Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-09T16:10:18Z No. of bitstreams: 1 Nivan Antonio Alves da Silva.pdf: 1743300 bytes, checksum: b072f6750488b491d2565ab1e9cc28bb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T16:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nivan Antonio Alves da Silva.pdf: 1743300 bytes, checksum: b072f6750488b491d2565ab1e9cc28bb (MD5) Previous issue date: 2011-02-09 / The objective of this study was to describe the epidemiological, clinical, and ultrasound findings in 24 cattle affected with traumatic pericarditis. The epidemiological and clinical data were obtained from case histories and physical examinations. Was made the blood count and serum concentrations of total plasma protein and plasma fibrinogen. Ultrasound examination was performed in the left side over the ventral thorax and between the 4th to 8th intercostal spaces with a 3.5 MHz convex transducer. All affected animals were dairy female, mostly nursing, created semi-intensive, with a mean age of five years. The owners were main complaints of decreased appetite and milk production, being diagnosed mainly in the summer (dry season), with periods of disease ranging from one to 30 days. The main clinical findings were related to cardiovascular changes such as tachycardia, abnormalities in cardiac auscultation as muffled sounds and fluid, jugular vein distention and oedema in the submandibular region and brisket. The increase in fibrinogen and a neutrophilic leukocytosis were present in most cases. In the thoracic cavity, the ultrasound revealed distension of the pericardial sac varied by hypoechoic fluid content causing a medial displacement of the heart, fibrin deposits echogenic free fluid in the pericardial and/or adhered to the epicardium and the pericardial sac, hypoechoic pleural effusion, lung displacing dorsally, irregular structures and filaments of different echogenicity adhered to the pleura. In the abdominal cavity, the changes were located mainly in the ventral and cranial with dorsal displacement of the reticulum. Changes in the reticulum contour is characterized by the presence of masses irregular hypo-or hyperechoic, abscesses, fibrin strands, hypoechoic fluid or anaecóico latter being evidenced in cases of ascites. Reticular contractions showed disorders in the frequency, amplitude or speed being evidenced in isolation or combined. The interaction of information obtained from epidemiological, clinical and laboratory findings, coupled with the sonographic findings were sufficient for the diagnosis and prognosis of cattle suffering from traumatic pericarditis. / O objetivo deste trabalho foi descrever os achados epidemiológicos, clínicos e ultrassonográficos em 24 bovinos acometidos por reticulopericardite traumática. Os dados epidemiológicos e clínicos foram obtidos por meio das anamneses e exames físicos. Realizou-se o hemograma e dosagens das concentrações de proteína plasmática total e fibrinogênio plasmático. O exame ultrassonográfico foi realizado no antímero esquerdo sobre a região crânio ventral do tórax e do 4º ao 8º espaço intercostal com um transdutor convexo de 3,5 MHz. Todos os animais acometidos eram fêmeas leiteiras, sendo a maioria lactante, criadas semi-intensivamente, com média de idade de cinco anos. As principais queixas dos proprietários foram diminuição do apetite e produção láctea, sendo diagnosticada principalmente no verão (época seca), com período de evolução da doença variando de um até 30 dias. Os principais achados clínicos encontrados foram relacionados às alterações cardiovasculares como, taquicardia, anormalidades na ausculta cardíaca como abafamento e sons de líquidos, distensão da veia jugular e edemas na região submandibular e barbela. Os principais achados laboratoriais evidenciados foram leucocitose neutrofílica com desvio a esquerda regenerativo e hiperfibrinogenia. Na cavidade torácica, o exame ultrassonográfico revelou variada distensão do saco pericárdico por conteúdo líquido hipoecoíco levando ao deslocamento medial do coração, depósitos de fibrina ecogênicos livres no fluído pericárdico e/ou aderidos ao epicárdio e saco pericárdico, efusão pleural hipoecóica, deslocando pulmões dorsalmente, massas e filamentos de diferentes ecogênicidades aderidos à pleura. Na cavidade abdominal, as alterações se localizaram principalmente na região crânio ventral, com deslocamento dorsal do retículo. As alterações no contorno reticular se caracterizaram pela presença de massas sem contorno definido hipo ou hiperecóicas, abscessos, filamentos de fibrina, líquido hipoecóico ou anaecóico sendo este último evidenciado nos casos de ascite. As contrações reticulares apresentaram alterações quanto à frequência, amplitude ou velocidade sendo evidenciadas de forma isolada ou combinada. As informações obtidas dos dados epidemiológicos, clínicos e laboratoriais foram condizentes com a gravidade da enfermidade, contudo, os achados ultrassonográficos foram determinantes para a confirmação do diagnóstico e determinação do prognóstico dos bovinos acometidos por retículopericardite traumática.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T12:25:05Z No. of bitstreams: 1 Pedro Augusto Marinho Patriota Lima.pdf: 1417191 bytes, checksum: 7e1d18fc8ee49410d1d129b817022e3f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T12:25:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedro Augusto Marinho Patriota Lima.pdf: 1417191 bytes, checksum: 7e1d18fc8ee49410d1d129b817022e3f (MD5) Previous issue date: 2013-02-08 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The gossypol is a Polyphenolic yellow pigment (C30H30O8), toxic that is present in all parts of cotton plant and its derivatives. Experiments show the reproductive side effects caused by feed containing high percentage of bran or cottonseed and claim that gossypol might affect in different ways the reproductive system, causing sperm abnormalities and subsequent infertility. In this work, it was examined the effects caused by diet rich in cottonseed containing gossypol on hair sheep ram semen Santa Inês Breed. The work was performed with 22 rams, sexually mature, which were divided into 2 groups, being the animals confined in individual stocks. The gossypol group (Gg = 15), was supplemented with 500g of gossypol cottonseed and the control group (Gc = 7), supplemented with 500g of corn. The two groups were supplemented during 104 days and underwent semen collections, by the method of artificial vagina and measurements of scrotal circumference (C.E.), before (7 days), during (at intervals of 15 days) and after (10 days) the supplementation period. Non o statistical difference was seen in the mean C.E. group being treatment and control group respectively 27.07 cm and 27.08 cm. The variable observed in the semen were: color, aspect, volume, whirling, motility, concentration, vigor and sperm morphology. For color and aspect analyses were qualitative and no differences were seen in these parameters. The mean for seminal volume for animals who consumed cottonseed was 1.04 ml and for control group was 0.94 ml with no significant difference. In the variable whirling, motility, vigor, concentration and morphology there was no statistical difference and the results was respectively 4.12-81.6%-4.26-3.57 x 109/ml sptz – 6.7% and 3.91 control group – 74.77%-4.07-3.48 x 109 sptz/ml-5.97%. After the last semen collection 5 animals from gossypol group and 2 animals from control group was submitted to unilateral orchiectomy. The material was used to perform the comparative Histopathological examination in historesin, No difference in seminiferous tubule diameter was seen between control and gossypol group. There was a significant difference in seminiferous epithelium height, having a larger measurement at gossypol epithelium compared with control group. The height of seminiferous epithelium is an effective feature for sperm production assessment, however in this study there was no significant difference in sperm concentration between control and treatment group demonstrating that this difference did not affect sperm production. Two out of the three castrated animals from gossypol group were used as a fertility test exposing them to 10 fertile ewes during 90 days, resulting in 6pregnancies. The results showed that supplementation with cottonseed gossypol rich-diet did not influence sperm quality, testicular morphology, fertilization capacity and seminiferous tubules morphology. / O gossipol é um pigmento polifenólico amarelo (C30H30O8), de natureza tóxica que está presente em todas as partes do algodoeiro e em seus derivados primários. Experimentos realizados mostram os efeitos colaterais na reprodução causadas por rações contendo alta porcentagem de farelo ou caroço de algodão e afirmam que o gossipol pode afetar de maneira multiforme o sistema reprodutivo, causando anormalidade nos espermatozoides e consequente infertilidade. Nesse trabalho foram analisados os efeitos causados pela dieta rica em caroço de algodão contendo gossipol no sêmen de ovinos deslanados da Raça Santa Inês. Para isso, o trabalho foi desenvolvido com 22 ovinos machos, em idade reprodutiva, os quais foram divididos em dois grupos, sendo os animais confinados em baias individuais. O grupo gossipol (Gg = 15), suplementado com 500g de caroço de algodão e o grupo controle (Gc = 7), suplementado com 500g de milho. Os dois grupos foram suplementados durante 104 dias e foram submetidos a coletas de sêmen, pelo método da vagina artificial e aferições de circunferência escrotal (C.E.), antes (7dias), durante (em intervalos de 15 dias) e depois (14 dias) do período de suplementação. Não houve diferença estatística na média de circunferência escrotal (C.E.) sendo a média do grupo tratamento e do grupo controle respectivamente 27,07 cm e 27,08 cm. As variáveis observadas no sêmen foram: coloração, aspecto, volume, turbilhonamento, motilidade, concentração, vigor e morfologia espermática. Para coloração e aspecto as análises foram qualitativas e não foram observadas diferenças nessas variáveis. A média do volume seminal para os animais que consumiram caroço de algodão foi de 1,04 ml e para os que não consumiram foi de 0,94 ml. Nas variáveis de turbilhonamento, motilidade, vigor, concentração e morfologia não houve diferença significativa sendo os valores do grupo tratamento respectivamente 4,12 – 81,6% - 4,26 – 3,57 x 109sptz /ml – 6,7% e do grupo controle 3,91 – 74,77% – 4,07 – 3,48 x 109sptz/ml – 5,97%. Após o término da última coleta de sêmen cinco animais sofreram orquiectomia unilateral, sendo dois do grupo controle e três do grupo gossipol. O material foi utilizado para realização de exame histopatológico comparativo em historesina, onde não apresentou diferença significativa entre tratamento e controle quanto ao diâmetro de túbulo seminífero, e apresentou diferença na altura do epitélio seminífero. Tendo o grupo gossipol maiores medidas de epitélio do que o grupo controle. A altura do epitélio seminífero é uma característica efetiva para a avaliação da produção espermática, entretanto nesse estudo não houve diferença significativa na concentração espermática entre grupo controle e tratamento demonstrando que essa diferença não afetou a produção espermática. Dois dos três animais castrados do grupo gossipol foram utilizados para um teste de fertilidade, onde cobriram 10 ovelhas férteis durante 90 dias, resultando em 6 prenheses positivas. Os resultados da pesquisa mostram que a suplementação com caroço de algodão não influenciou a qualidade espermática, a morfometria testicular, a capacidade fertilizante dos espermatozoides e a morfologia dos túbulos seminíferos.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T12:45:43Z No. of bitstreams: 1 Rafael Otaviano do Rego.pdf: 3781500 bytes, checksum: 0d74623e13f1d6c6710f143ebf173d5f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T12:45:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rafael Otaviano do Rego.pdf: 3781500 bytes, checksum: 0d74623e13f1d6c6710f143ebf173d5f (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lysosomal storage diseases (LSD) cause neurological disorders in humans and animals and are classified as genetic or acquired. The acquired type result of ingestion of plants containing specific inhibitors of catabolic lysosomal enzymes causing neuronal metabolic substrates accumulation. Among these plants, in Brazil best known neurolipidosis are caused by some species of Solanum, responsible for intoxication in ruminants clinically distinguished by cerebellar disorders. They are commonly known as "Jurubebas" and are widely used in folk cooking and medicine, the Solanum paniculatum is the predominant species in the Northeast and considered the true jurubeba. From 2005 to 2008 outbreaks of poisoning in cattle occurred in properties located in Pernambuco, where animals were kept in pastures invaded by this species. In southern Brazil, the best known species to cause neurological poisoning in cattle is the S. fastigiatum var. fastigiatum. Several species of Solanum cause similar diseases in other countries: S. kwebense in South Africa, S. dimidiatum in the U.S. and S. bonariense in cattle in Uruguay and S. viarum, S. cinereum cause similar poisoning in goats in Australia and the U.S. respectively. This poisoning in ruminants is considered low morbidity and mortality and is characterized by clinical signs restricted to the central nervous system with seizures or epileptiform periodic and transient, especially when the animals are excited, with intention tremors, opisthotonos, nystagmus and loss of balance. These attacks can be induced by the Head Raising Test. At necropsy no gross lesions are found in specific poisoning, but can be observed lesions associated with injuries from falls. Histological lesions are located mainly in the cerebellum, characterized by degeneration, with thin diffuse vacuolation of the perikaryon and loss of Nissl granules in Purkinje cells and multifocal areas of loss or disappearance of these cells. The diagnosis of poisoning is based on clinical signs, epidemiological data, in the presence of the plant can be confirmed by characteristic pathological lesions. There is no known treatment and prophylaxes of poisoning are difficult. As S. paniculatum is the predominant species in the Northeast and responsible for spontaneous intoxication outbreaks described in the State of Pernambuco, is of utmost importance to perform an experimental study of S. paniculatum in cattle developing the clinical and pathological criteria to describe the location of the lesions in the CNS, measure changes in cerebrospinal fluid and perform morphometry of cerebellar damage. / Doenças do depósito lisossomal (DDL) causam distúrbios neurológicos em humanos e animais, sendo classificadas como genéticas ou adquiridas. As adquiridas resultam da ingestão de plantas que contêm inibidores específicos de enzimas catabólicas lisossômicas que causam acumulo neuronal de substratos metabólicos. Dentre essas plantas, no Brasil a neurolipidose mais conhecida são as causadas por algumas espécies de Solanum, responsáveis por intoxicações em ruminantes caracterizadas clinicamente por desordens cerebelares. Elas são conhecidas comumente por “Jurubebas” e são muito usadas na culinária e medicina popular, sendo a espécie Solanum paniculatum a predominante no Nordeste e a considerada a verdadeira jurubeba. De 2005 a 2008 surtos de intoxicação em bovinos ocorreram em propriedades localizadas no Agreste do estado de Pernambuco, onde os animais permaneciam em pastos invadidos por esta espécie. No Sul do Brasil, a espécie mais conhecida causando intoxicação em bovinos com quadros neurológicos é a S. fastigiatum var. fastigiatum. Diversas espécies de Solanum causam doenças semelhantes em outros países: S. kwebense na África do Sul, S. dimidiatum nos Estados Unidos e S. bonariense no Uruguai em bovinos e S. viarum, S. cinereum causam intoxicação semelhante em caprinos na Austrália e nos Estados Unidos, respectivamente. Essa intoxicação em ruminantes é considerada de baixa morbidade e mortalidade e caracteriza-se por sinais clínicos restritos ao sistema nervoso central, com crises convulsivas ou epileptiformes periódicas e transitórias, principalmente, quando os animais são excitados, apresentando tremores de intenção, opistótono, nistagmo e perda do equilíbrio. Esses ataques podem ser induzidos pelo Head Raising Test. Na necropsia não são encontradas lesões macroscópicas específicas da intoxicação, mas podem ser observadas lesões associadas aos traumatismos provenientes das quedas. Já as lesões histológicas estão localizadas principalmente no cerebelo, caracterizadas por degeneração, com vacuolização difusa fina do pericário e perda dos grânulos de Nissl das células de Purkinje e áreas multifocais de perda ou desaparecimento dessas células. O diagnóstico da intoxicação é baseado nos sinais clínicos observados, nos dados epidemiológicos, na presença da planta, podendo ser confirmado pelas lesões histológicas características. Não se conhece tratamento e as medidas profiláticas das intoxicações por jurubeba são difíceis. Por ser S. paniculatum a espécie predominante na região Nordeste e a responsável pelos surtos de intoxicação espontânea descrita no Estado de Pernambuco, é de fundamental importância realizar um estudo experimental da S. paniculatum em bovinos desenvolvendo o quadro clínico-patológico para descrever a localização das lesões no SNC, avaliar as alterações no líquido céfalo-raquidiano e realizar a morfometria da lesão cerebelar.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-10T13:08:46Z No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-10T13:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Robespierre Augusto Joaquim Araujo Silva.pdf: 876319 bytes, checksum: 0f2c3e9ca22ca2262229c589230deed3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to evaluate the influence of different extenders [Tris buffer (Tris), Tris-egg yolk (EY) and Tris-soybean lecithin 1% (SL1) and 2% (SL2)] and the removal of seminal plasma process in goat sperm stored at 5 ºC for 48 hours. Semen was collected four goats (two Toggenburg and two American Alpine), using an artificial vagina twice a week for four weeks. Ejaculates with greater than 60% motility were pooled and each pool seminal (n = 8) was used in a repeat. The pool was divided equally, half diluted without removal of seminal plasma (non washed semen – NW), and packaged in straws of 0.25 mL (200x106 sperm/mL). The second half of the pool was subjected to removal of the seminal plasma (washed semen - W) by double centrifugation (2200 g/10 min) then diluted and packaged as mentioned above. Then, the samples were chilled to 5 °C (90 min) and kept under refrigeration for 48 hours. Computer analysis of sperm kinetics (CASA) and the evaluation of the plasma membrane (PMi) and acrosomal (ACi) integrity and mitochondrial membrane potential (MMP) were determined within five minutes after reaching 5 °C (T0), and after 24 (T24) and 48 (T48) hours of storage. No influence extender (p>0.05) was observed for sperm kinetic variables of NW semen, however, independent extender, progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), straightline velocity (VSL) and average path velocity (VAP) were lower (p<0.05) in T48 compared to T0, a fact confirmed for total motility (TM) of SL2 group. In washed semen, TM and MP of EY group was higher (p <0.05) than the other groups throughout chilling period. After removal of the seminal plasma did not influence the cooling time (p>0.05) in any of the kinetic variables SL2 group. However, LIN, STR, VSL values for Tris-EY and SL1 groups, and PM and VAP values for Tris-EY group, were lower in T48 compared to T0. It was observed also that in the T48 TM, PM, VSL and VAP variables of LS2 group, and PM variable of Tris-EY group were higher in semen washed when compared to semen non whased. The PMi was not influenced by the type of extender, but in NW semen PMi of Tris-EY and SL2 groups was lower (p <0.05) in T48 compared to T0. Greater (p <0.05) PMi was observed for the washed compared to non washed semen. The ACi and kinetics (curvilinear velocity – VCL) were not affected (p>0.05) by extender, or by storage time or the removal of seminal plasma. Thus, it is concluded that the soybean lecithin can be used as a substitute for egg yolk for cooling of goat semen and which removal of the seminal plasma enhances the preservation of the caprine semen. / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de diferentes diluidores [Tris tampão (Tris), Tris-Gema (TG) e Tris-lecitina de soja 1% (LS1) e 2% (LS2)] e do processo de remoção do plasma seminal no sêmen caprino armazenado a 5 ºC por 48 horas. O sêmen foi colhido de quatro caprinos (dois Toggenburg e dois Alpino Americano), com vagina artificial, duas vezes por semana, durante quatro semanas. Ejaculados com motilidade superior a 60% foram agrupados e cada pool seminal (n=8) foi utilizado em uma repetição. O pool foi igualmente dividido, sendo metade diluído, sem remoção do plasma seminal (sêmen não lavado – NL), e envasado em palhetas de 0,25 mL (200x106 espermatozoides/mL). A segunda metade do pool foi submetida a remoção do plasma seminal (sêmen lavado – L) por dupla centrifugação (2200 g/10min) e depois diluída e envasada como citado anteriormente. Em seguida, as amostras foram refrigeradas até 5 ºC (90 min) e mantidas sob refrigeração por 48 horas. Análise computadorizada da cinética espermática (CASA) e a avaliação da integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossomal (iAC) e do potencial de membrana mitocondrial (PMM) foram determinadas cinco minutos após atingir 5 ºC (T0), após 24 (T24) e 48 (T48) horas de armazenamento. Nenhuma influência do diluidor (p>0,05) foi observada para as variáveis de cinética espermática do sêmen NL, porém, independente do diluidor, motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR), velocidade em linha reta (VSL) e velocidade média do percurso (VAP) foram menores (p<0,05) no T48 em relação ao T0, fato também observado para motilidade total (MT) do grupo LS2. No sêmen lavado, MT e MP do grupo Gema foi superior (p<0,05) aos demais grupos durante todo período de refrigeração. Após a remoção do plasma seminal não houve influência do tempo de refrigeração (p>0,05) sobre quaisquer das variáveis cinéticas do grupo LS2. Entretanto, os valores de LIN, STR, VSL para os grupos Tris-Gema e LS1, e MP e VAP para o grupo Tris-Gema, foram inferiores no T48 em relação ao T0. Observou-se, ainda, que no T48 as variáveis de MT, MP, VSL e VAP do grupo LS2, e MP do grupo Tris-Gema foram superior no sêmen lavado quando comparado ao sêmen não lavado. A iMP não foi influenciada pelo tipo de diluidor, porém no sêmen NL a iMP dos grupos Tris-Gema e LS2 foi inferior (p<0,05) no T48 em relação ao T0. Maior (p<0,05) iMP foi observada para o sêmen lavado em relação ao não lavado. A iAC e a cinética (velocidade curvilinear-VCL), não foram influenciadas (p>0,05) pelo diluidor, nem pelo tempo de armazenamento ou pela remoção do plasma seminal. Assim, conclui-se que a lecitina de soja pode ser utilizada como substituto à gema de ovo para refrigeração do sêmen caprino e que a remoção do plasma seminal melhora a conservação do sêmen dessa espécie.

Os experimentos tiveram como objetivo determinar a taxa de eclosão dos embriões vitrificados em volumes diferentes de 9,0 M de etileno glicol. Simultaneamente, testou-se dois procedimentos de estocagem dos fios de teflon, denominados caixa de aço inoxidável e globete/raque. No experimento I, os 881 embriões coletados foram distribuídos em 4 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 307 embriões foram cultivados in vitro em meio PBSm, acrescido de 0,4% de BSA; tratamento 2 (T2): 292 embriões foram expostos à solução de glicerol 10% acrescida de 0,4% de BSA, envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool; tratamento 3 (T3): 138 embriões foram expostos durante 2 minutos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e então transferidos para a solução de vitrificação (50% de EG + 6% de BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos e foram colocados em volume de 1 μL no interior de um fio de teflon, medindo 0,4 mm de diâmetro, 2,0 cm de comprimento e 0,05 mm de espessura. Os fios foram acondicionados em uma caixa de aço inoxidável para serem armazenados em nitrogênio líquido; tratamento 4 (T4): 144 embriões foram expostos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e após 2 minutos, foram transferidos para a solução de vitrificação (50% de EG + 6% BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos, sendo após transferidos para um volume de 1 μL no interior do fio de teflon. Os fios de teflon foram estocados em globetes unidos às raques e mantidos em nitrogênio líquido. Após o aquecimento, os embriões foram cultivados em PBSm suplementado com 0,4% de BSA. As taxas de eclosão embrionária observadas foram: T1=76,29% (245/307); T2=41,05% (117/292); T3=37,98% (54/138) e T4=26,78% (37/144). No segundo experimento, 747 embriões foram distribuídos em 3 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 80 embriões foram cultivados in vitro em meio KSOM acrescido de 0,4% de BSA; tratamento 2 (T2): 334 embriões expostos em solução de glicerol 10% acrescida de 0,4% de BSA, foram envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool; tratamento 3 (T3): 333 blastocistos foram expostos durante 2 minutos à solução de desidratação (10% de EG + 0,4% BSA em PBSm) e então transferidos para tubos eppendorf de 2,0 mL em contato com a solução de vitrificação (50% de EG + 0,4% BSA em PBSm). Após o cultivo in vitro, as taxas de eclosão embrionária observadas nos 3 tratamentos foram respectivamente: 88,75% (71/80), 40,44% (141/334) e 19,70% (66/333). Baseado nesses resultados conclui-se que embriões Mus domesticus domesticus submetidos à técnica de vitrificação após exposição à solução de 9,0 M de etileno glicol e envase em fios de teflon assegurou índices satisfatórios de sobrevivência embrionária. As taxas de sobrevivência dos embriões Mus domesticus domesticus foi independente do procedimento de estocagem em botijão de nitrogênio líquido. A vitrificação em solução de 9,0 M de etileno glicol com envase em tubos eppendorf não foi eficiente para promover altas taxas de sobrevivência embrionária, mas proporcionou segurança biológica aos embriões, durante o armazenamento. / This work was performed with Mus domesticus domesticus embryos to verify the in vitro viability of vitrified embryos using differents volumes of ethylene glycol–based solution. The experiment I consisted of four treatments. The 881 collected embryos were arranged as follows: treatment 1(control): 307 fresh embryos were cultured in vitro in PBSm + 0.4% BSA without being exposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2: 292 embryos were loaded into 0.25 mL french straws containing 10% glycerol + 0.4% BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure (Biocool®, controlled freezer); treatment 3:138 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) and then transferred to the vitrification solution (50% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) in teflon wire with 0.4 mm diameter, 2 cm length and 0.05 mm thickness containing the drop of 1μL volume, and placed into stainless steel box for the storage in LN2; treatment 4:144 embryos were exposed to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) and after 2 minutes were transferred to the teflon wire, that was previousily loaded with 1μL of the vitrification solution (50% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm). Finally, the teflon wires were placed into plastic globets attached to aluminum canes and maintained in LN2. After thawing, the embryos were serially washed in PBSm, and then cultured in PBSm supplemented with 0.4% BSA. The hatched blastocyst rates observed in the treatments were: T1=76.29% (245/307); T2=41.05% (117/292); T3=37.98% (54/138) and T4=26.78% (37/144). In the second experiment, 747 embryos were arranged as follows: treatment 1(control): consisted of 80 fresh embryos cultured in vitro in KSOM medium + 0.4% BSA without being exposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2: 334 embryos were loaded into 0.25 mL french straws containing 10% glycerol + 0.4% BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure (Biocool®, controlled freezer); treatment 3: 333 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 0.4% BSA in PBSm) and then transferred to the eppendorf tubes loaded with the vitrification solution (50% ethylene glycol + 0.4% BSA in PBSm). After in vitro culture, the hatched blastocysts rates observed were: T1=88.75% (71/80); T2=40.44% (141/334) and T3=19.70% (66/333). Based on these results it is concluded that the embryos of Mus domesticus domesticus submitted to vitrification procedure after being exposed to 9.0 M of ethylene glycol – based solution and loaded in teflon wires were efficient to promote satisfactory embryo survival rates. The survival rate of Mus domesticus domesticus embryos was independent of the LN2 storage procedure. The vitrification procedure after being exposed to 9.0 M of ethylene glycol – based solution and loaded in eppendorf tubes were not efficient to promote high embryo survival rate, but to warrant the embryo’s biologically security during storage in liquid nitrogen.

Este estudo foi realizado com o objetivo de: 1) determinar a influência da tensão de oxigênio na viabilidade das células do cumulus oriundas de oócitos caninos maturados em meio com alta concentração de glicose (11,0 mM); 2) determinar a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos mantidos em meio contendo altas concentrações de glicose (11,0 mM), bem como avaliar o efeito da tensão de oxigênio sobre a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos; 3) determinar a influência da adição de água de coco em pó (ACP-318®) ao meio de maturação com alta concentração de glicose (11,0 mM) na taxa de maturação in vitro de oócitos caninos. O meio de maturação usado nos experimentos foi TCM 199 suplementado com 26,19 mM de bicarbonato de sódio, 50 μg/ml de gentamicina, 0,20 mM de ácido pirúvico, 20 μg/ml de estradiol, 0,5 μg/ml de FSH e 0,03 UI/ml hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental apresentada. Os resultados do primeiro experimento mostraram diferença estatística nas taxas de apoptose nas células do cumulus entre os três grupos avaliados. Foi concluído que células do cumulus oriundas de COCs caninos cultivados em meio contendo altas concentrações de glicose apresentaram significativamente menos apoptose do que as cultivadas em meio com soro fetal bovino, e que a baixa tensão de oxigênio foi eficiente em reduzir a ocorrência de apoptose nas células do cumulus. No segundo experimento deste estudo, os índices mais elevados (p < 0,001) de oócitos degenerados foram obtidos, quando TCM 199 era suplementado com 10 % de FCS. Uma influência positiva sobre a retomada de meiose e aquisição de metáfase I (MI) foi observada quando os oócitos caninos foram maturados em meio livre de soro e com altas concentrações de glicose. Foi concluído que a adição de FCS ao meio de maturação de oócitos caninos resulta em altas taxas de degeneração dos oócitos e que a redução da tensão de oxigênio não resultou em melhora da taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Os resultados obtidos no terceiro experimento mostraram que nos grupos experimentais cujo meio foi suplementado com ACP-318®, houve melhora significativa (p < 0,05) na taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Oócitos maturados em meio suplementado com 5% de ACP-318® mostraram-se menos susceptíveis a alterações na configuração típica da cromatina que os maturados com 10% de ACP-318® no meio de maturação. Os resultados sugerem que tanto a integridade da morfologia nuclear, como a progressão da meiose dos oócitos caninos são positivamente influenciadas quando estes são expostos ao TCM 199 com alta concentração de glicose e suplementado com 5% de ACP-318®. / This study was designed: 1) determine the influence of oxygen tension on cumulus cell (CC) viability from canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 2) determine the influence of two oxygen tensions on the nuclear maturation of canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 3) determine the influence of powdered coconut water (ACP-318®) diluted in high glucose (11.0 mM) TCM199 in the achievement of nuclear in vitro maturation (IVM) of canine oocytes. Basic medium used in the experiments was TCM 199 suplemented with 26.19 mM sodium bicarbonate, 50 μg/ml gentamicin, 0.20 mM piruvic acid, 20 μg/ml oestradiol, 0.5 μg/ml FSH and 0.03 IU/ml hCG. Maturation medium was modified following the beyond described experimental proposals. The results of the first experiment showed that there was statistical difference in the rate of CCs apoptosis among the three groups. It was concluded that CCs of canine COCs cultured in high-glucose medium showed significantly less apoptosis than those cultured in medium with FCS. Low O2 tension was efficient in reducing apoptosis in canine CCs. In the second experiment of this study, the highest rates (p < 0.001) of degenerated oocytes were achieved when TCM 199 was added with 10% FCS. A positive influence on the meiosis resumption and on the MI acquisition rate was observed when canine oocytes were matured in defined high-glucose medium. It was concluded that the addition of FCS in the maturation medium of canine oocytes result in a high level of degenerated oocytes, and that the low level of oxygen tension did not improve the nuclear maturation of canine oocytes. The results achieved on the third experiment showed that in the experimental groups with the medium supplemented with ACP-318® (groups 2 and 3) enhanced the rates of oocytes’ nuclear maturation (p < 0.05). Ooocytes matured in medium added with 5% powdered coconut water (ACP-318®) were less prone to deviation of typical chromatin configuration than those matured in medium added with 10% ACP-318®. The results suggest that oocytes’ nuclear morphology integrity and meiosis achievement were positively influenced when exposed to high glucose TCM199 supplemented with 5% powdered coconut water.

O objetivo deste trabalho foi avaliar alguns aspectos reprodutivos de éguas Crioulas a fim de verificar a influência destes nos índices de prenhez: idade das éguas, status reprodutivo, uso do cio do potro, presença de líquido intra-uterino (LIU), eficiência dos tratamentos pós-cobertura, presença de cistos endometriais, realização de vulvoplastia, incidência de ovulações duplas e gestações gemelares. Foram utilizados 517 ciclos de 406 éguas Crioulas de um rebanho comercial, com idades entre dois e vinte e dois anos. O índice de prenhez por ciclo foi de 80,5% aos 12 dias, 76,5% aos 42 dias e a mortalidade embrionária foi de 3,9%. O índice de prenhez foi influenciado pela idade das éguas (P < 0,01). O índice de prenhez no cio do potro foi de 85,4%, melhor que o índice obtido pelas éguas em que não se utilizou este cio e que foram cobertas no subseqüente (P = 0,07). O método de cobertura influenciou a prenhez, sendo a inseminação superior à monta natural (P = 0,01). A idade influenciou a presença de LIU sendo a incidência em éguas com mais de 12 anos maior que nas mais jovens (P < 0,01). A presença de cistos endometriais influenciou negativamente a taxa de prenhez aos 12 e aos 42 dias (P = 0,00). A correção cirúrgica da região perineal melhorou os índices de prenhez aos 12 e aos 42 dias (P < 0,05). A taxa de ovulações duplas foi de 4,84% e não influenciou os índices de prenhez aos 12 e aos 42 dias (P > 0,5). Em 6 ciclos (1,16%) de 5 éguas solteiras foram observadas gestações gemelares. Concluímos que a fertilidade das éguas Crioulas é influenciada pela idade das éguas, pela conformação vulvar, pela presença de cistos endometriais e pelo status reprodutivo. O acúmulo de LIU é um fator importante na reprodução da égua Crioula e deve ser observado e devidamente tratado para a obtenção de melhores índices de prenhez. / The aim of this study was to evaluate the reproductive aspects of Crioulo mares to verify the influence of the following aspects on the pregnancy rates: mare’s age, reproductive status, use of foal heat, presence of intrauterine fluid (IUF), efficiency of post-breeding treatments, presence of endometrial cysts, incidence of double ovulations and twin pregnancies. There were used 517 cycles of 406 Crioulo mares of a commercial herd, with ages varying from 2 to 22 years old. Pregnancy rate per cycle was 80.5% at 12 days, 76.5% at 42 days and embryo mortality was 3.9%. The pregnancy rate was influenced by the age of the mares (P < 0.01). Pregnancy rate on foal heat was 85.4%, better than the rate obtained by the mares which foal heat was not used and the subsequent cycle was (P = 0.07). The breeding method influenced pregnancy, being artificial insemination superior to natural breeding (P = 0.01). Age influenced the presence of IUF, once the incidence was higher in mares with more than 12 years old than in younger mares (P < 0.01). The presence of endometrial cysts negatively influenced the pregnancy rate at 12 and 42 days (P = 0.00). Surgical repair of perineal region improved the pregnancy rates at 12 and 42 days (P < 0.05). The rate of double ovulations was of 4.84% and did not influence the pregnancy rates either at 12 and 42 days (P > 0.5). In 6 cycles (1.16%) of 5 single mares there were observed twin pregnancies. We concluded that the fertility of Crioulo mares is influenced by the age of the mares, vulvar conformation, presence of endometrial cysts and reproductive status. The accumulation of IUF is an important factor on the reproduction of Crioulo mares and must be observed and correctly treated in order to obtain better pregnancy rates.

O líquido folicular é o microambiente do oócito durante sua maturação in vivo que é, em parte constituído por exsudato do soro sanguíneo e por substâncias produzidas localmente, que estão relacionados com a atividade metabólica das células ovarianas. Tais substâncias podem ser essenciais para a proliferação e diferenciação das células somáticas bem como na maturação e posterior fertilização de um oócito competente. A busca por biomarcadores capazes de predizer a saúde de um folículo ou a capacidade do oócito em se tornar um embrião saudável é objeto de estudo na medicina reprodutiva humana e veterinária. Para tanto é essencial o conhecimento a nível molecular dos constituintes do liquido folicular e suas funções. O objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil proteico do líquido folicular de éguas submetidas à indução de ovulação, com dois diferentes protocolos usuais na prática clínica, utilizando eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. Para tanto 19 amostras de liquido folicular de éguas que tiveram sua ovulação induzida por dois diferentes protocolos (1000UI hCG IV, Grupo H, ou 1000UI hCG IV + 1,5mg de acetato de deslorelina IM, Grupo H + G) foram submetidos a eletroforese 2D e posterior análise dos géis no PDQuest. Os valores de proteína total foram significativamente diferente nos Grupo H e Grupo H+G, 63,97 ± 6,97 e 73,07 ± 6,42, respectivamente. O número máximo de spots em um mesmo gel foi de 157 e o mínimo de 34, com média de 90 spots para o Grupo H e 83 spots para o Grupo H+G. Os 19 géis foram avaliados e a porcentagem máxima de spots relacionados foi de 52% e a mínima de 0%. Com média de 37,8% de similaridade entre spots para o Grupo H e 22% para o Grupo H+G. Estes resultados são de grande importância devido à escassez de trabalhos com proteômica de liquido folicular de éguas induzidas a ovulação e demonstram que a associação entre hCG e acetato de deslorelina aumenta a concentração de proteínas no líquido folicular em folículos pré-ovulatórios (>35 mm). / Follicular fluid is the oocyte microenvironment during its in vivo maturation. It is partly composed by blood serum exudate, and also by locally produced substances, related to ovarian cells metabolic activity. These substances may be essential for somatic cells proliferation and differentiation, as well as on the oocyte maturation and fertilization. The search for biomarkers able to predict oocyte ability to grow into a healthy embryo are targets on human and veterinary reproductive medicine. It is essential to know the components of follicular fluid and their functions. The aim of the present study was to evaluate protein profile of the follicular fluid in mares with inducted ovulation, in two different protocols, using 2D electrophoresis in polyacrylamide gel. 19 follicular fluid samples from mares in which ovulation induction was performed with two different protocols (1000UI hCG IV or 1000UI hCG IV + 1,5mg deslorelin acetate IM), submitted to 2D electrophoresis, and gel analysis on PDQuest. Total protein values were significantly different in Group H and Group H+G, 63,97 ± 6,97 and 73,07 ± 6,42, respectively. The highest number of spots on a same gel was 157 and the minimum was 34, with a mean of 90 spots to Group H and 83 spots for Group H+G. All of the19 gels were evaluated according to MasterGel and the highest percent of related spots was 52% and the lowest, 0%, with mean similarity between spots 37,8% to Group H and 22% to Group H+G. These results are of great importance, due to lack of works on follicular fluid proteomics using fluid from mares with induced ovulation, and demonstrate that the association hCG + deslorelin acetate increase proteins concentration on pre-ovulatory follicles fluid.

O embrião equino apresenta um desenvolvimento dinâmico por um longo período entre a fertilização, sua entrada no útero, fixação e posterior invasão trofoblástica após o 36º dia da gestação. Durante todo este período o concepto é sustentado pelo histotrofo endometrial. Estas características dos equídeos favorecem o seu uso com modelo experimental in vivo para estudos nos desenvolvimentos e interações fetal e maternal. Os estudos em endométrio equino tiveram foco em eventos fisiológicos nas diferentes fases do ciclo estral, enquanto os estudos aos primeiros momentos da gestação são escassos. O entendimento do processo de remodelação e morfofisiologia do endométrio após a entrada do embrião no útero não é completamente entendido. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfofisiologia endometrial da gestação na égua envolvendo os períodos pós-fixação e peri-implantação, por histologia e microscopia eletrônica de varredura. A característica mais marcante da transformação ou adaptação endometrial à gestação foi o quase total desaparecimento das células ciliadas na superfície epitelial em ambos cornos uterinos. A capacidade de secreção das células microvilosas também passou por mudanças com o avanço gestacional. Muitas células secretórias ingurgitadas e protusas formam a maioria da população do epitélio, onde o histotrofo se acumula, e apresentaram erosões em sua superfície, provavelmente pela secreção apócrina de vesículas. A superfície epitelial apresentou pleomorfismo celular e pseudoestratificação, promovida por intensa hiperplasia celular, acompanhada de adensamento das glândulas endometriais, desde o 21º dia da gestação diminuído após o 36º dia. Linfócitos, provavelmente uNK, foram encontrados no epitélio luminal do endométrio já aos 21 dias de gestação em ambos cornos, gravídico e não gravídico. Foi evidenciado o septamento no epitélio luminal, com sulcos formados aos 35 e 36 dias, tornando-se mais profundos aos 42 dias de gestação. Toda esta evolução e adaptação contínua aconteceram principalmente no corno gravídico acompanhados em menor intensidade pelo corno não gravídico. / The equine embryo plays a dynamic development for a long period between fertilization, its entry into the uterus, fixes and subsequent trophoblastic invasion after day 36 of gestation. Throughout this period, the conceptus is supported by endometrial histotrophe. These equids characteristics favor their use as an in vivo experimental model for studying the changes and interactions in fetal and maternal development. Studies in equine endometrium were focused on physiological events in the different phases of the estrous cycle, while studies in early moments of pregnancy are scant. The process of endometrial remodeling and morphophysiology after the maternal recognition of pregnancy is not completely understood. The objective of this work was to study the endometrial morphophysiology in the mare comprising post-fixation and peri-implantation periods, by histology and scanning electron microscopy. The most striking feature of endometrial transformation or adaptation to pregnancy was the almost total ciliated cells disappearance of the epithelial surface in both uterine horns. In addition, the secretory capacity of microvillus cells underwent changes with gestational age. Many engorged and protruded secretory cells were the majority epithelium population where histotroph accumulates, and showed erosions on its surface, probably by apocrine vesicle secretion. The epithelial surface also showed cellular pleomorphic and pseudostratified epithelium as a result of intense cell hyperplasia. It was accompanied by thickening of the endometrial glands from day 21 of gestation, then decreasing after the 36th day. Lymphocytes, probably uNK, were found in the luminal epithelium of the endometrium since 21st day of gestation in both pregnant and not pregnant horns. Septation was evidenced in the luminal epithelium, with sulci formed at 35 days, becoming deeper at 42 days of pregnancy. All this continued evolution and adaptation occurred mainly in the gravid horn accompanied in less intensity by non-gravid horn.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:48:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T21:55:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T21:55:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_PolimorfismosGeneOsteopontina.PDF: 512218 bytes, checksum: 778ee81294f6547b26545b2516f0d00f (MD5) Previous issue date: 2012-09-24 / Este trabalho teve como objetivo identificar polimorfismos neste gene e associar os mesmos aos parâmetros de fertilidade de búfalos criados de forma extensiva. Foram utilizados 306 machos bubalinos, acima de 18 meses de idade, criados em duas propriedades, uma no estado do Amapá e outra no estado do Pará. Os resultados obtidos para a extração de DNA através de pêlos foram de excelente quantidade, com concentração maior que 50ng/l. Ambos pares de primers amplificaram as regiões específicas do gene da osteopontina. Foram identificados 3 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS4 (5`UTR) e 4 polimorfismos do tipo SNP para a região amplificada pelo primer OS9 (éxon 5 ao éxon 6). Os polimorfismos foram nas posições 1478, 1513 e 1611 na região amplificada pelo OS4 e nas posições 6690, 6737, 6925 e 6952 na região amplificada pelo OS9. Para todas as características estudadas foram encontrados SNPs significativos a 5%. Para circunferência escrotal, o SNP 6690; para volume testicular, o SNP 6737; para a concentração, o SNP 6690; para motilidade, o SNP 6690 e para patologia espermática, o SNP 6690. Estando os polimorfismos do SNP 6690 relacionado com quatro características. Para a característica CE o genótipo AA foi associado (P<0,05) com os animais que apresentaram maior média de circunferência escrotal, maior média de concentração espermática, maior média de motilidade e menor número de patologias totais. Entretanto, para a característica volume testicular, os animais que apresentaram maior volume estão correlacionados com a presença do genótipo GG, para o SNP 6737. Isso indica que o gene da osteopontina pode influenciar as características reprodutivas em machos bubalinos. / Because the osteopontin gene can influence the fertility of water buffaloes, the aim of this work was to identify polymorphisms in this gene and associate them with fertility parameters of animals kept under extensive grazing. We used 306 male buffaloes older than 18 months, bred on two farms, one in the state of Amapá and the other in the state of Pará. We identified three SNP for the region amplified by the primer OS4 (5`UTR) and four SNP polymorphisms for the region amplified by the primer OS9 (exon 5 to exon 6). The polymorphisms were in positions 1478, 1513 and 1611 in the region amplified by OS4 and positions 6690, 6737, 6925 and 6952 in the region amplified by OS9. We calculated correlations with the traits scrotal circumference and volume and sperm motility, concentration and pathology. There were SNPs for all the traits studied at 5% significance: for circumference, SNP 6690; for volume, SNP 6737; for concentration, SNP 6690; for motility, SNP 6690; and for pathology, SNP 6690. Therefore, SNP 6690 was related to four traits. The AA genotype of SNP 6690 presented the highest averages for scrotal circumference, sperm concentration and motility and the lowest total number of pathologies. However, for the scrotal volume trait, the animals with the largest volume were correlated with the presence of the GG genotype of SNP 6737. This indicates that the osteopontin gene is important because it can have a substantial influence on the reproductive traits of male buffaloes.