Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1588_1.pdf: 2848696 bytes, checksum: 4150211d65881993481b36f129cebc17 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Vários pesquisadores têm concluído que as lectinas são úteis para estabelecer o perfil de carboidratos da parede celular dos fungos. Neste estudo, nós avaliamos a expressão de N-acetil- D-glucosamina, L-fucose, D-galactose e glucose/manose na parede celular de fungos filamentosos queratinofílicos, isolados de solos de áreas de lazer, através de um simples protocolo de marcação com lectinas. As culturas fúngicas usadas foram isoladas de solos de parquet público através da técnica hair-bait . As lectinas usadas no ensaio foram concanavalin A (Con A), wheat germ agglutinin (WGA), Ulex europeus agglutinin I (UEA I) e peanut agglutinin (PNA), todas conjugadas a peroxidase. Uma fita adesiva, posicionada com a parte colante para baixo, foi levemente pressionada sobre a colônia do fungo. A amostra de fungo na fita foi incubada com lectina (50μg/mL) por 1h a 4°C. A marcação com lectina foi visualizada usando 3,3-diaminobendizina (DAB) e peróxido de hidrogênio. Houve uma alta expressão de Nacetil- D-glucosamina sobre a parede celular de todas as espécies fúngicas testadas, enquanto a expressão de L-fucose, D-galactose e glucose/manose apresentaram variações interespecíficas. Nós concluímos que o ensaio de marcação com lectina apresentado neste trabalho, elimina muito dos passos laboriosos envolvidos em outros protocolos. A quantidade e qualidade de micélio e esporos imobilizados na fita adesiva foram adequadas para acessar os carboidratos da parede celular de fungos filamentosos

Los Onygenales son uno de los grupos de hongos más fascinantes que existen. Pertenecen a los ascomycetes y agrupan a una gran cantidad de especies. Muchos de ellos presentan la rara habilidad de degradar la queratina, característica poco común dentro de los hongos, lo que les hace indispensables para el ciclo biológico de estas sustancias y su descomposición en la naturaleza (escamas, pelos, uñas, cuernos, etc.). Pero también pueden atacar, algunos de estos hongos, al hombre causándole importantes infecciones superficiales, las dermatofitosis.La necesidad de este estudio, parte de las discrepancias existentes en la clasificación taxonómica de este orden, tradicionalmente las clasificaciones de los hongos se basaban en las características morfológicas, proponiéndose clasificaciones claramente artificiales y existía discrepancia entre los autores que las proponían. En la actualidad se dispone de herramientas mucho más objetivas como son las moleculares, concretamente la secuenciación del ADN ribosomal. Basándonos tanto en las características morfológicas como en las moleculares, se ha realizado un estudio de caracterización de este grupo de hongos, centrándonos en aquellos géneros y especies donde existía una mayor controversia.Para la realización de estos estudios se han utilizado cepas y cultivos procedentes de colecciones internacionales. También se han estudiado muestras de suelo de diferentes orígenes. En los aislamientos se ha utilizado la técnica del anzuelo de queratina descrita por Vanbreuseghem 1952. Como resultado de nuestros estudios se han podido reportar nuevos géneros y especies del orden Onygenales. Nuestros estudios nos han permitido proponer las siguientes nuevas combinaciones:- Auxarthron kuehnii (Arx) Solé, Cano y Guarro- Auxarthron pseudoreticulatum (Currah) Solé, Cano y Guarro- Amauroascus queeslandicus (Apinis y R.G.Rees) Solé, Cano y Guarro- Mallochia reticulata (Kuehn y Goos) Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus hyalinosporus (Kuehn, Orr y Ghosh) Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus japonicus (Uchiyama, Kamiya y Udagawa) Solé, Cano y GuarroAsí como las nuevas especies para la ciencia: - Auxarthron concentricum Solé, Cano y Guarro - Auxarthron chlamydosporum Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus armeniacus Solé, Cano y Guarro También se han podido reportar los siguientes nuevos géneros y especies para la ciencia:- Testudomyces con T. verrucosus como especie tipo.- Castanedomyces con C. australiensis como especie tipo.- Pseudoamauroascus con P. australiensis como especie tipo.Tras el estudio exhaustivo del género Gymnoascus se propone la sinonimización de los géneros Arachniotus, Gymnascella, Gymnoascoideus y Narasimhella con Gymnoascus.La presente tesis ha generado los siguientes artículos publicados en dos importantes revistas internacionales especialistas en el estudio de la micología. Mycological Research con un índice de impacto de 1,306 y Studies in Mycology con un índice de impacto de 1,667.1. Molecular phylogeny of Amauroascus, Auxarthron and morphologically similar onygenalean fungi. Solé M., Cano J. & Guarro J. Mycological Research 106 (4): 388-396 (2002).2. Two new species of Auxarthron mophologically and genetically close to Auxarthron kuehnii. Solé M., Cano J., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:97-102 (2002).3. Molecular phylogeny of Gymnoascus and related genera. Solé M., Cano J., Pitarch L.B., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:141-152 (2002).4. Pseudoamauroascus a new genus of the Onygenales (Ascomycota) Cano J., Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:173-180 (2002).5. Castanedomyces australiensis gen. nov., sp. nov. a keratinophilic fungus from Australian soil. Cano J, Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:165-172 (2002). / The order Onygenales is one of the most interesting fungal groups. These fungi are included in the Ascomycetes and contains a number of extremely important fungal pathogens as well as several opportunistic fungi. Onygenales can be frequently found on keratinous substrates. The ability for breakdown the keratin is unusually in there fungi. This ability is very important in the cycle of organic mater because keratin is an important natural material occurring in nature mainly in the form of hair, feather, nails, etc. These fungi therefore play a significant role in the decomposition of soil debris. Any fungus which can produce enzymes capable of decomposing keratinised structures must be regarded as keratinophilic. When the pathogenic strains find a suitable host in favourable conditions , they produce the symptoms of what is know as ringworm diseases. The heterogeneity of the traditional morphological taxonomy of the order make necessary a study for proposing a more natural classification. Currently there are molecular methods, which allow phylogenetic relationships among the different taxa grouped in this order. We performed sequence analysis based on the sequences of the ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region and the intervening 5.8S rDNA gene. We have performed a morphological and molecular characterization of these group of fungi based mainly in those genera and species with confused taxonomy.These studies were performed with strains from different international collections and others isolated from soil samples of different origins. For the isolation of fungi from soil samples we have used the hair habit technique described for Vanbreuseghem 1952.We have proposed the following new genera, species and new combinations: New combinations:- Auxarthron kuehnii (Arx) Solé, Cano y Guarro- Auxarthron pseudoreticulatum (Currah) Solé, Cano y Guarro- Amauroascus queeslandicus (Apinis y R.G.Rees) Solé, Cano y Guarro- Mallochia reticulata (Kuehn y Goos) Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus hyalinosporus (Kuehn, Orr y Ghosh) Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus japonicus (Uchiyama, Kamiya y Udagawa) Solé, Cano y GuarroNew species: - Auxarthron concentricum Solé, Cano y Guarro - Auxarthron chlamydosporum Solé, Cano y Guarro- Gymnoascus armeniacus Solé, Cano y Guarro New genera and species:- Testudomyces con T. verrucosus with type specie.- Castanedomyces con C. australiensis with type specie.- Pseudoamauroascus con P. australiensis with type specie.We have also synonymyzed the following genera with Gymnoascus: Arachniotus, Gymnascella, Gymnoascoideus and Narasimhella. As a result of the studies performed we have published the following papers.1. Molecular phylogeny of Amauroascus, Auxarthron and morphologically similar onygenalean fungi. Solé M., Cano J. & Guarro J. Mycological Research 106 (4): 388-396 (2002).2. Two new species of Auxarthron mophologically and genetically close to Auxarthron kuehnii. Solé M., Cano J., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:97-102 (2002).3. Molecular phylogeny of Gymnoascus and related genera. Solé M., Cano J., Pitarch L.B., Stchigel A.M. & Guarro J. Studies in Mycology 47:141-152 (2002).4. Pseudoamauroascus a new genus of the Onygenales (Ascomycota) Cano J., Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:173-180 (2002).5. Castanedomyces australiensis gen. nov., sp. nov. a keratinophilic fungus from Australian soil. Cano J, Solé M., Pitarch L.B. & Guarro J. Studies in Mycology 47:165-172 (2002).

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1611_1.pdf: 1139279 bytes, checksum: 13fba9643abab60fece169537288d269 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos queratinolíticos ocorrem em muitos habitats naturais e sintéticos. Estes microrganismos existem juntos a outros fungos que possuem uma baixa atividade pela queratina e utilizam principalmente os produtos de sua decomposição. Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a capacidade queratinofílica e queratinolítica de fungos filamentosos isolados de amostras de água de piscinas e de solo dos filtros destas piscinas em parques aquáticos de Recife-PE, selecionar a linhagem mais promissora para a produção da queratinase, avaliar parâmetros de melhores condições para produção dessa enzima e incorporar as amostras ao acervo da Micoteca URM/UFPE. As culturas foram isoladas da água de piscinas e do solo dos filtros de piscinas do parque aquático I e apenas água de piscinas dos parques aquáticos II e III, utilizando-se as técnicas Hair Bait e diluição de água e suspensão de solo dos filtros em água destilada esterilizada. A identificação foi efetuada através de observações das características macroscópicas e microscópicas das colônias. Para selecionar a linhagem mais promissora foi utilizado o meio líquido contendo sais e pena de frango. O estudo das melhores condições de produção foi avaliado os seguintes parâmetros: temperatura, pH, tempo de produção, velocidade de agitação, concentração do substrato e quantidade do inóculo. As atividades queratinolítica e proteásica foram determinadas espectrofotometricamente a 280 e 440 nm, respectivamente. Utilizando as técnicas Hair Bait e diluição e suspensão e plaqueamento em superfície, foram isoladas 49 espécies de fungos provenientes da água e do solo dos filtros das piscinas do parque I, e 31 espécies provenientes da água do parque II e 33 do parque aquático III. Dentre as espécies estudadas para a atividade queratinolítica Paecilomyces farinosus apresentou o melhor resultado com 4,2 U/mL de atividade enzimática. As melhores condições para a produção de queratinases são: pH 7,8, 30 °C, 180 rpm, 2,0% de pena de frando, 105 esporos/mL por quatro dias. A condição adequada para se ter uma maior produção de proteases, com menor custo, seria com pH 6,2, 30 °C, 180 rpm, 2,0% de pena de frango, 105 esporos/mL por 4 dias. Em todas as amostras o resultado da atividade proteásica obtido foi menor que 1 U/mL, comprovando que para a degradação da queratina é necessário uma atividade proteolítica bastante específica. A água e o solo dos filtros das piscinas são ricos em fungos potencialmente patógenos ao homem