O mofo-branco causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum se encontra amplamente disperso pelas áreas de produção em todo pais e afeta mais de 400 espécies de planta, causando perdas na produção e redução na qualidade. O controle da doença é considerado difícil, pois o patógeno forma escleródios (estruturas de sobrevivência), que podem permanecer viáveis por vários anos. Normalmente exige-se um manejo integrado, que envolve o controle químico, biológico e diversas práticas culturais, uma vez que cultivares resistentes não estão disponíveis. As adoções de estratégias sustentáveis de manejo do mofo branco dependem da compreensão do patógeno, sua etiologia, morfologia, agressividade e dinâmica populacional. Foram avaliados 150 isolados, coletados em cultivos de cenoura, couve, girassol, nabo, soja e feijão. O índice de velocidade de crescimento micelial (IVCM), a coloração da colônia e densidade do micélio, o tempo necessário para a formação do primeiro escleródio, o número de escleródios por placa, o peso em mg e a forma dos escleródios foram utilizados na caracterização dos isolados. O critério adotado nas avaliações da agressividade dos isolados foi o diâmetro das lesões após diversos intervalos de tempo, usando o método da folha destacada, em feijão e soja. Os valores foram usados para calcular a área abaixo da curva de progresso de doença. A população avaliada mostrou ampla variabilidade para as características morfológicas, fisiológicas e na agressividade. O controle químico é a estratégia mais utilizada no controle do mofo branco. No Brasil, onze ingredientes ativos estão registrados, no entanto, três são mais utilizados: fluazinam, procimidona e tiofanato metílico. O uso intensivo de fungicidas, especialmente os que agem em um unico sitio de ação, podem selecionar isolados resistentes e, consequentemente, levar a falhas de controle. A avaliação da sensibilidade de S. sclerotiorum para os fungicidas mais utilizados é fundamental para monitorar o comportamento da população. Foram avaliadas a sensibilidade de isolados brasileiros de Sclerotinia sclerotiorum a fluazinam, procimidona e tiofanato metílico, atraves de concentrações discriminatórias e valores de CI50 (concentração do fungicida que inibe em 50% o crescimento micelial). Um total de 150 isolados foi testado e nenhum se mostrou resistente a fluazinam ou procimidona. O valor da CI50 para fluazinam variou de 0,00173 ppm a 0,01284 ppm, com média de 0,007 ppm. Para procimidona, a CI50 desses isolados variou de 0,12223 ppm a 0,35916 ppm, com média de 0,21834 ppm. Foram encontrados sete isolados resistentes ao tiofanato metílico, com CI50 variando de 990-2667 ppm. Na população sensível o valor variou de 0,49 - 3,73 ppm. Foi verificada a adaptabilidade dos isolados resistentes, e esta se mostrou comparável a dos isolados sensíveis, sugerindo que os isolados possuem aptidão parasitária suficiente para competir com os isolados sensíveis em condições de campo. / The white mold caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum is widely dispersed in production areas in the whole country and affects more than 400 species, causing production losses and reduced quality. Disease control is considered difficult because the pathogen form sclerotia (survival structure) which can remain viable for several years. Typically this requires a integrated pest management, which involves chemical, biological control and various cultural practices, since resistant cultivars are not available. The adoption of sustainable management strategies for white mold depends on understanding the pathogen, its etiology, morphology, aggressiveness and population dynamics. We evaluated 150 isolates collected from carrots, cabbage, sunflower, turnip, soybeans and beans. Mycelial growth rate index (MIG), colony color and mycelium density, time required to form the first sclerotia, the number of sclerotia per plate, the weight in mg and sclerotia shape were used for the isolates characterization. The criteria used in the isolates aggressiveness evaluations were lesions diameter after various time intervals, using the detached leaf method in bean and soybean. The values were used to calculate the area under the disease progress curve (AUDPC). The population evaluates showed wide variability for morphological, physiological and aggressive characteristics. Chemical control is the most commonly strategy used in the control of white mold. In Brazil, eleven ingredients active are registered, however, three are most commonly used, and they are: fluazinam, procymidone and thiophanate-methyl. The intensive use of fungicides, especially those which act on at a single site of action, can select resistant isolates, and consequently lead to failure control. The evaluation of the sensitivity of S. sclerotiorum to the most commonly used fungicides is critical to monitor the behavior of the population. We assessed the sensitivity of Brazilian Sclerotinia sclerotiorum isolated to fluazinam, procymidone and thiophanate-methyl, through discriminatory concentrations and IC50 values (the fungicide concentration which inhibits 50% of the mycelial growth). A total of 150 strains have been tested, and none were resistant to fluazinam or procymidone. The IC50 value for fluazinam ranged from 0.00173 to 0.01284 ppm ppm, with an average of 0.007 ppm. For procymidone, the IC50 of these isolates ranged from 0.12223 to 0.35916 ppm ppm, averaging 0.21834 ppm. Seven isolates were found resistant to thiophanate-methyl with IC50 ranging from 990-2667 ppm. In sensitive people the value ranged from 0.49 to 3.73 ppm. Adaptability of resistant isolates was observed, and this proved to be comparable to the susceptible isolates, suggesting that the isolates have parasitic fitness enough to compete with susceptible isolates in field conditions.

Made available in DSpace on 2014-07-29T14:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Sclerotinia_Riccely - pre textual.pdf: 83822 bytes, checksum: 7f0c226c4852681fb38e300f649a6c93 (MD5) Previous issue date: 2012-06-29 / The soybean (Glycine max L. Merril) is the main cultivated species on the country, having an average productivity of 3,106 kg.ha-1 in an area of 24.2 million hectares, giving to Brazil the second place in world production. Among the factors that limit the yield, the profitability and the successful production of this legume, diseases are a highlight. Among them, the white mold, caused by Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) of Bary, is gaining importance in the soybean fields on the Brazilian Cerrado . The control of this disease is being considered difficult due to the absence of resistant cultivars, fungus survival in soil during long periods, range of hosts, large number of ascospores produced by apothecium and their fast dissemination on relatively long distances from the source and survival in seeds on mycelial dormant form or sclerotia, contaminating the batches. This work had the aim to study the genetic variability of S. sclerotiorum populations; evaluate the aggressiveness of isolates in soybean culture; evaluate the sensitivity of isolates to fungicides, temperatures and light regime; select an inoculation method of S. sclerotiorum in soybean plants, efficient and practical and; characterize soybean cultivars for reaction to S. sclerotiorum. The experiments were conducted on the Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos da Universidade Federal de Goiás . The collection of isolates was obtained by collecting sclerotia in soybean plants in eight municipalities of the Brazilian Central Region, Silvânia GO, Anápolis GO, São Miguel do Passa Quatro GO, Água Fria GO, Montividiu GO, Chapadão do Sul MS, Uberlândia MG and Patrocínio MG. The tests of mycelial compatibility were performed in MPM (Modified Patterson s Medium) and in PDA (Potato Dextrose Agar) medium, having the mycelial reactions of compatibility and incompatibility evaluated seven days after incubation. Analyzes of mycelial compatibility were performed in each sampled municipality, with a number of 25 isolates, as well as among groups of mycelial compatibility of each municipality, totaling 31 isolates. To evaluation of aggressiveness, 21 isolates representing each group of mycelial compatibility, found in each studied locality, were inoculated by the tip method on the petiole in the cultivars M-SOY 7908 RR and BRSGO 7760 RR. The evaluations of lesion length on stem were made three and seven days after inoculation. The same 21 isolates used on aggressiveness experiments were evaluated for sensibility to fungicides fluopyram, boscalid, thiophanate methyl, carbedanzim, dimoxystrobin + boscalid, procymidone and fluazinam. Those isolates were also evaluated for sensibility on temperatures 10oC, 15oC, 20oC, 25oC and 30oC, in light regime conditions of 12 hours and continuous darkness. For selection of a inoculation method both efficient and practical, four inoculation methods were used in soybean cultivars M-SOY 7908 RR and BRS 7760 RR using only one isolate. The characterization of soybean cultivars regarding reaction to S. sclerotiorum was made by means of an aggressive isolate, selected on aggressiveness experiments, and by the tip method. In this experiment forty cultivars were evaluated in totally randomized design with 3 repetitions. In intrapopulation analysis, was verified that the genetic variability in S. sclerotiorum was low, while in interpopulation analysis, eight compatibility groups were found, one of the groups more aggressive than the other ones. There was significant difference among isolates for the aggressiveness in the two cultivars, being the M-SOY 7908 RR cultivar the most susceptible. The isolates were highly sensible to fungicides boscalid, carbendazim, dimoxystrobin + boscalid, procymidone, fluopyram and fluazinam, only the isolate SSUB 18 was moderately sensible to the fungicide fluopyram. Most of isolates had insensibility to the fungicide thiophanate methyl. The best temperature for mycelial growth of isolates was 25oC, regardless the light regime. The tip method of inoculation in petiole was efficient and practical for characterization of soybean cultivars for their reaction to S. sclerotiorum. There is varietal difference among soybean cultivars for resistance to white mold, being cultivars BRSGO 8460RR, BRSGO Ipameri and P98Y11 the most resistant ones, on the present study conditions. / A soja (Glycine max L. Merril) é a principal espécie cultivada no país, tendo produtividade média de 3.106 kg.ha-1 em uma área de 24,2 milhões de hectares, conferindo ao Brasil o segundo lugar na produção mundial. Dentre os fatores que limitam o rendimento, a lucratividade e o sucesso de produção desta leguminosa destacam-se as doenças. Dentre elas, o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary, tem assumido importância nos campos de cultivo de soja no Cerrado brasileiro. O controle dessa doença tem sido considerado difícil em função da ausência de cultivares resistentes, sobrevivência do fungo no solo por longos períodos, ampla gama de hospedeiros, grande número de ascósporos produzidos por apotécio e sua rápida disseminação a distâncias relativamente longas a partir da fonte produtora e sobrevivência em sementes na forma de micélio dormente ou escleródios contaminando os lotes. Este trabalho teve como objetivo estudar a variabilidade genética de populações de S. sclerotiorum; avaliar a agressividade de isolados em plantas de soja; avaliar a sensibilidade de isolados à fungicidas, temperaturas e regime de luz; selecionar um método de inoculação de S. sclerotiorum em plantas de soja, eficiente e prático e; caracterizar cultivares de soja quanto à reação à S. sclerotiorum. Os experimentos foram conduzidos na Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos da Universidade Federal de Goiás. A coleção de isolados foi obtida por meio de coleta de escleródios em plantas de soja de oito municípios da região Central do Brasil, Silvânia GO, Anápolis GO, São Miguel do Passa Quatro GO, Água Fria GO, Montividiu GO, Chapadão do Sul MS, Uberlândia MG e Patrocínio MG. Os testes de compatibilidade micelial foram realizados em meio de cultura MPM (meio modificado de Patterson s) e meio de cultura BDA (Batata Dextrose Ágar), sendo as reações miceliais de compatibilidade e incompatibilidade avaliadas aos sete dias após a incubação. As análises de compatibilidade micelial foram realizadas dentro de cada município amostrado, com um número de 25 isolados, bem como entre os grupos de compatibilidade micelial de cada município, totalizando 31 isolados. Para avaliação de agressividade, 21 isolados representando cada grupo de compatibilidade micelial, encontrado em cada localidade estudada, foram inoculados pelo método da ponteira no pecíolo nas cultivares M-SOY 7908 RR e BRSGO 7760 RR. As avaliações do comprimento de lesão na haste foram realizadas aos três e sete dias após a inoculação. Os mesmos 21 isolados utilizados nos experimentos de agressividade foram avaliados quanto à sensibilidade aos fungicidas fluopyram, boscalid, tiofanato metílico, carbedazim, dimoxystrobina+boscalid, procimidone e fluazinam. Estes isolados também foram avaliados quanto à sensibilidade as temperaturas de 10oC, 15oC, 20oC, 25oC e 30oC, em condições de fotoperíodo por 12 horas e escuro contínuo. Para seleção de um método de inoculação eficiente e prático, quatro métodos de inoculação foram utilizados nas cultivares de soja M-SOY 7908 RR e BRS 7760 RR, utilizando-se apenas um isolado. A caracterização de cultivares de soja quanto à reação a S. sclerotiorum foi realizada por meio de um isolado agressivo, selecionado nos experimentos de agressividade, e pelo método de inoculação da ponteira. Neste experimento foram avaliadas quarenta cultivares em delineamento inteiramente casualizado com 3 repetições. Em análise intrapopulacional, verificou-se que a variabilidade genética em S. sclerotiorum foi baixa, enquanto que em análise interpopulacional, oito grupos de compatibilidade foram encontrados, sendo um grupo mais predominante do que os demais. Houve diferença significativa entre os isolados quanto à agressividade nas duas cultivares, sendo a cultivar M-SOY 7908 RR a mais suscetível. Os isolados foram altamente sensíveis aos fungicidas boscalid, carbendazim, dimoxystrobina+boscalid, procimidone, fluopyram e fluazinam, somente o isolado SSUB 18 que foi moderamente sensível ao fungicida fluopyram. A maioria dos isolados apresentou insensibilidade ao fungicida tiofanato metílico. A melhor temperatura para o crescimento micelial dos isolados foi 25oC, independentemente do regime de luz. O método de inoculação da ponteira no pecíolo foi eficiente e prático para caracterização de cultivares de soja quanto à reação a S. sclerotiorum. Existe diferença varietal entre as cultivares de soja quanto à resistência ao mofo branco, sendo que as cultivares BRSGO 8460RR, BRSGO Ipameri e P98Y11 foram as mais resistentes, nas condições do presente estudo.

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To evaluate the fungicide sensitivity a cell viability test based on the alamarBlue dye using mycelial growth was standardized. Dose-response curves for fluazinam, procymidone and benomyl were estimated using this test and were compared with dose-response curves estimated by the mycelial growth inhibition on PDA plate and the FRAC (Fungicide Resistance Action Committee) protocol. Despite the differences to assess the fungicide sensitivity between the three methods, the dose-response curves showed similar trends for the three fungicides. The fungicide sensitivity assessment at the four populations showed low sensitivity to benomyl in the Planaltina population. Furthermore, this population presented a principally clonal population structure, with a haplotype represented by 18 out of 20 isolates. Significant population differentiation in all pairwise comparisons of phi, except the comparison between EV_2013-NH, was detected. Five genetically homogeneous groups were inferred by the DAPC analysis. No group was conformed by isolates from the four populations. Only two haplotypes between the two populations from the same sampling location were shared. The hypothesis of random mating was rejected at the four populations; however this hypothesis was not rejected at the two major populations inferred by the DAPC analysis. The screening of mating type locus showed a dominance of Inv+ isolates and a high proportion of Inv+/Inv- isolates (presumable heterokaryons). / Sclerotinia sclerotiorum é um fungo fitopatogênico capaz de colonizar mais de 400 hospedeiras, sendo o agente causal do mofo branco no feijoeiro. Estudos de variabilidade genética associados a características fenotípicas de interesse agronômico, como a sensibilidade a fungicidas, oferecem informações importantes para direcionar estratégias de controle sobre este patógeno. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a variabilidade genética, sensibilidade a fungicidas e agressividade de 79 isolados de S. sclerotiorum distribuídos em quatro populações procedentes de culturas de feijoeiro em pivô central. Duas destas populações representaram um único local de coleta em duas épocas diferentes (2000 e 2013). Para avaliar a sensibilidade a fungicidas foi padronizado um teste de viabilidade celular baseado no corante alamarBlue® sobre o crescimento micelial em microplaca de 96 poços. Curvas de dose-resposta para os fungicidas fluazinam, procimidona e benomyl, usando um isolado de S. sclerotiorum, foram estimadas com este método, e comparadas com curvas de dose-resposta obtidas com os métodos de inibição do crescimento em placa e o proposto pelo Fungicide Resistance Action Committee (FRAC). Apesar das diferentes abordagens as curvas dose-resposta mostraram tendências semelhantes para os três fungicidas. A avaliação da sensibilidade a fungicidas nas quatro populações indicou uma alta insensibilidade ao benomyl na população de Planaltina. Por outro lado, a estrutura populacional foi principalmente clonal com um haplótipo representado por 18 dos 20 isolados desta população. Diferenciação populacional significativa foi detectada em todas as comparações par a par do phi, com a exceção da comparação EV-2013-NH. A analise DAPC identificou cinco grupos geneticamente homogêneos. Nenhum dos grupos esteve constituído por isolados das quatro populações. Só dois haplótipos foram compartilhados pelas populações EV_2000 e EV_2013. A hipótese de acasalamento aleatório foi rejeitada nas quatro populações, no entanto não foi rejeitada nas duas maiores populações sugeridas pelo DAPC. O screening do Mating type locus (MAT) mostrou uma prevalência de isolados Inv+ e uma alta proporção de isolados Inv+/Inv-

O mofo-branco causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum se encontra amplamente disperso pelas áreas de produção em todo pais e afeta mais de 400 espécies de planta, causando perdas na produção e redução na qualidade. O controle da doença é considerado difícil, pois o patógeno forma escleródios (estruturas de sobrevivência), que podem permanecer viáveis por vários anos. Normalmente exige-se um manejo integrado, que envolve o controle químico, biológico e diversas práticas culturais, uma vez que cultivares resistentes não estão disponíveis. As adoções de estratégias sustentáveis de manejo do mofo branco dependem da compreensão do patógeno, sua etiologia, morfologia, agressividade e dinâmica populacional. Foram avaliados 150 isolados, coletados em cultivos de cenoura, couve, girassol, nabo, soja e feijão. O índice de velocidade de crescimento micelial (IVCM), a coloração da colônia e densidade do micélio, o tempo necessário para a formação do primeiro escleródio, o número de escleródios por placa, o peso em mg e a forma dos escleródios foram utilizados na caracterização dos isolados. O critério adotado nas avaliações da agressividade dos isolados foi o diâmetro das lesões após diversos intervalos de tempo, usando o método da folha destacada, em feijão e soja. Os valores foram usados para calcular a área abaixo da curva de progresso de doença. A população avaliada mostrou ampla variabilidade para as características morfológicas, fisiológicas e na agressividade. O controle químico é a estratégia mais utilizada no controle do mofo branco. No Brasil, onze ingredientes ativos estão registrados, no entanto, três são mais utilizados: fluazinam, procimidona e tiofanato metílico. O uso intensivo de fungicidas, especialmente os que agem em um unico sitio de ação, podem selecionar isolados resistentes e, consequentemente, levar a falhas de controle. A avaliação da sensibilidade de S. sclerotiorum para os fungicidas mais utilizados é fundamental para monitorar o comportamento da população. Foram avaliadas a sensibilidade de isolados brasileiros de Sclerotinia sclerotiorum a fluazinam, procimidona e tiofanato metílico, atraves de concentrações discriminatórias e valores de CI50 (concentração do fungicida que inibe em 50% o crescimento micelial). Um total de 150 isolados foi testado e nenhum se mostrou resistente a fluazinam ou procimidona. O valor da CI50 para fluazinam variou de 0,00173 ppm a 0,01284 ppm, com média de 0,007 ppm. Para procimidona, a CI50 desses isolados variou de 0,12223 ppm a 0,35916 ppm, com média de 0,21834 ppm. Foram encontrados sete isolados resistentes ao tiofanato metílico, com CI50 variando de 990-2667 ppm. Na população sensível o valor variou de 0,49 - 3,73 ppm. Foi verificada a adaptabilidade dos isolados resistentes, e esta se mostrou comparável a dos isolados sensíveis, sugerindo que os isolados possuem aptidão parasitária suficiente para competir com os isolados sensíveis em condições de campo. / The white mold caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum is widely dispersed in production areas in the whole country and affects more than 400 species, causing production losses and reduced quality. Disease control is considered difficult because the pathogen form sclerotia (survival structure) which can remain viable for several years. Typically this requires a integrated pest management, which involves chemical, biological control and various cultural practices, since resistant cultivars are not available. The adoption of sustainable management strategies for white mold depends on understanding the pathogen, its etiology, morphology, aggressiveness and population dynamics. We evaluated 150 isolates collected from carrots, cabbage, sunflower, turnip, soybeans and beans. Mycelial growth rate index (MIG), colony color and mycelium density, time required to form the first sclerotia, the number of sclerotia per plate, the weight in mg and sclerotia shape were used for the isolates characterization. The criteria used in the isolates aggressiveness evaluations were lesions diameter after various time intervals, using the detached leaf method in bean and soybean. The values were used to calculate the area under the disease progress curve (AUDPC). The population evaluates showed wide variability for morphological, physiological and aggressive characteristics. Chemical control is the most commonly strategy used in the control of white mold. In Brazil, eleven ingredients active are registered, however, three are most commonly used, and they are: fluazinam, procymidone and thiophanate-methyl. The intensive use of fungicides, especially those which act on at a single site of action, can select resistant isolates, and consequently lead to failure control. The evaluation of the sensitivity of S. sclerotiorum to the most commonly used fungicides is critical to monitor the behavior of the population. We assessed the sensitivity of Brazilian Sclerotinia sclerotiorum isolated to fluazinam, procymidone and thiophanate-methyl, through discriminatory concentrations and IC50 values (the fungicide concentration which inhibits 50% of the mycelial growth). A total of 150 strains have been tested, and none were resistant to fluazinam or procymidone. The IC50 value for fluazinam ranged from 0.00173 to 0.01284 ppm ppm, with an average of 0.007 ppm. For procymidone, the IC50 of these isolates ranged from 0.12223 to 0.35916 ppm ppm, averaging 0.21834 ppm. Seven isolates were found resistant to thiophanate-methyl with IC50 ranging from 990-2667 ppm. In sensitive people the value ranged from 0.49 to 3.73 ppm. Adaptability of resistant isolates was observed, and this proved to be comparable to the susceptible isolates, suggesting that the isolates have parasitic fitness enough to compete with susceptible isolates in field conditions.