Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El estrés es la forma que posee el organismo para afrontar una situación agobiante y/o amenazadora. Frente a una situación de estrés, el organismo responde activando el Sistema Nervioso Simpático, lo que produce un aumento en la liberación de catecolaminas, que se traduce en una respuesta simpaticomimética conocida como “respuesta de pelea o huida”. Existen etapas del desarrollo en las cuales es especialmente delicado para el equilibrio del organismo, el enfrentarse a situaciones de estrés. Por ejemplo, durante el embarazo, un estrés crónico que cambie el ambiente en el cual se desarrolla el individuo, tiene efectos importantes que programan permanentemente su desarrollo postnatal. En el presente trabajo estudiamos el efecto que produce el estrés por frío, sobre las características farmacológicas de los receptores β-adrenérgicos cardíacos de la descendencia. Para tal efecto, se sometió a ratas Sprague-Dawley preñadas, a estrés por frío crónico intermitente (4ºC por 3h/día) durante todo el periodo de gestación y se evaluó el efecto que causa este estrés en la descendencia, comparándola con un grupo control, en el cual la madre se mantuvo a 20ºC durante la gestación. Las crías adultas se sacrificaron y se estudiaron los cambios a nivel cardíaco de los receptores β-adrenérgicos mediante técnica de radioligando, los cambios en la actividad del Sistema Nervioso Simpático a través de la determinación de Noradrenalina (NA) y su metabolito por HPLC y los niveles plasmáticos de las hormonas sexuales por ELISA, comparando en cada caso entre machos y hembras buscando diferencias entre género. Hubo diferencias evidentes entre géneros, al momento del sacrificio las ratas hembras estresadas tuvieron menor peso corporal junto con un mayor peso ventricular que las ratas controles, algo que en ratas machos no variaba. En cambio, las ratas machos tenían una menor concentración de receptores β-adrenérgicos y una mayor actividad nerviosa simpática a nivel cardíaco (medida como el recambio de NA) comparada con las ratas hembras. Pero, comparando entre el mismo sexo no hubo cambios en la concentración de receptores β-adrenérgicos, en la concentración de NA ni tampoco en la activación nerviosa a nivel cardíaco por efecto del estrés. Sin embargo, hubo un cambio en la afinidad de los receptores β-adrenérgicos (reflejada en el aumento en la IC50 del Atenolol y del Propranolol). Por lo tanto, existen diferencias fisiológicas entre ratas machos y hembras, estas últimas presentan una mayor concentración de receptores β-adrenérgicos lo que podría indicar una mayor susceptibilidad a la respuesta frente al estrés. Por otro lado, el estrés por frío crónico intermitente no produce variaciones en la concentración de receptores β-adrenérgicos, pero sí cambia la respuesta funcional de estos receptores, lo que podría afectar las respuestas del organismo a situaciones de estrés futuras / Stress is the way that possesses the organism to affront an oppressive or threatening situation. Facing a stressful situation, the organism activates the Sympathetic Nervous System, resulting in an increased release of catecholamines, which is translated into a sympathomimetic response known as the “fight or flight response”. There are some stages of development which facing a stressful situation is particularly sensitive to the balance of the body. For example, during pregnancy, a stressful situation that changes the environment of the foetus, will have important effects that permanently programs postnatal development. In the present work we study the effect produced by cold stress on the pharmacological characteristics of heart β-adrenergic receptors in the offspring. To this end, we submitted pregnant Sprague-Dawley rats to chronic intermittent cold stress (4°C for 3h/day) throughout the gestation period and assessed the effect that causes this stress in the offspring, compared with a control group in which the mother was kept at 20°C during pregnancy. The adult offspring were sacrificed and we studied the changes at cardiac β-adrenergic receptors by radioligand technique, changes in the Sympathetic Nervous System through the determination of Noradrenaline and its metabolite by HPLC and plasma levels sex hormones by ELISA, comparing in each case between males and females looking for differences between genders. There were obvious differences between genders, at the moment of sacrifice female rats had lower body weight along with an increased ventricular weight than control rats, which did not vary in male rats. In contrast, the male rats had a lower concentration of β-adrenergic receptors and increased sympathetic nerve activity (measured as the turnover of Noradrenaline) compared with female rats. But, comparing the same sex there was no change in the concentration of β-adrenergic receptors, in Noradrenaline concentration or nerve activation in the heart, caused by stress. However, there was a change in the affinity of β-adrenergic receptors (reflected in the increased in IC50 of Atenolol and Propranolol). Therefore, there are physiological differences between male and female rats, the latter have a higher concentration of β-adrenergic receptors which may indicate an increased susceptibility to stress. On the other hand, chronic intermittent cold stress does not cause variations in the concentration of β-adrenergic receptors, but changes the functional response of these receptors, which could affect the body’s responses to future stressful situations

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / En el corazón, los fibroblastos son las células más abundantes y tienen características estructurales y funcionales muy determinadas: a) actúan como sensores de los cambios del entorno reaccionando frente a estímulos externos; b) secretan factores de crecimiento, citoquinas, y poseen sus receptores; c) tienen una alta capacidad proliferativa; d) secretan una gran cantidad de proteínas de matriz extracelular; e) se diferencian a un fenotipo conocido como miofibroblasto, los que participan activamente del proceso de cicatrización tisular después de una injuria cardiaca. En el proceso de secreción de proteínas, una vez sintetizadas, estas deben ser plegadas al interior del retículo endoplásmico (RE) a través de un complejo proceso en el que participan proteínas conocidas como proteínas chaperonas. Cuando por diversos factores como alteración de la homeostasis del calcio, estrés oxidativo, estado redox, isquemia o isquemia/reperfusión, se altera la homeostasis del RE, se afecta el plegamiento y maduración de proteínas en vías a ser secretadas, conduciendo a un estado celular conocido como Estrés de Retículo Endoplásmico (ERE). Esta nueva condición activa la Respuesta a Proteínas Mal Plegadas, que induce mecanismos compensatorios que llevan al aumento de la expresión de chaperonas del RE. Cuando esta respuesta no es capaz de recuperar la homeostasis del plegamiento de proteínas, se gatilla la expresión del factor transcripcional CHOP que activa la expresión de genes que conducen a la muerte celular de tipo apoptótica. En este estudio se demostró que tanto isquemia como Isquemia/Reperfusión (I/R) simuladas (cultivo de fibroblastos en medio isquémico y cámara hipóxica), son capaces de generar una pérdida significativa en la viabilidad celular de fibroblastos cardíacos neonatos de rata (FCNR). La pérdida de viabilidad celular es debido a que tanto isquemia como I/R son capaces de inducir ERE, evidenciado por un aumento de los niveles de CHOP (8 horas de isquemia y 8 horas de isquemia seguidas de 24 horas de reperfusión), resultando en una pérdida de un 25% y un 50% de la viabilidad celular en isquemia e I/R respectivamente. Muchos han sido los intentos para solucionar el principal problema que se genera ante un evento isquémico, la muerte celular. En la literatura se ha reportado que TGF-β1 es capaz de generar un efecto cardioprotector en cultivos primarios de cardiomiocitos sometidos a isquemia e I/R. Nuestros resultados muestran que TGF-β1 a una concentración de 5 ng/mL, disminuye, aunque no totalmente, la pérdida de viabilidad de FCNR inducida por isquemia e I/R. De igual manera, nuestros resultados muestran que esta citoquina es capaz de bloquear totalmente el aumento en la expresión de CHOP inducidos por isquemia e I/R simuladas. De estos resultados se concluye que tanto en isquemia como I/R, la pérdida de la viabilidad celular se debe, al menos en parte, al ERE, un efecto que es atenuado por TGF-β1, no descartando que existen otros mecanismos no regulados por ERE que generan la pérdida de viabilidad celular. Una segunda alternativa para enfrentar este problema, fue la utilización de la chaperona química Ácido 4-fenilbutírico (4-PBA, quien ha demostrado proteger del ERE por tapsigargina en FCNR). Nuestros resultados muestran que distintas concentraciones de 4-PBA en isquemia, o pre-incubando los FCNR 24 horas antes de realizar la isquemia con 4-PBA, no se observó un efecto sobre la pérdida de viabilidad celular. Si bien estos resultados son discordantes con TGF-β1, fortalece la idea de que el ERE es parte de la perdida de viabilidad celular o que TGF-β1 gatilla vías de sobrevida, una de las cuales podría ser frenar la muerte celular inducida por ERE / In the heart, fibroblasts are the most abundant cell type and they have very specific structural and functional features: a) act as sensors of changes in the environment reacting under external stimuli; b) secrete growth factors, cytokines and have their receptors; c) have a high proliferative capacity; d) secrete a large amount of extracellular matrix proteins; e) differentiate into a phenotype known as myofibroblast, which is involved in the wound healing process after a cardiac injury. In the protein secretion process, once synthesized, they have to be fold inside the endoplasmic reticulum (ER) through a complex process in which are involved many proteins known as chaperone proteins. When because of many factors such alterations in calcium homeostasis, oxidative stress, redox state, ischemia or ischemia/reperfusion (I/R), is altered the endoplasmic reticulum homeostasis, the fold and maturation of proteins in the secretory pathways is affected, leading to a state known as Endoplasmic Reticulum Stress (ERS). This new condition activates de Unfolded Protein Response, which induces compensatory mechanisms that leads to an increase of the expression of the chaperone proteins of the endoplasmic reticulum. When this response is not able to restore homeostasis in the correct protein folding, it triggers the expression of the transcriptional factor CHOP that activates the expression of genes that lead to cell death by apoptosis. In this study we demonstrated that either simulated ischemia or I/R (fibroblast culture in ischemic medium and hypoxic chamber), are capable to generate a significant loss of cardiac fibroblast viability. The loss of cell viability is because either ischemia and I/R are capable of inducing ERS, evidenced by an increased levels of CHOP (8 hours for ischemia and 8 hours of ischemia followed by 24 hours of reperfusion), resulting in a loss of 25% and 50% of cell viability in ischemia and I/R. There have been many attempts to solve the principal problem of an ischemic event, the cell death. In literature has been reported that TGF-β1 is capable of generating a cardio protective effect in primary cardiac myocytes cultures under ischemia and I/R. Our results show that TGF-β1 [5 ng/mL], decreases, although not entirely, the loss of cardiac fibroblasts viability induced by ischemia and I/R. Similarly, our results show that this cytokine is able to block totally the increase in the expression of CHOP induced by ischemia and I/R. From these results it is concluded, that either in ischemia as well as in I/R, the loss of cell viability is due, at least in part, to ERS, and it is attenuated by TGF-β1, not ruling out that there are other mechanisms not regulated by ERS that lead to a loss of cell viability. A second alternative to face this problem, was the use of the chemical chaperone 4-PBA (who has demonstrated protect from cardiac fibroblast death thapsigargin-induced by ERS cardiac fibroblasts). Our results show that different concentrations of 4-PBA in ischemia, or pretreatment the cardiac fibroblasts by 24 hours before the ischemia with 4-PBA, don´t have any effect in the loss of cell viability. Although these results are discordant with TGF-β1, they strengthen the idea that the ERS is a part of the loss of cell viability, or that TGF-β1 triggers survival pathways, one of which could be to prevent ERS cell death

Memoria para optar el título de Químico Farmacéutico / La murtilla (Ugni molinae), Myrtaceae es un arbusto nativo, de gran importancia debido a la exportación de sus frutos. Diversos estudios han comprobado la actividad analgésica y antiinflamatoria de las hojas de esta planta, siendo la más reciente, que las sapogeninas de esta especie poseen efecto inhibitorio sobre la enzima glicógeno fosforilasa a (GPa). Esto define los objetivos de este estudio, los cuales son: la obtención de un crudo de saponinas (CS), la determinación de la sapogenina mayoritaria obtenida de la hidrólisis de CS mediante CLAE y la posterior evaluación del efecto inhibitorio sobre GPa de CS y de su hidrolizado (CSH). Con este fin, se prepararon distintos extractos de hojas de murtilla con solventes de polaridad creciente, siendo uno de ellos el extracto etanólico (EET). El EET fue eluído a través de una columna de poliamida con MeOH, obteniéndose EETlt, el cual se secó para obtener su rendimiento, y luego fue extraído con ayuda de un equipo soxhlet con agua, obteniéndose AET. El sub-extracto AET fue filtrado, extraído con n-BuOH y rotavaporado, obteniéndose el crudo de saponinas (CS), y comprobándose la presencia de saponinas mediante CCF (utilizando p-anisaldehido como revelador). El CS fue redisuelto en HCl 2 N, y calentado a reflujo por 2 horas, el residuo obtenido fue filtrado y luego secado en estufa a 50° C, llamándose CSH. Posteriormente, tanto CS como CSH, fueron analizados y comparados mediante CLAE, lo que permitió determinar la sapogenina mayoritaria del hidrolizado, la cual resultó ser el ácido asiático. El efecto inhibitorio sobre GPa de FS y FSH fue evaluado mediante espectrofotometría, utilizando cafeína como compuesto de referencia. De los resultados se obtuvo que el CS a altas concentraciones presenta un efecto inhibitorio de un 60%, pero para el hidrolizado, el método no fue capaz de determinar la inhibición por la alta absorbancia que presenta la muestra por si sola. Estos resultados, permitieron contribuir al trabajo realizado en el laboratorio, y al mismo tiempo permiten ampliar el conocimiento químico-farmacológico de esta planta nativa

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La administración de fármacos a través de la piel es una práctica muy utilizada en dermatología. La vía de administración cutánea es poco invasiva, de fácil acceso y en cierta manera, es segura debido a la externalidad de los preparados utilizados. En una lesión, ya sea causada por un por un golpe, una herida o una intervención médica, las fibras nerviosas superficiales, ubicadas en la dermis y la epidermis, son capaces de percibirlas cualquiera haya sido su origen, mecánico, a causa del calor o el frío, o de un daño al tejido tisular. La asociación prilocaína-lidocaína tópica (EMLA) es innovadora en el tratamiento del dolor local. El mecanismo por el cual este fármaco realiza su acción es la depresión de la conducción nerviosa al bloquear los canales de sodio dependientes de voltaje. La asociación tópica en cuestión se comercializa en Chile en forma de gel en concentraciones de 2,5% de prilocaína y de 2,5% de lidocaína por varios laboratorios farmacéuticos y es prescribidla como preparado magistral en la misma forma de presentación. En este trabajo se evaluaron los perfiles de liberación in vitro de dos formulaciones de EMLA, (gel base carbomer y gel base poloxámero 407) utilizando una modificación del aparato 5 de la USP 30. Los resultados obtenidos mediante los modelos de cesión, específicamente la ecuación de Peppas y Sahlin, indicarían que la cinética de liberación de lidocaína y prilocaína de los dos productos se aproxima a un modelo de transporte gobernado principalmente por la difusión de los compuestos a través de la matriz. Los resultados presentaron diferencias significativas entre ambos productos, según el cálculo del factor de diferencia f1 y el factor de similitud f2.

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Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / Se realizó una práctica prolongada en el servicio de farmacia del Hospital Clínico Universidad de Chile durante el periodo comprendido entre enero- agosto del año 2006, como requisito fundamental para optar al titulo profesional de Químico Farmacéutico. El principal objetivo de la práctica prolongada fue conocer las labores y responsabilidades del químico farmacéutico dentro de cada unidad del servicio de farmacia para lo cual la práctica se basó en pasantías de un mes de duración en las distintas áreas de desempeño profesional. Durante el período de práctica se desarrollaron procedimientos operativos de trabajo para la Unidad de Reenvasado en Dosis Unitaria de medicamentos orales dependiente del Departamento de Abastecimiento y se normalizó su funcionamiento con el objetivo principal de garantizar la calidad del proceso de reenvasado. La práctica prolongada permitió conocer las etapas involucradas en la dispensación y adquisición de medicamentos, en la elaboración de preparados farmacéuticos estériles, además de conocer la importancia del servicio de farmacia en el ámbito hospitalario. A la vez se adquirieron habilidades y criterios farmacéuticos necesarios para el desempeño laboral

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / La problemática de la existencia de desnutrición en el paciente hospitalizado es un hecho ya reconocido que abarca al enfermo pre y posquirúrgico. Estos pacientes, en mayor o menor grado, sufren de períodos de ayuno y estrés, lo que conlleva a una directa relación entre el grado de desnutrición y morbimortalidad. Es aquí donde la nutrición artificial ha modificado favorablemente situaciones clínicas, dando un apoyo al paciente. Dentro de la nutrición artificial encontramos la nutrición parenteral total periférica que es una técnica por medio de la cual soluciones nutricionales son infundidas a través de venas periféricas, condicionando una asistencia nutricional completa o parcial, evitando la colocación de un catéter venoso central, que corresponde a una nutrición parenteral central, esto es su mayor ventaja. Sin embargo, esta técnica tiene ciertas limitaciones y ostenta ocasionalmente algunas complicaciones, entre las cuales la más importante es el desarrollo de flebitis. Es por esta razón que se consideró importante realizar una revisión retrospectiva a pacientes adultos hospitalizados en el Hospital Clínico Universidad de Chile, a los que se les haya administrado nutrición parenteral total periférica, desde enero de 2003 hasta julio de 2005, para poder encontrar y evaluar los factores que influyen en el desarrollo de flebitis. Durante el estudio se comparó también las nutriciones parenterales periféricas magistrales y nutriciones parenteales periféricas comerciales, en donde las primeras, prima la elaboración en forma individual para cada paciente que la requiera, según su estado nutricional, peso, talla y diagnóstico, mientras que las segundas son bolsas prellenadas con un volumen y composición estándar. De la muestra considerada, un 34.7% de lo pacientes que se les administró nutrición parenteral total periférica desarrolló flebitis, 12,5% aportado por el preparado magistral y un 22.2% por la preparación comercial. Paralelamente durante el estudio se pudo establecer que existe estrecha relación entre el diámetro de la aguja, el volumen total de la preparación, la osmolaridad y el tipo de preparación utilizada en estos pacientes con la incidencia de flebitis. No se encontró a la vez relación entre el género, diagnóstico y Nº de días de tratamiento en el desarrollo de flebitis. Las prescripciones para nutrición parenteral total periférica han ido en aumento desde que se creó la nueva Unidad de Preparados Farmacéuticos Estériles del Hospital Clínico Universidad de Chile y la incidencia de flebitis ha disminuido considerablemente desde su inauguración

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Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / Actualmente, la industria farmacéutica nacional, debe cumplir con las exigencias contenidas en las Prácticas Adecuadas de Fabricación (PAF), de la OMS. Parte de estas exigencias, dice relación con la cualificación de los equipos que están involucrados en la fabricación y control de los productos. En el presente trabajo, se diseñó un protocolo de cualificación de un equipo HPLC y se llevó a cabo la cualificación de éste tomando en cuenta los parámetros de instalación, operación y desempeño del mismo. El protocolo desarrollado, se entiende como un conjunto de pruebas y actividades destinadas a verificar que el equipo cumple con los requerimientos mínimos que definirán su correcta operación y desempeño, lo que finalmente concluirá si el equipo es adecuado para realizar la tarea para la que está destinado. La cualificación del equipo se dividió en tres etapas: Cualificación de la Instalación: Permitió verificar que el equipo estuviera instalado correctamente y en el ambiente adecuado, para el óptimo desempeño del equipo. Cualificación de la operación: Se verificó mediante las pruebas seleccionadas, que las variables que fueron clasificadas como críticas para la operación de cada uno de los módulos, como la linealidad del volumen de inyección, la constancia del flujo y la linealidad del detector, estuvieran dentro del rango de aceptación. Cualificación del desempeño: Mediante la valoración de Ranitidina como producto terminado, se verificó que el equipo podía cumplir la función para la que fue adquirido, es decir, análisis de materias primas y producto terminado, en el Laboratorio de Control de Calidad. Luego de aprobar las pruebas para los parámetros críticos de estas tres etapas, se aceptó la Cualificación del equipo HPLC

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