Thesis (M.Sc.). / Written for the Dept. of Biochemistry. Title from title page of PDF (viewed 2008/01/15). Includes bibliographical references.

Orientadores: Gustavo Antonio de Souza, Sophie Françoise Mauricette Derchain / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T18:43:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramalho_SusanaOliveiraBotelho_M.pdf: 1500372 bytes, checksum: 04f5c0de427c8917a798d6fef8b46619 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: O câncer da mama é a segunda neoplasia mais frequente no mundo. Sem considerar os tumores de pele não melanoma, é a neoplasia mais incidente no sexo feminino. No Brasil, a estimativa do câncer da mama para o ano de 2012 é de 52.608 novos casos. Os cânceres da mama que não expressam receptores de estrógeno (RE) e progesterona (RP) apresentam uma sobrevida pior comparada aos cânceres da mama que expressam esses receptores. O Human Epidermal growth fator Receptor 2 (HER-2) é uma oncoproteína cuja hiperexpressão ocorre em aproximadamente 20% dos carcinomas da mama e associa-se a um fenótipo mais agressivo. Nos carcinomas da mama RE e RP negativos, a expressão do HER-2 identifica dois grupos: os carcinomas da mama que hiperexpressam o HER-2, chamados duplo negativo com HER-2 hiperexpressado, e os carcinomas da mama que não hiperexpressam o HER-2, chamados triplo negativos. Objetivo: Avaliar a relação entre os fatores clínicos e patológicos e a sobrevida em pacientes com carcinomas da mama duplo negativo HER-2 hiperexpressado e triplo negativo. Sujeitos e Métodos: Foram selecionadas as pacientes com carcinoma invasivo da mama diagnosticadas e tratadas no Hospital da Mulher Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti - Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp), entre abril de 2004 e outubro de 2008, seguidas até outubro de 2010. A expressão dos RE e RP foi avaliada por imunoistoquímica (IIQ) em microarranjo de tecidos (TMA). A expressão de HER-2 foi avaliada por IIQ e Hibridização Fluorescente in situ (FISH). A expressão do HER-2 foi classificada pela IIQ exclusiva nos casos HER-2 escore 0 ou 1+ e 3+. Nos casos em que a IIQ mostrou-se indeterminada (2+) foi realizado FISH. Assim, foram classificados como HER-2 negativos os casos escore 0 e 1+, e os casos escore 2+ com FISH negativo. Foram considerados HER-2 positivos os casos escore 3+ e os casos escore 2+ com FISH positivo. Foram incluídas no estudo 161 pacientes, sendo 58 duplo negativo HER-2 hiperexpressado (RE e RP negativos e HER-2 positivo) e 103 triplo negativo (RE, RP e HER-2 negativos). Foram avaliados: idade ao diagnóstico, estádio, grau nuclear, grau histológico, presença de invasão vascular e tipo histológico. Também foi avaliada utilização de quimioterapia adjuvante e neoadjuvante baseada em antraciclina, e se foi associado taxano. Foram calculados os odds ratios (OR) brutos e os odds ratios ajustados com os respectivos intervalos de confiança (IC95%) para as características clínicas e patológicas, comparando carcinomas da mama duplo negativo HER-2 hiperexpressado e triplo negativo. Foram calculados os Hazard Ratios (HR) com os respectivos IC95% em relação à sobrevida geral, para as variáveis clínicas e patológicas. Resultados: Comparando as pacientes com carcinomas da mama duplo negativo HER-2 hiperexpressado e triplo negativo, observou se que as medianas da idade foram de 54 e 52, respectivamente. Não houve diferença na distribuição por idade em função da expressão do HER-2. Nesta casuística, mais de 80% das pacientes apresentaram a doença em estádios II e III. Houve o predomínio do grau histológico III e do grau nuclear 3 em ambos os grupos. As pacientes com carcinomas da mama duplo negativo HER-2 hiperexpressado apresentaram invasão vascular em 27,5% dos casos quando comparadas com 14,5% nas pacientes triplo negativo (p= 0,06). Nas pacientes com carcinoma da mama triplo negativo observou-se 11% de tipo histológicos mais indiferenciados. Em relação ao local das metástases, ambos os grupos tiveram um percentual maior que 50% de metástases viscerais. A mediana de seguimento foi de 36 meses (percentiles 25/75: 25/78 meses). A expressão do HER-2 não interferiu com a sobrevida. O estádio III e a utilização de antraciclina aumentaram significativamente o risco de morte pela doença (p<0,001 e p=0,007 respectivamente). A presença de invasão vascular não se relacionou com a sobrevida (p=0,05). A sobrevida das pacientes com estádios I-II foi significativamente maior do que daquelas com estádio III, tanto para carcinomas duplo negativo com HER-2 hiperexpressado (p<0,.0001) quanto para os triplo negativos (p=0,03). Não houve diferença na sobrevida das pacientes com carcinoma duplo negativo HER-2 hiperexpressado e carcinoma triplo negativo nos estádio I + II (p= 0,13) e estádios III (p= 0,34). Conclusão: Nesta casuística de 161 pacientes com carcinoma da mama RE e RP, independente da expressão do HER-2, houve um predomínio de estádios avançados e de tumores indiferenciados. A expressão do HER-2 não se associou com a sobrevida global. Apenas o estádio III e a utilização de antraciclina estiveram relacionados com maior probabilidade de óbito pela doença / Abstract: Introduction: Breast cancer is the second most common malignancy worldwide. Aside from non-melanoma skin cancers, breast cancer is the most common malignancy among women. In Brazil, approximately 52,608 new cases of breast cancer are predicted to occur in 2012. Breast cancers that do not express estrogen receptors (ER) and progesterone receptors (PR) have a worse survival rate, in comparison to breast cancers that express these receptors. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER2) is an oncoprotein that is overexpressed in approximately 20% of breast carcinomas and is associated with a more aggressive phenotype. In ER and PR receptor-negative breast carcinomas, HER2 expression identifies two groups: breast carcinomas that overexpress HER2, termed double negative HER2-overexpressing tumors and breast carcinomas that do not overexpress HER2, termed triple negative. Objective: To assess the relationship between clinical-pathological factors and survival in patients with double negative HER2-overexpressing and triple negative breast carcinomas. Subjects and Methods: Patients with invasive breast carcinoma diagnosed and treated in the Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti's Women' Hospital - Integrated Healthcare Center of the Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) were selected from April 2004 to October 2008, receiving follow-up care until October 2010. ER and PR expression was evaluated by immunohistochemistry (IHC) in tissue microarray (TMA). HER2 expression was evaluated by IHC and Fluorescent in situ Hybridization (FISH) analysis. HER2 expression was assessed exclusively by IHC in cases scored 0 or 1+ and 3+ HER2. If IHC test scored 2+ (equivocal), FISH analysis was performed. Thus, scores 0/1+, and 2+/FISH-negative were classified as HER2-negative. Score 3+, and score 2+/ FISH-positive cases were classified as HER2-positive. One hundred and sixty-one (161) patients were included in the study. Of these patients, 58 had double negative HER2-overexpressing (ER/PR-negative, HER2-positive) breast tumor and 103 had triple negative (ER-negative/PR-negative/HER2-negative) breast tumor. Age at the time of diagnosis, stage, nuclear grade, histologic grade, presence of vascular invasion and histologic type were evaluated. The use of adjuvant and neoadjuvant anthracycline-based chemotherapy was assessed and also whether this regimen was combined with taxane. The crude odds ratios (OR) and adjusted odds ratios with their respective confidence intervals (95%CI) for clinical and pathological characteristics were calculated, comparing double negative HER2-overexpressing breast carcinoma with triple negative breast carcinoma. The Hazard Ratio (HR) with the respective 95%CI in relation to overall survival was calculated for clinical and pathological variables. Results: Patients with double negative HER2-overexpressing breast tumors were compared to those with triple-negative breast tumors (median patient age: 54 and 52 years, respectively). There was no difference in age distribution according to HER2 expression. In this case study, more than 80% of patients had Stage II and III disease, with a predominance of histologic grade III and nuclear grade 3 in both groups. Patients bearing double negative HER2-overexpressing breast carcinomas had vascular invasion in 27.5% of cases compared to 14.5% of triple negative patients (p= 0.06). In patients with triple negative breast carcinoma, more undifferentiated histologic types were observed in 11% of cases. Regarding metastasis site, the incidence of visceral metastasis was higher than 50% in both groups. The median follow-up period was 36 months (percentiles 25/75: 25/78 months). HER2 expression did not interfere with patient survival. Stage III disease and the use of anthracycline significantly increased the risk of death from the disease (p<0.001 and p=0.007, respectively). The presence of vascular invasion was not related to survival (p=0.05). Patients with Stage I-II disease survived significantly longer than those with Stage III disease in both double negative HER2-overexpressing tumors (p<0.0001) and triple negative tumors (p=0.03). There was no difference in survival of patients with double negative HER2-overexpressing carcinomas and triple negative carcinomas in Stages I + II (p= 0.13) and Stages III (p= 0.34). Conclusion: In this case study of 161 patients with ER/PR-negative breast carcinoma, there was a predominance of advanced stages. Virtually 50% of the patients seen in this service presented with Stage III disease. Regardless of HER2 expression, undifferentiated tumors (histologic grade III and nuclear grade 3 predominated. It was observed that triple negative carcinomas had a higher proportion of special histologic types. Vascular invasion was slightly more frequent in double negative HER2-overexpressing carcinoma and was not associated with survival. HER2 expression was not associated with overall survival. Only Stage III and the use of anthracycline were related to a higher probability of death due to the disease / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestre em Ciências da Saúde

ErbB2/Neu overexpression is observed in 20--30% of human mammary carcinomas and correlates with poor prognosis. We have demonstrated that four ErbB2/Neu tyrosine autophosphorylation sites (YB, YC, YD and YE) are sufficient to mediate transforming signals in vitro and bind distinct adapter proteins, suggesting that transformation functions through distinct pathways. To study the role of each individual tyrosine autophosphorylation site in mammary tumourigenesis, we derived transgenic mice expressing mutant ErbB2/Neu receptors in the mammary gland. Recently, we showed that YB and YD female transgenic mice developed mammary tumours with differences in tumour latency, morphology, and metastatic potential. To further understand the role of the autophosphorylation sites, I characterized the YC and YE transgenic mouse models and showed that although, they exhibit similar phenotypes, they also differ in their latency, morphology and metastatic rate compared to the YB and YD transgenic mouse models. This suggests that recruitment of specific adaptor proteins has distinct biological effects on ErbB2/Neu-mediated mammary tumourigenesis.

Licentiatavhandling (sammanfattning) Linköping : Linköpings universitet, 2009. / Härtill 2 uppsatser.

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Orientadores: Luis Otávio Zanatta Sarian, Sophie Françoise Mauricette Derchain / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-07T13:36:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toledo_MariaCarolinaSzymanski_M.pdf: 838964 bytes, checksum: 3c546db1a656989db9f433b93287b2d2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: o câncer de ovário é comumente diagnosticado em estágios avançados, sendo atualmente a neoplasia ginecológica de maior letalidade. As pesquisas têm direcionado esforços na tentativa de descobrir novos fatores prognósticos e métodos terapêuticos. Muitos trabalhos estudam a expressão dos receptores de esteróides (dentre eles, estrógeno (RE), progesterona (RP) e andrógeno (RA)) e HER2 (receptor estimulador de crescimento epitelial - subtipo 2) como fatores prognósticos e associados à resposta terapêutica, apresentando; entretanto, resultados conflitantes. Até onde conhecemos, não há estudos desta natureza no Brasil. Objetivo: Correlacionar à expressão dos RE, RP, RA e HER2 aos fatores clínico patológicos, ao intervalo livre de doença e à sobrevida nos cânceres epiteliais de ovário. Material e métodos: Este é um estudo observacional de coorte retrospectiva. Foram incluídas 152 mulheres com tumores epiteliais malignos, selecionados através dos prontuários no período de 1993 a 2008, no Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM) da Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP, São Paulo, Brasil. A avaliação da expressão dos RE [subtipos alfa (RE?) e beta (RE?)], RP, RA e HER2 foram realizadas por imunoistoquímica através da construção de microarranjos de tecidos (TMA). Inicialmente, foi realizada análise uni variada da expressão dos receptores acima quanto à idade, estado menopausal, índice de massa corpórea (IMC), tipo histológico, grau histológico, estadiamento inicial de acordo com a classificação proposta pela FIGO e presença de doença residual pós-tratamento cirúrgico. Em seguida, as pacientes foram divididas em dois grupos: ausência da expressão de RE?, RP e HER2 (triplo negativo) e positividade para pelo menos um desses receptores (não triplo negativo); e, avaliadas em relação aos critérios clínicos e epidemiológicos acima. Foram, então, realizadas análises multivariadas dos padrões de expressão de RE ? e ?, RP, RA, HER2 e triplo negativo em relação a estes mesmos critérios. Por fim, análise de sobrevida multivariada foi realizada utilizando-se todos os padrões de expressão e os fatores clínicos epidemiológicos estudados. Resultados: Nas análises multivariadas, mostraram-se significativas as seguintes associações: do receptor de estrógeno alfa (ER?) com tumores de grau histológico menos diferenciado (p=0.01); do receptor de progesterona (RP) à obesidade (p= 0.01); do receptor de andrógeno (RA) com tumores do subtipo seroso (p= 0.01); do receptor de HER2 com tumores dos graus histológicos II-III (p=0.02); do subgrupo triplo negativo com tumores de grau histológico menos diferenciado (II-III) (p<0.01). Não houve associação do RE? com nenhum dos fatores estudados. Quanto à análise multivariada de sobrevida livre de doença e sobrevida global; dentre os padrões de expressão de receptores, apenas o RE? esteve associado com melhor sobrevida livre de doença (RR=0.39; 95%CI 0.17 -0.90). Conclusões: A expressão do RE? esteve mais significativamente associada a fatores clínicos de pior prognóstico. O RP esteve associado à obesidade. O RA esteve significativamente mais presente nos tumores serosos. A expressão do HER2 e a presença de tumores triplo negativo foram maiores em tumores menos diferenciados. Paradoxalmente; o RE? foi o único receptor a apresentar associação com maior sobrevida livre de doença apesar de sua relação significativa com fatores reconhecidos de pior evolução clínica. Não houve diferença estatística significativa na análise multivariada de sobrevida total e sobrevida livre de doença quanto ao grupo de tumores triplo negativo / Abstract: Introduction: Ovarian cancer is commonly diagnosed in advanced stages and currently is the most lethal gynecological malignancy. Surveys have focused efforts in an attempt to discover new prognostic and therapeutic methods. A plenty of studies investigates the expression of steroid receptors (among them, estrogen (ER), progesterone (PR) and androgen AR)) and HER2 (epidermal growth receptor stimulator - subtype 2) as prognostic factors and associated to therapeutic response, presenting, however, conflicting results. As far as we know, there are no studies of this nature in Brazil. Objective: The aim of this study was to correlate the expression of ER (subtypes ? (ER ?) and ? (ER ?), PR, AR and HER2 to clinical pathological factors, the disease-free survival and overall survival of epithelial ovarian cancers. Methods: This is a retrospective observational cohort study. The study included 152 women with malignant epithelial tumors, selected through the records from 1993 to 2008, in the Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM) at the State University of Campinas - UNICAMP, São Paulo, Brazil. The expression of ER (? and ?), PR, AR and HER2 was evaluated by immuno histochemistry through tissue microarray (TMA) technique. Initially, univariate analyses were performed, evaluating the expression of each receptor mentioned above to age, menopausal status, body mass index (BMI), histological type, histological grade, initial staging as preconized by FIGO staging of ovarian tumors and presence of residual disease after surgical treatment. Then, the patients were divided into two groups: absence of the expression of ER?, PR and HER2 (triple negative) and positive for at least one of these receptors (not triple negative), and evaluated in relation to the clinical and epidemiological criteria mentioned above. Multivariate analyzes were performed with ER ?, ER?, PR, AR, HER2 and triple negative towards these same criteria. At last, multivariate survival analyses were conducted using all the patterns of receptors' expression, epidemiological and clinical factors studied. Results: In multivariate analyzes, there were the following significant associations: of the estrogen receptor alpha (ER?) with less differentiated histological grade tumors (p = 0.01); of the progesterone receptor (PR) to obesity (p = 0.01); of the androgen receptor (AR) with the serous tumors (p = 0.01); of the HER2 receptor with tumors of histological grades II-III ( p = 0.02); of the triple negative subgroup with less differentiated histological grade tumors (II-III) (p <0.01). There was no association of the ER? with any of the factors studied. In the multivariate analysis of disease-free survival and overall survival; considering the patterns of receptors' expression, only the ER? expression was associated with better disease-free survival (RR= 0.39, 95% CI 0.17 to 0.90). Conclusions: The expression of ER? was more significantly associated with clinical factors of poor prognosis. The PR was associated with obesity. The AR was significantly more prevalent in serous tumors. The HER2 expression and the presence of triple negative epithelial ovarian cancer tumors were higher in less differentiated tumors. Paradoxically, the ER? was the only receptor which showed association with better disease-free survival despite its significant relationship with recognized factors of worse clinical outcome. There was no statistically significant difference in multivariate analysis of overall survival and disease-free survival regarding to the triple negative group / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestra em Ciências da Saúde

INTRODUÇÃO: O tratamento padrão do câncer do colo uterino é a histerectomia radical para doença inicial e quimio-radioterapia para doença avançada. A radioterapia após a histerectomia radical tem impacto em ganho de sobrevida caso hajam fatores de risco histopatológicos para recidiva. Portanto, a busca de marcadores preditores de radiossensibilidade torna-se importante para a individualização do planejamento terapêutico. O HER-2/ErbB-2 faz parte da família de proteínas ErbB que formam um grupo de receptores de membrana e tem um papel crítico no controle de diversas funções celulares básicas como diferenciação, proliferação, migração e sobrevida celular. A ação do NF-B na carcinogênese pode ocorrer através da regulação da apoptose e controle do ciclo celular. Para ativação do NF-B é necessário a enzima quinase IKK e a atividade do NF-B foi relacionada com resistência tumoral a quimioterapia e radioterapia. A via PI3K/Akt mediada pela hiperexpressão de HER-2 pode estar envolvida na ativação do NF-B. Os objetivos foram: a) avaliar os padrões de expressão imunoistoquímica de HER-2, NF-B-p65, NF-B-p50 e IKK em pacientes portadores de câncer do colo uterino submetidos à radioterapia; b) avaliar o status do gene HER2 através de FISH; c) avaliar o papel da expressão imunoistoquímica de NF-B-p65, NF-B-p50, IKK e HER-2 como fator prognóstico para sobrevida livre de doença e sobrevida global. MATERIAIS E MÉTODOS: Trata-se de estudo retrospectivo que avaliou uma série de 32 pacientes portadores de câncer do colo do útero submetidos a tratamento com radioterapia seguido de histerectomia no período de janeiro de 1992 a junho de 2001. RESULTADOS: A idade mediana foi 45 anos (22-67). Um paciente apresentava-se no estádio IB2 (FIGO) e 31 (96,9%) estádio IIB. Todos os pacientes foram submetidos à teleterapia e braquiterapia com alta taxa de dose com caráter neoadjuvante à histerectomia radical (HR). Dezesseis (50%) pacientes apresentaram doença residual após radioterapia. O tempo de seguimento mediano foi de 73,5 meses. A sobrevida global da amostra foi de 66,5% em 5 anos. As expressões imunoistoquímicas de NF-B-p65 e NF-B-p50 em citoplasma nos tumores primários foram encontradas em respectivamente 90,6% e 96,9% dos casos. As expressões de NF-B-p65 e NF-B-p50 em núcleo nos tumores primários 59,4% dos casos em ambos. As expressões de NF-B-p65 e NF-B-p50 em citoplasma nos tumores residuais após tratamento com radioterapia foram encontradas 50% dos casos em ambos. A expressão em núcleo de NF-B-p50 nos tumores residuais após tratamento com radioterapia foi encontrada em 75% dos casos. Não houve expressão em núcleo de NF-B-p65 nos tumores residuais. A expressão imunoistoquímica de HER-2 nos tumores primários foi de encontrada em 21,9% dos casos. Não houve expressão imunoistoquímica de HER-2 nos tumores residuais do colo uterino. A amplificação gênica de HER-2 nos tumores primários foi encontrada em 1 (3,1%) caso. Não houve expressão imunoistoquímica de IKK nos tumores primários ou residuais. As expressões imunoistoquímicas de HER-2, NF-B-p65 e NF-B-p50 não se correlacionaram com a resposta ao tratamento radioterápico pré-operatório. As expressões imunoistoquímicas positivas de NF-B-p65, NF-B-p50, IKK e HER-2 não se associaram a piores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. CONCLUSÕES: Nossos dados sugerem que as expressões imunoistoquímicas de NF-B e HER-2 não são capazes de predizer resposta à radioterapia e não estão relacionadas com pior prognóstico. O NF-B parece ser constitutivamente ativado no câncer do colo uterino / INTRODUCTION: The standard treatment of early cervical cancer is radical hysterectomy and concomitant radiation therapy and chemotherapy for advanced stages. After radical hysterectomy, adjuvant radiation therapy is indicated if risk factors are present. HER-2 is part of protein membrane family that has a critical role in cellular differentiation, proliferation and survival. The NF-B regulates apoptosis, cellular cycle, adhesion and cellular migration. NF-B is activated by IKK kinase. NF-B activation is related to resistance to radiotherapy and chemotherapy. The overexpression of HER-2 may activate the NF-B pathway through PI3K/Akt. Our aims were: a) analyze the immunohistochemical expression of HER-2, NF-B-p50, NF-B-p65 and IKK in patients with cervical cancer treated with radiation therapy followed by radical hysterectomy; b) analyze the HER-2 amplification gene with FISH; c) evaluate the immunohistochemical expression of HER-2, NF-B-p50, NF- B-p65 and IKK as a prognostic factor to recurrence and death. MATERIALS AND METHODS: A retrospective analysis was carries out on 32 patients with cervical cancer submitted to radical hysterectomy after neoadjuvant radiotherapy from January 1992 to June 2001. RESULTS: The median age was 45 years (22-67). One patient was stage IB2 (FIGO) and 31 IIB (96,9%). All patients received external beam radiotherapy and high dose vaginal brachytherapy. Sixteen (50%) patients had residual pathological disease after radical hysterectomy. Median follow-up time was 73.5 months and overall 5-year survival was 66.5%. Immunohistochemical cytoplasmic expression of NF-B-p65 e NF-B-p50 before radiotherapy was found in respectively 90.6% and 96.9% of cases. Immunohistochemical nuclear expression of NF-B-p65 and NF-B-p50 before radiotherapy was found in both 59.4% of cases. Immunohistochemical cytoplasmic expression of NF-B-p65 and NF-B-p50 in the residual tumors after radiotherapy was found in both 50% of cases. Immunohistochemical nuclear expression of NF-B-p50 in the residual tumors was found in 75% of cases. There was no nuclear expression of NF-B-p65 in the residual tumors. Immunohistochemical expression of HER-2 was found in 21.9% of cases. However, gene amplification was found in one case (3.1%). There was no expression of IKK in neither primary nor residual tumors. HER-2 and NF-B were not correlated to the risk of residual tumor after radiotherapy. Immunohistochemical expression of HER-2 and NF-B were not correlated to risk of recurrence or death. CONCLUSIONS: Our data suggest that NF-kB is constitutively activated in advanced cervical cancer. NF-kB and HER-2 may not predict response to radiotherapy and do not correlate to poor outcome