Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-19T17:38:36Z No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-22T14:39:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-22T14:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) Previous issue date: 2009 / O presente trabalho teve como objetivo testar diferentes crioprotetores na criopreservação de tecido ovariano suíno. Ovários suínos (n=3) foram coletados em abatedouro local. De cada ovário foram retiradas 10 fatias do córtex ovariano, sendo uma imediatamente fixada (controle) e outra submetida ao cultivo in vitro (Controle CIV). As outras 8 amostras foram criopreservadas, em pares, usando 4 diferentes crioprotetores: DMSO (1,5 M), etilenoglicol (EG 1,5 M), glicerol (GLY 10%) ou propanoglicol (PROH 1,5M) adicionados de 0,4% de sacarose. As amostras foram congeladas pelo método lento e estocadas em nitrogênio líquido por 7 dias. Posteriormente, o tecido ovariano foi descongelado, o crioprotetor foi removido por lavagens sucessivas em meio contendo concentrações decrescentes dos crioprotetores em questão e 0,4% de sacarose. Após a remoção do crioprotetor uma amostra de cada tratamento foi imediatamente fixada e a outra colocada em cultivo in vitro (CIV) com duração de 2 horas e em seguida fixada. As amostras foram processadas para histologia e microscopia eletrônica de transmissão. A porcentagem de folículos morfologicamente normais (FMN) após a criopreservação utilizando DMSO (67,0±4,9), EG (81,8±1,4) e PROH (55,9±9,9) foi significativamente menor (P<0,05) do que a observada no controle fresco (97,7±1,2). Quando o tecido ovariano foi criopreservado com GLY, nenhum folículo morfologicamente normal foi encontrado (0%). Depois do CIV, o tecido criopreservado com PROH (40,1±2,9) apresentou a menor porcentagem de FMN quando comparado aos outros tratamentos e ao controle (85,1±3,3 DMSO CIV; 84,6±3,4 EG CIV; 97,5±1,2 controle CIV). Em geral, a ultraestrutura dos folículos criopreservados com DMSO ou EG, antes e após o cultivo in vitro, foi similar. Apesar de sua ultraestrutura não ter sido muito diferente do controle, algumas alterações leves puderam ser observadas. Em conclusão, a criopreservação de tecido ovariano suíno utilizando DMSO ou EG permite a preservação de um grande número de folículos pré-antrais com morfologia normal. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present work aimed to test different cryoprotectants on cryopreservation of pig ovarian tissue. Pig ovaries (n=3) were collected at a local slaughterhouse. From each ovary 10 cortex slices were taken, and one was immediately fixed (control) and another placed in in vitro culture (IVC control). The other 8 samples were cryopreserved, in pairs, using 4 different cryoprotectants: DMSO (1.5 M), etilene glycol (EG - 1.5 M) glycerol (GLY - 10%) or propanediol (PROH - 1.5 M) with 0.4% sucrose. Samples were slow cooled and stored in liquid nitrogen for 7 days. After thawing and cryoprotectant removing, one sample from each treatment was immediately fixed and the other was placed in in vitro culture (IVC) for 2h and then fixed. Samples were processed for histology and transmission electron microscopy. The percentages of morphologically normal follicles (MNF) in cryopreserved tissue using DMSO (67.0±4.9), EG (81.8±1.4) and PROH (55.9±9.9) were significantly lower (P<0.05) than the observed in fresh control tissue (97.7±1.2). When ovarian tissue was cryopreserved with GLY no morphologically normal follicle could be found (0%). After IVC, PROH (40.1±2.9) presented significantly lower percentage of MNF compared to all other treatments and to the control (85.1±3.3 DMSO IVC; 84.6±3.4 EG IVC; 97.5±1.2 control IVC). In general, the ultrastructure of follicles cryopreserved with DMSO or EG, before and after in vitro culture, was similar. Although their ultrastructure was not very different from control follicles, some alterations could be observed. Signs of advanced degeneration were not observed. In conclusion, the cryopreservation of pig ovarian tissue using DMSO or EG allows a good number of MNF.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-03-02T14:22:25Z No. of bitstreams: 1 2010_RosangelaCorreaRodrigues.pdf: 892512 bytes, checksum: 469f0a8de5e4be4017c25d91cf168374 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-03T12:02:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RosangelaCorreaRodrigues.pdf: 892512 bytes, checksum: 469f0a8de5e4be4017c25d91cf168374 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-03T12:02:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RosangelaCorreaRodrigues.pdf: 892512 bytes, checksum: 469f0a8de5e4be4017c25d91cf168374 (MD5) / Os hormônios sexuais são moduladores do comportamento, os quais têm um papel fundamental na expressão do comportamento sexual. Assim sendo, o presente estudo teve como objetivo avaliar aspectos comportamentais e hormonais do ciclo reprodutivo de Cebus libidinosus mantidos no Centro de Primatologia da Universidade de Brasília. Para isso, durante quatro meses consecutivos foram observados os comportamentos sexuais e não sexuais e, concomitantemente, coletado material fecal para dosagem hormonal de progesterona e androgénos em C. libidinosus. Os dados foram coletados três vezes por semana em 10 indivíduos. Para a coleta dos dados comportamentais foi empregado o método animal focal com registros contínuos e instantâneos. A extração dos hormônios nas amostras fecais ocorreu por meio da hidrólise e solvólise e a dosagem hormonal através de técnica imuno-enzimática. Para fins de análises, indivíduos foram agrupados em: machos adultos, fêmeas adultas e idosas. Os resultados obtidos revelam que o comportamento sexual nos três grupos observados foi distinto, a maior expressão foi encontrada no grupo das adultas. Em relação aos não-sexuais, foram encontradas médias semelhantes nos três grupos estudados. Porém, a média de comportamento de estereotipia foi bem maior no grupo das idosas. Houve diferença significativa no repertório sexual das fêmeas idosas em relação às fêmeas adultas, possivelmente decorrentes do envelhecimento fisiológico, uma vez que essas fêmeas se encontram em idade bem avançada. Os níveis de progesterona foram entre 0,01 e 99 ng/g de fezes, os da testosterona foram 0 e 351 ng/g. Foi encontrada diferença significativa no comportamento sexual das adultas nas diferentes fases do ciclo menstrual, o qual foi maior na fase folicular, confirmando a hipótese de que as flutuações hormonais decorrentes do ciclo menstrual influenciam na expressão comportamental sexual das fêmeas. Os resultados não indicam diferenças significativas do comportamento dos machos em relação às fases do ciclo das suas respectivas companheiras, não confirmando a hipótese que os machos se comportam diferente em decorrência as flutuações hormonais do ciclo reprodutivo das fêmeas. Os resultados desse estudo foram importantes para entender como os hormônios sexuais influenciam no comportamento sexual e não-sexual de C. libidinosus com idades e gêneros distintos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The sex hormones are modulators of behavior, which have a key role in the expression of sexual repertoire. Therefore, this study aimed to study the behavioral and hormonal profile of the reproductive cycle of Cebus libidinosus kept at Primate Center at the University of Brasilia. Data collections were conducted over three times per week in 10 subjects, divided in three groups: adult males, adult females and elderly females. Sexual and not sexual behavior was observed continuously for four months, using focal animal sampling by either instantaneous or continuous recordings. Fecal material was collected concurrently to measure hormone progesterone and testosterone. Hormone quantification was achieved by hydrolysis, solvolysis and immune-enzymatic techniques. Sexual repertoire observed in the three groups was different, the highest expression was found in the group of adults. Nonsexual behaviors were found not different among the three groups. However, the average behavior of stereotypy was higher in the group of elderly female. There were significant differences in the sexual repertoire of elderly females in relation to adult female, possibly due to physiological aging, since in these older females progesterone levels were between 0.01 and 99 ng / g of feces. Testosterone was 0 and 351 ng / g in the adult male group. Significant differences in sexual behavior of adult females at different stages of the menstrual cycle, which was greater in the follicular phase, confirming the hypothesis that hormonal fluctuations resulting from the menstrual cycle influence the expression of female sexual behavior. The results indicate no significant differences in the behavior of males in relation to the phases of the cycle of their respective companions, not confirming the hypothesis that males behave differently due to hormonal fluctuations of the reproductive cycle of females. The results of this study were to understand how sex hormones influence the sexual and nonsexual behavior of C. libidinosus with different ages and genders.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T20:06:03Z No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T20:10:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-16T20:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / O conhecimento da morfologia de folículos ovarianos e ovócitos é crucial para o desenvolvimento e aplicação de tecnologias como cultivo in vitro e a criopreservação. O objetivo da dissertação foi descrever a morfometria de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA), as características ultraestruturais e o perfil lipídico de folículos pré-antrais e antrais de suínos. Fragmentos de tecido ovariano foram processados para microscopias de luz e eletrônica de transmissão para análise dos FOPA. Folículos antrais foram dissecados e divididos em 3 categorias: <2mm; 2-4mm e 4-6mm e processados somente para microscopia eletrônica de transmissão (MET). As amostras destinadas à MET foram processadas para rotina e para detecção de lipídeos (método ósmio-imidazol). Para extração de ácidos graxos os FOPA foram isolados e os ovócitos puncionados dos folículos antrais. Ambos foram processados seguindo a técnica de Folch et al. (1957). Folículos primordiais, primários e secundários mediram 34±5, 40±7 e 102±58 µm, respectivamente. Nos FOPA as organelas concentravam-se próximas ao núcleo do ovócito sendo as mitocôndrias arredondadas as mais abundantes, seguidas de retículo endoplasmático. Nos folículos primordiais e primários gotículas de lipídeo formavam um aglomerado na região cortical do ovócito. Nos folículos secundários a zona pelúcida circundava o ovócito e microvilosidades e projeções das células da granulosa estavam presentes. As mitocôndrias organizavam-se na forma de colar de pérolas e vesículas eram abundantes no citoplasma ovocitário. Nos terciários foi observado início da formação do espaço perivitelineo associado à liberação de microvilosidades da zona pelúcida, mais evidente em folículos maiores que 2mm. Os ovócitos eram repletos de vacúolos geralmente associados a outras organelas. O método ósmio-imidazol confirmou que as vesículas e vacúolos presentes nos ovócitos de folículos secundários e terciários eram gotas lipídicas ou vacúolos contendo lipídeo. Após extração lipídica, tanto nos FOPA quanto nos ovócitos de folículos antrais os ácidos graxos saturados foram encontrados em maior porcentagem, 71,91% e 94,63%, respectivamente. Porém, a proporção de ácidos graxos insaturados em folículos pré-antrais foi maior do que nos ovócitos de folículos antrais (P<0,05). Em conclusão o presente trabalho descreveu a morfometria de FOPA assim como a ultraestrutura e o perfil de ácidos graxos de folículos pré-antrais e antrais. Além disso, demonstrou que ovócitos suínos são ricos em lipídeo e que seu conteúdo e natureza modificam à medida em que os folículos se desenvolvem. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The knowledge of ovarian follicle and oocyte morphology is crucial to the development of reproductive biotechnologies associated to the female gamete, such as cryopreservation and in vitro embryo production. The aim of the present work was to characterize pig preantral follicles (PAF) morphometry and the ultrastructure and lipid composition of preantral and antral follicles. Ovarian tissue was processed for light and transmission electron microscopy (TEM) for PAF analysis. Antral follicles were dissected and divided into 3 groups: < 2mm; 2-4mm and 4-6mm, and processed for TEM. At TEM, ovarian follicles were processed for routine and osmium-imidazole method (lipid detection). For lipid extraction, PAF were isolated and oocytes were aspirated from antral follicles. They were processed according to Folch et al. (1957). Primordial, primary and secondary follicles had 34±5, 40±7 and 102±58 μm in diameter, respectively. In PAF the most abundant organelles were round mitochondria, and endoplasmic reticulum. At primordial and primary follicle oocytes, lipid droplets had polarized localization. In secondary follicles round mitochondria were organized as strings of pearls and many electron-lucent vesicles were observed. The zona pellucida completely surrounded the oocyte and some microvilli and granulosa cells projections were seen through it. In antral follicles the development of perivitelline space was associated with the liberation of microvilli from the zona pellucida, more evident when follicles were bigger than 2mm. Antral follicles oocytes presented many electron-lucent vacuoles all over the cytoplasm and these structures were often associated with other organelles. The osmium-imidazole method confirmed that most of these vesicles and vacuoles seen in secondary and antral follicle oocytes were lipid droplets or vacuoles contenting lipid. After lipid extraction, saturated fatty acids were the most abundant in PAF (71.91%) and in oocytes from antral follicles (94.63%). However, the proportion of unsaturated fatty acids was bigger in PAF, than in antral follicle oocytes (P<0.05). In conclusion, this work described the morphometry of PAF as well as, the ultrastructure and lipid composition of preantral and antral follicles oocytes in pigs. In addition, it proved that pig oocytes are rich in lipids and the nature of lipid contents changes as the follicle develops.

Existe uma associação entre hipertensão arterial e prejuízo da função reprodutiva. No modelo experimental dois-rins, um-clipe (2R1C), a hipertensão de origem renovascular é estabelecida pelo aumento na produção de angiotensina II (Ang II). O presente estudo analisou a evolução temporal dos efeitos da hipertensão promovida pelo modelo 2R1C sobre a função reprodutiva de ratos, bem como a participação dos receptores de Ang II do tipo 1 (AT1) nesse processo. Para tanto, avaliamos as manifestações do comportamento sexual, da gametogênese e das concentrações plasmáticas de Ang ll, hormônio luteinizante (LH), testosterona, prolactina e corticosterona de ratos submetidos ao modelo 2R1C (clipados) ou à cirurgia fictícia (controle) pertencentes aos grupos 7, 14, 21 e 28 dias de procedimento cirúrgico. Essas mesmas análises dos parâmetros endócrinos e do comportamento sexual foram realizadas em outros dois grupos, após 28 dias de clipamento ou cirurgia fictícia, que receberam o tratamento com losartan, um antagonista dos receptores AT1. Os ratos dos quatro grupos analisados, aos 7, 14, 21 e 28 dias de clipamento, sem o tratamento com losartan, apresentaram um aumento nas concentrações plasmáticas de Ang ll e uma resposta hipertensora, quando comparados aos seus respectivos controles. As demais análises das dosagens hormonais mostram que o emprego do modelo 2R1C promoveu redução nas concentrações plasmáticas de LH somente no grupo 7 dias de clipamento e elevação do LH circulante nos grupos 21 e 28 dias de clipamento. As concentrações plasmáticas de prolactina aumentaram nos grupos 14, 21 e 28 dias de clipamento. Além disso, ocorreu diminuição nas concentrações plasmáticas de testosterona no grupo 28 dias de clipamento. Por outro lado, não houve alterações nas concentrações plasmáticas de corticosterona em nenhum grupo. Todos os animais clipados manifestaram inibição de um ou mais parâmetros do comportamento sexual, ocorrendo maior comprometimento desta função com o avanço temporal da hipertensão. Os grupos 21 e 28 dias de clipamento também apresentaram um dano da espermatogênese. O tratamento com losartan normalizou a pressão arterial e preveniu as alterações da prolactina, do LH, do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos clipados por 28 dias. Somado a isso, o losartan ocasionou uma elevação nas concetrações plasmáticas de testosterona no grupo clipado e produziu um aumento na Ang ll circulante nos grupos controle e clipado por 28 dias. Os resultados deste estudo evidenciam que a Ang ll exerce influência modulatória sobre parâmetros endócrinos e comportamentais da função reprodutiva, representando um dos principais elementos determinantes do comprometimento do comportamento sexual e da espermatogênese de ratos com hipertensão renovascular. / There is an association between hypertension and reproductive function impairment. In the two-kidney, one-clip model (2K1C), the renovascular hypertension is established by plasma angiotensin II (Ang II) increases. The present study aimed to analyze the temporal evolution of hypertension effects on rat reproductive function submitted to a 2K1C model. It was also analyzed the AT1 receptors participation in this process. Sexual behavior manifestations, gametogenesis and plasmatic concentrations of Ang II, luteinizing hormone (LH), testosterone, prolactin and corticosterone in rats submited to 2K1C model (clipping) or to sham surgery (control) from groups at 7, 14 , 21 and 28 days after surgery were evaluated. These endocrine parameters and sexual behavior analysis were conducted in two other groups after 28 days of 2K1C or sham surgery, which received losartan treatment - an AT1 receptor antagonist. The rats from the four groups on days 7, 14, 21, and 28 after clipping procedure, without losartan treatment, showed an increase in plasma Ang ll levels and a hypertensive response, compared to their respective control groups. The other hormonal measurements showed that the 2K1C model caused a reduction in plasma LH only in the 7 days after clipping procedure group and a plasma LH elevation in the 21 and 28 days after clipping groups. Plasma prolactin increased in 14, 21, and 28 days after clipping procedure groups. Moreover, there was a decrease in plasma testosterone in the 28 days after clipping group. On the other hand, there were no changes in plasma corticosterone in any group. All clipping animals showed inhibition of one or more sexual behavior parameters and the temporal advancement of hypertension promoted a greater impairment in this function. The 21 and 28 days after clipping procedure groups presented spermatogenesis dysfunction. Losartan treatment normalized the blood pressure and prevented the changes on plasma prolactin and LH levels, sexual behavior and spermatogenesis after 28 days clipping procedure. In addition, losartan treatment caused a rise in plasma testosterone clipping group levels and an increase in circulating Ang ll control and clipping group levels after 28 days of surgery procedure. Together, these results suggest that Ang ll acts modulating behavioral and endocrine parameters of reproductive function in a 2K1C rat model. Therefore, Ang II seems to represent one of the major elements inducing sexual behavior and spermatogenesis impairment in rats with renovascular hypertension.

O objetivo do experimento foi determinar as taxas de sobrevivência pós vitrificação de blastocistos murinos (experimento 1) expostos à duas associações de crioprotetores e envasados em micropipetas de quartzo (QMC) ou de vidro (GMP) e, (experimento 2) comparar as taxas de sobrevivência obtidas na vitrificação dos embriões envasados em QMC de dois diâmetros internos (0,1 mm ou 0,2 mm). No experimento 1, blastocistos murinos coletados no dia 4 de desenvolvimento foram selecionados morfologicamente e divididos aleatoriamente em seis grupos. Grupo 1 (Controle 1): embriões colocados em cultivo imediatamente após a coleta. Grupo 2: embriões expostos a 10% PROH + 10% EG + 0,5% PVA em PBSm (ES1) por 1 min e em seguida expostos a 20% PROH + 20% EG + 0,5% PVA em PBSm (VS1) por no máximo 30 seg, período em que foram envasados em QMC. Grupo 3: idem ao Grupo 2 com envase em GMP. Grupo 4: embriões expostos a 10% DMSO + 10% EG + 0,5% PVA em PBSm (ES2) por 1 min e em seguida expostos a 20% DMSO + 20% EG + 0,5% PVA em PBSm (VS2), por no máximo 30 seg, período em que foram envasados em QMC. Grupo 5: idem ao grupo 4 com envase em GMP. Após a exposição às soluções de vitrificação, os capilares foram imediatamente imersos em N2 líquido. Grupo 6 (Controle 2): embriões não vitrificados colocados em cultivo somente após o final dos procedimentos dos grupos tratados. No segundo experimento, a exemplo do primeiro, foram formados os seguintes grupos: Grupo 1 (controle 1): embriões colocados em cultivo imediatamente após a coleta; Grupo 2: embriões envasados em QCM de 0,1mm de diâmetro; Grupo 3: embriões envasados em QCM de 0,2mm de diâmetro; Grupo 4 (controle 2): embriões não vitrificados colocados somente após o término da vitrificação. Para vitrificação foi utilizado o tratamento 4 do experimento 1. Nos dois experimentos, os embriões vitrificados foram reaquecidos pela exposição a 0,25M de sacarose em PBSm, a 37°C, durante 5min para a retirada do crioprotetor. Após, os embriões foram transferidos para o cultivo in vitro em meio KSOM durante 72h. As taxas de eclosão dos blastocistos nos grupos do experimento 1 foram: G1: 83,07% (54/65), G2: 47,3% (23/49), G3: 38,4% (20/52), G4: 60,4% (29/48), G5: 41,1 (21/51), G6: 77,4% (55/71). No segundo experimento, as taxas de eclosão dos blastocistos foram: G1: 82,5% (33/40), G2: 55,3% (17/31), G3: 58,5% (22/38), G4: 82,0% (41/50). Os resultados observados nos experimentos mostraram que não houve diferença significativa na taxa de eclosão entre os grupos experimentais, entretanto, todos foram inferiores (P>0,05) aos controles. As soluçõesutilizadas, os GMP e os dois diâmetros do QCM testados permitiram que blastocistos murinos vitrificados apresentassem taxas de sobrevivência in vitro semelhantes entre si. / The aim of the experiment was to determine the survival rates after vitrification of mice blastocysts exposed to two different associations of cryoprotectants and loaded in quartz microcapillaries (QCM) or glass microcapillaries (GMP) and, later, to compare the embryo survival rates obtained with murine blastocysts loaded into QMC with two internal diameters (0.1 mm or 0.2 mm). In experiment 1, the murine blastocysts were collected on day 4 of development and morphologically selected and randomly divided into six groups. Group 1 (control 1): not vitrified blastocysts cultured into KSOM drops immediately after collection. Group 2: embryos exposed for 1 minute at 10% PROH, 10% EG, 0.5% PVA in PBSm(ES1) and after exposed to 20% PROH, 20% EG, 0.5% PVA in PBSm (VS1) within 30 seconds, then loaded in QMC. Group 3: the same to group 2 however loaded in GMP. Group 4: exposed to 10% DMSO, 10% EG, 0.5% PVA in PBSm(ES2) and after exposed to 20% DMSO, 20% EG, 0.5% PVA in PBSm(VS2), loaded in QMC. Group 5: the same to group 4 however loaded in GMP. After exposure to vitrification solutions, the capillaries were immediately immersed in LN2. Group 6 (Control 2): not vitrified embryos placed in culture only after the end of vitrification of the treated groups. The second experiment consisted of the following groups: Group 1 (control 1) embryos transferred to culture immediately after collection; Group 2: embryos loaded in QCM with 0.1 mm internal diameter, and Group 3: embryos loaded in QCM with 0.2 mm internal diameter diameter, and Group 4 (control 2): not vitrified embryos placed in culture only after the end vitrification procedures. Groups 2 and 3 were exposed to ES2 and VS2 and later loaded in QMC 0.1 or 0.2 mm in diameter, immediately immersed in LN2. Blastocysts were warmed by exposure to 0.25 M sucrose in PBSm at 37 °C for 5min to remove the cryoprotectant. After warming, the embryos were transferred to 100 μL drops of KSOM during 72 hours. Hatching rates were observed in groups of experiment 1 were: G1: 83.07% (54/65), G2: 47.3% (23/49), G3: 38.4% (20/52), G4: 60.4% (29/48), G5: 41.1 (21/51), G6: 77.4% (55/71). In the second experiment, the blastocyst hatching rates were: G1: 82.5% (33/40), G2: 55.3% (17/31), G3: 58.5% (22/38), G4: 82% (41/50). The results observed in both experiments showed no significant difference in embryo hatching rates among the experimental groups, but all were inferior (P>0.05) to controls. The vitrification solutions used, the GMP and the QCM at two diameters tested provided similar embryo survival rates.

Resumo não disponível

Na inseminação artificial de suínos, são utilizados de 9 a 12 bilhões de espermatozóides por fêmea inseminada. A utilização de menor número de espermatozóides, sem interferir na performance reprodutiva das fêmeas, poderia otimizar o uso dos machos e reduzir os custos de inseminação. Esta tese foi dividida em três experimentos para avaliar o efeito da redução do número de espermatozóides por fêmea inseminada com a técnica tradicional ou intra-uterina. No experimento 1 foram utilizadas 218 leitoas Camborough 22 inseminadas em três intervalos antes da ovulação (0-12, 13-23 e 24-30 h), com doses inseminantes contendo 1,5 bilhão de espermatozóides e armazenadas por 0-48 h ou 96-120 h. As leitoas receberam uma única inseminação. As fêmeas foram abatidas aos 30,83,7 dias de gestação e o trato genital foi removido para contagem do número de corpos lúteos e embriões totais. A taxa de prenhez foi influenciada pelo intervalo inseminação-ovulação quando o sêmen foi armazenado por 96-120 h (P<0,05). Da mesma forma, a interação tempo de armazenamento do sêmen e o intervalo inseminação-ovulação afetou (P<0,05) o número de embriões totais e a sobrevivência embrionária. Quando o período de armazenamento do sêmen foi de 120 h e o intervalo inseminação-ovulação de 24-30 h, foi observada redução no número de embriões totais e na sobrevivência embrionária. No experimento 2 foi avaliado o efeito do intervalo inseminação-ovulação e do número de espermatozóides na dose inseminante em fêmeas submetidas à inseminação intra-uterina. Foram utilizadas 66 matrizes pluríparas da linhagem Camborough 22. As fêmeas foram distribuídas em quatro tratamentos (doses de 1 ou 2 bilhões de espermatozóides diluídos em 60 ml e intervalo inseminação-ovulação de 0-24 e 25-36 h). As fêmeas receberam uma única inseminação intra-uterina. No momento da inseminação, não foi observado refluxo de sêmen. A passagem do cateter pela cérvix foi possível em todas as fêmeas. Foi observada presença de sangue em 1,7% das fêmeas. Aos 314,3 dias de gestação, as fêmeas foram abatidas e o trato genital foi removido para a contagem dos corpos lúteos e número de embriões totais. A taxa de prenhez e a sobrevivência embrionária não foram afetadas pelo número de espermatozóides ou pelo intervalo inseminação-ovulação. O número de embriões totais não foi influenciado pelo número de espermatozóides, mas foi reduzido para o intervalo inseminação-ovulação de 25-36 h comparado a 0-24 h (P<0,05). No experimento 3 foram utilizadas 298 fêmeas Camborough 22 com o objetivo de comparar o desempenho reprodutivo de fêmeas submetidas à inseminação intra-uterina e a tradicional. As fêmeas foram distribuídas em dois tratamentos: T1 – inseminação intra-uterina com doses inseminantes contendo 0,5 bilhão de espermatozóides em um volume total de 20 ml; T2 - inseminação tradicional com doses inseminantes contendo 3,0 bilhões de espermatozóides em um volume total de 90 ml. As fêmeas receberam múltiplas inseminações. Foi possível a realização da inseminação intra-uterina em 98,1% das fêmeas. A presença de sangue, na extremidade do cateter ou espiral da pipeta de inseminação intra-uterina, foi observada em 8,4 % das fêmeas. As taxas de prenhez e de parto ajustada não diferiram entre os tratamentos. No entanto, o tamanho da leitegada foi menor (P<0,05) na IAU quando comparado à tradicional. Na inseminação artificial tradicional, em leitoas, é possível utilizar 1,5 bilhão de espermatozóides sem que as taxas de prenhez, número de embriões totais e sobrevivência embrionária sejam comprometidas. Para a inseminação intra-uterina, a utilização de 1 bilhão de espermatozóides não compromete o desempenho reprodutivo.

A inseminação artificial da leitoa é recomendada levando em consideração a idade, o peso, a espessura de toucinho e o ciclo estral no qual se encontra a fêmea. Entretanto, apesar dessas variáveis estarem correlacionadas, nem sempre todos esse índices são obtidos. A leitoa representa alto impacto nos dias-não-produtivos do plantel e é fundamental que seja inseminada no momento correto pois a longevidade e o desempenho reprodutivo da fêmea suína estão diretamente relacionados com o momento dessa inseminação. Esta tese foi dividida em três trabalhos, objetivando avaliar os efeito da idade, do peso, do estro da cobertura e da taxa de crescimento no desempenho reprodutivo da leitoa. O primeiro experimento foi realizado com o objetivo de determinar se leitoas que apresentam maiores taxas de crescimento e apresentam o peso mínimo recomendado para cobertura em uma idade mais precoce podem ser inseminadas sem apresentarem prejuízos reprodutivos ou uma maior taxa de descarte até o 3º parto. Foram formados 3 grupos, conforme o peso e a idade na inseminação. O grupo 1 foi composto pelas fêmeas que apresentaram alta taxa de crescimento (700 g/dia) inseminadas com idade inferior a 210 dias. O grupo 2 foi formado também por leitoas que apresentaram alta taxa de crescimento (700 g) porém que foram inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias. O grupo 3 foi formado por fêmeas inseminadas com idade igual ou superior a 210 dias mas que apresentaram baixa taxa de crescimento (< 700 g/dia). Houve um maior número de nascidos totais no primeiro parto para as fêmeas do grupo 2. Entretanto, analisando os 3 primeiros partos, não houve diferença no número médio de leitões produzidos (11,6 x 12,3 x 11,7), na taxa de parto (87,1% x 88,7% x 89,8%) e na taxa de descarte (30,0% x 25,3% x 28,3%) entre as fêmeas dos grupos 1, 2 e 3, respectivamente (p>0.05). O segundo experimento foi desenvolvido com o objetivo de avaliar se existia diferença na idade à puberdade, na taxa de ovulação e na sobrevivência embrionária de leitoas que apresentaram diferenças nas taxas de crescimento. Foram selecionadas 120 leitoas, aos 144 dias de idade, sendo formados 2 grupos, de acordo com a taxa de crescimento na seleção. O grupo 1 foi formado por 60 leitoas que apresentaram taxa de crescimento média de 576 g/d e o grupo 2 por 60 fêmeas que apresentaram taxa de crescimento média de 722 g/d na seleção. As fêmeas foram agrupadas em baias e estimuladas ao desencadeamento da puberdade com o auxílio de machos adultos. As leitoas foram inseminadas a partir de 50 dias após o início do manejo e foram abatidas 30 dias após, para análise das ovulações e do número de embriões. As fêmeas com maiores taxas de crescimento apresentaram puberdade mais precoce (156 x 163 dias; p<0.01) e menor porcentagem de anestro aos 190 dias de idade (3,5% x 20,7%; p<0.01). O terceiro experimento teve por objetivo avaliar a influência do estro da inseminação sobre o desempenho reprodutivo no primeiro parto de leitoas que não apresentaram mesmo peso e idade na inseminação. Foram formados 4 grupos, conforme os estros da inseminação, sendo que as leitoas inseminadas no 1º estro apresentaram menor número de nascidos e menor taxa de parto que as leitoas inseminadas no 3º e 4º estros. Não houve diferença nas taxas de parto e no número de leitões nascidos entre as fêmeas inseminadas no 2º, 3º e 4º estro. Conforme os resultados obtidos nos 3 experimentos, é possível concluir que leitoas podem ser inseminadas a partir do 2º estro e aquelas que apresentam maiores taxas de crescimento têm puberdade mais precoce, menor porcentagem de anestro e podem ser inseminadas mais precocemente, sem prejuízos produtivos até o terceiro parto.

O trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos do creep-feeding no ganho de peso e comportamento ingestivo de concentrado dos terneiros e impacto no desempenho produtivo e reprodutivo de vacas primíparas (Experimento I) e de vacas multíparas (Experimento II). Os tratamentos em cada experimento foram T1: vacas amamentando terneiros em sistema creep-feeding; T2: vacas amamentando terneiras em sistema creep-feeding; T3: vacas amamentando terneiros em sistema sem creep-feeding e T4: vacas amamentando terneiras em sistema sem creep-feeding. No Experimento I, o sistema creep-feeding promoveu nas vacas peso vivo (PV) e escore de condição corporal (CC) no final do experimento mais altos (P<0,01) em relação às vacas do sistema sem creep-feeding (412 kg e 3,94 vs. 399 kg e 3,77, respectivamente). Foi observado para as vacas do sistema creep-feeding ganho de peso médio diário (GMD) mais elevados (P<0,01) em relação ao grupo de vacas onde os terneiros (as) não receberam suplementação (0,549 vs. 0,449 kg/dia). O sistema de alimentação e o sexo dos terneiros (as) não influenciaram a porcentagem de repetição de prenhez das vacas primíparas (76,5%). O sistema creep-feeding proporcionou maior peso vivo ao desmame e maior GMD (P<0,01) para terneiros (as) em comparação a estas categorias no sistema sem creep-feeding (194 kg e 0,843 kg/dia vs. 174 kg e 0,701 kg/dia, respectivamente). Na avaliação do comportamento ingestivo de concentrado se observou maior (P<0,01) tempo médio de consumo de concentrado (TCT) para os terneiros em relação as terneiras. Não se encontrou diferença (P>0,05) para número diário de acesso ao cocho (NAT) e porcentagem de terneiros (as) consumindo concentrado (PAT). No Experimento II, não se observou diferença significativa (P>0,05) para GMD e CC das vacas durante o experimento, em função do sistema de alimentação e do sexo dos terneiros (0,265 kg/dia e 3,15, respectivamente). O sistema de alimentação e o sexo dos terneiros (as) não influenciaram a porcentagem de repetição de prenhez das vacas multíparas, apresentando média de 76,5%. O sistema de alimentação e o sexo dos terneiros apresentaram diferenças significativas (P<0,01) para PV ao desmame (195, 184, 172 e 165 kg para T1, T2, T3 e T4, respectivamente) e para GMD (0,849, 0,789, 0,705 e 0,637 kg/dia para T1, T2, T3 e T4, respectivamente). Na avaliação do comportamento ingestivo de concentrado dos terneiros (as) de vacas multíparas não se observou diferença significativa (P>0,05) entre sexo para TCT, NAT E PAT.

Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de avaliar o desenvolvimento e o desempenho reprodutivo de novilhas de corte da desmama até o final do segundo período reprodutivo aos 25/28 meses de idade. O experimento 1 foi de maio de 2003 a março de 2005. Iniciou com 118 bezerras Aberdeen Angus e cruza Angus provenientes de três rebanhos. No outono, as bezerras foram submetidas a níveis de suplementação em pastagem natural: 0,7; 1,0 e 1,3% do peso vivo (PV). No período de inverno foram mantidas em pastagem de aveia (Avena strigosa Schreb) e azevém (Lolium multiflorum Lam). Durante 48 dias pré-acasalamento, foram reagrupadas: SS- novilhas exclusivamente a pasto; CS - novilhas suplementadas a 0,7% do PV. O primeiro período reprodutivo foi em pastagem natural. Após o diagnóstico de gestação permaneceram novilhas prenhes em pastagem de milheto (Pennisetum americanum, L) – PMI; e novilhas prenhes em pastagem natural - PNA. Ao fim dos tratamentos, seguiram em grupo único: pré-parto em pastagem natural, pós-parto em pastagem de azevém e no segundo período reprodutivo em pastagem natural. No outono as bezerras suplementadas com 1,3% PV tiveram maior GMD, 0,405 kg em relação às de 0,7% PV, 0,300 kg. No inverno não existiu diferença no GMD, média de 0,820 kg. No pré-acasalamento as CS tiveram maior GMD, 0,800 kg e maior TP (47%). As PMI tiveram maior PV, 301 kg, e CC pós-parto, 2,9. ATP média no segundo período reprodutivo foi de 77%. O experimento 2 foi de junho de 2004 a março de 2006. Iniciou com 78 bezerras Aberdeen Angus e cruza Angus submetidas a duas épocas de suplementação na recria em aveia e azevém: SIbezerras suplementadas no período inicial da recria; SF- bezerras suplementadas no período final da recria. No primeiro período reprodutivo os tratamentos foram: PM- novilhas em serviço em pastagem natural e milheto; PN- novilhas em serviço em pastagem natural. Durante a gestação os tratamentos foram: PCIG - novilhas prenhes em pastagem de milheto na fase inicial da gestação e pastagem natural no pré-parto; PCFG - novilhas prenhes em pastagem natural na fase inicial da gestação e pastagem de aveia e azevém pré-parto. Em grupo único, seguiram no pós-parto em aveia e azevém e no segundo período reprodutivo sobre pastagem natural. No período inicial da suplementação não houve diferença no GMD, média de 1,108 kg, e no GCC, média de 0,59 ponto. No período final, as SF tiveram maior GMD, 0,685 kg, e GCC, 0,53 pontos. A PM proporcionou maior TP, 97%, em relação à PN, 85%. As AFG foram mais pesadas ao parto, 323 kg e com maior CC (3,3). No segundo período reprodutivo, a taxa de prenhez de 85% nas PCFG foi superior a de 53% nas PCIG. / Two experiments were developed with the objective of evaluate the growth and reproductive performance of beef heifers since the weaning until the end of the second reproductive period at 25/28 months old. The experiment 1 was of May 2003 to March 2005. Began with 118 Aberdeen Angus and Angus crossbreed females calves from three herds. The heifers were submitted to supplementation levels at autumn on natural pasture: 0.7, 1.0 and 1.3% of the LW. During the winner period the heifers were mantained on oat (Avena strigosa Schreb) and annual ryegrass (Lolium multiflorum Lam) pasture. During 48 days pre mating heifers were mantained as: SS - heifers grazing only pasture; CS - heifers supplemented on pasture at proportion of 0.7% of the LW. The first reproductive period was on natural pasture. Only pregnant heifers remained after the pregnancy diagnostic: PMI - pregnant heifers maintained on pearl millet pasture (Pennisetum americanum, L.); PNA - pregnant heifers maintained on natural pasture. At end of the treatments, were maintained as an unique group: on natural pasture at pre calving period, on annual ryegrass pasture at post calving period and on natural pasture at second reproductive period. During the autumn the calves supplemented whith 1.3% LW, had greater ADG, 0.405 kg, than the 0.300 kg of calves supplemented with 0.7% LW. During the winter the ADG wasn’t affected, mean of 0.820 kg. Pre mating CS heifers’ had greater ADG, 0.800 kg and higher PR (47%). The PMI had greater post calving LW 301 kg and post calving BC of 2.9. Mean PR was 77% at the second reproductive. The experiment 2 was June 2004 to March 2006. Began with 78 Aberdeen Angus and Angus crossbreed females calves submitted to two supplementation periods during the rearing on oat and annual ryegrass pasture: SI - heifers supplemented at initial period of rearing; SF - heifers supplemented at final period of rearing. At first mating period the treatments were: PM - heifers on service on natural pasture and pearl millet; PN - heifers on service on natural pasture. During the gestation period the treatments were: PCIG - pregnant heifers maintained on pearl millet pasture at initial gestation period and natural pasture at pre calving period; PCFG - pregnant heifers maintained on natural pasture at initial gestation period and oat and annual ryegrass pasture at pre calving period. Heifers were maintained as an unique group on oat and annual ryegrass pasture at post calving period and on natural pasture at second reproductive period. At initial period there was no differences in ADG, mean of 1.108 kg, and in BCG, mean of 0.59 point. At final period, the SF heifers had higher ADG, 0.685 kg, and BCG, 0.53 point. The PM got higher PR, 97%, in relation to PN, 85%. The PCFG had greater calving LW of 323 kg and post calving BC of 3.3 points. PCFG cows pregnancy rate of 85% was greater than the 53% of the PCIG ones at the second reproductive period.