Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Luehea divaricata Martius (açoita-cavalo) is a tree of Tiliaceae family that is of the interest of industries due to wood the quality and also reflorestation programs. Studies about propagation are justified mainly when working with native plants, that have few research results. Two studies were conducted about specie propagation: one vegetative way and another by sexual way. The first study tried to determinate the collection period of cuttings and concentration of AIB fitorregulator ideals employed in the vegetative propagation of Luehea divaricata. Cuttings with 10cm received asseptical treatment and stayed for seven days in the environment of rooting induction 1/4 WPM + concentration (T1); 0,1 (T2); 1,0 (T3); 10,0 mg/L (T4) of AIB, as applied treatment in the collected cuttings in these following periods of cuttings: nov/2003, fev/2004, may/2004, aug/2004. After this period, they were transfered for the environment formation of roots (1/4 WPM). On the 60th day were analyzed the variables dry mass of roots (g), average root lenght (cm), roots numbers, and also diameter aspects of stem (cm) and dry mass of the aero part (g). In the second study, it was verified the better substract and which improves more the growth of seedlings come from seeds. Four substracts were tested: Plantmax®, turfa, carbonizated crust rize, and Mec Plant®. At 60, 120 and 180 days after the sowing, the development was evaluated of seedlings from the variables: root dry mass (g), stem diameter (cm), aero part fresh mass (g), aero part dry mass (g), aero part height (cm) and the total of leaves. In the propagation of specie by cutting, in all collection periods, excepted aug/2004, until the concentration of 5 mg/L of AIB, there wan an increase of vigor, of uniformity and quality of the root system. The collection of feb/2004 got the best results for the analyzed parameters. In the sexual propagation, the seed germination of Luehea divaricata occurred in all the tested substracts. In the Plantmax® commercial substract on the 180th day after the sowing (Third and last avaliation) in the roots dry mass parameters, fresh and dry mass the aero part results four times better, were achieved. In all variables analyzed, the results of four times more hight at 180 days, Plantmax® got a superior development comparing to the other substracts. / A Luehea divaricata Martius (açoita-cavalo) é uma árvore da família Tiliaceae que apresenta interesse para o uso industrial devido às boas qualidades da sua madeira e também em programas de reflorestamento. Estudos sobre propagação são justificados principalmente quando se trabalha com plantas nativas, para as quais existem poucos resultados de pesquisa. Foram realizados dois estudos sobre propagação da espécie: um via vegetativa e outro via sexuada. O primeiro estudo objetivou determinar a época de coleta das estacas e a concentração do fitorregulador AIB ideais empregados na propagação vegetativa de Luehea divaricata. Estacas com 10 cm receberam tratamento asséptico e permaneceram por 7 dias no meio de indução de enraizamento: 1/4 WPM + concentrações 0 (T1); 0,1 (T2); 1,0 (T3); 10,0 mg/L (T4) de AIB, como tratamento aplicado em estacas coletadas nas seguintes épocas de coleta: nov/2003, fev/2004, mai/2004, ago/2004. Após este período, foram transferidas para o meio de formação de raízes (1/4 WPM). Aos 60 dias, analisaram-se as variáveis massa seca das raízes (g), comprimento médio das raízes (cm), número de raízes, e ainda os aspectos diâmetro do colo (cm) e massa seca da parte aérea (g). No segundo estudo, verificou-se o substrato mais adequado e que proporciona maior crescimento das plântulas advindas de semente. Foram testados 4 substratos: Plantmax®, turfa, casca de arroz carbonizada e Mec Plant®. Aos 60, 120 e 180 dias após a semeadura, avaliou-se o desenvolvimento das plântulas a partir das variáveis: massa seca das raízes (g), diâmetro do colo (cm), massa fresca da parte aérea (g), massa seca da parte aérea (g), altura da parte aérea (cm) e total de folhas. Na propagação da espécie via estaquia, em todas as épocas de coleta, com exceção de ago/2004, até a concentração de 5,0 mg/L de AIB, ocorreu aumento do vigor, da uniformidade e da qualidade do sistema radicular. A coleta realizada em fev/2004 obteve os melhores resultados nos parâmetros analisados. Na propagação sexuada, a germinação de sementes de Luehea divaricata ocorreu em todos os substratos testados. No substrato comercial Plantmax®, foram obtidos resultados até quatro vezes maiores aos 180 dias após a semeadura (3ª e última avaliação) nos parâmetros massa seca das raízes, massa fresca e seca da parte aérea. Em todas as variáveis analisadas, Plantmax® obteve desempenho superior em comparação aos demais substratos.

Este estudo foi realizado com o objetivo de: 1) determinar a influência da tensão de oxigênio na viabilidade das células do cumulus oriundas de oócitos caninos maturados em meio com alta concentração de glicose (11,0 mM); 2) determinar a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos mantidos em meio contendo altas concentrações de glicose (11,0 mM), bem como avaliar o efeito da tensão de oxigênio sobre a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos; 3) determinar a influência da adição de água de coco em pó (ACP-318®) ao meio de maturação com alta concentração de glicose (11,0 mM) na taxa de maturação in vitro de oócitos caninos. O meio de maturação usado nos experimentos foi TCM 199 suplementado com 26,19 mM de bicarbonato de sódio, 50 μg/ml de gentamicina, 0,20 mM de ácido pirúvico, 20 μg/ml de estradiol, 0,5 μg/ml de FSH e 0,03 UI/ml hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental apresentada. Os resultados do primeiro experimento mostraram diferença estatística nas taxas de apoptose nas células do cumulus entre os três grupos avaliados. Foi concluído que células do cumulus oriundas de COCs caninos cultivados em meio contendo altas concentrações de glicose apresentaram significativamente menos apoptose do que as cultivadas em meio com soro fetal bovino, e que a baixa tensão de oxigênio foi eficiente em reduzir a ocorrência de apoptose nas células do cumulus. No segundo experimento deste estudo, os índices mais elevados (p < 0,001) de oócitos degenerados foram obtidos, quando TCM 199 era suplementado com 10 % de FCS. Uma influência positiva sobre a retomada de meiose e aquisição de metáfase I (MI) foi observada quando os oócitos caninos foram maturados em meio livre de soro e com altas concentrações de glicose. Foi concluído que a adição de FCS ao meio de maturação de oócitos caninos resulta em altas taxas de degeneração dos oócitos e que a redução da tensão de oxigênio não resultou em melhora da taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Os resultados obtidos no terceiro experimento mostraram que nos grupos experimentais cujo meio foi suplementado com ACP-318®, houve melhora significativa (p < 0,05) na taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Oócitos maturados em meio suplementado com 5% de ACP-318® mostraram-se menos susceptíveis a alterações na configuração típica da cromatina que os maturados com 10% de ACP-318® no meio de maturação. Os resultados sugerem que tanto a integridade da morfologia nuclear, como a progressão da meiose dos oócitos caninos são positivamente influenciadas quando estes são expostos ao TCM 199 com alta concentração de glicose e suplementado com 5% de ACP-318®. / This study was designed: 1) determine the influence of oxygen tension on cumulus cell (CC) viability from canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 2) determine the influence of two oxygen tensions on the nuclear maturation of canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 3) determine the influence of powdered coconut water (ACP-318®) diluted in high glucose (11.0 mM) TCM199 in the achievement of nuclear in vitro maturation (IVM) of canine oocytes. Basic medium used in the experiments was TCM 199 suplemented with 26.19 mM sodium bicarbonate, 50 μg/ml gentamicin, 0.20 mM piruvic acid, 20 μg/ml oestradiol, 0.5 μg/ml FSH and 0.03 IU/ml hCG. Maturation medium was modified following the beyond described experimental proposals. The results of the first experiment showed that there was statistical difference in the rate of CCs apoptosis among the three groups. It was concluded that CCs of canine COCs cultured in high-glucose medium showed significantly less apoptosis than those cultured in medium with FCS. Low O2 tension was efficient in reducing apoptosis in canine CCs. In the second experiment of this study, the highest rates (p < 0.001) of degenerated oocytes were achieved when TCM 199 was added with 10% FCS. A positive influence on the meiosis resumption and on the MI acquisition rate was observed when canine oocytes were matured in defined high-glucose medium. It was concluded that the addition of FCS in the maturation medium of canine oocytes result in a high level of degenerated oocytes, and that the low level of oxygen tension did not improve the nuclear maturation of canine oocytes. The results achieved on the third experiment showed that in the experimental groups with the medium supplemented with ACP-318® (groups 2 and 3) enhanced the rates of oocytes’ nuclear maturation (p < 0.05). Ooocytes matured in medium added with 5% powdered coconut water (ACP-318®) were less prone to deviation of typical chromatin configuration than those matured in medium added with 10% ACP-318®. The results suggest that oocytes’ nuclear morphology integrity and meiosis achievement were positively influenced when exposed to high glucose TCM199 supplemented with 5% powdered coconut water.

O estudo da expressão gênica é de grande aplicabilidade nas áreas de pesquisa científica e clínica. Por ser um método pouco invasivo e permitir coletas seriadas, a utilização de amostras sanguíneas facilita a análise da transcrição gênica. O maior desafio para a precisão nos ensaios moleculares é manter uma amostra com qualidade desde a coleta, armazenamento e transporte até o momento de sua análise. Este estudo utilizou um sistema de conservação de RNA sanguíneo que manteve amostras de qualidade após a coleta, transporte e armazenamento, permitindo extração de RNA e identificação da expressão do gene MDR1 em cavalos da raça Crioulo. Foram coletadas amostras sanguíneas de 27 cavalos a campo em tubos PAXgene® Blood RNA, que após o transporte e armazenamento a -20°C por 90 dias foram processadas em laboratório. A extração do RNA sanguíneo foi realizada com o kit Nucleo Spin® RNA II, a conversão em cDNA foi com o kit High-Capacity cDNA Reverse Transcription, utilizando a fluorimetria para as avaliações. A identificação da expressão do gene MDR1 em sangue conservado utilizou primer específico para cDNA e PCR em tempo real. Houve extração de RNA em todas as amostras coletadas, sendo que as leituras das concentrações de RNA das amostras com DNA contaminante não tiveram diferença estatística das amostras sem DNA contaminante. Ocorreu amplificação do gene MDR1 a partir do RNA das amostras, independente de contaminação de DNA. A coleta de sangue venoso dos cavalos a campo com os tubos PAXgene foi realizada sem complicações. A amplificação do mRNA com primer específico para transcrito do gene MDR1, de amostras submetidas aos métodos de coleta, armazenamento e processamento executados neste trabalho, confirma que o mRNA extraído, com a metodologia descrita, é viável, sendo sua expressão identificada em leucócitos sanguíneos de equinos da raça Crioulo. / Efficient nucleic acid extraction methods are paramount for gene expression studies and applications in the scientific and clinical research. Whole blood samples provide material for gene transcription analysis allowing serial trials with a not much invasive procedure. Still, a major challenge for molecular assays accuracy and reliability is to maintain RNA stability during sample collection and storage. A whole blood collection system for RNA preservation was used during collection, transport and storage of samples intended for RNA extraction and identification of the MDR1 gene in Crioulo horses. The blood samples were obtained from 27 horses in the field using the PAXgene® Blood RNA tubes. After 2h transport at room temperature, the samples were stored at -20oC for 90 days before processing. RNA extraction was performed with the Nucleo Spin® RNA II kit and cDNA conversion carried out with the High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit. RNA concentration was determined by fluorometry. MDR1 gene expression was assessed using real time polymerase chain reaction (PCR) with a specific primer for cDNA. RNA was successfully extracted from all samples. Total RNA yield from DNA contaminated samples was not statistically different from those without DNA contamination. MDR1 gene amplification occurred regardless of DNA contamination. There were no complications during horse handling and blood sampling direct into PAXgene tubes in the field. Successful amplification of MDR1 gene transcript with a specific primer showed that blood samples collected, stored and processed under the described methodology provided viable mRNA for down-stream applications of molecular analyses. This study allowed the identification of the gene MDR1 in blood leucocytes of Crioulo horses.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da utilização da associação do butafosfan e da vitamina B12 (Catosal B12®) na qualidade do sêmen fresco e refrigerado de garanhões. Foram utilizados quatro garanhões divididos aleatoriamente em dois grupos, A e B, cada um com dois garanhões. Um dos grupos serviu como controle e o outro como grupo tratado. Como tratamento utilizaram-se duas aplicações intramusculares de 5 ml /100 kg PV de Catosal por semana. O projeto se dividiu em 4 etapas de 84 dias cada uma. Na primeira etapa o grupo A foi tratado enquanto que o grupo B serviu de controle. Na segunda etapa ambos os grupos deixaram de ser tratados. Na terceira etapa se inverteram os grupos, sendo o B tratado e o A controle. Finalmente na quarta etapa, nenhum dos grupos foi tratado. Imediatamente após a coleta o sêmen foi avaliado e diluído a uma concentração final de 25 x 10 6 de espermatozoides por mililitro. O sêmen fresco e refrigerado a 5ºC foi avaliado quanto a numero total de espermatozoides, motilidade total e progressiva, vigor, morfologia, funcionalidade (HOS test) e integridade de membrana (CFDA/PI staining). Foi realizada ANOVA e as médias pelo teste de Tukey. Não se observaram diferenças significativas entre os grupos tratados e os controles em nenhum dos parâmetros espermáticos avaliados tanto no sêmen fresco quanto no sêmen resfriado. Tampouco foram detectadas interações entre os garanhões para nenhum dos parâmetros observados. O uso prolongado de Catosal intramuscular não teve efeitos negativos e pode ser utilizado com segurança, em garanhões destinados á reprodução. O tratamento intramuscular com Catosal nas doses administradas e recomendadas pelo fabricante, durante 84 dias, não alterou a qualidade do sêmen fresco ou refrigerado por 24 horas dos garanhões jovens e férteis. / The objective of this study was to evaluate the action of butaphosphan, in combination with vitamin B12 (Catosal B12®) on the quality of fresh and cooled stallion semen. Four healthy stallions were randomly assigned to two groups A and B (n=2 per group). One acted as control group and the other one as treatment group. The treatment consisted in two intramuscular applications of 5 ml / 100 kg PV of Catosal per week following the manufacturer’s doses recommendations. The project was divided in 4 stages of 84 days. In the first stage group A was treated while group B was the control. After that both groups were not treated allowing a washout period for the treated group. Then, the groups were reversed, group B was treated and group A acted as a control. Finally in the last 84 days both groups were kept without any treatment. Semen was diluted to 25 million sperm/mL and evaluated for total sperm count, total and progressive sperm motility (light microscopy), membrane integrity (CFDA/PI staining) and membrane functionality (HOS test) at 0 and 24 hours after preservation at 5º C. Data were analyzed by one way ANOVA and means compared by the Tukey test at 5% level of significance. Experimental endpoints were analyzed to compare the values for the treated stallions in the period of time between the sixty and eighty-four days of treatment versus the same stallions without treatment. No significant differences between treatment and control groups were detected for any of the sperm parameter evaluated in this study. No interactions between stallions were detected. Results show that the use of Catosal for 84 days in the given doses does not alter fresh and cooled semen quality of the young and fertile stallions.

A coleta de sêmen da cauda do epidídimo é a última oportunidade de obter espermatozoides de garanhões valiosos, sendo que durante a criopreservação, a etapa de centrifugação é considerada um ponto crítico. A principal hipótese é que a centrifugação com coloides pode melhorar a qualidade dos espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões. Para avaliação da hipótese foram realizados dois experimentos. O experimento um teve por objetivo avaliar o efeito da centrifugação com cushion e com coloide em camada única (SLC) na motilidade de sêmen do epidídimo de garanhões após a etapa de centrifugação. O experimento dois teve o objetivo de determinar o efeito da SLC prévio ao congelamento e após o descongelamento. Experimento 1) Oito garanhões foram submetidos à orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=16). Após a coleta, as amostras foram submetidas a três protocolos de centrifugação: Convencional (20 minutos a 600xg), cushioned (20 minutos a 900xg) e SLC (20 minutos a 300xg). Os pellets foram ressuspendidos e as amostras foram submetidas à avaliação laboratorial de motilidade e morfologia espermática. Experimento 2) Dez garanhões foram submetidos a orquiectomia bilateral e o sêmen foi coletado da cauda dos epidídimos (n=20). Para criopreservação, as amostras foram submetidas a: centrifugação convencional (20 minutos a 600xg), SLC prévio a criopreservação (SLC-Pre) (20 minutos a 300xg) e SLC após a criopreservação (SLC+) (20 minutos a 600xg seguidos de uma segunda centrifugação descrita após descongelamento). Os pellets foram ressuspendidos em diluente de congelamento, submetidos ao processo de congelamento em nitrogênio líquido e descongelamento. Os grupos de 6 centrifugação convencional e SLC-Pre foram avaliados imediatamente após descongelamento. O grupo SLC+ foi descongelado e submetido à SLC (20 minutos a 300xg) e ressupendido em diluente de congelamento (SLC+F) ou resfriamento (SLC+C). A motilidade total e a motilidade progressiva das amostras foram avaliadas com análise computadorizada do movimento espermático. A morfologia foi avaliada com auxílio de microscópio com contraste de fase. Funcionalidade de mitocôndria, integridade de membrana e DNA foram avaliados com auxílio de microscópio de fluorescência. Os dados foram analisados por estatística descritiva, simple one-way ANOVA e Teste de Tukey. Experimento 1) a motilidade de espermatozoide submetidos à SLC (p<0,05) e cushion (p>0,05) foi superior do que os submetidos a centrifugação convencional. Experimento 2) SLC-Pre e SLC+F apresentaram maior motilidade total, enquanto SLC+F apresentou maior motilidade progressiva. O percentual de espermatozoides com morfologia normal foi maior em SLC-Pre e SLC+F. A funcionalidade de mitocôndria foi maior em todos grupos com SLC, enquanto a integridade de membrana foi maior em SLC-Pre. A centrifugação com coloides melhorou a qualidade de espermatozoides coletados da cauda do epidídimo de garanhões, tanto no momento prévio ao congelamento como após o descongelamento. / Epididymis cauda sperm recovery and cryopreservation are last opportunity to obtain spermatozoa from a valuable animal, even though during cryopreservation centrifugation step is considered as a critical point. It is hypothesized that colloidal centrifugation could enhance epididymal stallion sperm parameters. To evaluate this hypothesis two experiments were performed. In experiment one, the objective was to evaluate the effect of cushioned and Single Layer Centrifugation (SLC) on epididymal stallion sperm motility postcentrifugation. In experiment two, the objective was to determine the effect of SLC on epididymal stallion sperm quality pre-freezing and post-thawing. Experiment 1) Eight stallions were submitted to bilateral orchiectomy and the resulting epididymal cauda (n = 16) were flushed with semen extender. After harvesting, samples were submitted to three centrifugation protocols: conventional (20 minutes at 600xg), cushioned (20 minutes at 900xg), and SLC (20 minutes at 300xg). Pellets were resuspended, motility and morphology were evaluated. Experiment 2) Ten stallions were submitted to bilateral orchiectomy and epididymal cauda (n=20) were harvested. For cryopreservation, epididymal sperm were submitted to: conventional centrifugation (20 minutes at 600xg), Single Layer Centrifugation prior cryopreservation (SLC-Pre) (20 minutes at 300xg) and Single Layer Centrifugation after cryopreservation (SLC+) (20 minutes at 600xg followed by a second centrifugation described after thawing). Pellets were resuspended in freezing extender, submitted to cryopreservation process in liquid nitrogen and thawed. Conventional and SLC-Pre were evaluated immediately after thawing. SLC+ samples were thawed, submitted to SLC (20 minutes at 300xg) and the pellets were resuspended with freezing (SLC+F) and cooling extender (SLC+C). Total motility (TM) and progressive 8 motility (PM) were evaluated with computer-assisted semen analyses. Sperm morphology was evaluated under a phase-contrast microscope. Mitochondrial functionality, membrane e DNA integrity were evaluated with an epifluorescence microscope. Data was evaluated by descriptive statistics, simple one-way ANOVA and comparison between means by Tukey test. Significance was assigned to all values p<0.05. Experiment 1) Motility of spermatozoa recovered by SLC (p<0.05) and cushioned centrifugation (p>0.05) were higher than those recovered by conventional centrifugation. Experiment 2) SLC-Pre and SLC+F yielded the highest TM, while SLC+F yielded the highest PM. Higher morphological normal sperm was observed in SLC-Pre and SLC+F. Mitochondrial functionality was significantly higher in all treatments with SLC, while membrane integrity was higher in SLC-Pre. Colloidal centrifugation improved epididymal sperm quality before freezing and after thawing.

O objetivo geral deste trabalho foi caracterizar o perfil protéico da secreção uterina pura, através da eletroforese bi-dimensional, de éguas em diferentes fases do ciclo estral, com diferentes graus de alterações inflamatórias e degenerativas, e com diferente capacidade de resposta à cobertura. Para tanto se realizaram cinco experimentos. O primeiro objetivou caracterizar o perfil protéico da secreção endometrial de éguas e determinar se essas proteínas estão associadas ao ciclo estral. A hipótese a ser testada é que o perfil protéico das secreções endometriais varia entre o estro e o diestro. Conclui-se que a composição protéica da secreção uterina da égua em estro é diferente daquela de éguas em diestro, podendo as diferenças protéicas estarem associadas tanto ao processo de manutenção e desenvolvimento embrionário, como a uma necessidade de eventual resposta inflamatória. O segundo experimento objetivou comparar as taxas de prenhez e morte embrionária em éguas não lactantes cobertas no primeiro, ou em outros ciclos durante a temporada reprodutiva. Foi concluído que: (a) durante a temporada reprodutiva, a fertilidade de éguas solteiras é menor no 1° ciclo que nos ciclos subseqüentes; (b) que uma taxa de morte embrionária maior pode ser esperada em éguas falhadas cobertas no 1° ciclo do que nos demais e (c) que a menor fertilidade observada no 1° ciclo não está relacionada à incidência de endometrite persistente pós-cobertura. O terceiro experimento objetivou comparar o perfil protéico da secreção endometrial e a expressão de receptores para esteróides ovarianos no endométrio de éguas em diestro após a 1ª ovulação e após a 2ª ovulação da temporada. Conclui-se que o ambiente uterino é diferente no primeiro diestro da temporada reprodutiva, comparado aos ciclos subseqüentes. O quarto experimento objetivou comparar o perfil protéico da secreção endometrial de éguas resistentes e susceptíveis à endometrite persistente pós-cobertura, durante o estro.Ahipótese a ser testada é que o ambiente uterino da égua susceptível encontra-se alterado no estro prévio à cobertura. Conclui-se que a composição da secreção endometrial das éguas susceptíveis, antes da cobertura, é diferente daquela observada nas éguas resistentes, estando as proteinas observadas relacionadas ao processo inflamatório e à contratilidade uterina. O quinto experimento objetivou (a) comparar a composição protéica da secreção endometrial de éguas em estro com e sem fibrose e (b) avaliar o efeito da inflamação endometrial sobre o perfil protéico da secreção uterina de éguas em estro e em diestro. A hipótese é que a fibrose e a inflamação alteram a composição protéica do fluído uterino, podendo prejudicar o desempenho reprodutivo da égua. Conclui-se que nas éguas em estro a inflamação e a fibrose endometrial alteram apenas a quantidade de poucas proteínas no ambiente uterino. Durante o diestro, a presença da inflamação alterou o ambiente uterino, havendo maior quantidade de proteínas inflamatórias. Os resultados apresentados neste trabalho requerem a confirmação da identidade das proteínas, através de seqüeciamento ou imuno identificação. No entanto, várias informações puderam ser obtidas e muitas novas perguntas podem ser geradas, em especial a partir dos resultados com as éguas susceptíveis. / The main objective from this study was the characterization of the protein profile by SDS-PAGE, from mares during the estrous cycle and mares with uterine inflammation, fibrosis and susceptibility to persistent post-mating endometritis. Five experiments were performed. The first aimed to evaluate the protein profile of endometrial secretions of mares and to determine if any of these proteins was associated with estrous cycle. It was concluded that protein profile from estrous mares is different from the profile from diestrous mares. This difference can be explained by requirements to support and develop the embryo or to an eventually inflammatory response. The second experiment aimed to compare pregnancy and embryo loss rates in non-lactating mares bred either in the first, or in other estrus cycles during the breeding season. It was concluded that: (a) during the breeding the fertility of non-lactating mares is lower in the 1st than in other estrus cycles season; (b) that a higher embryo loss rate may be expected in barren mares bred in the 1st than in other estrus cycles of the breeding season and (c) that the lower fertility rate observed during the 1st estrus cycle is not related to the incidence of post-breeding endometritis. The third experiment aimed to compare the protein profile of endometrial secretions and the steroid hormone receptor expression of the uterus from diestrous mares in the first, or in other estrous cycles during the breeding season. It was concluded that the uterine environment in the first diestrus of the breeding season is different in relation of the other diestrus. The fourth experiment aimed to compare the protein profile of endometrial secretions from estrous mares resistant or susceptible to persistent post-mating endometritis (PPME). The tested hypothesis was that before the insemination in susceptible mares the uterine environment is disturbed. It was concluded that there is a difference in the uterine environmentbetween resistant and susceptible mares to PPME, probably resulting from the inflammatory response and affecting the uterine contractility. The fifth experiment aimed (a) to compare the protein profile of endometrial secretions from estrous mares with and without fibrosis and (b) to estimate the effect of inflammation in the protein profile of endometrial secretion from mares in estrous and in diestrous. The tested hypothesis was that fibrosis and inflammation disturb the uterine environment modifying the protein profile of the endometrial secretion impairing the reproductive performance. It was concluded that inflammation and fibrosis in estrous influenced the protein profile in a low number of spots. During diestrous, the inflammation affect uterine environment with an expressive number of inflammatory proteins. The protein profile observed in the experiments must be confirmed by sequencing or immunoidentification. However, much information could be obtained but many others must be investigated, principally by the susceptible mare.

A endometrite é uma importante causa de subfertilidade na égua. Infecções uterinas repetidas ou persistentes poderiam levar ao desenvolvimento de fibrose periglandular. Os objetivos deste trabalho foram avaliar se os processos degenerativos do endométrio são influenciados por infecções bacterianas experimentais sucessivas; realizar uma avaliação histopatológica das biópsias endometriais para documentar os efeitos de diferentes tratamentos sobre o endométrio após infecções experimentais. Foram utilizadas vinte éguas resistentes, com histórico reprodutivo desconhecido, e cinco éguas susceptíveis, com histórico de endometrites recorrentes e subfertilidade. As vinte e cinco éguas foram classificadas nos seguintes grupos, de acordo com o grau de endometrite e endometrose: GI (n=4), GIIA (n=10), GIIB (n=8) e GIII (n=3). Após o primeiro exame histopatológico (amostra pré-infecção), as éguas foram sincronizadas com prostaglandina. Na fase estral, as éguas foram infectadas com 1 x 109 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Constatada a presença de sinais clínicos de endometrite, os grupos de éguas foram distribuídos entre cinco diferentes tratamentos: leucócitos frescos, leucócitos congelados, leucócitos lisados, Interleucina-8 (Il-8) e grupo controle.As éguas foram tratadas diariamente, por, no máximo, quatro dias, ou até que o exame bacteriológico não evidenciasse o crescimento de Streptococcus. No quinto dia, as éguas eram submetidas a novo exame histopatológico (amostra pós-infecção) e no sétimo dia, todas as éguas eram tratadas com penicilina, independentemente de terem eliminado a infecção ou não. Sete dias após, as éguas eram novamente submetidas a exame histopatológico e sincronizadaspara realizar uma nova infecção e novo tratamento. As biópsias foram avaliadas quanto à endometrose e endometrite. Não se observaram diferenças significativas entre os graus de endometrose observados antes e no quinto dia após as cinco infecções experimentais. Da mesma forma, não foram observadas variações no grau de endometrose entre as biópsias realizadas antes das infecções, bem como entre as biópsias coletadas no quinto dia após a infecção. Não houve influência dos tratamentos sobre os graus de endometrose durante as 5 infecções experimentais. Entretanto, verificou-se variação significativa entre as diferentes éguas no grau de endometrose das biópsias uterinas coletadas antes e após a infecção experimental. Observou-se, nas éguas resistentes, neutrofilia e eosinofilia significativas nas biópsias do 5º dia pós-infecção, quando comparadas com as biópsias pré-infecção. Nas éguas susceptíveis, somente foi detectada eosinofilia, não se observando aumento do número de neutrófilos. Não houve aumento do número de linfócitos e plasmócitos nas biópsias pós-infecção, quando comparadas às pré- infecção, nas éguas susceptíveis e resistentes. Os tratamentos não influenciaram, nas éguas resistentes e susceptíveis, a migração de neutrófilos no quinto dia, quando comparada com a observada antes da infecção. Conclui-se que infecções experimentais sucessivas durante 13 meses não influenciaram o grau médio de endometrose, apesar da variabilidade ocorrida entre as éguas. Esta variação provavelmente se deva a uma baixa representatividade de uma única amostra de biópsia na avaliação somente do grau de degeneração endometrial. Conclui-se, também, que éguas susceptíveis à endometrite, com presença de Streptococcus no útero, não apresentam neutrofilia cinco dias após a infecção. Provavelmente, o menor tempo de eliminação bacteriana observada nos tratamentos com leucócitos frescos e congelados deva-se a outros fatores que não o efeito quimioatraente leucocitário. / Endometritis is an important cause of subfertility in the mare. Repetitive or persistent uterine infections could lead to the development of periglandular fibrosis. The objectives of this study were: - to evaluate if degenerative endometrial diseases are influenced by repetitive experimental bacterial infections; - to determine the effect of different treatments on the endometrium after experimental infections by means of histopathological evaluation of endometrial biopsies. Twenty resistant mares, with unknown reproductive history, and five susceptible mares, with history of recurrent endometritis and subfertility, were used. Mares were classified, according to the degree of endometritis and endometrosis, within the following groups: GI (n=4), GIIA (n=10), GIIB (n=8) and GIII (n=3). Cycles were synchronized with prostaglandin after the first histopathological examination (pre-infection sample). During estrus, mares were infected with 1 x 109 Streptococcus equi subsp. zooepidemicus. Twenty four hours after the inoculation, clinical, bacteriological and cytological examinations were performed. When endometritis clinical signs were detected, the groups of mares were distributed into five different treatments: fresh leukocytes, frozen leucocytes, lysed leucocytes, Interleukin-8 (Il-8) and control group. Mares were treated on a daily basis for no more than four days, or until there was no Streptococcus growth in bacteriological examination. On the fifth day, mares were submitted to a new histopathological examination (post-infection sample) and, on the seventh day, all the mares were treated with penicillin, independently of having eliminated infection, or not. Seven days after, mares were submitted to a new histopathological examination and synchronized in order to proceed to a new infection and a new treatment. Biopsies were evaluated for endometritis and endometrosis. Therewas no significant difference regarding the degree of endometrosis before and on the fifth day after the five infections. Similarly, there was no difference regarding the degree of endometrosis among biopsies performed before infections and among biopsies performed on the fifth day after infections. Treatments did not influence the degree of endometrosis during the five experimental infections. Anyway, there was a significant variation between different mares, according to the degree of endometrosis, in biopsies collected before, as well as in biopsies collected after experimental infection. Resistant mares showed significant neutrophilia and eosinophilia in biopsies collected on the fifth day after infection, compared to pre-infection samples. Susceptible mares showed eosinophilia, but no growth in neutrophil number. There was no growth in lymphocyte and plasma cell number in post-infection biopsies, if compared to pre-infection biopsies, either in susceptible, or in resistant mares. In the same way, treatments did not influence neutrophil migration on the fifth day post-infection, if compared to pre-infection, either in susceptible, or in resistant mares. It was concluded that repetitive experimental infections do not influence the average degree of endometrosis, in spite of the variability between mares. This variability is probably due to the low representation of one single biopsy sample in the evaluation of the degree of endometrial degeneration. It was also concluded that susceptible mares showing Streptococcus in uterus do not present with neutrophil growth five days after infection. The shorter time required for bacterial elimination when fresh and frozen leukocytes were used is probably due to other factors than leukocyte chemoattractive effect.

[pt] O presente trabalho debruça-se sobre as políticas ambientais de mercadificação da natureza como modelo de acesso, uso e conservação da natureza sob o atual estágio de urbanização que estamos vivenciando, nomeado de metropolização do espaço. Essa conjuntura representa a emergência da questão ambiental como uma nova contradição da problemática urbana, relacionada diretamente à contradição sociedade e natureza no contexto do capitalismo neoliberal. Para tal, buscaremos construir algumas mediações necessárias entre a Geografia e o marxismo, com o objetivo de demonstrar o potencial epistemológico e metodológico da integração entre a Geografia e o materialismo histórico e dialético na interpretação dessas novas contradições, colaborando na constituição de uma teoria social do espaço fundamentada nos aportes teóricos da economia política do espaço. Esse modelo de conservação e de sustentabilidade baseada na expansão da lógica do mercado para a natureza esconde práticas de apropriação/dominação do espaço, que são estratégias de classe, que procuram garantir a reprodução das relações sociais de produção. Para isso, procuramos identificar e reconhecer a atual produção da natureza como uma nova estratégia espacial de acumulação e de reprodução do capital. A natureza, no neoliberalismo, tem a função de absorver parte do capital excedente, principalmente em um contexto de crise como estamos vivendo na atual conjuntura. Essa afirmação é o ponto de partida para compreendermos as relações íntimas sobre os novos mecanismos de uso e conservação da natureza (baseado em práticas de mercadificação, financeirizão e privatização do ambiente) com os processos de acumulação por espoliação. / [en] This present dissertation focuses on environmental policy of nature s commoditization (commodification) like the model of access, use and conservation of nature under the current stage of urbanization that we are experiencing, named metropolization of the space. This conjuncture represents the emergence of environmental issue as a new contradiction of urban problems, related directly to the contradiction society and nature in the context of neoliberal capitalism. Aiming it, we will seek to build some necessary mediations between the Geography and Marxism, in order to demonstrate the epistemological and methodological potential of integration between Geography and the historical and dialectical materialism in the interpretation of these new contradictions, cooperating in a constitution of space s social theory based on the theoretical contributions of political space economy. This conservation and sustainable model based on the expansion of market logic to the nature hides practices of appropriation/space domination, which are class strategies, which seek to ensure the reproduction of the social relations of production. For that, we look forward to identify and recognize the current production of nature as a new space strategy of accumulation and reproduction of capital. The nature, in neoliberalism, has the function of absorbing part of the surplus capital, mainly in a context of crisis like we are living in the current conjuncture. This statement is the starting point so that we can understand he intimated relationships over the new mechanisms of use and conservation (based on practices of commoditization - commodification –, of process of financing and environmental’s privatization) with the processes of accumulation by spoliation.

Aspectos relacionados com a organização social e seus reflexos no comportamento reprodutivo de garanhões submetidos a coberturas em sistemas de manadas, não têm sido estudados nas populações domesticadas. Este estudo foi conduzido com os seguintes objetivos: identificar as unidades sociais estabelecidas num grupo de garanhões e de éguas; verificar os fatores envolvidos na estabilidade, na repetibilidade e na composição dos haréns; verificar o efeito do garanhão na atividade de cobertura; estabelecer relações entre os níveis plasmáticos de testosterona e a condição sócio-sexual dos reprodutores; verificar a existência de atividade sexual noturna. Foi realizado em duas estações de monta (Ano I – 2001/02; Ano II – 2002/2003). No primeiro ano, os animais foram acompanhados diariamente durante um período de 12 dias, totalizando 117,02 horas de observação. A duração média dos períodos diários de observação diurna foi de 8,1horas. No segundo ano, os animais foram acompanhados em três períodos de observação (1, 2 e 3) com intervalos de 21 dias entre eles. A duração média dos períodos de observação diários foi de 9,6h e o tempo total foi igual a 203,51h. No Ano I, foram utilizados quatro garanhões com idades iguais a 3, 5 e mais de 12 anos e um grupo de 46 éguas solteiras, com idades entre 3 e 20 anos. No segundo, observaram-se quatro garanhões com 3, 6 e com mais de 12 anos e um grupo de 40 éguas solteiras, com idades entre 3 e mais de 12 anos. As unidades sociais identificadas foram do tipo harém e grupo de solteiros. Os reprodutores com três anos de idade não formaram haréns. Estabeleceram-se relações hierárquicas entre os garanhões e dentro dos haréns. A dominância, a capacidade de luta, os níveis de testosterona e a idade dos garanhões parecem ter influenciado no tamanho e na manutenção dos haréns. Foi constatada estabilidade em sua composição e esta dependeu do status reprodutivo das fêmeas, da dominância do garanhão no grupo e do tamanho do potreiro de observação. Não foi verificada repetibilidade na composição dos haréns. Todos os garanhões tiveram os seus níveis plasmáticos médios de testosterona aumentados, em média, 77,6%, quando foram expostos às éguas e quando formaram haréns (85,6%), embora os do grupo de solteiros tivessem os níveis mais baixos. O total de coberturas observadas no Ano I foi 28. As éguas foram cobertas em média, 1,86 vez, e o número médio de coberturas diárias foi 1,17. O número médio de éguas cobertas /dia foi igual a 1,08. O número médio de éguas receptivas, diariamente, foi igual a 8,5. O tempo médio de duração das coberturas foi igual a 38,4 segundos e o intervalo médio diário entre as mesmas foi de 79,75 minutos. No Ano II, os garanhões realizaram um total de 134 coberturas. As éguas foram cobertas, em média, 2,21 vezes. O número médio de coberturas diário foi 2,1. O número médio de éguas receptivas, diariamente, foi 20,7. O número médio de éguas cobertas/ dia foi 1,78. O tempo médio de duração das coberturas foi igual a 37 segundos e o intervalo médio diário entre as mesmas foi de 104,1minutos. Nos dois anos de estudo foi verificada atividade sexual noturna. O índice geral de prenhez no Ano I foi 79,4% e, no segundo, foi 72,25%. / Aspects related of social organization and its effects on the reproductive behavior of domestics stallions breeding under free range management systems, not have been studied. This study was carried out with the following objectives: to identify the social unities established between stallions and mares; to verify the factors involved in the stability, repeatability and in the composition of harems; to verify the effect of the stallion in the mating activity; to establish the relationship between the plasmatic levels of testosterone and the social-sexual condition of the stallion; to verify the existence of night sexual activity. This study was carried out in two mating seasons (Year I – 2001/02; Year II – 2002/03). In the first year, the animals were accompanied daily during a period of 12 days, totalizing 117.02 hours. The average duration of daily periods of day observation was 8.1 hours. In the second year, the animals were accompanied in three periods of observation (1, 2 and 3) with intervals of 21 days between them. The average duration of daily periods of observation was 9.6h and the total observation time was equal to 203.51h. In each interval of periods of observation, the social unities were disrupted and the mares were separated. In Year I four stallions were used, with ages of 3, 5 and more than 12 years and a group of 46 no lactates mares from the same breed, with ages varying from 3 to 20 years. In the second year, four stallions were observed, with 3, 6 and more than 12 years of age, and a group of 40 no lactates mares, with ages varying from 3 to more than 12 years of age. The social unities identified in the two years of observation were of the harem and the bachelor group type. The stallions with three years of age did not form harem. Hierarchic relationships among stallions and within harems were established. The dominance, the fight capacity, the aggressive behavior, the testosterone levels and the age of the stallions seem to influence the size and the maintenance of the harems. The stability in the composition of harems was observed, and the factors identified in this process were the reproductive status of females, the dominance of the stallions over the group and the size of the observation field. Repeatability in the composition of the harems was not verified. All stallions had their mean testosterone plasmatic levels increased, in average 77.6%, when were exposed to the mares, and when they formed harems (average of 85.6%). The mating activity of the stallions varied individually. The total mating observed in the 12 days from Year I was 28. The mares were mated in average 1.86 times, and the mean number of daily mating was 1.17. The mean number of mares mated per day was 1.08. The mean number of receptive mares, daily, was 8.5. The average of time during the matings was of 38.4 seconds and mean daily interval between matings was 79.75 minutes. In the second year of observation, the stallions performed a total of 134 matings. Considering the three periods of observation, the mares were mated, in average, 2.21 times. The mean number of daily matings was 2.1. The average number of receptive mares, daily, was 20.7. The average number of mated mares per day was 1.78. The average duration time of the matings was 37.0 seconds and the mean daily interval between matings was 104.1 minutes. In the two years of the study, the existence of sexual activity at night was verified. In the first year, the general pregnancy index was 79.4%. In the second year, the general index was 72.25%.

Na espécie equina, ao contrário do obtido com ruminantes, as técnicas de criopreservação de sêmen progridem lentamente, mas apesar das barreiras técnicas o emprego da inseminação artificial com sêmen congelado vem crescendo. Este experimento foi dividido em três etapas: na primeira comparou-se a utilização de diferentes diluentes e técnicas de congelação; determinação da eficiência do criotubo para envase do sêmen para a criopreservação; e na terceira determinou-se as taxas de prenhez das éguas artificialmente inseminadas com sêmen congelado envasado em criotubo. Seis garanhões foram submetidos à coleta do sêmen e doze éguas foram inseminadas artificialmente no primeiro estro da estação reprodutiva. As amostras foram diluídas em INRA82 ou Nagase, contendo 5% de glicerol, com concentração de 200 x 106 espermatozóides/ml. Parte do sêmen diluído foi envasado em palhetas (0,5ml), das quais uma parte foi imediatamente congelada. As palhetas restantes foram resfriadas previamente da temperatura ambiente (24ºC) até 5ºC antes do congelamento. As amostras foram descongeladas em banho-maria a 37ºC por 30seg. O mesmo protocolo de congelamento com resfriamento prévio foi realizado com as amostras envasadas em criotubos, sendo estas amostras descongeladas a 50ºC por 100seg em banho-maria. A eficiência in vivo do sêmen criopreservado, foi determinada através da inseminação artificial. O diagnóstico de prenhez foi realizado 20 dias após a inseminação artificial através de exame ultrassonográfico. Após a análise dos dados verificou-se que não houve diferença significativa entre os diluentes testados na motilidade progressiva e vigor dos espermatozóides. As médias da motilidade espermática após o aquecimento das amostras foram de: 43,32% e 26,66%, para o sêmen diluído com INRA82 submetido ao resfriamento ou não antes do congelamento, respectivamente, e para o sêmen diluído com Nagase revelou motilidade espermática de 41,08% e 24,44%, respectivamente. De acordo com esses resultados, os grupos experimentais submetidos ao resfriamento prévio apresentaram taxas de motilidade espermática superiores aos grupos que foram congelados diretamente. Não se verificou diferenças quanto ao vigor, motilidade e defeitos espermáticos entre os diluentes testados e os tipos de envase. As éguas inseminadas com criotubo apresentaram taxa de prenhez de 50% (3/6), já com as éguas do grupo controle (palheta) observou-se 16,66% (1/6), provando a viabilidade do congelamento do sêmen envasado em criotubo. / In the horse industry, unlike obtained with catle, the development of sperm cryopreservation techniques are very slow but despite the technical barriers the artificial insemination with frozen semen is growing. This experiment was divided into three steps. The first one compared the use of different diluents and freezing techniques. The other two stages were the use of cryogenic tubes for filling the semen and the determination of mare pregnancy rates that were artificially inseminated with frozen semen packaged in cryogenic tubes. Six stallions were submitted to semen collection and twelve mares were artificially inseminated at first estrus of the breeding season. The samples were diluted in INRA82 or Nagase, containing 5% glycerol, with a concentration of 200 x 106 sperm / ml. A fraction of the diluted semen was stored in straws (0.5 ml), some of those straws were immediately frozen. The remaining straws were cooled from room temperature (24ºC) to 5º C before freezing. The samples were thawed in a water bath at 37° C during 30sec. The same protocol with cooling prior to freezing was performed with samples filled into cryogenic tubes, and these samples were thawed in a water bath at 50° C during 100seg. The in vivo efficiency of cryopreserved semen was determined through artificial insemination. The diagnosis of pregnancy was performed after 20 days by ultrasound examination. After analyzing the data it was found that there was no significant difference in sperm motility and vigor among the tested diluents. Motility was INRA82: 43.32% / 26.66% and Nagase: 41.08% / 24.44%, when the semen was previously cooled or frozen directly, respectively. According to these results, the experimental groups subjected to cooling prior freezing showed better motility rates than the groups that were frozen directly. There were no differences regarding the vigor, motility and sperm defects among the diluents and the semen containers. The mares inseminated with cryotubes showed 50% (3/6) pregnancy rate, and 16.66% (1/6) pregnancy rate was observed in the group of mares inseminated with straws.