O retorno ao estro após a cobertura ou inseminação artificial e o abortamento são as principais falhas reprodutivas observadas nas granjas suínas, exercendo influência sobre os dias não-produtivos e sobre a taxa de reposição do plantel. A determinação dos fatores que influenciam a ocorrência de retorno ao estro após a cobertura e o conhecimento do desempenho reprodutivo de fêmeas reinseminadas após apresentarem retorno ao estro (RE) ou abortamento (AB) tornam-se importantes ferramentas para auxiliar na decisão de remover ou recobrir fêmeas do plantel. Com esses objetivos, esta tese foi realizada, através do desenvolvimento de três experimentos. O primeiro experimento foi realizado para determinar alguns fatores que contribuem para a fêmea retornar ao estro após a inseminação ou cobertura. Fêmeas com cistos ovarianos no momento da IA apresentaram maior chance de retornar ao estro (9,0 vezes mais) do que fêmeas sem cisto (33% x 10,4%). Houve interação entre a classe de ordem de parto (OP) e o dia da semana em que a fêmea foi inseminada, onde fêmeas inseminadas entre quinta e sábado, independente da classe de OP apresentaram maior chance de retornar ao estro. Leitoas e porcas OP1 apresentaram maior chance de retornar ao estro, independentemente do dia da semana da IA. Porcas com intervalo desmame-estro (IDE) maior do que 5 dias apresentaram 2,6 vezes mais chance de retornar (21,4%) do que fêmeas com IDE menor do que 5 dias (7,3%) Nas fêmeas desmamadas, o RE foi afetado pela interação da OP e da perda do escore corporal visual (ECV) durante a lactação, onde fêmeas OP1 e OP2 com perdas maiores do que 0,5 ponto de ECV apresentaram maior chance de retornar do que fêmeas de outras categorias de OP. O segundo e o terceiro estudo foram desenvolvidos com o objetivo de avaliar o desempenho reprodutivo de fêmeas reinseminadas após apresentarem retorno ao estro ou abortamento, comparando com fêmeas de primeiro serviço, através da avaliação de registros de bancos de dados. No segundo estudo, as fêmeas foram avaliadas conforme a situação no momento da cobertura: fêmea recoberta após ter apresentado retorno ao estro (R), após abortamento (AB) e fêmeas de 1º serviço (1S). Foram utilizadas 24194 coberturas de quatro granjas localizadas na região Centro-Oeste. A taxa de parto (TP) das fêmeas 1S foi maior do que a das fêmeas R. A TP de fêmeas AB não diferiu da das outras situações avaliadas. A taxa de RE nas fêmeas R foi maior do que a das outras situações (P<0,05). A taxa de abortamento foi maior nas fêmeas AB do que nas R e foi menor nas fêmeas 1S. O número de leitões nascidos totais (LT) das fêmeas 1S foi menor do que o das R. Fêmeas OP1, na situação 1S, não apresentaram TP diferente das outras duas situações avaliadas, no entanto, a TP dessas fêmeas foi menor do que a das fêmeas das outras classes de OP na mesma situação. A TP de fêmeas com intervalo de retorno precoce (11-17dias) ou tardio (>48 dias) foi menor do que os demais intervalos de retorno avaliados (P<0,05). O terceiro estudo foi realizado em uma granja da região Sul, avaliando 19575 coberturas O objetivo foi comparar o desempenho reprodutivo de fêmeas inseminadas após apresentarem um retorno ao estro (R), dois retornos ao estro (RR), abortamento (AB) e primeiro serviço (1S). A taxa de parição das fêmeas R foi menor (76,0%; P<0,05) do que a das fêmeas 1S (87,2%) e AB (86,2%). A taxa de retorno das fêmeas R foi maior (19,4%; P<0,05) do que a das fêmeas 1S (8,4%) e AB (6,3%). Fêmeas nas situações RR apresentaram menor taxa de parição (40,1%) e maior taxa de retorno ao estro (56,9%) do que fêmeas de 1S, AB e R (P<0,05). A taxa de abortamento de fêmeas AB (5,8%; P<0,05) foi maior do que a das fêmeas 1S (2,3%) e R (2,6%). Fêmeas com retorno regular (18 a 24 dias) apresentaram maior taxa de retorno ao estro e menor taxa de parto do que fêmeas com intervalo de retorno maior do que 24 dias. Conforme os resultados obtidos nos três trabalhos, é possível concluir que fêmeas jovens constituem um fator de risco para a ocorrência de retornos ao estro. A presença de cistos ovarianos, a perda de condição de ECV de fêmeas jovens na lactação, a duração do IDE e o dia da semana da IA também foram fatores associados a maiores taxas de retorno ao estro. Fêmeas reinseminadas após um retorno ao estro apresentam comprometimento da TP. A taxa de RE de fêmeas nas situações R foi maior do que a das fêmeas 1S e AB. Fêmeas inseminadas na situação RR apresentaram comprometimento na TP e no LT. O LT de fêmeas R foi maior do que o das 1S, no entanto, não diferiu das fêmeas na situação AB. / The return to estrus after artificial insemination (AI) and abortion are the main reproductive failures in swine farms, influence on the non-productive days and the replacement rate of the herd. The determination of the factors that influence the return to estrus after AI and knoledge the reproductive performance of re-serviced females after showed return to estrus (RE) or abortion (AB) become important tools to assist in the decision to remove or maintain the female in the herd. Through these objectives, this thesis was run by developing three works. The first experiment was conducted to determine factors that contribute to the female return to estrus after insemination. Females with an ovarian cyst at the AI had 9.0-times higher (33%) odds of return to estrus than those without cysts (10.4%). There was interaction between the parity order (PO) and the day of the week in AI occurred. Independently of PO category, females inseminated from Thursday to Saturday had higher odds for return to estrus when compared with the reference category inseminated from Sunday through Tuesday. Gilts and PO1 females had higher odds for return to estrus independently of insemination day. Sows with weaning-estrus interval (WEI) >5 days had 2.6-times higher (21.4%) odds return compared to the sows with WEI of 0-5 days (7.3%). In weaned sows, the RE was also affected by the interaction between PO and body condition score (BCS) during lactation Loss of more than 0.5 unit in BCS result in higher odds of return to estrus in PO1 and PO2 but not in PO>2 sows. The second and third study was performed to evaluate the reproductive performance of females re-breeding after submitting to the return to estrus or abortion compared with first service females through evaluation of records from databases. In the second study, the females were evaluated according to the state at the time of isemination day: female re-serviced after submitting return to estrus (R), abortion (AB), and first service females (1S). Records used were obtained from 4 comercial herds in Middle West Region including 24,194 breedings. The farrowing rate (FR) of 1S females was higher than R females. The FR of AB females did not differ from the other states evaluated. The rate of RE in R females was higher than in other states (P <0.05). The abortion rate was higher in AB than R females and was lower in 1S. The litter size (LS) in 1S females was lower than R (P<0.05). R Females had lower FR and higher RE rate than the other states. PO1 sows, in the state 1S, did not have FR different from the other two studied states, although, the FR of these females was lower than the females from other PO category in the same state. The farrowing rate of R females in early (11-17d) or late (>48d) intervals after insemination day was significantly lower than other intervals of return to estrus. The third study was conducted on a farm in South Region, assessing 19575 breedings. The objective was to determine the reproductive performance of females re-serviced after return to estrus (R), two return to estrus (RR), abortion (AB) and first service (1S) The FR of R females were lower (76.0%, P<0.05) than that 1S (87.2%) and AB females (86.2%). The RE rate of the R females was higher (19.4%, P <0.05) than 1S (8.4%) and AB females (6.3%). Females in RR states had lower FR (40.1%) and a higher RE rate (56.9%) than 1S, AB and R females (P <0.05). The abortion rate of AB females (5.8%, P <0.05) was higher than 1S (2.3%) and R (2.6%). Females with regular return to estrus (18 to 24 days) showed a higher RE rate and lower FR rate than females with an interval of return longer than 24 days. According to the results of the three studies, it is possible to conclude that return to estrus is increased in young females. The presence of an ovarian cysts, the loss of BCS females in lactation, the WEI and the day of the week of IA occurred were also factors associated with higher rates of return to estrus. Females inseminated after a return to estrus showed damage in FR. The RE rate females in R states was higher than 1S and AB females. Females inseminated in the RR states showed FR and LS damage. The LS of RF females was higher than the 1S, however, did not differ from AB females.

O objetivo deste trabalho foi analisar a biologia alimentar e reprodutiva de Pachyurus bonariensis na fase pré-represamento do arroio Taquarembó, sul do Brasil. As coletas foram realizadas mensalmente de Julho de 2006 a Julho de 2007, com de redes de espera e picaré. A influência de fatores abióticos sobre a alimentação e reprodução foi analisada através dos testes não-paramétricos de Spearman e de regressões múltiplas. O período reprodutivo foi estimado através da variação da média mensal do índice gonadossomático (IGS) e da frequência dos estádios de maturação gonadal. Foram analisadas algumas gônadas de fêmeas e machos em vários níveis de desenvolvimento para descrever os aspectos morfológicos e histológicos dos estádios de maturação. Através da contagem dos ovócitos vitelinados foram estimadas as fecundidades absoluta e relativa. O tipo de desova foi determinado pela medida dos maiores diâmetros de 150 ovócitos retirados de gônadas em diferentes estádios de maturação e pela distribuição das médias dos IGS de cada estádio. Foram verificadas as proporções sexuais por período total de estudo e por classes de comprimento padrão para análise da estrutura populacional da espécie no local de estudo. Para a análise quali-quantitativa da dieta foram utilizados o índice de repleção estomacal (IR) e os métodos de composição percentual (CP), freqüência de ocorrência (FO), método gráfico de Costello e índice de importância alimentar (IIA). Para verificar o bem estar da espécie foi estimado o fator de condição mensal (FC). A variação dos fatores abióticos ao longo do período amostral não influenciou na alimentação dessa espécie, porém o fotoperíodo e a condutividade demonstraram ter relações significativas com o período reprodutivo que se estendeu de Outubro/2006 a Fevereiro/2007. O desenvolvimento ovocitário foi sincrônico em mais de dois grupos caracterizando uma desova do tipo parcelada. A fecundidade média absoluta foi de 39.313 ovócitos e a fecundidade relativa foi de 0,43 ovócito. O tamanho da primeira maturação foi estabelecido em 112,67 mm para as fêmeas e em 110,71 mm para os machos. A proporção sexual total foi de 1,2 fêmeas para 1 macho, apresentando diferenças significativas pelo teste do Qui-quadrado (α= 0.05) nos meses de setembro, outubro e dezembro de 2006 e as fêmeas alcançaram comprimentos maiores que os machos. A análise da dieta demonstrou que essa espécie possui hábito alimentar insetívoro aquático se alimentando principalmente de Diptera e Ephemeroptera. A comparação quali-quantitativa dos itens alimentares revelou que existem diferenças entre as dietas de jovens e adultos. Os valores do fator de condição mensal foram pouco influenciados pelo período reprodutivo. Através das análises de biologia alimentar e reprodutiva pode-se sugerir que essa espécie terá possibilidades de se adaptar às mudanças que serão causadas pelo represamento, pois a mesma tem preferência por ambientes lênticos, além de um hábito sedentário com alimentação insetívora aquática, fecundidade alta e desova parcelada, que favorecem uma boa adaptação em locais com tais como um reservatório. / The aim of this paper was to analyze the feeding and reproductive biology of Pachyurus bonariensis before the damming in Taquarembó stream, south of Brazil. Samples were collected monthly from July 2006 to July 2007 by means of fishing nets of different mesh, sizes and one seine net. The influence of abiotic factors on the feeding and reproduction was analyzed through the non-parametric tests of Spearman and multiple regressions. Reproductive period was estimated by monthly variation of the mean gonadossomatic index (GSI) and by the frequency of gonadal maturation stages. Some female and male gonades in several development levels were histologically analyzed to describe morphological and histological aspects. Vitelline oocytes were counted from selected mature females to estimate the absolute and relative fecundity. The spawning type was determined by the measure of the largest possible diameters of 150 ovocytes whose samples were taken from gonades belonging to the different gonadal maturation stages. Data such as sex ratio and standard length classes were considered to populational structure character analysis of the species at the study site. The feeding habit was described through the repletion index (RI) and the analysis by the percentage composition (PC), the frequency of occurrence (FO), the Costello's graphic method and the feeding importance index (IIA). The condition factor (CF) was used to analyze the well-being of the species in the environment. The variation of abiotic factors during the sampling period did not influence the feeding of this species, but the photoperiod and conductivity demonstrated significant relationship with the reproduction period. The species presented a reproductive period that going from October/2006 to February/2007. The ovocitary development was synchronic in more than two groups, characterizing a parcelled spawning type. The absolute fecundity was of 39.313 ovocytes and the relative fecundity was 0,43 ovocytes. First maturation size estimated to males was 110,71 mm and to females 112,67 mm of standard length. Sex ratio tested by the Chi-square test (α= 0,05) was 1,2 females for 1 male, with significant differences in the months of September, October and December 2006. Females have larger standard lehgth than the males. The diet analysis showed that P. bonariensis had an insectivorous aquatic habit, feeding mainly of Diptera and Ephemeroptera. The qualitative-quantitative comparison of the feeding items showed differences between the diets of the young and the adults. The condition factor was little influenced by the reproduction period. Based on the analysis of the feeding and reproduction biology, one may suggest that this species will have great chances of adjusting to changes caused by the damming, once it showed a sedentary habit with insectivorous aquatic feeding, high fecundity and multiple spawning, which favor a good adaptation in places with such like the reservoir.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-10-16T11:25:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566274 bytes, checksum: 435b70c31d30f285a894df8e6609cd67 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-16T11:25:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566274 bytes, checksum: 435b70c31d30f285a894df8e6609cd67 (MD5) Previous issue date: 2015-06-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da adição de L-carnitina, um acelerador do metabolismo lipídico, e ácido linoléico conjugado (trans-10, cis-12) em diferentes fases da produção in vitro de embriões sobre o desenvolvimento e criotolerância embrionária. Em todos os experimentos, embriões foram produzidos in vitro utilizando-se complexos cumulos-oócitos (CCO) provenientes de ovários coletados em abatedouro. Foram calculadas as taxas de clivagem (dia 3 do cultivo), taxa de formação de blastocistos expandidos e blastocistos em estágio avançado de desenvolvimento (dia 7 do cultivo) em função do total de CCO inseminados. Embriões em estágio de blastocisto expandido foram coletados de cada tratamento no dia 7 do cultivo in vitro e submetidos ao congelamento lento. Avaliou-se a taxa de reexpansão e eclosão embrionária 24, 48 e 72 h após o descongelamento em função do total de embriões descongelados. No experimento 1, oócitos fertilizados foram incubados em meio de cultivo contendo diferentes concentrações de L-carnitina (0,00; 0,75; 1,50 ou 3,03 mM) suplementado ou não com 5 % de soro fetal bovino (SFB). A adição de L-carnitina ao meio de cultivo na concentração de 1,5 mM melhorou a taxa de formação de blastocistos em estágio avançado de desenvolvimento quando comparado ao grupo controle (15,2±2,0 vs. 11,2±1,5; P<0,05). A L-carnitina também apresentou efeito positivo sobre a reexpansão embrionária 24 e 48 h pós-descongelamento quando adicionada na concentração de 0,75 e 3,03 mM (77,4±4,5; 80,1±4,0 e 75,0±5,5; 78,0±4,2 vs. 64,0±4,7; 67,4±4,7) ao meio de cultivo (P<0,05). Não houve interação entre os efeitos da adição de L-carnitina e SFB ao meio de cultivo embrionário. Apesar da suplementação do meio de cultivo com SFB ter melhorado o desenvolvimento embrionário (27,2±1,1 vs. 19,4±0,9; P<0,01), houve uma redução das taxas de reexpansão 24, 48 e 72 h pós-descongelamento (65,8±2,9; 67,8±2,8; 66,0±3,0 vs. 78,1±3,8; 81,4±3,0; 79,1±3,5; P<0,01). No experimento 2, os embriões foram cultivados em meio contendo L-carnitina (0,75 mM) ou ácido linoleíco conjugado (CLA – 100 mM) durante as primeiras 96 h, últimas 72 h ou durante todo o cultivo in vitro. A suplementação do meio de cultivo com L-carnitina ou CLA durante diferentes vifases do cultivo in vitro não afetou o desenvolvimento e a criotolerância embrionária. No experimento 3, avaliou-se o desenvolvimento e a crioresistência embrionária quando oócitos foram maturados em meio suplementado com L-carnitina (3.03 mM) e/ou CLA (100 mM). L-carnitina e CLA não afetaram o desenvolvimento embrionário quando adicionados ao meio de maturação. Apesar da L-carnitina não ter afetado a a taxa de reexpansão embrionária pós-descongelamento, o CLA apresentou efeito negativo sobre a eclosão embrionária 72h pós-descongelamento (53,3±3,6 vs. 65,1±4,3; P<0,05) quando adicionado ao meio de maturação oócitaria. Como conclusão, a L- carnitina melhora a criotolerância de embriões produzidos in vitro quando adicionada à concentração de 0,75 mM ao meio de cultivo embrionário. Já o CLA apresenta efeito negativo sobre a sobrevivência embrionária após o descongelamento quando adicionado ao meio de maturação oócitaria. / High lipid content in embryo is associated with low freezing tolerance. This study assessed the effects of exogenous L-carnitine and trans-10, cis-12 (t10, c12) conjugated linoleic acid (CLA) on in-vitro development and cryotolerance of bovine embryos when added during different stages of in vitro production of embryos. For all experiments, embryos were produced in vitro using slaughterhouse cows oocytes. Cleavage rates on Day 3, blastocyst and advanced blastocyst (hatching/hatched blastocyst) formation rates on Day 7 were calculated from the total number of oocytes subjected to in vitro fertilization (IVF). Expanded blastocysts-stage embryos from each treatment were harvested on Day 7 and subjected to slow freezing. Embryo viability was assessed 24, 48 and 72 h after thawing. In experiment 1, fertilized oocytes were incubated with different L-carnitine concentrations (0.0, 0.75, 1.50 or 3.03 mM) in the presence or absence of fetal bovine serum (FBS). There was an improvement (P<0.05) on embryo development when 1.5 mM of L-carnitine was added to in vitro culture (IVC) medium. L-carnitine had also a positive effect (P<0.05) on post thaw embryo competence when supplemented at 0.75 and 3.03 mM during IVC. There was no interaction (P>0.05) between the effects of L-carnitine and FBS supplementation on IVC on embryo development and cryosurvival. Although FBS supplementation had increased blastocyst development (P<0.05), it reduced the reexpansion rates at 24, 48 and 72 h post thawing. In experiment 2, L-carnitine (0.75 mM) or CLA (100 mM) were supplemented during the first 96 h, last 72 h or throughout the entire IVC period. There was no effect of L-carnitine or CLA supplementation during different periods of IVC on embryo development and cryotolerance. In experiment 3, embryo development and cryosurvival were evaluated when oocytes were maturated in medium supplemented with L-carnitine (3.03 mM) or/and CLA (100 mM). No effect of L-carnitine and CLA supplementation during in vitro maturation (IVM) on IVP embryo development was detected. Although there was no effect (P>0.05) of L-carnitine supplementation on embryo cryotolerance, CLA showed a negative effect (P<0.05) on embryo cryosurvival when added during IVM. In conclusion, L-carnitine improved embryo cryosurvival viiiwhen added at 0.75 mM during IVC and CLA supplementation during IVM has a negative effect on post thaw embryo survival.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-08-08T16:17:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 681704 bytes, checksum: efc689f5748859f5c81a8640c7d07da5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T16:17:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 681704 bytes, checksum: efc689f5748859f5c81a8640c7d07da5 (MD5) Previous issue date: 2011-04-29 / Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a influência das estações bioclimáticas da Zona da Mata Mineira sobre a composição bioquímica do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram utilizados três garanhões de fertilidade comprovada, dois com 15 anos de idade e outro com sete anos. O sêmen foi coletado a cada 14 dias, durante o período de um ano (abril de 2009 a abril de 2010) totalizando 26 coletas, perfazendo 78 ejaculados. Foi realizada a análise física e morfológica do sêmen. O plasma seminal foi separado para análise da concentração das proteínas solúveis, de glicose e de colesterol para a determinação do perfil das proteínas presentes nos ejaculados ao longo das estações do ano. O perfil das proteínas foi avaliado pelo método de eletroforese bidimensional e as análises foram realizadas no programa IMAGEMASTER, da GE-HEALTCARE. Quanto às características físicas do sêmen, houve um maior volume de sêmen na primavera e no verão (p<0,05) porém, a quantidade de espermatozóides foi a mesma para todas as estações do ano (p>0,05). Com relação aos aspectos físicos do sêmen, a concentração de proteínas no plasma diferiu entre os métodos utilizados (p<0,05) porém, a correlação entre si foi muito alta e positiva (r = 0,73). A concentração protéica no plasma seminal teve correlação positiva apenas com a quantidade de espermatozóides por ejaculado, porém baixa (r=0,36). Não houve correlação entre as concentrações de proteínas e a concentração de testosterona sérica. Um grupo variado de proteínas foi encontrado pelo método de eletroforese bidimensional, sendo que 10 dessas proteínas foram comuns aos três garanhões. No outono, observou-se uma proteína de 18 kDa/pI=9,1; na primavera observou-se duas: de 22 kDa/pI= 6,7 e 35 kDa/pI= 7,2; no verão observou-se três: 20 kDa/pI= 8,2; 27 kDa/pI= 8,0 e 29 kDa/pI= 7,5; uma proteína foi comum às estações de Outono, Inverno e Primavera: 9 kDa/pI= 9,0 e três proteínas foram comuns a todas as estações bioclimáticas: 4 kDa/pI=5,8; 7 kDa/pI=7,0 e 11 kDa/pI=7,5. Além dessas proteínas, uma série de proteínas com peso molecular inferior a 30 kDa foram observadas individualmente. As concentrações de glicose e colesterol no plasma seminal não apresentaram variação sazonal (p>0,05) ou correlação com qualquer característica estudada (p>0,05). Conclui-se no presente estudo que os parâmetros bioquímicos do sêmen sofrem maior variação intrínseca que sazonal, havendo algumas proteínas que são comuns aos garanhões Mangalarga Marchador. / The aim of this study was to evaluate the biochemistry composition of the seminal plasma in Mangalarga Marchador stallions as to evaluate the influence of bioclimatic seasons in the Zona da Mata Mineira over its content. Thus, three stallions with proved fertility were used. Two of then with 15 years old and the other with seven years old. The semen was collected every 14 days, during one year (April 2009 to April 2010) totalizing 26 collects, in a total of 76 samples. The physical and morphological parameters of the spermatozoa were evaluated. A semen sample was taken and the seminal plasma was separated to measure the concentration of soluble proteins, glucoses and cholesterol concentration and to find the protein profile in the ejaculates grouped in each season. The protein profile was done by two-dimensional electrophoresis and analyses were done by IMAGEMASTER program (GE HEALTCARE). About the physical parameters of the semen, there was a bigger volume of semen during Spring and Summer (p<0.05) but the quantity of spermatozoa was the same for all seasons (p>0,05). Protein concentration in seminal plasma differed between methods used (p<0.05) although the correlation between then were high and positive (r = 0.73). The seminal plasma protein concentration had a positive correlation only with the quantity of spermatozoa in the ejaculated and, even so, was weak (r = 0.362). There were no correlation between the protein concentration and the serum testosterone concentration. A diverse group of proteins were found thorough the two-dimensional electrophoresis method. Ten of those proteins were common to all three stallions. In Autumn, was found a 18 kDa/pI 9.1 protein; during Spring, were found two proteins: 22 kDa/pI 6.7 and 35 kDa/pI 7.2; in Summer, were found three: 20 kDa/pI 8.2; 27 kDa/pI 8.0 and 29 kDa/pI 7.5; one protein was common to Autumn, Winter and Spring 9 kDa/pI 9.0 and three proteins were common to all seasons: 4 kDa/pI 5.8 ;7 kDa/pI 7.0 and 11 kDa/pI 7.5. Beyond those proteins, a bunch of other polypeptides with molecular weight less than 30 kDa were found individually. Concentrations of glucose in seminal plasma does not show a seasonal variation (p>0.05) or correlation with any other evaluated parameter. The same occurs to seminal plasma cholesterol concentrations. It is concluded that biochemistry of seminal parameters have greater intrinsic variation than seasonal, showing some proteins that are common to Mangalarga Marchador stallions.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-11-22T17:37:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-22T17:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2065563 bytes, checksum: fc1fc9fd3c992a3711487aee63eaff9d (MD5) Previous issue date: 2017-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Brasil está entre os países com biomas mais diversos e biologicamente mais ricos. A Mata Atlântica é um hotspot global de biodiversidade e o segundo maior bioma brasileiro em diversidade de espécies de mamíferos, no qual 30% deles são endêmicos. A presença de roedores na mata é de extrema importância, uma vez que influenciam a dinâmica das florestas atuando como dispersores de sementes e plântulas. Os roedores sul-americanos da subfamília Sigmodontinae formam um conjunto altamente diverso de mais de 382 espécies, dentre elas os roedores das espécies Calomys tener, Necromys lasiurus e Akodon cursor. Poucos trabalhos sobre os parâmetros reprodutivos dessas espécies foram encontrados e não existem estudos que descrevem o epidídimo dos mesmos. Assim, o objetivo desse trabalho foi descrever e comparar a morfologia, morfometria e proteínas do epidídimo de C. tener e N. lasiurus. Além disso, foi feita a descrição dos mesmos parâmetros da espécie A. cursor, bem como a avaliação da sua produção diária de espermatozoides. Desta forma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram processados para análise morfológica e morfométrica. Da mesma, fragmentos dos epidídimos de C. tener e N. lasiurus e epidídimos inteiros de A. cursor foram utilizados para análise de proteínas presente no fluido. Além disso, epidídimos e testículos de A. cursor foram utilizados para análise do tempo de trânsito epididimário. A comparação entre C. tener e N. lasiurus mostrou que a região da cauda teve os diâmetros, tubular e luminal, maiores quando comparados às outras regiões em C. tener. O epidídimo de N. lasiurus mostrou diferenças estatísticas entre as suas 3 regiões para os diâmetros tubular e luminal. A altura epitelial não mostrou diferenças entre regiões em cada espécie. O epitélio epididimário de C. tener e N. lasiurus foi composto de 3 tipos celulares (principal, basal e clara) que foram distribuídas igualmente entre as duas espécies. Na abordagem proteômica, 58 proteínas foram identificadas em C. tener e 64 em N. lasiurus. A. cursor teve o epidídimo morfológica e morfometricamente dividido em 5 regiões (segmento inicial, cabeça, corpo, cauda proximal e cauda distal), no qual o diâmetro tubular da cauda distal, assim como o seu diâmetro luminal, foram maiores em relação às demais regiões. A comparação em relação à altura epitelial mostrou que o segmento inicial, a cabeça e a cauda proximal obtiveram maior altura epitelial do que o corpo e a cauda distal, sendo que da cabeça foi o maior e da cauda distal o menor. Células principal, basal, estreita e clara foram detectadas no epidídimo de A. cursor, sendo a célula estreita presente somente no segmento inicial e a clara nas demais regiões. As células principais foram as mais abundantes em todas as regiões do epidídimo de A. cursor, seguido da basal. A média da produção diária de espermatozoides de A. cursor foi de 4,07 dias e na abordagem proteômica, foram identificadas 22 proteínas. Pode-se concluir com esse trabalho que o estudo da biologia reprodutiva dessas espécies é importante para estudos futuros, bem como suas diferenças podem servir como parâmetro para estudos taxonômicos. / Brazil is among the countries with the most diverse and biologically richest biomes. The Atlantic Forest is a global hotspot of biodiversity and the second largest Brazilian biome in diversity of mammal species, in which 30% of them are endemic. The presence of rodents in the forest is extremely important, since they influence the dynamics of forests acting as seed dispersers and seedlings. South American rodents of the subfamily Sigmodontinae form a highly diverse set of more than 382 species, among them the small wild rodent Calomys tener, Necromys lasiurus and Akodon cursor. Few studies on the reproductive parameters of these species have been found and there are no papers describing the epididymis of these species. Thus, the objective of this work was to describe and compare the morphology, morphometry and proteins of the epididymis of C. tener and N. lasiurus. In addition, a description was made of the same parameters of the A. cursor species, as well as the evaluation of their daily production of spermatozoa. For such, fragments of C. tener epididymis and N. lasiurus and whole epididymis A. cursor were processed for morphological and morphometric analysis. Similarly, fragments of C. tener and N. lasiurus epididymis and whole epididymis A. cursor were used for analysis of proteins present in the fluid. In addition, epididymis and testes of A. cursor were used for analysis of epididymal transit time. The comparison between C. tener and N. lasiurus showed that the cauda region had the tubular and luminal diameters, higher when compared to the other regions in C. tener. The epididymis of N. lasiurus showed statistical differences between its 3 regions for tubular and luminal diameters. Epithelial height did not show differences between regions in each species. The epididymal epithelium of C. tener and N. lasiurus was composed of 3 cell types (principal, basal and clear) that were distributed equally between the two species. In the proteomic approach, 58 proteins were identified in C. tener and 64 in N. lasiurus. A. cursor had the morphological and morphometrically divided epididymis in 5 regions (initial segment, caput, corpus, proximal and distal cauda), in which the tubular diameter of the distal cauda, as well as its luminal diameter, were larger in relation to the others regions. The comparison with respect to epithelial height showed that the initial segment, the caput and the proximal cauda obtained greater epithelial height than the corpus and the distal cauda, with the caput being the largest and the distal cauda the smallest. Principal, basal, narrow and clear cells were detected in the epididymis of A. cursor, being the narrow cell present only in the initial segment and the clear cell in the other regions. The principal cells were the most abundant in all regions of the epididymis of A. cursor, followed by basal. The mean daily sperm production of was 4.07 days and in the proteomic approach, 22 proteins were identified. It can be concluded with this work that the study of the reproductive biology of these species is important for future studies, as well as their differences can serve as parameter for taxonomic studies.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-01T14:05:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-01T14:05:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese compreende quatro capítulos. Todos os estudos aqui relatados foram executados na Colorado State University (CSU), em Fort Collins-CO/USA. Foram utilizados sêmen de seis garanhões com idade entre 15 e 21 anos, das raças Puro-Sangue Inglês, Quarto de Milha e Árabe; estabulados no Laboratório de Reprodução Equina da CSU. Capítulo 1: dividido em três experimentos. Experimento 1: objetivou-se avaliar efeito do tratamento com 2 mg de ciclodextrina carregada com colesterol e estigmastanol (CCC , CCE); 1, 2 e 3 mg de ciclodextrina carregada com óleo de salmão (S1, S2 e S3) e com óleo de semente de linho (L1, L2 e L3) nas motilidades total (MT) e progressiva (MP) dos espermatozóides após descongelamento. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (p>0,05). Experimento 2: objetivou-se avaliar MT e MP do sêmen tratado com diferentes fontes de lipídeos sonicados em meio Whitten’s Modificado (MW), após congelamento convencional e congelamento precedido por choque pelo frio; e avaliar efeito do tratamento com 2 mg de CCC e CCE sobre motilidades após choque pelo frio. Os tratamentos usando lipídeos foram: 3 e 6 mg de óleo de salmão (S3 e S6), de óleo de semente de linho (L3 e L6), de gema de ovo de galinha (G3 e G6), de óleo fígado de bacalhau (B3 e B6) e de óleo de açafrão (A3 e A6). Nenhum dos tratamentos utilizando lipídeos melhorou motilidade após congelamento convencional (p>0,05). Para o sêmen submetido a 0 oC por 30 minutos, os tratamentos G6, CCC e CCE melhoraram MT e MP (p<0,05). Experimento 3: utilizou-se cromatografia gasosa para avaliar eficiência dos tratamentos em alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática. Os tratamentos foram: 6 μg de óleo de semente de linho diluído em etanol (L1); 2 mg de ciclodextrina carregada com óleo de semente de linho (L2) e 6 mg de óleo de semente de linho sonicado em MW (L3). Nenhum dos tratamentos foi capaz de alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática (p>0,05). Capítulo 2: objetivou-se mensurar quantidade de colesterol e estabelecer a relação colesterol:fosfolipídeos na membrana plasmática de células espermáticas tratadas com diferentes quantidades de CCC (0, 2, 4, 6 e 8 mg). Foram utilizados kit comercial (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) para mensuração do colesterol e ensaio de ferrotiocianato de amônio para mensuração dos fosfolipídeos totais. A quantidade de colesterol encontrada nas células tratadas com 0, 2, 4, 6 e 8 mg de CCC foram respectivamente 0,22; 0,58; 0,77; 0,91 e 1,07 μg/10 6 de espermatozóides, e a relação colesterol:fosfolipídeos para os mesmos tratamentos foram 0,39; 0,72; 1,0; 1,16 e 1,36. A quantidade de colesterol na membrana foi maior a partir do uso de 2 mg de CCC (p<0,05), e a relação colesterol:fosfolipídeos a partir do tratamento com 4 mg de CCC (p<0,05). Capítulo 3: neste estudo o objetivo foi avaliar o comportamento do sêmen sem tratamento (CT) ou tratado com 20% de plasma seminal (PS) e 40 μM de PC-12 (PC) em eventos ligados à capacitação espermática durante incubação por 30 minutos (avaliações foram feitas no tempo 0 – T0, 5 – T5, 15 – T15 e 30 minutos – T30). Para isso cada um dos tratamentos foi submetido a quatro diferentes corantes: 1- CoroNa Green, que quantifica sódio intracelular (CG); 2- Fluo-3, que quantifica cálcio intracelular (Fluo); 3- FITC-PNA, que quantifica reação acrossômica (FP) e 4- Merocianina, que caracteriza fluidez/desorganização da membrana plasmática (Mero). Yo-Pro-1 ou iodeto de propídeo foram utilizados para avaliar integridade de membrana plasmática. As amostras foram lidas em citometria de fluxo. O tratamento com PC-12 aumentou o percentual de células com acrossoma reagido, detectada na avaliação aos 30 minutos. Este percentual, de 33%, foi maior que o dos demais tratamentos no mesmo tempo (CT: 13% e PS: 4%) e superior aos percentuais para o próprio PC-12 nos tempos 0 (7%), 5 (9%) e 15 minutos (16%). Com relação à fluidez da membrana plasmática não houve diferença no percentual de células com merocianina elevada entre os diferentes tratamentos, nem entre um mesmo tratamento ao longo do tempo (p>0,05). O estudo revelou efluxo de sódio das células espermáticas equinas viáveis após 15 minutos de incubação, sendo que nos tempos 15 e 30 minutos o percentual de celulas positivas para CG foram menores para tratamento com plasma seminal (8,8 e 4,8%) e maiores para tratamento com PC-12 (36 e 15,4%), em relação ao controle (23,6 e 11,8%, p<0,05). Após 15 minutos de incubação o sêmen dos três tratamentos apresentou percentual de células positivas para Fluo superior ao tempo 0, porém o plasma seminal retardou a entrada deste íon nas células, visto que, no T15 percentual de células Fluo+ foi menor que nos outros tratamentos (CT: 87%; PS: 59% e PC: 95%, p<0,05), voltando a se igualar no tempo 30 minutos (CT: 98%%; PS: 85% e PC: 97%, p>0,05). O meio MW utilizado foi capaz de induzir efluxo de sódio e influxo de cálcio, alterações que caracterizam capacitação espermática. Capítulo 4: os objetivos aqui foram avaliar eficiência de diluidores a base de gema de ovo (Lactose-EDTA) ou gema de ovo associada a leite em pó (FR5 modificado – FR5M) e eficiência do glicerol (GLI) ou da combinação deste com metilformamida (MF) em manter MT e MP dos espermatozóides após congelamento usando diferentes protocolos (0: congelamento sem resfriamento; 20: resfriamento em palhetas por 20 minutos a 5 oC antes do congelamento; 120T: resfriamento do sêmen em tubos por 120 minutos a 5 oC; 120P: resfriamento do sêmen em palhetas por 120 minutos a 5 oC). O FR5M preservou melhor a MP de células espermáticas em todos os protocolos de congelamento utilizados, mostrando benefício da combinação da gema de ovo com leite em pó no diluente de congelamento (15%, 21%, 26% e 25% para 0, 20, 120T e 120P, respectivamente, vs. 9%, 14%, 19% e 17%, para lactose-EDTA, p<0,05). A utilização de Lactose-EDTA 5%GLI apresentou resultados superiores para MT e MP se comparado ao mesmo diluidor com 3%MF + 2%GLI, o que mostra que o glicerol é um crioprotetor que pode ser utilizado em diferentes protocolos de congelamento (MT para Lactose-EDTA 5%GLI = 33%, 45%, 56% e 53% para 0, 20, 120T e 120P vs. 20%, 30% 35% e 36% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05; MP para Lactose-EDTA 5%GLI = 19% e 17% para 120T e 120P vs. 11% e 10% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05). O resfriamento do sêmen antes do congelamento pode ser realizado tanto em tubos quanto em palhetas de 0,5 mL, sem prejuízos às motilidades total e progressiva do sêmen após congelamento. / This thesis is compounded by four chapters. All work reported here were performed at Colorado State University (CSU), located in Fort Collins, CO / USA. Six stallions between 15 and 21 years old (Thoroughbred, Quarter Horse and Arabian breeds) and stabled at Equine Reproduction Laboratory at CSU were used in all experiments. Chapter 1: comprised by three experiments. Experiment 1: aimed to evaluate the effects on total motility (TM) and progressive motility (PM) after semen thawing from treatments with 2 mg of cyclodextrin-loaded-cholesterol and 2 mg of cyclodextrin-loaded-stigmastanol (CLC, CLS); 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin-loaded-salmon oil (S1, S2 and S3); and 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin- loaded-flax seed oil (F1, F2, and F3). No differences among treatments were detected (p>0.05). Experiment 2: aimed to evaluate TM and PM of semen treated with different sonicated lipids into Modified Whitten’s Medium (MW), after conventional freezing and freezing preceded by cold shock, and assess the effect of treatment with 2 mg of CLC and CLS on motility after cold shock. Treatments using lipids were: 3 and 6 mg of salmon oil (S3 and S6); 3 and 6 mg of flax seed oil (F3, F6); 3 and 6 mg of egg yolk (E3 and E6); 3 and 6 mg of cod liver oil (C3 and C6), 3 and 6 mg of safflower oil (SF3 and SF6). None of the lipid treatments improved motility after conventional freezing (p>0.05). For semen subjected to 0 °C for 30 minutes, TM and PM increased in semen treated with E6, CLC and CLS (p<0.05). Experiment 3: gas chromatography was used to evaluate effectiveness of treatments in altering the sperm membrane fatty acid profile. The treatments were: 6 μg of flax seed oil diluted with ethanol (F1); 2 mg of cyclodextrin-loaded- flax seed oil (F2) and 6 mg of flax seed oil sonicated in MW (F3). None of the treatments was able to change fatty acid profile in the sperm membrane (p>0.05). Chapter 2: aimed to measure the amount of cholesterol and to establish the cholesterol:phospholipids ratio in plasma membrane of fresh equine sperm cells treated with different amounts of CLC (0, 2, 4, 6 and 8 mg). A commercial kit was used to measure cholesterol (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) and an ammonium ferrothiocyanate assay for total phospholipids measurement. Amount of cholesterol found for cells treated with 0, 2, 4, 6 and 8 mg CLC were, respectively, 0.22; 0.58; 0.77; 0.91 and 1.07 micrograms/10 6 sperm, and cholesterol:phospholipids ratios to the same treatments were 0.39; 0.72; 1.0; 1.16 and 1.36, respectively. Increase in cholesterol amount was observed when 2 mg of CLC was used (p<0.05), and cholesterol:phospholipids ratio was higher with 4 mg of CLC (p<0.05). Chapter 3: in this study the objective was to evaluate the response of fresh equine semen without treatment (CT) or treated with 20% of seminal plasma (SP) and 40 μM PC-12 (PC) in events related to sperm capacitation during incubation for 30 minutes (evaluations made at time 0 - T0, 5 - T5, 15 – T15 and 30 minutes - T30). Each treatment was subjected to four different dyes: 1- CoroNa Green, which measures intracellular sodium (CG); 2- Fluo-3, which measures intracellular calcium (Fluo); 3- FITC-PNA, which measures acrosome reaction (FP) and 4- Merocyanine, which characterizes plasma membrane fluidity/destabilization (Mero). Yo-Pro-1 or propidium iodide were used to assess cell membrane integrity. Samples were read in flow cytometry. An increased percentage of cells with reacted acrosome was observed in semen treated with PC-12 at T30. This proportion (33%) was higher than the other treatments at the same time (CT: 13% and SP: 4%) and higher than the proportion for PC-12 at T0 (7%), T5 (9%) and T15 (16%). There was no difference in the percentage of cells with high merocyanine between different treatments or between the same treatment over time (p>0.05). The study showed sodium efflux after 15 minutes incubation, and at times 15 and 30 minutes the percentage of positive cells for GC were lower in SP treatment (8.8 and 4.8%) and higher for PC-12 (36 and 15.4%) compared to the CT (23.6 and 11.8%, p <0.05). At T15 the semen of all treatments showed higher proportion of Fluo positive cells than T0, but seminal plasma delayed entry of the ion into the cells, since at T15 Fluo proportion of positive cells was lower than the other treatments (CT: 87%; SP: 59% and PC: 95%, p<0.05) and became similar at T30 (CT = 98%, SP= 85% and PC=97%, p> 0.05). The semen extender used was able to inducing sodium efflux and calcium influx, changes characterizing sperm capacitation. Chapter 4: the objectives were to evaluate efficiency of an egg yolk–based medium (lactose-EDTA) or egg yolk associated with powdered milk (modified FR5 - MFR5), and efficiency of glycerol (GLY) or a combination between GLY and dimethylformamide (MF) to maintain TM and PM sperm after freezing using different protocols (0: no cooling; 20: cooling straws for 20 minutes at 5 °C before freezing; 120T: cooling in tubes for 120 minutes at 5 °C; and 120P: cooling in straws for 120 minutes at 5 °C). MFR5 preserved PM in all freezing protocols, showing the benefit of the combination of egg yolk with powdered milk for freezing diluent (15%, 21%, 26% and 25% for 0, 20, 120T and 120P, respectively, vs. 9%, 14%, 19% and 17% for lactose-EDTA, p<0.05). The use of lactose-EDTA 5%GLY showed superior results for TM and PM if compared to the same medium with 3%MF + 2%GLY, indicating that glycerol is a cryoprotectant that can be used in several different freezing protocols (TM for Lactose-EDTA 5%GLY = 33%, 45%, 56% and 53% for 0, 20, 120T and 120P vs. 20% 30% 35% and 36% for LactoseEDTA 3%MF + 2%GLY, p <0.05; MP for Lactose-EDTA 5%GLY = 19% and 17% at 120T and 120P vs. 11% and 10% for Lactose-EDTA 3%MF + 2%GLY, p<0.05). The cooling before freezing can be performed either in tubes as in 0.5 mL straws for 120 minutes, without damage to total and progressive motility of thawed semen.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-27T10:15:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655848 bytes, checksum: 0ff4198bce278adfb35d72306b750cef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T10:15:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 655848 bytes, checksum: 0ff4198bce278adfb35d72306b750cef (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração via oral do óleo de nim sobre a função reprodutiva e o perfil metabólico de carneiros mestiços da raça Santa Inês. Trinta animais foram distribuídos em quatro grupos (G): GI - controle, administração de 20 mL de água por animal por via oral; e GII, GIII e GIV – administração de 1, 2 e 3 mL de óleo de nim/kg de peso vivo (PV) por via oral, respectivamente, durante sete dias. Realizou-se a biometria testicular e coletou-se sêmen duas vezes por semana durante 93 dias para avaliação dos aspectos físicos e morfológicos. Amostras de sangue foram coletadas nos dias D1, D4, D8, D30, D60 e D90, para determinação da concentração plasmática de testosterona e do perfil metabólico plasmático dos animais. Ao final do período experimental, os animais foram abatidos; os testículos, coletados e pesados; e foram obtidas amostras para avaliações histológicas. Houve comportamento linear decrescente (P˂0,05) para ganho de peso. Observou-se comportamento linear decrescente (P˂0,05) para volume seminal, turbilhão e vigor espermático, motilidade progressiva e concentração espermática. Para defeitos maiores verificou-se comportamento linear crescente (P<0,05), e defeitos menores, comportamento linear decrescente (P<0,05). Não houve diferença (P>0,05) para defeitos totais. Perímetro escrotal e consistência testicular apresentaram comportamento linear decrescente (P<0,05). Quanto aos dados da morfometria testicular, observou-se diferença (P<0,05) para volume das células de Leydig, volume do conjuntivo e volume do espaço intertubular, porém não houve diferença (P>0,05) para peso do testículo, índice gonadossomático, porção volumétrica da lâmina basal, lúmen, epitélio germinativo, vasos sanguíneos e linfáticos, tecido conjuntivo, túbulo seminífero, espaço intertubular, volume dos vasos sanguíneos e linfáticos, volume do túbulo seminífero, comprimento total dos túbulos seminíferos, comprimento total dos túbulos seminíferos por grama de testículo, índice leydigossomático e índice tubolossomático. No perfil metabólico, observou-se comportamento quadrático decrescente (P<0,05) para LDL e quadrático crescente (P<0,05) para concentração plasmática de VLDL e triglicerídios. Não houve diferença (P>0,05) para concentração plasmática de colesterol total, HDL, ureia e testosterona. A administração oral de óleo de nim nas concentrações de até 3 mL/kg de peso vivo durante sete dias causou prejuízos à função reprodutiva de carneiros mestiços da raça Santa Inês, mostrou-se dose – dependente e provocou intoxicação dos animais na maior concentração. / The aim of the study was to evaluate the effect of oral administration of Neem oil on the reproductive function and metabolic profile of crossbred Santa Inês sheep. Thirty animals were divided into four groups (G): GI - control, oral administration of 20 mL of water per animal; GII, GIII and GIV – oral administration of 1, 2 and 3 mL of neem oil/kg body weight (BW), respectively, for seven days. Testis size was estimated and semen was collected twice a week for 93 days to evaluate physical and morphological aspects. Blood samples were collected on days D1, D4, D8, D30, D60 and D90 for determination of plasma testosterone and plasma metabolic profile of the animals. At the end of the experimental period, the animals were slaughtered, and the testes were collected, weighed and sampled for histological evaluations. There was a linear decrease (P˂0.05) for weight gain. A linear decrease (P˂0.05) was observed for semen volume, sperm vigor, turmoil, progressive motility, and sperm concentration. A linear increase (P<0.05) was observed for major defects, and a linear decrease (P<0.05), for minor defects. There was no difference (P>0.05) for total defects. Scrotal circumference and testicular consistency decreased linearly (P<0.05). For the morphometric data of the testes, a difference was observed (P<0.05) for Leydig cell volume, volume of tissue and volume of intertubular space. However, there was no difference (P>0.05) for testis weight, gonadosomatic index, volumetric basal lamina, lumen, germinal epithelium, connective tissue, seminiferous tubule, intertubular space, volume of blood and lymph vessels, seminiferous tubule volume, total length of the seminiferous tubules, total length of seminiferous tubules per testicular gram, leydigosomatic index and tubulosomatic index. In the metabolic profile, a quadratic decrease (P<0.05) was observed for LDL and a quadratic increase (P<0.05), for plasma VLDL and triglycerides. There was no difference (P>0.05) for plasma concentration of total cholesterol, HDL cholesterol, urea and testosterone. Oral administration of Neem oil at concentrations of up to 3 mL/kg body weight for 7 days produced damage to the reproductive function of crossbred Santa Inês sheep. It was shown to be dose dependent and poisoned the animals at the highest concentration.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-07-14T11:26:34Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2240112 bytes, checksum: 4939a4fe99132503c43837da656e03d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T11:26:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2240112 bytes, checksum: 4939a4fe99132503c43837da656e03d6 (MD5) Previous issue date: 2016-01-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A atividade reprodutiva nas coelhas domésticas (Oryctolagus cunniculus) é controlada pelo sistema nervoso, e o mesmo recebe influência tanto do meio interno quanto do meio externo. O órgão vomeronasal liga o ambiente externo a áreas do encéfalo responsáveis por comportamentos reprodutivos e maternais. Baseado nestes aspectos, o estudo visou esclarecer como os comportamentos reprodutivo e maternal e a anatomia dos órgãos genitais seriam influenciados pela obstrução dos ductos incisivos associados à presença ou não do efeito do macho. Para este estudo foram utilizadas 30 coelhas da raça Nova Zelândia dividias em dois experimentos. No primeiro experimento, 10 das 20 coelhas com idade de 50 dias tiveram seus ductos incisivos cauterizados. No segundo experimento, 5 das 10 coelhas tiveram seus ductos incisivos cauterizados com a idade de 50 dias, enquanto as outras 5 foram submetidas à cauterização 10 dias após o parto. As coelhas do primeiro experimento foram divididas em 4 grupos baseados na associação da cauterização ou não dos ductos incisivos com a presença ou não do efeito do macho. As coelhas do segundo experimento foram destinadas exclusivamente para reprodução. As coelhas do primeiro experimento foram pesadas semanalmente, tiveram amostras de sangue coletadas para análise dos hormônios luteinizante (LH), folículo estimulante (FSH) e 17β-estradiol (E2) a cada dez dias, e o comportamento avaliado segundo um etograma adaptado a este estudo. Ao atingirem a idade de 125 dias, estas 20 coelhas foram eutanasiadas para coleta do órgão vomeronasal, do fígado e da vesícula biliar, fragmento dos músculos reto femoral e vasto medial, fragmento da epífise proximal de fêmur e órgãos genitais. A pesagem dos animais mostrou não haver diferença entre a taxa de crescimento e o ganho de peso entre os quatro grupos, mas a presença do macho influenciou no peso independente da cauterização dos ductos incisivos. A avaliação da coloração da vulva não mostrou diferença entre os grupos durante o experimento. O comportamento destas fêmeas mostrou diferença no tempo de auto-catação entre os grupos na ausência do efeito do macho. Os órgãos genitais não apresentaram diferenças anatômicas e histológicas que incapacitassem as fêmeas de gestar. O cálculo do índice hepatossomático não mostrou diferença entre os grupos. O índice gonadossomático mostrou diferença quando associado ao efeito do macho, independente da cauterização dos ductos incisivos estar ou não presente. A qualidade da carcaça se manteve a mesma para os grupos testados. O comprimento do órgão vomeronasal para os animais cujos ductos incisivos foram cauterizados foi menor que nos animais controles independente do efeito do macho. Dos três hormônios avaliados, o E2 mostrou diferença aos 120 dias de idade entre as coletas da manhã e da noite no grupo cujos ductos incisivos foram cauterizados e submetidos ao efeito do macho e no grupo controle sem efeito do macho. Este mesmo hormônio também mostrou diferenças entre as idades na coleta do período noturno para o grupo controle sem efeito do macho. Os níveis séricos do hormônio LH noturno foram diminuindo com a idade para o grupo controle com efeito do macho, enquanto o nível sérico do FSH diminuiu com a idade para o grupo cujos ductos incisivos foram cauterizados sem efeito do macho. As coelhas do segundo experimento não mostraram alteração de comportamento frente ao macho; a capacidade de gestar, o comportamento frente aos láparos e a habilidade materna permaneceram depois da cauterização dos ductos. Estes resultados mostraram que as coelhas mantiveram a sua capacidade reprodutiva intacta ao contrário de outras fêmeas, como ratas, camundongas e porquinhas da Índia. / The reproductive activity on female domestic rabbits (Oryctolagus cunniculus) is controlled by nervous system which, in its turn, is influenced both by internal and external means. The vomeronasal organ binds external environment and cerebrum areas responsible for reproductive and maternal behaviors. Based on these aspects, this study aimed to enlighten how reproductive and maternal behaviors and anatomy of reproductive organs would be influenced by the obstruction of incisive ducts; and how this obstruction is associated to the "male effect". For this study it was used 30 New Zealand female rabbits divided between two experiments. In the first experiment, 10 of the 20 female rabbits 50 days old had its incisive ducts cauterized. In the second experiment, 5 of the 10 female rabbits had their incisive ducts cauterized at 50 days old while the other 5 were submitted to cauterization 10 days after parturition. The female rabbits of the first experiment were divided into 4 group based on association between cauterization or not of incisive ducts and on presence or not of "male effect". The female rabbits of the second experiment were destined exclusively to reproduction. The females of the first experiment were weighted weekly, had blood samples collected every 10 days for analysis of luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH), 17β-estradiol (E2) and had their behavior evaluated by an ethogram adapted for this study. When 125 days old, these 20 females were euthanized for collection of vomeronasal organ, liver, fragments of rectus femoris and vastus medialis muscles, fragment of proximal femoral epiphysis, and reproductive organs. The weighing on the animals showed no difference between growth rate and weight gain among the 4 groups but the presence of male influenced on weight regardless of cauterization. Evaluation of coloring on the vulva showed no difference among groups during the experiment. The behavior of these female rabbits showed difference among groups in time spent on self- grooming in the absence of "male effect". The reproductive organs showed no anatomic or histological differences that could unable the females of gestating. The calculation of hepatosomatic index showed no difference between groups. The gonadosomatic index showed difference when associated to "male effect" regardless of presence or absence of cauterization. The carcass quality was the same among tested groups. The length of the vomeronasal organ from animals with cauterized incisive ducts was lesser than from control animals regardless of "male effect". Among the three tested hormones, E 2 showed difference at 120 days old between collects in the morning and at night on the group with cauterized incisive ducts and submitted to "male effect" and on the control group without "male effect". This same hormone also showed differences between ages in the night collect for control without "male effect" group. The serum levels of nightly LH decreased with age on control with "male effect" group while serum level of FSH decreased with age on the group with cauterized incisive ducts without "male effect". The female rabbits of the second experiment showed no behavioral change in face of male; the capacity of gestating, the behavior with young rabbits and maternal skills remained after cauterization of the ducts. These results showed that female rabbits kept their reproductive ability intact in opposite to other females like rats, mices and guinea pigs.These results showed that female rabbits kept their reproductive ability intact in opposite to other females.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-08-10T10:28:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 475943 bytes, checksum: 4700679733e56fffafeea553d2dd1f56 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T10:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 475943 bytes, checksum: 4700679733e56fffafeea553d2dd1f56 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este estudo foi realizado com o objetivo de verificar se a ação antioxidante da melatonina influencia na viabilidade in vitro pós-descongelamento dos espermatozoides caprinos, bem como verificar o potencial uso deste antioxidante em diferentes concentrações de espermatozoides caprinos criopreservados. Foram utilizados dois machos adultos da raça Alpina e dois machos adultos da raça Saanen. Para as coletas de sêmen foi utilizada vagina artificial onde se obteve seis ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação das características macro e microscópicas. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos : T1 40 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante (Controle); T2 40 X 10^6 espermatozoides com antioxidante; T3 80 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante; T4 80 X 10^6 espermatozoides com antioxidante; T5 100 X 10^6 espermatozoides sem antioxidante e T6 100 X 10^6 espermatozoides com antioxidante.Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático de cada tratamento. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, as palhetas foram resfriadas a cinco graus celsius, durante uma hora em refil plástico contendo álcool etílico. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37 °C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico e teste de termorresistência. As amostras foram avaliadas mediante patologia espermática e por meio de citometria de fluxo quanto à integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial mitocondrial e produção de peróxido de hidrogênio intracelular No sêmen fresco, as características físicas estavam dentro dos parâmetros normais. O melhor resultado obtido no TTR foi referente aos tratamento 100μM (p<0,05), manteve a maior média de motilidade espermática total após cinco minutos de incubação a 37°C. O potencial mitocondrial sofreu alteração frente aos tratamentos com uma concentração de 40 X 10^6 sptz/dose (p<0,05). Em relação à raça, foi observado maior viabilidade celular com presença de peróxido de hidrogênio intracelular na raça saanen comparada a raça alpina (p<0,05). Em relação à concentração espermática, foi observado maior proporção de células viáveis com presença de peróxido de hidrogênio intracelular nos tratamentos com concentração espermática de 40 e 80 x 10^6 espermatozoide/mL, enquanto a menor proporção foi observada no tratamento com 100 x 10^6 espermatozoide/mL (p<0,05). Os resultados obtidos quanto à ação da Melatonina não foram satisfatórios, porém as concentrações utilizadas neste experimento mantiveram a viabilidade seminal de acordo com as características preconizadas pelo CBRA, mas não foram superior ao tratamento controle. / The aim of this study was to evaluate the antioxidant effect of melatonin on the viability in vitro post-thaw sperm of goats, as well as to investigate the potential use of this antioxidant in different concentrations of sperm cryopreserved goats. Four Billy goats were used and six samples were colleted from each and their semen was cryopreserved in commercial diluent Botubov ® . After each collection, the semen was diluted and analyzed, and then distributed along nine experimental treatments: T1 (control) – 40 X 10^6 spermatozoa without melatonin; T2 - 40 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T3 - 40 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin; T 4 - 80 X 10 6 spermatozoa with without melatonin; T5 - 80 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T6 - 80 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin; T7 - 100 X 10^6 spermatozoa without melatonin; T8 - 100 X 10^6 spermatozoa with 1μM melatonin; T9 - 100 X 10^6 spermatozoa with 100μM melatonin. After dilutions, the semen was coled to 5°C, kept in a three- hour period of equilibrium, and then stored in previously identified and sealed 0,25mL straws. The straws were frozen in a liquid nitrogen vapor for 15 minutes, submerged in nitrogen, and then stored in cryogenic cylinder. The doses of semen in the treatments were thawed at 37°C for 30 seconds and subjected to in vitro tests: motility, vigor, morphology, membrane functionality by hypoosmotic test and thermoresistance test (TRT) at 37°C for three hours and by flow cytometry as to integrity of plasma and acrosomal membrane, mitochondrial potential and intracellular peroxide hydrogen production. The results related to Melatonin were not satisfactory, revealing with it the need for new studies about its optimal concentration and effects on semen freezing goats. The best result obtained in TTR was referring to 100μM treatment (p <0.05), maintained the highest average total sperm motility after five minutes of incubation at 37°C. Mitochondrial potential was altered to the treatments with a concentration of 40 X 10^6 sperm / dose (p <0.05). In regard to race, greater cell viability was observed with the presence of intracellular hydrogen peroxide in the Alpine compared Saanen (p <0.05). Regarding the sperm concentration was observed a higher proportion of viable cells in presence of intracellular hydrogen peroxide in treatments with sperm concentration of 40 to 80 x 10^6 sperm / ml, while the smaller proportion was observed in the treatment with 100 x 10^6 sperm / ml (p <0.05). The results obtained as to the action of melatonin were not satisfactory, however the concentrations used in this experiment maintained seminal viability according to the features prescribed by the CBRA, but not higher than the control treatment.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-11-29T17:51:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573452 bytes, checksum: b30ab12e24dedee6f3cd4b820e641897 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-29T17:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 573452 bytes, checksum: b30ab12e24dedee6f3cd4b820e641897 (MD5) Previous issue date: 2016-07-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A produção in vitro de embriões caprinos ainda não é considerada uma biotecnologia rotineiramente efetiva. Um dos fatores mais importante e que dificulta a evolução no processo de todo o processo da PIV é o estresse oxidativo. A proposta adotada neste estudo foi avaliar os efeitos da adição de melatonina em meios de maturação e cultivo in vitro no desenvolvimento de embriões caprinos e na qualidade dos blastocistos oriundos de oocitos de cabras pré-púberes. O objetivo do primeiro estudo foi avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro de embriões partenogenéticos através da taxa de desenvolvimento de blastocistos e vitrificação. Foi utilizado um meio de maturação e de cultivo in vitro e convencional com e sem melatonina (10-9 mol L-1). Os oocitos com células do Cumulus oophorus foram maturados in vitro naqueles meios de maturação por 27 h e então ativados. Estas células ativadas foram cultivadas nos respectivos meios de cultivo por oito dias e então aferidos as taxas de blastocistos. O método de vitrificação foi utilizado de acordo com Mermillod et al., 1998. A adição da melatonina a 10-9 mol L- aos meios de maturação e de cultivo in vitro não apresentou melhora na taxa de blastocistos produzidos. Na segunda parte deste estudo objetivou-se avaliar o efeito da melatonina no meio de cultura in vitro, porém em embriões fertilizados artificialmente, por meio da taxa de desenvolvimento de blastocistos. Utilizou-se um meio convencional para MIV com ou sem adição de melatonina a 10-9 mol L-1. Após a MIV, os oocitos maturados foram inseminados com semen a fresco, e os espermatozoides foram capacitados em meio de capacitação contendo heparina. Os possíveis zigotos foram separados e uma parte foi cultivado em meio de cultura padrão com adição da melatonina a 10-9 mol L-1. Ambos foram cultivados durante oito dias e a taxa de blastocisto foi aferida. Os resultados desta segunda etapa mostraram que ao utilizar melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada ao meio de maturação in vitro convencional melhoraram quanto ao número de células fertilizadas (34,57% vs. 17,39%, p<0,05), embora, não houve melhora na taxa de clivagem e no número de blastocistos produzidos. A conclusão mostra que a melatonina a 10-9 mol L-1 adicionada tanto em MIV, quanto em CIV, não melhora o desenvolvimento e a produção dos embriões in vitro, embora possa aumentar a taxa fertilização in vitro. / The in vitro production of goat embryos is not considered a routinely effective biotechnology. There are a number of factors that hinder the progress in the process of maturation, fertilization, cultivation and freezing. One of the most important factors that cause deleterious effects throughout the IVP process is the oxidative stress. The proposal of this study in order to prevent and to control that stress condition was to supplement the in vitro maturation (IVM) and in vitro culture media (IVC) with melatonin evaluating it effects on the development of goat embryos and quality of embryos derived from prepubertal goats oocytes. The aim of the first experiment was to evaluate the effect of melatonin supplementation in the in vitro culture on development of parthenogenetic embryos. It was used two in vitro maturation media [conventional maturation media (CM) and CM + 10-9 M melatonin] and two in vitro culture media [conventional cultivation media (CC) and CC + 10-9 M melatonin. The oocytes with cumulus cells were randomly distributed in the IVM and then activated by ionomycin method followed by 6-DMAP. Afterwards, presumptive zygotes were randomly distributed in the IVC media and cultured for eight days. Supplementation of 10-9 M melatonin to the IVM and IVC media showed no improvement in the parthenogenetic blastocyst rate. The blastocyst rate diminished when melatonin was added in vitro culture medium. The second study was also evaluate the effect of melatonin in vitro culture medium, but using in vitro fertilization over the blastocyst development rate. We used a conventional medium (CM) to in vitro maturation media and other CM was supplemented with melatonin at 10-9 M. After IVM, the matured oocytes were inseminated with fresh semen, and then, that spermatozoa were capacitated and cultured for eight days. There was an in vitro culture media used and other one added with melatonin (10-9 M). The results of this second study demonstrated that the use of melatonin at 10-9 M added to the in vitro conventional maturation medium presented a beneficial effect on the number of fertilized cells (34.57 % vs. 17.39%, p<0.05). However, this addition there was no improvement in the cleavage rate nor the blastocyst rate. We concluded that melatonin at 10-9 M added in both IVM medium and IVC medium do not improve the development of embryos. However, it can be a gain in the in vitro fertilization rate when melatonin is added in the IVM medium.