regulação da secreção de GnRH necessita de estudos adicionais / Most cases of central precocious puberty (CPP) in girls remain idiopathic. The hypothesis of a genetic cause has been strengthened after the discovery of some genes associated with this phenotype, particularly those involved with the kisspeptin system (KISS1 and KISS1R). However, genetic defects in KISS1 and its receptor are rare and have been identified in only a few patients with CPP.over the past years. To date, most genetic studies in CPP was based mainly on a candidate gene approach, including genes selected in animal studies, human models of patients with hypogonadotropic hypogonadism or in genome wide association studies. In the present study, we used whole exome sequencing, a more advanced method of sequencing, to identify variants associated with CPP. Thirty-six patients with the familial form of CPP (19 families) and 213 apparently sporadic cases were initially selected. The familial form was defined by the presence of more than one member affected in the family. Genomic DNA was extracted from peripheral blood leukocytes in all patients. Whole exome sequencing performed by ILLUMINA technique in 40 members of 15 families with CPP, identified inactivating mutations in a single gene, MKRN3, in five out of these families. Analysis of MKRN3 mutations performed by automatic sequencing in two additional families (four patients) identified two novel mutations. MKRN3 is an introless gene located on chromosome 15, in the Prader Willi syndrome critical region, and it is expressed only by the paternal allele due to the maternal imprinting. Following the initial findings, we searched for MKRN3 mutations in 213 patients with apparently sporadic CPP using polymerase chain reaction followed by direct enzymatic purification and automated sequencing (Sanger). Three new mutations and two previously reported, including four frameshifts and one missense variant was identified in six unrelated girls with CPP. All variants were not described in the two databases (1000 Genomes and Exome Variant Server). The familial segregation analysis performed in three out of these girls with apparently sporadic CPP and MKRN3 mutations confirmed the autosomal dominant inheritance with complete penetrance and exclusive transmission through the paternal allele, revealing familial inheritance in apparently sporadic cases. Most of these MKRN3 mutations were frameshifts or nonsense, leading to premature stop codons and truncated proteins, thus demonstrating positive genotype- phenotype correlation. The two missense mutations (p.Arg365Ser and p.Phe417Ile) identified were located within zinc finger motifs, regions predicted to be essential for the protein function. Besides that, all missense mutations were predicted to be pathogenic by in silico analysis. All patients carrying MKRN3 mutations exhibited typical clinical and hormonal features of premature activation of the reproductive axis. The median age of puberty onset was 6.0 years in girls (ranging from 3.0 to 6.5) and 8.0 years in boys (ranging from 5.9 to 8.5). In view of the imprinting phenomenon, methylation analysis was also performed in a subgroup of 52 patients with CPP by MSMLPA technique, but no methylation abnormalities were detected. In conclusion, our work has identified a new gene associated with CPP. Currently, inactivating mutations in MKRN3 represent the most common genetic cause of familial CPP (33%). MKRN3 is the first imprinted gene associated with pubertal disorders in humans. However, its precise mechanism of action in the regulation of GnRH secretion needs further studies