Um dos principais fatores limitantes da produção do melão é a ocorrência de doenças. Entre os patógenos mais importantes estão as bactérias, que causam perdas significativas na produção. Causada pela bactéria Acidovorax avenae subsp. citrulli (Aac), a mancha-aquosa-do-melão, também conhecida como mancha-bacteriana-dofruto, é uma doença grave, que tem preocupado produtores do nordeste, sendo que todos os tipos de melão apresentam suscetibilidade ao patógeno. A principal fonte de inóculo para esta bactéria é a semente infectada. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um meio semi-seletivo para detecção e identificação de Acidovorax avenae subsp. citrulli em sementes de melão, para testes de rotina em laboratórios de patologia de sementes. Por meio de testes de fungitoxicidade, antibiogramas qualitativos e quantitativos e testes bioquímicos foi desenvolvido o seguinte meio semiseletivo para a detecção de Aac em sementes de melão: dextrose (5 g/L), NaCl (5 g/L), peptona (5 g/L), KH2PO4 (2 g/L), MgSO4.7H2O (0,2 g/L), vermelho de fenol (0,012 g/L), uréia (25 g/L), agar (17 g/L), benomil (100 mg/L), nistatina (200 mg/L) e amoxicilina (15 mg/L). / One of the main limiting factors of the melon production is the occurrence of diseases. The bacteria are among the most important pathogens causing significant losses in the production. Caused by the bacterium Acidovorax avenae subsp. citrulli (Aac), the bacterial-fruit-blotch is a serious disease that affects all types of melon and has worried northeast producers. The main source of inoculum for this bacterium is the infected seed. This work had as objective the development of a semi-selective medium to detect and identify Acidovorax avenae subsp. citrulli in melon seeds, for routine tests in seed pathology laboratories. By means of fungitoxicity tests, qualitative and quantitative antibiograms and biochemical tests the following semi-selective medium to detect Aac in melon seeds was developed: dextrose (5 g/L), NaCl (5 g/L), peptone (5 g/L), KH2PO4 (2 g/L), MgSO4.7H2O (0,2 g/L), phenol red (0,012 g/L), urea (25 g/L), agar (17 g/L), benomil (100 mg/L), nistatina (200 mg/L) and amoxicilin (15 mg/L).

Um dos principais fatores limitantes da produção do melão é a ocorrência de doenças. Entre os patógenos mais importantes estão as bactérias, que causam perdas significativas na produção. Causada pela bactéria Acidovorax avenae subsp. citrulli (Aac), a mancha-aquosa-do-melão, também conhecida como mancha-bacteriana-dofruto, é uma doença grave, que tem preocupado produtores do nordeste, sendo que todos os tipos de melão apresentam suscetibilidade ao patógeno. A principal fonte de inóculo para esta bactéria é a semente infectada. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um meio semi-seletivo para detecção e identificação de Acidovorax avenae subsp. citrulli em sementes de melão, para testes de rotina em laboratórios de patologia de sementes. Por meio de testes de fungitoxicidade, antibiogramas qualitativos e quantitativos e testes bioquímicos foi desenvolvido o seguinte meio semiseletivo para a detecção de Aac em sementes de melão: dextrose (5 g/L), NaCl (5 g/L), peptona (5 g/L), KH2PO4 (2 g/L), MgSO4.7H2O (0,2 g/L), vermelho de fenol (0,012 g/L), uréia (25 g/L), agar (17 g/L), benomil (100 mg/L), nistatina (200 mg/L) e amoxicilina (15 mg/L). / One of the main limiting factors of the melon production is the occurrence of diseases. The bacteria are among the most important pathogens causing significant losses in the production. Caused by the bacterium Acidovorax avenae subsp. citrulli (Aac), the bacterial-fruit-blotch is a serious disease that affects all types of melon and has worried northeast producers. The main source of inoculum for this bacterium is the infected seed. This work had as objective the development of a semi-selective medium to detect and identify Acidovorax avenae subsp. citrulli in melon seeds, for routine tests in seed pathology laboratories. By means of fungitoxicity tests, qualitative and quantitative antibiograms and biochemical tests the following semi-selective medium to detect Aac in melon seeds was developed: dextrose (5 g/L), NaCl (5 g/L), peptone (5 g/L), KH2PO4 (2 g/L), MgSO4.7H2O (0,2 g/L), phenol red (0,012 g/L), urea (25 g/L), agar (17 g/L), benomil (100 mg/L), nistatina (200 mg/L) and amoxicilin (15 mg/L).

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-03-02T13:04:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Carlos Rafael.pdf: 2751688 bytes, checksum: 31c547702ea9189c4ded0e1d56077de5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-02T13:04:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Carlos Rafael.pdf: 2751688 bytes, checksum: 31c547702ea9189c4ded0e1d56077de5 (MD5) Previous issue date: 2017-08-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento da dinâmica espacial de doenças de plantas, aliado a quantificação de inóculo e monitoramento das condições meteorológicas é de grande importância para a adoção de estratégias de manejos adequados e com menor impacto ambiental. Sendo assim, os objetivos deste trabalho de pesquisa foram caracterizar a distribuição, variabilidade espacial e possíveis relações entre atributos referentes ao mofo branco e atributos de plantas de soja além de avaliar técnicas de identificação e quantificação de ascósporos de Sclerotinia sclerotiorum durante o florescimento da soja. Foram realizadas amostragens através de uma malha georreferenciada em uma área de 12 hectares (ha) no município de Mauá-da-Serra-PR nas safras 2013/14 e 2014/15 e uma área de quatro hectares no município de Ponta Grossa-PR na safra 2015/16. Foram utilizados quadrats com área útil de 7,2 m² para avaliação das seguintes variáveis: escleródios presentes no solo, estande da cultura, incidência, índice de doença, rendimento, escleródios produzidos na colheita, além da deposição do bioaerossol, partes de folha e flores da soja como uso de Meio Semi-seletivo a Sclerotinia sclerotiorum (MSS) e Reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR), em 36 pontos de amostragem na área de Ponta Grossa-PR, em três datas durante o florescimento da soja. Os dados foram analisados com uso de estatística descritiva, ajuste de semivariogramas e matriz de correlação de Pearson. As condições meteorológicas observadas nos três experimentos foram adequadas para o desenvolvimento da cultura da soja e do mofo branco na soja. As variáveis referentes a cultura da soja apresentaram coeficientes de variação baixos ou moderados e as variáveis referentes ao mofo branco apresentaram coeficiente de variação muito elevados. Os ajustes dos semivariogramas apresentaram diferenças nos três experimentos, com efeito pepita puro, ajuste linear, esférico e exponencial. A variável escleródios do solo apresentou efeito pepita puro nos dois experimentos em Mauá-da-Serra. Foram encontradas correlações significativas positivas entre a incidência do mofo branco e a produção de escleródios na colheita, além de correlação negativa com o rendimento nos três experimentos. A identificação de inóculo de mofo branco com incubação em MSS mostrou-se a técnica com maior sensibilidade, mas demanda de até 15 dias para a confirmação de S. sclerotiorum, tanto para bioaerossol, como flores e partes de folhas de soja. Foi possível otimizar o protocolo de extração de DNA e ciclo de reação para qPCR, além de gerar uma curva padrão com DNA oriundo de ascósporos de S. sclerotiorum, com ajuste ao modelo linear (R²=0,99) e eficiência de 92,2%. O uso de qPCR mostrou-se promissor para partes de folhas, sendo possível resultados em um dia de trabalho. / The knowledge of the spatial dynamics of plant diseases, allied with the quantification of inoculum and monitoring of the meteorological conditions, is important for the adoption of adequate management strategies and with less environmental impact. The aim of this work was to characterize the distribution, spatial variability and possible relations between white mold attributes and soybean plants attributes, as well as to evaluate techniques for identification and quantification of ascospores of Sclerotinia sclerotiorum during soybean flowering. Samplings were carried out through a georeferenced grid on a field of 12 hectares (ha) in the municipality of Mauá-da-Serra-PR in the 2013/14 and 2014/15 crop seasons and, on a field of four hectares in the municipality of Ponta Grossa-PR in the 2015/16 crop season. Quadrats with a useful area of 7.2 m² were used to evaluate the following variables: sclerotia in the soil, crop stand, incidence, severity, yield, sclerotia produced at harvest, as well as bioaerosol deposition, soybean leaf parts and flowers on semi-selective medium to Sclerotinia sclerotiorum (MSS) and quantitative polymerase chain reaction (qPCR), at 36 sampling points in the Ponta Grossa- PR field, at three dates during soybean flowering. Data were analyzed using descriptive statistics, semivariogram adjustment and Pearson correlation matrix. The meteorological conditions observed in the three experiments were adequate for the development of soybean crop and white mold disease. The variables related to soybean plants, showed low or moderate coefficients of variation and the variables related to white mold showed a high coefficient of variation. The semivariograms adjustments showed differences in the three experiments, with pure nugget effect, linear, spherical and exponential adjustments. The variable sclerotia of soil showed pure nugget effect on the two experiments in Mauá-da-Serra. Significant positive correlations were found between the incidence of white mold and the production of sclerotia at harvest, in addition to negative correlation to yield in the three experiments. The identification of white mold inoculum with incubation on MSS was shown to be the most sensitive technique, but takes up to 15 days for the confirmation of S. sclerotiorum pathogen for bioaerossol, flowers and parts of soybean leaves. It was possible to optimize the protocol of DNA extraction and reaction cycle for qPCR, besides generating a standard curve with DNA from ascospores of S. sclerotiorum, adjusted to the linear model (R² =0, 99) and efficiency of 92.2%. The use of qPCR showed promise results for leaf parts, being possible achieve concluding results in one working day.

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Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1101546 bytes, checksum: 470ffe81811565bb509698fba48cfb51 (MD5) Previous issue date: 2012-02-13 / It was aimed to evaluate the efficiency of semi-selective media, for pathogenicity tests and primers specificity for detection of Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc). For execution of experiments, we used 29 strains received from different regions in Brazil. For confirmation of the identity of the strains we carried out xanthomonadins production test, asparagine utilization, analysis of the 16S rDNA genes region of bacterial genome and pathogenicity tests. Of the 29 strains, 24 were identified as belonging to Xanthomonas genus. None of the strains induced hypersensitivity reaction (HR) in inoculated plants and only 14 strains induced typical symptoms of black rot in collard. The NSCAA medium was the uniquely to support the growth of all strains, whereas mCS20ABN, YTSA-CC and Xan-D media allowed the growth of most of strains. Except of X03 strain, the XCR/XCF and HrcCR2/HrcCF2 primers allowed the amplification and visualization of bands of expected size to Xcc. / Avaliou-se a eficiência de meios de cultura semi-seletivos, de testes de patogenicidade e a especificidade de primers para a detecção de Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc). Para a execução dos experimentos, foram utilizados 29 isolados recebidos de diferentes regiões do Brasil. Para a confirmação da identidade dos isolados foram realizados os testes de produção de xantomonadinas e de utilização de asparagina, análise da região 16s do genoma bacteriano e testes de patogenicidade. Dos 29 isolados, 24 foram identificados como pertencentes ao gênero Xanthomonas. Nenhum dos isolados induziu HR nas plantas inoculadas e apenas 14 isolados induziram sintomas típicos da podridão negra em couve. O meio NSCAA foi o único capaz de suportar o crescimento de todos os isolados, enquanto os meios mCS20ABN, YTSA-CC e Xan-D permitiram o crescimento da maioria dos isolados. À exceção do isolado X03, os primers XCR/XCF e HrcCR2/HrcCF2 permitiram a amplificação e visualização das bandas de tamanhos esperados para Xcc.