Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-12Bitstream added on 2014-06-13T18:40:41Z : No. of bitstreams: 1 000738084.pdf: 1485351 bytes, checksum: 44c3fe5b1a2d1c123e48af427ea7f8ce (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de diferentes indutores hormonais na evolução do processo de maturação final e ovulação em Leporinus macrocephalus. Os animais (n = 42) foram submetidos à reprodução induzida através de injeções intramusculares dos seguintes hormônios: extrato bruto de hipófise de carpa (EBHC) aplicado em duas doses (0,5 e 5,0 mg kg-1 com intervalo de 12 h entre as aplicações); hormônio liberador de gonadotrofina na forma líquida (mGnRHa – L) aplicado em dose única (0,5 mg kg-1); hormônio liberador de gonadotrofina na forma sólida (mGnRHa – S) aplicado em dose única (0,5 mg kg-1) e gonadotrofina coriônica humana (hCG) aplicado em duas doses (5 e 10 UI g-1 com intervalo de 12 h entre as aplicações). A administração de EBHC promoveu altas taxas de fertilização (63,57%) e eclosão (59,07%), porém apenas 71,4% das fêmeas ovularam. Por outro lado, o mGnRHa – S promoveu elevado percentual de desova (100%), taxas de fertilização (93,75%) e eclosão (89,15%). O mGnRHa – L apesar de ter causado 100% de ovulação, proporcionou baixas taxas de fertilização (6,25%) e eclosão (0%). Já o animais induzidos com hCG não ovularam (0%). A indução a desova com mGnRHa – L e hCG causou uma rápida elevação na concentração plasmática dos esteroides gonadais (E2 e 17α – OHP) após a primeira dose. Por outro lado, nos tratamentos EBHC e mGnRH – S observamos um aumento progressivo e regular nos níveis dos esteroides. O EBHC, permaneceu com um percentual elevado de ovócitos maduros com quebra da vesícula germinativa (GVBD) remanescente nos ovários (22,01%) e que não atingiram a ovulação. Por outro lado, a frequência de folículos pós – ovulatórios (FPO) nos tratamentos mGnRHa – L (26,69%) e mGnRHa – S (52,89%) aumentou após uma única dose hormonal. Assim, concluímos que a primeira dose de EBHC é responsável pela maturação.... / The aim of this study was to evaluate the effect of different hormonal inductors in the progress of final maturation and ovulation in Leporinus macrocephalus. The animal ( n = 42) were subjected to induced reproduction through intramuscular injections of following hormones: carp pituitary extract (CPE) injected in two doses (0,5 and 5,0 mg kg-1 with a 12 h interval between the doses); gonadotropin releasing hormone in liquid form (mGnRHa - L) injected with a single dose; gonadotropin releasing hormone in solid form (mGnRHa - S) injected with a single dose and human chorionic gonadotropin (hCG) injected in two doses (5 and 10 UI g-1 with a 12 h interval between the doses). The administration of CPE promoted high fertilization (63.57%) and hatching rate (59.07%), but only 71.4% of the females ovulated. On the other hand, mGnRHa - S promoted high spawning percentage (100%), fertilization (93.75%), and hatching (89.15%). The mGnRHa - L although it caused a 100% ovulation, resulted low fertilization (6.25%), and hatching rates (0%). The induced with hCG cannot cause the ovulation (0%). Induction spawning with mGnRHa - L and hCG caused a rapid increase in plasma concentrations of gonadal steroids (E2 and 17α - OHP) after the first dose. However, in animals induced with CPE and mGnRH - S observed a progressive increase and steady in steroid levels. The treatment CPE, despite have promoted high rates of fertilization and hatching, remained with a high percentage of mature oocytes with germinal vesicle breakdown (GVBD) remaining in the ovaries (22.01%) and who did not achieve ovulation. On the other hand, there was an increase in the frequency of follicles post - ovulatory (FPO) in the treatment mGnRHa - L (26.69%) and mGnRHa - S (52.89%) after administration of a single dose hormonal. Thus, we conclude that the first dose CPE is responsible for the final maturation and second dose by the ovulation ...

Resumo: O presente projeto objetivou investigar os efeitos da combinação, em baixas doses, de cinco praguicidas (dieldrin, dicofol, endosulfan, diclorvos e permetrina) sobre o sistema reprodutor de ratas Sprague-Dawley, Wistar e Lewis. Ratas de cada linhagem, com seis semanas de idade, foram randomizadas em três grupos: GI: controle negativo; GII: praguicidas adicionados à ração em doses de NOEL (mg/Kg/dia) - diclorvos (0,23), dicofol (0,5), dieldrin (0,025); endosulfan (0,7), permetrina (5); GIII: praguicidas adicionados à ração em doses de LOEL (mg/Kg/dia) - diclorvos (2,3), dicofol (2,1), dieldrin (0,05), endosulfan (3,8), permetrina (25). A eutanásia foi realizada entre a 10ª e a 12ª semana experimental, na fase de estro. Os parâmetros de avaliação foram: peso de fígado, útero e ovários; análise histológica qualitativa de fígado, útero e ovários; morfometria do endométrio; avaliação do ciclo estral; dosagem de LH, FSH e progesterona; e contagem de folículos ovarianos. Animais das três linhagens tratados com a LOEL apresentaram toxicidade sistêmica, evidenciada pela diminuição de peso corpóreo e aumento de peso de fígado. A análise qualitativa de útero e ovários, assim como a avaliação do ciclo estral e níveis hormonais não indicaram sinais de toxicidade reprodutiva exercida pelas misturas. A contagem de folículos ovarianos indicou ausência de resposta dose dependente e alta variabilidade entre os animais de mesmo grupo experimental. Desta forma concluímos que, embora os resultados tenham mostrado diminuição de algumas populações foliculares nas doses de NOEL e LOEL, este parâmetro não pode ser utilizado isoladamente como indicativo de toxicidade reprodutiva. Estes achados remetem à necessidade de maiores estudos para o esclarecimento dos efeitos destes compostos nas populações foliculares / Abstract: This project aimed to investigate the effects of the combination, in low doses, of five pesticides (dieldrin, dicofol, endosulfan, dichlorvos and permethrin) on the reproductive system of Sprague- Dawley, Wistar and Lewis rats. Six-weeks-old rats from each strain were randomized into three groups: GI: negative control; GII: pesticides added to the feed at NOEL doses (mg/kg/day) - dichlorvos (0.23), dicofol (0.5), dieldrin (0.025), endosulfan (0.7), permethrin (5), GIII: pesticides added to the feed at LOEL doses (mg / kg / day) - dichlorvos (2.3), dicofol (2.1), dieldrin (0.05), endosulfan (3.8), permethrin (25). Euthanasia was performed between the 10th and 12th experimental week, in the estrous stage. The evaluation parameters were: weight of liver, uterus and ovaries; qualitative histological analysis of liver, uterus and ovaries; endometrium morphometry; estrous cycle assessment; dosage of LH, FSH and progesterone; and counting of ovarian follicles. Animals from all three strains showed systemic LOEL toxicity, as evidenced by decreased body weight and increased liver weight. Qualitative analysis of the uterus and ovaries, as well as estrous cycle and hormone levels evaluations indicated no signs of reproductive toxicity exerted by the mixtures. Counting of ovarian follicles indicated lack of dose-dependent response and high variability among animals from the same experimental group. Hence, we concluded that, although our results have shown a decrease of some follicular populations at the NOEL and LOEL doses, this parameter can not be used alone as an indicator of reproductive toxicity. These findings underscore the need for more studies to clarify the effects of these compounds on follicular populations / Orientador: Noeme Sousa Rocha / Coorientador: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Clarissa Scolastici / Banca: Antonio Francisco Godinho / Mestre

O uso da tecnologia de DNA recombinante abre portas para um estudo detalhado da estrutura e função de proteínas, e a produção de proteínas recombinantes em sistema procarioto apresenta várias vantagens. A presente tese propõe a expressão heteróloga das proteínas aSFP, proteína ácida do fluido seminal bovino de 14 kDa, e osteopontina (OPN) de 55 kDa, relacionadas à congelabilidade do sêmen. Foram construídas bibliotecas de cDNA de vesícula seminal, próstata e glândula bulbouretral. Oligonucleotideos iniciadores foram sintetizados baseados nas seqüências disponíveis no GenBank (aSFP: número de acesso NM_174616, OPN: número de acesso M66236). Os amplicons resultantes das reações de PCR foram clonados em pET23a(+). Os plasmidios pET-aSFP e pET-OPN foram transformados em linhagens eletrocompetentes de E. coli BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. Para expressão das proteínas recombinantes foram testadas diferentes concentrações de indutor de expressão IPTG, e diferentes tempos e temperaturas de indução. A expressão recombinante foi avaliada por SDS-PAGE, usando como controle cultivo não induzido. Das cinco linhagens transformadas com pET-aSFP, somente E. coli BL21 pLysS induzida com 0,5 mM de IPTG por 3 horas a 37°C apresentou uma banda de aproximadamente 15 kDa, compatível com o tamanho esperado de aSFPr-6xHis. Por cromatografia de afinidade com metal imobilizado em condições desnaturantes foi possível um rendimento de purificação de 2,5mg/mL de aSFPr-6xHis por 10 mL de cultura bacteriana. Contudo, a expressão de OPNr-6xHis, também obtida com a linhagem de E. coli BL21 pLysS, foi de baixa eficiência, o que não permitiu sua purificação. A produção recombinante de proteínas do plasma seminal é uma das mais novas ferramentas para o estudo de suas funções. O aperfeiçoamento dos processos de expressão e purificação é fundamental no desenvolvimento desta biotecnologia, que possui grande potencial terapêutico e diagnóstico. / The use of recombinant DNA technology makes possible a deeper investigation on protein structure and function. Also the production of recombinant proteins has several advantages. The present thesis presents the recombinant expression of the 14 kDa acidic seminal fluid protein (aSFP) and osteopontin (55 kDa), both associated with bovine semen freezability. cDNA libraries from prostate, seminal vesicle and bulbouretral gland were constructed, and primers were designed based on data available on Genebank (aSFP: access number NM_174616; OPN: access number M66236). Amplicons of the target genes were cloned into pET23a(+), and the constructs pET-aSFP and pET-OPN were transformed into electrocompetent E. coli strains: BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. For the expression trials, different concentrations of IPTG were tested, as well several different expression induction conditions. The recombinant expression was analyzed by SDS-PAGE and western blotting. The best expression for aSFPr-6xHis (15 kDa) was obtained with the strain BL21 pLysS, induced with 0.5 mM IPTG in 3 hours at 37°C. The target protein was purified by immobilized metal ion chromatography in denaturing conditions with a yield of 2.5 mg/mL per 10 mL of bacterial culture. The recombinant expression of OPNr-6xHis was also possible with the pLysS strain, however in a lower efficiency. The low amount of recombinant OPN did not allow its purification. The production of seminal plasma recombinant proteins is a new tool for the study of its functions. The improvement of expression and purification processes is important for this biotechnology which has a great potential for therapeutic and diagnose applications.

O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência reprodutiva de vacas de corte com cria ao pé em programas de inseminação artificial (IA), utilizando práticas de desmame definitivo antecipado (DA) ou temporário e terapia de sincronização de estros para IATF. Foram utilizadas 205 vacas Angus x Nelore, com escore de condição corporal de 2,6±0,4 (escala de 1 a 5) e período pósparto variando de 54 e122 dias. No início do estudo, determinou-se, em uma amostragem de 20% das vacas, a taxa de aciclia de 55%, através da avaliação da função ovariana por ultra-sonografia e formaram-se quatro grupos experimentais. As vacas do grupo DA-IA (n= 53) foram inseminadas a partir do 10º dia após o desmame definitivo antecipado, de acordo com a observação de estros por 30 dias. No grupo DA-IATF (n= 50), as vacas foram tratadas (Dia 0) com um dispositivo intravaginal contendo 1,9g de Progesterona, por 8 dias, 2mg de Benzoato de estradiol, im, no desmame definitivo antecipado, 75mcg de Cloprostenol, im, na retirada do implante (Dia 8) e 1mg de Benzoato de estradiol, im, 24 horas após (Dia 9). A IATF foi realizada entre 52 a 56 horas após a retirada do dispositivo (Dia 10). Nas vacas do grupo DA-IATF10, (n= 50), aplicou-se o mesmo tratamento do grupo DA-IATF, iniciando-se 10 dias após o desmame definitivo, seguindo o mesmo protocolo para a IATF. No grupo DT-IATF, (n= 52), utilizou-se o tratamento usado para DA-IATF e DAIATF 10, realizando-se desmame temporário dos terneiros por 48 horas, entre a retirada do implante e a IATF. O período de monta natural foi de 60 dias para DA-IATF e DT-IATF, de 50 dias para DA-IATF10 e de 30 dias para o DAIA. Uma amostragem das vacas submetidas à sincronização de estros para IATF (DA-IATF, n= 10; DA-IATF 10, n= 10 e DT-IATF, n= 10) foi, examinada por ultra-sonografia para a determinação dos diâmetros dos folículos dominantes no início do tratamento hormonal (Dia 0) e no momento da IATF (Dia 10). As médias dos diâmetros foliculares não apresentaram diferença significativa (P>0,05) no Dia 0 (7,0±3,1mm; 8,1±1,9mm e 6,5±1,7mm) e no Dia 10 (9,8±1,4mm; 12,5±1,2mm e 11,8±2,8mm) para DA-IATF, DA-IATF 10 e DTIATF, respectivamente. As taxas de prenhez na IA foram 57, 48, 48 e 46% e ao final do período reprodutivo foram de 77, 88, 68 e 78% para DA-IA, DA-IATF, DA-IAF 10 e DT-IATF, respectivamente, não apresentando diferença significativa (P>0,05). / The objective of this experiment was to determine the reproductive performance of suckled beef cows in programs of artificial insemination (AI) submitted to definitive early or temporary weaning and estrous synchronization protocol to fixed-time AI (FTAI). Two-hundred and five Angus x Nelore cows, body condition scored 2,6±0,4 and post-partum period between 54 and 122 days. In the beginning of the experiment, forty cows were sampled to determine the ciclicity rate of the herd using ultrasound evaluation of ovaries. It was determined that 55% of the cows had ovarian cyclic activity. Cows of EW-AI (n= 53) were artificial inseminated according estrous detection after 10 days of definitive weaning in period of 30 days. In the group EW-FTAI (n= 50), cows were treated (Day 0) with a intravaginal implant containing 1,9g of Progesterone, for 8 days , and 2mg of Estradiol benzoate (EB), im, at the moment of definitive early weaning. When the dispositives were removed (Day 8), 75mcg of Cloprostenol were injected, im, and, after 24 hours (Day 9), 1mg of EB, im. Cows were fixed-time artificial inseminated 52 to 56 hours after implants removal (Day 10). In EW-FTAI10 group (n= 50), cows were treated with the same protocol of EW-FTAI, beginning 10 days after the definitive weaning to FTAI. In group EW-FTAI (n=52), cows were also treated with same hormonal therapy, but a temporary weaning was done after the implant removal to the FTAI moment. The breeding season was 60 days in EW-FTAI and TWFTAI groups, 50 days in EW-FTAI10 group an for 30 days in AW-AI group. A sampling of cows submitted to hormonal treatment (EW-FTAI= 10, EW-FTAI10= 10 and TW-FTAI= 10) had their ovaries scanned to determine the dominant follicle diameter at beginning of hormonal treatment (Day 0) and at FTAI moment (Day 10). The means of follicular diameters were not different (P>0,05) between groups at Day 0 (7,0±3,1mm; 8,1±1,9mm e 6,5±1,7mm) and at Day 10 (9,8±1,4mm; 12,5±1,2mm e 11,8±2,8mm). The pregnancy rates at AI were 57, 48, 48 and 46% and at the end of reproductive period were 77, 88, 68 and 78%, EW-AI, EW-FTAI, EW-FTAI10 and TW-FTAI respectively, without significance (P>0,05).

O experimento avaliou os efeitos de tratamentos alimentares (CN: campo nativo; CNS: campo nativo + suplementação; CNM: campo nativo melhorado) e grupos de peso (leves; médias; pesadas) no desempenho reprodutivo de novilhas aos 24/27 meses de idade. Houve diferença significativa (P<0,05) no ganho de peso, durante o período de inverno (0,261, 0,376 e 0,679 kg/dia) e no peso vivo ao início do período reprodutivo (302,8, 317,8 e 330,7 kg) para CN, CNS e CNM, respectivamente. Entre os tratamentos a taxa de prenhez (PR) não diferiu (88,3, 93,3 e 95,0%, respectivamente; P>0,05), entretanto, o CNM apresentou o menor intervalo início da reprodução-concepção (IRC) (30,5 dias; P<0,05), em relação ao CN e CNS (36,4 e 39,4 dias, respectivamente). Os GDM dos grupos de peso foram bastante semelhantes (0,600, 0,612 e 0,634 kg/dia), mantendo-se a diferença (P<0,05) de peso vivo entre os grupos ao início do período reprodutivo (299,6, 316,0 e 335,6 kg, para leves, médias e pesadas, respectivamente). As novilhas “pesadas” tiveram a maior PR (100%) e o menor IRC (29,86 dias; P<0,05). O grupo “leves” obteve PR de 91,6% e o maior IRC (39,83 dias), e o grupo “médias” 85,0% de PR e IRC de 36,8 dias (P>0,05). Durante o período pré e pós-parto foi avaliado a influência do nível nutricional (CNTP: campo nativo no período pré e pós-parto; CN/P: campo nativo no pré-parto e pastagem melhorada no pós-parto; P/CN: pastagem melhorada no pré-parto e campo nativo no pós-parto; PTP: pastagem melhorada no pré e pós-parto) no desempenho das vacas primíparas. Constatou-se menor peso vivo e condição corporal ao parto dos tratamentos CNTP e CN/P (384,3 kg e 3,31; 391,4 kg e 3,26), em relação ao P/CN e PTP (424,4 kg e 3,60; 421,2 kg e 3,59), respectivamente (P<0,05). Vacas primíparas do PTP obtiveram maior peso vivo e condição corporal ao início do acasalamento (442,1 kg e 3,76), taxa de prenhez (82,3%) e velocidade de concepção. O CN/P e o P/CN não diferiram (P>0,05) no peso vivo ao início do acasalamento (417,2 e 409,8 kg) e na taxa de prenhez (65,8% e 62,8%, respectivamente), entretanto, o CN/P apresentou o menor IRC. O menor peso ao início do acasalamento (391,2 kg), a menor taxa de prenhez (52,7%) e o maior IRC foi verificado no CNTP. O peso ao nascimento e o GDM dos terneiros (média 0,623 kg/dia), não foi influenciado pelos tratamentos (P>0,05). / The experiment evaluated the effects of feeding treatments (CN: native pasture; CNS: native pasture + supplementary feeding; CNM: improved pasture) and of liveweight groups (lights; mediums; heavies) on reproduction performance of heifers on service at 24/27 months of age. There was significant difference (P<0.05) on daily liveweight gain (GDM) at winter time (0.261, 0.376 e 0.679 kg/day) and on the liveweight at beginning of reproduction period (302.8, 317.8 e 330.7 kg) for CN, CNS and CNM, respectively. The pregnancy rate (PR) was not significant (88.3, 93.3 and 95.0%, respectively; P>0.05). However, CNM showed a lower interval between the beginning of the reproduction-conception (IRC) (30.5 days; P<0.05), than CN and CNS (36.4 and 39.4 days, respectively). The GDM of the groups were very similar (0.600, 0.612 and 0.634 kg/day), keeping the difference (P<0.05) of liveweight between groups at beginning of reproduction (299.6, 316.0 and 335.6 kg, for lights, mediums and heavies, respectively). “Heavies” heifers had higher pregnancy rate (100%) and a lower IRC (29.86 days; P<0.05). The “light” group had 91.6% of PR and higher IRC (39.83 days), and the “medium” group 85.0% of PR and IRC of 36.8 days (P>0.05). During the pre and post-calving period was evaluated the influence of the nutritional level (CNTP: natural pasture at pre and post-calving; CN/P: natural pasture at pre-calving and improved pasture at postcalving; P/CN: improved pasture at pre-calving and natural pasture at postcalving; PTP: improved pasture at pre and post-calving) on the performance of primiparous cows. It was observed lower liveweight and body condition at calving of the treatments CNTP and CN/P (384.3 kg and 3.31; 391.4 kg and 3.26) in relation to P/CN and PTP (424.4 kg and 3.60; 421.2 kg and 3.59), respectively (P<0.05). Primiparous cows of PTP gained more liveweight and body condition at start of reproduction (442.1 kg and 3.76), PR (82.3%) and velocity conception. The CN/P and P/CN did not shown differences (P>0.05) at liveweight beginning of reproduction period (417.2 and 409.8 kg) and at PR (65.8% and 62.8%, respectively), however, the CN/P showed a lower IRC. The lowest weight at beginning of reproduction (391.2 kg), the lowest pregnancy rate (52.7%) and the higher IRC was obtained at CNTP. The birth weight of the calves and their GDM (mean 0.623 kg/day) was not affected by the treatments (P>0.05).

Orientador: Francisco Guilherme Leite / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Rubens Paes Arruda / Resumo: A utilização da L-carnitina - ácido y-trimethilamino- ß-hidróxido butírico - visando melhorar os parâmetros espermáticos tem sido intensivamente utilizado em medicina humana e em menor escala em medicina veterinária com resultados satisfatórios. O objetivo deste estudo foi verificar a influência da suplementação oral de L-carnitina em sêmen criopreservado de garanhões. Utilizou-se neste experimento quatro garanhões submetidos a duas colheitas de sêmen por semana por um período de quatro semanas durante o mês de agosto de 2001; amostras se sêmen desses animais, agora denominado TO, foram criopreservadas. Os mesmos quatro garanhões receberam uma suplementação oral de quinze gramas de L-carnitina uma vez ao dia nos meses de maio, junho, julho e agosto de 2002 e no mês de agosto de 2002 foram submetidos a duas colheitas de sêmen semanais, tendo suas amostras também criopreservadas, que passaram a ser denominado tratado (T1). Foram analisados e comparados entre si os seguintes parâmetros espermáticos:- total de espermatozóides no ejaculado e integridade da membrana espermática e através de análise computadorizada as variáveis motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), velocidade de trajeto (VAP), velocidade progressiva (VSL) e velocidade curvilinear (VCL) antes e após da realização de um teste de termo-resistência (TTR). Foi realizado um delineamento casualizado com oito repetições (dois tratamentos e quatro garanhões); empregou-se análise de variância - ANOVA - com posterior desdobramento para estudar o efeito dos tratamentos em cada um dos garanhões - Teste de Tukey - o nível de significância adotado foi p<0,05... (resumo completo, clicar acesso no endereço eletrônico abaixo) / Abstract: Owing its positive effect on the improvement of spermatic parameters, L- carnitine - ?-trimethilamino- ß-hidroxid butiric acid - has been intensively utilized in human medicine and in a lower scale in veterinary medicine with satisfactory results. The objective of this study was to verify the influence of oral supplementation with L-carnitine on cryopreserved stallion semen. Four stallions were submitted to semen collection twice a week during a four week period in August of 2001. The collected samples from those horses were then cryopreserved and they were assigned as a control group (T0). The same horses received fifteen grams of L- carnitine by oral supplementation, once a day, during May, June, July and August of 2002, and then they were submitted to semen collection twice a week in August of 2002. Those collected samples were also equally cryopreserved, and assigned as treatment group (T1). The following spermatic parameters were analyzed and submitted to a pair wise comparison: total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity and by computer analyze, variables as: total motility (TM), progressive motility (PM), linearity (LIN), path velocity (VAP), progressive velocity (VSL), and track speed (VCL). Those variables were then determined before and after a term resistance test (TRT). A casual design was established using eight repetitions (two treatments and four stallions). To investigate the treatment effect, analysis of variance (ANOVA) was performed and to investigate de effect within stallion, the Tukey's test - significance level was established as p£ 0.05. The means and standard errors of means for the variable total motility, determined before and after the term resistance test, total sperm number in the ejaculate and sperm membrane integrity was significantly higher in the treatment group (T1) when compared to the control group (T0)... (complete abstract, access undermentioned eletronic address) / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antonio Dell'Aqua Júnior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A criopreservação de sêmen equino mostra-se como importante instrumento no ganho genético de rebanhos pela maximização do uso de bons reprodutores. Porém, nos programas de inseminação artificial, a utilização de espermatozóides criopreservados apresenta índices de fertilidade inferiores aos obtidos com sêmen a fresco, constituindo um dos maiores entraves à plena difusão dessa biotecnologia. Assim, o experimento 1 teve como objetivo avaliar o movimento espermático pelo sistema computadorizado (CASA) e a integridade da membrana plasmática por microscopia de epi-fluorescência de espermatozóides equino congelados em palhetas de 0,5 e 0,25 mL, em diferentes taxas de congelação na viabilidade espermática. Para desenvolver o projeto foram utilizadas três metodologias de congelação: o método convencional em caixa de isopor e dois equipamentos automatizados, um deles a máquina Mini Digitcool® (IMV - Technologies - França), que possibilita uma variação de -10ºC a -60ºC por minuto e o outro equipamento TK® 4000C (TK Equipamentos para Congelação) que possibilita uma variação de -10ºC a -40ºC por minuto. Para tanto foram utilizados 3 ejaculados de 4 garanhões de diferentes raças, para cada protocolo de congelação, sendo o protocolo 1: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -20ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -20ºC/min; protocolo 2: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -40ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -40ºC/min e protocolo 3: caixa de isopor x máquina TK® 4000C na taxa de -40ºC/min x máquina Mini Digitcool® na taxa de -60ºC/min. Para a análise pós-descongelação as palhetas de 0,5 mL foram descongeladas a 46ºC por 20 segundos e as palhetas de 0,25 mL a 46ºC por 15 segundos. A análise estatística das variáveis estudadas no sêmen congelado/descongelado foi realizada mediante o pacote... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Equine semen cryopreservation comes as an important tool to enhance the herd gene pool by maximizing the use of the top genetic merit stallions. However, the use of frozen semen in the artificial insemination programs presents reduced fertility rates in comparison to those obtained with fresh semen, being one of the biggest hindrances to spread this biotechnology. Thus, Experiment 1 aimed to evaluate the motility pattern using a computer-assisted sperm analysis (CASA) and plasma membrane integrity by epifluorescence microscopy of equine semen that were frozen in 0.5 and 0.25mL straws at different freezing rates and their relationship with sperm viability. Three different methodologies were used: conventional method with isothermic box and two automated systems: the Mini Digitcool® machine (IMV - Technologies - France), which allows a range from -10oC to -60oC per minute, and the TK® 4000C (TK Equipamentos para Congelação, Brazil), that provides a range from -10ºC to -45ºC per minute. Therefore 3 ejaculates for 4 animals were used for each freezing protocol. On protocol 1 we compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -20ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -20ºC/min rate; Protocol 2 compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -40ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -40ºC/min rate; and Protocol 3 compared isothermic box vs. TK® 4000C machine at a -40ºC/min rate vs. Mini Digitcool® at a -60ºC/min rate. The 0.5mL-straw samples were thawed at 46oC/20 sec whereas samples from the 0.25mL straws were thawed at 46oC/15 sec for post-thawing analysis. Statistical analysis from the frozen-thawed semen evaluated parameters was performed using the statistics software SAS 9.1. At first, it was used the descriptive analysis Box Plot R program. Then, data were analyzed using Proc. MIXED, a variance analysis to investigate the treatment effect (freezing rates and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lindsay Unno Gimenes / Coorientador: Fabio Morato Monteiro / Coorientador: Moyses dos Santos Miranda / Coorientador: Rinaldo Batista Viana / Banca: Marcílio Nichi / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A criopreservação provoca injúrias aos espermatozoides e necessita de métodos que minimizem esses danos. Embora seja bastante discutida, a remoção do plasma seminal tornou-se uma alternativa para melhorar a qualidade e viabilidade espermática após a congelação e vem sendo utilizada em outras espécies na tentativa de obter bons resultados. O objetivo deste estudo foi comparar a remoção do plasma seminal de bubalinos tanto por filtragem (SpermFilter®) quanto por centrifugação sobre a qualidade do sêmen descongelado de búfalos. Foram utilizados sete touros da raça Murrah, os quais foram submetidos à colheita de sêmen por vagina artificial uma vez por semana. Os ejaculados foram diluídos com Botu-Bov® e fracionados em alíquotas para confrontar três técnicas antes da congelação: grupo C (Criopreservação convencional com plasma seminal), grupo CE (Criopreservação removendo o plasma seminal por centrifugação) e grupo F (Criopreservação removendo o plasma seminal por filtragem). O sêmen fresco foi analisado quanto ao volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), turbilhonamento, motilidade progressiva, vigor e morfologia espermática. No sêmen descongelado, foram avaliados a cinética espermática pelo CASA, a integridade de membrana plasmática, acrossoma, potencial de membrana mitocondrial e quantificação de EROs por citometria de fluxo e, adicionalmente, foi estimado o grau de peroxidação lipídica pela técnica de TBARS. Os resultados revelam que a remoção de plasma seminal ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryopreservation promotes injury to sperm and methods to minimize such damage are necessary. Although much discussed, removal of seminal plasma that has been successfully used in other species has become an alternative for improving sperm quality and viability after freezing. The aim of the present study was compare to removal seminal plasma in buffalo both by filtering (SpermFilter®) and by centrifugation on the quality frozen thawed buffalo semen. For this purpose, semen of seven Murrah buffalo-bulls, which were submitted to semen collection by artificial vagina once a week. The samples were diluted with Botu-Bov® and were fractionated in aliquots to confront three techniques before freezing: C group (conventional cryopreservation with seminal plasma), CE group (cryopreservation removing the seminal plasma centrifuge) F group (Cryopreservation removing the seminal plasma with Sperm Filter®). Fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), gross motility, progressive motility, vigor and sperm morphology. In the thawed sperm, sperm kinetics was evaluated by CASA, plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and estimation of the levels of reactive oxygen species were assigned by flow cytometry and was estimated degree of lipid peroxidation by TBARS technique. The results show that the removal seminal plasma did not improve sperm kinetics, mitochondrial membrane potential and does not modify the degree of l... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Maurício Macham Franco / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da alta ou baixa ingestão alimentar na produção in vitro de embriões e na função ovariana em bovinos. Vinte vacas aneloradas não lactantes com ECC de 2,9 (1 a 5) e pesando 410,5 kg ficaram 14 dias em adaptação à dieta de manutenção. Em seguida, foram divididas aleatoriamente em dois grupos experimentais recebendo dietas de 170% (alta ingestão) ou 66% (baixa ingestão) em relação à manutenção durante 56 dias. Com 21 dias nas dietas experimentais, as vacas tiveram o estro sincronizado para posterior avaliação dos ovários e coleta de sangue diariamente até seis dias após a ovulação. Dosagens de progesterona foram realizadas no Dia 7 do ciclo estral, de estradiol, IGF-I, FSH e insulina no período peri-ovulatório, além de avaliação de FSH e insulina no início das aspirações. Entre 7 e 10 dias após o estro, todos os folículos com diâmetro acima de 5 mm foram aspirados através de ultra-sonografia transvaginal e as vacas receberam aplicação de cloprostenol, além da colocação de um implante auricular de norgestomet. Quatro dias após, as vacas foram submetidas à aspiração folicular seriada (intervalo de 3 e 4 dias). Os ovócitos coletados foram classificados, maturados, fecundados in vitro e incubados por 7 dias. Os embriões de qualidade I foram submetidos a avaliação de expressão gênica para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of high or low feed intake on in vitro embryo production and on ovarian function in zebu cows. Twenty nonlactating zebu cows with body condition 2.9 (1 a 5) and weighing 410.5 kg received maintenance diet during 14 days. After this, they were randomly divided into two groups that received 170% (high feed intake) or 66% (low feed intake) of the maintenance diet during 56 days. Within 21 days on the experimental diets, the cows had estrus synchronized to posterior evaluation of the ovaries and daily blood samples collection until six days after ovulation. Evaluation of serum progesterone was realized on Day 7 of the estrus cycle, of estradiol, IGF-I, FSH and insulin was determined at the periovulatory period, and the evaluation of FSH and insulin at the beginning of aspiration. Between 7 and 10 days after estrus, all follicles with diameter above 5mm were aspirated by transvaginal ultrasound and the cows received... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: Luciano Andrade Silva / Banca: Frederico Ozanam Papa / Resumo: Os agentes indutores de ovulação são rotineiramente utilizados na reprodução eqüina, em especial quando da aplicação de biotecnologias. A fim de reduzir custos e otimizar seus resultados, esta dissertação teve como objetivos avaliar o efeito de novos protocolos sobre a indução e sincronização de ovulação, grau de edema endometrial, bem como taxa de desenvolvimento e diâmetro folicular. Foram utilizadas 145 éguas da raça Campolina, entre três e 14 anos, em dois Haras de Conselheiro Lafaiete - MG, Brasil. Na presença de um folículo ≥30mm e de edema endometrial, no mínimo, grau 2 (0-5), as éguas foram randomicamente separadas em grupos e tratadas no dia seguinte (Hora 0) com: 1,0mg de deslorelina (I.M.) (G1; n=20); 0,5mg de deslorelina (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI de hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI de hCG (I.V.) (G4; n=20); 1,0mg de deslorelina (I.M.) e 2.000UI de hCG (I.V.) (G5; n=15); 0,5mg de deslorelina (I.M.) e 750UI de hCG (I.V.) (G6; n=10); 10,0mg de ECP (I.M.) (G7; n=10) e, por fim, 1,0mg de deslorelina (I.M.), após pré-tratamento com 10,0mg de ECP (I.M.) no dia anterior (G8; n=10). Vinte éguas não foram tratadas, utilizadas como controle (GC; n=20). As avaliações ultra-sonográficas diárias foram conduzidas até a ovulação (D0) ou Hora 120, o que ocorresse primeiro. A análise estatística valeu-se do Statistical Analysis System (SAS). A taxa de ovulação entre 24 e 48 horas da indução nos grupos G1 ao G6 foi similar estatisticamente, maior ou igual a 75%. No G7, esta foi de 20%, inferior (P<0,01) à obtida no G1 ao G6. Verificou-se taxa de 40% no G8, menor (P<0,01) que a do G5 e G6 (de 100%) e similar aos demais. O ECP não foi capaz de induzir ou sincronizar as ovulações. Não houve benefício do pré-tratamento com ECP em éguas induzidas com deslorelina. O edema endometrial foi maior na Hora 0 em comparação ao momento em que a ovulação ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ovulation inductors are routinely used in the equine species, especially when modern reproductive technologies are applied. In order to reduce costs and optimize their results, the present study aimed to evaluate the effect of new treatment protocols on ovulation induction and synchronization, endometrial edema as well as follicular diameter and development rate. One hundred and forty-five Campolina breed mares, aging three to 14 years, from two Studs in Conselheiro Lafaiete - MG, Brazil, were used. Prostaglandin-induced estrous mares showing one follicle ≥30mm and at least grade 2 (0-5) endometrial edema were randomly assigned to different groups and treated, at the following day (Hour 0), with either: 1.0mg of deslorelin (I.M.) (G1; n=20); 0.5mg of deslorelin (I.M.) (G2; n=20); 2.000UI of hCG (I.V.) (G3; n=20); 750UI of hCG (I.V.) (G4; n=20); 1.0mg of deslorelin (I.M.) and 2.000UI of hCG (I.V.) (G5; n=15); 0.5mg of deslorelin (I.M.) and 750UI of hCG (I.V.) (G6; n=10); 10.0mg of ECP (I.M.) (G7; n=10) and 1.0mg of deslorelin (I.M.), 24 hours post-injection with 10.0mg of ECP (I.M.) (G8; n=10). Twenty mares served as control (GC; n=20). Ultra-sonography was daily performed until ovulation (D0) or Hour 120, whichever occurred first. Data was evaluated through the Statistical Analysis System (SAS). Ovulation rate between 24 and 48 hours post-induction in groups G1 to G6 was ≥75% and statistically similar (P>0.05). Ovulation rate in G7 was 20%, lower (P<0.01) than in G1 to G6. G8 showed a 40% rate, which was lower (P<0.01) than G5 and G6 and similar to the remaining groups. ECP treatment was unable to induce or synchronize ovulations. Deslorelin-induced mares did not benefit from pre-treatment with ECP. Higher endometrial edema scores were identified at Hour 0 compared to the moment an ovulation was detected, when G1 to G6 showed higher (P<0.01) edema scores than control. Used ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre