Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T03:43:01Z No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-01T22:10:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-01T22:10:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_KarimeBicasRochaIannini.pdf: 3591521 bytes, checksum: d0c696cfb74ae3f2e258a100c055f39e (MD5) Previous issue date: 2008-12-15 / Relatos clínicos descrevem a existência de alterações do sistema fibrinolítico em pacientes com doenças da tireóide. Apesar de alguns resultados controversos, em geral, relata-se um risco elevado de sangramento em pacientes com hipotireoidismo e de trombose no hipertireoidismo. O papel do hormônio tireoideano (T3) na capacidade fibrinolítica ainda não está completamente estabelecido. O inibidor do ativador do plasminogênio (PAI-1) – inibidor fisiológico dos ativadores de plasminogênio (tipo tecidual e uroquinase) – é um importante inibidor do sistema fibrinolítico. Consequentemente, altas concentrações plasmáticos de PAI-1 correlacionam-se com doenças trombóticas, enquanto baixas concentrações correlacionam-se com a tendência ao sangramento. Considerando que o T3, ao se ligar ao receptor do hormônio tireoideano (TR), regula a transcrição de vários genes, o objetivo desse estudo é o de analisar o efeito do T3 sobre a atividade transcricional do promotor do gene PAI-1. Foi comparada a ação dos receptores do hormônio tireoideano (TRα e TRβ) sobre a atividade transcricional do PAI-1 em células pró-monocíticas humanas (U937) e em células mesangiais humanas. Os resultados revelaram que o promotor do PAI-1 é significativamente estimulado pelo TR não-ligado e que o tratamento com T3 diminuiu a atividade do promotor de uma maneira dose-dependente. Em células U937, o tratamento com T3 (10-7 M) em células transfectadas com TRα e TRβ inibiram o promotor do PAI-1 em aproximadamente 70% e 40%, respectivamente, com um IC50 de 3,07 x 10-10 M (TRα) e 3,81 x 10-10 M (TRβ). Além disso, o T3 reverteu a ativação do promotor do PAI-1 causado pelo éster de forbol PMA (12-miristato 13-acetato forbol) por meio da repressão direta do promotor do PAI-1 pelo TR ligado. Foi demonstrado que essa regulação depende do domínio de ligação ao DNA (DBD) do TR. Foram identificados dois possíveis elementos responsivos ao TR no promotor do PAI-1 entre o nucleotídeo -422 e -389, que contém uma seqüência TTTGGG, e entre o nucleotídeo -346 e -286, que contêm uma seqüência DR-4. O TR se liga como heterodímero às seqüências de DNA citadas. Além disso, a regulação negativa exercida pelo T3 requer uma superfície intacta de ligação a co-ativadores no TR. Esse efeito parece guardar relação com as anormalidades da coagulação observadas nos pacientes com disfunções da tireóide. _____________________________________________________________________________ ABSTRACT / Various coagulation abnormalities occur in patients with thyroid hormones (TH) disorders. Patients with hypothyroidism are particularly at risk of hemorrhage. In contrast, in hyperthyroidism, there is a tendency to thrombotic complications development. However, the role of TH in the fibrinolytic capacity is not well established, and published data remain conflicting. Plasminogen activator inhibitor (PAI)-1, a physiological inhibitor of plasminogen activators (urokinase and tissue types), is an important repressor of the fibrinolytic system. Consequently, high plasma levels of PAI-1 correlate to thrombotic disease, while low levels implies a bleeding tendency. In this study, we investigated whether PAI-1 gene expression is directly controlled by TH levels and whether the gene expression control depends on recruitment of cofactors. We compared the action of thyroid hormone receptors (TRα and TRβ) in regulating the activity of human PAI-1 promoter through transfections in human mesangial cells and human leukemic monocyte lymphoma cells (U937). Our results showed that the human PAI-1 promoter is significantly stimulated by unliganded TRs and TH treatment decreased the PAI-1 promoter activity in a hormone-dependent manner. In U937 cells, the addition of T3 (10-7M) in cells co-transfected with TRα and TRβ inhibit PAI-1 promoter in almost 70% and 40%, respectively, with an IC50 of 3,07 x 10-10 M (TRα) and 3,81 x 10-10 M (TRβ). In addition, we found that T3 reverses the activation of the PAI-1 promoter caused by phorbol 12-myristate 13-acetate through the direct repression of the PAI-1 promoter by liganded TR. Our results show that this regulation requires de DNA-binding domain of the TR. We shower two possible TR inhibitory elements in the PAI-1 promoter between –346 and – 286, a DR-4 sequence, and -422 and – 389, a TTTGGG sequence. Furthermore, the negative regulation exerted by TR requires an intact co-activator-binding surface. This effect may be important to explain the coagulation abnormlities observed in patients with thyroid hormones disorders.

O microquimerismo vem sendo identificado em uma série de situações biológicas, sendo decorrentes de procedimentos clínicos ou condições fisiológicas. A transfusão sangüínea é um dos procedimentos que pode produzir a mistura de células do doador com as do receptor. Na transfusão sanguínea, o maior constituinte são as hemácias, logo a interferência microquimérica que pode ocorrer deve-se apenas aos leucócitosque são transfundidos do doador. A admistração rotineira de produtos derivados do sangue é a principal causa de doenças, aonde estes hemocomponente vindos de doadores alogênicos contém leucócitos capazes de sobreviver e se expandir. Os leucócitos presentes nas bolsas de concentrado de hemácias usados em transfusões sanguíneas podem causar a doença do enxerto versus hospedeiro, febre, transmissão viral e interferir na identificação genética do receptor. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em um primeiro momento, o limite de detecção de microquimerismo, através de microssatélites (STRs), em amostras biológicas misturadas em proporções conhecidas e, posteriormente, verificar a presença e o tempo de duração de microquimerismo em pacientes submetidos à transfusão sangüínea no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A análise foi realizada a partir de amostras biológicas de três grupos: sete misturas de DNA extraídos antes desse estudo, cinco misturas de sangue e 20 pacientes submetidos à transfusão sangüínea. Todas essas amostras foram também genotipadas individualmente. A genotipagem foi realizada através de PCR seguido por eletroforese capilar, sendo amplificadas as seguintes regiões do genoma: D3S1358, D16S539, THO1, TPOX, CSF1PO, D7S820 e Amelogenina. Os resultados obtidos no grupo de mistura de amostras de DNA foi observada a presença de microquimerismo de 1:30 (ou 3,3%). No grupo de misturas de sangue, microquimerismo foi identificado até a proporção de 1:10 (ou 10%). Entretanto, não foi identificada a presença de microquimerismo em amostras coletadas nas primeiras 24 hs de pacientes submetidos à transfusão sangüínea. Esses resultados sugerem que a metodologia utilizada é sensível para identificar microquimerismo em misturas biológicas até o limite de 3,3%. Portanto, podemos concluir que o microquimerismo em pacientes transfundidos avaliados nesse estudo não atingiu o limite mínimo de detecção da metodologia empregada nesse trabalho. / Microchimerism has been identified in a series of biologic situations, being due to clinical procedures or from physiological conditions. Blood transfusion is a procedure that can produce a mixture of donor and receptor cells. In blood transfusions, where red blood cells are the major component, microchimeric interference is due to donor leukocytes. Even blood cell components previously processed may contain a small portion of leukocytes. In some cases, the routine administration of blood-derived products may be the main cause of diseases9 because these hemocomponents from allogeneic donors contain leukocytes capable of surviving and expanding10. Leukocytes present in bags of red blood cell concentrates used in blood transfusions may cause graft-versus-host disease (GVHD), as well as fever and, viral transmission, and may interfere in the genetic identification of the recipient. This work aimed to evaluate, at first, detection limit of microchimerism, using microssatelites (short tandem repeats - STR), in mixed biological samples of controlled proportions and, later, to verify presence and duration of microchimerism in patients postblood transfusion in the Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Analysis was performed in biological samples from three groups: DNA mixtures isolated previously to this study, blood mixtures and patients submitted to blood transfusion. All these samples were also analyzed individually. Allelic patterns were performed through PCR, using fluorescent primers, followed by capillary electrophoresis, with amplification of the following genome regions: D3S1358, D16S539, THO1, TPOX, CSF1PO, D7S820 and Amelogenin. These results in the group of DNA mixtures, microchimerism was observed up to 1:30 (or 3.3%). In the group of blood mixtures, microchimerism was identified up to 1:10 (or 10%). However, presence of microchimerism was not identified in samples collected up to 24 h from patients submitted to blood transfusion. These results suggest that the applied methodology is sensitive to identify microchimerism in biological mixtures up to the limit of 3.3%. Therefore, we can conclude that microchimerism in patients submitted to blood transfusion evaluated in this study did not reach the minimal detection limit for the methodology applied in this work.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:05:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4536_1.pdf: 902070 bytes, checksum: b14d26e9cc1df2d57eb53e8c2e74b436 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ao nascer o neonato entra em contato com fungos e outros microrganismos provenientes da microbiota materna e de outras fontes. A pele é o primeiro órgão a entrar em contato com esses microrganismos atuando como uma interface entre o meio interno e o meio ambiente, oferecendo funções especiais para sobrevivência do ser humano. Uma vez integrantes da microbiota do homem, os fungos, podem passar oportunamente de sapróbios a patogênicos, provocando quadros clínicos variáveis. Com o objetivo de detectar leveduras em neonatos internos na Unidade Neonatal do Instituto Materno Infantil de Pernambuco (IMIP), foram coletadas de 93 neonatos, escamas epidérmicas através de fricção na pele com swab e 37 amostras de sangue através de punção. Todas as amostras de sangue foram provenientes do Berçário de Alto Risco. Foi realizado o exame direto das amostras de sangue e todos os espécimes foram semeados na superfície de ágar Sabouraud adicionado de cloranfenicol. Das amostras clínicas foram obtidas 131 culturas de leveduras sendo 35 (26,7%) internos no alojamento conjunto 23 (17,6%) internos no alojamento mãe-canguru e 73 (55,7%) internos no Berçário de Alto Risco. Foram identificadas 13 espécies pertencentes a três gêneros Candida, Rhodotorula e Trichosporon. No alojamento conjunto 30 (85,7%) foram de Candida spp destacando-se C. parapsilosis 15 (42,9%), 1 (2,9%) de R. mucilaginosa e 4 (11,4%) Trichosporon, sendo 2 (5,7%) T. cutaneum e 2 (5,7%) T. variabile. No alojamento mãe-canguru 20 (87%) foram de Candida spp. prevalecendo C. parapsilosis 10 (43,5%), 1 (4,3%) de R. mucilaginosa e 2 (8,7%) de T. cutaneum. No Berçário de Alto Risco 66 (90,4%) foram de Candida spp. destacando-se C. albicans 28 (38,4%), 6 (8,2%) de R. mucilaginosa e 1 (1,4%) de T. cutaneum. De 09 amostras de sangue foram isoladas leveduras prevalecendo 5 (55,5%) de C. pelliculosa

Orientador: Thales Rocha de Mattos Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-22T12:23:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_LucianeCruzLopes_D.pdf: 5490102 bytes, checksum: 5caae8500670ea147adcb8d9112d9e19 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: O efeito terapêutico dos antiinflamatórios não esteroidais (NSAIDs) vem acompanhado de efeitos indesejáveis relacionados à irritação gástrica, alterações de hemostasia, entre outros. Nimesulide (NMSL) é um NSAID que apresenta mecanismo de ação bastante peculiar. Estudos recentes mostram que o NMSL apresenta pouca atividade sobre a COX-1. O objetivo deste estudo foi verificar se o NMSL altera a função plaquetária e o tempo de sangramento (TS) o que, em odontologia, seria desvantajoso, podendo induzir um sangramento excessivo e, conseqüentemente, uma interferência negativa nos processos de reparação tecidual. Para tanto, a função plaquetária foi avaliada in vitra; ex vivo e in vivo. Amostras de sangue de voluntários sadios foram coletadas, em citrato de sódio 3.8%, para obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP). O PRP foi incubado com NMSL(0.01 µM a 1 OOOµM) ou AAS (0.1 µM a 1 OOµM) por 20 min a 37°C sobre constante agitação. A IC50 para o efeito antiagregante plaquetário do NMSL e do AAS foi determinada após a adição de ADP(1 µM), ácido araquidônico (AA 1 mM), fator ativador plaquetário (PAF 1-3µM), colágeno (COL 2.5 - 5.0 µg/ml) e adrenalina (ADR 1 O~M). A formação de TXA2 após adição dos agonistas ao PRP foi determinada por radioimunoensaio. Nos estudos ex vivo, voluntários sadios foram selecionados e divididos em 2 grupos, tratados com NMSL (cp 100mg, n=4) ou com AAS (cp 100mg, n=3). Amostras de sangue foram coletadas antes e após 2 e 4h do tratamento, seguindo os procedimentos do estudo in vitro quanto a verificação da agregação plaquetária e determinação da produção de TXA2. IN VIVO, foram utilizadas as mesmas doses das drogas, seguida da determinação do TS utilizando SIMPLATE - 11 R®, antes e após 2, 4, 8, 24h e 7 dias. Verificou-se que- o NMSL é menos potente que o AAS para inibir a agregação plaquetária in vitra, induzida por ADP, CaL, ADR e AA, exceção feita ao PAF. Seu efeito é concentração e tempo dependentes. A produção de TXA2 foi inibida pelo NMSL(>30µM) em concentrações superiores a do AAS (>3µM) nos estudos in vitro. No entanto, a inibição de mais de 80% da produção de TXA2 só foi alcançada em concentrações superiores à 1 OO~M. NMSL não interferiu com a agregação plaquetária no ensaio ex vivo, inibindo entretanto, significativamente (p<0.05) a produção de TXA2 induzida por PAF. NMSL prolongou o TS (em média 56%) nos períodos 4h e 8h em proporções menores que o AAS (em média 160%); este, por sua vez interferindo nos tempos 2h, 4h, 8h e 24h. Concluíse que NMSL é menos potente que o AAS quanto a inibição da COX-1 plaquetária. No entanto, outros mecanismos podem estar envolvidos, dada a especificidade de ação desta droga para inibir os efeitos mediados pelo PAF, como por exemplo, a interferência com a fosfodiesterase plaquetária / Abstract: The therapeutic effect of nonsteroidal anti-inflammatory (NSAIDs) come with undesired effects related with gastric irritation, homeostatic changes, among others. Nimesulide (NMSL) is a NSAID that present ample peculiar action mechanism. Early studies show that the NMSL present short activity above COX-1. The objective of this study was verify if the NMSL modifies the platelet function and the bleending time (TS) what in odontology could be disadvantageous, prejudicing the cicatrixation of de damaged area. For this, platelet function was valued in vitro; ex vivo and in vivo. Voluntaries blood samples was collected in sodium citrate 3.8%, to obtainment of platelet rich plasma (PRP). The PRP was incubated with NMSL(0.01/lM a 1000/lM) or AAS(0.1/lM a 100/lM) per 20 min in 37°C above constant agitation. The IC50 to platelet anti-aggregation of NMSL and the AAS was determinated afier the addition of ADP.(1 /lM), aracdonic acid (AA 1 mM), platelet activating factor (PAF 1-3/lM), colagen (CaL 2.5 - 5.0 /lg/ml) and adrenaline (ADR 10/lM). The formation of TXA2 afier addition of agonistics of PRP was determinated by radioimunoassay. In ex vivp studies, health voluntaries was selected and distributed in 2 groups, with NMSL treatment (cp 100mg, n=4) or AAS (cp 100mg, n=3). Blood samples was collected before and afier 2h and 4h of treatment, following de proceeds of in vitro study while the verification of platelet aggregation and determination of the production of TXA2. IN VIVO, was utilized the same drugs doses, following the TS determination using SIMPLATE - 11 R@, before and afier 2h, 4h, 8h, 24h and 7 days. Was find out that the NMSL is less potent than the AAS to inhibit the platelet aggregation in vitro, induced by ADP, CaL, ADR e AA, exception made to PAF. His effect is concentration and time dependo The TXA2 production was inhibited by NMSL (>30/lM) in concentrations higher than AAS (>3/lM) in in vitro studies. Although more than 80% inhibition of' production only was reached in higher concentrations than 100/lM. NMSL didn't' interfered with the platelet aggregation in ex vivo assays, however inhibiting significantly (p<0.05) the TXA2 production induced by PAF. NMSL prolonged the TS (mean 56%) into times 4h and 8h in smaller proportions than AAS (mean 160%), that interfered into times 2h, 4h, 8h and 24h. Has been concluded that NMSL is less potent than AAS in the COX-1 platelet inhibition. Although others mechanisms may be involved, seem this drug especifity of action to inhibit the mediated effects by PAF, like a example, the interference with the platelet phosphodisterases / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Ciências

Orientador: Ronei J. Poppi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:34:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trevisan_MarcelloGarcia_M.pdf: 3662072 bytes, checksum: eebd703fcb1c62fa02098364cf194cff (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Este trabalho trata da aplicação de métodos quimiométricos de ordem superior e fluorescência molecular no desenvolvimento de novas metodologias analíticas, sem o auxílio de métodos de separação ou pré-concentração, na análise direta de espécies moleculares em amostras biológicas. Para tanto, foram empregados a técnica de fluorimetria (EEM-MF) e os métodos quimiométricos PARAFAC e N-PLS para a determinação direta de doxorrubicina (DXR) em plasma humano e vitamina B2 em leite bovino. Para a quantificação de DXR em plasma, foram obtidas 10 amostras de sangue de indivíduos sadios, sem a presença prévia de DXR. Cada amostra gerou uma matriz de dimensões 262x56 (comprimentos de onda de emissão x excitação), na faixa de 510 a 650 nm e 390 a 500 nm, respectivamente. O PARAFAC foi empregado para a decomposição espectral das EEM-MF, referente às amostras de sangue humano. Dois fatores foram obtidos, sendo que um deles foi atribuído à presença de DXR e outro à fluorescência natural do sangue devido, principalmente, à presença de riboflavina e bilirubina. A partir dos scores obtidos pela decomposição com PARAFAC, realizou-se a quantificação, resultando em um RMSECV de 0,060 mg mL. O N-PLS também foi empregado para a quantificação, gerando um RMSECV de 0,045 mg mL. A análise de vitamina B2 em amostras de leite desnatado e integral foi realizada com a obtenção de EEM-MF na faixa espectral de emissão 470 a 670 nm e de excitação 310 a 500 nm, produzindo uma matriz de dimensões 401x20. A partir de 10 amostras, 5 de leite integral e 5 de leite desnatado, todas com concentrações desconhecidas de vitamina B2, o método PARAFAC foi empregado para as decomposições espectrais e, a partir de adição padrão, realizadas as quantificações. As mesmas amostras foram analisadas por HPLC, e os desvios entre os resultados das duas metodologias encontram-se abaixo de 5%. / Abstract: This work relates the application of N-way methods and molecular fluorescence in the development of new analytical procedures, without physical separation process or pre-concentration, in the direct determination in biological samples. For this, Excitation-Emission Matrix of Molecular Fluorescence (EEM-MF) was applied with chemometrics methods, such as PARAFAC and N-PLS, for direct determination of doxorubicin (DXR) in human plasma and B2 vitamin (riboflavin) in bovine milk. For the quantitation of DXR in human plasma, 10 samples of blood were obtained from healthy volunteers, without the previous presence of DXR. Each sample generated a matrix of dimensions 262x56 (emission wavelengths x excitation wavelengths), from 510 to 650 nm and 390 to 500 nm, respectively. PARAFAC was used for spectra deconvolution of EEM-MF and two factors were obtained, one of them was used to DXR. Other factor was related to the natural fluorescence of the plasma, due mainly to riboflavin and bilirubin. By using the scores obtained by the decomposition with PARAFAC, the quantitation was performed, resulting in a RMSECV of 0.060 mg mL. N-PLS was also used for the quantitation, generating a RMSECV of 0.045 mg mL. The B2 vitamin analysis in samples of whole and skimmed milk was accomplished based on EEM-MF in the spectral range of emission 470 to 670 nm and of excitation 310 to 500 nm, resulting in a matrix of dimensions 401x20. Ten samples, 5 of whole milk and 5 of skimmed milk, with unknown concentrations of B2 vitamin were used for to build a PARAFAC model and the concentration was estimated by standard addition method. The same samples were analyzed by HPLC and the deviations among the results of the two methodologies were below 5%. / Mestrado

Orientador: Paulo Maria Ferreira de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T15:18:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rachel_SoniaCanoMontebelo_M.pdf: 4302773 bytes, checksum: e70d73e4816a7507ec4a34413e851587 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O conhecimento sobre a tolerância à pratica de tranfusão sanguinia que antecede alguns alotranspolantes ainda é bem limitado. Utilizando-se um modelo de altransplante em camundongos, investigou-se a importância da via de administração do sangue do doador sobre a manutenção do coração transplantado, observando-se aspectos macroscópicos e histopatológicos. Camundongos machos A/J (A) de haplótipo H-'2 POT a¿, usados como receptores foram inoculados com salina ou sangue de machos de linhagem doadora C56BL/76 (B6) de haplótipo H-'2 POT b¿, pelas vias intravenosas (V.I) e oral (V.O). Após uma semana grupos de 10 animais receberam auto ou alotransplantes na orelha com tecido cardíaco de recém-nascidos (A) e (B6)e foram observados quanto ao aspecto macroscópio da inflamação e o abatimento cardíaco. Em dias determinados (5, 10, 15, 20), retirou-se as orelhas contendo o transplante para estudos histopatológicos. Dados macroscópicos permitiram distinguir algumas características inflamatórias da rejeição ou aceitação do transplante. O monitoramento do batimento cardíaco dos tecidos transplantado foi realizado como um dos indicadores da sobrevivência dos transplantes. Assim, nos alotransplantes de animais inoculados com sangue por via oral os batimentos cardíacos foram observados durante 5 dias e o tecido cardíaco permaneceu visível até o '20GRAUS¿ dia, enquanto nos alotransplantes de animais inoculados por via intravenosa os batimentos cardíacos foram observados durante 2 dias e o tecido permaneceu até o '15GRAUS¿dia...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria de Fatima Sonati / Texto em portugues e ingles / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T22:14:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wenning_MarciaReginadeSouzaCossa_M.pdf: 14873291 bytes, checksum: a0e561ff18e15096a84204c0f2c4c2a0 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Para identificar as mutações presentes nos genes da globina a da população do Sudeste Brasileiro, foram estudados 7 pacientes com Doença da Hb H e 27 indivíduos com alterações estruturais de cadeia a. A metodologia envolveu a reação em cadeia pela polimerase (PCR), a análise com enzimas de restrição e o sequenciamento direto de DNA. Os pacientes com Hb H, caucasóides. revelaram os seguintes genótipos: -(a)20.5/- a3.7 (2 casos), -- MED/-a3.7 (1 caso), -- MED/aHpha (1 caso) e a interação da deleção -a3.7 com uma forma incomum de talassemia a, não-delecional [-?3.7/(aa)T] (3 casos) Entre as alterações estruturais encontradas estão as Hbs Hasharon (a47AspaHis) (15 caucasóides), J-Rovigo (a 53AlaaAsp) (4 caucasóides), Stanleyville-II (a78AsnaLis) (3 negróides e 1 caucasóide), G-Pest (a74 AspaAsn) (lnegróide), Kurosaki (a7LisaGlu) (l caucasóide), Westmead (al22HisaGln) (1 caucasóide) e Campinas (a26AlaaVal) (1 caucasóide), uma variante não descrita previamente. As Hbs Hasharon e Stanleyville-II foram encontradas em associação com a deleção -a3.7 . Foram determinadas pela primeira vez as bases moleculares das Hbs J-Rovigo, Stanleyville-II, G-Pest e Kurosaki (GCCaGAC, AACaAAA, GACaAAC, AAGaGAG, respectivamente). Embora as hemoglobinopatias sejam freqüentes, pouco se sabe sobre as alterações dos genes a que acometem a população brasileira. As mutações aqui detectadas refletem a importante contribuição italiana e africana na população desta região do Brasil e indicam a presença de formas não-delecionais de talassemia a, bem como de variantes estruturais raras / Abstract: In order to identify the a-globin gene mutations present in the population of southeastern Brazil, 7 unrelated Hb H disease patients and 27 individuals with a-chain structural alterations were studied. Methodology involved PCR, restriction enzyme analyses and DNA direct sequencing. Among the Hb H patients, all Caucasians, 2 showed the -(a)20.5/ -a3.7 genotype, 1 the --MED/-a3.7, 1 the --MED/a Hpha, and 3 the interaction of the - a3.7 deletion with an unusual a-thalassemia, non-deletional [-a3.7/(aa)T]. The structural alterations were the Hbs Hasharon (a47AspaHis) (15 Caucasians), J-Rovigo (a53AlaaAsp) (4 Caucasians), Stanleyville-II (a78AsnaLys) (3 Blacks and 1 Caucasian), G-Pest (a74AspaAsn) (1 Black), Kurosaki (a7LysaGlu) (1 Caucasian), Westmead (al22HisaGln) (1 Caucasian) and Campinas (a26AlaaVal) (1 Caucasian), a variant not previously described. The Hbs Hasharon and Stanleyville-II were found in association with the -a 3 .7 deletion The molecular bases of Hbs J-Rovigo, Stanleyville-II, G-Pest and Kurosaki were determined (GCCaGAC, AACaAAA, GACaAAC, AAGaGAG, respectively). Although hemoglobinopathies are frequent in Brazil, very little is known about the a-globin gene alterations. The deletions and the most prevalent structural alterations found here reflect the Italian and African contribution to the population of this region of Brazil and indicate the presence of non-deletional a thalassemia, as well as rare variants / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Carmino Antonio de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Landi_EvaldoPasquini_M.pdf: 7173102 bytes, checksum: d1e09c6e1cc9c87e2ca89c418ae6b1fd (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Introdução. A criopreservação dos concentrados de plaquetas pode ser de grande importância para a manutenção dos estoques de concentrados de plaquetas. No entanto, a criopreservação exige a adição e remoção do crioprotetor, o que toma a técnica trabalhosa e de custo elevado. Os concentrados de plaquetas "secas" se caracterizam por apresentarem pequeno conteúdo plasmático. A criopreservação destes concentrados eliminaria a necessidade de centrifugação para remoção do plasma excedente antes da adição do crioprotetor. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da coleta por aférese e da criopreservação dos concentrados de plaquetas "secas" e a atividade do dimetilsulfóxido (DMSO) 5% e 2% com inibidores da segunda resposta celular (ThromboSol@)como substâncias crioprotetoras para os concentrados de plaquetas "secas". Material e Métodos. Foram coletadas 28 unidades de concentrados de plaquetas convencionais e "secas", utilizando o mesmo procedimento de aférese para cada coleta. Amostras dos respectivos concentrados foram obtidas para análise microbiológica, contagem de leucócitos, contagem plaquetária, detenninação do volume plaquetário médio, do pH e dos níveis de glicose e DHL. Para avaliar a ocorrência de ativação plaquetária, foram estudados por citometria de fluxo, o complexo GPlb (CD42b), a integrina allbf33 (CD41), a p-selectina (CD62p) e a ligação da anexina V. A avaliação funcional foi realizada por meio da agregação plaquetária com difosfato de adenosina (ADP), epinefrina, colágeno e ácido aracdônico. Após o descongelamento, foram colhidas amostras para realização dos mesmos testes acima descritos. Os concentrados de plaquetas "secas" foram comparados aos concentrados de plaquetas convencionais por aférese e aos concentrados de plaquetas "secas" criopreservados, assim como o grupo de concentrados de plaquetas "secas" criopreservado com DMSO 5% foi comparado ao grupo criopreservado com ThromboSol@. Para análise estatística foi utilizado o teste de Wilcoxon pareado na comparação de bolsas do mesmo indivíduo,e não pareado, quando se tratava de indivíduos diferentes.Os resultados foram consideradossignificativos se p< 0,05. Resultados. Os concentrados de plaquetas "secas" apresentaram menor pH (p<0,001) e conteúdo de glicose (p<0,001), maiores níveis de DHL (p<0,001), maior porcentagem de plaquetas pselectina positivas (p<0,001) e menor resposta agregatória com ADP (p<0,001) e epinefrina (p<0,001). A criopreservação ocasionou alterações morfológicas nas plaquetas e foi associada à maior ocorrência de lise, ativação e diminuição da resposta funcional. A criopreservação com ThromboSol@foi associada a maiores níveis de DHL (p<0,001) e à maior ligação da anexina V (p=0,005), além de menor porcentagem de plaquetas CD42 positivas (p=0,01) e menor resposta agregatória ao colágeno (p=0,005). Conclusão. Este estudo sugere que os concentrados de plaquetas "secas" devem ser prontamente criopreservados após a coleta para evitar a redução do pH e a ocorrência de ativação plaquetária. A utilização de DMSO 5% ofereceu um efeito crioprotetor melhor ao do ThromboSol@ / Abstract: Introduction. Longterm cryopreservationand banking of platelet concentrates (PCs) would provide a better storage management. Howeve r, cryopreservation requires the addition and posterior removal of a cryoprotective, making the procedure cumbersome and expensive. Ory PCs would provide a plasma reduced component and fresh dry PCs could be cryopreserved in a dry condition, avoiding the centrifugation required to remove excess plasma before adding the cryoprotective. The purpose of this study was to evaluate the effects of collecting and cryopreserving dry PCs and the activityof dymethyl sulfoxide (OMSO)5% and of OMSO2% plus second-messenger effector (ThromboSofTM)as cryopreserving solution for dry PCs. Material and Methods. 80th standard and dry PCs were collected in the same apheresis procedure and samples were obtained for microbiologic control, leukocyte and platelet counts and mean platelet volume (MPV),pH, glucose and LOHlevels determination.Activationwas examined by flow cytometry using monoclonal antibodies directed against GPlb complex (CO42), allb~3 integrin (CO41) and pselectin (CO62p),alongwith annexin binding assay. Plateletfunction was assessed by aggregation using adenosine diphosphate (AOP), collagen and arachidonic acid as agonists. Ory PCs were compared to apheresis standard PCs and to cryopreserved dry PCs. The cryoprotective effect of OMSO 5% was also compared to ThromboSolTM.Statistical analysis was performed by using a Wilcoxon signed rank test to test for significant differences between samplesfrom the same donor and a . Wilcoxon ranksum test between samples from distinct donors. A p value < 0.05 was considered significant. Results. Ory PCs presented a significantly reduced>pH (p<O.OO1) and glucose (p<O.OO1), increased LDH levels (p<O.OO1) and CD62p expression (p<O.OO1),and diminished aggregation response to ADP (p<O.OO1)and epinephrine (p<O.OO1).Platelet cryopreservation was associated to platelet Iyses, activation and loss of function. Dry PCs cryopreserved with ThramboSolTM were associated to higher LDH levels (p<O.OO1)and annexin biding (p=O,OO5),and to lower CD42 positive platelets (p=O.O1)and aggregation response to collagen as agonist (p=O.OO5).Conclusion. This study suggest that dry PCs should be rapidly frazen after collection to avoid pH fali and platelet activation. In addition, it was observed that DMSO 5% demonstrated better performance than ThromboSolTM cryopreserving dry PCs / Mestrado / Clinica Medica / Clinica Medica

Orientador: Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T11:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_ArtemisSocorrodoNascimento_D.pdf: 9543028 bytes, checksum: 5774a3716484ea2212070f20c266a89f (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Considerando a imunogenicidade e importância clínica do antígeno RhD bem como o grande número de variantes RhD identificadas, estudos que possam esclarecer sua expressão e mecanismos moleculares envolvidos são importantes para a padronização de técnicas moleculares e sorológicas em diferentes populações. Assim foram nossos objetivos: padronizar técnicas moleculares para realização da genotipagem RHD fraco e determinar sua ocorrência na população brasileira; associar os tipos de RhD fracos encontrados com os haplótipos Rh presentes; e avaliar a aplicação da determinação do antígeno RhD na prática transfusional. Estudamos 503 amostras de DNA de doadores voluntários de sangue fenotipados como RhD ftaco. Destas amostras de DNA estudadas, 415 (82,5%) foram caracterizadas como RhD ftaco, 65 (12,9%) como RhD parcial, 15 (3%) apresentaram associações de RhD parcial e RhD ftaco e 8 (1,6%) foram RhD normal. I Os antígenos RhD fraco tipos 1, 3 e 4 foram os mais fteqüentes em nossa população. Como estes três tipos de RhD fraco não apresentam risco de aloimunização anti-D, pacientes assim classificadospodem ser transfundidos com sangue RhD-positivo. Nossos resultados demonstraram que 12,~A>das amostras fenotipadas como RhD fraco eram na verdade RhD parcial. Os antígenos RhD parciais encontrados em nosso estudo foram D~ DHMi e DVI. Quarenta (7,9%) amostras de DNA foram caracterizadas como D~ 16 (3,2%) como DHMi e 9 (1,8%) como DVI. A caracterização dos antígenos RhD parciais que reagem sorologicamente como RhD ftaco, tais como D DHMi e RhD categoria VI pode ser de grande auxilio na prevenção da aloimunização anti-D em pacientes politransfundidos e gestantes. A freqüência dos antígenos RhD parciais D~ DHMi e DVI encontrada em nossas amostras sugere um elevado risco de aloimunização ao antígeno RhD em pacientes fenotipados como RhD ftaco. - Das 503 amostras estudadas, 15 apresentaram mutações responsáveis pela expressão do antígeno RhD fraco e ao mesmo tempo mutações características de antígenos RhD parciais, ou seja, estas amostras possuíam os antígenos RhD fraco e RhD parcial associados. Estudamos quatro amostras de DNA de pacientes fenotipados como RhD :fraco que apresentavam anti-D. Nosso estudo demonstrou que a aloimunização anti-D nestes pacientes estava relacionada à presença de um antígeno RhD parcial e não a um antígeno RhD :fraco como diagnosticado sorologicamente. Duas amostras foram classificadascomo RhD parcial DAR, 1 como RhD parcial DHMi e 1 como DVI. Os resuhados demonstraram que os tipos de RhD fraco 1, 2, 3 e 4 que foram detectados à TA ou à 3'te e apresentaram grau de aglutinação superior a 1+ na AGH podem ser considerados como RhD positivo, pois não foram associados ao antígeno RhD parcial. Apesar deste trabalho ter sido o único que relacionou os tipos de RhD ftaco com o grau de aglutinação, a literatura revela que ainda não foi demonstrada aloimunização anti-D em pacientes portadores dos antígenos RhD fraco tipos 1,2 e 3. De acordo com os nossos resultados pode-se concluir que: 1. A transfusão com sangue RhD-positivo pode ser recomendada para todos os pacientes que apresentam os tipos do antígeno RhD :ftaco 1, 3 e 4 identificados por técnicas moleculares e para aqueles que apresentarem grau de aglutinação superior a 1+ na fenotipagem RhD. 2. A utilização de métodos de fenotipagem mais sensíveis em combinação com reagentes anti-D de alta afinidade é recomendada na detecção de antígenos RhD ftaco com baixa densidade antigênica em doadores de sangue; 3. Há necessidade da utilização de dois anti-soros monoc1onais (IgM e IgG) na determinação do antígeno RhD :ftacoem pacientes; 4. As genotipagens RHD, RHD ftaco e RHD parcial devem ser rea1i73dasquando os resuhados sorológicos não forem claros ou quando o paciente for politransfundido. 5. A biologia molecular associada à hemaglutinação pode aumentar consideravelmente a segurança transfusional pela mellior caracterização dos antígenos RhD em nossa população / Abstract: The purpose of this study was to characterize by molecular studies theRhD antigens (weak D and partial D) in Brazilian blood donors. DNA samples ftom 503 blood donors phenotyped as weak D were tested by two different sequence-specific primers (pCR-SSP) assays to determine the presence or absence of RHD gene (PCR-SSP intron 4 and exon 10) and to detect the common weak D types. Ofthe 503 weak D samples studied, 415 (82,5%) were identified as weak D, 65 (12,9%) as partial D, 15 (3%) showed association ofweak D and partial D and 8 (1,6%) were normal D. Weak D types 1, 3 and 4 contributed more than 85% of alI molecular weak D types. For these 3 types, D-positive transfusion can be considered safe because no immunization events have been documented yet. These findings show for the first time the frequency of weak D types in Brazilians. Molecular analysis showed that 12,9% of the weak D phenotype samples studied carried a partia! D alIele. The partial Ds found in our study were DAR, DVI and DHMi. Forty (7,9%) DNA samples were characterized as DAR, 16 (3,8%) as DHMi and 9 (1,8%) as DVI. The characterization of the partia! D antigens DAR, DHMi and DVI may avoid alIoimmunization in patients phenotyped as weak D. Fiffeteen patients showed mutations to weak D and partia! D showing that these samples had the weak D and partia! D antigens associated. We also studied 4 DNA samples of patients phenotyped as weak D who had developed anti-D. Our study showed that anti-D alIoimmunization in these patients was associated with the presence of partia! D antigens. Two samples were classified as partia!, D DAR, 1 as DHMi and 1 was DVI.AlI the weak D types identified in our study were associated with the intensity of agglutination obtained at room temperature (RT), 3'fC and AGH. The sensitivity of detecting weak D depends on the anti-D reagent and on the exact conditions of the methods. Our results showed that the weak D types 1, 2, 3 and 4 were frequently detected at RT and 3'fC and therefore could be considered as D-positive for transfusion. According to our results we could recommend the use ofmonoclonal anti-DIgM with high avidity to detect weak D antigen with low antigen density in blood donors and two monoclonals, one IgM and one IgG in combination with AGT to detect the weak D antigen in patients / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador : Jose Aristodemo Pinotti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-15T16:04:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_GustavoAntoniode_D.pdf: 1803224 bytes, checksum: d4ee9d22d0495ed81639b54c857d51a3 (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas