Fernando Henrique Azevedo Lopes. Níveis séricos de interleucina-6 e polimorfismo - 174G>C em infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis. 2012. 70 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T13:15:49Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T13:16:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T13:16:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_fhalopes.pdf: 6329480 bytes, checksum: 293198c77f20aefef6e6e1fef618297a (MD5) Previous issue date: 2012 / Interleukin-6 (IL-6) is an important cytokine involved in the pathogenesis of multiple infectious diseases. The aim of this study was to investigate the levels of IL-6 production and to correlate to the -174G>C polymorphism at the IL-6 gene in latent infection with M. tuberculosis (ILTB). As controls, two groups were used. One of them with active pulmonary tuberculosis (TB) patients and the other with healthy blood donors. ILTB group was composed by 15 individuals, selected among active pulmonary TB contacts seen at the Hospital São José de Doenças Infecciosas and the Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. TB group had 38 patients with active pulmonary disease seen at the Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú and the Hospital Geral Dr. César Cals. The third group was composed by 63 healthy blood donors from the Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. Serum levels of IL-6 were measured by an ELISA using specific kits from Invitrogen Corporation. For DNA purification a GFX Genomic Blood DNA Purification kit (GE Healthcare) was used. The -174GC polymorphism was analyzed by a SSP-PCR method using One-Lambda kits. Median values of serum levels of IL-6 from ILTB, TB and healthy groups were, respectively, 1.7 pg/mL, 4.3 pg/mL and 0.5 pg/mL (p < 0.0001). For the three studied group, the most frequent genotype found was the G/G (ILTB = 80%; TB = 58.9%; saudáveis = 62.8%). In conclusion, it is possible to consider that IL-6 should play an important role in the maintenance of latent infection state as its concentrations were 3.4 fold higher in ILTB group than that of healthy controls. Moreover, the -174GC polymorpism was not functional in the ILTB group. / A interleucina-6 (IL-6) é uma importante citocina que exerce papel fundamental na imunopatogênese de diversas doenças infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar o nível de produção sistêmica de IL-6 e aferir o papel funcional do polimorfismo -174 G>C do gene dessa citocina em indivíduos diagnosticados como portadores de infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis (ILTB). Para controle, foram utilizados dois grupos de comparação: um deles composto por portadores de tuberculose pulmonar ativa (TB) e o outro formado por indivíduos saudáveis, doadores de sangue. O grupo ILTB foi composto por 15 indivíduos, selecionados dentre os contactantes de portadores de TB pulmonar ativa, atendidos no Hospital São José de Doenças Infecciosas e no Centro de Saúde da Família Anastácio Magalhães. O grupo TB foi formado por 38 pacientes com TB pulmonar ativa, procedentes do Hospital de Messejana, Hospital de Maracanaú e Hospital Geral Dr. César Cals. O grupo de indivíduos saudáveis contava com 63 doadores voluntários de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia do Ceará. A dosagem sérica de IL-6 foi realizada por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA), com kit específico fornecido pela Invitrogen Corporation. Para purificação do DNA, foi utilizado o kit GFX Genomic Blood DNA Purification, da GE Healthcare. O polimorfismo -174GC do gene da IL – 6 foi tipificado pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR), utilizando-se iniciadores de sequência específica (PCR-SSP) (One-Lambda). As medianas de concentrações séricas de IL-6 para os grupos ILTB, TB e saudáveis foram de, respectivamente, 1,7 pg/mL, 4,3 pg/mL e 0,5 pg/mL (p < 0,0001). Nos três grupos estudados, o genótipo encontrado com maior frequência foi o G/G [ILTB = (80%); TB = (58,9%); saudáveis = (62,8%)]. Em conclusão, podemos inferir que a IL-6 deve desempenhar um papel importante na manutenção do estado de latência, haja vista que sua concentração, nos indivíduos com ILTB, foi 3,4 vezes maior que no grupo saudável. Ademais, constatamos que, na população estudada, o polimorfismo -174GC não se mostrou funcional no âmbito da infecção latente pelo Mycobacterium tuberculosis.

Submitted by Tatiana Oliveira (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-06-06T15:32:21Z No. of bitstreams: 1 denise_gj_batista_ioc_bp_0023_2009.pdf: 5405466 bytes, checksum: 0bb4fce7e31b0593bb33cff01fa3e688 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-06T15:32:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 denise_gj_batista_ioc_bp_0023_2009.pdf: 5405466 bytes, checksum: 0bb4fce7e31b0593bb33cff01fa3e688 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / No centenario da descoberta da doenca de Chagas (DC), esta parasitose negligenciada causada pelo Trypanosoma cruzi e importante causa de mortalidade e morbidade na America Latina, sem vacinas ou agentes quimioterapicos satisfatorios. Esta tese objetivou analisar atividade, seletividade e mecanismos de acao sobre o T.cruzi de 04 classes de compostos (fluorquinolonas - FQ, tiossemicarbazonas - TS, diamidinas aromaticas - DA e arilimidamidas – AIA – uma nova classe a partir de DA) in vitro e in vivo. FQ como NOR e SPAR sao antibioticos com ampla acao bactericida, atuando sobre o DNA via toposoimerases. Embora SPAR e NOR nao tenham sido ativas, seus complexos metalicos de cobre-fenantrolina foram efetivos sobre tripomastigotas e formas intracelulares de T.cruzi, (IC50 1,62 a 4,65µM). TS sao agentes anti-tumorais e microbicidas que atuam sobre ribonucleotideo redutases e cisteina proteases. Todas TS apresentaram baixa toxicidade (>200µM) sobre celulas de mamiferos. Embora N4-metil-4-nitrobenzaldeido-tiossemicarbazona, N4-metill-4-nitroacetofenona-tiossemicarbazona e seus complexos metalicos de manganes (Mn) não tenham sido ativos, o complexo de Mn da N4-metil-4-nitrobenzofenona-tiossemicarbazona revelou-se moderadamente ativo sobre formas sanguineas (IC50 19µM). A terceira classe foi DA, ligantes de DNA com excelente atividade sobre diversos patogenos. Embora todas tenham baixa toxicidade sobre cardiomiocitos, somente tres (DB1645, DB1582 e DB1651) foram ativas contra formas sanguineas e intracelulares (IC50 entre 0,15 a 13,3µM), com atividade relacionada a curvatura das moleculas (sendo as moleculas lineares as nao efetivas). Todas DA localizam-se no nucleo e kDNA dos parasitos, com maior acumulo na ulti Analise in vitro da AIA DB766 sobre T.cruzi revelou: (i) excelente atividade sobre formas sanguineas (60nM) e intracelulares (25nM), mantendo otima acao mesmo quando o parasito e incubado com 96% de sangue de camundongo, sugerindo assim, um potencial uso profilatico, (ii) ação sobre diferentes cepas (peridomiciliares/silvestres), incluindo as naturalmente resistentes ao benznidazole (BZ), com superior eficacia que BZ, (iii) localizacao em compartimentos ricos em DNA, induzindo danos ultra-estruturais na mitocondria. Com base no excelente indice de seletividade (>533 e 714), ensaios foram conduzidos durante a infeccao aguda experimental por T.cruzi (cepas Y e Colombiana), em doses diarias ou alternadas =100mg/kg/dia da DB766 sozinha ou associada ao BZ, administradas via ip ou p.o. por ate 20 dias, com primeira dose no inicio da parasitemia. DB766 (25 e 50mg/kg/dia ip e 100mg/kg/dia p.o.) reduziu (>90%) a carga parasitaria (sangue e tecido cardiaco) e protegeu 90-100% contra mortalidade, com semelhante eficacia ao BZ. AIA reverteu inflamacao e alteracoes eletricas cardiacas e protegeu contra lesoes hepaticas e musculares induzidas pela infeccao. Doses sub-otimas de BZ associado com a DB289 (DA - pro-droga da DB75 – via p.o.) ou com a DB766 (ip) resultaram em =99% reducao de parasitemia e 100% de protecao sobre mortalidade. BZ (p.o)+DB766 (ip) resultou em cura parasitologica (2 em 15 animais) avaliada por hemocultivo e PCR. AIA foi a mais ativa e seletiva sobre T. cruzi, estimulando a continuidade de ensaios pre-clinicos com representantes desta classe visando identificacao de novos farmacos para a DC / In the centenary of the discovery of Chagas' disease (AD), this parasitosis caused by Trypanosoma cruzi neglected and important cause of morbidity and mortality in Latin America, no vaccines or chemotherapeutic agents satisfactory. This thesis aims to analyze activity, selectivity and mechanisms of action of T. cruzi on the 04 classes of compounds (fluoroquinolones - CF thiosemicarbazones - TS, aromatic diamidines - DA and arilimidamidas - AIA - a new class from DA) in vitro and in vivo. CF as NOR and SPAR are antibiotics with broad antibacterial action, acting on the DNA via toposoimerases. Although SPAR and NOR have not been active, their metallic complexes of copper-phenanthroline were effective on trypomastigotes and intracellular forms of T. cruzi (IC50 1.62 to 4.65 mM). TS are anti-tumor agents and microbicides that act on ribonucleotide reductase and cysteine ​​proteases. All TS showed low toxicity (> 200μM) on cells of mammals. Although N4-methyl-4-nitrobenzaldehyde thiosemicarbazone, N4-methyl-4-nitroacetophenone thiosemicarbazone and its metal complex of manganese (Mn) were not active, the complex of Mn N4-methyl-4-nitrobenzophenone thiosemicarbazone revealed was moderately active on blood forms (IC50 19μM). The third class was DA, DNA binders with excellent activity against many pathogens. Although all have low toxicity cardiomyocyte, only three (DB1645, DB1582 and DB1651) were active against blood forms and intracellular (IC 50 from 0.15 to 13.3 mM), activity related to the curvature of the molecules (the molecules being the non-linear effective). OF all located in the nucleus and kDNA from parasites, with greater accumulation in the ulti In vitro analysis of EIA DB766 on T.cruzi revealed: (i) excellent activity against bloodstream forms (60nm) and intracellular (25nm), while maintaining optimal action even when the parasite and incubated with 96% blood of mice, thus suggesting a potential prophylactic use, (ii) act on different strains (peridomestic / wild), including naturally resistant to benznidazole (BZ), with higher efficacy than BZ, (iii) location compartments rich DNA damage inducing ultrastructural the mitochondria . Based on the excellent selectivity index (> 533 and 714), tests were conducted during experimental acute infection by T. cruzi (Y and Colombian strains) in daily doses or alternate = 100mg/kg/day of DB766 alone or associated with BZ, administered ip or po for up to 20 days with the first dose at the onset of parasitaemia. DB766 (25 100mg/kg/day and 50mg/kg/day ip and po) reduced (> 90%) the parasite load (blood and cardiac tissue) and 90-100% protected against mortality, with similar efficacy to the BZ. EIA reversed inflammation and cardiac electrical changes and protected against liver injury induced by infection and muscle. Sub-optimal doses of BZ associated with DB289 (DA - pro-drug of DB75 - via po) or DB766 (ip) resulted in ≥ 99% reduction of parasitemia and 100% protective on mortality. BZ (po) + DB766 (ip) resulted in parasitological cure (2, 15 dogs) assessed by blood culture and PCR. EIA was the most active and selective against T. cruzi, encouraging the continuation of pre-clinical trials with representatives of this class in order to identification of new drugs for AD

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 60.pdf: 1087420 bytes, checksum: d43c3b6da28a66b2ee5f2ae5c11fc7ae (MD5) Previous issue date: 2010 / Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) são patógenos emergentes associados a surtos de meningite, enterocolite necrosante e septicemia em neonatos em diversos países. A taxa de mortalidade relatada varia de 40 a 80% e os sobreviventes apresentam seqüelas neurológicas severas. O desenvolvimento da infecção está associado ao consumo de fórmulas infantis desidratadas. As metodologias atualmente disponíveis para o isolamento de Cronobacter spp. apresentam discrepâncias e a identificação bioquímica não é esclarecedora. Assim, torna-se necessário que metodologias confiáveis para o isolamento e identificação desses micro-organismos estejam disponíveis. Outro ponto ainda não esclarecido são os mecanismos de virulência utilizados por esses patógenos para o desenvolvimento de infecções em humanos. Os objetivos desse estudo foram o desenvolvimento de um método rápido e eficiente para a identificação de Cronobacter spp., a avaliação do perfil de resistência a antimicrobianos e a avaliação da presença de alguns fatores de virulência. Foram utilizadas inicialmente cepas de referência de Cronobacter spp e 37 isolados previamente identificados como pertencentes ao gênero. O novo protocolo foi considerado 100% sensível e específico quando comparado aos demais métodos utilizados, indicando sua utlidade. O estudo de fatores de virulência revelou que Cronobacter spp. tem desenvolvido resistência aos β-lactâmicos e cefalosporinas, é capaz de formar cápsula, biofilme, e apresentar atividade de protease e atividade hemolítica. Nesse estudo relata-se pela primeira vez a presença de hemaglutininas associadas a pili tipo 3, enquanto algumas cepas apresentaram hemaglutininas associadas a pili tipo 1. Também foi demonstrada a atividade citotóxica em células Vero e a capacidade de invasão dessas células por Cronobacter spp. Os resultados desse estudo sugerem que todas as espécies do gênero Cronobacter apresentam potencial patogênico e que autoridades de saúde pública, produtores de alimentos e pessoas responsáveis pelo cuidado de indivíduos que fazem parte dos grupos de risco devem dedicar especial atenção ao controle de ambientes e à qualidade microbiológica de produtos destinados a esses grupos de modo a minimizar o risco de infecção por esses micro-organismos. / Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii) is an emerging foodborne pathogen associated with outbreaks of meningitis, necrotizing enterocolitis and sepsis in neonates in different countries. The reported mortality rate ranges from 40 to 80% and the survivors present severe neurological sequela. Development of the infection is associated with the consumption of powdered infant formula. The available methodologies employed for the isolation of Cronobacter spp. lack the necessary specificity and the biochemical identification remains non-conclusive. For these reasons, it is necessary to develop reliable methodologies for the isolation and identification of these microorganisms. Another issue still to be clarified refers to the virulence mechanisms associated with human infections. The objectives of this study were to develop a rapid and efficient method to identify Cronobacter, to evaluate the antimicrobial resistance of the strains, and to evaluate the presence of some virulence factors. Initially, reference strains of Cronobacter, and 37 isolates that had been previously identified as members of the genus were used. The proposed protocol showed 100% sensitivity and specificity when compared to the other methods used, indicating its usefulness. Studies on virulence factors revealed that Cronobacter spp. has developed resistance to β-lactams and cephalosporins, is able to form capsule, biofilm, and presents protease and hemolytic activities. This study reports, for the first time in literature, the presence of hemagglutinins associated with type 3 pili and it was also shown that some strains presented previously described hemagglutinins associated with type 1 pili. Cytotoxic activity in Vero cells and the invasiveness of these cells by Cronobacter spp were also demonstrated. The results of this study suggest that all species of the genus Cronobacter have pathogenic potential and public health authorities, food producers and caregivers should pay careful attention to issues associated with environment control and with the microbial quality of the products associated with the risk groups in order to minimize the risk of infection with these microorganisms.

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) carla_cunha_ioc_dout_2007.pdf: 1656140 bytes, checksum: 90fb142cec8bf557fc5a27f8df2af732 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Relógios biológicos são mecanismos endógenos de marcar a passagem do tempo e podem ser encontrados em animais, plantas, fungos e até organismos unicelulares. No modelo Drosophila, o mecanismo molecular que controla os ritmos circadianos (~24 horas) funciona através de alças de retroalimentação negativa envolvendo alguns genes, sendo os principais: period, timeless, cycle e Clock. Os homólogos destes genes já foram encontrados em várias espécies de animais, apontando para uma origem ancestral comum. Mosquitos são vetores de diversos agentes causadores de doenças a humanos e animais, mas apesar da sua importância epidemiológica pouco se conhece sobre os mecanismos moleculares que controlam os ritmos de atividade e hematofagia neste grupo de insetos. O presente trabalho objetivou o estudo do relógio biológico circadiano em mosquitos, usando como modelos a espécie diurna Aedes aegypti e a noturna Culex quinquefasciatus Os estudos moleculares foram sempre acompanhados de experimentos de monitoramento da atividade/repouso dos insetos. A primeira etapa da pesquisa compreendeu a obtenção em Ae. aegypti da seqüência codificante integral do gene homologo a timeless de Drosophila melanogaster e o estudo comparativo da seqüência do mesmo entre as duas espécies. Os resultados apontaram para uma alta similaridade em regiões de timeless conhecidas como importantes em Drosophila para manutenção do relógio biológico, sugerindo conservação de sua função nos mosquitos. A segunda etapa da pesquisa envolveu a determinação do padrão de expressão circadiana de period, timeless, cycle e Clock em mosquitos. Após estudos preliminares sobre a expressão de timeless e cycle em machos de Aedes aegypti, foram obtidas as curvas de expressão circadiana de period, timeless, cycle e Clock na cabeça de fêmeas de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus Os resultados sugerem que o relógio central funcione de forma muito semelhante nas duas espécies. Análise da expressão desses genes nos corpos decapitados das fêmeas de Ae. aegypti, entretanto, aponta para padrões diferentes de expressão em relação à cabeça. Foi analisado também o efeito da inseminação e da hematofagia na expressão dos genes de relógio em Ae. aegypti. Apesar de dados da literatura mostrarem que a inseminação e a alimentação com sangue (após inseminação), causam alteração no comportamento das fêmeas de mosquito, apenas a hematofagia parece exercer alteração significativa na expressão dos genes de relógio. Finalizando, foi efetuado o silenciamento de timeless em Ae. aegypti por técnica de RNA de interferência, através da injeção de RNA dupla-fita de timeless no tórax de fêmeas adultas. O silenciamento da expressão foi detectado tanto na cabeça quanto no corpo das fêmeas no quarto dia após a injeção do RNA dupla-fita, mesmo dia em que foi detectada alteração no padrão de comportamento. Esse resultado confirma o papel de timeless no controle da atividade em mosquitos / Biological clocks are endogenous time keepi ng systems that can be found in animals, plants, fungi and even unicellular organisms. In the Drosophila model, the molecular mechanism that controls the circadian rhythm (~24 hours) works through negative feedback loops composed of a number of genes, among which the principal genes are: period, timeless , cycle and Clock. The homologues of these genes have been found in many animal species and their comparison points to a common ancestral origin. Mosquitoes ar e vectors of several organisms and viruses that cause diseases in hu mans and other animals, however despite their epidemiological relevance not much is known about the molecular mechanisms controlling their activity rhythms and bloodfeedin g behaviour. The purpose of the present work was to investigate the molecular regulati on of the biological clock in mo squitoes, using as models the diurnal species Aedes aegypti and the nocturnal species Culex quinquefasciatus . Analysis of the mosquitoes’ activity/rest behaviour was performed in parallel to the molecular studies. The first stage of this research was to obtain, in Aedes aegypti , the full coding sequence of the gene homologue to the timeless gene of Drosophila melanogaster and to perform comparative analysis between them. The results s howed high similarities between the timeless gene of the two species, mainly in regions known, in Drosophila , to have a crucial involvement in the operation of the biological clock, thus sugg esting function conservation of the gene in mosquitoes. The second stage of the research involved the determination of the patterns of expression of the clock genes period, timeless , cycle and Clock in mosquitoes. After preliminary studies of male Ae. aegypti , in which the temporal pattern of the expression of timeless and cycle was determined, the circadian expression of period, timeless , cycle and Clock was characterised in the heads of females of the species Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus . The results suggest that the central clock works in a very similar way in both species. The expression of the same four genes in the behead ed bodies of females of Ae. aegypti , however, showed a pattern different from that of the head. The effect s of insemination and blood meal intake upon the expression of clock genes in Ae. aegypti were also analysed. In spite of the data in the literature showing that insemination drives important change s in the behaviour of the female mosquito, in this study only the intake of blood seemed to cau se significant changes in the expression of the clock genes. To finalize the st udy of the biological clock in mosquitoes, silencing of the timeless gene in the head and body of Ae. aegypti mosquitoes was performed using an interference RNA technique in which the thoraxes of adult females were injected with timeless double-stranded RNA. Silencing of gene expre ssion was achieved on the fourth da y after injection, the same day in which a significant alteration of the activity pattern of these females was detected. This result confirms the role of timeless in the control of activity behaviour in mosquitoes

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 109.pdf: 1338749 bytes, checksum: dced83f0e7a2d55b58777971825adce2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 109.pdf: 1338749 bytes, checksum: dced83f0e7a2d55b58777971825adce2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Durante o período de 1996 a 2006, a proporção da área global de lavouras biotecnológicas plantadas por países em desenvolvimento aumentou consistentemente a cada ano. Nos últimos dez anos, mais de 40 países adotaram políticas de rotulagem para alimentos geneticamente modificados, mas as características das regulamentações e seu grau de execução variam enormemente. Os efeitos observados dessas políticas sobre a escolha dos consumidores, a informação para os consumidores, comércio dos alimentos, comércio internacional também variam significativamente. No Brasil, o Decreto n. 4.680/03 regulamenta o direito à informação, assegurado pela Lei n. 8.078/90, quanto aos alimentos e ingredientes alimentares destinados ao consumo humano ou animal que contenham ou sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados (OGMs). O cumprimento da legislação que regulamenta a comercialização de alimentos e ingredientes contendo OGMs é totalmente dependente da sensibilidade e confiabilidade dos métodos de detecção e quantificação de OGMs. . Entre os métodos existentes, a reação em cadeia da polimerase (PCR) é o mais aceito, por ser sensível e confiável para detecção de material geneticamente modificado em análises de rotina. A padronização da técnica de PCR multiplex para a detecção de vários transgênicos em produtos alimentícios facilita o monitoramento destes, pois além de diminuir o tempo de diagnóstico, utiliza uma menor quantidade de reagentes, barateando o processo de detecção. No presente estudo, foi utilizada uma duplex PCR para a detecção de soja geneticamente modificada tolerante ao herbicida glifosato (Roundup Ready) e uma PCR multiplex para a detecção simultânea de três linhagens de milho transgênico (MON810, Bt11 e Bt176) em amostras de alimentos humano e animal. Foram utilizadas duas metodologias para extração do DNA das amostras: o método CTAB (já utilizado pelo INCQS) e o kit DNeasy Mini. [...] / From 1996 to 2006, the proportion of the global area of biotech crops growing in developing countries has increased consistently. In the last ten years, over 40 countries have adopted policies for the labeling of genetically modified food, but the regulations characteristics and their degree of implementation varies greatly. The effects of these policies on consumer choice and information, on food trade and international trade also vary significantly. In Brazil, the Decree No. 4.680/03 regulates the right to consumers information, provided by Law No. 8078/90, on food and food ingredients intended for human or animal consumption containing or produced from genetically modified organisms (GMOs). Compliance with regulation on the marketing of foods and ingredients containing GMOs is totally dependent on the sensitivity and reliability of methods of detection and quantification of GMOs. Among the existing methods, the polymerase chain reaction (PCR) is the most accepted, sensitive and reliable for the detection of genetically modified material in routine. The multiplex PCR is used on the screening of GMO in food because its able to detect simultaneously several transgenic, being a less time and reagents consuming method, making the process of detection cheaper. In the present study, duplex PCR was tested for the detection of genetically modified soybeans tolerant to the herbicide glyphosate (Roundup Ready) and a multiplex PCR was tested for the simultaneous detection of three lineages of transgenic maize (MON810, Bt11 and Bt176) in samples of human food and feed. Two methodologies were used for extraction of DNA from samples: the CTAB method (already used by INCQS) and DNeasy® Mini kit. The results were compared to the standard method used by INCQS. Out of the fourty samples, thirty samples were positive for the presence of Roundup Ready soybeans, fourteen were positive for at least one of the GM corn studied. Nine were positive for MON 810 maize, three were positive for Bt 11 maize, and five were positive for Bt 176 maize. The method proved to be robust and can be used on a routine for the detection of GMOs in food.

Made available in DSpace on 2015-05-15T13:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 215.pdf: 2592111 bytes, checksum: 804f8cb6e33b01bf63dd4d4e6914d708 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Dentre os diversos problemas associados à leishmaniose tegumentar americana (LTA), a dificuldade para a obtenção do diagnóstico exerce destaque pelos vários métodos associados para que se obtenha sua definição. A coleta do material biológico tem papel fundamental neste processo, tendo em vista a severidade das lesões aliada às comuns infecções secundárias observadas. O método de coleta empregado no serviço de saúde baseia-se no raspado da lesão e na obtenção de biópsia do local lesionado, caracterizado por promover riscos aos pacientes O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do método de coleta de amostra biológica através do swab para ao diagnóstico molecular da LTA. Entre os meses de março de 2011 a junho de 2012 foram selecionados 88 pacientes, dos quais foram coletadas amostras de biópsia, exsudatos cutâneos através do swab e raspado cutâneo. As amostras de biópsia e exsudatos foram avaliadas através da reação em cadeia da polimerase tendo como alvo o minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania. As amostras de raspado cutâneo foram avaliadas através da pesquisa direta microscópica do parasito. O perfil epidemiológico dos pacientes revelou a predominância da doença em indivíduos do sexo masculino (57,8 por cento) e as faixas etárias acometidas com predominância foram a jovem e adulto, sendo 40,36 anos a média das idades. A maioria dos pacientes foi procedente do município de Moreno, região metropolitana do Recife (70/ 79,54 por cento). Foram observadas majoritariamente lesões ulceradas com presença de exsudato (90,9 por cento) e estas se concentraram nos membros inferiores (71,6 por cento). Ao comparar o resultado do diagnóstico molecular entre as amostras analisadas, obteve-se a convergência de 86,36 por cento, sendo este valor estatisticamente significativo (p-value 0,001). Os resultados obtidos sugerem que o método de coleta de amostra biológica através do swab para o diagnóstico molecular da LTA apresenta excelente eficácia quando comparado com o método de biópsia e pode ser implantado em caráter auxiliar no serviço de saúde haja vista sua simplicidade e facilidade de execução, não oferecendo riscos secundários ao paciente

Made available in DSpace on 2015-06-01T19:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 539.pdf: 8577507 bytes, checksum: 8b2c270d079647e954ed0cf6eed5e17f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Estudos que buscam entender o porque de pacientes com dengue apresentarem diferentes prognósticos são de grande importância para a Saúde Pública. Baseado na teoria de que a resposta do sistema imune do hospedeiro frente a infecções pelo DENV tem influência no prognóstico da infecção, foram analisados e quantificados a expressão de genes em pacientes com diferentes formas clínicas da dengue. Essa tese apresenta seus resultados nos três artigos publicados. Nesse estudo, dentre os seis genes - relacionados com a resposta immune inata-, analisados, três deles (MYD88, PDCD4, FCGR3B) apresentaram potencial para serem utilizados como classificadores dos pacientes com dengue. No segundo artigo, 28 pacientes (15 DF e 13 DHF) tiveram a expressão de 12 genes - relacionados com a via de indução da resposta imune inata antiviral, principalmente interferon - individualmente quantificados. Foi utilizado o método de inteligencia computacional de predição Vetor de Suporte de Máquina para a classificação dos pacientes em DF e DHF. Os resultados destacaram MYD88 e TLR7 como os mais importantes (acurácia de 89 por cento) para a classificação entre DF e DHF; TLR9, RIG-I, IRF7, IFN- , IFN- mostraram efeito negativo na classificação, já TLR3, MDA5, IRF3, CLEC5A, IFN- separadamente não influenciaram na classificação, no entanto, quando analisados juntamente com MYD88 e TLR7 aumentaram a acurácia de classificação para 96 por cento. Destacando assim que os genes exercem influencia entre si e dessa forma se tornam os melhores elementos para classificação dos pacientes. Finalizando a tese, o terceiro artigo apresenta a análise baseada nos dados do segundo artigo, de como cada genes poderia estar sendo influenciado pela infecção do vírus nos pacientes. Observamos que o DENV influencia mais de uma via intracelular na indução do IFN; não apenas através do TLRs, mas também genes citoplasmáticos como MDA5 e RIG-I. O presente trabalho buscou identificar genes com potencial de relevancia no prognóstico da infecção por DENV e através de suas relações contribuir para o esclarecimento a cerca do prognóstico da dengue

Made available in DSpace on 2015-06-08T13:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 539.pdf: 8577507 bytes, checksum: 8b2c270d079647e954ed0cf6eed5e17f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Estudos que buscam entender o porque de pacientes com dengue apresentarem diferentes prognósticos são de grande importância para a Saúde Pública. Baseado na teoria de que a resposta do sistema imune do hospedeiro frente a infecções pelo DENV tem influência no prognóstico da infecção, foram analisados e quantificados a expressão de genes em pacientes com diferentes formas clínicas da dengue. Essa tese apresenta seus resultados nos três artigos publicados. Nesse estudo, dentre os seis genes - relacionados com a resposta immune inata-, analisados, três deles (MYD88, PDCD4, FCGR3B) apresentaram potencial para serem utilizados como classificadores dos pacientes com dengue. No segundo artigo, 28 pacientes (15 DF e 13 DHF) tiveram a expressão de 12 genes - relacionados com a via de indução da resposta imune inata antiviral, principalmente interferon - individualmente quantificados. Foi utilizado o método de inteligencia computacional de predição Vetor de Suporte de Máquina para a classificação dos pacientes em DF e DHF. Os resultados destacaram MYD88 e TLR7 como os mais importantes (acurácia de 89 por cento) para a classificação entre DF e DHF; TLR9, RIG-I, IRF7, IFN- , IFN- mostraram efeito negativo na classificação, já TLR3, MDA5, IRF3, CLEC5A, IFN- separadamente não influenciaram na classificação, no entanto, quando analisados juntamente com MYD88 e TLR7 aumentaram a acurácia de classificação para 96 por cento. Destacando assim que os genes exercem influencia entre si e dessa forma se tornam os melhores elementos para classificação dos pacientes. Finalizando a tese, o terceiro artigo apresenta a análise baseada nos dados do segundo artigo, de como cada genes poderia estar sendo influenciado pela infecção do vírus nos pacientes. Observamos que o DENV influencia mais de uma via intracelular na indução do IFN; não apenas através do TLRs, mas também genes citoplasmáticos como MDA5 e RIG-I. O presente trabalho buscou identificar genes com potencial de relevancia no prognóstico da infecção por DENV e através de suas relações contribuir para o esclarecimento a cerca do prognóstico da dengue

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 38.pdf: 779592 bytes, checksum: bb7860a5216579fd5bbccc4e3c3d8a6d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / As hortaliças como a alface (Lactuca sativa) têm sido associadas a diversos surtos de doenças de origem alimentar. Dentre os patógenos envolvidos, os norovírus (NoV) são reconhecidos como os principais agentes etiológicos de gastrenterite, sendo as estirpes do genogrupo II (GII) mais prevalentes. Dessa forma, muito esforço tem sido realizado no desenvolvimento de métodos para detecção desses vírus em hortaliças. Os estudos têm focado na padronização dos métodos e otimização das etapas de extração, concentração e detecção do ácido nucléico viral. O uso de outros vírus como controle interno também tem sido estudado, para identificação de falhas durante a análise e evitar resultados falso-negativos. O presente estudo teve como objetivo investigar a contaminação de NoV GII pelo método de concentração por filtração em membrana negativa seguida de semi-nested PCR e PCR em tempo real e avaliar a qualidade microbiológica (pesquisa de Salmonella e enumeração de coliformes) de 90 amostras de alface (30 in natura, 30 minimamente processadas e 30 de serviços de alimentação) no Estado do Rio de Janeiro.O bacteriófago PP7 foi utilizado como controle interno e uma otimização do método comparando a solução salina fosfatada tamponada (PBS) e o tampão glicina (TG) foi realizada. Nenhuma amostra apresentou contaminação por NoV GII e Salmonella. As amostras in natura apresentaram qualidade microbiológica satisfatória de acordo com a legislação. Uma amostra minimamente processada (3,3%) e seis de serviços de alimentação (20%) apresentaram condições higiênico-sanitárias insatisfatórias devido ao número de coliformes termotolerantes acima do permitido, indicando que os procedimentos de higienização realizados nos serviços de alimentação não foram eficazes para eliminação dos micro-organismos ou que a contaminação pode ocorrer, por parte dos manipuladores. / Green leafy vegetables, as lettuce (Lactuca sativa) have been linked to diverse foodborne outbreaks worldwide. Among several pathogens involved, norovirus (NoV) are recognized as one of the most important etiological agent associated with gastroenteritis, being genotype II (GII) the most prevalent. In this manner, efforts have been made to develop methods to detect these viruses in green leafy vegetables. Researches have focused on standardizing methods and optimize stages of extraction, concentration and detection of viral nucleic acid. The use of others viruses as internal control has also been studied, to identifying possible errors during analysis and avoid false-negatives results. This study aimed to verify the contamination by NoV GII through concentration methodology by negative-membrane filtration followed by detection by semi-nested PCR and quantification by Real Time PCR and microbiological quality evaluation (Salmonella research and enumeration of total and thermo tolerant coliform) of 90 samples of lettuce (30 in natura, 30 minimally processed and 30 from food services) in the state of Rio de Janeiro. Bacteriophage PP7 was utilized as internal control and a method optimization comparing phosphate buffered saline (PBS) and Glycine buffer (GB) was carried out. No sample showed contamination by NoV GII and Salmonella. Samples of in natura lettuce exhibited satisfactory microbiology quality according Brazilian resolution. One minimally processed sample (3.3%) and six (20%) from food service showed unsatisfactory hygienic-sanitary conditions because of the number of thermotolerant coliforms above of allowed, indicating that hygienic proceedings in restaurants were not effective for eliminating those microorganisms or that the contamination may occur by employers. PP7 bacteriophage was detected in 40, 86.7 and 76.7% of in natura, minimally processed and food service, respectively. Using GB increased PP7 bacteriophage recovery (p = 0.029), but did not demonstrate significant difference in NoV GII recovery (p = 0.57), and increased sensitivity of semi nested PCR technique for detecting NoV GII in samples artificially contaminated. This last one exhibited lower sensitivity than Real Time PCR for NoV GII detection. Results point out that GB is an elution buffer more efficient and that PP7 bacteriophage is applicable as an internal control of this method.

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 14.pdf: 2053160 bytes, checksum: 6a9f2af0a7daaa1f0f06673bc00622fc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A doença meningocócica (DM) é uma enfermidade aguda, grave, de evolução rápida com taxas de mortalidade de 15 a 20% e que atinge principalmente as faixas etárias mais jovens, considerada um grave problema de saúde pública mesmo em países desenvolvidos. A DM está associada à colonização da nasofaringe de humanos, único hospedeiro, por uma bactéria Gram negativa, Neisseria meningitidis. O método considerado padrão ouro para a tipificação molecular da Neisseria meningitidis é o MLST, que consiste no sequenciamento de 7 genes Housekeeping , o MLST é uma técnica complexa que exige uma demanda de custo e tempo, tornando-se inviável sua implementação em laboratórios públicos que recebem amostras de Nm, uma estratégia que poderá contornar este obstáculo seria a PCR em tempo real que com poucas reações e em poucos dias fornecerá o perfil de MLST de isolados com alta porcentagem de confiabilidade. O objetivo do estudo é detectar os complexos clonais do MLST causadores dos grandes surtos de DM através de sondas específicas pela PCR em Tempo Real Qualitativa. A análise pelo MLST de 98 isolados estudados caracterizou todos os 15 isolados do sorogrupo B como integrantes do complexo clonal ST-32/ET-5 além de outras 11 cepas do sorogrupo C. O ST-103 foi o complexo clonal predominante entre as cepas do sorogrupo C com 43 isolados, outros STs foram encontrados para o sorogrupo C,ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) e outros 5 isolados não foram associados a nenhum complexo clonal. A análise pela PCR em Tempo Real forneceu dados importantes como a caracterização de grande número dos isolados com 100% de certeza e de outros isolados com probabilidade acima de 75%. A PCR em Tempo Real qualitativa mostrou ser uma ferramenta rápida e sensível no auxílio a estudos epidemiológicos para controle de surtos regionais quando há a necessidade de ações rápidas por parte das autoridades de saúde pública. / Meningococcal disease (MD) is an acute illness, severe, rapidly evolving with mortality rates of 15 to 20% and that primarily affects younger age groups, considered a serious public health problem in developed countries. DM is associated with colonization of the nasopharynx of human host by Gram negative bacteria, Neisseria meningitidis (Nm). The method considered the "gold standard" for molecular typing of Neisseria meningitidis is the MLST, which consists in sequencing of 7 genes "Housekeeping", the MLST is a complex technique that requires a time and cost consuming, making it impractical implementation in public laboratories that receive Nm samples, a strategy that could circumvent this obstacle would be the real-time PCR with few reactions in a few days coud provide the MLST profile of isolates with a high percentage of reliability. The objective in this study is to detect the MLST clonal complexes causing major outbreaks of DM through specific probes for Real Time PCR Qualitative method. The analysis by MLST of 98 isolates studied featured all 15 isolates of serogroup B as clonal complex ST-32/ET-5 plus 11 other strains of serogroup C. The ST-103 was the predominant clonal complex among strains of serogroup C isolates with 43. Others STs were found for serogroup C, ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) and other five isolates were not associated with any clonal complex. The analysis by Real Time PCR provided important data such as the characterization of large numbers of isolates with 100% certainty and other isolates with probability above 75%. The Real-Time PCR using the qualitative method proved to be a highly useful tool to aid in rapid and epidemiological studies for outbreak control is necessary when regional rapid actions of public health authorities.