Memoria para optar al título profesional de Químico Farmacéutico / El basidiomicete de pudrición blanca Ceriporiopsis subvermispora es un hongo capaz de degradar la lignina de la madera mediante una serie de enzimas secretadas al medio extracelular. Este sistema ligninolítico está compuesto por las enzimas lacasa (Lcs) y manganeso peroxidasa (MnP) cuyos genes codificantes y sus secuencias regulatorias han sido clonados y secuenciados por nuestro grupo. Tomando en cuenta que la regulación de la expresión de un gen depende de diferentes elementos contenidos en su región promotora, esta actúa como módulo central de procesamiento de diversas señales. Con el objetivo de conocer más sobre el sistema regulatorio de estas enzimas, específicamente de la isoenzima MnP2B, nos propusimos estudiar los posibles factores transcripcionales que se unen al promotor del gen Cs-mnp2B; Para esto se dividió la región promotora en cuatro fragmentos, α1, α2, β1 y β2, los cuales fueron utilizados para ensayos de retardo (EMSA) con extractos de proteínas nucleares preparados a partir de micelio del hongo, para demostrar la formación de complejo proteína-DNA. Posteriormente se realizaron ensayos de competencia que comprobaron la especificidad de la unión a estas sondas. Al analizar mediante footprinting los distintos fragmentos, la sonda β1 mostró los resultados más claros, encontrándose una región protegida de 48 pb. Para analizar este sitio de unión, se diseñó un nuevo partidor que permitió la amplificación de un fragmento de 74 pb, que forma parte de β1 y que contenía dicha secuencia. Esta sonda se denominó β1A y fue analizada con más detalle. Este pequeño fragmento del promotor fue utilizado como sonda en ensayos de EMSA, los que mostraron la unión específica de a lo menos una proteína. Para caracterizar las proteínas unidas a la sonda β1A, el complejo proteína-DNA fue purificado desde el gel de retardo y posteriormente fue resuelto en un gel SDS-PAGE. El resultado de este ensayo mostró la existencia de una proteína mayoritaria en este complejo con una masa molecular entre 60 y 70 kDa. Finalmente se estudió la secuencia que mostró protección en el ensayo de huella digital o “footprinting”, con los programas computacionales CBRC y TESS, los que predicen cajas de unión putativas a factores transcripcionales. El análisis conjunto de ambos programas mostró la probable unión de seis proteínas, ADR1, GCN4, Hsf1, SRY, Stuap y Ttk69, de las cuales al menos tres podrían estar directamente relacionadas con la regulación del gen Cs-mnp2B / The white-rot basidiomycete Ceriporiopsis subvermispora is able to degrade lignin from wood trough an array of extracellular secreted enzymes, its ligninolytic system composed by laccase (Lcs) and manganese peroxidase enzymes. Their coding sequences and regulatory regions have been cloned and sequenced by our group. Taking into account that the regulation of the expression of a particular gene depends on different elements contained in its promoter region, we decided to explore the possible transcription factors that may interact with the promoter region of the Cs-mnp2B gene. Since promoter regions act as key elements that process a broad type of signals, the aim of this work was to study to some extent the regulatory mechanisms of the genes encoding for these enzymes. For this purpose, the Cs-mnp2B promoter region was divided into four different fragments named α1, α2, β1 and β2. To demonstrate a protein-DNA interaction, all these fragments were incubated with protein nuclear extracts prepared from fungal mycelia and used as DNA probes for electromobility-shift assays (EMSA). Using all the aforementioned probes, the protein-DNA interaction specificity was studied by competition analysis. By means of footprinting, a 48bp protected region was only clearly identified when using the β1 probe. To analyze this binding region, a new primer was designed to allow the amplification of a 74bp fragment that it is part of the b1 probe and that also contains the mentioned sequence. This new probe was named b1A and it was further analyzed. When used as a probe, EMSA showed a specific interaction with at least one nuclear protein. The observed protein-DNA complex was gel-purified and subsequently loaded onto a SDS-PAGE to characterize the proteins present in the complex. The existence of a major protein with a molecular mass between 60 and 70 KDa was observed within the protein- DNA complex. Finally, the footprinting-protected sequence was further analyzed using the CBRC and TESS computational software, which predicts transcriptional factors putative binding regions. According to both analyses, six proteins named ADR1, GCN4, Hsf1, SRY, Stuap and Ttk69 showed to be the most probable binding candidates. Among these proteins, only three may be directly involved in the regulation of the Cs-mnp2B gene

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de un agente dispersante, (Labrafil®M2125 CS) y una dispersión sólida, sobre la liberación de albendazol desde sistemas matriciales lipídicos. Para esto se realizaron formulaciones con Gelucire® 50/13 y albendazol (F0) y formulaciones de Gelucire® 50/13 y albendazol con porcentajes crecientes de Labrafil®M2125 CS de 1%, 2%, 3% y 5% p/p (F1, F2, F3 y F4), y además comprimidos matriciales de Gelucire® 50/13 y albendazol (Fa) y de dispersión albendazol:PVP-Gelucire® 50/13 (Fb). Los perfiles de liberación del albendazol desde las matrices diseñadas se realizaron utilizando el aparato 2 de la USP 30 a 50 rpm, 37ºC en 900 mL y como medio de disolución HCl 0,1N (pH 1,2) y un buffer fosfato de pH 6,8 durante 8 horas. Los perfiles de liberación obtenidos desde matrices lipídicas a base de Gelucire® 50/13 (F0) fueron de 47,06±0,34 y para las matrices Gelucire® 50/13-Labrafil® M 2125 CS (F1, F2, F3, F4) fueron de 49,23±0,39%; 62,43±0,26%; 68,23±0,26% y 72,91 ±0,68%, respectivamente. El estudio de los mecanismos de liberación indicó que el modelo cinético que presentaron las matrices lipídicas en todas sus formulaciones se ajustó a una cinética de orden cero y el mecanismo de liberación del fármaco se realizó principalmente por erosión de matriz. El porcentaje de albendazol liberado al término de las 8 horas desde la comprimidos matriciales de Gelucire® 50/13 fue de 66,24±0,39% y para los comprimidos que usaron la dispersión sólida del principio activo fue de 87,99±0,52%. El modelo cinético que presentaron los comprimidos matriciales en las dos formulaciones se ajustó a una cinética de orden uno. El modelo de liberación para Fa se acerca al modelo de difusión, mientras que Fb el un mecanismo de liberación no está muy definido, pudiendo ocurrir en forma simultánea, difusión y erosión.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los sistemas fotosintéticos naturales y artificiales en los cuales la energía de la luz es colectada y almacenada como energía química, es un proceso de conversión que es iniciado con la transferencia fotoinducida de un electrón, que es seguida por otras etapas químicas que permiten la separación y estabilización cinética de los llamados “sistemas de carga separada”. Este es el caso de las 7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-onas, conocidas como oxoisoaporfinas, que al ser fotorreducidas en presencia de aminas generan fotoproductos iónicos metaestables, capaces de almacenar una fracción apreciable de la energía de fotoexcitación. Los fotoproductos que se forman vía una transferencia secuencial de electrón-protón-electrón, revierten térmicamente a las oxoisoaporfinas originales, generando productos de oxidación de la amina. La reconversión del fotoproducto metaestable permite la reutilización del sistema en tanto exista amina remanente que reaccione con la oxoisoaporfina regenerada. Se estudiaron los transientes de la fotorreducción por aminas de la oxoisoaporfina y 5-metoxi-oxoisoaporfina, el triplete excitado, el anión radical y el radical neutro. Los intermediarios transientes fueron generados por láser flash-fotólisis, en presencia y ausencia de aminas terciarias, con y sin hidrógenos alfa. Si la amina no es capaz de donar protones, la reacción procederá sólo hasta la formación de A-·. Se identificaron y se caracterizaron los tripletes y radicales de las dos oxoisoaporfinas en estudio y se determinaron los parámetros cinéticos / Natural and artificial photosynthetic systems in which the energy of the light is collected and stored as chemical energy, is a process beggining with a photoinduced single electron transfer, PET, followed by other stages wich allow the separation and kinetic stabilization of “separate-charge systems”. This is the case of 7H-dibenzo[de,h]quinolin-7-onas, well-known as oxoisoaporphines, wich are photoreduced by amines, generating ionic metastable photoproducts capable to store an appreciable fraction of the photoexcitation energy. The photoproducts, formed via a sequential transfer of electron-proton-electron, revert thermally to the original oxoisoaporphines generating amine photooxidation products. The back reaction of the metastable photoproducts allows the reuse of the system as long as amine remains in the system, to react with the regenerated oxoisoaporphine. In this work we studied the transient species involved in the photoreduction by amines of oxoisoaporphine and 5-methoxy-oxoisoaporphine; the excited triplet state of oxoisoaporphines, the radical anion formed after electron transfer and the neutral hydrogen radical, generated by proton transfer. Photoreduction intermediary transients were generated by laser flash-photolysis, in the presence and absence of tertiary amines, with and without transferable α- hydrogen. If the amine is not able to donate protons, the reaction will only proceed until the formation of A-·, allowing its characterization. With amines capables to donate an α- H, photoreduction continues to the formation of neutral hydrogen radical AH·, and eventually to metastable photoproducts. In this work triplet excited states were characterized, radical anions and neutral hydrogen radicals for both oxoisoaporphines and the kinetic parameters through evolve were also determined

En esta Memoria se presenta el desarrollo y la puesta punto de metodologías analíticas reproducibles y selectivas, y su posterior aplicación en estudios de degradación de 2-(o-nitrofenil)-benzimidazol (NB) y N-benzoil-2-(o-nitrofenil)-benzimidazol (BNB). Dichos estudios se llevaron a cabo usando las técnicas de polarografía de pulso diferencial (PPD), polarografía tast (PTAST), voltametría cíclica (VC), espectrofotometría UV-Vis, cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) y además estudios computacionales de modelamiento molecular.

No description available.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Aristotelia chilensis (Mol) Stutnz, también conocida como maqui, es una especie perteneciente a la familia Eleaocarpaceae, un árbol nativo de Chile y Argentina. La medicina popular le atribuye a las hojas de esta especie, propiedades analgésicas y antiinflamatorias siendo respaldadas por estudios científicos y se ha determinado además que las hojas poseen actividades antimicrobiana y antioxidante. Sus frutos son explotados como alimento y fuente de colorantes. El presente estudio examinó los posibles mecanismos involucrados en el efecto antinociceptivo tópico de tres extractos de hexano (EH, 3,5%p/v), diclorometano (EDCM, 4,5%p/v) y metanol (EM, 2,7%p/v) obtenidos desde las hojas de Aristotelia chilensis, a una concentración correspondiente a su CE25, utilizando como modelo experimental un ensayo de dolor térmico agudo como es el tail flick en ratones y la administración previa vía intraperitoneal (i.p.) de los siguientes antagonistas: naltrexona (NTX), naltrindol(NTI), nor-binaltorfimina (Nor-BNI), tropisetrón (TRO), prazosin(PRA), yohimbina (YOH), atropina (ATRO) y NG-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME). La antinocicepción causada por EDCM y EM fue modificada por NTX, antagonista de MOP-R, mientras que NTI, antagonista de DOP-R sólo varió la analgesia de EM. En contraste, Nor-BNI no provocó cambios significativos en la antinocicepción de los extractos en estudio. El antagonista serotonérgico (TRO) incrementó el efecto analgésico de EH y EDCM, sin embargo no modificó significativamente la actividad analgésica de EM. Por otro lado, el antagonista adrenérgico (α-1) PRA aumentó el efecto analgésico de EH, EDCM y EM, mientras que YOH, antagonista adrenérgico (α-2) causó una modificación significativa de la antinocicepción de los extractos EDCM y EM, no así de la analgesia de EH. Por otra parte, la administración de ATRO, antagonista colinérgico muscarínico aumentó la analgesia de EH y EM, no así de EDCM. Por último, L-NAME incrementó significativamente los efectos analgésicos de los extractos EH, EDCM y EM. En conclusión, la actividad analgésica de EH estaría modulada por receptores serotonérgicos (5-HT3), adrenérgicos (α-1), colinérgico muscarínico (ACh-M) y vÍa L-arginina/NO. En cambio la actividad antinociceptiva de EDCM es modulada por las vías opioide, serotonérgicas, adrenérgicas y nitridérgicas. Mientras que en el efecto analgésico de EM estarían involucrados los sistemas opioide, adrenérgico, colinérgico muscarínico y L-arginina/NO

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Dunalia spinosa (Meyer) Dammer (Solanaceae), n.v. chumu-chumi, yara, chilca hembra, es un arbusto que crece en la precordillera de la región de Tarapacá, provincia de Arica, I Región de Chile. La medicina folclórica le atribuye propiedades para el dolor de muelas, problemas respiratorios y lavado de heridas, No existen antecedentes acerca de estudios químicos ni farmacológicos. La recolección del material vegetal (parte aérea) fue realizada en el pueblo de Socoroma (3.000 msnm), conservándose un testigo en el herbario de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile (SQF Nº 22256). La obtención de los extractos se realizó de los ejemplares colectados y aún frescos. El exudado resinoso (ERES) fue obtenido por inmersión de la parte aérea de la planta en diclorometano. Luego el material vegetal extraído fue secado, molido y sometido a extracción secuencial con disolventes de polaridad creciente obteniéndose los extractos hexano (EHEX), diclorometano (EDCM), acetato de etilo (EAET) y metanólico /EMET). La actividad antimicrobioana evaluada mediante siembra radial fue encontrada en los extractos; ERES y EDCM, presentando actividad frente a las bacterias Gram (+): B. subtilis y M. flavus y Gram (-): E. coli, siendo inactivos para los hongos C. albicans y S. cerevisiae. Mediante el bioensayo bioensayo bioautografía se verificó la actividad antibacteriana frente a las mismas bacterias, además de S.aureus y K. pneumoniae por parte de los extractos y los compuestos aislados DU-1 y DU-2. Luego se determinó la concentración mínima inhibitoria (CMI) para DU-1 frente a una bacteria Gram (-): E. coli y una Gram (+): S. aureus, dando como resultado para E. coli: 30ug/mL, siendo el fármaco de referencia cloramfenicol con una CMI < 5 ug/mL; y para S. aureus: 80 ug/mL usando como fármaco de referencia ampicilina con una CMI de 5 ug/mL. La actividad analgésica tópica in vivo fue determinada por el test de formalina, utilizando como fármaco de referencia ibuprofeno, observándose que todos los extractos estudiados presentaron actividad, siendo ésta mayor en lo extractos menos polares. La actividad antiinflamatoria tópica in vivo fue estudiada mediante el método de edema en oreja de ratón utilizando ácido araquidónico (AA) y 12-miristato-13-acetato forbol (TPA) como agentes inflamatorios y como fármacos de referencia se utilizaron nimesulida e indometacina respectivamente. Los extractos ERES, EACET, EMET e INF presentaron actividad frente al edema producido por TPA. Debido a estos resultados se evaluó la actividad antiinflamatoria del compuesto aislado DU-1 frente a AA, el cual no presentó actividad. Con el fin de evaluar la actividad atrapadora de radicales libres, se realizó el ensayo de inhibición de la enzima xantina osidasa (X.O.), donde se utilizó como fármaco de referencia alopurinol, Sólo el EDCM presentó una leve actividad, ninguno de los otros extractos fue activo. Para aislar los metabolitos activos se realizó un fraccionamiento desde el ERES mediante columnas rápidas de gel de sílice y columnas de Sephadex obteniéndose las sustancias DU-1 y DU-2. De estas dos sustancias se identificó DU-1 mediante un completo estudio espectroscópico del cuál se obtuvo que el compuesto corresponde a un withanólido, el: 26-δ-lactona-1-oxo-4β, 27-dihidroxi-5,6-epoxi-ergostano-2,24-dieno, conocido con el nombre de withaferina A. Con los resultados encontrados hasta ahora, quedan respaldados científicamente los usos y las propiedades que la medicina folclórica atribuye a esta especie para el dolor de muelas, lavado de heridas y problemas respiratorios y la validan como planta medicinal

Se realizó un estudio voltamétrico de dos compuestos 4-nitroimidazólicos los que presentan diferentes substituyentes (-H, -CH3) en la posición 1 del anillo imidazólico. Se determinó el comportamiento electroquímico en medio EtOH/Britton Robinson, DMF/Citrato y 100% DMF mediante técnicas de polarografía de pulso diferencial, polarografía tast y voltametría cíclica. La reducción en medio EtOH/Britton Robinson produce a pHs básicos una señal de carácter reversible en ambos compuestos, la cual al ser estudiada por voltametría cíclica es atribuida a la formación del anión radical nitro, posibilitando medir las constantes de decaimiento de estos radicales. Además los potenciales de reducción del compuesto con el substituyente metil en la posición 1 resultaron ser menos negativos. En medio DMF/Citrato fue posible medir las constantes de decaimiento solamente del compuesto con el substituyente metil en la posición 1, debido a la imposibilidad de aislar la señal correspondiente a la formación de anión radical nitro en el otro compuesto. Además, las constantes de decaimiento obtenidas para el compuesto en estudio resultaron ser mayores a las obtenidas por este mismo compuesto en medio EtOH/Britton Robinson.