Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2014-10-21T11:09:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-23T11:19:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-23T11:19:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Mestrado Final Wanessa Vieira Marques - 2014.pdf: 2424315 bytes, checksum: 43cfe85410f8246c32e9c3194794b2d6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-04-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Patients with rheumatoid arthritis (RA) present higher prevalence of comorbidities. Such comorbidities are associated with different outcomes in RA patients, such as mortality risk, increase in disability, impact on RA specific treatment and higher medical costs. The purpose of this study was to assess the influence of comorbidities on the functional capacity and mobility of the affected individuals, and to identify, among the comorbidity indicators, the most appropriate to determine association between comorbidities and physical function on these patients. In a cross-sectional study we included 60 patients with RA fulfilling the American College of Rheumatology criteria (ACR, 1987) over a period of 11 months, both male and female between 43 and 80 years old. Comorbidities were assessed by means of three indicators: (i) total number of comorbidities (NCom) reported by the patients and listed on their medical records; (ii) the Charlson comorbidity index (CCI); and (iii) the functional comorbidity index (FCI). The activity of disease was evaluated by the Disease Activity Score, based on 28 joints and erythrocyte sedimentation rate value (DAS28/ESR). The participants’ functional capacity was measured using the Health Assessment Questionnaire (HAQ), and their mobility was measured using the chairrising test (CRT) and timed get up and go (TUG) test. Statistical analysis was performed using Log-Linear Stepwise multiple regression at 5% significance level. The prevalence of comorbidities in the investigated sample of patients with RA was 90% when the total number of comorbidities (NCom) was taken into consideration. In the final multiple regression model, the independent factors that influenced functional capacity (HAQ) were activity of disease (DAS28/ESR) and comorbidities, as assessed by FCI, which explained together 32.9% of the HAQ score variability (adjusted coefficient of determination [R2] = 0.329). With respect to the participants’ mobility (CRT and TUG), in the final model, only the independent factor comorbidities (FCI) exerted a significant influence on the results. The FCI scores explained 19.1% of the CRT variability (R2= 0.191) and 19.5% of the TUG variability (R2= 0.195). Among the comorbidity indicators used, the FCI was the main responsible for explain the physical function (HAQ) and mobility (CRT and TUG) variability at the final model in our sample. Comorbidities were highly prevalent in individuals with RA and exerted a negative influence on their functional capacity and mobility. FCI proved to be appropriate to determine the association between comorbidities and physical function in individuals with RA. / Pacientes com artrite reumatoide (AR) apresentam prevalência aumentada de comorbidades. A presença de comorbidades está associada a um pior desfecho clínico nesses indivíduos, tais como risco de mortalidade, comprometimento na funcionalidade, interferência no tratamento específico da AR e aumento nos custos médicos. O objetivo deste estudo foi investigar a influência das comorbidades na capacidade funcional e na mobilidade em pacientes com AR, e identificar, dentre os indicadores de comorbidade, aquele mais apropriado para determinar a associação entre comorbidades e desfecho funcional nesses indivíduos. Trata-se de um estudo transversal com a participação de 60 pacientes classificados com AR pelos critérios da American College of Rheumatology (ACR) de 1987 em um período de 11 meses, de ambos os gêneros e faixa etária entre 43 e 80 anos. As comorbidades foram avaliadas por meio de três indicadores: (i) número total de comorbidades (NCom) relatadas pelos pacientes e anotadas em prontuário médico; (ii) escore obtido no índice de comorbidade de Charlson (ICC); e escore obtido no índice de comorbidade funcional (ICF). A atividade da doença foi mensurada pelo Índice de Atividade da Doença baseado em 28 articulações e no valor do VHS (Disease Activity Score 28 – DAS28/VHS). A capacidade funcional e a mobilidade foram avaliadas por meio do escore obtido no Questionário de Avaliação da Saúde (Health Assessment Questionnaire – HAQ), no teste senta-levanta da cadeira cinco vezes (TSL) e no teste timed get up and go (TUG). A análise estatística dos dados foi realizada através de regressão múltipla Log-Linear Stepwise com nível de significância de 5%. Observou-se que a prevalência das comorbidades, analisada pelo indicador número total de comorbidades (NCom), foi de 90% em nossa amostra. No modelo final da análise múltipla os fatores determinantes da capacidade funcional (HAQ) foram a atividade da doença (DAS28/VHS) e as comorbidades, avaliadas pelo ICF, que em conjunto explicaram 32,9% da variabilidade do escore do HAQ (coeficiente de determinação [R2] ajustado = 0,329). Com relação à mobilidade (TSL e TUG), no modelo final, apenas as comorbidades (ICF) influenciaram significativamente o seu desempenho. O escore no ICF explicou 19,1% da variabilidade do TSL (R2 = 0,191)e 19,5% da variabilidade do TUG (R2 = 0,195). Dentre os indicadores de comorbidade utilizados, o indicador ICF foi o principal responsável por explicar no modelo final a variabilidade da capacidade funcional (HAQ) e da mobilidade (TSL e TUG) em nossa amostra. Conclui-se que as comorbidades são frequentes em pacientes com AR e influenciam negativamente a capacidade funcional e a mobilidade desses indivíduos. O ICF demonstrou ser um indicador de comorbidade apropriado para determinar a associação entre comorbidades e funcionalidade em pacientes com AR.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-09T13:12:56Z No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:12:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:16:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-09T14:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Antonio Luiz Ribeiro Boechat Lopes.pdf: 13031715 bytes, checksum: d88fbd133c649844648684a05e01cc76 (MD5) Previous issue date: 2010-12-15 / Não Informada / Rheumatoid Arthritis (RA) is a autoimmune disease that affects 1% of worldwide population and promotes polyarthritis and joint destruction with work disability. About 60% of the risk factors of RA are related to genetic characteristics of individuals. The functional polymorphisms of the TNF gene -308 G/A andPTPN22 1858 C/T were associated with RA in several studies.The aim of this study was to investigate the influence of the TNF 308 G/A polymorphism in the promoter region of the tumor necrosis factor- gene and PTPN22 1858 C/T on rheumatoid arthritisand tuberculosis patients from the Brazilian Amazon. A total of 545 individuals 205 healthy controls without arthritis and 132 individuals suffering from rheumatoid arthritis and 208 tuberculosis patients  were genotyped for these polymorphisms using a methodology based on PCR-RFLP. Rheumatoid factor, age more than 60 years old and more than 10 disease years, was found to be risk factors for systemic disease (p=0,0001). The frequency of the A allele (TNF2) in rheumatoid arthritis sufferers was not found to be significantly higher than in the controls (p=0.671; OR=1.16; confidence interval=0.59 – 2.25). However, using a logistic regression model when the patients were stratified according to whether the manifestations were preponderantly articular or systemic, there was a strong association between the TNF2 allele and the systemic disease (p=0.001; OR=4.75; confidence interval=1.82 – 12.40) as well as the use of anti-TNF immunotherapy (p=0.021; OR 2.93; confidence interval=1.15 –7.46). On the other hand, PTPN22 1858T allele was not associated with systemicdisease (p=0,071; OR=3,17; confidence interval=0.83 – 11.73), but we found association between this allele and biologic anti-TNF immunotherapy (p=0,021; OR=4.39; confidence interval=1.08 – 17.86). Moreover, there was found no association between PTPN22 15858 C/T and rheumatoid arthritis nor tuberculosis. These results suggest that the TNF2 allele is associated with the more serious forms of the disease in individuals from the Brazilian Amazon but not with a risk for developing RA. / A Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune que afeta 1% da população geral, promovendo poliartrite e destruição articular com variados graus de incapacidade. Cerca de 60% dos fatores de risco da AR são relacionados a caracteres genéticos do indivíduo. Os polimorfismos funcionais dos genes TNF -308 G/A e PTPN22 1858 C/T foram associados à AR e à Tuberculose em diversos estudos. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do polimorfismo da região promotora do gene do Fator de Necrose Tumoral-α, TNF -308 G/A e do gene PTPN22 1858 C/T na Artrite Reumatoide (AR) e na Tuberculose pulmonar em indivíduos procedentes do Amazonas. Para isso, foram genotipados, pela técnica baseada em PCR-RFLP para o polimorfismo TNF 308 G/A (TNF2) e PTPN22 1858T, 545 indivíduos sendo 205 controles sem Artrite, 208 pacientes com Tuberculose e 132 portadores de AR. Não foi observado aumento da frequência dos alelosTNF2ouPTPN22 1858T em portadores de Artrite Reumatoide e Tuberculose em comparação aos controles (p=0,218; p=0,376, respectivamente). Foram identificados como fatores preditivos para manifestações sistêmicas da Artrite Reumatoide: o Fator Reumatoide positivo, a idade maior que 60 anos e o tempo de doença (p=0001).Quando os dados foram estratificados segundo as formas predominantemente articulares ou sistêmicas, o alelo TNF2 esteve fortemente associado às formas sistêmicas (p=0,001; OR=4,75; Intervalo de confiança = 1,82 – 12,40), além de estar associado ao uso de imunobiológicos Anti-TNF (p=0,021; OR=2,93; Intervalo de confiança=1,15 – 7,49). O alelo PTPN22 1858T também está associado ao uso de imunobiológicos (p=0,021; OR= 4,39; Intervalo de Confiança=1,08 – 17,86), mas não está relacionado às formas sistêmicas (p=0,071; OR = 3,17; Intervalo de Confiança = 0,83 – 11,73). Entretanto, o polimorfismo de PTPN22 1858 C/T não foi associado à Artrite Reumatoide ou à Tuberculose Pulmonar. Estes resultados sugerem que o alelo TNF2 está associado às formas mais graves da AR em indivíduos do Amazonas, mas não ao risco de desenvolver Artrite Reumatoide.

A artrite reumatoide (AR) é a artropatia inflamatória mais prevalente no mundo, de etiologia multifatorial e fenótipos heterogêneos. Busca-se, além de definir fatores etiológicos, compreender as interações entre mecanismos envolvidos na fisiopatologia da AR. Entre estes, fatores genéticos, tanto genes do antígeno leucocitário humano (HLA), especialmente a presença do epítopo compartilhado (Shared epitope - SE) do HLA-DRB1, como genes não-HLA, e fatores ambientais e epigenéticos têm sido associados à doença. Assim, a identificação de novos fatores relacionados à etiopatogenia da AR e suas possíveis associações com características clínicas motivaram esse estudo. Um estudo caso-controle foi desenhado e dividido em duas etapas. Para a primeira etapa, foi obtido plasma de 18 indivíduos de AR e 18 voluntários saudáveis de Ribeirão Preto, no qual foram identificados quinurenina (Kyn), Trp, serotonina (5-HT) e taxa Kyn/Trp (KTR) por cromatografia líquida de ultra-eficiência (CLUE) acoplada a espectrômetro de massas sequencial (CLUE-DAD-EM/EM). Na segunda etapa, de estudo genético, uma coorte formada por 328 indivíduos com AR e por 234 voluntários saudáveis de Ribeirão Preto e de Porto Alegre foi avaliada quanto ao polimorfismo do gene da enzima indoleamine 2,3-dioxigenase 1 (IDO1). Foram obtidos dados clínicos e epidemiológicos e coletadas amostras de sangue periférico para extração de DNA pelo método de salting-out. Em seguida, tipificação HLA e reação em cadeia de polimerase (RCP) das variantes da IDO1, rs7820268, rs3739319, rs61753677, rs35059413, rs35099072 e rs9298586, foram realizadas. A positividade para fator reumatoide (FR) em indivíduos com AR foi associada ao tabagismo (p= 0.0002) e ao SE (p < 0.0001), e para anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (anti-CCP), associado ao SE (p < 0.0001). Quando combinadas a presença de SE e a de tabagismo, houve associação estatisticamente significante para FR (p < 0.001) e para anti-CCP (p = 0.03). Foram observadas menores concentrações plasmáticas de 5-HT em indivíduos com AR quando comparados a voluntários saudáveis (p =0.006), mas sem diferença para níveis de Trp, Kyn e KTR. Para estes, diferenças apareceram quando avaliados subgrupos. Em indivíduos com AR sem tratamento com drogas modificadoras do curso da doença (DMCDs), os valores plasmáticos de Trp foram menores quando comparados aos em terapia (p = 0.0016), enquanto em pacientes com AR tabagistas os valores de Kyn e KTR foram menores que em pacientes não tabagistas (p = 0.039 e p = 0.032, respectivamente). Não foram identificadas associações estatisticamente significantes entre as variantes genéticas estudadas e o risco de desenvolver AR, nem entre os polimorfismos da IDO1 estudados e a concentração plasmática de Trp, Kyn e 5-HT e KTR. Este estudo não identificou relação das variantes do gene da IDO1 com suscetibilidade para AR. Assim, novos estudos são necessários para que possam ser explicadas as associações encontradas na via das Kyns e na 5-HT em etiopatogenia da AR. / Rheumatoid arthritis (RA) is the most prevalent inflammatory arthropathy in the world, with multifactorial etiology and heterogeneous phenotypes. Besides defining etiological factors, it is sought to understand the interactions between mechanisms in RA pathophysiology. About these, genetic factors, both human leucocity antigen (HLA) genes, especially the HLA-DRB1 Shared epitope (SE) presence, and not-HLA genes, and environmental and epigenetics factors have been associated with the disease. Therefore, the aim of this study was to identify new possible associations between RA clinical features and its etiopathogenesis. A case-control study was designed and it was divides in two phases. The first phase, it was obtained plasma of 18 RA patients and 18 healthy controls from Ribeirão Preto to identify the kynurenine (Kyn), Trp and serotonin (5-HT) concentrations and Kyn/Trp ratio (KTR) by ultra-high performance liquid chromatography coupled to sequential mass spectrometer. The second phase was a genetic study that evaluated a cohort of 328 RA patients and 234 healthy volunteers from Ribeirão Preto and Porto Alegre about the indoleamine 2,3-dioxygenase 1 (IDO1) gene polymorphism. Clinical and epidemiological data were obtained and peripheral blood samples were collected to DNA extraction by salting-out method. Then, HLA typification and polymerase chain reaction to identify IDO1 genetic variants rs7820268, rs3739319, rs61753677, rs35059413, rs35099072 and rs9298586 were performed. Rheumatoid factor (RF) positivity was associated to smoking (p = 0.0002) and SE (p < 0.0001), and cyclic citrullinated peptide autoantibodies (anti-CCP) positivity was associated to SE (p < 0.0001). When SE presence and smoking were combined, there was statistically significant association to RF (p < 0.001) and anti-CCP (p = 0.03). We observed lower plasma 5-HT concentrations in RA patients than in healthy volunteers (p = 0.006), but no significant difference to Trp, Kyn and KTR levels. For these, differences were observed when subgroups were evaluated. In RA patients not using disease modifying antirheumatic drugs (DMARDs) the plasma Trp levels were lower than RApatients using DMARDs, while the plasma Kyn concentrations and KTR in smokers RA patients were lower than nonsmokers RA patients (p = 0.039 and p = 0.032 respectively). We did not indetify statistically significant associations neither between studied genetic variants and risk to develop RA nor between IDO1 polymorphisms and plasma Trp, Kyn, 5HT concentrations and KTR. This study did not identify relation between IDO1 genetic variants with susceptibility to RA. Therefore, new studies are necessary to explain the searched associations between Kyns pathway and 5-HT in RA etiopathogenenesis.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Daniela Graner Schuwartz Tannus Silva.pdf: 2699876 bytes, checksum: 9f1addca3b98dc8f124ef4cc53bfe67a (MD5) Previous issue date: 2010-12-09 / The diagnosis of latent tuberculosis (TBIL) in patients with rheumatoid arthritis (RA) has got special importance with the advent of anti tumor necrosis factor (anti-TNF-&#945;) and the arise of cases of active tuberculosis in these patients. The tuberculin skin test (TST) is a test used for more than a century on the diagnosis of TBIL but has limited value in patients with RA. New tests that are based on the production and release of interferon-gamma (IFN-&#947;) have been studied but its role has not yet been well established in this group of patients. This paper shows a review about the use of anti-TNF-&#945; and its role on the development of tuberculosis, the use of the TST for the diagnosis of TBIL in patients with RA and new tests for diagnosis of TBIL. The review is illustrated with a case of a patient who developed tuberculosis after starting the use of anti-TNF-&#945;. In the sequence, a study comparing the diagnostic TBIL in a group of RA patients by cellular immune response, compared to TST, T.SPOT-TB and measurement of IFN-&#947; by flow cytometry after stimulation with Hspx and through computed tomography changes consistent with TBIL. It was observed that the response to TST was lower in RA patients (13.5%) than the expected response to the general population. We also observed that the T.SPOT-TB identified a greater number of patients with TBIL compared to PT (36.8%). The IFN-&#947; in response to Hspx was not statistically different among the groups considered TBIL (TST and / or T.SPOT-TB positives) or NO TBIL (TST and T.SPOT-TB negatives). Finally, HRCT showed changes consistent with TBIL in 52.9% of patients, including eight of the eleven patients with TST and T.SPOT TB negatives. Conclusion: The TST alone is not appropriate for the diagnosis of TBIL. The T SPOT TB showed a higher number of positives results compared to TST but was negative in a large percentage of patients with CT changes highly suggestive of TBIL. HRCT is accessible in most major centers and should be incorporated in the diagnostic strategy of TBIL in patients with RA. / O diagnóstico de tuberculose latente (TBIL) em pacientes com artrite reumatoide (AR) ganhou especial importância com o advento do uso dos agentes anti necrose tumoral (anti-TNF-&#945;) e o surgimento de casos de tuberculose ativa nesses pacientes. A prova tuberculínica (PT), teste utilizado há mais de um século no diagnóstico de TBIL, apresenta valor limitado entre os pacientes com AR. Novos exames que se baseiam na produção e liberação de interferon-gamma (IFN-&#947;) vêm sendo estudados, mas ainda não têm seu papel bem estabelecido neste grupo de pacientes. No presente trabalho é realizada uma revisão sobre o uso dos anti-NF-&#945; e seu papel no desenvolvimento da tuberculose, a utilização da PT para o diagnóstico de TBIL nos pacientes com AR e os novos testes para o diagnóstico de TBIL ilustrado com um caso de uma paciente que desenvolveu tuberculose após o início do uso do anti-TNF-&#945;. Segue-se um estudo de comparação do diagnóstico de TBIL em um grupo de pacientes com AR através da resposta imune celular, frente à prova tuberculínica, T.SPOT-TB e medida da produção de IFN-&#947; pela citometria de fluxo após estímulo com Hspx e através de alterações tomográficas compatíveis com TBIL. Observou-se que a resposta à PT foi menor nos pacientes com AR (13,5%) do que a resposta esperada para população geral. Observou-se ainda que o T.SPOT-TB identificou um maior número de pacientes com TBIL em relação à PT (36,8%). A produção de IFN-&#947; em resposta ao Hspx não foi estatisticamente diferente entre os grupos considerados como TBIL (PT e/ou T.SPOT-TB positivos) ou NÃO TBIL (PT e T.SPOT-TB negativos). E, finalmente, a tomografia computadorizada de alta resolução apresentou alterações compatíveis com TBIL em 52,9% dos pacientes estudados, inclusive entre oito dos onze pacientes com PT e T.SPOT-TB negativos. Conclusão: A PT isoladamente é insuficiente para o diagnóstico de TBIL. O T.SPOT TB apresentou maior número de resultados positivos em relação à PT mas foi negativo em grande porcentagem de pacientes com alterações tomográficas bastante sugestivas de TBIL. A TCAR é um exame acessível na maior parte dos grandes centros e deve ser incorporada na estratégia diagnóstica de TBIL em pacientes com AR.

Os neutrófilos são células fagocíticas do sistema imunológico mobilizadas principalmente no combate a infecções. Estas células são capazes de matar os micro-organismos através da desgranulação, que leva à liberação de moléculas antimicrobianas, e da produção de espécies reativas de oxigênio. Embora o recrutamento de neutrófilos seja essencial para a proteção do organismo, sua ativação excessiva resulta na intensa liberação de moléculas citotóxicas no meio extracelular, o que pode desencadear o desenvolvimento e/ou agravar o quadro clínico de doenças autoimunes e inflamatórias, como a artrite reumatoide. Uma possível abordagem terapêutica para o tratamento destas doenças é a modulação das funções efetoras dos neutrófilos. Estudos prévios mostraram que o extrato etanólico das folhas de Baccharis dracunculifolia (EEBd) possui grande potencial terapêutico, uma vez que apresenta expressiva atividade antioxidante frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos. Para dar continuidade à investigação da atividade anti-inflamatória e/ou imunomoduladora deste extrato, o presente trabalho avaliou, na primeira etapa, o seu efeito modulatório sobre importantes funções efetoras de neutrófilos que medeiam o reconhecimento a e eliminação de patógenos - fagocitose, desgranulação e atividade microbicida - e sobre a atividade de enzimas lisossomais. Verificou-se que o EEBd, dependendo da concentração, inibe o metabolismo oxidativo dos neutrófilos sem alterar a capacidade de defesa das células. Na segunda etapa, foi avaliada a atividade antioxidante de sete compostos isolados do EEBd - ácido cafeico, ácido cumárico, ácido ferúlico, ácido cinâmico, aromadendrina-4?-metil éter, isosacuranetina e hispidulina - frente ao metabolismo oxidativo dos neutrófilos, a fim de propor possíveis marcadores químicos para as atividades biológicas do extrato. Os resultados apontaram o ácido cafeico como um potencial marcador químico da atividade biológica em questão. Na terceira etapa, com o intuito de aumentar a biodisponibilidade e favorecer o uso terapêutico dos produtos naturais estudados, o EEBd e o ácido cafeico foram incorporados em lipossomas, e constatou-se que a incorporação não alterou suas atividades antioxidantes frente aos neutrófilos, quando comparado às respectivas amostras na forma livre. Por fim, foi avaliado o efeito terapêutico do EEBd e do ácido cafeico, ambos na forma livre e incorporada em lipossomas, em um modelo animal de artrite. Verificou-se que as amostras na forma livre melhoraram expressivamente os parâmetros inflamatórios nas articulações, promovendo redução do edema e da migração de células totais e de neutrófilos, e discreta diminuição da concentração das citocinas inflamatórias TNF-?, IL-6 e IL-1?. Além disso, a incorporação do EEBd e do ácido cafeico em lipossomas pode auxiliar na redução das suas concentrações necessárias para a obtenção dos efeitos terapêuticos desejados. Assim, pode-se concluir que o EEBd tem grande potencial para se tornar um agente terapêutico adjuvante no tratamento de doenças inflamatórias mediadas por neutrófilos, sendo o ácido cafeico um possível marcador químico para a atividade anti-inflamatória do extrato. / Neutrophils are phagocytic immune cells mobilized primarily to fight against infections. These cells are capable to kill microorganisms through degranulation, which leads to the release of antimicrobial molecules, and production of reactive oxygen species. Although neutrophil recruitment is essential for host protection, excessive activation of these cells culminates in intense discharge of cytotoxic molecules to the extracellular milieu, which can elicit the development of and/or aggravate the clinical condition in autoimmune and inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Modulation of the effector functions of neutrophils is a possible therapeutic approach to treat these diseases. Previous studies have shown that the ethanolic extract of Baccharis dracunculifolia leaves (EEBd) has a great therapeutic potential due to its significant antioxidant effect towards the oxidative metabolism of neutrophils. To continue investigating the anti-inflammatory and/or immunomodulatory action of such extract, the first part of the present work examined its modulator effect on three important effector functions of human neutrophils that mediate recognition and clearance of pathogens - phagocytosis, degranulation, and microbial killing - and on the activity of lysosomal enzymes. EEBd inhibited the oxidative metabolism of neutrophils without affecting their defense ability, depending on the extract concentration used. To propose possible chemical markers for the biological effects of the extract, the second part of this study evaluated the antioxidant activity of seven compounds isolated from EEBd - caffeic acid, coumaric acid, ferulic acid, cinnamic acid, aromadendrin-4\'-methyl ether, isosakuranetin, and hispidulin - towards the oxidative metabolism of neutrophils. The results pointed to caffeic acid as a potential chemical marker for this biological activity. The third part of this investigation aimed to improve the bioavailability and favor the therapeutic use of the natural products studied. EEBd and caffeic acid were incorporated into liposomal carrier systems. The incorporation of both samples into liposomes did not alter their antioxidant activity towards neutrophils, as compared with their respective free forms. Finally, this study examined the therapeutic effect of EEBd and caffeic acid, both in the free form and incorporated into liposomes, in an animal model of arthritis. The free samples markedly improved the joint inflammatory parameters: they reduced edema and migration of total cells and neutrophils, and slightly lowered the levels of the inflammatory cytokines tumor necrosis factor ? and interleukin 6 and 1? (TNF-?, IL-6, and IL-1?, respectively). In addition, incorporation of EEBd and caffeic acid into liposomes can help to reduce their concentrations required to achieve the desired therapeutic effect. Based on the set of results obtained in this study, we conclude that EEBd has a great potential to become a therapeutic adjuvant in the treatment of neutrophil-mediated inflammatory diseases, and that caffeic acid is a possible chemical marker of the anti-inflammatory activity of the extract.

A artrite reumatóide é uma doença inflamatória crônica associada a alta morbidade, perda da produtividade e redução da expectativa de vida. Os pacientes requerem uma atendimento multidisciplinar para o controle da doença, reduzindo a inflamação e prevenindo a atrofia e deformação articulares. A estimulação elétrica nervosa transcutânea (TENS) tem se demonstrado no controle da dor articular, mas ainda há controvérsias sobre sua eficácia na reabilitação funcional da mão nesses pacientes. Este é um estudo cego, placebo-controlado, cruzado para comparar parâmetros funcionas da mobilidade da mão em pacientes com artrite reumatóide antes, durante e ao final de um período de 12 semanas de aplicação de TENS-burst em pontos sensitivos do membro superior. Na aplicação terapêutica utilizou-se intensidade de corrente de 10mA para estimulação das articulações metacarpofalangeanas e 20mA para os pontos sensorias do braço. Após uma pausa de um mês no tratamento, os pacientes que inicialmente receberam a estimulação terapêutica passaram a receber a estimulação placebo e vice-versa. Os resultados mostraram que a eletroestimulação terapêutica produziu mudanças positivas graduais e lineares na reabilitação funcional da mão analisado-se parâmetros de força e precisão de preensão das mãos, levando os pacientes à uma independência na execução de atividade de vida diária. O tratamento placebo mostrou-se ineficiente para a recuperação dos parâmetros avaliados. As habilidades conquistadas pelos pacientes que receberam inicialmente a eletroestimulação terapêutica foram perdidas durante o período de repouso, sugerindo que a manutenção da função da mão depende da continuidade do tratamento ao longo do tempo / Rheumatoid arthritis is a chronic inflammatory disease associated with high morbidity, loss of productivity and reduced life expectancy. Patients require multidisciplinary treatment to control the disease by reducing inflammation and preventing atrophy and joint deformation. Transcutaneous electrical nerve stimulation (TENS-burst) has been shown to control joint pain, but there is still controversy about its efficacy in functional hand rehabilitation in these patients. This is a blind, placebo-controlled, crossover study to compare the functional parameters of the mobility of the hand in rheumatoid arthritis patients before, during and after a period of 12 weeks of application of TENS- burst in the sensory points of the arm and metacarpophalangeal joints . In therapeutic application we used a current of 10mA for stimulation of joints and 20mA for the sensory points of the arm. After a month-long pause in treatment, patients who initially received therapy stimulation began receiving the placebo stimulation and vice versa. The results showed that therapeutic electrical stimulation produced gradual and linear positive changes in functional rehabilitation of the hand, accessed by analysis of strength and accuracy parameters of prehension, leading patients to independence in performing their daily living activities. The placebo treatment was inefficient for the recovery of the parameters evaluated. Skills achieved by patients who initially received therapeutic TENS-burst were lost during the rest (washing out) period, suggesting that the maintenance of hand function in rheumatoid artherits patients depends on the continuity of TENS-burst treatment

Objetivo: este estudo teve como objetivo avaliar as infecções por papilomavírus humano (HPV) e Chlamydia trachomatis (CT) em pacientes com artrite reumatoide (AR) pré e pós-terapia anti-TNF. Método: foram avaliadas 50 pacientes do sexo feminino com AR (preenchiam os critérios do Colégio Americano de Reumatologia) que eram elegíveis para terapia anti-TNF. Cinquenta pacientes foram incluídas no estudo de forma prospectiva. Destas, 45 pacientes foram reavaliadas após 6 meses de terapia anti-TNF. Inicialmente as 50 pacientes com AR foram comparadas com 50 controles saudáveis pareadas por idade. Foram avaliados dados demográficos, avaliação ginecológica (citologia cervical e avaliações histológicas), função sexual, parâmetros de doença e tratamento atual da AR. Os testes para detecções dos DNAs do HPV e CT nas espécimes cervicais foram realizados utilizando a captura híbrida II. Resultados: na avaliação inicial, a mediana da idade das pacientes com AR e controles foi de 49 (18-74) vs. 49 (18-74) anos, p = 1,0. Observou-se uma tendência de menor frequência de infecção por HPV nas pacientes com AR pré anti-TNF em relação aos controles (14% vs. 30%, p = 0,054). Adicionalmente, realizou-se avaliação das pacientes com AR com infecção positiva e negativa por HPV antes da terapia anti-TNF que demonstrou que o primeiro grupo apresentou maior frequência de relações sexuais (100% vs. 48%, p = 0,014), maior número de parceiros sexuais [1 (1-1) vs. 0 (0-1), p = 0,032] e maior frequência de citologia cervical anormal (43% vs. 7%, p = 0,029). A idade atual, a duração da doença, os parâmetros da doença e os tratamentos foram semelhantes em ambos os grupos (p > 0,05). Após 6 meses de terapia anti-TNF, a infecção por HPV permaneceu inalterada em cinco pacientes, enquanto que dois tornaram-se negativos e uma paciente adicional tornou-se positiva (p = 1,0). A infecção por CT foi uniformemente negativa nas pacientes com AR pré e pós-TNF, assim como nas controles. Conclusões: a infecção por HPV observada nas pacientes sexualmente ativas com AR antes da terapia anti-TNF foi leve, sem evidência de infecção por CT. A terapia anti-TNF não aumentou o risco de exacerbação e/ou progressão das infecções por HPV e CT em pacientes com AR / Objective: to evaluate human papillomavirus (HPV) and Chlamydia trachomatis (CT) infections in rheumatoid arthritis (RA) patients pre- and post-TNF blocker. Methods: fifty female RA patients (American College of Rheumatology criteria), who were eligible to anti-TNF therapy, [n = 50 at baseline (BL) and n = 45 after 6 months of treatment (6M)] and 50 agematched healthy controls were prospectively enrolled. They were assessed for demographic data, gynecologic, sexual, cervical cytology and histological evaluations, disease parameters and current treatment. HPV DNA and CT DNA testing in cervical specimens were done using Hybrid Capture II assays. Results: at BL, the median current age of RA patients and controls was 49(18-74) vs. 49(18-74) years, p = 1.0. A trend of lower frequency of HPV infection was observed in AR patients pre anti-TNF compared to controls (14% vs. 30%, p = 0.054). Further evaluation of AR patients with and without HPV infection before anti-TNF therapy showed that the former group had higher frequency of sexual intercourses (100% vs. 48%, p = 0.014), higher median number of sexual partners [1(1-1) vs. 0(0-1), p=0.032] and higher frequency of abnormal cervical cytology (43% vs. 7%, p = 0.029). Current age, disease duration, disease parameters and treatments were alike in both groups (p > 0.05). At 6M after TNF blockage, HPV infection remained unchanged in five patients, whereas two became negative and one additional patient turn out to be positive (p = 1.0). CT infection was uniformly negative in RA patients pre- and post-TNF blockage and in controls. Conclusions: anti-TNF does not seem to increase short-term risk of exacerbation and/or progression of HPV and CT infections in RA patients

Le coût des biomédicaments impacte lourdement le fardeau financier déjà important imposé par la polyarthrite rhumatoïde (PR) à la société. Le but de ce travail était de rechercher les motivations de la prescription des médicaments biosimilaires en rhumatologie, tout particulièrement pour prendre en charge les patients atteints de PR. Les travaux effectués ont permis d’estimer les économies annuelles réalisables en France avec le médicament biosimilaire de l’infliximab à 13,6 millions d’EUR, pour la seule prise en charge de la PR. Par ailleurs, une enquête menée auprès des rhumatologues et pharmaciens a permis d’identifier les principaux enjeux liés à l’utilisation de ces médicaments. Enfin, le suivi de leur utilisation en région Grand Est entre 2015 et 2016 rend compte de leur utilisation encore modeste. La mise sur le marché régulière de médicaments biosimilaires, combinée à l’expérience croissante des acteurs et aux dispositifs d’incitation mis en place, devraient permettre de faire progresser la part d’utilisation de ces médicaments dans les prochaines années, et de s’assurer qu’ils tiennent bien leurs engagements sur le plan des économies réalisées. / Biological drugs are associated with high procurement costs and heavily impact the financial burden imposed by rheumatoid arthritis on society. The purpose of this work was to investigate the benefits of using biosimilar drugs in rheumatoid arthritis patients. This work showed the introduction of biosimilar infliximab could lead to substantial annual cost savings of up to €13.6 million nationally, to treat rheumatoid arthritis patients only. Moreover, a biosimilar survey involving rheumatologists and pharmacists allowed us to identify the main issues at stake. Finally, the monitoring of their use in Grand Est region between 2015 and 2016 account for their relatively low utilization rate. The regular launch of new biosimilar medicines, together with growing experience of healthcare players and incentive policies, should allow to increase biosimilar uptake in the future, and also to make sure they meet well their commitments in terms of savings generated.

The effects of parathyroid hormone (PTH), prostaglandins (PGE1, PGE2, PGF2a), cAMP, cAMP-analogues, phosphodiesterase (PDE) inhibitors and la (OH) D3 on bone resorption and associated cellular process have been studied in a bone organ culture system using half- calvaria from 6-7 day-old mice. Bone resorption was assessed by determining the release of calcium (Ca2+), inorganic phosphate (Pi) and 45Ca from the calvarial bones to the culture media. The release of lysosomal enzymes was studied by analysing the activities of β-glucuronidase, β-N-acetyl- glucosaminidase, β-galactosidase and p-nitrophenyl phosphatase in bone expiants and culture media. The release of non-lysosomal enzymes was followed by assaying the activities of lactate dehydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (ASAT) and alanine aminotransferase (ALAT) in the expiants as well as the media. In addition glucose consumption and lactate production was registered. The findings may be summarized as follows: 1. cAMP and PDE-inhibitors have the capacity to inhibit the initial stages of spontaneous as well as PTH- PGE1- and PGE2-stimulated bone resorption. 2. cAMP and PDE-inhibitors produce after a lag period, or a period of reduced bone resorption, a stimulatory effect on bone resorption. 3. There is a significant correlation between bone resorption and lysosomal enzyme release both as regards the inhibitory and stimulatory effect of cAMP. 4. PGE2 and la (OH) D3 increase the release of lysosomal enzymes in parallel with bone resorption. 5. Bone resorption stimulated by cAMP and PGE2 is associated with increased glucose consumption and lactate production, while la (OH) D3 promotes bone resorption without any change with regard to these parameters of glucose metabolism. It is concluded that the initial stages of bone resorption stimulated by PTH, PGE1 and PGE2 is medited by cAMP-independent mechanisms, but that this nucleotide may be an intracellular mediator of these hormones of later stages of bone resorption. It is suggested that the role played by cAMP may be related to the capacity of PTH and PGE2 to develop new osteoclasts. The observations further support the concept that lysosomal enzyme release is intimately associated with bone resorption. Finally it is concluded that increased lactate production seems to be related to bone resorption stimulated by agents which increase the level of cAMP (PTH, PGE2, dbcAMP), but that it is not an indispensible part of the mechanism by which the osteoclasts solubilize bone mineral. / digitalisering@umu.se

La polyarthrite rhumatoïde (PR) représente le plus fréquent des rhumatismes inflammatoires chroniques. En plus d’une atteinte ostéo-articulaire responsable de l’invalidité fonctionnelle, la PR est associée à une surmortalité d’origine cardiovasculaire (CV). Les données récentes de la littérature identifient la dysfonction endothéliale (DE) comme la pierre angulaire du processus athéromateux et des complications CV au cours de la PR. Cependant, la physiopathologie et les possibilités thérapeutiques de cette DE sont mal connues. L’objectif de mon travail a été d’étudier la cinétique de la DE au cours de la PR, la différence de sa survenue entre les lits macrovasculaire et microvasculaire, le lien entre la DE et des marqueurs circulants d’inflammation ou d’activation endothéliale, et l’impact de l’Etanercept, un anti-TNFα utilisé comme traitement de fond de la PR, sur la DE. Les expériences ont été réalisées sur le modèle d’Arthrite Induite à l’Adjuvant (AIA) chez le rat Lewis, la fonction endothéliale étant étudiée sur des anneaux aortiques isolés (macrocirculation) ou des artères mésentériques isolées (microcirculation).Dans la première étude, nous avons montré que la DE microvasculaire est d’apparition plus précoce que la DE macrovasculaire (premiers symptômes d’arthrite versus inflammation maximale), et plus durable. Les taux circulants de CRP, ICAM-1 et VCAM-1 ne peuvent pas être utilisés comme marqueurs de DE dans l’arthrite.Dans la deuxième étude, nos résultats ont montré que, malgré l’absence de DE aortique au stade précoce de l’arthrite (premiers symptômes d’arthrite), les anomalies endothéliales sont déjà présentes mais initialement compensées par une augmentation de l’activité de la NOS. Nous avons identifié l’IL-1β, le TNF-α et le MIP-1α plasmatiques comme des marqueurs circulants potentiels de la DE macrovasculaire dans la PR.Notre troisième étude a démontré la capacité d’un traitement curatif par Etanercept : un anti TNF-α, à améliorer la fonction endothéliale dans le modèle AIA, indépendamment de son impact sur les facteurs traditionnels de risque CV et sur la sévérité de la maladie.En conclusion, nos travaux ont permis de mieux comprendre la DE en cas d’arthrite, et ont apporté des éléments qui ouvrent des perspectives diagnostiques et thérapeutiques pour une meilleure prise en charge du risque CV du patient PR / Rheumatoid arthritis (RA) is the most common systemic autoimmune disease which is associated with excessive cardiovascular (CV) mortality and morbidity. Endothelial dysfunction (ED) has been identified as a key element in the development of atherosclerosis and CV complications in RA. However, both pathophysiology and therapeutic options of ED are still ill-defined. In this work we aimed to determine the time-course of ED in RA, the differences of ED between macro- and microvasculature, the link between ED and circulating markers of inflammation or endothelial activation, and the effect of an anti-TNFα agent, Etanercept, for reversing ED. Experiments have been conducted on the model of adjuvant-induced arthritis (AIA) in Lewis rats. Endothelial function was assessed in isolated aortic rings (macrovasculature) and in isolated mesenteric arteries (microvasculature). In a first study, we showed that ED occurred earlier in microvascular bed (first symptoms of arthritis) than in macrovascular bed (at maximal inflammation), and is more sustainable. Circulating levels of CRP, ICAM-1 and VCAM-1 cannot be used as markers of ED in arthritis.In a second study, we characterized the mechanisms involved in ED in AIA rats. Our results showed that despite the absence of aortic ED in the early stage of arthritis (first symptoms of arthritis), endothelial abnormalities are already present but initially compensated by an increase in NOS activity. We identified plasma levels of IL-1β, TNF-α and MIP-1α as potential circulating markers of macrovascular ED in RA.Our third study demonstrated the ability of a curative treatment with Etanercept, an anti-TNFα, to improve endothelial function in the AIA model, regardless its impact on traditional CV risk factors and on the severity of the diseaseIn conclusion, our results led to improve the understanding of ED in case of arthritis. They provide diagnostic and therapeutic perspectives to enhance the management of CV risk in RA patients