O uso da tecnologia de DNA recombinante abre portas para um estudo detalhado da estrutura e função de proteínas, e a produção de proteínas recombinantes em sistema procarioto apresenta várias vantagens. A presente tese propõe a expressão heteróloga das proteínas aSFP, proteína ácida do fluido seminal bovino de 14 kDa, e osteopontina (OPN) de 55 kDa, relacionadas à congelabilidade do sêmen. Foram construídas bibliotecas de cDNA de vesícula seminal, próstata e glândula bulbouretral. Oligonucleotideos iniciadores foram sintetizados baseados nas seqüências disponíveis no GenBank (aSFP: número de acesso NM_174616, OPN: número de acesso M66236). Os amplicons resultantes das reações de PCR foram clonados em pET23a(+). Os plasmidios pET-aSFP e pET-OPN foram transformados em linhagens eletrocompetentes de E. coli BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. Para expressão das proteínas recombinantes foram testadas diferentes concentrações de indutor de expressão IPTG, e diferentes tempos e temperaturas de indução. A expressão recombinante foi avaliada por SDS-PAGE, usando como controle cultivo não induzido. Das cinco linhagens transformadas com pET-aSFP, somente E. coli BL21 pLysS induzida com 0,5 mM de IPTG por 3 horas a 37°C apresentou uma banda de aproximadamente 15 kDa, compatível com o tamanho esperado de aSFPr-6xHis. Por cromatografia de afinidade com metal imobilizado em condições desnaturantes foi possível um rendimento de purificação de 2,5mg/mL de aSFPr-6xHis por 10 mL de cultura bacteriana. Contudo, a expressão de OPNr-6xHis, também obtida com a linhagem de E. coli BL21 pLysS, foi de baixa eficiência, o que não permitiu sua purificação. A produção recombinante de proteínas do plasma seminal é uma das mais novas ferramentas para o estudo de suas funções. O aperfeiçoamento dos processos de expressão e purificação é fundamental no desenvolvimento desta biotecnologia, que possui grande potencial terapêutico e diagnóstico. / The use of recombinant DNA technology makes possible a deeper investigation on protein structure and function. Also the production of recombinant proteins has several advantages. The present thesis presents the recombinant expression of the 14 kDa acidic seminal fluid protein (aSFP) and osteopontin (55 kDa), both associated with bovine semen freezability. cDNA libraries from prostate, seminal vesicle and bulbouretral gland were constructed, and primers were designed based on data available on Genebank (aSFP: access number NM_174616; OPN: access number M66236). Amplicons of the target genes were cloned into pET23a(+), and the constructs pET-aSFP and pET-OPN were transformed into electrocompetent E. coli strains: BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. For the expression trials, different concentrations of IPTG were tested, as well several different expression induction conditions. The recombinant expression was analyzed by SDS-PAGE and western blotting. The best expression for aSFPr-6xHis (15 kDa) was obtained with the strain BL21 pLysS, induced with 0.5 mM IPTG in 3 hours at 37°C. The target protein was purified by immobilized metal ion chromatography in denaturing conditions with a yield of 2.5 mg/mL per 10 mL of bacterial culture. The recombinant expression of OPNr-6xHis was also possible with the pLysS strain, however in a lower efficiency. The low amount of recombinant OPN did not allow its purification. The production of seminal plasma recombinant proteins is a new tool for the study of its functions. The improvement of expression and purification processes is important for this biotechnology which has a great potential for therapeutic and diagnose applications.

O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência reprodutiva de vacas de corte com cria ao pé em programas de inseminação artificial (IA), utilizando práticas de desmame definitivo antecipado (DA) ou temporário e terapia de sincronização de estros para IATF. Foram utilizadas 205 vacas Angus x Nelore, com escore de condição corporal de 2,6±0,4 (escala de 1 a 5) e período pósparto variando de 54 e122 dias. No início do estudo, determinou-se, em uma amostragem de 20% das vacas, a taxa de aciclia de 55%, através da avaliação da função ovariana por ultra-sonografia e formaram-se quatro grupos experimentais. As vacas do grupo DA-IA (n= 53) foram inseminadas a partir do 10º dia após o desmame definitivo antecipado, de acordo com a observação de estros por 30 dias. No grupo DA-IATF (n= 50), as vacas foram tratadas (Dia 0) com um dispositivo intravaginal contendo 1,9g de Progesterona, por 8 dias, 2mg de Benzoato de estradiol, im, no desmame definitivo antecipado, 75mcg de Cloprostenol, im, na retirada do implante (Dia 8) e 1mg de Benzoato de estradiol, im, 24 horas após (Dia 9). A IATF foi realizada entre 52 a 56 horas após a retirada do dispositivo (Dia 10). Nas vacas do grupo DA-IATF10, (n= 50), aplicou-se o mesmo tratamento do grupo DA-IATF, iniciando-se 10 dias após o desmame definitivo, seguindo o mesmo protocolo para a IATF. No grupo DT-IATF, (n= 52), utilizou-se o tratamento usado para DA-IATF e DAIATF 10, realizando-se desmame temporário dos terneiros por 48 horas, entre a retirada do implante e a IATF. O período de monta natural foi de 60 dias para DA-IATF e DT-IATF, de 50 dias para DA-IATF10 e de 30 dias para o DAIA. Uma amostragem das vacas submetidas à sincronização de estros para IATF (DA-IATF, n= 10; DA-IATF 10, n= 10 e DT-IATF, n= 10) foi, examinada por ultra-sonografia para a determinação dos diâmetros dos folículos dominantes no início do tratamento hormonal (Dia 0) e no momento da IATF (Dia 10). As médias dos diâmetros foliculares não apresentaram diferença significativa (P>0,05) no Dia 0 (7,0±3,1mm; 8,1±1,9mm e 6,5±1,7mm) e no Dia 10 (9,8±1,4mm; 12,5±1,2mm e 11,8±2,8mm) para DA-IATF, DA-IATF 10 e DTIATF, respectivamente. As taxas de prenhez na IA foram 57, 48, 48 e 46% e ao final do período reprodutivo foram de 77, 88, 68 e 78% para DA-IA, DA-IATF, DA-IAF 10 e DT-IATF, respectivamente, não apresentando diferença significativa (P>0,05). / The objective of this experiment was to determine the reproductive performance of suckled beef cows in programs of artificial insemination (AI) submitted to definitive early or temporary weaning and estrous synchronization protocol to fixed-time AI (FTAI). Two-hundred and five Angus x Nelore cows, body condition scored 2,6±0,4 and post-partum period between 54 and 122 days. In the beginning of the experiment, forty cows were sampled to determine the ciclicity rate of the herd using ultrasound evaluation of ovaries. It was determined that 55% of the cows had ovarian cyclic activity. Cows of EW-AI (n= 53) were artificial inseminated according estrous detection after 10 days of definitive weaning in period of 30 days. In the group EW-FTAI (n= 50), cows were treated (Day 0) with a intravaginal implant containing 1,9g of Progesterone, for 8 days , and 2mg of Estradiol benzoate (EB), im, at the moment of definitive early weaning. When the dispositives were removed (Day 8), 75mcg of Cloprostenol were injected, im, and, after 24 hours (Day 9), 1mg of EB, im. Cows were fixed-time artificial inseminated 52 to 56 hours after implants removal (Day 10). In EW-FTAI10 group (n= 50), cows were treated with the same protocol of EW-FTAI, beginning 10 days after the definitive weaning to FTAI. In group EW-FTAI (n=52), cows were also treated with same hormonal therapy, but a temporary weaning was done after the implant removal to the FTAI moment. The breeding season was 60 days in EW-FTAI and TWFTAI groups, 50 days in EW-FTAI10 group an for 30 days in AW-AI group. A sampling of cows submitted to hormonal treatment (EW-FTAI= 10, EW-FTAI10= 10 and TW-FTAI= 10) had their ovaries scanned to determine the dominant follicle diameter at beginning of hormonal treatment (Day 0) and at FTAI moment (Day 10). The means of follicular diameters were not different (P>0,05) between groups at Day 0 (7,0±3,1mm; 8,1±1,9mm e 6,5±1,7mm) and at Day 10 (9,8±1,4mm; 12,5±1,2mm e 11,8±2,8mm). The pregnancy rates at AI were 57, 48, 48 and 46% and at the end of reproductive period were 77, 88, 68 and 78%, EW-AI, EW-FTAI, EW-FTAI10 and TW-FTAI respectively, without significance (P>0,05).

O objetivo do experimento foi determinar as taxas de sobrevivência pós vitrificação de blastocistos murinos (experimento 1) expostos à duas associações de crioprotetores e envasados em micropipetas de quartzo (QMC) ou de vidro (GMP) e, (experimento 2) comparar as taxas de sobrevivência obtidas na vitrificação dos embriões envasados em QMC de dois diâmetros internos (0,1 mm ou 0,2 mm). No experimento 1, blastocistos murinos coletados no dia 4 de desenvolvimento foram selecionados morfologicamente e divididos aleatoriamente em seis grupos. Grupo 1 (Controle 1): embriões colocados em cultivo imediatamente após a coleta. Grupo 2: embriões expostos a 10% PROH + 10% EG + 0,5% PVA em PBSm (ES1) por 1 min e em seguida expostos a 20% PROH + 20% EG + 0,5% PVA em PBSm (VS1) por no máximo 30 seg, período em que foram envasados em QMC. Grupo 3: idem ao Grupo 2 com envase em GMP. Grupo 4: embriões expostos a 10% DMSO + 10% EG + 0,5% PVA em PBSm (ES2) por 1 min e em seguida expostos a 20% DMSO + 20% EG + 0,5% PVA em PBSm (VS2), por no máximo 30 seg, período em que foram envasados em QMC. Grupo 5: idem ao grupo 4 com envase em GMP. Após a exposição às soluções de vitrificação, os capilares foram imediatamente imersos em N2 líquido. Grupo 6 (Controle 2): embriões não vitrificados colocados em cultivo somente após o final dos procedimentos dos grupos tratados. No segundo experimento, a exemplo do primeiro, foram formados os seguintes grupos: Grupo 1 (controle 1): embriões colocados em cultivo imediatamente após a coleta; Grupo 2: embriões envasados em QCM de 0,1mm de diâmetro; Grupo 3: embriões envasados em QCM de 0,2mm de diâmetro; Grupo 4 (controle 2): embriões não vitrificados colocados somente após o término da vitrificação. Para vitrificação foi utilizado o tratamento 4 do experimento 1. Nos dois experimentos, os embriões vitrificados foram reaquecidos pela exposição a 0,25M de sacarose em PBSm, a 37°C, durante 5min para a retirada do crioprotetor. Após, os embriões foram transferidos para o cultivo in vitro em meio KSOM durante 72h. As taxas de eclosão dos blastocistos nos grupos do experimento 1 foram: G1: 83,07% (54/65), G2: 47,3% (23/49), G3: 38,4% (20/52), G4: 60,4% (29/48), G5: 41,1 (21/51), G6: 77,4% (55/71). No segundo experimento, as taxas de eclosão dos blastocistos foram: G1: 82,5% (33/40), G2: 55,3% (17/31), G3: 58,5% (22/38), G4: 82,0% (41/50). Os resultados observados nos experimentos mostraram que não houve diferença significativa na taxa de eclosão entre os grupos experimentais, entretanto, todos foram inferiores (P>0,05) aos controles. As soluçõesutilizadas, os GMP e os dois diâmetros do QCM testados permitiram que blastocistos murinos vitrificados apresentassem taxas de sobrevivência in vitro semelhantes entre si. / The aim of the experiment was to determine the survival rates after vitrification of mice blastocysts exposed to two different associations of cryoprotectants and loaded in quartz microcapillaries (QCM) or glass microcapillaries (GMP) and, later, to compare the embryo survival rates obtained with murine blastocysts loaded into QMC with two internal diameters (0.1 mm or 0.2 mm). In experiment 1, the murine blastocysts were collected on day 4 of development and morphologically selected and randomly divided into six groups. Group 1 (control 1): not vitrified blastocysts cultured into KSOM drops immediately after collection. Group 2: embryos exposed for 1 minute at 10% PROH, 10% EG, 0.5% PVA in PBSm(ES1) and after exposed to 20% PROH, 20% EG, 0.5% PVA in PBSm (VS1) within 30 seconds, then loaded in QMC. Group 3: the same to group 2 however loaded in GMP. Group 4: exposed to 10% DMSO, 10% EG, 0.5% PVA in PBSm(ES2) and after exposed to 20% DMSO, 20% EG, 0.5% PVA in PBSm(VS2), loaded in QMC. Group 5: the same to group 4 however loaded in GMP. After exposure to vitrification solutions, the capillaries were immediately immersed in LN2. Group 6 (Control 2): not vitrified embryos placed in culture only after the end of vitrification of the treated groups. The second experiment consisted of the following groups: Group 1 (control 1) embryos transferred to culture immediately after collection; Group 2: embryos loaded in QCM with 0.1 mm internal diameter, and Group 3: embryos loaded in QCM with 0.2 mm internal diameter diameter, and Group 4 (control 2): not vitrified embryos placed in culture only after the end vitrification procedures. Groups 2 and 3 were exposed to ES2 and VS2 and later loaded in QMC 0.1 or 0.2 mm in diameter, immediately immersed in LN2. Blastocysts were warmed by exposure to 0.25 M sucrose in PBSm at 37 °C for 5min to remove the cryoprotectant. After warming, the embryos were transferred to 100 μL drops of KSOM during 72 hours. Hatching rates were observed in groups of experiment 1 were: G1: 83.07% (54/65), G2: 47.3% (23/49), G3: 38.4% (20/52), G4: 60.4% (29/48), G5: 41.1 (21/51), G6: 77.4% (55/71). In the second experiment, the blastocyst hatching rates were: G1: 82.5% (33/40), G2: 55.3% (17/31), G3: 58.5% (22/38), G4: 82% (41/50). The results observed in both experiments showed no significant difference in embryo hatching rates among the experimental groups, but all were inferior (P>0.05) to controls. The vitrification solutions used, the GMP and the QCM at two diameters tested provided similar embryo survival rates.

A inseminação intra-uterina (IAU) permite reduzir o número de espermatozóides e o volume de diluente em comparação à inseminação tradicional. No entanto, a técnica ainda apresenta algumas limitações a serem superadas para que seja uma alternativa de diminuição dos custos de cobertura. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho reprodutivo de 423 fêmeas suínas de ordem de parto 1 a 9 submetidas à inseminação intra-uterina (IAU), com um novo modelo de pipeta (T1) cuja extremidade não é fixada na cérvix ou uma pipeta de IAU modelo Verona® e que permite a fixação da sua extremidade em espiral na cérvix (T2). Para comparar as duas pipetas foi considerado o grau de dificuldade para realização das inseminações, o tempo necessário para realizálas, presença de sangramento após a inseminação, a presença de refluxo no momento da inseminação, as taxas de retorno ao estro (TR), de prenhez (TPR) e de parto ajustada (TPA), além do número de leitões nascidos (NT). As fêmeas de ambos os grupos foram inseminadas com doses de 1 bilhão de espermatozóides, em intervalos de 24 horas. A passagem do cateter de IAU através da cérvix foi possível em 95,9% das fêmeas, sem diferença entre os tratamentos (P>0,05). Em pelo menos uma das inseminações, foi observado sangue no cateter, após a realização da IAU, em 20,6% das fêmeas do T1 e 15,2% das fêmeas do T2 (P=0,14). O tempo médio necessário para realizar a inseminação foi de 2,1 minutos para o T1 e 2,3 minutos para o T2 (P=0,26). O percentual de fêmeas com refluxo de sêmen no momento da inseminação foi maior (P=0,01) no T1 (8,4%) em comparação ao T2 (2,9%). Não houve diferença (P>0,05) nas variáveis TR (8,0 e 4,8%), TPR (93,4 e 96,2%) e NT (12,4 e 12,7 leitões) entre T1 e T2, respectivamente. A TPA do T1 (90,6%) apresentou tendência (P=0,07) de ser inferior à do T2 (95,1%). No T1, as fêmeas primíparas apresentaram maior TR e menor TPA em comparação às pluríparas (P<0,05). Os resultados mostram que a nova pipeta pode ser utilizada sem prejuízos ao desempenho reprodutivo, em fêmeas pluríparas, mas sugerem cautela para sua utilização em fêmeas primíparas.

MANSO, Helena Emília Cavalcanti da Costa Cordeiro. Avaliação da glutamina sintetase e da concentração da glutamina no terço final da gestação e na lactação de camundongos fêmeas e matrizes suínas primíparas. 2006. 106 f. Tese (doutorado em zootecnia)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2006. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-04-07T20:30:52Z No. of bitstreams: 1 2006_tese_hecccmanso.pdf: 2703402 bytes, checksum: 12ef7f4302a4af1a6a8de3b3cfed3d9e (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-05-25T19:50:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_tese_hecccmanso.pdf: 2703402 bytes, checksum: 12ef7f4302a4af1a6a8de3b3cfed3d9e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-25T19:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_tese_hecccmanso.pdf: 2703402 bytes, checksum: 12ef7f4302a4af1a6a8de3b3cfed3d9e (MD5) Previous issue date: 2006 / The glutamine (Gln), a non-essential amino acid, normally it isn’t included in the animal feed. The metabolic properties of glutamine made it an essential conditionally amino acid during stress and catabolism, when the body has no ability to attend the nutritional requirements. The present research was divided in two parts; the first one had the objective to characterize the glutamine (Gln) and the glutamine synthetase (GS) during lactation of primiparous mice and the second one, the aim was to evaluate the effects of glutamine supplementation, given in two forms, pure (L-glutamine) and in association with glutamic acid (AminoGut® by Ajinomoto) for primiparous gilts. In the first experiment was characterized the importance of GS and Gln, and the important role on the animal metabolism during a catabolism. In the second experiment was demonstrated the importance of Gln to maintain the gilt health. More studies should have to establish the adequate level of Gln supplementation and to evaluate the reproductive performance of gilts as well as the piglets development after weaning. / A glutamina (Gln), aminoácido por ser não-essencial, não é tradicionalmente incluído nas rações animais. As propriedades metabólicas da Gln fazem dela um aminoácido condicionalmente essencial em períodos de estresse e catabolismo, quando o organismo não tem a habilidade de suprir em tempo hábil sua demanda nutricional. A presente pesquisa foi dividida em 2 partes, a primeira delas teve por objetivo de avaliar o metabolismo da glutamina (Gln) e da glutamina sintetase (GS) no período lactacional de camundongos fêmeas primíparas, a segunda parte teve o objetivo de avaliar os efeitos da suplementação da Gln na dieta, fornecida em 2 formas, uma delas, pura (L-glutamina) e uma outra associada ao ácido glutâmico (AminoGut® Ajinomoto) para matrizes suínas primíparas. No primeiro experimento caracterizou-se a importância da GS e da Gln e evidenciou-se o seu importante papel no metabolismo, quando o animal se encontrava em catabolismo. No segundo experimento, a glutamina mais uma vez demonstrou sua importância na manutenção da higidez da matriz. Mais estudos devem ser feitos no intuito de estabelecer níveis adequados de suplementação e de avaliar a subsequente performance reprodutiva de matrizes suínas assim como o desempenho dos leitões após o desmame.

O estudo de adaptações deve levar em conta que a forma das características dos organismos afeta os desempenhos de mais de uma função, sendo, portanto, modificada por mais de uma pressão seletiva. Estas diferentes demandas podem ser conflitantes, como no caso da seleção convergente para mimetismo contra a seleção divergente para o isolamento reprodutivo. As borboletas Heliconius utilizam o padrão de coloração de advertência das asas também para o reconhecimento de parceiros, o que acaba por gerar um conflito de sinais em potencial quando duas ou mais espécies simpátricas compartilham seu padrão. Neste trabalho, as cores das asas de três espécies de Heliconius e de alguns co-mímicos do Sul do Brasil são investigadas através de duas abordagens: uma físico-sensorial, a fim de se caracterizar as diferenças entre cores co-miméticas em termos de discriminabilidade por diferentes tipos de visão, incluindo borboletas e aves; e uma etológica experimental, avaliando a eficácia da coloração das asas como sinal de reconhecimento específico. Uma terceira abordagem procurou caracterizar e comparar a corte das três espécies de Heliconius a fim de se explorar mecanismos adicionais de reconhecimento específico e possíveis relações com a convergência mimética. As análises físico-sensoriais deram suporte à hipótese recente de diferenças crípticas nas cores como um possível sinal privado de comunicação para as Heliconius, mas os testes comportamentais contrariaram esta expectativa, revelando um alto grau de interferência reprodutiva entre co-mímicos, além de um grau moderado entre não mímicos. A análise comparada da corte sugeriu uma influência maior do mimetismo do que da filogenia sobre a semelhança entre padrões comportamentais. Propomos que esta relação se dê indiretamente através da convergência morfológica na forma das asas e no comportamento de voo entre co-mímicos. / The study of adaptation should take into account that the form of characteristics in organisms affects the performance of more than one function, and therefore are modified by more than one selective pressure. These various demands can be conflicting, as in the case of convergent selection for mimicry against divergent selection for reproductive isolation. The Heliconius butterflies use the advertising wing color pattern also for mate recognition, which ultimately generates a potential signal conflict when two or more sympatric species share its pattern. In this work, the wing colors of three species of Heliconius and some co-mimics from Southern Brazil are investigated through two approaches: a physical-sensory, in order to characterize the differences between co-mimetic colors in terms of discriminability by different types of view, including butterflies and birds; and an experimental ethological, evaluating the effectiveness of wing coloration as a specific recognition signal. A third approach aimed to characterize the courtship of the three species of Heliconius in order to explore additional mechanisms of specific recognition and possible relations with mimetic convergence. The physical-sensory analyzes supported the recent hypothesis of cryptic differences in color as a possible private communication signal for Heliconius, but behavioral tests contradicted this expectation, revealing a high degree of reproductive interference between co-mimics, and in addition a moderate degree between non-mimics. The comparative analysis of the courtship suggested a greater influence of mimicry than phylogeny on the similarities between behavioral patterns. We propose that this relationship happens indirectly through morphological convergence in the wings shape and flight behavior between co-mimics.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:57Z : No. of bitstreams: 1 000860413_20170910.pdf: 230352 bytes, checksum: 018e667c9aa92dfab87506346c37b2be (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-11T13:56:01Z: 000860413_20170910.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-11T13:56:50Z : No. of bitstreams: 1 000860413.pdf: 1309321 bytes, checksum: 5ddda6b6b143e0c96151c41cdd3f86a3 (MD5) / Embriões produzidos in vitro (PIV) apresentam baixa sobrevivência aos métodos convencionais de criopreservação. Na tentativa de melhorar a produção e taxa de sobrevivência embrionária após a vitrificação foram utilizados reguladores metabólicos L-carnitina (CA), Forskolina (FO) e Ácido linoleico conjugado trans-10; cis-12 (CLA), separadamente ou em associação em diferentes doses, à partir do quarto (D4) ou sexto (D6) dia do cultivo de desenvolvimento embrionário. No experimento 1 o uso de 2,5 mM de CA influenciou positivamente na produção (62,0±12,5%, P=0,02), expansão (60,7%, P=0,009) e eclosão (41,1%, P=0,04). No experimento 2, a produção de embriões não foi influenciada pela suplementação com FO (P=0,2), entretanto, a dose de 15,0μM afetou positivamente a expansão (53,2%, P=0,001) e eclosão (46,8%, P0,001). No experimento 3, a produção de embriões não foi influenciada pela suplementação do meio de cultivo com CLA (P=0,4), no entanto a dose de 150,0 μM afetou positivamente a expansão (85,5%, P=0,001) e eclosão (70,9%, P=0,001) dos embriões reaquecidos e cultivados por 48 horas. No experimento 4, a associação dos reguladores de metabolismo lipídico utilizados não influenciou a produção de embriões (P=0,16), entretanto o melhor resultado de produção observado foi no tratamento com 15,0 μM de FO individualmente. As taxas de expansão e eclosão foram influenciadas pela suplementação com reguladores de metabolismo adicionados individualmente ou em associação (P=0,001). A melhor taxa de expansão foi observada na suplementação associando CA+FO+CLA, com 90,05%, que não diferiu (P>0,05) da suplementação com CLA (86,4) e da associação CA+CLA (87,9%). Entretanto, a melhor taxa de eclosão foi obtida com CLA (71,8%, P=0,01), superior aos demais tratamentos. Foi concluído que o uso dos... / Embryos produced in vitro (IVP) have low survival to conventional cryopreservation methods. In attempt to improve the production and the rate of embryo survival to the cryopreservation process, was used the metabolic regulators, L-carnitine (CA), forskolina (FO) and the conjugated linoleic acid isomers trans-10, cis-12 (CLA), separately or in combination in different doses, starting the fourth (D4) or sixth (D6) days of the embryo culture development in vitro. In experiment 1, the best results of production (62,0 ± 12,5%, P = 0,02), expansion (60,7%, P = 0,009), and hatching (41,1 % P = 0,04) was obtained using 2,5 mM of CA. In experiment 2, the production of embryos was not influenced by supplementation with FO (P=0,2), however, the dose of 15,0μM was the best result of expansion (53,2%) and hatching (46,8%) (P=0,001). In experiment 3, the production of embryos was not influenced by supplementation with CLA (P=0,4), however, the dose of 150,0 μM resulted in higher rates of expansion (85,5%, P=0,001) and hatching (70,9%, P=0,001). In the experiment 4, the embryo production was not influenced by the supplementations (P=0,16), however the best result of the production was using 15,0μM of FO individually. The expansion and hatching rates was influenced by supplementation with the metabolism regulators added individually or in a combination (P=0,001). The best expansion rate was observed with the association CA+FO+CLA (90,05%), that was not different (P>0,05) of the CLA (86,4%) or CA+CLA (87,9%) groups. However, the best hatching rate was obtained with CLA (71,8%), which was higher to the other treatments (P=0.01). In conclusion, the use of the metabolic regulators CA, FO and CLA from the fourth day of the embryo culture in vitro increase ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-02Bitstream added on 2014-06-13T19:12:07Z : No. of bitstreams: 1 pinto_rfp_me_botib.pdf: 235047 bytes, checksum: f66f9dd3e29764cee35ce259fd850b2c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O fator de crescimento fibroblástico (FGF10) atua de forma parácrina no complexo cumulus-oócito, aumentando a expressão de genes relacionados à expansão das células do cumulus e à competência oócitária. Objetivou-se com o presente estudo testar se a adição do FGF10 ao meio de maturação melhora a maturação, diminui as taxas de oócitos apoptóticos e influencia na produção de embriões in vitro e na expressão de genes relacionados à competência e implantação embrionárias (COX2, CDX2 e PLAC8). Em todos os experimentos, oócitos foram obtidos de abatedouro, coletados de vacas adultas e maturados por 22 h em meio TCM 199 suplementado com: 2.5 ng/mL FGF10, 10 ng/mL FGF10, 50 ng/mL FGF10 ou na ausência de FGF10 (grupo controle). No Experimento 1, depois da maturação, os oócitos foram fixados e corados com TUNEL para determinar a porcentagem de oócitos apoptóticos e posteriormente com Hoechst-33342 para avaliação dos diferentes estágios da meiose (metáfase 1, metáfase 2 ou metáfase 2 com extrusão do primeiro corpúsculo polar). No Experimento 2, os oócitos foram fertilizados e cultivados até o estágio de blastocisto inicial. No experimento 3 avaliou-se o efeito da suplementação do FGF10 ao meio de maturação in vitro sobre a expressão dos genes COX2, CDX2 e PLAC8 em embriões bovinos. No experimento 1, os resultados demonstraram que a dose de 2,5 ng/mL FGF10 aumentou a porcentagem de oócitos com extrusão do primeiro corpúsculo polar (36%) quando comparado as doses de 10 ng/mL FGF10 (13%), 50 ng/mL FGF10 (12%) e grupo controle (19%; p≤0.05). Com relação ao número de oócitos apoptóticos, as maiores doses de FGF10 apresentaram menor quantidade de oócitos TUNEL-positivos (10 ng/mL and 50 ng/mL FGF10, 5% e 6%, respectivamente) quando comparados a menor... / Not available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-05-30Bitstream added on 2014-06-13T20:33:50Z : No. of bitstreams: 1 pereira_vmc_me_jabo.pdf: 170146 bytes, checksum: a632189e1f4550de16cb0049845075b8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estimaram-se, pelo método da máxima verossimilhança restrita livre de derivadas, parâmetros genéticos dos pesos ao nascimento (PN), à desmama (P240), ao ano (P365) e ao sobreano (P550), dos ganhos em peso do nascimento à desmama (GND) e do nascimento ao sobreano (GN18), do número de dias para ganhar 175 kg do nascimento à desmama (D175) e 450 kg do nascimento ao abate (D450) de machos e fêmeas, do perímetro escrotal (PE12) de machos aos 12 meses de idade e da idade (IPP) e peso (PPP) ao primeiro parto e peso adulto (PAD) de fêmeas, em um rebanho Canchim. As herdabilidades foram: 0,41 (PN e PE12); 0,28 (P240 e P550); 0,38 (P365); 0,26 (GND); 0,30 (GN18); 0,23 (D175 e D450); 0,09 (IPP); 0,42 (PPP) e 0,48 (PAD). As correlações genéticas entre as características de crescimento (-0,98 a 0,97) e das características de crescimento com PE12 (-0,39 a 0,46) e com IPP (-0,38 a 0,44) foram favoráveis, com exceção de PN com IPP (0,49). Com PPP (-0,47 a 0,88) e PAD (-0,42 a 0,78), as correlações genéticas das características de crescimento foram desfavoráveis e as de PE12 com IPP, PPP e PAD foram -0,37; 0,04 e -0,09, respectivamente. Os resultados sugerem que a seleção para melhorar as características de crescimento após o nascimento deve reduzir IPP, mas resultar em fêmeas com maior PAD, enquanto que a seleção para maior PE12 deve reduzir IPP sem modificar PAD. / Genetic parameters for body weights at birth (PN), weaning (P240), twelve (P365) and eighteen (P550) months of age, body weight gains from birth to weaning (GND) and from birth to eighteen (GN18) months of age, and days to gain 175 kg from birth to weaning (D175 = 175/GND) and 450 kg (D450 = 450/GN18) from birth to slaughter of males and females, male scrotal circumference at 12 months of age (PE12), and female age (IPP) and weight (PPP) at first calving, and adult body weight (PAD), were obtained by the derivative free restricted maximum likelihood method, in a Canchim (5/8 Charolais + 3/8 Zebu) beef cattle herd. The heritabilities were: 0.41 (PN and PE12), 0.28 (P240 and P550), 0.38 (P365), 0.26 (GND), 0.30 (GN18), 0.23 (D175 and D450), 0.09 (IPP), 0.42 (PPP) and 0.48 (PAD). The genetic correlations among the growth traits (-0.98 to 0.97), and between the growth traits and PE12 (-0.39 to 0.46) and IPP (-0.38 to 0.44) were favorable, with the exception of that for PN and IPP (0.49). For PPP (-0.47 to 0.88) and PAD (-0.42 to 0.78) with the growth traits, the correlations were unfavorable, while for PE12 with IPP, PPP and PAD they were -0.37, 0.04 and -0.09, respectively. The results suggest that selection to enhance growth traits after birth should reduce IPP, but increase PAD, while selection to increase PE12 should reduce IPP without changes in PAD.

A busca de estratégias eficientes para a manutenção de espécies em risco de extinção tem impulsionado a comunidade científica a pesquisar alternativas para a preservação de material genético, com intuito de formação de bancos de genoma e aplicação de biotécnicas reprodutivas. Este estudo teve por objetivo avaliar os efeitos de dois protocolos diferentes de resfriamento pré-congelamento para a criopreservação de sêmen de jaguatirica (n=3), gato-do-mato-pequeno (n=4) e gato doméstíco (n=15). Apenas seis amostras de sêmen de jaguatirica, sete de gato-do-mato-pequeno e treze amostras de gato doméstico apresentaram características qualitativas e quantitativas para serem submetidas aos dois métodos de resfriamento. Estas amostras foram processadas e diluídas em meio crioprotetor, com 4% de glicerol e divididas em duas alíquotas submetidas ao método rápido (30 min a 4°C) ou lento (= 2 horas a 4°C) de resfriamento e, em seguida congeladas. Após o descongelamento as amostras foram avaliadas para índice de motilidade, percentual de células com acrossoma intacto e de células viáveis. Ovócitos de gatas domésticas maturados in vitro foram utilizados para avaliar a capacidade de ligação espermática à zona pelúcida, em ensaios de ligação competitiva in vitro. Os espermatozóides criopreservados pelos dois métodos, diferenciados entre si pelo uso de corante vital, competiram pela ligação à zona pelúcida dos mesmos ovócitos, em iguais condições de tratamento. O índice médio da motilidade espermática, pós-congelamento, foi de aproximadamente 50% para todas as espécies nos dois métodos de resfriamento. O percentual de células com acrossoma intacto, para a jaguatirica, foi de aproximadamente 20% nos dois métodos de resfriamento enquanto o gato-do-mato-pequeno apresentou 30,8% de células com acrossoma intacto no método de resfriamento rápido e 33,4% no método lento. Para o gato doméstico, o percentual de células com acrossoma intacto foi de 33,4% e 32,7% nos métodos de resfriamento rápido e lento, respectivamente. O sêmen do gato-do-mato-pequeno sofreu a menor redução no percentual de células viáveis com 51,2% no método de resfriamento rápido e 44% no método lento. A jaguatirica apresentou os menores índices entre as três espécies com 24% de células viáveis no método rápido e 27,4% no método lento, e o gato doméstico apresentou 28,6% e 28,2% de células viáveis nos métodos rápido e lento, respectivamente. O número médio de espermatozóides ligados por ovócito foi maior (p < 0,05) para o resfriamento lento do sêmen de gato-do-mato-pequeno (5,8 +- 0,9) do que para o resfriamento rápido (2,7 +- 0,4). Já o resfriamento rápido proporcionou melhores resultados na taxa de ligação espermática para a jaguatirica (8,5 +- 1,3) (p < 0,01) e para gato doméstico (4,3 +-0,9) (p< 0,05), enquanto o método de resfriamento lento proporcionou 2,5 +- 0,3 espermatozóides de jaguatirica e 1,4 +- 0,2 espermatozóides de gato doméstico ligados por ovócito. As diferentes respostas entre as espécies podem ser devidas a características espermáticas espécie-específicas e individuais. Os resultados permitiram inferir que os protocolos de criopreservação devem ainda ser aperfeiçoados e adaptados à cada espécie e que o ensaio de ligação espermática competitiva foi eficiente na detecção de diferenças na função espermática entre tratamentos, o que não foi possível com as avaliações espermáticas de rotina