Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:50:55Z : No. of bitstreams: 1 000865143.pdf: 1222502 bytes, checksum: 6d7d7cfc6cf6e5880416ce873a338cad (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Muitas espécies de protozoários podem causar gastroenterite aguda ou crônica em seres humanos e são altamente prevalentes nas populações residentes nos países em desenvolvimento, onde a transmissão é favorecida devido a condições precárias de higiene e escassa disponibilidade de água potável. No entanto, a infecção assintomática e o poliparasitismo também são comumente observados nessas populações. Neste trabalho, investigou-se a prevalência de protozoários intestinais em duas colônias de pescadores, Porto Said (PS) e Santa Maria da Serra (SM), situadas ao longo do rio Tietê, no Estado de São Paulo. As colônias não dispõem de serviços públicos básicos como: vias públicas, fornecimento de água e luz e saneamento básico. Todos os colonos (n = 88 em PS, e n = 38 em SM) coletaram três amostras de fezes, e todos eram assintomáticos no momento da coleta. Para obter informações sobre as possíveis vias de transmissão, amostras fecais de 49 cães (38 de PS e 11 de SM) e 28 amostras de água do rio foram coletadas (16 de PS e 12 de SM). As amostras fecais humanas e caninas foram analisadas por microscopia e PCR para detectar e caracterizar os protozoários Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis e Cryptosporidium spp. Diante dos resultados obtidos, Blastocystis spp. foi o parasita mais prevalente nas amostras humanas (45,4% em PS e 71% em SM), seguido por D. fragilis (13,6% em PS e 18,4% em SM) e G. duodenalis (18,2% em PS e 7,9% em SM), já Cryptosporidium spp. não foi detectado na população humana. Além disso, G. duodenalis foi detectado em quatro cães (10,5%) em PS e dois cães (18,2%) em SM, enquanto que um único cão foi detectado com Cryptosporidium canis. Nas 28 amostras de água previamente processadas pelos métodos de filtração e separação imunomagnética e examinadas por microscopia de fluorescência, oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia não foram... / Several species of protozoa cause acute or chronic gastroenteritis in humans, worldwide. The burden of disease is particularly high among children living in developing areas of the world, where transmission is favored by lower hygienic standards and scarce availability of safe water. However, asymptomatic infection and polyparasitism are also commonly observed in poor settings. Here, we investigated the prevalence of intestinal protozoa in two small fishermen villages, Porto Said (PS) and Santa Maria da Serra (SM), situated along the river Tietê in the State of São Paulo, Brazil. The villages lack basic public infrastructures and services, such as roads, public water supply, electricity and public health services. Multiple fecal samples were collected from 88 individuals in PS and from 38 individuals in SM, who were asymptomatic at the time of sampling and had no recent history of diarrheal disease. To gain insights into potential transmission routes, 49 dog fecal samples (38 from PS and 11 from SM) and 28 river water samples were also collected. All samples were tested by microscopy and PCR was used to genotype isolates of Giardia duodenalis, Blastocystis spp., Dientamoeba fragilis and Cryptosporidium spp. By molecular methods, the most common human parasite was Blastocystis spp. (prevalence, 45% in PS and 71% in SM), followed by D. fragilis (13.6% in PS, and 18.4% in SM) and G. duodenalis (18.2% in PS and 7.9% in SM); Cryptosporidium spp. were not detected. Further, G. duodenalis was found in 4 dogs (10.5%) in PS and 2 dogs (18.2%) in SM, whereas a single dog was found infected with Cryptosporidium canis. River water samples processed by filtration and immunomagnetic separation and examined by fluorescent microscopy, were negative for Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts. Sequencing of the barcoding region of the small subunit ribosomal gene revealed large genetic variation among Blastocystis isolates, with subtypes (STs) that ... / FAPESP: 11/52100-3

Submitted by Walter Bertequini Nagata null (walter.bn@hotmail.com) on 2017-01-04T19:05:41Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO DE MESTRADO - Walter Bertequini Nagata.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-01-06T13:34:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nagata_wb_me_araca.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-06T13:34:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nagata_wb_me_araca.pdf: 726100 bytes, checksum: 44016cb83ccb52d2853fbd5e43a37790 (MD5) Previous issue date: 2017-01-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi investigar, por métodos estatísticos, a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e Ehrlichia spp. com o uso de técnicas sorológicas e moleculares. Um total de 100 amostras sanguíneas de cães foram colhidas e processadas por meio do ELISA (Ensaio Imunoenzimático Indireto) e PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). A análise estatística consistiu nos testes de McNemar e Coeficiente de concordância Kappa. As estatísticas foram consideradas significativas quando p<0,05. A sensibilidade e especificidade dos testes foram determinadas pela curva ROC (Receiver Operator Characteristic), considerando o PCR como teste padrão ouro. A partir das análises pode-se verificar que 48,0% dos animais foram reativos na ELISA e 58,0% foram positivos na PCR, no caso da Leishmania spp. Para Ehrlichia spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 54,0% e, pela PCR, 48,0% dos cães foram positivos. Nota-se, também, que 37,0% dos animais foram positivos para os dois patógenos por meio do teste molecular, e quatro cães foram reativos no teste ELISA para ambas as doenças e tiveram resultado negativo apenas no teste molecular de Ehrlichia spp. Estes resultados, na sorologia, podem sugerir possíveis casos de reatividade cruzada entre a Leishmania spp. e Ehrlichia spp.. Entretanto, é mais provável que estes resultados estejam relacionados com a coinfecção desses agentes. Por meio dos resultados obtidos, há mais evidências de coinfecção por estes dois agentes patogênicos no cão, do que reatividade cruzada entre eles. / The aim of this study is to investigate, by statistical methods, the occurrence of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp. using serological and molecular techniques. A total of 100 blood samples from dogs were collected and processed by ELISA (indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and PCR (polymerase chain reaction). Statistical analysis consists of McNemar tests and agreement coefficient Kappa. The statistics were considered significant when p <0.05. The sensitivity and specificity of the tests were determined by ROC curve (Receiver Operator Characteristic), considering the PCR as gold standard. From the analysis it can be seen that 48,0% of the animals were reactive in ELISA and 58,0% were positive in PCR in the case of Leishmania spp. For Ehrlichia spp., the occurrence of antibodies by ELISA was 54,0% and, by PCR, 48,0% of the dogs were positive. It can be noted also that 37,0% of the animals were positive for both parasites through molecular test and four dogs were reactive in the ELISA test for both diseases and were negative only in molecular test for Ehrlichia spp. These results in serology can suggest possible cases of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp.. However, it is more likely that these results are related to coinfection of these agents. Through the results obtained, there are more evidences of coinfection by these two pathogens in dogs than cross-reactivity between them. / FAPESP: 2014/26413-2

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:19:16Z : No. of bitstreams: 1 resende_mv_me_jabo.pdf: 500037 bytes, checksum: dcdabb9ddd0a9d7b7a657398caa401ff (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Anticorpos anti H-Y foram produzidos em ratas da linhagem isogênica Wistar Furth, e utilizados no sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos, com o objetivo de desviar a proporção sexual. As ratas foram imunizadas com leucócitos do baço de machos de mesma linhagem, e a atividade biológica dos anticorpos verificada por ELISA. Cento e trinta e quatro embriões foram produzidos in vitro e quando atingiram o estádio de mórula foram incubados em meio de cultivo contendo 5% de anticorpos anti H-Y a 38,5 °C com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 , por um período de 24 horas. Os embriões do grupo controle foram cultivados nas mesmas condições, sem adição de anticorpos anti H-Y. Após o cultivo com anticorpos anti H-Y, os embriões foram classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos que permaneceram no estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e houve a formação de blastocele (classificados como fêmeas). Conseguimos produzir anticorpos anti H-Y com títulos de até 1:2048. Dos 134 embriões produzidos, 79 embriões (58,96%) tiveram o desenvolvimento inibido, e 55 embriões (41,04%) não sofreram inibição. O sexo de 124 embriões pode ser verificado com a PCR para confirmação dos resultados. Das 78 mórulas, 49 (62,82%) eram do sexo masculino e dos 46 blastocistos, 22 (47,83%) eram do sexo feminino. No grupo controle a proporção sexual foi de 55,57% de embriões fêmeas e 44,43% de embriões machos, totalizando 70 embriões. O teste do Qui-quadrado indicou que somente na sexagem de mórulas obteve-se desvio da proporção sexual (P<0,05) em relação ao grupo controle. Os resultados da sexagem foram diferentes dos apresentados na literatura o que pode ser devido à qualidade morfológica inferior dos embriões produzidos in vitro comparada aos embriões produzidos in vivo, ou também, a influência do meio de cultivo. / Anti-H-Y antibodies were produced in female rats of the isogenic strain Wistar Furth, immunized with spleen leukocytes of males of the same strain, and the biological activity of the antibody was verified by ELISA. One hundred and thirty four embryos were produced in vitro and when they reached the morula stage they were incubated with anti-H-Y antibodies at 38.5°C under 5% CO2, 5% O2 and 90% N2 , for a period 24 hours. The embryos in the control group were cultured under same conditions, without addition of the anti-H-Y antibodies. After culture of the embryos in the medium containing anti H-Y antibodies, they were classified in two groups: 1) arrested embryos that remained in morula stage (classified as male) and 2) embryos that developed and formaed a blastocoele (classified as female). With the isogenic rats used, had been antibodies were obtained with titers up to 1:2048. Of the 124 embryos, 79 of them (58.96%) were arrested, and 55 embryos (41.04%) were not. The sex of 124 embryos was identified by PCR. Of the 78 morulas, 49 (62.82%) were confirmed as being male sex and of the 46 blastocysts, 22 (47.83%) were confirmed as being of the female sex. In the control group the sexual ratio was of 55.57% of femle embryos and 44.43% of male embryos, totalizing 70 embryos. Using the Chi-Square Test it was possible to observe that in the sexing of morulas it was obtained only statistical difference (P<0.05) in relation to the sexual ratio of the control group, while for sexed blastocysts no statistical difference was detected. The different results found compared with those reported in the literature could be due to the poor morphogical quality of the in vitro produced embryos when compared with the in vivo produced ones, or also, to the influence of the culture medium used during the in vitro production of embryos with anti-H-Y antibodies.

Orientadora: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Resumo: Anticorpos anti H-Y foram produzidos em ratas da linhagem isogênica Wistar Furth, e utilizados no sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos, com o objetivo de desviar a proporção sexual. As ratas foram imunizadas com leucócitos do baço de machos de mesma linhagem, e a atividade biológica dos anticorpos verificada por ELISA. Cento e trinta e quatro embriões foram produzidos in vitro e quando atingiram o estádio de mórula foram incubados em meio de cultivo contendo 5% de anticorpos anti H-Y a 38,5 °C com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% de N2 , por um período de 24 horas. Os embriões do grupo controle foram cultivados nas mesmas condições, sem adição de anticorpos anti H-Y. Após o cultivo com anticorpos anti H-Y, os embriões foram classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos que permaneceram no estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e houve a formação de blastocele (classificados como fêmeas). Conseguimos produzir anticorpos anti H-Y com títulos de até 1:2048. Dos 134 embriões produzidos, 79 embriões (58,96%) tiveram o desenvolvimento inibido, e 55 embriões (41,04%) não sofreram inibição. O sexo de 124 embriões pode ser verificado com a PCR para confirmação dos resultados. Das 78 mórulas, 49 (62,82%) eram do sexo masculino e dos 46 blastocistos, 22 (47,83%) eram do sexo feminino. No grupo controle a proporção sexual foi de 55,57% de embriões fêmeas e 44,43% de embriões machos, totalizando 70 embriões. O teste do Qui-quadrado indicou que somente na sexagem de mórulas obteve-se desvio da proporção sexual (P<0,05) em relação ao grupo controle. Os resultados da sexagem foram diferentes dos apresentados na literatura o que pode ser devido à qualidade morfológica inferior dos embriões produzidos in vitro comparada aos embriões produzidos in vivo, ou também, a influência do meio de cultivo. / Abstract: Anti-H-Y antibodies were produced in female rats of the isogenic strain Wistar Furth, immunized with spleen leukocytes of males of the same strain, and the biological activity of the antibody was verified by ELISA. One hundred and thirty four embryos were produced in vitro and when they reached the morula stage they were incubated with anti-H-Y antibodies at 38.5°C under 5% CO2, 5% O2 and 90% N2 , for a period 24 hours. The embryos in the control group were cultured under same conditions, without addition of the anti-H-Y antibodies. After culture of the embryos in the medium containing anti H-Y antibodies, they were classified in two groups: 1) arrested embryos that remained in morula stage (classified as male) and 2) embryos that developed and formaed a blastocoele (classified as female). With the isogenic rats used, had been antibodies were obtained with titers up to 1:2048. Of the 124 embryos, 79 of them (58.96%) were arrested, and 55 embryos (41.04%) were not. The sex of 124 embryos was identified by PCR. Of the 78 morulas, 49 (62.82%) were confirmed as being male sex and of the 46 blastocysts, 22 (47.83%) were confirmed as being of the female sex. In the control group the sexual ratio was of 55.57% of femle embryos and 44.43% of male embryos, totalizing 70 embryos. Using the Chi-Square Test it was possible to observe that in the sexing of morulas it was obtained only statistical difference (P<0.05) in relation to the sexual ratio of the control group, while for sexed blastocysts no statistical difference was detected. The different results found compared with those reported in the literature could be due to the poor morphogical quality of the in vitro produced embryos when compared with the in vivo produced ones, or also, to the influence of the culture medium used during the in vitro production of embryos with anti-H-Y antibodies. / Mestre

Resumo: O presente trabalho teve como objetivos a) desenvolver um método eficiente, rápido e de fácil aplicação na detecção e na identificação de Diaporthe phaseolorum var. meridionalis (Dphm), em sementes de soja utilizando-se a técnica de reação de polimerase em cadeia (PCR); b) comparar PCR com os métodos rotineiros de patologia de sementes. Os resultados sugerem que pode haver uma identificação equivocada, quando se utiliza este parâmetro na diferenciação do agente causal do cancro da haste da soja, com outras espécies de Diaporthe presentes em sementes; b) pela coloração das colônias nos meios de cultura BDA e Czapeck, os isolados de Dphm e Dph foram agrupados em 9 classes. Em meio Czapeck, todas as colônias identificadas como Dphm, foram agrupadas nas classes 8 e 9, apresentando um padrão micelial lanoso (tipo feltro), exceto o isolado 46; c) pelo crescimento micelial não foi possível distinguir Dphm de Dph. Comparando-se os métodos do papel de filtro modificado com 2,4D, plaqueamento em BDA e sementes em papel de filtro com 2,4D, associado a PCR, para detecção e identificação de Dphm, visando distinguí-lo de outras espécies presentes nas sementes, conclui-se que o método mais confiável foi o de incubação das sementes em papel de filtro com 2,4D associado a PCR. Em relação ao melhor método de extração de DNA, em sementes colonizadas por Dph., foi o da lavagem das sementes com STE e purificação do DNA com a resina de sílica gel da Wizard (Promega). / Abstract: The objective of this research was to develop, an easy, quick and efficient method for detection and identification of Diaporthe phaseolorum var. meridionalis (Dphm), in soybean seeds, using the polimerase chain reaction (PCR) technique and methods routinely used in seed pathology. The results suggest that there can be a mistake when using this parameter to distinguish the causal agent of the stem canker from other species of Diaporthe; b)color of the colonies in PDA and Czapeck medium, Dphm and the of Diaporthe spp. (Dph) isolates were grouped in 9 classes. In Czapeck medium, all isolates identified as Dphm, were grouped in classes 8 and 9, showing wooled micelial pattern (like felt), except isolate 46; c) basead on the micelial growth it was not possible to distinguish Dphm from Dph. For detection and identification of Dphm of other Dph species in the seeds, the most reliable method was the modified blotter test with 2,4D associated with PCR. In Dph colonized seeds, the best method of DNA extraction was seed washing with STE and DNA purification using Wizard (Promega) silica gel resin. / Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Elza Maria Frias Martins / Doutor

Resumo: O subtipo Anemia Refrataria com Excesso de Blastos (AREB) representa cerca de 30% dos casos de Síndromes Mielodisplásicas (SMD). Os pacientes apresentam uma sobrevida media de poucos meses e risco alto de progressão para Leucemia Mielóide Aguda. As bases moleculares da doença não estão elucidadas. O objetivo do presente trabalho foi investigar a expressão gênica das células da medula óssea (MO) de pacientes com AREB. Foi gerada a primeira biblioteca SAGE de AREB, ao diagnostico, a partir de amostras de MO de seis pacientes. A comparação entre as bibliotecas AREB e normal evidenciou genes diferencialmente expressos. Cinco genes hipo-expressos, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO e MSH2, e outros cinco hiper-expressos, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 e NOTCH1 foram selecionados para validação nas amostras coletadas ao diagnostico e dos mesmos pacientes após seis meses do diagnóstico, por PCR em tempo real. O padrão de expressão dos cinco genes hipo-expressos e dois hiper-expressos, MIF e RHOG foi confirmado, ao diagnostico, em 60% dos pacientes. Os genes NUMB e RHOG mostraram o mesmo padrão de expressão após seis meses de evoluçlão da doença, enquanto o gene. NOTCH1 apresentou hiper-expressão em duas amostras. Os dados aqui obtidos mostram que a criação da biblioteca SAGE de AREB permite o estudo de genes possivelemente envolvidos na origem e evolução da doença. As células da MO de pacientes com AREB apresentam um perfil de expressão gênica diferente das celulas de MO normal. Os genes TXNIP, SGPL1, NUM e, FOXO3, e MSH2, MIF e RHOG, estão hipo e hiper-expressos, respectivamente, ao diagnóstico. NUMB e RHOG mantêm seu padrão de expressão após seis meses, mas NOTCH1 parece aumentar sua expressão após este período.,Estes resultados devem ser confirmados em um número maior de amostras, no entanto, demonstram que a expressão alterada dos genes FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The refractory anemia with excess blast (RAEB) subtype represents approximately 30% of Myelodysplastic Syndrome (MDS) cases. Patients with RABE have survival rates of a few months and a high risk for progression to acute myeloid leukemia. The molecular basis of the disease is not elucidated yet. This study aimed at analyzing the gene expression profile of bone marrow (BM) cells in patients with RAEB. We created the first SAGE library of RAEB at diagnosis using the BM cells of six patients. A comparison between RAEB and normal SAGE libraries show differentially expressed genes. Five under-expressed genes, TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3 and MSH2 and five over-expressed genes, MIF, RHOG, ICAM3, CHI3L1 and NOTCH1, were selected for validation using real time PCR with samples collected at diagnosis and samples from the same patients collected six months after diagnosis. The pattern of expression of the five under-expressed genes and two overexpressed genes (MIF and RHOG) was validated at diagnosis in 60% of the patients. The NUMB and RHOG genes show the same expression pattern six months after diagnosis. NOTCH1 continued over-expressed in two samples six months after diagnosis. Our results show that the creation of the RAEB SAGE library allowed an analysis of genes passively involved in the genesis and progression of disease. BM cells from patients with REAB show a different gene expression profile to normal BM. The TXNIP, SGPL1, NUMB, FOXO3, and MSH2 genes are under-expressed and MIF and RHOG are over-expressed at diagnosis. NUMB and RHOG conserved their expression pattern six months after diagnosis and NOTHC1 gene increase its expression in this period. However, the results should be confirmed in studies with a larger number of cases with abnormal expressions for the FOXO3, NUMB, SGPL1, TXNIP, MSH2, MIF, RHOG and NOTCH1 genes. As these genes may play a role in the pathogenesis and progression... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Coorientador: Wilson Araújo da Silva Júnior / Banca: Octávio Ricci Júnior / Banca: Andréia Machado Leopoldino / Banca: Andréa Regina Baptista Rossit / Banca: Luis Carlos de Mattos / Doutor

Orientador: Jane Megid / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: José Buratini Junior / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Lara Borges Keid / Resumo: Mundialmente a brucelose continua sendo um problema econômico e de saúde pública. A brucelose ovina é reconhecida como a mais importante causa de epididimite, sendo uma das principais causadoras de infertilidade em ovinos. Os mecanismos imunes envolvidos na defesa e eventualmente na persistência e manutenção do agente são desconhecidos. Brucellas spp. geram somente uma resposta inflamatória moderada e os estudos da patogenia da brucelose ovina são escassos. Recentes avanços demonstram que a resposta inflamatória induzida pelas Brucellas spp. representam provavelmente o resultado de uma tentativa de evasão e supressão da resposta imune hospedeira. Utilizando as tecnologias de RT-PCR em tempo real (q) e microarranjos este trabalho avaliou a expressão gênica da resposta imune e inflamatória na brucelose experimental ovina. O estudo apresenta a primeira análise do perfil de expressão gênica de citocinas através de RT-qPCR em tecidos reprodutivos e não reprodutivos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dias pós infecção (dpi). O estudo também demonstra a primeira análise geral da expressão gênica por meio de microarranjos em tecidos reprodutivos e pool de linfonodos de carneiros experimentalmente infectados com cepa de B. ovis PA até 240 dpi. Neste trabalho demonstrou a persistência da B. ovis e o perfil inflamatório da resposta imune gerado pela infecção. Com este estudo espera-se aumentar o conhecimento da patogênese da B. ovis em carneiros infectados / Abstract:Globally, brucellosis remains an economic problem and public health threat. The ovine brucellosis is recognized as the most important cause of epididymitis, one of the main causes of infertility in sheep. The mechanisms involved in immune defense and possibly the persistence and maintenance of the agent are unknown. Brucellas spp. generate only a moderate inflammatory response, and studies of the pathogenesis of ovine brucellosis are scarce. Recent developments have shown that Brucella spp. induces a moderate inflammatory response probably the result of an attempt to escape and to suppress the host immune response. Through real time (q) RT-PCR and microarrays the purpose this study evaluated the gene expression of immune and inflammatory response in experimental ovine brucellosis. The study demonstrated for the first time the gene expression profile of cytokines by RT-qPCR in reproductive and non reproductive tissues of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 days post infection (dpi). The research also showed the first overall analysis of gene expression using microarrays in reproductive tissues and pool of lymph nodes of rams experimentally infected with B. ovis PA strain up to 240 dpi. The study demonstrated the persistence of B. ovis and the inflammatory profile of immune response occasioned due the infection. These results are expected to increase the knowledge of the pathogenesis of B. ovis in sheep / Doutor

Resumo: O papilomavírus humano (HPV) está associado à um amplo espectro de lesões em humanos e tem sido associado à carcinogênese oral. Uma das metodologias mais sensíveis e especifica para sua detecção é a reação em cadeia de polimerase (PCR). O objetivo deste estudo foi investigar a presença do DNA do HPV em carcinoma epidermóide de lábio e correlacioná-la com fatores de risco, características clínicas, anatomopatológicas e sobrevida dos pacientes estudados. A presença do DNA do HPV foi investigada através da nested PCR em 30 amostras parafinadas de carcinoma epidermóide de lábio. O DNA viral foi detectado em 43,33% (13/30) das amostras. A presença do DNA do vírus foi relacionada com: idade, sexo, etnia, graduação histológica, etilismo, tabagismo, exposição freqüente à radiação solar, estadiamento clínico e sobrevida livre de doença e nenhuma correlação entre a presença do DNA viral e os parâmetros avaliados foi observada. Estes resultados sugerem que HPV não teve participação no processo de carcinogênese dos carcinomas epidermóides de lábio estudados. / Abstract: Human papillomavirus (HPV) is associated with a wide spectrum of lesions in humans and has been related to the oral carcinogenesis. The most sensitive and specific methodology for its detection is the polymerase chain reaction (PCR). The aim of this study was to investigate HPV DNA presence in lip squamous cell carcinoma and to correlate it with demographic, clinicalpathologic characteristics and survival data. HPV DNA was investigated by nested PCR in 30 paraffin-embedded tissues of lip squamous cell carcinomas. HPV DNA was detected in 43,33% (13/30) of samples. Presence of viral DNA was not associated with the following factors: age, sex, race, histologic grade, etilism, tabagism, history of solar radiation exposition, clinical staging and survival of the patients. This results suggest that HPV is not related to the lip squamous cell carcinomas carcinogenesis. / Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: José Fernando Garcia / Banca: Cáris Maroni Nunes / Banca: Ricardo Della Coletta / Mestre

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Francisco Chiaravalloti Neto / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Banca: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Mary Marcondes / Resumo: Leishmaniose visceral é uma doença grave que tem no cão seu principal reservatório doméstico. Algumas lacunas no conhecimento dificultam ainda mais o controle da doença. Com relação ao reservatório canino, a possibilidade de se estabelecer indicadores de infectividade ao vetor, como a carga parasitária, poderia resultar em melhor caracterização de seu papel como fonte de infecção na cadeia epidemiológica. Foram realizados xenodiagnósticos em cães acometidos de leishmaniose visceral, com subsequente avaliação da carga parasitária no hospedeiro e no vetor, utilizando-se flebotomíneos da área urbana de Araçatuba,SP. Após cinco dias do repasto, as fêmeas foram dissecadas e submetidas à avaliação parasitológica por meio da demonstração direta do parasito (DDP) e da contagem em câmara de Neubauer (NC). Fragmento de DNA de cinetoplasto (kDNA) de Leishmania spp. foi amplificado por meio da PCR convencional e em tempo real (qPCR), para quantificação da carga parasitária. Os cães foram avaliados para a presença de sinais clínicos e amostras de sangue, swab conjuntival e de pele foram colhidas e processadas por PCR e qPCR. Os resultados dos métodos diagnósticos utilizados foram correlacionados em modelo de regressão linear e a positividade de felbotomíneos foi corrigida pela positividade natural. Tanto a PCR convencional quanto a qPCR mostraram-se adequadas para a avaliação da infectividade canina. Houve correlação entre a carga de parasitos presentes na pele e no swab conjuntival do cão bem como com a cargas de parasitos dos flebotomíneos. Alguns sinais clínicos dos cães, pela análise de componentes principais (PCA), estiveram relacionados com a maior taxa de infecção dos vetores. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a severe disease that has the dog as its main domestic reservoir. Gaps in the knowledge difficult even more the control of this disease. Regarding the canine reservoir, the possibility of establishing infectivity indicators, like the dogs parasite load, could result in better characterization of its role as source of infection in the transmission chain. Xenodiagnosis in dogs with visceral leishmaniasis were performed with subsequent parasite load evaluation of the host and the vectors, using sandflies captured in the urban area of Araçatuba,SP. After five days, the female sand flies were dissected, subjected to parasitological evaluation by the direct demonstration of the parasite (DDP) and by counting in a Neubauer chamber (NC). A kinetoplast DNA fragment of Leishmania spp. was amplified by conventional PCR and by qPCR to check the presence and quantification of Leishmania kDNA. Dogs were assessed for clinical signs and blood, skin and conjunctival swab samples were taken and tested for parasite load. The diagnostic methods tested (NC, PCR and qPCR) were correlated by linear regression and positivity results were corrected by the natural infection rate. Conventional PCR and qPCR proved to be appropriate for evaluating canine infectivity. There was a correlation between the parasite load present in the dog' skin and the conjunctive swab, as well as with the sandflies parasite loads. Principal component analysis revealed that some of the clinical signs shown by the dogs were related to a highest sandfly infection rate. / Doutor

Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Izabel Regina Fischer Rubira-Bullen / Resumo: A leucoplasia bucal é considerada uma lesão cancerizável para o desenvolvimento do carcinoma espinocelular (CEC), e vários fatores de risco podem estar relacionados a essa carcinogênese, incluindo o papiloma vírus humano (HPV). Na mucosa bucal tem sido feita a associação da leucoplasia bucal com o HPV. O objetivo desse estudo foi detectar a presença do DNA do HPV em amostras de tecidos fresco, saliva, plasma e células exfoliadas orais, extraídas de pacientes com e sem leucoplasia bucal, analisadas através da técnica de nested PCR (nPCR). Para este estudo foram avaliados 32 pacientes portadores de leucoplasia bucal e 24 pacientes selecionados de forma caso-controle. Foi realizada a extração de DNA das amostras, e em seguida a sua amplificação através da PCR. A nPCR para detecção do HPV revelou a presença do vírus em 68,75% das amostras de tecido fresco, 50% no plasma, 28,1% no citobrush, 62,5% na saliva no grupo de pacientes com leucoplasia em comparação com 45,8%, 54,2%, 45,8%, 50% nas amostras de tecido fresco, plasma, citobrush e saliva do grupo controle respectivamente. Baseado no presente estudo o HPV poderia ser um co-fator etiológico na patogênese da leucoplasia oral. / Abstract: The oral leukoplakia is considered as a pre-malignant lesion for the development of the oral squamous cell carcinoma, and several risk factors can be related to this carcinogenesis, including the human papillomavirus (HPV). HPV is the main cause of cervix cancer, and your role in the oral carcinogenesis is still controversial. The aims of this study was to detect the presence of HPV DNA in fresh tissue samples, plasma and oral exfoliated cells extracted from patients 32 with oral leukoplakia, and 24 controls analyzed through the technique of nPCR and make a comparison among these biological materials sources. It was performed the extraction of DNA from 37 patients with oral leukoplakia, and amplification of the human β-globin gene was carried out in all samples to confirm the presence and integrity of DNA. Nested PCR assays revealed the presence of HPV DNA in 68.75% of fresh tissue, 50.0% of plasma, 62.5% of saliva, and in 28.1% of oral exfoliated cells extracted from patients. Based on the current experiment, HPV could potentially be an etiologic co-factor in the pathogenesis of oral leukoplakia. / Mestre