Associações simbióticas, comensais e parasitárias são amplamente relatadas em insetos. Pelo fato de larvas de culicídeos e amebas de vida livre (AVL) habitarem meios aquáticos similares, objetivou-se verificar a prevalência de Acanthamoeba spp. em populações silvestres de Aedes aegypti. Esta AVL foi investigada em 60 pools contendo 10 larvas de A. aegypti, as quais foram coletadas através de ovitrampas instaladas em diversos bairros da cidade de Porto Alegre (RS, Brasil). Os isolados de Acanthamoeba spp. foram caracterizados morfologicamente e submetidos à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmação do gênero. Ademais, realizouse análise genotípica e testes presuntivos de patogenicidade para algumas cepas. Entre os pools, 54 (90%) foram positivos para AVL, dos quais 47 (87%) isolados eram pertencentes ao gênero Acanthamoeba. Os grupos genotípicos T4, T3 e T5 foram identificados, correspondendo a 14 (53,8%), 10 (38,5%) e dois (7,7%) isolados, respectivamente. De acordo com testes fisiológicos empregados para 14 cepas, 12 (85,7%) foram consideradas não patogênicas e duas (14,3%) foram consideradas com baixo potencial patogênico. Estes resultados servem como base para um maior conhecimento acerca da interação entre estes protozoários e mosquitos vetores, em seu habitat natural. Além disso, é o primeiro estudo dedicado ao isolamento de Acanthamoeba spp. a partir de culicídeos coletados do ambiente. / Symbiotic, commensal and parasitic associations are widely reported in insects. By the fact of mosquito larvae and free-living amoebae (FLA) occupy the similar aquatic sites, the aim of this study was to determine the prevalence of Acanthamoeba spp. in Aedes aegypti larvae collected in the environment. The amoebae were investigated in 60 pools, each containing 10 larvae of A. aegypti which were collected by using larvitraps installed in various districts of Porto Alegre (RS, Brazil). Acanthamoeba isolates were morphologically characterized and submitted to Polymerase Chain Reaction technique to confirm the genus. In addition, genotype analyses as well as presumptive tests for pathogenicity in some samples were performed. Among the pools, 54 (90%) were positive for FLA. From those isolates, 47 (87%) belong to the genus Acanthamoeba. The genotype groups T4, T3 and T5 have been identified corresponding to 14 (53.8%), 10 (38.5%) and two (7.7%) isolates respectively. The physiological tests performed in 14 strains showed that 12 (85.7%) were non pathogenic, while two (14.3%) were considered with low pathogenic potential. These results provide a basis for a better understanding between these protozoan and mosquitoes interaction in their natural habitat. Moreover, this study is the first to report isolation of Acanthamoeba spp. from mosquitoes collected in the environment.

Objetivos: Avaliar o desempenho e o custo-efetividade de duas técnicas de PCR (Polymerase Chain Reaction) in house: PCR dot-blot e o PCR utilizando a eletroforese em gel de agarose (PCR-AG) no diagnóstico de Tuberculose Pulmonar em pacientes infectados ou não pelo HIV . Material e Métodos: Um estudo prospectivo foi conduzido (de Maio de 2003 a Maio de 2004) em um Hospital de Referência para TB/HIV. Escarros de 277 indivíduos com suspeita de Tuberculose Pulmonar (PTB) foram testados pelas técnicas de microscopia direta pela coloração de Ziehl-Neelsen (ZN), cultura e pelas metodologias de PCR in house (PCR dot-blot e PCR-AG). A acurácia dos testes foi avaliada de acordo com o status de HIV, com o status de tratamento prévio ou não, e com a estimativa de probabilidade pré-teste feita pelos pneumologistas. O padrão ouro utilizado foi a cultura positiva combinada com a definição clínica de PTB (usando sintomas, fatores de risco e Raios-X). O custo efetividade foi expresso por: a) custo por correto caso diagnosticado de Tuberculose; b) custo por correto caso diagnosticado de Tuberculose e tratado incluindo tratamento de casos falsamente diagnosticados; c) custo por casos incorretamente diagnosticados e não tratados. Resultados: Prevalência de PTB foi 46,2% (128/277); em HIV soropositivo (HIV+) foi de 54% (40/74). Em pacientes com baciloscopias negativas foi de 28,4% (43/151) e nos grupos com probabilidades pré-teste alta, intermediária e baixa foi de 67,4% (31/46); 24% (6/25) e 7,5% (6/80). A sensibilidade e a especificidade do PCR dot-blot foi 74% (CI 95%; 66,1%-81,2%) e 85% (CI 95%; 78,8%-90,3%); do PCR-AG foi 43% (CI 95%; 34,5%-51,6%) e 76% (CI 95%; 69,2%-82,8%), respectivamente. Sensibilidades do PCR dot-blot (72% vs 75%; p=0,46) e PCR-AG (42% vs 43%; p=0,54) foi similar para HIV+ and HIV seronegativo (HIV-). Em relação ao efeito da suspeita clínica no desempenho do PCR em pacientes com PTB e com a baciloscopia negativa, o PCR dot-blot combinado com alta probabilidade pré-teste de TB mostrou uma sensibilidade, Valor Preditivo Negativo (VPN) e Razão de Verossimilhança negativa (RV-) de 93%, 96% e 0,1, respectivamente. Usando a estratégia de associar ZN a Cultura, a PCR-AG e PCR dot-blot. A ZN associada à Cultura mostrou o melhor desempenho com sensibilidade de 94% e VPN de 99%, e RV- de 0,07, seguida da ZN associado ao PCR dot-blot com sensibilidade de 90%, com VPN de 99% e uma RV- de 0,12. Não houve diferença significativa no desempenho do PCR em relação ao status de HIV. Na análise de custo-efetividade os custos por correto caso diagnosticado de Tuberculose foram U$1.462,00 , U$1.296,00 e U$1.136,00; os custos por correto caso diagnosticado de Tuberculose e tratado, incluindo tratamento de casos falsamente diagnosticados, foram de US$1.608,00 para a estratégia do ZN associado ao PCR-dotblot e de US$2.359,00 para a estratégia de ZN associado a Cultura. Os custos por casos não diagnosticados que retornam aos serviços de saúde foram de US$3.735,00 para a estratégia de ZN associado ao PCR-dot-blot e de US$2.329,00 para a estratégia de ZN associada à Cultura. Conclusão: Este estudo mostra que as técnicas de PCR in house podem oferecer uma melhora para o diagnóstico de exclusão de TB em pacientes com suspeita de TB atendidos em hospitais com alta prevalência de TB e HIV. / Objective: To evaluate the performance and cost-effectiveness of two in house PCR (Polymerase Chain Reaction) techniques: PCR dot-blot methodology (PCR dot-blot) and PCR agarose gel electrophoresis (PCR-AG) for the diagnosis of Pulmonary Tuberculosis (PTB) in patients with or without HIV. Methods: A prospective study was conducted (from May 2003 to May 2004) in a TB/HIV reference hospital. First sputum from 277 PTB patients suspects was tested by Ziehl-Neelsen direct microscopy staining (ZN), culture and in house PCR assays (PCR dot-blot and PCR-AG). The accuracy of tests was evaluated in according to HIV status, previous treatment and the estimative of pretest probability (PP) of PTB performed by chest physicians. Gold standard was the culture positive combined with the definition of clinical PTB (based on symptoms, risk factors and chest X- Ray). The cost effectiveness was expressed as: a) cost per correctly diagnosed case of PTB; b) cost per case correctly diagnosed and treated, including treatment of falsely diagnosed cases; c) cost per case incorrectly diagnosed and non treated. Results: The prevalence of PTB was 46% (128/277); in HIV Seropositive (HIV+) was 54% (40/74). In patients ZN negative was 28.% (43/151) and in the groups with high, intermediary and low PP was 67.4% (31/46); 24% (6/25) and 7.5% (6/80). The Sensitivity and Specificity of PCR dot-blot were 74% (CI 95%; 66.1%-81.2%) and 85% (CI 95%; 78.8%-90.3%); of PCR-AG were 43% (CI 95%; 34.5%-51.6%) and 76% (CI 95%; 69.2%-82.8%), respectively. Sensitivities of PCR dot-blot (72% vs 75%; p=0.46) and PCR-AG (42% vs 43%; p=0.54) were similar for HIV+ and HIV Seronegative (HIV-). In relation to the effect of clinical suspicion on the performance of PCR in patients with PTB and ZN negative, the PCR dot-blot associate to high pretest probability of PTB showed sensitivity, Negative Predictive Value (NPV) and negative likelihood ratio (LR-) of 93%, 96% and 0.1, respectively. Using the strategy of associate ZN with Culture and PCR methods (PCR-AG and PCR dot-blot), the ZN plus Culture had the highest performance: Sensitivity of 94%, VPN of 99% and LR- of 0.07. ZN plus PCR dot-blot also had a good performance with sensitivity of 90%, VPN of 99% and LR- of 0.12.There was not statistical difference on the performance of PCR in relation to HIV status. Costs per correctly diagnosed case were U$1,462, U$1,296 and U$1,136 for ZN plus culture, ZN plus PCR-AG and ZN plus PCR dot-blot, respectively. The cost per case correctly diagnosed and treated, including treatment of falsely diagnosed cases, was US$1,608 for ZN plus PCR dot-blot and US$2,359 for ZN plus culture. Cost of the return of all false negatives to health service was US$3,735 for ZN plus PCR dot-blot and US$2,329 for ZN plus Culture. Conclusion: This study shows that in house PCR may offer an improvement for ruling out TB diagnosis for PTB suspects assisted at hospitals with a high prevalence of TB and HIV.

A angiostrongilíase abdominal (AA) é uma doença causada pelo nematódeo Angiostrongylus costaricensis, tendo como hospedeiros definitivos roedores silvestres e hospedeiros intermediários moluscos terrestres. No homem, hospedeiro acidental, pode causar infartos intestinais e pseudotumorações, que podem complicar com peritonite e sepse. O diagnóstico definitivo é realizado pelo estudo histopatológico de peças cirúrgicas, ao serem identificadas estruturas parasitárias como vermes, ovos ou larvas. Este processo demanda tempo e experiência do patologista. Até o presente momento não existe tratamento disponível contra o parasito ou para evitar as complicações, apesar de várias tentativas realizadas com o uso de antiparasitários. O presente estudo teve dois objetivos: 1. Testar a reação em cadeia da polimerase (PCR) em bloco parafinado para o diagnóstico de angiostrongilíase abdominal em seres humanos; e 2. Avaliar o efeito da enoxaparina na prevenção de complicações isquêmicas intestinais em camundongos com AA. Para a técnica da PCR utilizamos iniciadores de DNA do Angiostrongylus cantonensis. Blocos parafinados de 4 grupos foram divididos em: (1) casos confirmados (n=20), onde haviam estruturas parasitárias; (2) casos suspeitos (n=20), sendo alvos os granulomas e infiltrado eosinofílico; (3) controle negativo (n=3), proveniente de pacientes operados por adenocarcinomas; e (4) controle de especificidade (n=7), outras parasitoses, representados por estrongiloidíase, enterobíase, ascaridíase e esquistossomose. Para avaliar do tratamento foram utilizados 24 camundongos Swiss infectados com Angiostrongylus costaricensis (10L3/animal), sendo 12 tratados com enoxaparina subcutânea (40mg/kg/dia) e 12 com água destilada (placebo) por 50 dias. Os resultados mostraram que a sensibilidade da PCR foi de 55%, a especificidade de 100% e valor preditivo positivo de 100% para confirmaçãoo da AA. O tratamento dos camundongos com enoxaparina não mostrou diferença com o grupo placebo, em relação a prevenção das lesões tissulares e óbito. Concluindo, a PCR pode tornar-se uma ferramenta promissora para auxiliar na definição diagnóstica da AA, em especial quando o patologista não está familiarizado com esta doença. A enoxaparina na dose profilática não preveniu as lesões e os óbitos causados pelo parasito. / Abdominal angiostrongyliasis (AA) is a disease caused by the nematode Angiostrongylus costaricensis. The parasite has wild rodents as definitive hosts and molusks as intermediate hosts. Incidental contamination in men can provoke bowel infarction and pseudotumoral lesions, clinically manifested as acute abdomen. The diagnosis has been confirmed after histopathological examination of surgical specimens, with the identification of parasitic structures such as worms, eggs and larvae. Diagnostic workup demands high expertise from the pathologist. Hitherto there is no available treatment either for parasite eradication or avoidance of complications, despite several studies addressing the effect of anti-parasitic drugs. The current study aimed: 1. To test polimerase chain reaction (PCR) in formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue for the diagnosis of AA in humans; and 2. To assess the effect of enoxaparin in preventing intestinal ischemic complications in mice with AA. For PCR we used DNA primers from Angiostrongylus cantonensis. Four groups of FFPE intestinal tissue from surgically treated patients were tested with PCR: (1) confirmed cases (n = 20), in which AC structures were present in the target tissue; (2) presumptive cases (n = 20), containing eosinophilic infiltrates and/or granulomatous reaction in the absence of AC structures; (3) negative controls (n = 3), consisting of normal colonic tissue surrounding resected colonic adenocarcinoma; and (4) tissue affected by other parasitosis (n = 7), including strongiloidiasis, ascaridiasis, schistosomiasis, and enterobiasis. In the study with enoxaparin, 24 mice infected with Angiostrongylus costaricensis (10L3/animal) were allocated to receive subcutaneous enoxaparin (40mg/kg/day, n = 12) or sterile water (n = 12) for 50 days. Regarding results, PCR showed sensitivity of 55%, specificity of 100% and positive predictive value of 100% in confirming AA. Treatment with enoxaparin was not superior to placebo in preventing AA related complications or death. In conclusion, the PCR technique might be a promising tool to be used in the diagnostic workup of AA, particularly in the setting of non-experienced pathologists. Enoxaparin in prophylactic doses did not prevent lesions or death in mice suffering from AA.

Orientadores: Sandra Regina Muchinechi Fernandes, Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T16:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sachetto_Zoraida_M.pdf: 4729475 bytes, checksum: 274c907aab485d19facfe60e402f092a (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Poliarterite nodosa (PAN) é uma vasculite sistêmica necrosante de pequenas e médias artérias e a poliangiíte microscópica de pequenos vasos (arteríolas, vênulas e capilares) caracterizada por glomerulonefrite necrosante pauci-imune rapidamente progressiva e envolvimento pulmonar que estão ausente na PAN. Uma possível relação etiológica entre as vasculites sistêmicas e infecção viral tem sido considerada. O vírus da hepatite B está comprovadamente associado à etiopatogênese em alguns casos de PANe outros agentes virais são também apontados como prováveis desencadeadores de PAN, tais como os vírus HIV, HTLV1, citomegalovírus e parvovirus B19 (B19). Na PAN existem relatos de casos comprovando a presença concomitante de atividade da doença e testes sorológicos IgM positivos para o B19 e pela presença do DNA do B19 no soro, medula óssea e músculo em um paciente, pesquisado por reação em cadeia de polimerase (PCR). Não há investigação referente à pesquisa de DNA do parvovírus B19 em amostras teciduais de PANe poliangiíte microscópica. A pesquisa desta associação se toma importante na abordagem terapêutica destas doenças pela necessidade de corticosteróides e imunossupressores podendo agravar as manifestações de uma parvovirose associada. Nosso objetivo foi pesquisar a presença do DNA viral do B19 em tecidos fixados em parafina e com evidência histopatológica de vasculite em pacientes com PANe poliangiíte microscópica e se há relação com as manifestações clínicas, índices de atividade (BVAS) e gravidade (FFS) da doença. Foram investigados todos os pacientes com diagnóstico histopatológico de PAN ou poliangiíte microscópica, com blocos de parafina disponíveis no Departamento de Anatomia Patológica e acompanhados no Ambulatório de Vasculites do Hospital das Clínicas/Disciplina de Reumatologia da FCM!Unicamp no período de 1985 a 2003. A investigação foi feita pela pesquisa da presença de seqüência de ácidos nucléicos do B19 por PCR. Foram encontrados 21 pacientes com amostras teciduais e blocos de parafina disponíveis para estudo. Destas 21 amostras, 17 apresentaram DNA de boa qualidade para realização do PCR para o B19. Dez com diagnóstico de PAN (média da idade 29,3:!::15,1; M:F=I,5:1) e sete de poliangiíte microscópica (média da idade 41,9 :!::18,5; M:F=1:1,3). A média do BVAS, no início da doença, foi de 15,7 :!:: 7,7 com mínimo de 5 e máximo de 26 para PANe de 20,7 :f: 7,1 com mínimo de 13 e máximo de 31 para poliangiíte microscópica. Na PAN, FFS=1 em 60% e FFS=O em 40% dos casos, com média de 0,6 :f: 0,5. Na poliangiíte microscópica FFS=2 em 14%, FFS=1 em 43% e FFS=O também em 43% dos casos, com média de 0,7 :f:0,8. . I Nenhum dos tecidos avaliados apresentou positividade para o DNA do B19. Este resultado sugere que o B19, provavelmente, não está associado a etiopatogenia da PAN idiopática e da poliangiíte microscópica / Abstract: Polyarteritis nodosa (PAN) is a well-known form of sistemic necrotizing vasculitis. lndividualized ftom PAN, microscopic polyangiitis (MPA) is a systemic vasculitis of small-sized vessels (arterioles, venules or capillaries) characterized by the presence of rapidly progressive glomerulonephritis and pulmonary involvement, absent in PAN. Nowadays, a role of viral infections in primary systemic vasculitis has been considered. The hepatitis B virus is associated with the ethiopathogenesis ofsome cases ofPAN. HIV, HTLVl, CMV and parvovirus B19 (BI9) may also be found, eventually, in some patients with PAN. Evidence of the B19 involvement in primary systemic vasculitis is based on some anedoctal reports of cases of Wegener' s granulomatosis and PAN and studies with giant-cell arteritis. Regarding in PAN, there are few reports showing an active disease and positive serological tests for the B19. B19DNA is the serum, marrow bone and muscle was found in one patient with PAN. To our knowledgment, there is no research related to B19DNA in tissue samples of patients with PAN and MPA Our objective was to identify the presence ofB19 DNA in fixed, paraffin-embedded tissue samples obtained ftom patients with PAN and MPA We investigated the patients with histological diagnosis of PAN or MPA who were attended at the university hospital ftom 1985 to 2003. AlI fixed, paraffin-embedded tissue samples available, with evidence of vasculitis, were screened for B19 DNA using the polymerase chain reaction (PCR) method. ,Among all patients, we found 17 tissue samples available for the study. Ten had PAN (mea nage 29.3 :t: 15.1yrs.; M:F sex ratio 1.5:1)and seven had microscopicpolyangiitis (mean age 41.9 :t: 18.5 yrs.; M:F sex ratio 1:1,3). AlI of the patients investigatedwere negative for parvovirus B19 DNA .J These results suggest that the parvovirus B19 is not involved in the pathogenesis of idiopathic PAN and MPA / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:02:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fioravanti_MariaTeresa_M.pdf: 22008902 bytes, checksum: 9c572a1942530716413f488825262fea (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A infecção ativa por citomegalovírus humano (HCMV) aumenta a morbidade e mortalidade de pacientes imunocomprometidos. Em transplantados renais, sabe-se que 70% a 90% dos receptores apresentam infecção ativa por HCMV, em períodos que variam de 1 a 4 meses pós-transplante e isso tem uma influência negativa na sobrevida do enxerto. A natureza variável da doença por HCMV, neste grupo de pacientes, faz com que seja essencial o diagnóstico precoce desta infecção, para não confundir suas manifestações com outros eventos do período pós-transplante. Em particular, os quadros de disfunção renal devido à infecção ativa por HCMV, que se confundem com rejeição, podem ser erroneamente tratados, resultando em imunossupressão adicional, colocando em risco a vida do paciente. O objetivo principal do presente trabalho foi estudar, prospectivamente, um grupo de transplantados renais em relação à infecção ativa pelo HCMV, comparando as técnicas "Nested"-PCR e Antigenemia para monitorização da infecção ativa e verificar a soroprevalência da infecção por HCMV no grupo análisado. Foram monitorados, prospectivamente, 48 transplantados renais em seguimento no Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas, (UNICAMP), no período de junho de 1999 a novembro de 2000. O material para análise foi obtido no pré-transplante e por um período de quatro meses, após o transplante. Na população estudada, observou-se uma soroprevalência de 89% o que confirma a alta prevalência da infecção por HCMV em nosso meio. Como resultados globais observou-se que a infecção ativa (replicação viral) por HCMV ocorreu em 34 (71%) dos pacientes estudados. Em 18 transplantados, só a "Nested"-PCR foi capaz de identificar infecção ativa. Quatorze pacientes que não apresentaram evidências de infecção ativa por nenhum dos testes, não tiveram problemas clínicos. Durante a monitorização 15 pacientes (31%) apresentaram manifestações clínicas sugestivas de serem secundárias à replicação viral (provável doença por HCMV). Entre os pacientes sintomáticos, somente 4 apresentaram infecção primária. A técnica da "Nested"-PCR foi positiva em 100% dos casos sintomáticos e a da Antigenemia foi positiva em 87% desses. Entre os pacientes com episódios de rejeição aguda 85% apresentaram infecção ativa e em 54% ocorreram manifestações clínicas. Concluímos que as técnicas da "Nested"-PCR e da Antigenemia são sensíveis, rápidas e precoces no diagnóstico da infecção ativa por HCMV e portanto adequadas para a monitorização da infecção e provável doença por HCMV em pacientes transplantados renais / Abstract: Human Cytomegalovirus (HCMV) active infection remains a significant cause of morbidity and mortality of immunocompromised patients. In the case of renal transplant recipients, it is known that 70% to 90% of them have HCMV active infection, which has a negative influence on graft survival, and that the highest risk period is between one to four months posttransplant. Early diagnosis of HCMV infection/disease and a correct differentiation from other opportunistic infections that occur during the posttransplant period are essential, considering that confusion between renal dysfunction caused by HCMV active infection and allograft rejection may lead to additional immunosuppressive therapy and life-threatening consequences to the patient. The present study was designed to follow prospectively 48 renal transplant recipients managed at the University Hospital of Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) and evaluate the usefulness of the HCMV "Nested" -PCR technique and pp65 Antigenemia assays in monitoring HCMV active infection. A further aim of the study was to establish the seroprevalence of HCMV infection in 28 donors and in the 48 recipients and verify the clinic impact caused by HCMV active infection and disease. Among 76 evaluated people, 68 (89,5%) had anti-CMV IgG, indicating that they were infected with CMV before transplantation. Considering the incidence of active HCMV infection, of 48 patients enrolled in the study, 34 (70,8%) experienced active HCMV infection and 18 of these 34 patients were only HCMV-PCR-positive. During the follow-up period, a total of 15 (31,3%) patients developed clinical disease with evocative symptoms. Thirteen (81,3%) of 16 HCMV-antigenemia-positive patients had HCMV disease, and 15 (44,1%) of 34 HCMV-PCR-positive patients developed HCMV disease. Our results indicated that PCR is more sensitive than Antigenemia; however, both are rapid and early assays for detection of cytomegalovirus infection / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Marcos Antonio Machado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ColettaFilho_HelvecioDella_D.pdf: 4856519 bytes, checksum: 3aeea812ba8eae7d60b99dd3d637e116 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientadores: Darcy F. Nouer, Enilson Antonio Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:21:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sallum_EmersonJose_M.pdf: 2070160 bytes, checksum: bfdeec8627b10960faf43bc7eaa8d058 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos e microbiológicos associados à presença de anéis e braquetes ortodônticos em pacientes submetidos a tratamento na clínica de Ortodontia da FOP/UNICAMP. Foram selecionados 10 pacientes que preenchiam os critérios de inclusão: presença de sinais clínicos de inflamação gengival, idade entre 12 e 20 anos e em fase final de remoção do aparelho ortodôntico. Os dentes selecionados para a pesquisa foram 16-11-26. Foram avaliados em dois períodos, constituindo os grupos: teste: durante a vigência da inflamação gengival; controle: os mesmos dentes receberam profilaxia profissional após a retirada do aparelho ortodôntico e foram reavaliados trinta dias após. Os parâmetros clínicos utilizados foram o índice de placa, índice de sangramento gengival e profundidade de sondagem. O exame microbiológico incluiu a técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). As bactérias pesquisadas foram: Porphyromonas gingivalis (Pg), Bacteroides forsytus (Bf), Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa), Prevotela intermedia (Pi), Prevotela nigrescens (Pn). Os dados foram submetidos à análise estatística utilizando o teste McNemar. Observou-se redução significativa na profundidade de sondagem, no índice de placa e sangramento à sondagem. A inflamação gengival estava associada à presença de periodontopatógenos demonstrada pelo PCR. A remoção do aparelho ortodôntico fixo associada à profilaxia resultou em significativa diminuição na freqüência de detecção do Aa e Bf Dentro dos limites deste estudo, conclui-se que as bactérias associadas à inflamação gengival durante o tratamento ortodôntico podem ser reduzidas após a remoção do aparelho e profilaxia profissional. Estes achados reforçam a importância do controle de placa em pacientes portadores de aparelhos ortodônticos fixos para diminuir o risco de doença periodontal / Abstract: The goal of the present study was to evaluate the clinical and microbiological aspects associated with orthodontic appliances in patients of the Orthodontic Graduate Clinic of the School of Dentistry at Piracicaba. The 10 patients included in the study were at the end of the orthodontic treatment (phase of removal of the appliance) and were selected according to the inclusion criteria: clinical signs of gingival inflammation and age between 12 and 20 years. The evaluation was performed in the teeth 16-11-26 in two periods: test: during the course of gingival inflammation, control: the same teeth submitted to a professional prophylaxis and 30 days after the removal of the appliance. The clinical parameters evaluated were plaque index, gingival bleeding index, probing depth and the microbiological evaluation with the polymerase chain reaction technique (PCR) to detect the presence of the following bactéria: Porphyromonas gingivalis (Pg), Bacteroides forsytus (Bf), Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa), Prevotela intermedia (Pi), Prevotela nigrescens (Pn). The data were analyzed by the McNemar testo A statistically significant reduction in probing depth, plaque and gingival bleeding index was observed. It has been shown the presence of putative periodontal pathogens associated with the gingival inflammation during the orthodontic treatment. The retum to the periodontal health achieved by a professional prophylaxis and the removal of the appliance resulted in a statistically significant reduction in the detection of Aa and Bf"It can be concluded that the periodontopathic bacteria associated with gingival inflammation during orthodontic treatment can be significantly reduced by the removal of the appliance associated to a professional prophylaxis. The importance of aplaque control regimen during orthodontic treatment is reinforced by the findings ofthe present study / Mestrado / Mestre em Ortodontia

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3672_1.pdf: 2497903 bytes, checksum: cc3087d67434a06af59f087e20d56fc9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Papilomavírus bovinos (BPVs), vírus da família Papillomaviridae, acometem o gado com a indução do aparecimento de verrugas, cânceres de bexiga e do trato digestório, causando importantes prejuízos à economia pecuarista. Dez tipos de BPV já foram bem caracterizados (BPV-1 a 10). O presente trabalho teve como foco detectar seqüências do genoma de BPVs em amostras de sangue de animais de uma fazenda leiteira em Pernambuco e nas culturas de linfócitos correspondentes, visando investigar a presença dos tipos virais, mais especificamente 1, 2 e 4, verificar a presença simultânea de mais de um tipo viral e o eventual tipo mais freqüente. Para o diagnóstico viral, utilizou-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), empregando-se iniciadores específicos para os tipos 1, 2 e 4, direcionados aos genes L1, L2 e E7, respectivamente. A confirmação dos produtos amplificados foi realizada com digestão enzimática e posterior seqüenciamento. Foram detectadas seqüências virais em todos os animais trabalhados, independente da presença de papilomas aparentes. Os tipos 1 e 2 foram detectados diretamente de amostras de sangue e em cultura celular de linfócitos, enquanto que o tipo 4 não foi detectado em nenhuma das amostras. Os resultados positivos puderam ser confirmados por digestão enzimática. A presença viral em sangue corrobora trabalhos descritos na literatura que discutem a disseminação do BPV pelo sangue, enquanto que a detecção em cultura indica manutenção viral neste sistema. A partir do seqüenciamento de algumas amostras positivas para BPV-1, sugeriu-se uma nova variante viral, quando comparadas às seqüências depositadas no GenBank. Faz-se necessário a ampliação deste estudo, abordando-se outras fazendas importantes do Estado. Em conclusão, os resultados obtidos neste trabalho geram maiores conhecimentos acerca de BPV em Pernambuco, mais especificamente no município de Ribeirão

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T20:01:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molina_RosanaMara_M.pdf: 4754222 bytes, checksum: 3779fdcee94bc5b1512119ee03263569 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O diagnóstico da infecção pelo HIV é usualmente estabelecido por ensaios sorológicos, que identificam anticorpos específicos contra o HIV. Entretanto, o recém-nato pode receber os anticorpos matemos da classe IgG, durante a gestação, no momento do parto, ou após o nascimento e com isso apresentar resultados falsos positivos até cerca de 18 meses de vida. Há vários outros métodos para o diagnóstico do HIV -1 em crianças, mas o que está sendo indicado atualmente é a reação em cadeia da polimerase (PCR) , por ser um método rápido, de alta sensibilidade e especificidade, que podem ser potencializadas com a realização de uma segunda reação de amplificação (''Nested-PCR''). A PCR detecta fragmentos-alvo do genoma viral. Com base na necessidade de um diagnóstico precoce do HIV-1, o presente trabalho teve como objetivo a padronização da técnica da ''Nested-PCR'', com utilização de "primers" que flanqueiam 4 regiões virais conservadas do HIV -1 (genes gag, env - 2 regiões e pol), para detecção do HIV-I, e aplicação do método em 41 crianças (com no mínimo 2 e no máximo 4 coletas de amostragem de sangue periférico) em seguimento no Hospital de Clínicas da UNICAMP, com suspeita de infecção. Os dados permitiram um estudo comparativo entre o diagnóstico feito pela ''Nested-PCR'' com os resultados obtidos pelo método soro lógico imunoenzimático ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), apesar das crianças apresentarem idade inferior a 18 meses, não tendo portanto o ELISA como teste padrão-ouro. Com base nos resultados da ''Nested-PCR'' foi calculada uma proporção de crianças infectadas pelo HIV que estão em seguimento no ambulatório de Imunodeficiência Pediátrica e que foram incluídas neste trabalho. Foi analisada também, a influência do uso da zidovudina (AZT), do tipo de parto (cesárea ou normal) e do aleitamento materno, já que esses fatores são influentes para o aumento da transmissão perinatal do HIV -1. Os resultados positivos obtidos pela ''Nested-PCR'' para a l' coleta de sangue periférico das crianças em estudo foi de 26,32%; para a 1a coleta, manteve-se o mesmo valor, e para a 3a coleta, 26,67%. Os resultados positivos pelo ELISA, para as 1a, 2a e 3a coletas foram respectivamente 86,84%; 78,95% e 56,67%. A proporção de crianças infectadas pelo HIV na população estudada foi de 29,3%. A análise da relação do uso profilático do AZT no período gestacional apresentou um "p", (obtido pelo teste de Fisher), de 0,05 para as (1a e 2a coletas e 0,014 para a 3a coleta; esses resultados sugerem que houve significância entre o uso do AZT (por parte materna) e a redução da transmissão vertical do HIV-l. Em relação ao aleitamento materno, os valores de "p" foram: 0,006 (1a e 2a coletas) e 0,016 ( 3a coleta) sugerindo também, associação com a redução da transmissão vertical do HIV-1, nesta população. A análise das crianças as quais as mães fizeram uso dos fatores associados à redução da infecção pelo HIV via perinatal (uso do AZT durante a gestação; parto do tipo cesárea e não aleitamento materno) mostrou um percentual de 20% de positividade à infecção pelo HIV-1 pela "Nested-PCR"; já nas crianças nascidas de mães que não fizeram uso de tais fatores, esse percentual elevou-se para 75%. Os resultados obtidos pela "Nested-PCR" foram confirmados em algumas amostras, através da hibridação e do método de seqüenciamento direto de seqüências gênicas do HIV -1. Os resultados obtidos neste estudo sugeriram que a "Nested-PCR" foi um método rápido e precoce para o diagnóstico da infecção pelo HIV -1 via perinatal. A utilização dos fatores associados à redução da infecção pelo HIV via perinatal indicadas às gestantes infectadas sugeriram influência na redução da transmissão perinatal do vírus na população estudada. / Abstract: The diagnosis of the HIV infection is usually set by serologic assays that identify specific antibodies against the HIY. However, the newborn can get the IgG c1ass maternal antibodies, during the pregnancy, at the delivery time, or after berth, and thus, can present false-positive results up to about 18 months old. There are several other methods to the diagnosis of the HIV -1 in children, but, nowadays, PCR (polymerase chain reaction) is the one that is being suggested because it is a quick method with high sensitivity and specificity that can be risen by performing a 2nd amplification reaction (Nested PCR). The PCR detects target fragments ofthe viral genome. Based on the necessity of an early diagnosis ofthe HIV-1, the present study had as goal the standardization of the Nested-PCR technique with the utilization of the primers that flank 4 preserved viral areas of the HIV -1 (gens gag, env - 2 areas and paI) to the detection of the HIV -1 and the application of the method in 41 infants (with at least 2 collects and at most 4 collects of the peripheral blood sample) followed at Hospital de Clínicas da UNICAMP, with suspicion of infection. The data allowed a comparative study between the diagnosis made by the ''Nested-PCR'' and the diagnosis obtained trom the serologic immune enzymatic method, ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), in spite ofthe children had been under 18 months old, they did not have the ELISA as a gold-standard test. Based on the results of the Nested PCR, a rate of the HIV infected children who are being followed at the ambulatory de Immunodeficiency Pediatric and that were inc1uded in this work was evaluated. The influence of the use of Zidovudine (AZT), the type of the delivery (caesarian or normal), and the maternal breastfeeding were also analyzed since these factors are known to be influent to augment the HIV -1 perinatal transmission. The positive results acquired by the Nested-PCR to the 1st peripheral blood collect of the children under study were 26,32%; to the 2nd collect, the same value was maintained, and to the 3rd collect, 26,67%. The positive results by ELISA, to the 1st, 2nd, and 3rd collects, were 86,84%, 78,95%, and 56,67% respectively. The rate of the HIV infected children in the studied population was 29,3%. The analyzes of the association of the prophylactic use of AZT during the pregnancy period presented 0,05% 'p' (obtained by the Fisher's test) to the 1st and 2nd collects, and 0,014 to the 3rd collect. These results suggest that there was significance between the use of AZT (on the mother' s side) and a reduction of the HIV -1 vertical transmission. Regarding the maternal breastfeeding the values of 'p' were: 0,006 (1st and 2nd collects) and 0,016 (3rd collect), also suggesting association with the reduction of the HIV-1 vertical transmission in this population. The analysis from children whose mothers made use ofthe factors related to the reduction ofthe HIV infection via perinatal (use of AZT, during the pregnancy; cesarian delivery, and non maternal breastfeeding), showed a 20% percentage ofthe positiveness to the HIV-1 infection by Nested-PCR; yet in the children bom from mothers that did not made any use of such factors, this percentage increased to 75%. The results obtained by the "Nested-PCR" were confirmed in some of the samples, through the hybridization and the direct sequencing method of the HIV-1 genetics sequences. The results obtained in this study suggest that the Nested-PCR is really an early and quick method to the diagnosis to the HIV -1 infection via perinatal. The use of the factors related to the reduction of the perinatal HIV infection indicated to the infected pregnants suggested the influence in the reduction of the perinatal transmission of the virus in the studied population. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências

Orientadores: Fernando Lopes Gonçales Junior, Neiva Sellan Lopes Gonçales / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:42:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_Claudiada_M.pdf: 5366361 bytes, checksum: e07618e3f3502fa067dd078ba533e4fd (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A infecção pelo VHB em pacientes que não apresentam o antígeno de superficie do vírus da hepatite B (HBsAg) detectável pelos métodos usuais, é denominada de infecção oculta. Sua prevalência e significado clínico, não estão ainda, completamente esclarecidos. A proposta deste estudo foi o de investigar: a) a presença de infecção oculta pelo VHB em pacientes com infecção crônica pelo VHC; b) correlacionar a presença do DNA do VHB com fatores de riscos para aquisição da HVB e HVC ; c) correlacionar a presença do DNA do VHB com as alterações histológicas e hepáticas nos pacientes co- infectados pelo VHC e com a resposta ao tratamento da hepatite C. Foi utilizada a Reação em Cadeia da Polimerase para pesquisar o DNA do VHB em amostras de soro de 256 indivíduosHBsAg negativo e anti-HBc positivo: 150 eram doadores de sangue (100 eram anti-HBc isolado e 50 eram anti-HBc / anti-HBs positivo) e 106 eram pacientes com infecção crônica pelo vírus da hepatite C (HCV) (50 eram anti-HBc isolado e 56 eram anti-HBc / anti-HBs positivo). A prevalência da infecção oculta pelo VHB variou de 4% (6/150) nos doadores de sangue a 24% (12/50) nos pacientes com infecção crônica pelo VHC (anti-HBs negativo). A prevalência da infecção oculta pelo VHB em todos os pacientes co-infectados com o YHC foi de 14.2% (15/106). Foi observado que nos pacientes com infecção oculta pelo VHB, o anticorpo contra o antígeno de superficie do VHB (anti-HBs) não foi capaz de proteger os pacientes co-infectados pelo VHC (5,4, 3/56). Não houve correlação entre os diferentes genótipos do VHC e a presença de infecção oculta pelo VHB nem com o grau histológico de lesão hepática. A infecção oculta pelo VHB não influenciou na resposta ao interferon em pacientes com infecção crônica pelo VHC / Abstract: HBV infections in patients who lack levels of hepatitis B surface antigen (HBsAg) are called occult infections. Their prevalence and clinical significance are not yet fully understood. The purpose of this study was to investigate: a) the prevalence ofHBV occult infection in patients with chronic HCV infection; b) to correlate the presence ofHBV DNA with risk factor to acquire HBV and HCV infection; c) to correlate the presence of HBV DNA in serum with histopathologic al terations and the response to interferon therapy in patients with chronic HCV infection. We used the polymerase chain reaction to search for HBV DNA in serum samples from 256 HBsAg negative and anti-HBc positives subjects: 150 were blood donors (100 were anti-HBc alone and 50 were anti-HBc / anti-HBs positive), 106 were patients with chronic hepatitis C virus (HCV) infection (50 were anti-HBc alone and 56 were anti-HBc / anti-HBs positive). The prevalence of HBV occult infection ranged from 4% (6/150) in blood donors to 24% (12/50) in patients with chronic HCV infection anti-HBc / anti-HBs negative. The prevalence of HBV occult in the totality of patients co-Ínfected with HCV was 14.2% (15/106). It was observed that in our patients with HBV occult infection the antibodies to anti-HBs was not able to protect the patients co-Ínfected with HCV (5.4, 3/56). There was not correlation between different genotypes and the presence HBV occult infection neither with the lesion histological grade. The HBV occult infection did not influence in the response to interferon therapy in the patients with chronic HCV infection / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas