Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-30Bitstream added on 2014-06-13T19:04:21Z : No. of bitstreams: 1 luize_ds_dr_araca.pdf: 3119615 bytes, checksum: 3282986a90405ad7117f1b9d2fd00c27 (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar, por meio de análise histológica e histométrica, o processo de reparo de defeitos de furca Classe II, em cães, criados cirurgicamente e tratados com enxerto de osso autógeno em neoformação (OAN) associado ou não a barreira de tecido conjuntivo (TC). Foram utilizados os 3os e 4os pré-molares mandibulares de 6 cães machos para a criação dos defeitos de furca. Inicialmente foram extraídos os 1os molares superiores, com o intuito de criar uma área de rebordo ósseo edêntulo. Após 28 dias, foram confeccionados alvéolos cirúrgicos nestas áreas, com finalidade de obter osso autógeno em neoformação. Decorridos 14 dias, os defeitos de furca classe II, com medidas de 5mm (altura) e 2mm (profundidade), foram criados cirurgicamente e tratados imediatamente. Os dentes foram distribuídos, por meio de randomização bloqueada, em 4 grupos experimentais (n=6): Grupo C (GC): defeito preenchido somente pelo coágulo sanguíneo; Grupo O (GO): preenchimento com OAN; Grupo B (GB): o defeito, preenchido pelo coágulo sanguíneo, foi recoberto por barreira de TC; e Grupo O/B (GO/B): preenchimento com OAN associado a barreira de TC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada após 90 dias do tratamento dos defeitos de furca criados. Após remoção das peças e tratamento laboratorial de rotina, foram obtidos cortes histológicos seriados no sentido mésio-distal, corados com hematoxilina e eosina ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados, de forma a representar toda a extensão da furca, para as análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Os dados obtidos por meio... / The purpose of this study was to histologically and histometrically evaluate the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone in neoformation (ABN) graft with or without a connective tissue graft (CT) barrier. The third and fourth mandibular premolars (P3 and P4) of six mongrel dogs were used in this study. Initially, the both first upper molars were extracted, aiming the establishment of an edentulous ridge. After 28 days, surgical alveolus was produced en these areas. After 14 days, Class II furcation defects (5 mm in height and 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into four groups: Group C (GC), in which the defect was filled with blood clot only; Group AB (GAB), in which the defect was filled with ABN graft; Group CB (GCB), in which the defect, filled with blood clot, was covered by CT barrier; and Group AB/CB (GAB/CB), in which the defect was filled with ABN graft and covered by a CT barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized 90 days post-surgery. Vestibule-lingual serial sections were obtained and stained with either hematoxylin and eosin or Masson’s trichrome. Histologic and histometric analyses, using a image-analysis software, were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect for statistical analysis (analysis of variance; P <0.05). Histologically, the collagen fibers tending to a parallel direction, in groups treated with ABN graft. Although, in the GCB, the periodontal ligament seemed better organized. Anquilosis was observed in their groups that received ABN, whereas the epithelial migration was observed mainly in the specimens of the GC and GCB. The osseous bonefill of the furcation defect was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:05:24Z : No. of bitstreams: 1 fernandes_jma_dr_arafo.pdf: 1627813 bytes, checksum: c33f2da49d4d220b69231200c1a3f0c1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo do presente estudo foi avaliar histomorfometricamente o efeito do plasma rico em plaquetas (PRP), associado a enxerto ósseo autógeno e a membrana absorvível (Resolut®), no tratamento de lesões de furca grau III. Foram criados defeitos cirúrgicos nos 3os pré-molares inferiores (P3) de cinco cães, de ambos os lados, totalizando 10 dentes. Após um período de três meses de cronificação, as lesões foram divididas aleatoriamente em dois grupos de tratamento. (1) Grupo teste: PRP + enxerto ósseo autógeno + membrana; (2) Grupo controle: enxerto ósseo autógeno + membrana. Após um período de cicatrização de 90 dias, os animais foram sacrificados. A análise histológica, a partir da marcação, mostrou formação de novo cemento celular, mínima quantidade de novo osso e ligamento periodontal, em ambos os grupos. Nenhuma diferença estatisticamente significante foi observada entre os grupos teste e controle. A associação do PRP ao enxerto ósseo autógeno e membrana, ou somente, do enxerto ósseo autógeno e membrana, não apresentou vantagens estatisticamente significantes no tratamento das lesões, resultando em preenchimento parcial das furcas e regeneração periodontal limitada à marca experimental das lesões. / The objective of this study was to evaluate histomorphometrically the platelet-rich plasma (PRP) effects, associated with autogenous bone graft and absorbable membrane (Resolut®), for the treatment of Class III furcation defects, in 5 dogs. Surgical defects were created in the 3nd mandibular premolars (P3) on both sides, of each dog, totaling 10 teeth. After a period of three months of chronified, the defects were randomly divided in two treatment groups. (1) Group Tests: PRP + graft bone autogenous + membrane; (2) Group Control: graft bone autogenous + membrane. Animals were sacrificed after 90 days healing. Histologic evaluation revealed new cellular cementum, low amount of bone and periodontal ligament formation in both groups, starting from the demarcation. No statistically significant difference was observed between Groups Test and Control. PRP + autogenous bone graft + membrane or autogenous bone graft + membrane no present statistically significant advantages on the lesions treatment, resulting in furcation partial filling and periodontal regeneration limited to the experimental mark of the lesions.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-06Bitstream added on 2014-06-13T19:23:26Z : No. of bitstreams: 1 ruiz_kgs_dr_arafo.pdf: 357284 bytes, checksum: 93541a495590ca3b701f6cf9ef876131 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica sandwich. Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios. / The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a sandwich techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:15:54Z : No. of bitstreams: 1 deliberador_tm_me_araca.pdf: 2630912 bytes, checksum: a0347c4bc88ad360bdf74a6658873848 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente em cães e tratados com enxerto de osso autógeno (OA) associado ou não à barreira de sulfato de cálcio (SC). Os segundos, terceiros e quartos pré-molares mandibulares de 6 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo OA (osso autógeno): o defeito foi preenchido com enxerto de OA; Grupo OA/SC (osso autógeno/sulfato de cálcio): o defeito foi preenchido com enxerto de OA e coberto com barreira de SC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pós-operatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com HE ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados para análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Esses parâmetros foram apresentados como porcentagem do defeito original e transformados em arcoseno para análise estatística (ANOVA, p < 0,05). A regeneração periodontal ocorreu de forma similar nos três grupos, não sendo observada completa neoformação óssea e de tecido conjuntivo na maioria dos espécimes. Diferenças estatisticamente significativas não foram constatadas entre os três grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. A cicatrização periodontal foi similar após o tratamento de defeitos de furca Classe II com enxerto de OA, enxerto de OA com barreira de SC ou debridamento cirúrgico somente. / The purpose of this study was to histologically analyze the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone (AB) graft with or without a calcium sulfate (CS) barrier. The second, third and fourth mandibular premolars of 6 mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into 3 groups: Group C (control): the defect was filled with blood clot; Group AB: the defect was filled with AB graft; Group AB/CS: the defect was filled with AB graft and covered by a CS barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized at 90 days postoperative. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either H&E or Masson's Trichrome. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, p<0.05). Periodontal regeneration in the 3 groups was similar. Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Statistically significant differences were not found in any of the evaluated parameters among the groups. Periodontal healing was similar wheter using surgical debridement alone, AB graft, or AB graft with a CS barrier in the treatment of Class II furcation defects.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-27Bitstream added on 2014-06-13T19:57:15Z : No. of bitstreams: 1 esper_la_me_araca.pdf: 415604 bytes, checksum: 36bcb3441620df6465aef668552a719f (MD5) / Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães. / This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs.

Submitted by Caroline Periotto (carol@ufscar.br) on 2016-09-19T20:22:22Z No. of bitstreams: 1 TeseMTS.pdf: 13656662 bytes, checksum: c066663a491a08dfbd2c80065f41de40 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-20T18:07:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseMTS.pdf: 13656662 bytes, checksum: c066663a491a08dfbd2c80065f41de40 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-20T18:07:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseMTS.pdf: 13656662 bytes, checksum: c066663a491a08dfbd2c80065f41de40 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T18:07:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseMTS.pdf: 13656662 bytes, checksum: c066663a491a08dfbd2c80065f41de40 (MD5) Previous issue date: 2015-10-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bioactive glasses were developed by Hench in 1969, and are widely known to have the ability to rapidly form a chemical bond with hard and soft living tissues. Currently, these glasses have been used clinically as biomaterials that act in bone regeneration in dental and orthopedic applications. However, their use is still very limited due to their fragility and also the limited commercially available forms, such as powders and granules. Therefore, the development of processes that make possible their conformation in fibers and fabrics (meshes) is indeed promising and highly desired, as this new shape could significantly expand the usage spectrum of this excellent biomaterial. Thus, this project aimed to develop and improve the production of highly bioactive glass fibers by the downdrawing process, as well as optimize the production of unwoven fabrics and characterize them in relation to their physicochemical and biological properties. Therefore, a new bioactive glass composition previously developed at the Vitreous Materials Laboratory was used (LaMaV - UFSCar). This new bioactive glass presents a fast interaction with the body fluids to rapidly promote the healing process and reduced crystallization tendency for its processing into fibers, as crystal formation difficult or even impossible to obtain the same. The obtained results showed that this new bioactive glass composition is more suitable to undergo through working processes involving high temperatures than other currently known bioactive glasses, being then, possible to produce highly flexible fabrics and meshes by the downdrawing process. Concurrently, this new biomaterial presents similar physical-chemical and biological properties to gold standard bioglass 45S5, making this new biomaterial suitable for several applications aiming in situ tissue regeneration. / Os vidros bioativos foram desenvolvidos por Hench, em 1969, e são amplamente conhecidos por ter a capacidade de formar rapidamente uma ligação química com tecidos vivos duros e moles. Atualmente, estes vidros vêm sendo utilizados clinicamente como biomateriais que auxiliam na regeneração óssea em aplicações odontológicas e ortopédicas. Entretanto, sua utilização ainda é restrita devido à sua fragilidade e também à limitação de suas formas disponibilizadas comercialmente, como pós e grânulos. Portanto, a busca por um processo que viabilize sua conformação em fibras e tecidos (malhas) é bastante promissora, já que este formato poderá expandir de forma significativa o espectro de utilização deste excelente biomaterial. Deste modo, este projeto teve como objetivo desenvolver e aprimorar a produção de fibras de vidros altamente bioativas pelo método de downdrawing, assim como otimizar a produção de tecidos vítreos a partir destas fibras e caracterizá-los em relação as suas propriedades físico-químicas e biológicas. Para tanto, foi utilizada uma nova composição vítrea bioativa previamente desenvolvida no Laboratório de Materiais Vítreos (LaMaV - UFSCar) que possui rápida interação com os fluidos corpóreos para promoção acelerada do processo de regeneração e diminuída tendência de cristalização durante seu processamento em fibras, já que a formação de cristais dificulta ou até impede a obtenção das mesmas. Os resultados obtidos evidenciaram que esta nova composição vítrea bioativa está mais apta a passar por processos de conformação que envolvam altas temperaturas do que outros vidros bioativos atualmente conhecidos, sendo portanto, possível a obtenção de tecidos e malhas altamente flexíveis pelo processo de downdrawing. Concomitantemente, este novo material apresenta propriedades físico-químicas e biológicas semelhantes as do biovidro gold standard 45S5, tornando possível a utilização deste biomaterial em diversas aplicações para regeneração tecidual in situ.

Submitted by MILAGROS DEL VALLE EL ABRAS ANKHA (doc_elabras@hotmail.com) on 2018-04-19T00:51:40Z No. of bitstreams: 1 Milagros Abras Ankha-tese final 2018 com ficha catolográfica.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-25T22:49:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elabrasankha_mdv_dr_sjc.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-25T22:49:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elabrasankha_mdv_dr_sjc.pdf: 3661703 bytes, checksum: 64be3370b9106d7afd83981f08a49a3e (MD5) Previous issue date: 2018-02-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos anteriores sugerem que o ácido hialurônico (AH) e o plasma rico em plaquetas (PRP) têm potencial para melhorar o processo de cicatrização da cartilagem e diminuir a progressão da osteoartrite. No entanto, poucas pesquisas avaliam seu efeito sinérgico. Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito do AH associado ao PRP na regeneração do disco articular e da superfície osteocondral da articulação temporomandibular (ATM). A osteoartrite será induzida por meio da perfuração bilateral do disco articular de coelhos. Quarenta coelhos foram divididos em 4 grupos, conforme o procedimento: sem lesão(SL)/sem tratamento(ST) (n=4), lesão(L)/sem tratamento (ST) (n=12), L/AH (n=12), L/AH+PRP (n=12). Quatro coelhos do grupo SL/ST foram eutanasiados no tempo zero. Após 8 e 24 semanas da perfuração dos discos articulares, seis coelhos dos grupos L/ST, L/AH e L/AH+PRP foram eutanasiados. O disco articular foi avaliado radiograficamente para visualizar possíveis calcificações. Foi realizada análise macroscópica e histológica do disco e do côndilo mandibular. Foi utilizada a análise histoquímica por Picrosirius Red para avaliar a presença de colágeno I e III e a análise imuno-histoquímica do colágeno I e II. As porcentagens de marcação obtidas nas análises histoquímica e imuno-histoquímica foram avaliadas estatisticamente, adotando-se o nível de significância de 5%. Macroscopicamente, o disco articular nos grupos tratados apresentou, na maioria dos espécimes, preenchimento parcial ou total do defeito criado. Os côndilos apresentaram, na maioria dos espécimes, irregularidade da superfície osteocondral. Radiograficamente, após 24 semanas da perfuração do disco, focos de radiopacidade foram observados nos grupos não tratados e em alguns dos espécimes dos tratados. Na análise histológica foi confirmada a presença de material mineralizado, próximo e distante da perfuração, além de diminuição da celularidade e fibrose. Na análise histoquímica, a porcentagem de colágeno I prevaleceu com relação ao colágeno III, tanto no disco quanto no côndilo, independentemente do grupo e período avaliado. Entretanto, no disco não houve diferença estatística significativa. No côndilo, L/AH e L/AH+PRP nos períodos de 8 e 24 semanas apresentaram uma porcentagem de colágeno I significativamente maior que L/ST (p<0,05). A expressão imuno-histoquímica de colágeno I e II no disco não apresentou diferença estatística significante. No côndilo, a expressão do colágeno I apresentou diferença significativa entre os 9 grupos (p=0,00) e os períodos (p=0,05). O grupo L/AH+PRP de 24 semanas apresentou maior porcentagem de marcação positiva para colágeno I, que era diferente dos grupos SL/ST e L/ST, porém sem diferença estatística com relação ao L/AH. Em conclusão, os tratamentos da osteoartrite com AH ou PRP associado ao AH mostram resultados promissores, ajudando na redução do defeito criado no disco, porém, sem resultados satisfatórios como protetores da superfície osteocondral, na presença de perfuração discal. / Previous studies have suggested that hyaluronic acid (HA) and platelet-rich plasma (PRP) have the potential to improve the healing process of cartilage and decrease the progression of osteoarthritis. However, few studies have evaluated their synergistic effect. This study aims at evaluating the effect of HA associated with PRP on the regeneration of the articular disc and the osteochondral surface of the temporomandibular joint (TMJ). Osteoarthritis was induced by means of bilateral perforation of the articular disc of rabbits. Forty rabbits were divided into 4 groups, according to the procedure: without lesion (WL)/without treatment (WT) (n = 4), lesion (L)/without treatment (WT) (n = 12), L/HA (n = 12), L/ HA+PRP (n = 12). Four rabbits from group G1 were euthanized at time zero. After 8 and 24 weeks of joint disc perforation, six rabbits from groups L/WT, L/HA and L/HA+PRP were euthanized. The articular disc was evaluated radiographically to visualize possible calcifications. Macroscopic and histological analysis of the disc and the mandibular condyle were performed. The histochemical analysis by Picrosirius Red was used to evaluate the presence of collagen I and III, as well as the immunohistochemical analysis was used to evaluate the expression of collagen I and II. The percentages of staining obtained from the histochemical and immunohistochemical analysis were statistically evaluated, adopting the significance level of 5%. Macroscopically, the articular disc in the treated groups presented in most of the specimens partial or total filling of the defect created. The condyles presented, in most of the specimens, degeneration of the osteochondral surface. Radiographically, after 24 weeks of disc perforation, foci of radiopacity were observed in the untreated and in some of the specimens of treated groups. Histological analysis confirmed the presence of mineralized material, close and distant to perforation, as well as decreased cellularity and fibrosis. In the histochemical analysis, the percentage of collagen I prevailed in both disc and condyle, independently of the group and period evaluated. However, in the disc there was not statistical difference. In the condyle, L/HA and L/HA+PRP in the periods of 8 and 24 weeks presented a percentage of collagen I significantly higher than L/WT (p <0.05). The expression of collagen I and II in the disc did not present significant statistical difference. In the condyle, the expression of collagen I was statistically different between the groups (p = 0.00) and the periods (p = 0.05). The 24-week L/HA+PRP group had a higher percentage of positive marking for collagen I, which was different from the WL/WT and L/WT groups, but with no statistical difference with respect to L/HA. In conclusion, the treatment of osteoarthritis with HA or PRP associated with HA shows promising results, helping to reduce the defect created in the disc, but without satisfactory results as protectors of the osteochondral surface, in the presence of perforation of the disc. / 2016/23446-2

Orientador: Ricardo Samih Georges Abi Rached / Banca: Silvana Regina Perez Orrico / Banca: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Francisco Humberto Nociti Junior / Banca: Márcio Zafallon Casati / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica "sandwich". Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a "sandwich" techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis. / Doutor

Os avanços relacionados à ciência dos biomateriais e engenharia tecidual buscam esclarecer os mecanismos envolvidos na resposta biológica associada ao uso desses dispositivos e sua interação com o sistema imune. Neste estudo, avaliou-se a resposta imune e inflamatória desenvolvida em camundongos frente à implantação de membrana de cortical óssea bovina no tecido subcutâneo, em implantação única e sequencial de duas membranas, assim como os possíveis mecanismos envolvidos no processo de reconhecimento e reabsorção desse biomaterial, de acordo com análise histomorfométrica, enzimática e molecular. Após a implantação da membrana, sinais de reabsorção que antes eram notados em pontos isolados, aos poucos se unem até sua completa degradação, observada somente após 15 dias. Todo o processo de reabsorção da membrana é acompanhado por uma reação inflamatória de magnitude moderada, seguida pelo declínio do número de leucócitos, surgimento de células gigantes multinucleadas e formação de uma cápsula de tecido conjuntivo fibroso. A cinética de TNF- e MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 apresentou um padrão de produção decrescente, entretanto os níveis dos inibidores de metaloproteinases (TIMPs) e TGF- parecem atuar de forma inversa. A velocidade de reabsorção após duas implantações consecutivas da membrana foi maior quando comparada ao grupo de animais que sofreu apenas uma implantação, porém os resultados do teste de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) demonstraram que a membrana é biocompatível, pois não elicitou resposta imunológica exacerbada após uma segunda implantação, confirmando então a natureza não imunogênica desse biomaterial. Finalmente, os animais CD14KO e MyD88KO apresentaram uma reabsorção mais lenta da membrana implantada, quando comparados aos animais C57Bl/6 (WT), demonstrando que as moléculas CD14 e MyD88 estão envolvidas no reconhecimento do biomaterial e desempenham importante papel no processo de reabsorção da membrana de cortical óssea bovina, indicando a participação de PAMPs e/ou DAMPs na resposta biológica gerada por esse biomaterial. / Advances related to the biomaterials science and tissue engineering seek to clarify the mechanisms involved in the biological response associated with the use of those devices and their interaction with the immune system. This study evaluated the inflammatory and immune response developed in mice after implantation bovine bone cortical membrane in subcutaneous tissue, in both, unique and sequential implantation of 2 membranes, as the mechanisms involved in this biomaterial recognition and resorption process, on regards to histomorphometric, enzymatic and molecular analysis. After membrane implantation, previously observed signs of resorption in isolated spots, gradually unite until their complete degradation after 15 days. The whole membrane resorption process is accompanied by a moderate inflammatory reaction, followed by a decline in the leukocytes number, appearance of multinucleated giant cells and formation of a capsule of fibrous connective tissue. The kinetics of TNF-, MMP-2, MMP-8, MMP-9 e MMP-13 showed a pattern of decreasing production, however, levels of metalloproteinases inhibitors (TIMPs) and TGF- seem to act in reverse way. The resorption rate after two successive membrane implantations was higher when compared to the group which suffered only one implantation, however, the results of delayed test hypersensity (DTH) demonstrated that the membrane is biocompatible, that is, it does not elicited too high immune response after a second position, confirming the non immunogenic nature of this biomaterial. Eventually, CD14KO and MyD88KO strains showed a slower membrane resorption when compared to animals C57Bl/6, demonstrating that the CD14 and MyD88 molecules are involved in biomaterial recognition and play an important role in bovine cortical bone membrane resorption process, indicating that PAMPs and/or DAMPs are involved in biological response generated by this biomaterial.

Membranas celulares (MCs; Cell Sheets), constituídas por células-tronco (CTs), são autodestacáveis da placa de cultivo, e sem subcultivos geram grande quantidade de células que podem ser transplantadas de maneira mais próxima da fisiologia celular, mantendo-se as ligações celulares e a matriz extracelular produzidas em cultura. O ácido ascórbico ou vitamina C (VC) tem efeito indutor da formação destas MCs, aumentando a longevidade e tempo de indiferenciação das CTs. A similaridade observada entre respostas biológicas da VC em MCs e aquelas da Laserfototerapia (LFT) sobre células e tecidos, nos levou à hipótese de que estas terapias poderiam se complementar melhorando o prognóstico de futura aplicação clínica dessas MCs em regenerações de tecidos de interesse odontológico. Para testar essa hipótese, LFT e VC foram aplicadas associadas ou não na indução de MCs de células-tronco da polpa dentária humana (hDPSCs). Para tanto, hDPSCs descongeladas, que expressaram níveis típicos de marcadores de superfície de células-tronco mesenquimais, foram plaqueadas em placas de 6 poços (5x104 células por poço). Vinte e quatro horas depois do plaqueamento as culturas foram submetidas aos tratamentos dos grupos experimentais: Controle: hDPSCs em P3 cultivadas com meio clonogênico; Senescente: hDPSCs em P27 cultivadas com meio clonogênico; VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultivadas com meio clonogênico e submetido à LFT (contato e pontual - 5 pontos / poço, 660 nm, 20 mW, 0,028 cm², 0,71 W/cm², 7 segundos, 5 J/cm², 0,14 J por ponto, 48 horas de intervalo) e Laser+VC: P3 cultivadas com meio clonogênico acrescido de VC e submetido à LFT. Em 24 horas, 7 e 13 dias as hDPSCs dos diferentes grupos experimentais foram observadas macro e microscopicamente, e atividade da enzima telomerase foi avaliada por PCR-TRAP, complementado por ELISA. Para a avaliação da expressão de genes relacionados à natureza e indiferenciação (Mitofilina e Oct 4) e à longevidade (fase catalítica da enzima telomerase - hTERT); bem como à senescência das células do grupo senescente (?-galactosidase), as hDPSCs de todos os grupos experimentais foram submetidas ao RT-qPCR As hDPSCs foram capazes de formar MCs somente nos grupos VC e Laser+VC (100%), entre 10 e 13 dias. As MCs do grupo Laser+VC apresentaram maior facilidade na manipulação. Atividade de Telomerase nas hDPSCs foi observada somente em 24 horas (Controle e LFT) e em 7 dias (VC e Laser+VC). Os marcadores de indiferenciação (Oct 4) e mesenquimal (mitofilina), bem como a hTERT foram expressos nas hDPSCs de todos os grupos experimentais. O Oct4 e o hTERT, em 7 dias, apresentaram expressões significativamente maiores nos grupos VC e Laser+VC em comparação com os demais (p < 0,0001, p = 0,0009, respectivamente). A expressão da mitofilina foi significativamente maior no grupo Laser+VC, em 7 dias (p =0,033). A técnica de obtenção de MCs de hDPSCs por essa metodologia foi considerada adequada para ser testada em procedimentos regenerativos. A LFT quando associada à VC não interferiu na formação das MCs, nem na manutenção da longevidade e indiferenciação das hDPSCs. Adicionalmente, a LFT melhorou a manipulação das MCs. Assim sendo, a associação de VC e LFT na indução de MCs parece promissora para futura utilização de MCs na odontologia regenerativa. / Cell Sheets, consisting of stem cells (SCs) are self detachable from the cultivation plate, and with no subcultivation can generate large amount of cells. The cell sheets can be transplanted closer to cell physiology environment by keeping the cell connections and the extracellular matrix produced in culture. Ascorbic acid or Vitamin C (VC) has inductive effect on cell sheet formation, increasing the longevity and the stemness of the cell for long period of time. The similarity between biological responses of VC in cell sheets and those of Laserphototherapy (LPT, Laser) on cells and tissues led us to hypothesize that these therapies could improve the prognosis of future clinical application of these cell sheets in regeneration of dental tissues. To test this hypothesis, LPT and VC were applied, associated or not, to induce human dental pulp stem cells (hDPSCs). Therefore, hDPSCs, which expressed typical levels of mesenchymal stem cell surface markers, were plated in 6-well plates (5x104 cells per well). Twenty-four hours later they were subjected to the treatment of experimental groups: Control: hDPSCs in P3 cultured with regular medium; Senescent: hDPSCs in P27 cultured with regular medium; VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC (20 ?g/ml); Laser: P3 cultures with regular medium and submitted to LPT (punctual and contact mode-5 points / well, 660 nm, 20 mW, 0.028 cm², 0.71 W/cm², 7 sec, 5 J/cm², 0.14 J per point, 48 hours-intervals) and Laser+VC: P3 cultured with regular medium supplemented with VC and submitted to LPT Within 24 hours, 7 and 13 days the hDPSCs of the different experimental groups were observed macroscopically and microscopically, and the telomerase enzyme activity was assessed by PCR-TRAP, complemented by ELISA. To evaluate the expression of genes related to the nature and differentiation (Mitofilina and Oct 4), longevity (catalytic phase of telomerase-hTERT enzyme), and the senescence of the senescent group cells (?-galactosidase), the hDPSCs of all experimental groups were subjected to RT-qPCR. The RT-qPCR data were compared by ANOVA complemented by the Tukey\'s test (p <= 0.05). The hDPSCs were able to form cell sheets only in the VC and Laser+VC groups (100%). Additionally, the cell sheets of the Laser+VC group presented easier handling. Telomerase activity in hDPSCs was observed only in 24 hours (Control and Laser) and seven days (VC and Laser + VC). The undifferentiating marker (Oct 4) and mesenchymal marker (mitofilin), as well as hTERT were expressed in hDPSCs of all experimental groups. Oct4 and hTERT presented expressions significantly higher at 7 days in VC and Laser+VC groups than in all other groups (p < 0.0001, p = 0.0009, respectively). The expression of mitofilin was significantly higher in the Laser+VC group, in 7 days (p = 0.0338). The technique of obtaining cell sheets of hDPSCs by the methodology here presented was considered appropriate to be further tested in regenerative procedures. The LPT when combined with VC did not interfere with the formation of the cell sheets, neither in the maintenance of longevity and undifferentiating status of hDPSCs. Moreover, LPT improved the handling of the cell sheets. Thus, the association of VC and LPT in the induction of cell sheets seems promising for future use in regenerative dentistry.