Orientador: Sônia Regina Panzarini Barioni / Coorientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Wilson Roberto Poi / Banca: Jéssica Lemos Gulinelli / Resumo: O reimplante dentário é o tratamento de escolha para a avulsão e o seu sucesso tem relação direta com a vitalidade do ligamento periodontal e controle da contaminação. O controle da inflamação durante o processo de reparo do periodonto após o reimplante tem grande importância porque a sua persistência pode favorecer a reabsorção dentária. Tem-se recomendado a antibioticoterapia sistêmica, porém faltam estudos que demonstrem o seu real papel nesse processo. Portanto, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da antibioticoterapia sistêmica com amoxicilina e tetraciclina após reimplante dentário imediato em ratos. Noventa ratos (Rattus norvegicus albinus, variedade Wistar) tiveram os incisivos extraídos e armazenados em 20 ml de solução de soro fisiológico por 5 minutos. Em seguida, os dentes foram reimplantados e os animais divididos em 3 grupos de acordo com o antibiótico administrado por via intragástrica (Técnica de Gavagem): Grupo I - soro fisiológico, Grupo II - Amoxicilina e Grupo III - Tetraciclina. A eutanásia ocorreu aos 7, 15 e 30 dias após o reimplante. Os dados obtidos foram submetidos na análise histomorfométrica foram submetidos a análise estatística. Independente do período analisado o tecido conjuntivo subjacente à reinserção epitelial e o ligamento periodontal mostraram diferença estatística quanto ao infiltrado inflamatório aguda que se apresentava mais intenso no grupo controle seguido pelo grupo da Tetraciclina. Esses resultados permitem concluir que a antibioticoterapia sistêmica, no reimplante dentário imediato, favorece o processo de reparo da polpa e do ligamento periodontal e que a Amoxicilina foi mais efetiva que a Tetraciclina / Abstract: Tooth replantation is the choice treatment for avulsion and its success has a direct relationship with the vitality of the periodontal ligament and contamination control. The control of inflammation during periodontal repair after replantation is quite important, because it's persistence may promote resorption. It has been recommended the systemic antibiotic therapy, although there are just a little studies that demonstrate its real effect in the process. Therefore, the aim of the study was to evaluate the effect of systemic antibiotic therapy with amoxicillin and tetracycline after immediate tooth replantation in rats. The incisors of 90 rats (Rattus norvegicus albinus variety Wistar) were extracted and stored in 20 ml of saline solution for 5 minutes. Then, the teeth were replanted and the animals were divided into 3 groups according to the antibiotic administered by gavage: Group I - saline, Group II - amoxicillin and Group III - tetracycline. The rats were euthanized at 7, 15 and 30 days after reimplantation. Regardless of the analyzed period, the connective tissue underlying the epithelial reattachment and periodontal ligament showed a more intense infiltrate inflammatory acute in the control group followed by the Tetracycline group. These results indicate that systemic antibiotic therapy promotes the healing process of imediate tooth replantation and that the Amoxicillin is greater than Tetracycline / Mestre

Orientador: Sônia Regina Panzarini Barioni / Coorientador: Cristina Antoniali Silva / Banca: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Graziela Garrido Mori Panucci / Resumo: O reimplante dentário é o tratamento de escolha para a avulsão e o seu sucesso tem uma relação direta com a vitalidade do ligamento periodontal e controle da contaminação. O controle da inflamação durante o processo de reparo do periodonto após o reimplante tem grande importância porque a sua persistência pode favorecer a reabsorção dentária. Tem-se recomendado a antibioticoterapia sistêmica, porém seu valor é questionável. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da antibioticoterapia sistêmica com Amoxicilina e Tetraciclina após reimplante dentário tardio em ratos. Noventa ratos tiveram os incisivos superiores direito extraídos e mantidos 60 minutos em meio ambiente. Após esse período a polpa e o ligamento periodontal foram removidos e os dentes imersos em solução de fluoreto de sódio fosfato acidulado a 2%. Em seguida o canal radicular foi preenchido com pasta de hidróxido de cálcio e um plug apical de MTA e os dentes reimplantados. Os animais foram divididos em 3 Grupos de acordo com o antibiótico utilizado. No Grupo I - controle, Grupo II - Amoxicilina e Grupo III - Tetraciclina. A eutanásia ocorreu aos 7, 15 e 30 dias após o reimplante. Independente do período analisado o infiltrado inflamatório agudo foi menor no grupo da Amoxicilina. Quanto à reabsorção radicular esta apresentou com menor extensão e profundidade também no grupo da Amoxicilina o que permite concluir que a antibioticoterapia sistêmica tem uma influência positiva no processo de reparo do reimplante dentário tardio e a Amoxicilina mostrou-se mais efetiva no controle do processo inflamatório / Abstract: The tooth replantation is the treatment of choice for avulsion and its success has a direct relationship with the vitality of the periodontal ligament and contamination control. The control of inflammation during periodontal repair after replantation is of great importance because its persistence may promote resorption. Systemic antibiotic therapy has been recommended in such cases, but its value is questionable. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of systemic antibiotic therapy with Amoxicillin and Tetracycline after delayed tooth replantation in rats. Ninety rats were extracted incisors and held 60 minutes in the environment. After this time the pulp and periodontal ligament were removed, and the teeth were immersed in a solution of sodium fluoride and 2% acidulated phosphate. Then the root canal was filled with calcium hydroxide paste and an MTA apical plug, and the teeth were replanted. The animals were divided into three groups according to the types of the antibiotics. In Group I - control, Group II - Amoxicillin and Group III - Tetracycline. Evaluations were made at 7, 15 and 30 days after replantation. Regardless of the analyzed period the acute inflammatory infiltrate was lower in the Group II, with Amoxicillin. As for root resorption, it was presented with a lesser extent and depth also in the group of Amoxicillin, which indicates that systemic antibiotic therapy has a positive influence on the delayed tooth replantation repairing process, and Amoxicillin was more effective in controlling the inflammatory process / Mestre

Orientador: Celso Koogi Sonoda / Banca: Wilson Roberto Poi / Banca: Ana Paula Farnezi Bassi / Resumo: Este estudo avaliou as conseqüências de níveis diferentes de luxação e subluxação de dentes anteriores de ratos sem reposicionamento e o processo de reparo do tecido pulpar e do periodonto adjacentes. Realizou-se avaliação histológica descritiva e histomorfométrica. Utilizou-se 39 ratos divididos em 3 grupos sendo esses: GI: realizou-se a subluxação dos incisivos superiores. GII: realizou-se luxação extrusiva dos referidos dentes em 1 mm e GIII: luxação em 2 mm dos dentes acima citados. A avaliação qualitativa histológica das laminas foi realizada, utilizando tabela de scores previamente desenvolvida e descrita no texto. Foi utilizado também o programa imagelab 2000 para a quantificação da área compreendida pela superfície da câmara pulpar após esses movimentos traumáticos nos elementos dentais estudados. Observou-se como resultado qualitativo, que dentro desses limites previamente estabelecidos de luxação, ocorreu pouca, e em alguns casos nenhum, processo de reabsorção da estrutura dentinária. Agora, com relação ao comprometimento pulpar, observou-se que, quanto maior o trauma sofrido pelo dente, maior foi o processo degenerativo do conteúdo pulpar, apresentando em alguns casos, áreas de abscesso instaladas, concorrendo também com a revascularização do referido dente / Abstract: This study evaluated the consequences of different levels of dislocation and subluxation of the anterior teeth of rats without repositioning and repair process of the pulp tissue and periodontal healing. Carried out histological description and histomorphometry. We used 39 rats divided into 3 groups and these: GI: it was a subluxation of the upper incisors. GII: held extrusive luxation of those teeth in 1 mm and GIII: dislocation of 2 mm above the teeth. The qualitative assessment of histological slides was performed using table scores previously developed and described in the text. We also used ImageLab 2000 software to quantify the area including the surface of the pulp chamber after these movements in traumatic dental elements studied. Observed as a result qualitatively, that within those limits previously established dislocation, there was little, and in some cases non-existent, resorption of the dentin structure. Now, with respect to pulp involvement, it was observed that the greater trauma suffered by the tooth, greater degeneration of the pulp content, presenting in some cases, areas of abscess installed, also competing with revascularization of that tooth / Mestre

O presente trabalho investigou microscopicamente o efeito da equistatina sobre o processo reabsortivo de dentes incisivos superiores de ratos, extraídos e reimplantados. Foram utilizados 42 animais, divididos em grupos com e sem equistatina. Os tempos extra-alveolares dos dentes foram de 30 e 60 minutos e os períodos experimentais pós-cirúrgicos foram 15, 60 e 90 dias. Os espécimes obtidos foram processados e corados em H.E. para observar os processos biológicos presentes. Os eventos microscópicos foram avaliados por dois examinadores, de modo quantitativo histomorfométrico e descritivo, de acordo com o tipo de infiltrado e intensidade da reação inflamatória; com o tipo, extensão e localização de reabsorção dentária; e presença de anquilose alveolodentária. O nível de concordância entre examinadores, determinado pelo índice Kappa, revelou-se quase perfeito para todas as variáveis avaliadas. A comparação entre os grupos testes e controle para as variáveis apresentadas foi feita por meio do teste Mann-Whitney e mostrou não haver diferença estatística entre a administração de equistatina e tempo extra-alveolar em relação à intensidade inflamatória nas diferentes porções radiculares. Quanto ao tipo de reabsorção estabelecida, notou-se que a presença de reabsorção inflamatória foi significativamente maior (p<0,05) no grupo controle nos tempos de 30 e 60 minutos no período pós-cirúrgico de 15 dias. A anquilose alveolodentária também esteve significativamente mais presente no grupo tratado com equistatina com 30 minutos extra-alveolar e 15 dias de período experimental. Houve, ainda, mais anquilose alveolodentária no grupo controle de 60 minutos extra-alveolar, com o período experimental de 60 dias. No período experimental de 90 dias todos os espécimes avaliados apresentaram processos reabsortivos inflamatórios e ausência de anquilose alveolodentária. O teste Kruskall-Wallis avaliou as diferenças significantes entre grupos, em relação à intensidade inflamatória por terço radicular, tipo de reabsorção e anquilose alveolodentária. As comparações individuais foram realizadas com teste Dunn e mostrou diferenças significantes entre grupos teste em relação ao período experimental. As variáveis testadas também foram avaliadas pelo teste de correlação de Spearman, que demonstrou haver correlações positivas substanciais ou muito fortes entre as variáveis: intensidade inflamatória no 1/3 cervical e no 1/3 médio, intensidade inflamatória no 1/3 cervical e no 1/3 apical e intensidade inflamatória no 1/3 médio e no 1/3 apical. Destacou-se ainda a correlação negativa substancial entre tipo de reabsorção e a intensidade inflamatória do 1/3 médio radicular. O uso de implantes de ELVAX com equistatina demonstrou possuir um potencial terapêutico na prevenção de processos reabsortivos inflamatórios no modelo experimental de reimplante de incisivos superiores murinos. / This study aimed to microscopically investigate the effect on the dental resorptive process of subgingival implants of ELVAX polymer with peptide echistatin in reimplantation of upper incisors in rats. For this purpose, 42 animals were used and divided into groups with and without echistatin. Extra alveolar socket period was 30 and 60 minutes and post-surgical experimental periods were 15, 60 and 90 days. Specimens were processed and stained with H.E. to observe the biological processes in the area. The microscopic events were evaluated by two examiners. Quantitative histomorphometric and descriptive evaluation of the events were performed according to the presence, type and location of the inflammatory response, incidence of resorptions or dental ankylosis. The level of agreement between examiners determined by the Kappa index, proved to be almost perfect for all variables. The comparison between the experimental and control groups for the variables presented was performed using the Mann-Whitney test and showed no statistical difference between the administration of echistatin and extra alveolar socket period relative to the inflammatory intensity in different portions of the root. Regarding the type of resorption established, it was noted that the presence of inflammatory resorption was significantly higher (p<0.05) in the control group on days 30 and 60 minutes in the postoperative period of 15 days. Dental ankylosis was also significantly more prevalent in the group treated with echistatin in extra alveolar socket period of 30 minutes and 15-day trial period. There was even more dental ankylosis in control group with 60 minutes of extra alveolar socket, with the trial period of 60 days. In the trial period of 90 days all specimens studied featured inflammatory resorptives processes and absence of dental ankylosis. The Kruskal-Wallis test assessed significant differences between groups in relation to the intensity of inflammation by root third, resorption type of and dental. Individual comparisons were performed with Dunn test and showed significant differences between groups in relation to the test observation period. The variables tested were also evaluated by Spearman correlation test, which showed that there are substantial or very strong positive correlations among the variables: intensity of inflammation in the cervical third and the medium third, intensity of inflammation in the cervical 1/3 and apical 1/3 inflammatory intensity in the middle 1/3 and apical 1/3. It also highlighted the significant negative correlation between type and intensity of inflammatory resorption of middle 1/3 root. The use of subgingival ELVAX implants with echistatin shown to have therapeutic potential in preventing the inflammatory resorptive process in the experimental model of reimplantation of upper incisors in rats.

Este estudo avaliou, por meio de cultivo celular e MEV, a capacidade de adesão de fibroblastos e as alterações estruturais ocorridas na superfície dentinária de reabsorções radiculares externas simuladas, após tratamento com hidróxido de cálcio, MTA e/ou radiação com laser de diodo de alta potência e laser Er:YAG. Após a hemisecção das raízes de 31 dentes unirradiculares, foram realizadas cavidades padronizadas no terço cervical de cada secção, obtendo-se 62 amostras que foram divididas em 9 grupos: grupo1 - irradiação com laser Er:YAG (42 mJ/pulso, 10 s, 10 Hz e 38 J/cm2 ); grupo 2 - irradiação com laser de diodo de alta potência (1 W, 10 s, 796 W/cm2); grupo 3 - preenchimento da cavidade com hidróxido de cálcio e irradiação com laser Er:YAG; grupo 4 - preenchimento da cavidade com hidróxido de cálcio e irradiação com laser de diodo; grupo 5 - preenchimento da cavidade com MTA e irradiação com laser de Er:YAG; grupo 6 - preenchimento da cavidade com MTA e irradiação com laser de diodo; grupo 7 - preenchimento da cavidade com hidróxido de cálcio; grupo 8 - preenchimento da cavidade com MTA e grupo 9 (controle) - nenhum tratamento. Após a esterilização dos espécimes foi realizado o subcultivo celular com fibroblastos gengivais da linhagem FMM1, o plaqueamento dos fragmentos (5 x 104 células por fragmento) e o preparo para análise em MEV. A contagem das células aderidas evidenciou que a adesão celular foi em ordem decrescente: G1 (Er:YAG) > G2 (diodo) > G9 (controle) > G8 (MTA) > G5 (MTA+Er:YAG) > G6 (MTA+diodo) > G4 (CaOH2+diodo) > G3 (CaOH2+Er:YAG) > G7(CaOH2). Observou-se diferença estatisticamente significante entre a maioria dos grupos experimentais, exceto entre os grupos: G9 x G8; G8 x G5; G8 x G4; G5 x G6; G4 x G3; G3x G7. Na análise em MEV, observou-se nas amostras irradiadas com laser Er:YAG microrugosidades na superfície dentinária, ausência de smear layer e túbulos dentinários abertos. As irradiadas com laser de diodo apresentaram superfície dentinária mais lisa, maior quantidade de smear layer e os túbulos dentinários fechados. Não foram observadas zonas de carbonização nos grupos irradiados com laser. Nos grupos nos quais se associou a radiação laser com os materiais de uso endodôntico, foram observadas zonas de derretimento e fusão nas superfícies do hidróxido de cálcio e do MTA. Diante dos resultados obtidos foi possível concluir que: a irradiação com os lasers Er:YAG e de diodo, nos arâmetros utilizados neste experimento, provocaram alterações morfológicas nas superfícies dentinárias das reabsorções simuladas que favoreceram a adesão celular; o uso do MTA nas reabsorções radiculares simuladas permitiu a adesão celular, enquanto que o hidróxido de cálcio a inibiu e a associação dos materiais de uso endodôntico com os lasers Er:YAG e de diodo resultou em alterações morfológicas na superfície do MTA, assim como, na do hidróxido de cálcio, que interferiram, de forma discreta, na adesão celular. / The present study, utilizing cell culture and SEM, evaluated the adhesion of fibroblasts, and the structural changes on the dentinal surface of simulated external root resorptions, after treatment with calcium hydroxide, MTA and/or high power diode laser radiation and Er:YAG laser radiation. After splitting the roots of 31 single rooted teeth, standardized cavities were done on the coronal third of each section, resulting in 62 samples which were divided into 9 experimental groups: group 1 ? Er:YAG laser irradiation (42 mJ/pulse, 10 Hz, 10 s, 38 J/cm2); group 2 ? high power diode laser irradiation (1 W, 10 s, 796 W/cm2); group 3 ? cavity filling with calcium hydroxide and Er:YAG laser irradiation; group 4 ? cavity filling with calcium hydroxide and irradiation with diode laser; group 5 ? cavity filling with MTA and Er:YAG laser irradiation; group 6 - cavity filling with MTA and irradiation with diode laser; group 7 - cavity filling with calcium hydroxide; group 8 - cavity filling with MTA and group 9 (control) ? not treated. After the specimens were sterilized, a subculture was done with gingival fibroblasts from cell line FMM1. The fragments were plated (5 x 104 per fragment) and then prepared for SEM analyzis. The counting of adhered cells showed that the cells? adhesion was in decreasing order: G1 (Er:YAG) > G2 (diode) > G9 (control) > G8 (MTA) > G5 (MTA+Er:YAG) > G6 (MTA+diode) > G4 (CaOH2+diode) > G3 (CaOH2+Er:YAG) > G7(CaOH2). Significant statistical differences were observed among most of the experimental groups, except among the following groups: G9 x G8; G8 x G5; G8 x G4; G5 x G6; G4 x G3; G3 x G7. At the SEM analyzis of the samples irradiated with Er:YAG laser, roughness on the dentinal surface, no smear layer and open dentinal tubules were observed. The samples irradiated with diode laser exhibited a smooth surface, more smear layer and closed dentinal tubules. No carbonization zones were observed at the groups irradiated with both lasers. In the groups where laser irradiation was associated with endodontic materials, melting zones and fusion on the calcium hydroxide and MTA surfaces were observed. Based on the results it may be concluded that: irradiation with Er:YAG and diode lasers, in the parameters utilized in this experiment, caused morphologic changes on the dentinal surfaces of the simulated resorptions that favored cell adhesion; the MTA used on the simulated root resorptions allowed cell adhesion while calcium hydroxide inhibited it; and, the association of the endodontic materials to Er:YAG and diode lasers resulted in morphologic changes on the MTA and on the calcium hydroxide surface, which interfered subtly with the cell adhesion.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Background and Objectives: The proven efficacy of bisphosphonates to inhibit the osteoclastic bone resorption has led to their use in the management of periodontal diseases. This dissertation, comprised by 2 manuscripts, aimed: (1) to histologically analyze the effects of systemic administration of Tiludronate (TIL) on ligature-induced periodontitis in rats; (2) to histologically analyze the effects of systemic administration of TIL as an adjunctive therapy to mechanical periodontal treatment on ligature-induced periodontitis in rats. Methods: In study 1, 32 adult male rats were divided into four groups (n=8): C, PD, PD-TIL5, PD-TIL15 (CâControl group, PDâPeriodontitis groups). On PD groups, a ligature was placed in the cervical area of the right mandibular 1st molar of each rat. After 15 days, TIL solutions (TildrenÂ, Ceva SaÃde Animal Ltda., PaulÃnia, SP, Brazil) at dosages of 5 mg/kg body weight (group PD-TIL5) or 15 mg/kg body weight (group PD-TIL15) were subcutaneously administered 5 times a week for 3 weeks. In study 2, 40 adult male rats were divided into five groups (n=8): C, PD, PDT, PDT-TIL 5, PDT-TIL 15. On PD groups, ligatures were placed as described. After 15 days, ligatures of the rats from groups PDT, PDT-TIL5 and PDT-TIL15 were removed and scaling and root planing were performed. TIL solutions at dosages of 5 mg/kg body weight (group PDT-TIL5) or 15 mg/kg body weight (group PDT-TIL15) were subcutaneously administered 5 times a week for 3 weeks. All animals were euthanized at the 36th day. Histometric and histologic analyses were performed. Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p<0.05). Results: In study 1, alveolar bone loss was significantly reduced in group PD-TIL5 (1.12 mmÂ0.24), when compared with groups PD (1.70 mmÂ0.32) and PD-TIL15 (1.47 mmÂ0.21). The animals from all PD groups presented more periodontal attachment loss than the ones from group C (0.12 mmÂ0.09). There were no differences in periodontal attachment loss among PD groups (PD: 0.53 mmÂ0.19; PD-TIL5: 0.37 mmÂ0.09; PD-TIL15: 0.52 mmÂ0.13). In study 2, there were no differences in alveolar bone losses among groups PDT (1.27 mmÂ0.15), PDT-TIL 5 (1.18 mmÂ0.10) and PDT-TIL 15 (1.26 mmÂ0.40). The alveolar bone losses found in these groups were slighter than the alveolar bone loss observed in group PD and did not statistically differ from the alveolar bone loss found in group C. Animals from all groups with periodontitis induction (group PD: 0.59 mmÂ0.16; group PDT: 0.39 mmÂ0.07; group PDT-TIL 5: 0.42 mmÂ0.05; group PDT-TIL 15: 0.48 mm  0.09) presented periodontal attachment losses statistically greater than the animals from group C (0.12 mmÂ0.09). Groups PDT and PDT-TIL 5 presented less periodontal attachment loss than group PD. Conclusions: Within the limits of this study, it can be concluded that (i) systemically-administered TIL solution reduced alveolar bone loss in established periodontitis in rats, (ii) dosage of TIL may influence its anti-inflammatory and anti-resorptive properties and (iii) systemically-administered TIL did not result in additional benefits to periodontal mechanical therapy in rats with experimental periodontitis. / IntroduÃÃo e Objetivos: A eficÃcia comprovada dos bisfosfonatos em inibir a reabsorÃÃo Ãssea osteoclÃstica levou à utilizaÃÃo dos mesmos no tratamento da periodontite. Esta dissertaÃÃo, composta por 2 artigos, teve como objetivos: (1) avaliar, histologicamente, os efeitos da administraÃÃo sistÃmica do bisfosfonato Tiludronato (TIL) na periodontite induzida por ligadura em ratos; (2) avaliar, histologicamente, os efeitos da administraÃÃo sistÃmica do TIL como terapia adjuvante ao tratamento periodontal mecÃnico na periodontite induzida por ligadura em ratos. MÃtodos: No estudo 1, 32 ratos adultos machos foram divididos em 4 grupos (n=8): C, DP, DP-TIL5 e DP-TIL15 (C-grupo Controle, DP-grupos Periodontite). Nos grupos DP, ligaduras foram colocadas na Ãrea cervical dos 1os molares inferiores direitos de cada um dos ratos no 1 dia. ApÃs 15 dias, soluÃÃes de TIL (TildrenÂ, Ceva SaÃde Animal Ltda., PaulÃnia/SP, Brasil) nas dosagens de 5 mg/kg de peso corporal (grupo DP-TIL5) e 15 mg/kg de peso corporal (grupo DP-TIL15) foram administradas, 5 vezes por semana, durante 3 semanas. No estudo 2, 40 ratos adultos machos foram divididos em 5 grupos (n=8): C, DP, DPT, DPT-TIL5 e DPT-TIL15. Nos grupos DP, foram colocadas ligaduras, conforme descriÃÃo anterior. ApÃs 15 dias, as ligaduras dos ratos dos grupos DPT, DPT-TIL5 e DPT-TIL15 foram removidas, e foram realizados raspagem e alisamento radicular. SoluÃÃes de TIL nas dosagens de 5 mg/kg de peso corporal (DPT-TIL5) e 15 mg/kg de peso corporal (DPT-TIL15) foram administradas, 5 vezes por semana, durante 3 semanas. Os animais foram submetidos à eutanÃsia no 36 dia. Foram realizadas anÃlises histolÃgica qualitativa e histomÃtrica. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente (ANOVA, Tukey, p< 0,05). Resultados: No estudo 1, a perda Ãssea alveolar foi significativamente reduzida no grupo DP-TIL5 (1,12 mmÂ0,24), quando comparada à dos grupos DP (1,70 mmÂ0,32) e DP-TIL15 (1,47 mmÂ0,21). Os animais dos grupos DP apresentaram maior perda de inserÃÃo quando comparados aos do grupo C (0,12 mmÂ0,09). NÃo houve diferenÃas na perda de inserÃÃo entre os grupos DP (DP: 0,53 mmÂ0,19; DP-TIL5: 0,37 mmÂ0,09; DP-TIL15: 0,52 mmÂ0,13). No estudo 2, nÃo houve diferenÃas na perda Ãssea alveolar entre os grupos DPT (1,27 mmÂ0,15), DPT-TIL 5 (1,18 mmÂ0,10) e DPT-TIL 15 (1,26 mmÂ0,40). A perda Ãssea alveolar observada nesses grupos foi menor que a do grupo DP e nÃo diferiu estatisticamente da perda Ãssea alveolar encontrada no grupo C. Todos os animais dos grupos com ligadura (grupo DP: 0,59 mmÂ0,16; grupo DPT: 0,39 mmÂ0,07; grupo DPT-TIL 5: 0,42 mmÂ0,05; grupo DPT-TIL 15: 0,48 mm  0,09) apresentaram perdas de inserÃÃo estatisticamente maiores que os animais do grupo C (0,12 mmÂ0,09). Os grupos DPT e DPT-TIL 5 apresentaram menor perda de inserÃÃo que o grupo DP. ConclusÃes: Dentro dos limites deste estudo, pode ser concluÃdo que (i) a administraÃÃo sistÃmica de TIL reduziu a perda Ãssea alveolar na periodontite estabelecida em ratos; (ii) a dosagem do TIL pode influenciar suas propriedades antirreabsortivas e anti-inflamatÃrias; (iii) a administraÃÃo sistÃmica de TIL nÃo proporcionou benefÃcios adicionais à terapia periodontal mecÃnica em ratos com periodontite experimental.

O tecido ósseo possui alto grau de rigidez e resistência à pressão, característica relacionada às suas funções de proteção, sustentação e locomoção. Patologias como periodontite, artrite reumatóide e osteoporose decorrem do desequilíbrio da dinâmica óssea, que ocorre quando os osteoclastos estão em maior atividade em relação aos osteoblastos. O fluoreto (F-) é incorporado nos tecidos mineralizados após ingestão e a sua administração aumenta a formação óssea in vivo, de maneira dependente da dose e da linhagem dos animais. As linhagens A/J e 129P3/J possibilitam a análise dos fenômenos moleculares envolvidos na suscetibilidade e resistência de células ósseas aos efeitos do F- no osso. Neste estudo, avaliou-se a administração in vivo de F- na osteoclastogênese, através da análise da atividade da enzima fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP), contagem de células TRAP- positivas e quantificação da atividade das metaloproteinases MMP-2 e -9. Para tal, células hematopoiéticas provenientes da medula óssea de camundongos das linhagens 129P3/J e A/J foram cultivadas com M-CSF e RANKL em associação ou não com F-, nas concentrações de 10- 9, 10-7, 10-5, 5x10-5, 5x10-5, 10-4 e 10-3 M. Os dados mostraram que a atividade da TRAP foi semelhante entre as células das duas linhagens de animais, independente do F-. Concomitante à diferenciação osteoclástica, o tratamento das células com F-, independente da concentração, aumentou significativamente a atividade da TRAP em células da linhagem A/J. O aumento da atividade de TRAP foi associada com o aumento do número de osteoclastos formados, na concentração de 10-3 M F-. Já em células dos animais 129P3/J, o F- não alterou a atividade da TRAP bem como a osteoclastogênese. A atividade de MMP-9 foi aumentada em relação à da MMP-2, porém ambas não foram moduladas pelo F-, independente da linhagem. Assim, concluiu-se que as células de ambas as linhagens não diferem com relação à diferenciação de osteoclastos, mas respondem diferentemente ao F-, sendo as células dos animais A/J e 129P3/J sensíveis e resistentes à osteoclastogênese induzida pelo F-, respectivamente. / The bone tissue has a high degree of rigidity and pressure resistance, characteristic related to its protection, support and locomotion functions. Diseases such as periodontitis, osteoporosis and rheumatoid arthritis arise from dynamic bone imbalance that occurs when osteoclasts present increased activity compared to osteoblasts. Fluoride (F-) is incorporated in mineralized tissues after ingestion and its administration increases in vivo bone formation in dose and strain-dependent manner. The strains A/J and 129P3/J make possible the analysis of molecular phenomena involved in susceptibility and resistance of bone cells to the effect of F- in bone. In this study, we evaluated the effect of F- on the in vitro osteoclastogenesis, by analyzing the fosfatase tartrate-resistant acid (TRAP) activity, TRAP positive cell counts and the activity of MMP-2 and -9 measurements in A/J and 129P3/J differentiated hematopoietic stem cells. Hematopoietic cells were differentiated with M-CSF and RANKL and treated or not with F- in the concentrations of 10-9, 10-7, 10-5, 5x10-5, 5x10-5, 10-4 and 10-3 M.The data show that TRAP activity, an osteoclast marker, was similar between cells from both strains of mice, regardless of F-. In addition, the treatment of A/J cells with F- significantly increased TRAP activity, in a dose-independent manner. This was accompained by the increased TRAP+-osteoclast counts, at 10-3 M F- dose. However, while the MMP-9 activity was aumented when compared to MMP-2, it was not altered by F-, regardless of the strain. Thus, we concluded that cells from both strains do not differ regarding the osteoclast differentiation potential, but they respond differently to F-, whereas A/J and 129P3/J cells are sensitive and resistant to F--induced osteoclastogenesis, respectively.

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Francisco Carlos Groppo, Toshihisa Kawai / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_GilsonCesarNobre_D.pdf: 2005090 bytes, checksum: e5ea5ec57b82c8e2fa17e200ad139928 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Doxiciclina (Dox) é um antimicrobiano pertencente à família das tetraciclinas com um amplo espectro de ação contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Além de suas propriedades antimicrobianas, Dox é atualmente empregada na periodontia como um modulador da resposta do hospedeiro (MRH), ao inibir a atividade da enzima metaloproteinase de matriz (MMP), a qual está relacionada ao processo de destruição tecidual. Neste contexto, este trabalho teve os seguintes objetivos: 1-determinar os parâmetros farmacocinéticos e integrar os índices PK/PD da Dox para o plasma, fluido gengival (FG) e saliva; 2-analisar os efeitos in vitro e in vivo da Dox sobre a osteoclastogênese com a finalidade de elucidar possíveis propriedades biológicas adicionais deste fármaco como MRH. Para a análise farmacocinética, 12 voluntários receberam dose oral única de 100 mg de Dox. Sangue, FG e saliva foram coletados em tempos pré-determinados e a concentração da Dox nestes fluidos foi determinada por bioensaio. A análise dos principais índices PK/PD da Dox foi realizada considerando o CIM para P. gingivalis. Para o segundo objetivo, o efeito da Dox sobre os processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi verificado, respectivamente, pela contagem de células TRAP+ multinucleadas geradas a partir de células precursoras estimuladas com sRANKL na presença ou ausência de Dox e pela análise das lacunas de reabsorção formadas por estas células, quando cultivadas sobre discos de dentina. In vivo, o efeito da Dox sobre a osteoclastogênese foi determinado através da indução deste processo em calvária de camundongo. Solução de sRANKL/LPS foi injetada na região da calvária e os animais receberam, por gavagem, Dox ou placebo diariamente. Após 10 dias, a calvária foi removida para análise histoquímica. Em acréscimo, a atividade da Dox sobre a expressão de genes responsáveis pelos processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi analisada por RT-PCR. Durante os experimentos in vitro e in vivo, a produção e atividade da MMP foram verificadas através de Western-blot e Zimograma respectivamente. Os resultados demonstraram que as maiores concentrações de Dox foram observadas no plasma, seguido pelo FG e saliva. A análise dos índices PK/PD da Dox indicou que a dose de 100 mg foi insuficiente para se obter os valores ideais antimicrobianos preconizados na /CIM. Os experimentos in vitro e in vivo sobre o efeito da Dox como MRH demonstraram que este fármaco inibiu os processos de diferenciação e ativação dos osteoclastos. Dox também modulou a expressão de proteínas diretamente relacionadas a osteoclastogênese, incluindo TRAP, Catepsina K e c-Myc. Finalmente, embora a síntese da MMP não tenha sido afetada, a atividade da MMP foi reduzida na presença de Dox. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que uma dose inicial maior do que 100 mg é necessária para alcançar o valor preconizado para ASC/CIM e Cmax/CIM, com a finalidade de se obter os melhores resultados clínicos antimicrobianos. A análise da Dox como MRH indicou que este fármaco pode atuar neste processo não somente pela sua capacidade de inativar a MMP, e sim, por apresentar a propriedade de inibir a diferenciação e ativação osteoclástica, incluindo a modulação de sua expressão gênica. literatura para os parâmetros ASC/CIM e Cmax / Abstract: Doxycycline (Dox), a member of the tetracycline family, is an antimicrobial agent with a broad-spectrum of activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. In addition to its antimicrobial properties, Dox is used in the treatment of periodontal diseases as a host response modulator by inhibiting the activity of an important enzyme, matrix metalloproteinase (MMP), which is related to the process of tissue destruction. In this context, this study had the following aims: 1-to determine the pharmacokinetic parameters of Dox and to integrate the PK/PD indices for plasma, gingival crevicular fluid (GCF) and saliva; 2-to analyze the effects in vitro and in vivo of Dox on the osteoclastogenesis and on the osteoclast activation in order to elucidate additional biological properties of Dox on the host response modulation (HRM). Twelve volunteers received single oral administration of Dox (100 mg). Blood, GCF and saliva were collected and the concentrations were measured by bioassay technique. The PK/PD analyses were carried out using the MIC for P. gingivalis. For the second objective, the effect of Dox on the osteoclast differentiation and activation processes was determined, respectively, by the counting of TRAP+ multinuclear cells derived from osteoclast precursory cells sRANKL-stimulated in the presence or absence of Dox and by the analysis of the resorption areas formed by these cells when cultured on dentin discs. In vivo, Dox¿s effect on the osteoclastogenesis was verified using the model of osteoclastogenesis induction in mouse calvaria. sRANKL/LPS was injected in the supra-calvaria area and the animals received Dox or placebo daily by gavage. After the experimental period of 10 days, the calvariae were removed for histochemistry analyses. In addition, the effect of Dox on the expression of genes related to the osteoclast differentiation and activation processes was carried out using RT-PCR technique. MMP production and activity were ensured during in vitro and in vivo experiments by Western-blot and Zymography, respectively. The results demonstrated that Dox achieved the highest concentration in the plasma, following by GCF and saliva. PK/PD analyses showed that the dose of 100 mg was insufficient to get the antimicrobial levels indicated in the literature for AUC/MIC and Cmax/MIC indices. In vitro and in vivo studies of Dox¿s effects on the HRM demonstrated that this drug could inhibit the osteoclast differentiation and activation process. Dox also showed an important property of down-regulation in the expression of proteins directly related to osteoclastogenesis, including TRAP, Cathepsin K and c-Myc. Finally, although Dox did not affect the expression of MMP protein, MMP activity was remarkably decreased by Dox. Therefore, the present study suggests that higher doses than 100 mg would be necessary to obtain effective antimicrobial levels and the effect of DOX on the HRM can be due to not only by MMP inhibition but also by the direct effect on RANKL-mediated osteoclast differentiation and activation, including its gene regulation / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Antonio Wilson Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T09:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_BeatrizdeBrito_M.pdf: 4030297 bytes, checksum: ff82a7914f5c90084725c76037c4f132 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar histometricamente a influência de uma dieta hiperlipídica sobre a evolução da doença periodontal experimental em ratos. Trinta e dois ratos machos adultos, da linhagem Wistar, fizeram parte do estudo e os mesmos foram aleatoriamente divididos em dois grupos: C (ração para animais de laboratório) e H (ração hiperlipídica). Uma ligadura de fio de algodão foi colocada ao redor do primeiro molar inferior esquerdo e o dente contra-lateral serviu como controle. Os animais foram sacrificados nos intervalos de 7, 14, 21 e 28 dias após a colocação da ligadura com o objetivo de avaliarmos a progressão da doença periodontal. As mandíbulas foram removidas para obtenção dos cortes histológicos dos primeiros molares. Análise histométrica foi realizada, com o auxílio do programa de avaliação de imagens ImagePro®, para quantificar a perda óssea na região da bifurcação através da contagem de pontos. No momento do sacrifício observamos um maior acúmulo de restos alimentares nos dentes com ligadura, independente da dieta, e também um maior acúmulo de tecido adiposo na região abdominal dos animais do grupo H, devido ao tipo de dieta ingerida por estes animais, que continha maior concentração de lipídeos. Os dados foram analisados com os testes ANOVA e de Tukey ao nível de significância de 5%. A análise intergrupos não revelou diferença estatisticamente significante na quantidade de perda óssea entre os diferentes intervalos de tempo (p>0,05) tanto nos dentes com ligadura quanto nos sem ligadura. A análise intragrupo, no entanto, mostrou maior perda óssea nos dentes que receberam a ligadura, comparados aos dentes sem ligadura (p<0,0001). Desta maneira podemos concluir que o consumo de uma dieta hiperlipídica não tem influência sobre a perda óssea resultante da periodontite induzida em ratos / Abstract: The aim of this study was to evaluate, histometrically, the influence of a hyperlipidic diet on the evolution of experimental periodontal disease. Thirty-two male Wistar rats were randomly assigned to two groups: C (commercial chow diet) and H (hyperlipidic diet). Cotton ligatures were placed around the left first mandibular molar and the contralateral tooth was used as a control. The animals were sacrificed on days 7, 14, 21 and 28 days after ligature placement for evaluation of periodontal disease progression. The specimens were routinely processed for serial decalcified sections and histometric analysis was performed to evaluate bone loss in the furcation area with the help of an image analysis software, ImagePro®. In the moment of the sacrifice it was noticed a greater accumulation food debris on the teeth with ligature of both groups, it was also noticed a greater accumulation of adipose tissue in group H, due to the kind of diet that the animals were fed, which has an elevated concentration of lipids. The data was analyzed using the ANOVA and Tukey¿s test at a significance level of 5%. Intergroup analysis did not show significant differences in relation to loss of bone volume for both the ligated and unligated teeth between time intervals (p>0.05). Intragroup analysis, however, showed a greater amount of bone volume loss in the ligated teeth than in the unligated ones (p<0.0001). I could be concluded that the consumption of a hyperlipidic diet does not influence bone loss in ligature-induced periodontal disease in rats / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A Periodontite à uma doenÃa que envolve a presenÃa de bactÃrias e se caracteriza principalmente por eventos inflamatÃrios que levam à perda dos tecidos periodontais como cemento radicular ligamento periodontal e osso alveolar O Ranelato de estrÃncio (RS) à um fÃrmaco recÃm desenvolvido para tratamento da osteoporose que diferente de outros agentes anti-osteoporÃticos possui duplo efeito no metabolismo Ãsseo: diminui a reabsorÃÃo e estimula a formaÃÃo Ãssea O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito antirreabsortivo do RS na periodontite experimental considerando aspectos locais e sistÃmicos e a resposta inflamatÃria atravÃs de modelos experimentais clÃssicos de inflamaÃÃo em animais A periodontite foi induzida pela colocaÃÃo de um fio de sutura (nÃilon 3) ao redor dos 2o molares superiores esquerdos de ratos (Â200 g) utilizando a prÃpria hemiarcada contralateral para controle Os animais foram divididos em 4 grupos (n=6/cada) que receberam por via oral RS (70, 210 e 630 mg/kg) ou soluÃÃo Salina (SAL) durante 11 dias Foram acrescidos 2 grupos (RS e SAL) para anÃlise histolÃgica A perda Ãssea alveolar (POA) foi avaliada atravÃs de anÃlises macroscÃpica (mm2) histolÃgica e imunohistoquÃmica e por dosagens sÃricas de Fosfatase Alcalina Ãssea (FAO) Para verificar possÃveis repercussÃes sistÃmicas avaliou-se Leucograma, VariaÃÃo de massa corpÃrea (g) e os nÃveis sÃricos de Transaminases (AST e ALT) UrÃia e Creatinina Para investigaÃÃo da resposta inflamatÃria utilizaram-se os modelos de peritonite e de edema de pata ambos induzidos por Carragenina (Cg 700 Âg) por via intraperitoneal e intraplantar, respectivamente. Os animais foram divididos em grupos (Â200 g; n=6/cada) que receberam, previamente à injeÃÃo de Cg, RS 630 mg/kg-vo, Dexametasona 1 mg/kg-sc (DEX) e soluÃÃo Salina-vo (SAL) No modelo de peritonite 1 grupo de animais nÃo manipulados (Normal) foi acrescido ApÃs a 4 h da peritonite os ratos foram sacrificados para coleta do lÃquido peritoneal e avaliaÃÃo da migraÃÃo neutrofÃlica No modelo de edema de pata o volume de lÃquido deslocado pelas patas dos ratos, considerado o edema foi mensurado por hidropletismÃmetro antes e 1, 2, 3 e 4 h apÃs injeÃÃo de Cg Observou-se que o RS (70, 210 e 630 mg/kg) reduziu (p<0,05) a POA em 16,9%, 39,4% e 37,5% respectivamente à anÃlise imunohistoquÃmica e histolÃgica, RS diminuiu a expressÃo de TNF-a porÃm nÃo reduziu expressÃo de IL-1b e promoveu importante (p<0,05) reduÃÃo do infiltrado leucocitÃrio e osteoclastos, assim como preservaÃÃo do osso alveolar, ligamento periodontal e cemento [RS630= 1,5 (1-3); SAL= 2,5 (2-3)] Tais anÃlises foram corroboradas pelo aumento (p<0,05) dos nÃveis sÃricos de FAO (RS70= 94Â4,6; RS210= 90,9Â6; RS630= 107,5Â14,2; SAL= 57,9Â6,9 U/l) Inicialmente os animais apresentaram perda de peso, seguido de tendÃncia a normalidade mas tal como no leucograma ou nas demais dosagens sÃricas bioquÃmicas nÃo foram observadas alteraÃÃes significante (p>0,05) entre os grupos Quanto a resposta inflamatÃria RS 630 mg/kg foi capaz de reduzir a migraÃÃo neutrofÃlica induzida por Cg [RS=5,7Â0,6; Sal=8,3Â0,6 (x103/mm3); p<0,05] alÃm de reduzir edema de pata na 3 e 4 h apÃs administraÃÃo da Cg Em conclusÃo, o RS foi capaz de reduzir a POA confirmando seu potencial antirreabsortivo alÃm de exibir atividade anti-inflamatÃria podendo portanto vir a ser uma ferramenta importante no tratamento adjuvante da periodontite / Periodontitis is a disease which involves the presence of bacteria and it is characterized by inflammatory events that lead to loss of periodontal tissues such as root cementum periodontal ligament and alveolar bone Strontium Ranelate (RS) is a recent developed drug used for osteoporosis treatment that different from other anti-osteoporotic drugs it possess a dual effect on bone metabolism: it decreases bone resorption by the time it stimulates bone formation The aim of this study was to evaluate the RS anti-resorptive effect in experimental periodontitis considering local and systemic aspects and the inflammatory response through classical inflammation experimental models in animals Periodontitis was induced by placing a suture (nylon 3.0) around the left 2nd upper left molars of rats ( 200g) using their contralateral hemimaxillae for control. The animals were divided into 4 groups (n = 6/each) which received RS (70, 210 and 630 mg/kg) or saline 0.9% (SAL) orally during 11 days Two more groups were added (RS and SAL) for histological analysis Alveolar bone loss (ABL) was evaluated by macroscopic mm2) histologic and immunohistochemistry analysis and by serum bone alkaline phosphatase (BALP) levels In order to evaluate possible systemic repercussions body weight variation (g) leukocyte count and serum levels of: transaminases (AST and ALT) urea and creatinine were assessed In order to investigate inflammatory response peritonitis model and paw edema we used both of them induced by carrageenan (Cg 700 g) a potent anti-inflammatory agent by intraperitoneal and in rat hind paw, respectively Animals were divided in groups ( 200 g; n = 6/each) which received 0.9% saline-vo (SAL); Dexamethasone 1 m/kg-sc (DEX) and RS 630 mg/kg-vo before Cg injection. On peritonitis model a group of non-handled (Normal) animals was added After the 4th hour of peritonitis animals were sacrificed in order to collect peritoneal fluid and to evaluate neutrophil migration On paw edema model the dislocated liquid volume by rats paw (edema) was measured by a hydropletismometer before (0h) and 1 2 3 and 4 h after Cg injection It was observed that RS (70, 210 and 630 mg/kg) prevented ABL (p<0.05) by 16.9% 39.4% and 37.5% respectively On immunohistochemical and histologic analysis RS reduced TNF-a but not reduced IL-1b expression and additionally promoted important (p<0.05) decrease on leukocyte infiltrate and osteoclast number as well as alveolar bone periodontal ligament and root cementum preservation [RS 630 = 1.5 (1-3); SAL=2.5 (2-3)] These analyses were corroborated by the increase (p<0.05) of BALP serum levels (RS70= 94Â4.6; RS210= 90.9Â6; RS630= 107.5Â14.2; SAL= 57.9Â6.9 U/l) Initially animals presented loss of weight followed by a normal tendency but as well as in leukogram or in the other serum biochemical dosage it was not observed any significant alteration (p>0.05) between groups About inflammatory response RS 630 mg/kg was able to reduce neutrophil migration induced by Cg [RS=5.7Â0.6; Sal=8.3Â0.6 (x103/mm3); p<0.05] besides paw edema decreased on the 3rd and 4th hour after Cg administration In summary RS was able to prevent ABL confirming its anti-resorptive potential and also exhibit anti-inflammatory activity which can be an important tool as adjuvant to periodontitis treatment