Os experimentos tiveram como objetivo determinar a taxa de eclosão dos embriões vitrificados em volumes diferentes de 9,0 M de etileno glicol. Simultaneamente, testou-se dois procedimentos de estocagem dos fios de teflon, denominados caixa de aço inoxidável e globete/raque. No experimento I, os 881 embriões coletados foram distribuídos em 4 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 307 embriões foram cultivados in vitro em meio PBSm, acrescido de 0,4% de BSA; tratamento 2 (T2): 292 embriões foram expostos à solução de glicerol 10% acrescida de 0,4% de BSA, envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool; tratamento 3 (T3): 138 embriões foram expostos durante 2 minutos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e então transferidos para a solução de vitrificação (50% de EG + 6% de BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos e foram colocados em volume de 1 μL no interior de um fio de teflon, medindo 0,4 mm de diâmetro, 2,0 cm de comprimento e 0,05 mm de espessura. Os fios foram acondicionados em uma caixa de aço inoxidável para serem armazenados em nitrogênio líquido; tratamento 4 (T4): 144 embriões foram expostos à solução de desidratação (10% de EG + 6% BSA em PBSm) e após 2 minutos, foram transferidos para a solução de vitrificação (50% de EG + 6% BSA em PBSm), onde permaneceram por 30 segundos, sendo após transferidos para um volume de 1 μL no interior do fio de teflon. Os fios de teflon foram estocados em globetes unidos às raques e mantidos em nitrogênio líquido. Após o aquecimento, os embriões foram cultivados em PBSm suplementado com 0,4% de BSA. As taxas de eclosão embrionária observadas foram: T1=76,29% (245/307); T2=41,05% (117/292); T3=37,98% (54/138) e T4=26,78% (37/144). No segundo experimento, 747 embriões foram distribuídos em 3 tratamentos: tratamento 1 (T1= controle): 80 embriões foram cultivados in vitro em meio KSOM acrescido de 0,4% de BSA; tratamento 2 (T2): 334 embriões expostos em solução de glicerol 10% acrescida de 0,4% de BSA, foram envasados em palhetas de 0,25 mL e submetidos ao congelamento pelo método rápido em Biocool; tratamento 3 (T3): 333 blastocistos foram expostos durante 2 minutos à solução de desidratação (10% de EG + 0,4% BSA em PBSm) e então transferidos para tubos eppendorf de 2,0 mL em contato com a solução de vitrificação (50% de EG + 0,4% BSA em PBSm). Após o cultivo in vitro, as taxas de eclosão embrionária observadas nos 3 tratamentos foram respectivamente: 88,75% (71/80), 40,44% (141/334) e 19,70% (66/333). Baseado nesses resultados conclui-se que embriões Mus domesticus domesticus submetidos à técnica de vitrificação após exposição à solução de 9,0 M de etileno glicol e envase em fios de teflon assegurou índices satisfatórios de sobrevivência embrionária. As taxas de sobrevivência dos embriões Mus domesticus domesticus foi independente do procedimento de estocagem em botijão de nitrogênio líquido. A vitrificação em solução de 9,0 M de etileno glicol com envase em tubos eppendorf não foi eficiente para promover altas taxas de sobrevivência embrionária, mas proporcionou segurança biológica aos embriões, durante o armazenamento. / This work was performed with Mus domesticus domesticus embryos to verify the in vitro viability of vitrified embryos using differents volumes of ethylene glycol–based solution. The experiment I consisted of four treatments. The 881 collected embryos were arranged as follows: treatment 1(control): 307 fresh embryos were cultured in vitro in PBSm + 0.4% BSA without being exposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2: 292 embryos were loaded into 0.25 mL french straws containing 10% glycerol + 0.4% BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure (Biocool®, controlled freezer); treatment 3:138 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) and then transferred to the vitrification solution (50% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) in teflon wire with 0.4 mm diameter, 2 cm length and 0.05 mm thickness containing the drop of 1μL volume, and placed into stainless steel box for the storage in LN2; treatment 4:144 embryos were exposed to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm) and after 2 minutes were transferred to the teflon wire, that was previousily loaded with 1μL of the vitrification solution (50% ethylene glycol + 6% BSA in PBSm). Finally, the teflon wires were placed into plastic globets attached to aluminum canes and maintained in LN2. After thawing, the embryos were serially washed in PBSm, and then cultured in PBSm supplemented with 0.4% BSA. The hatched blastocyst rates observed in the treatments were: T1=76.29% (245/307); T2=41.05% (117/292); T3=37.98% (54/138) and T4=26.78% (37/144). In the second experiment, 747 embryos were arranged as follows: treatment 1(control): consisted of 80 fresh embryos cultured in vitro in KSOM medium + 0.4% BSA without being exposed to either dehydration or cryoprotectants agents; treatment 2: 334 embryos were loaded into 0.25 mL french straws containing 10% glycerol + 0.4% BSA in PBSm and after 10 minutes the straws were submitted to the rapid-freezing procedure (Biocool®, controlled freezer); treatment 3: 333 embryos were exposed during 2 minutes to a dehydration solution (10% ethylene glycol + 0.4% BSA in PBSm) and then transferred to the eppendorf tubes loaded with the vitrification solution (50% ethylene glycol + 0.4% BSA in PBSm). After in vitro culture, the hatched blastocysts rates observed were: T1=88.75% (71/80); T2=40.44% (141/334) and T3=19.70% (66/333). Based on these results it is concluded that the embryos of Mus domesticus domesticus submitted to vitrification procedure after being exposed to 9.0 M of ethylene glycol – based solution and loaded in teflon wires were efficient to promote satisfactory embryo survival rates. The survival rate of Mus domesticus domesticus embryos was independent of the LN2 storage procedure. The vitrification procedure after being exposed to 9.0 M of ethylene glycol – based solution and loaded in eppendorf tubes were not efficient to promote high embryo survival rate, but to warrant the embryo’s biologically security during storage in liquid nitrogen.

A inseminação artificial intracervical superficial em ovinos é uma técnica simples, de baixo custo e eficiente no emprego do sêmen fresco. Por outro lado, particularidades do aparelho reprodutivo da fêmea ovina, a quantidade de células espermáticas que sobrevivem ao pós-congelamento bem como a capacitação precoce de espermatozóides durante o processo de criopreservação, impedem o emprego desta técnica com sêmen criopreservado, fazendo-se necessária a deposição intrauterina, com auxílio da laparoscopia. Desconhece-se a eficiência da inseminação artificial intracervical superficial em ovinos, empregando-se sêmen criopreservado e capacitado in vitro. O experimento foi realizado com objetivo de determinar as taxas de prenhez com o sêmen criopreservado e capacitado in vitro. Os animais foram divididos aleatoriamente em 5 grupos: sêmen fresco (SF); sêmen congelado cervical (SCC); sêmen congelado laparoscopia (SCL); sêmen congelado capacitado cervical (SCCC); e sêmen congelado capacitado laparoscopia (SCCL). Todas as fêmeas receberam doses inseminantes com concentração de 200x106 sptz. As inseminações ocorreram em um período de 52 a 60 horas após a retirada dos dispositivos de progesterona. Os diagnósticos de prenhez foram realizados com auxílio da ultrassonografia 30 dias após as inseminações. As taxas de prenhez observadas foram: No grupo SF 42,30% (11/26), SCC 23,07% (6/26), SCL 54,16% (13/24), SCCC 25,92% (7/27), SCCL 48,14% (13/27), não existindo diferença estatística entre os grupos experimentais. O experimento realizado mostrou que é possível obter prenhez, empregando sêmen criopreservado e capacitado in vitro, na inseminação artificial pela via cervical em ovinos. / The superficial intracervical insemination in sheep is a simple, low cost and efficient technique using fresh semen. Still, the particularities of the female tract, the amount of sperm cells wich survive and the early capacitation during the cryopreservation process, difficult the use of this technique with cryopreserved semen, maaing it's necessary to intrauterine with the aid of laparoscopy. It's unanown the efficiency of superficial intracervical insemination in ovine, using cryopreserved and in vitro capacitated semen. The experiment was carried out with the objective to determine the pregnancy rate of ewes inseminated with cryopreserved and in vitro capacitated semen. The females were randomly distributed among five experimental groups: fresh semen (SF), frozen semen cervical (SCC), frozen semen laparoscopy (SCL), frozen semen in vitro capacitated cervical (SCCC), frozen semen in vitro capacitated laparoscopy (SCCL). All females received dosis with 00x106sptz per insemination. The inseminations were performed from to 60 hours after the withdrawal of progesterone implants. The pregnancy diagnosis was conducted by ultrasongraphy 30 days after inseminations. The observed pregnancy rates was: SF ,30% (113 6), SCC 3,07% (63 6), SCL ,16% (133 ) SCCC %, SCCL 4,1 % (133 7). our experiment showed that in sheep it's viable the superficial cervical artificial insemination using cryopreserved and in vitro capacitated semen.

O objetivo deste trabalho foi comparar a utilização de diluentes comerciais à base de gema de ovo de galinha com os mesmos diluentes, nos quais se substituiu a gema de galinha pela de ovo de ema (Rhea americana). Foram utilizados Seis garanhões da raça Crioula, comprovadamente férteis e no período fora da estação de monta e utilizados seis ejaculados de cada garanhão. O sêmen foi avaliado macroscopicamente quanto ao volume, aspecto e coloração, a seguir avaliou-se a motilidade progressiva e total. Posteriormente o sêmen foi dividido em quatro alíquotas e diluído na proporção 1:1 com o diluente, Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares) para centrifugação. Para adição do diluente de congelamento foram utilizados: diluente A (FR-5, Nutricell Nutrientes Celulares) e diluente B (Botu-crio, Biotech Botucatu S.A.) adicionados de 20 % de gema de ovo de ema, ou de 20 % de gema de ovo de galinha. As amostras foram envasadas, identificadas e submetidas a congelamento conforme o protocolo. As palhetas foram descongeladas, após um período mínimo de 7 dias e examinadas para os seguintes quesitos: motilidade total e progressiva, e integridade física e funcional da membrana plasmática do espermatozoide. Os diluentes comerciais com ou sem adição de gema de ovo de ema não apresentaram diferenças em relação à motilidade total e progressiva, porém observou-se diferença nos parâmetros quando comparados os diluentes comerciais. Houve diferença na funcionalidade da membrana apenas quando comparado diluente A e B com gema de ovo de ema. No quesito integridade de membrana não foi observado diferença estatística. Estes resultados demonstram que a gema de ovo de ema (Rhea americana) pode ser uma alternativa para produção de diluentes para congelamento de sêmen de equinos. / The aim of this study was to compare the use of two commercial extenders using chicken egg yolk with the same extenders, to which ema (Rhea americana) egg yolk was added. Six Criollo breed stallions were used during the off-breeding season period. Six collections per stallion were used. The ejaculate aspect, total and progressive motility were evaluated with a microscope; concentration was determined with a Neubauer counting chamber. After evaluation, semen samples were divided in two aliquots and diluted 1:1 in each of the centrifugation extender Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares). For freeze that semen we used two commercial extenders: A (extender with glycerol) or B (extender with methylformamide) and was added 20% rhea egg yolk or 20% chicken egg yolk . Semen samples were examined at least 1 week after freezing, for total and progressive motility, physical and functional membrane integrity (HOST test and CFDA-PI fluorescence) (Lagares et al. 1998; Harrison & Vickers, 1990). The extenders of a given brand with or without rhea egg yolk had no significant difference according to total and progressive motility, although there was difference (p = 0,05) between extenders when different brands were compared, no matter if they were added Rhea egg yolk or not. Membrane functionality showed difference only when compared Extender A and B with Rhea egg yolk. Membrane integrity had no significant difference between all the treatments. These results show that Rhea egg yolk might be an alternative to making an equine semen extender.

O conhecimento de aspectos como área de distribuição, tamanho populacional e requisitos de hábitat dos crustáceos na região da Serra do Itajaí é inexistente, sendo que o baixo grau de conhecimento taxonômico produz alguns problemas do ponto de vista preservacionista. Faz-se necessário portanto, a realização de pesquisas que possam suprir esta carência, subsidiando desta forma esforços que visem a conservação destas espécies. O Parque das Nascentes (27º01’ - 27º06’ S e 49º01’ - 49º10’ O), é assim denominado pela grande quantidade de córregos e ribeirões cujas nascentes encontram-se dentro dos limites desta unidade de conservação. Os aeglídeos são caranguejos anomuros que habitam riachos, rios e lagoas, da região Neotropical. A presente pesquisa teve por objetivos: Verificar as condições ambientais (temperatura, saturação de oxigênio, potencial hidrogeniônico, condutividade elétrica e tipo de substrato), nas quais os crustáceos são encontrados. Nas populações de Aegla jarai e Aegla sp., presentes no Ribeirão Espingarda, estimar o tamanho da maturidade sexual, observar o período reprodutivo e de recrutamento, a proporção sexual e a ocorrência de heteroquelia. Analisar a distribuição espacial e temporal das populações de Aegla jarai e Aegla sp. no Ribeirão Espingarda e estimar a equação que descreve o crescimento de Aegla jarai. A partir dos resultados obtidos pode-se concluir que: O presente estudo amplia o conhecimento acerca da distribuição geográfica das espécies Acanthocyclops michaelseni, Tropocyclops prasinus prasinus e dos gêneros Metacyclops e Paracyclops (Copepoda), Darwinula serricaudata espinosa e Pseudocandona pumilis (Ostracoda), e Aegla jarai (Decapoda). No Ribeirão Espingarda coexistem duas espécies da família Aeglidae, Aegla jarai e uma espécie ainda não descrita. O comprimento médio de início da primeira maturação sexual das fêmeas de Aegla jarai foi estimado entre 16 e 16,5 mm de comprimento do cefalotórax. O período reprodutivo na espécie Aegla jarai foi registrado no outono e no inverno, já na espécie Aegla sp. foi no inverno e na primavera. O recrutamento tanto em Aegla jarai como em Aegla sp. foi na primavera e no verão. A proporção sexual anual foi de 1:1 em Aegla jarai e Aegla sp. Na espécie Aegla jarai os machos e as fêmeas apresentam heteroquelia, sendo a quela esquerda maior na maioria dos espécimes. Em Aegla sp. a maioria dos machos tem a quela esquerda maior, já a maioria das fêmeas não apresenta heteroquelia. Não há diferença significativa na distribuição de machos e fêmeas de Aegla jarai e Aegla sp. entre os trechos amostrados do Ribeirão Espingarda. A espécie Aegla jarai é mais freqüente no trecho com maior acúmulo de cascalho grosso, já a abundância da espécie Aegla sp. não exibe diferença significativa entre os trechos amostrados. A espécie Aegla jarai foi mais abundante no inverno e no verão, já a espécie Aegla sp. foi na primavera e no outono. Os juvenis foram mais freqüentes no trecho com maior heterogeneidade ambiental, com raízes submersas, acúmulos de cascalho, areia e detritos vegetais. Na espécie Aegla jarai os machos crescem mais rápido do que as fêmeas, atingindo maior tamanho.

O desenvolvimento de meios de cultivo eficazes para a maturação in vitro de oócitos caninos tem sido um desafio para os pesquisadores em reprodução animal. O estresse oxidativo desempenha papel fundamental na maturação oocitária, uma vez que altas concentrações de espécies reativas ao oxigênio levam ao dano celular e apoptose. O objetivo desta pesquisa foi determinar as taxas de maturação nuclear de oócitos caninos na presença de cisteína e α-tocoferol, substâncias conhecidas por suas propriedades antioxidantes. No experimento 1, avaliou-se a taxa de maturação nuclear de oócitos caninos mantidos em meio TCM-199 modificado (A) (controle) ou acrescido de 0,57mM de cisteína (B). No experimento 2, determinou-se as taxas de maturação nuclear na presença de diferentes concentrações de α-tocoferol em duas etapas independentes: experimento 1 (0, 10, 50μM) e experimento 2 (0, 100 e 500μM). Os dados foram analisados pelo teste do Qui-quadrado (P < 0,05). No experimento 1, não foi observada diferença estatística entre as taxas de Metáfase I/Anáfase I (MI/AI) e Metáfase II (MII) entre os oócitos do grupo controle (A) (7,5%, 16/213; 1,9%, 4/213) e os oócitos do grupo acrescido de cisteína (B) (6,3%, 14/223; 0,9%, 2/223). No experimento 2, não houve diferença significativa nas taxas de MI e MII dos oócitos entre os tratamentos da primeira etapa: controle (26,8%, 29/108), 10μM (22,6%, 26/115) e 50μM (29,1%, 30/103). Na segunda parte do experimento, a percentagem de oócitos que retomaram a meiose (VGBD à MII) foi de 31,9% (31/97), 34,9% (39/112) e 51,5% (54/105) para os grupos controle,100 e 500μM de α-tocoferol respectivamente (P < 0,05). Entretanto, nenhum aumento nas taxas de MII foi observado quando foram utilizadas as concentrações de 100μM (0,9%, 1/112) ou 500μM (1,0%, 1/105) de α- tocoferol no meio. Concluiu-se que, o TCM-199 modificado suplementado com cisteína não foi eficaz em elevar os índices de maturação in vitro de oócitos caninos. Ainda, a suplementação de α-tocoferol não afetou as taxas de MII de oócitos caninos. / The development of effective culture media for in vitro maturation of canine oocytes has been a challenge for researchers in animal reproduction. Oxidative stress plays a critical role in oocyte maturation since high concentrations of reactive oxygen species lead to cell damage and apoptosis. This research aimed to determine the rates of nuclear maturation of canine oocytes in the presence of cysteine and α-tocopherol, substances known for its antioxidant properties. In experiment 1, the rates of oocytes nuclear maturation exposed to modified TCM-199 (A) (control) or added with 0.57mM cysteine (B) were evaluated. In experiment 2, the rates of oocytes nuclear maturation in the presence of different concentrations of α-tocopherol were determined in two independent essays: experiment 1 (0, 10 and 50μM) and experiment 2 (0, 100 and 500μM). Data were analyzed by the Chi-square test (P < 0.05). The data obtained in experiment 1 allowed no difference among the oocytes in Metaphase I/Anaphase (MI/AI) (7.5%, 16/213; 1.9%, 4/213) and Metaphase II (MII) (6.3%, 14/223; 0.9%, 2/223) rates observed in the medium without or supplemented with cysteine respectively. In experiment 2, there was no significant difference in the rates of MI and MII oocytes among treatments designed for the first essay: control (26.8%, 29/108), 10μM (22.6%, 26/115) and 50μM (29.1%, 30/103). In the second part of the experiment, the percentage of oocytes that resumed meiosis (GVBD to MII) was 31.9% (31/97), 34.9% (39/112) and 51.5% (54/105) for control, 100 and 500μM groups respectively (P < 0.05). However, no improvement on rates of MII was observed when either 100 or 500μM α-tocopherol was added in medium. It was concluded that, modified TCM-199 supplemented with cysteine, was not effective in raising the rates of in vitro maturation of bitch oocytes. Moreover, α-tocopherol supplement did not affect the rates of MII in canine oocytes.

Os Triglicerídeos são essenciais para o metabolismo espermático e um alto nível deste está associado com boa qualidade do sêmen. O nível de ácidos graxos poliinsaturados (PUFA) é considerado um elemento crítico para a capacitação espermática e está associada à motilidade espermática e com maior fluidez de membrana. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da alimentação suplementar de garanhões, com óleo de arroz comercial (Gama-Horse, HT Nutri ®, Brasil), em parâmetros espermáticos. Quatro garanhões com idades variando entre 6 e 30 anos foram utilizados. Os animais tiveram o mesmo manejo durante os 190 dias de tratamento. O experimento foi dividido em três períodos: pré-tratamento (PT) - 30 dias para a estabilização das reservas espermáticas; tratamento (TR) - 80 dias de suplementação com 200 ml de óleo arroz contendo 34% ácido linolêico, 1% ácido linolênico, 1% gama-oryzanol e 660mg/Kg vitamina E; controle (CN) - 80 dias sem suplementação de óleo de arroz. Ejaculados foram coletados duas vezes por semana com uma vagina artificial. As avaliações do sêmen foram realizadas imediatamente após a colheita, sendo avaliados volume, concentração, motilidade total, funcionalidade (HOST) e integridade (CFDA / PI) da membrana e potencial antioxidante total (TRAP). Uma amostra de sangue foi obtida cada 15 dias para avaliar testosterona e estradiol plasmáticos. Para avaliar o efeito da suplementação de óleo de arroz no sêmen os dados dos últimos 20 dias a partir da TR com os últimos 20 dias a partir da CN foram analisados com ANOVA, com uma significância estatística de P < 0,05. A suplementação do óleo de arroz aumentou a concentração (P < 0,01) (TR: 226 x 106/mL; NC: 172 x 106/mL), motilidade total (P < 0,01) (TR: 59%; NC: 42%), HOST (P < 0,02) (TR: 73%; NC: 69%) e TRAP (P < 0,01) (TR: 1,9 nmol Trolox / mg de proteína; CN: 0,98 nmol Trolox / mg de proteína). Não foram observadas diferenças entre os períodos TR e CN em volume, integridade de membrana, testosterona e estradiol. A suplementação oral com o óleo de arroz comercial contendo PUFA e gama-oryzanol aumentou o potencial antioxidante total do sêmen. Além disso, foi detectado uma maior funcionalidade de membrana, provavelmente devido a defesa antioxidante evitando peroxidação lipídica da membrana espermática ou a uma melhoria da fluidez da membrana. / Triglycerides are essential for sperm metabolism and a high level of triglycerides is associated with good semen quality. The level of polyunsaturated fatty acids (PUFA) is considered a critical feature for capacitation and is associated with sperm motility and with increased membrane fluidity. The aim of this experiment was to evaluate the effects of the supplementary feeding of stallions, with commercial rice oil (Gama- Horse, HT Nutri®, Brazil), on sperm parameters. Four stallions with ages ranging between 6 and 30 years were used. The animals had the same management during the 190 days of trial. The experiment was divided in three periods: pre-treatment (PT) - 30 days to sperm reserves stabilization; treatment (TR) - 80 days supplementation with 200 mL rice oil containing 34% linoleic acid, 1% linolenic acid, 1% gamma oryzanol and 660mg/Kg vitamin E; control (CN) - 80 days without rice oil supplementation. Ejaculates were collected twice a week with an artificial vagina. Semen exams were performed immediately after collection, being evaluated volume, concentration, total motility, functionality (HOST) and integrity (CFDA/PI) of membrane and total antioxidant potential (TRAP). A blood sample was obtained each 15 days to evaluate plasma testosterone and estradiol. To evaluate the effect of the rice oil supplementation the semen data from the last 20 days from TR with the last 20 days from CN were analyzed with ANOVA, with a statistical significance from 0.05. The supplementation of rice oil increased concentration (P < 0.01) (TR: 226 x 106/mL; CN: 172 x 106/mL), total motility (P < 0.01) (TR: 59%; CN: 42%), HOST (P < 0.02) (TR: 73%; CN: 69%) and TRAP (P < 0.01) (TR: 1.9 nmol Trolox/mg of protein; CN: 0.98 nmol Trolox/mg of protein). No differences among periods TR and CN were observed in volume, membrane integrity, testosterone and estradiol. Oral supplementation with the commercial rice oil containing PUFA and gamma-oryzanol increased the total antioxidant potential of the semen. In addition, a higher membrane functionality and motility was detected, probably due to antioxidant protection avoiding lipid peroxidation of sperm membrane or to a improved membrane fluidity.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 549736 bytes, checksum: 94f356a8e6012cc38a152d4e5b05791a (MD5) Previous issue date: 2007-04-20 / The objective of the present study was to evaluate the effect on the freezability of equine semen with the addition of glycerol in 0, 35 and 60 minutes the cooling period. Semen from two adult stallions (Mangalarga Marchador) were used, totalizing 11 colections of semen. The evaluation consisted of sperm progressive straight motility, total motility, sperm vigor, live/death cells (supravital), functional integrity of sperm plasma membrane (Hyposmotic Swelling test - Host) and sperm morphology analyses in the semen in natura , before and after freezing the semen. Each collected semen was divided in three treatments. T1: addition of the cryoprotector occurred before the cooling; T2: addition occurred after 35 minutes of the cooling; T3: the addition occurred immediately before the freezing, to the 60 minutes of cooling. After the minimum frozen period of 12 days, the semen samples had been thawed at 75º C per 7 seconds. The thawed samples had remained for 120 minutes at 38º C for longevity evaluation. Differences (P < 0.05) among the animals used in the experiment, were noted in sperm morphology. One of the stallions showed average values of abnormal sperms bellow of the praised standards. No relations (P > 0.05) were registered among average values of the morphology test, supravital test and Host in semen in natura . The supravital test showed relation (P < 0.05) only with the sperm vigor in the analysis of the semen in natura . No differences (P > 0.05) were registered among physical analyses, in the Host, supravital test, the morphologic analysis and in the evaluation of longevity in the frozen/thaw semen of three considered protocols. These results suggest that the time of balance between the semen and glycerol does not affect the quality and the longevity of the semen. Seminal qualities had been considered impracticable in fertility terms, after 60 minutes of incubation on longevity test. The supravital test of the frozen/thawed semen showed relation with the progressive sperm motility (r = 0.81) and sperm vigor (r = 0.64) in the 3 considered trataments. The values of the Host used in this experiment were satisfactory due the large reaction of the spermatozoa when in contact with the hyposmotic solutions, however this test did not show relations (P > 0.05) with the sperm physical parameters. The physical parameters of the semen before cooling did not present relation (P > 0.05) with the physical parameters and with supravital test of frozen/thaw sperm. The no significant relations among the different tests used in this study, suggests that the information of these tests are used under different aspects, ratifying the complementary character of the same ones. / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição do glicerol em tempo 0, 35 e 60 minutos de resfriamento sobre a congelabilidade do sêmen equino. Foram utilizados 2 garanhões adultos da raça Mangalarga Marchador, totalizando 11 ejaculados. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva total e retilínea, vigor espermático, percentual de células vivas e mortas (supravital), integridade funcional de membrana (Hiposmótico) e morfologia espermática no sêmen in natura , pré e pós congelamento. Cada ejaculado foi dividido em três tratamentos. T1: adição do crioprotetor ocorreu antes do resfriamento; T2: adição ocorreu aos 35 minutos de resfriamento; T3: a adição ocorreu imediatamente antes do congelamento, aos 60 minutos de resfriamento. Após o período mínimo de 12 dias de congelados, as amostras de sêmen foram descongeladas a 75º C por 7 segundos. As amostras descongeladas permaneceram por 120 minutos incubadas a 38º C para avaliação de longevidade pelo teste de termoresistência. Foram registradas diferenças (P < 0,05) entre as alterações de morfologia espermática entre os animais utilizados no experimento, sendo que no garanhão 2 os valores médios estavam acima dos padrões preconizados. Não foram registradas relações (P > 0,05) entre os valores médios dos testes de morfologia, Hiposmótico e supravital na avaliação dos ejaculados. O teste supravital apresentou relação (P < 0,05) apenas com o vigor espermático na análise do sêmen in natura . Não foram registradas diferenças (P > 0,05) entre os valores médios obtidos nas análises físicas, no teste Hiposmótico, no teste supravital, na análise morfológica e na avaliação de longevidade pelo teste de termoresistência entre o sêmen congelado de acordo com os três protocolos propostos. Esses registros sugerem que o tempo de equilíbrio entre o sêmen e o glicerol não interfere na qualidade e na longevidade do sêmen de garanhões. Aos 60 minutos de incubação (TTR), as qualidades seminais foram consideradas inviáveis em termos de fertilidade. O teste supravital do sêmen descongelado apresentou relação com os parâmetros de motilidade espermática progressiva (r = 0,81) e vigor espermático (r = 0,64) independente do tratamento avaliado. Os valores do teste hiposmótico mostraram taxas de espermatozóides reativos satisfatórios, porém não foram registradas relações (P > 0,05) com os parâmetros físicos avaliados. As avaliações físicas do sêmen pré-resfriamento não apresentaram relação (P > 0,05) com os parâmetros físicos e com o teste supravital do sêmen descongelado. As relações não significativas entre os diferentes testes utilizados nesse estudo sugerem que as informações são fornecidas sob diferentes aspectos, ratificando o caráter complementar dos mesmos.

Este estudo foi realizado com o objetivo de: 1) determinar a influência da tensão de oxigênio na viabilidade das células do cumulus oriundas de oócitos caninos maturados em meio com alta concentração de glicose (11,0 mM); 2) determinar a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos mantidos em meio contendo altas concentrações de glicose (11,0 mM), bem como avaliar o efeito da tensão de oxigênio sobre a taxa de maturação in vitro de oócitos caninos; 3) determinar a influência da adição de água de coco em pó (ACP-318®) ao meio de maturação com alta concentração de glicose (11,0 mM) na taxa de maturação in vitro de oócitos caninos. O meio de maturação usado nos experimentos foi TCM 199 suplementado com 26,19 mM de bicarbonato de sódio, 50 μg/ml de gentamicina, 0,20 mM de ácido pirúvico, 20 μg/ml de estradiol, 0,5 μg/ml de FSH e 0,03 UI/ml hCG. O meio de maturação era modificado de acordo com a proposta experimental apresentada. Os resultados do primeiro experimento mostraram diferença estatística nas taxas de apoptose nas células do cumulus entre os três grupos avaliados. Foi concluído que células do cumulus oriundas de COCs caninos cultivados em meio contendo altas concentrações de glicose apresentaram significativamente menos apoptose do que as cultivadas em meio com soro fetal bovino, e que a baixa tensão de oxigênio foi eficiente em reduzir a ocorrência de apoptose nas células do cumulus. No segundo experimento deste estudo, os índices mais elevados (p < 0,001) de oócitos degenerados foram obtidos, quando TCM 199 era suplementado com 10 % de FCS. Uma influência positiva sobre a retomada de meiose e aquisição de metáfase I (MI) foi observada quando os oócitos caninos foram maturados em meio livre de soro e com altas concentrações de glicose. Foi concluído que a adição de FCS ao meio de maturação de oócitos caninos resulta em altas taxas de degeneração dos oócitos e que a redução da tensão de oxigênio não resultou em melhora da taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Os resultados obtidos no terceiro experimento mostraram que nos grupos experimentais cujo meio foi suplementado com ACP-318®, houve melhora significativa (p < 0,05) na taxa de maturação nuclear dos oócitos caninos. Oócitos maturados em meio suplementado com 5% de ACP-318® mostraram-se menos susceptíveis a alterações na configuração típica da cromatina que os maturados com 10% de ACP-318® no meio de maturação. Os resultados sugerem que tanto a integridade da morfologia nuclear, como a progressão da meiose dos oócitos caninos são positivamente influenciadas quando estes são expostos ao TCM 199 com alta concentração de glicose e suplementado com 5% de ACP-318®. / This study was designed: 1) determine the influence of oxygen tension on cumulus cell (CC) viability from canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 2) determine the influence of two oxygen tensions on the nuclear maturation of canine oocytes in vitro matured in high glucose medium (11.0 mM); 3) determine the influence of powdered coconut water (ACP-318®) diluted in high glucose (11.0 mM) TCM199 in the achievement of nuclear in vitro maturation (IVM) of canine oocytes. Basic medium used in the experiments was TCM 199 suplemented with 26.19 mM sodium bicarbonate, 50 μg/ml gentamicin, 0.20 mM piruvic acid, 20 μg/ml oestradiol, 0.5 μg/ml FSH and 0.03 IU/ml hCG. Maturation medium was modified following the beyond described experimental proposals. The results of the first experiment showed that there was statistical difference in the rate of CCs apoptosis among the three groups. It was concluded that CCs of canine COCs cultured in high-glucose medium showed significantly less apoptosis than those cultured in medium with FCS. Low O2 tension was efficient in reducing apoptosis in canine CCs. In the second experiment of this study, the highest rates (p < 0.001) of degenerated oocytes were achieved when TCM 199 was added with 10% FCS. A positive influence on the meiosis resumption and on the MI acquisition rate was observed when canine oocytes were matured in defined high-glucose medium. It was concluded that the addition of FCS in the maturation medium of canine oocytes result in a high level of degenerated oocytes, and that the low level of oxygen tension did not improve the nuclear maturation of canine oocytes. The results achieved on the third experiment showed that in the experimental groups with the medium supplemented with ACP-318® (groups 2 and 3) enhanced the rates of oocytes’ nuclear maturation (p < 0.05). Ooocytes matured in medium added with 5% powdered coconut water (ACP-318®) were less prone to deviation of typical chromatin configuration than those matured in medium added with 10% ACP-318®. The results suggest that oocytes’ nuclear morphology integrity and meiosis achievement were positively influenced when exposed to high glucose TCM199 supplemented with 5% powdered coconut water.

A ovário-histerectomia (OVH) é um procedimento cirúrgico realizado de maneira rotineira na clínica de pequenos animais, com objetivo terapêutico ou de promover a esterilização reprodutiva nas fêmeas. Muitas abordagens pela técnica convencional aberta já foram descritas e com viabilidade comprovada. No segmento da cirurgia de invasão mínima dentro da Medicina Veterinária, diversos métodos vêm sendo propostos variando entre si em relação ao posicionamento, quantidade e tamanho dos trocartes e método de hemostasia. Assim sendo, o objetivo deste estudo foi avaliar e descrever a viabilidade de realização da OVH em felinas com até 5 kg de peso corporal através de abordagem minilaparoscópica com uso de eltrocoagulação bipolar como método hemostático. A minilaparoscopia (MINI) não é uma modalidade recente na cirurgia laparoscópica humana. Considerada a evolução mais sofisticada da cirurgia laparoscopia, a MINI apresenta muitos outros benefícios além do estético; visto que a lesão relacionada ao dano cirúrgico não se resume as somas das incisões realizadas. A técnica reina pela delicadeza e precisão dos movimentos, sem perda da triangulação, essencial ao padrão laparoscópico. Foram avaliados os procedimentos de 15 felinas quanto à viabilidade e dificuldades do acesso minilaparoscópico, uso do cautério bipolar, o tamanho das incisões e a necessidade de ampliá-las, complicações trans e pós-operatórias assim como a dor demonstrada por esses pacientes. A avaliação da dor foi feita através de tabela específica para espécie felina com diretrizes estabelecidas e confiabilidade comprovada, auxiliada a outras duas tabelas de avaliação da dor. A conversão de minilaparoscopia à cirurgia aberta foi necessária em um dos quinze pacientes operados nesse estudo. Conclui-se que a realização da técnica de OVH por abordagem minilaparoscópica em gatas é factível. / Ovariohysterectomy (OHE) is a surgical procedure routinely performed in small animals practice, with therapeutic purpose or to promote reproductive sterilization in females. Numerous approaches have been described using conventional open technique and had their viability proven. In the segment of minimally invasive surgery in the Veterinary Medicine, several methods have been proposed, differing from each other in position, number and size of trocars and hemostasis method used. Thus, the goal of this study was to evaluate and describe the practicability of performing OHE in cats with up to 5 kg of body weight through minilaparoscopic approach, using bipolar eltrocoagulation as hemostatic method. The minilaparoscopy (MINI) is not a new modality in human laparoscopic surgery. Considered the most sophisticated evolution of laparoscopic surgery, the MINI has many other benefits beyond the aesthetic; since the injury caused by the damage of surgery is not just the sum of the incisions. The technique stands out for the delicacy and accuracy of the movement without loss of triangulation, essential for the laparoscopic model. The procedures of 15 female cats were evaluated for the viability and difficulties of minilaparoscopic approach, use of bipolar cautery, incision size and the need to enlarge it, trans and postoperative complications and pain demonstrated in these patients. Pain assessment was done through specific table for feline species with established guidelines and proven reliability, helped by other two pain assessment tables. The conversion from minilaparoscopy to open surgery was required in one of the fifteen patients operated on in this study. Therefore, the implementation minilaparoscopic approach for OHE technique is feasible in cats.

Entre as diversas espécies de plantas forrageiras, destaca-se Paspalum notatum Flugge, uma das mais importantes nas pastagens nativas do sul do Brasil. Os ecótipos nativos são autotetraplóides, reproduzindo-se através apomixia. Porém, a variedade Paspalum notatum (cultivar Pensacola) é diplóide de reprodução sexual e pode ser usada em cruzamentos com plantas apomíticas após duplicação cromossômica. O objetivo deste trabalho foi avaliar genótipos poliploidizados quanto ao modo de reprodução, comportamento meiótico e estimar a fertilidade masculina e feminina. Três plantas diploides de reprodução sexual da cv. Pensacola tiveram seu número cromossômico duplicado artificialmente. A planta WKS 3 apresentou modificação em seu modo de reprodução após a duplicação, que passou a ser apomítico. Já as plantas WKS 63 e WKS 92 confirmaram o modo de reprodução sexual idêntico ao genótipo de origem. As plantas analisadas WKS 3, WKS 63 e WKS 92 apresentaram anormalidades meióticas relacionadas à poliploidia, entretanto essas anormalidades não comprometeram os produtos meióticos, que foram predominantemente tétrades regulares e satisfatória fertilidade polínica, variando de 88,7 a 95,7%. O pareamento cromossômico na fase da diacinese foi variável entre as plantas: WKS 3 apresentou associações predominantemente bivalentes com esporádicas associações quadrivalentes, WKS 92 mostrou associações bivalentes, trivalentes e tetravalentes e associações quadrivalentes, enquanto que na planta WKS 63, houve predomínio de associações quadrivalentes. As plantas WKS 63 e WKS 92 apresentaram baixa fertilidade feminina, indicando que a duplicação cromossômica pode afetar esta característica. Estas plantas duplicadas, juntamente com outros genótipos da espécie, previamente selecionados e os ecótipos apomíticos elite do Rio Grande do Sul, foram utilizadas em esquemas de cruzamentos intraespecíficos. A obtenção de híbridos segregantes abriu um grande leque de possibilidades para o melhoramento de plantas forrageiras, melhorando a composição do campo nativo, podendo corroborar com a conservação dos campos sulinos, evitando sua degradação, bem como sendo uma nova opção para a pecuária do sul do país, através da utilização de materiais bem adaptados, diversificando a produção forrageira. Além disso, podendo gerar materiais que possam ser utilizados na recuperação de áreas degradadas. Novos genótipos apomíticos, gerados através de hibridações e que tenham potencial agronômico poderão ser registrados e protegidos no Serviço Nacional de Proteção de Variedades do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). / Among the various species of forage plants, Paspalum notatum Flugge is one of the most important native grassland species of southern Brazil. The native ecotypes are tetraploid and have apomictic reproduction. However, the variety Paspalum notatum (cultivar Pensacola) is diploid and sexual and they can be used in crosses with apomictic plants after chromosome duplication. The objective of this study was to evaluate polyploidized genotypes as the mode of reproduction, meiotic behavior, pollen viability and to evaluate male and female fertility. Three diploid and sexual plants of cultivar Pensacola had chromosome number artificially duplicate. The WKS 3 plant showed change in mode of reproduction after duplication, which became apomictic. And the plants WKS 63 and WKS 92 confirmed sexual reproduction mode like the original genotype. The analyzed plants WKS 3, WKS 63 and WKS 92 presented abnormalities related to polyploidy, however, the abnormalities observed did not compromise the meiotic products which were characterized by regular tetrads and satisfactory pollen fertility varying from 88.7 to 95.7%.Chromosome paired at diakinesis were variable among plants: WKS 3 presented predominantly quadrivalents associations, WKS 92 presented bivalents, trivalents and tetravalents associations and the plant WKS 63, predominantly presented quadrivalents associations. The plants WKS 63 and WKS 92 had low female fertility, showing that chromosome duplication can affect this trait. These duplicate plants along with other genotypes of species previously selected and the elite apomictic ecotypes of Rio Grande do Sul were used in intraspecific crosses. Obtaining hybrids segregating opened a wide range of possibilities for the improvement of forage plants, improving natural pasture composition, can be corroborate with the conservation of the southern fields, preventing its degradation, as well as being a lever for livestock in the South of the country, with the use of materials well suited, diversifying the forage production. Also, can generate materials that can be used in the recovery of degraded areas. New apomictic genotypes produced, generated across the hybridization, with agronomic potential, will can be registered and licensed by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply of Brazil (MAPA).