Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-09-16T19:54:22Z No. of bitstreams: 1 2015_CristianaMouraAndrade.pdf: 1562427 bytes, checksum: c6b3855c58847246d1e9597518b95126 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-09-30T22:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_CristianaMouraAndrade.pdf: 1562427 bytes, checksum: c6b3855c58847246d1e9597518b95126 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-30T22:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_CristianaMouraAndrade.pdf: 1562427 bytes, checksum: c6b3855c58847246d1e9597518b95126 (MD5) / Sclerotinia sclerotiorum é um fungo necrotrófico, que causa uma doença devastadora denominada mofo branco, responsável por infectar mais de 450 espécies de plantas por todo o mundo. Sendo muito difícil seu controle por fungicidas. Desta forma, o uso de plantas hospedeiras com níveis adequados de resistência é a melhor alternativa para o manejo da doença. Entretanto, devido à natureza da doença, programas de melhoramento tem tido sucesso limitado. Uma alternativa para o desenvolvimento de resistência a um fungo necrotrófico é o uso da estratégia de HIGS (Silenciamento Gênico Induzido pelo Hospedeiro), que envolve a expressão de construções no hospedeiro, gerando dsRNA dirigidos para silenciar genes do patógeno. O alvo escolhido foi o gene que codifica para quitina sintase (chs), que determina a síntese de quitina, um polissacarídeo que é componente estrutural crucial na parede celular de diversos fungos. Plantas de fumo foram transformadas com uma construção do tipo intron-hairpin para silenciamento do gene chs do fungo. Cinco linhagens de plantas transformadas demonstraram uma redução na severidade da doença 72 horas após a inoculação, variando de 55,5% a 86,7% quando comparadas a linhagens não transgênicas. A área da lesão não mostrou extensivo progresso com o passar do tempo (até 120h) em linhagens transgênicas. Resistência à doença e silenciamento do gene chs do fungo teve uma correlação positiva com a presença de siRNAs detectáveis em linhagens transgênicas. Demonstrou-se que genes endógenos do fungo necrotrófico muito agressivo, S. sclerotiorum pode ser silenciado induzido pelo hospedeiro. HIGS do gene da síntese de quitina de fungo pode gerar plantas tolerantes à mofo branco. Do ponto de vista biotecnológico, nossos resultados abrem novas perspectivas para o desenvolvimento de plantas transgênicas resistentes a fungos necrotróficos patogênicos. / Sclerotinia sclerotiorum is a necrotrophic fungus, which causes a devastating disease called white mold, infecting more than 450 plant species worldwide. Its control with fungicides is difficult. Thus, the use of adequate levels of host-plant resistance is the best alternative for disease management. However, due to the nature of the disease, breeding programs have had limited success. A potential alternative to developing necrotrophic fungal resistance is the use of the host-induced gene silencing (HIGS) methods, which involves host expression of dsRNAgenerating constructs directed against genes in the pathogen. We chose as a target the gene coding for chitin synthase (chs) that is involved in the synthesis of chitin, the polysaccharide that is a crucial structural component of the cell walls of many fungi. Tobacco plants were transformed with an interfering intron-hairpin construct for silencing the chs fungal gene. Five transgenic lines showed a reduction in disease severity 72 h after inoculation ranging from 55.5% to 86.7% compared with the non-transgenic lines. The lesion area did not show extensive progress over this time (up to 120h). Disease resistance and silencing of the chs fungal gene was positively correlated with the presence of detectable siRNA in the transgenic lines. It was demonstrated that endogenous genes from the very aggressive necrotrophic fungus S. sclerotiorum can be silenced induced by the host. HIGS of the fungal chitin synthase gene can generate white mold-tolerant plants. From a biotechnological perspective, our results open new prospects for the development of transgenic plants resistant to necrotrophic fungal pathogens.

O tabaco (Nicotiana tabacum L.), originário dos Andes, pertence à família das Solanaceas e é cultivado em diversos países. A produção de tabaco contribui com a economia de 150 países e gera uma receita de mais de U$ 2 bilhões de dólares anuais. Porém, alguns fatores podem restringir os ganhos de produtividade. Dentre eles, as doenças se destacam como um dos fatores mais importantes e o mofo branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, atinge, principalmente, as lavouras localizadas na região litorânea de Santa Catariana, local que favorece o desenvolvimento do fungo devido às características climáticas. A partir dessa problemática este estudo buscou avaliar a agressividade de isolados de S. sclerotiorum frente a cultivares comerciais de tabaco, bem como e também conhecer o perfil genético dos isolados. Foram utilizadas cinco diferentes cultivares de tabaco e 33 isolados de S. sclerotiorum de diferentes municípios dos estados do Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná e São Paulo. Para o teste de agressividade, em casa de vegetação, somente dez isolados do fungo foram inoculados em hastes de plantas de tabaco mediante perfuração com palito de dente estéril Para avaliação do perfil genético utilizou-se a técnica de microssatélites com 33 isolados do fungo. Os resultados mostraram que os isolados apresentaram diferentes perfis de agressividade e diferentes taxas de mortalidade. Os níveis de agressividade observados neste estudo comprovaram que a suscetibilidade da cultivar foi dependente do isolado. Foram detectados 114 alelos com média de 11 alelos por Locus. Alguns marcadores apresentaram alelo nulo em alguns genótipos, em especial o marcador 99, o qual foi nulo em 14 isolados. A maioria dos isolados (61%) apresentaram alelos exclusivos e clones não foram observados. A análise da informação do conteúdo de polimorfismo (PIC) foi altamente informativa (PIC > 0.50) para todos os marcadores. / Tobacco (Nicotina tabacum L.), which is originated from South America, belongs to the Solanaceae family and it is grown in many countries. Tobacco production contributes to the economy of 150 countries, being responsible for U$ 2 bilions dollar of revenue. However, there are many factors affecting the productivity, for example, diseases. White mold, caused by Sclerotinia sclerotiorum, primarily affects crops located in the coastal region of the Santa Catarina state, where mold development is favored by the weather conditions. Because of that, this research aimed to evaluate the S. sclerotiorum aggressiveness in commercial tobacco cultivars and assess the genetic diversity of isolates. Five different tobacco cultivars and 33 S. sclerotiorum isolates were used. These isolates were collected in different areas of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, Paraná and São Paulo states. For the aggressively tests in green house, ten isolates were inoculated in tobacco stem plants by the sterile toothpick perforation technique. For the genetic diversity assessment, 33 mold isolates were evaluate by the microsatellite technique. As a result, the tested isolates showed different aggressiveness profiles and mortality rates. The cultivar susceptibility was dependent on isolates. One hundred and fourteen alleles were detected, 11 alleles average per Locus. Some markers showed null alleles in some genotypes. Fourteen isolates did not amplify the marker 99. Most of isolates (61%) showed unique alleles, without clone presences. The analysis of polymorphism information content (PIC) was highly informative (PIC> 0:50) for all markers.

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-08-26T17:47:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FRANCIMARSILVA.pdf: 843897 bytes, checksum: e547985b0559e2b0f30785d8bad76231 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T17:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FRANCIMARSILVA.pdf: 843897 bytes, checksum: e547985b0559e2b0f30785d8bad76231 (MD5) Previous issue date: 2007-05-05 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / We studied the effect of ethanol extracts and vegetable waste in carpogenic germination Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) De Bary. The extracts studied were obtained from Cerrado trees, and residues of crops (corn, beans, oats, millet, wheat and vetch). From these residues were obtained ethanol extracts of which were later submitted to the partition with different solvents and evaluated the effect of the obtained phases. Regarding the effects of the extracts of the trees, there was suppressive effect on carpogenic germination of ethanol extracts of Terminalia periderm fagifolia of seed Magonia pubecens. ethanol extracts of periderm of Tabebuia heptaplylla and hexane phases and CH3CN / CHCl3 obtained the partition of the ethanol extract of the core of Terminalia fagifolia had inhibitory effect on germination carpogenic. Oatmeal waste, beans, vetch and millet spread on sclerotia germination carpogenic suppressed. The ethanol extracts of oats and vetch suppressed carpogenic germination, while wheat, beans, corn and millet only delayed the carpogenic germination. The phases obtained from the partition of the ethanol extracts from crop residues, regardless of the solvent used in the partition, and cultural residue which was extracted, reduced carpogenic germination. The pH of oat extracts, vetch and millet had no influence on the suppressive effect of carpogenic germination. pH levels lower than 5.0 miceliogênica stimulated germination. / Estudou-se o efeito de extratos etanólicos de e resíduos de vegetais na germinação carpogênica de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary. Os extratos estudados foram obtidos de árvores do cerrado, e de resíduos de plantas cultivadas (milho, feijão, aveia, milheto, trigo e ervilhaca). A partir destes resíduos foram obtidos extratos etanólicos os quais foram posteriormente submetidos à partição com diferentes solventes e avaliado o efeito das fases obtidas. Em relação aos efeitos dos extratos das árvores, houve efeito supressor na germinação carpogênica dos extratos etanólicos da periderme de Terminalia fagifolia das sementes de Magonia pubecens. Extratos etanólicos da periderme de Tabebuia heptaplylla e das fases hexânica e CH3CN/CHCl3 obtidas da partição do extrato etanólico do cerne de Terminalia fagifolia tiveram efeito inibidor na germinação carpogênica. Os resíduos de aveia, feijão, ervilhaca e milheto distribuídos sobre os escleródios suprimiram a germinação carpogênica. Os extratos etanólicos de aveia e ervilhaca suprimiram a germinação carpogênica, enquanto de trigo, feijão milho e milheto apenas retardaram a germinação carpogênica. As fases obtidas da partição dos extratos etanólicos de resíduos de culturas, independente do solvente utilizado na partição, e do resíduo cultural do qual foi extraído, reduziram a germinação carpogênica. O pH dos extratos de aveia, ervilhaca e milheto não tiveram influência no efeito supressor da germinação carpogênica. Níveis de pH inferiores a 5,0 estimularam germinação miceliogênica.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-02T12:47:54Z No. of bitstreams: 1 MarianaRochaMaximianoDissertacaoParcial2015.pdf: 459398 bytes, checksum: b2185a3a3375dbb7ac1ed82fc658146b (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-02T12:48:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MarianaRochaMaximianoDissertacaoParcial2015.pdf: 459398 bytes, checksum: b2185a3a3375dbb7ac1ed82fc658146b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-02T12:48:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MarianaRochaMaximianoDissertacaoParcial2015.pdf: 459398 bytes, checksum: b2185a3a3375dbb7ac1ed82fc658146b (MD5) Previous issue date: 2015-06-18 / Sclerotinia sclerotiorum, the causal agent of white mold, is a plant pathogenic fungus that has a characteristic feature, production of sclerotia, resistance structures that can be viable for up to 10 years in the soil, with ability to initiate a new cycle of infection under favorable conditions. The disease control methods are based on integrated management practices, including biological and chemical control. The proteomic study of this interaction may be a strategy for studying this pathosystem, however, the small amount of mycelium produced during the infectious process in vivo greatly limits the study of this pathosystem using this strategy. The main goals of this work were the development and validation of a culture medium that would partially mimic the host and allow the production of large amounts of micelium for in vitro studies of this pathosystem. For this purpose, a protocol was established for the production of culture media prepared with leaf extract of the hosts. These media were inoculated with sclerotia of the monosporic isolate SS 200 of S. sclerotiorum and the differential expression of effectors and candidate effectors of virulence of the fungus was evaluated by qPCR. The results showed that a large amount of micelia grew in the media and effector genes and candidate effector genes were induced in these media. These results indicate that the proposed culture media can be used to study the in vitro interaction between S. sclerotiorum and several plant hosts and that they can be useful especially in proteomic studies. / Sclerotinia sclerotiorum, agente causal do mofo branco, ?? um fungo fitopatog??nico que possui uma caracter??stica marcante, a produ????o de escler??dios, estruturas de resist??ncia que podem ser vi??veis por at?? 10 anos no solo, com capacidade de iniciar um novo ciclo de infec????o em condi????es favor??veis. Os m??todos de controle da doen??a baseiam-se em pr??ticas de manejo integrado, incluindo controle biol??gico e qu??mico. O estudo prote??mico desta intera????o pode ser uma estrat??gia para o estudo deste patossistema, entretanto, a pequena quantidade de mic??lio produzido pelo pat??geno durante o processo infeccioso in vivo limita bastante o estudo deste patossistema utilizando esta estrat??gia. Os objetivos deste trabalho foram o desenvolvimento e valida????o de um meio de cultura que mimetizasse parcialmente o hospedeiro e permitisse a produ????o de grande quantidade de massa micelial para estudos in vitro desse patossistema. Para tal, foi estabelecido um protocolo para a produ????o de meios de cultura, preparados a partir de extratos foliares dos hospedeiros. Estes meios foram inoculados com escler??dios do isolado monosp??rico de S. sclerotiorum SS 200 e a express??o diferencial de genes efetores e candidatos a efetores de virul??ncia do fungo foi avaliada por qPCR. Os resultados mostraram que em todos os meios testados houve crescimento de grande quantidade de massa micelial e que os meios foram capazes de induzir a express??o de genes efetores e candidatos a efetores. Portanto, os resultados indicam que os meios propostos podem ser usados no estudo da intera????o in vitro de S. sclerotiorum com v??rios hospedeiros, especialmente em estudos prote??micos.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-02T18:54:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 429906 bytes, checksum: 0b67805b081bf9b6884b7dce27e092c3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T18:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 429906 bytes, checksum: 0b67805b081bf9b6884b7dce27e092c3 (MD5) Previous issue date: 2005-05-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O mofo-branco, causado por Sclerotinia sclerotiorum, é uma das doenças mais destrutivas do feijoeiro em Minas Gerais, especialmente nos plantios irrigados do outono-inverno. O controle da doença é mais eficiente com a adoção de medidas integradas, visando, principalmente, à redução do inóculo do patógeno no solo. O objetivo deste trabalho foi estudar a associação de estratégias de controle do mofo-branco do feijoeiro em área irrigada, incluindo o controle biológico, a redução da freqüência de irrigação e da densidade de plantio e a aplicação de fungicida. Foram realizados dois experimentos em um campo experimental da Universidade Federal de Viçosa infestado de escleródios de S. sclerotiorum, entre os meses de maio e agosto de 2004. Em cada experimento, foi montado um fatorial 2 x 2 x 3 x 4, com dois regimes de irrigação (semanal e quinzenal), duas densidades de plantio (6 e 12 sementes/m), três estratégias de aplicação de produtos/agentes de controle biológico (aplicação do fungicida fluazinam, aplicação de Trichoderma spp. e testemunha sem aplicação) e quatro repetições. Não foi observado efeito significativo dos diferentes regimes de irrigação sobre o desenvolvimento do mofo-branco e sobre a produtividade do feijoeiro, em decorrência do regime de chuvas atípico ocorrido durante a execução do experimento. Maior severidade da doença foi observada no tratamento com densidade de plantio de 12 plantas/m, em comparação com a densidade de 6 plantas/m. Alguns componentes da produtividade foram maiores no tratamento com densidade de 6 plantas/m, comparado com 12 plantas/m. Esses resultados confirmam a viabilidade da redução da densidade de plantas em áreas infestadas por escleródios de S. sclerotiorum no controle do mofo-branco. O fungicida fluazinam destacou-se no controle da doença e ao proporcionar ganhos de produtividade, em comparação com a aplicação de Trichoderma spp. e com o tratamento sem a aplicação do fungicida e dos antagonistas. / Common beans are staple food in Brazil. Bean diseases caused by soilborne pathogens, like white mold by Sclerotinia sclerotiorum, have increased in the last years, especially during the “winter season”, in the irrigated areas, because the growers do not properly manage the irrigation, leading to high relative humidity and soil moisture conditions. No single treatment provides a satisfactory disease management, but some practices used simultaneously may be effective to control white mold. The objective of this work was to study the association of control strategies of bean white mold in an irrigated area, including biological control, plant density adjustments, water management and fungicide application. Two field experiments were carried out on May-August 2004 in an experimental field of the Federal University of Viçosa, MG, Brazil. This field is naturally infested with sclerotia of S. sclerotiorum. The trials were conducted as a 2 x 2 x 3 x 4 factorial in the randomized complete-block design: two irrigation frequencies (seven und 14 days), two plant densities (rows spaced 0.5 m apart with 6 or 12 plants/m), three disease control treatments (no control, application of fluazinam, application of Trichoderma spp.) and four replications. No significantly effect of the irrigation frequencies was observed either on the disease development or on the bean yield, probably due the untypical rain occurred during the experiments. Higher disease severity was observed in the plant density 12 plants/m, compared with 6 plants/m. Some yield components were higher in the plant density 6 plants/m, compared with 12 plants/m. These results confirm the viability of using lower plant density in sclerotia infested fields to control bean white mold. The fungicide fluazinam was efficient to control the disease and to improve the bean yield, compared to the treatments with no application of fungicide and application of Trichoderma spp. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-09-18T13:05:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1544966 bytes, checksum: 2d7c99e531dd25f2d0e04968d8f3fedf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-18T13:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1544966 bytes, checksum: 2d7c99e531dd25f2d0e04968d8f3fedf (MD5) Previous issue date: 2018-02-19 / Sclerotinia sclerotiorum, agente causal do mofo branco ou podridão de sclerotinia, infecta espécies de interesse agronômico, tais como aquelas destinadas à produção de grãos, fibras e hortaliças. Este estudo foi conduzido para avaliar: a variabilidade genética do patógeno; a sensibilidade aos fungicidas tiofanato-metílico (TM), fluazinam e procimidone de 238 isolados de S. sclerotiorum coletados em diferentes hospedeiros e regiões no Brasil; e a estabilidade fenotípica de isolados resistentes. Os marcadores microssatélites (SSR) e os grupos de compatibilidade micelial foram utilizados para acessar a estrutura genética da população. Vinte e dois MCGs e 53 genótipos foram identificados. A maioria dos isolados (67,7 %) foi classificado como MCG 1 ou 2. Sete grupos genéticos foram identificados. A população foi estruturada por MCG e não houve evidência de acasalamento aleatório. A população como um todo possui estrutura genética clonal. A sensibilidade aos fungicidas TM, fluazinam e procimidone foi avaliada com doses discriminatórias. O crescimento micelial de nove isolados resistentes e um isolado sensível ao TM foi avaliado durante 10 gerações. A taxa de crescimento de seis isolados resistentes reduziu com o passar das gerações. Não houve resistência a fluazinam ou procimidone. Treze isolados coletados na cultura do feijoeiro nos municípios de Cabeceira Grande (8 isolados) e Unaí (5 isolados), Minas Gerais, foram resistentes ao TM. A resistência ao TM foi causada pela substituição de leucina por fenilalanina no códon 240 do gene da β- tubulina (L240F). Isolados resistentes a TM foram encontrados apenas em uma região. Isolados resistentes coletados em Cabeceira Grande têm adaptabilidade reduzida. Em síntese, no Brasil predominam clones de S. sclerotiorum fortemente determinados por MCG, constataram-se isolados resistentes ao TM e para manejo do mofo branco, recomenda-se o uso de fungicidas com diferentes modo de ação. / Sclerotinia sclerotiorum causes white mold or sclerotinia stem rot and affects important crops such as grains, fibers and vegetables. This study was conducted to assess the genetic variability; the sensitivity to thiophanate-methyl (TM), fluazinam and procymidone of 238 isolates of S. sclerotiorum from different hosts and regions in Brazil; and the phenotypic stability of fungicide resistant isolates. Microsatellites (SSR) and mycelium compatibility groups (MCG) markers were used to assess the genetic structure of the population. Twenty-two MCGs and 53 multilocus genotypes (MLG) were identified. Most isolates (67.7 %) were distributed in either MCG 1 or 2. Seven genetic groups were detected. The population has a clonal structure largely determined by MCGs and there was no evidence of random mating. Fungicide sensitivity was assessed using the discriminatory doses for TM, fluazinam and procymidone. The stability of nine isolates TM-resistant and one sensitive was assessed after 10 transfers in culture medium without fungicide. Mycelial growth rate of six TM-resistant isolates reduced with successive transfers. There was no evidence of resistance to fluazinam or procymidone. Thirteen isolates collected in common bean fields in the municipalities of Cabeceira Grande (8 isolates) and Unaí (5 isolates), Minas Gerais state, were resistant to TM. The resistance was associated with the L240F mutation in the β-tubulin gene. Resistance to TM seems to be localized; and there is evidence for a fitness cost in resistant isolates.

O fungo Sclerotinia sclerotiorum, agente causal do mofo branco, encontra-se disseminado em todo o país e afeta mais de 400 espécies de plantas, dentre elas a cultura da soja, causando danos consideráveis no rendimento. A transmissão do patógeno ocorre por meio de sementes contendo micélio dormente ou pela presença de escleródios no lote, os quais podem permanecer viáveis por um longo período, dificultando o manejo da doença. Este trabalho teve como objetivos verificar a viabilidade do patógeno em sementes durante o armazenamento e seu efeito sobre o poder germinativo; comparar tamanhos de amostras de sementes visando à detecção do fungo; e avaliar a sensibilidade in vitro de S. sclerotiorum a fungicidas. Para avaliação da sobrevivência do patógeno, sementes de soja foram inoculadas, artificialmente, com três isolados de S. sclerotiorum, e armazenadas em duas condições, câmara fria e seca (20 ºC e 45% UR) e ambiente não controlado, durante oito meses. A cada dois meses foram realizados testes de sanidade pelo meio de cultura ágar-bromofenol (Neon), utilizando-se 4 repetições de 100 sementes, e testes de germinação, com 4 repetições de 50 sementes, pelo método do rolo de papel. No experimento de amostragem foram avaliadas dez amostras de sementes de soja pelo método do meio Neon, comparando-se quatro tamanhos de amostra: 400, 800, 1600 e 2400 sementes. Para avaliação da sensibilidade in vitro de S. sclerotiorum a fungicidas, foram utilizados 13 ingredientes ativos, em 7 doses e 5 repetições. Os valores da concentração inibitória de 50% (CI50) e 100% (CI100) foram estimados com base na percentagem de inibição do crescimento micelial. Além disso, realizaram-se a quantificação e pesagem dos escleródios formados após 15 dias de incubação. A presença do patógeno S. sclerotiorum, afetou negativamente a germinação das sementes, com redução média de 32% em relação à testemunha. Verificou-se diferença entre os isolados com relação à agressividade. O patógeno sobreviveu nas sementes em ambos os ambientes de armazenamento, porém, em ambiente controlado a redução na geminação das sementes foi de 14% e na incidência do fungo de 16%, enquanto que, em laboratório, esta redução foi de 23% na germinação e de 62% na incidência. Não houve diferença estatística com relação à quantidade de sementes amostradas na detecção de S. sclerotiorum, entretanto, constatou-se maior frequência de ocorrência do patógeno à medida que o número de sementes amostrado foi maior. Todos os fungicidas foram capazes de reduzir o crescimento micelial de S. sclerotiorum, bem como a produção de escleródios, sendo que os ingredientes ativos piraclostrobina, carbendazim, tiabendazol e tiofanato metílico, além de apresentarem CI50 inferior a 1 mg L-1, também inibiram totalmente a formação de escleródios em concentrações inferiores a 5 mg L-1. / The fungus Sclerotinia sclerotiorum, the causal agent of white mold is spread throughout the country and affects more than 400 species of plants, including soybean, causing considerable decrease in yield. The pathogen transmission occurs through seeds with dormant mycelium or by the presence of sclerotia in the lot, which can remain viable for a longer period, making hard the disease management. This study aimed to verify the viability of the pathogen in seeds during the storage period and its effect on germinative power; compare sizes of seed samples to determine the presence of the fungus; and to evaluate the in vitro sensibility of S. sclerotiorum to fungicides. To determine the pathogen survival, soybean seeds were inoculated artificially with three isolates of S. sclerotiorum, and stored into two conditions, cold and dry chamber (20 °C and 45% RU) and in uncontrolled environment, for eight months. Every two months health tests were performed by culture media bromophenol agar (Neon), using 4 repetition of 100 seeds, and germination tests, with 4 repetition of 50 seeds, by the method of the paper roll. During the experiment of sampling, ten samples of soybean seeds were evaluated by the method of media Neon, comparing four sample sizes: 400, 800, 1600 and 2400 seeds. To evaluate the in vitro sensibility of S. Sclerotinia to fungicides were used 13 active ingredients, in 7 doses and 5 repetitions. The values of the 50% inhibitory concentration (IC50) and 100% (IC100) were estimated based on the percentage inhibition of the mycelial growth. In addition, it was performed the quantification and weighing of sclerotia formed after 15 days of incubation. The pathogen S. sclerotiorum in soybean seeds affected negatively the germination of seeds, with an average reduction of 32% compared to the control. There was difference between the isolates in relation to aggressiveness. The pathogen survived in seeds in both storage environments, however, under controlled environment, the decrease in the germination of the seeds was 14% and in its incidence was 16%, while in laboratory this reduction was 23% in the germination and 62% in the incidence. There was no statistical difference in the quantity of seeds sampled in the detection of S. sclerotiorum, however, a higher frequency of pathogen occurrence was verified as the number of sampled seeds was enlarged. All fungicides were able to reduce the mycelial growth of S. sclerotiorum and sclerotia production, and the active ingredients pyraclostrobin, carbendazim, thiabendazole and thiophanate methyl, besides having IC50 of less than 1 mg L-1 also completely inhibited the formation of sclerotia in concentrations less than 5 mg L-1.

The White mold or Sclerotinia stem rot, caused by the fungus Sclerotinia sclerotiorum, has become a serious problem in soybean production areas. The objectives of this work were to evaluate whether in different agricultural regions of Brazil, the fungus S.sclerotiorum, has a behavioral similarity at the level of symptoms on certain soybean genotypes, to evaluate which genotypes can be used for each region and which materials can be used for plant breeding. The experiment was conducted at the University of Santa Maria, in a growth chamber with controlled temperature and humidity, between November 2016 and February 2017, with three isolated of S.sclerotiorum, collected in the cities of Itaara and Passo Fundo in Rio Grande do sul and Jataí in Goias, in the season of 2015/2016, on a total number of 56 soybean genotypes. The inoculation of the isolates was performed by the straw test method when the plants were in the growth stages V3/V4. For all genotypes, it was evaluated average lesion size, in centimeters, five days after inoculation. Each treatment was consisted of seven replications, each replication being one plant. Analyzes resulted in the formation of four symptom levels, being susceptible, intermediate, moderately resistant and resistant. Analyzes demonstraded that for the three isolates, different resistant reaction levels were obtained for the tested genotypes. It was verified that the isolate of Passo Fundo - RS, showed resistant pattern the genotype CD 2655 and as susceptible patterns, five genotypes. For the reaction to the Itaara - RS isolate, there were no resistant reactions and nine genotypes were susceptible. For the isolate from Jatai - GO, six genotypes were resistant and one susceptible, NS4823. The use of the UPGMA grouping method, created for each isolate, showed no correlation emphasizing that the isolates have genetic diversity. / O mofo branco ou podridão branca da haste, causada pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum, tem se tornado um problema grave nas áreas de produção de soja. Os objetivos deste trabalho foram avaliar se em diferentes regiões agrícolas do Brasil, o fungo presente S. sclerotiorum, tem similaridade de comportamento ao nível de sintomas sobre determinados genótipos de soja, avaliar quais genótipos podem ser usados para cada região, bem como quais materiais podem ser utilizados pelo melhoramento genético. O experimento foi conduzido na Universidade Federal de Santa Maria, em câmara de crescimento com temperatura e umidade do ar controladas, entre os meses de novembro de 2016 a fevereiro de 2017, com um número de 3 isolados de S. sclerotiorum, coletados nas cidades de Itaara e Passo Fundo no Rio Grande do Sul e Jataí em Goiás, na safra agrícola 2015/2016, sobre um número total de 56 genótipos de soja. A inoculação dos isolados foi realizada pelo método straw test quando as plantas estavam em estádio fenológico de V3/V4. Avaliou-se o tamanho médio da lesão, em centímetros, cinco dias após a inoculação, para todos os genótipos. Cada tratamento foi constituído de sete repetições, sendo cada repetição uma planta. As análises resultaram na formação de quatro níveis de sintomas, sendo suscetível, intermediário, moderadamente resistente e resistente. As análises demonstraram que para os 3 isolados se obteve níveis de reação a resistência distintos para os genótipos testados. Foi verificado que o isolado de Passo Fundo – RS apresentou como padrão resistência o genótipo CD 2655 e como padrões suscetíveis 5 genótipos. Para a reação ao isolado Itaara - RS não houve reações de resistência e 9 genótipos foram suscetíveis. Para o isolado de Jataí - GO 6 genótipos foram resistentes e um suscetível, NS4823. A utilização do método de agrupamento UPGMA criado para cada isolado mostrou-se não possuir correlações, ressaltando de que os isolados têm diversidade genética.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:37:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 235692 bytes, checksum: ee18b34c6def906f1cea8ca756673794 (MD5) Previous issue date: 2011-07-27 / Sclerotinia sclerotiorum causes white mold, stem rot, watery rot and white rot disease in many important crops such as bean, soybean, cotton, tomato, and pea. The pathogen produces sclerotia that can survive in the field for several years, which hinders white mold control. In the perspective of assessing biocontrol in the management of the disease, we tested the efficiency of Clonostachys rosea in parasitizing sclerotia of the pathogen and reducing their viability. Thus, we studied in vitro the survival of sclerotia either dormant or conditioned to myceliogenic germination in soil samples that were untreated, pasteurized, or autoclaved, at different levels of both moisture and temperature, and infested with varying conidia concentrations of C. rosea. Temperature, moisture, stages of sclerotia, and conidia concentration did not affect the germination of sclerotia. Clonostachys rosea inhibited germination of sclerotia only in the autoclaved soil. Moisture, temperature, and conidia concentration had no effect in the recovery of C. rosea from soil. Although C. rosea have not affected the viability of sclerotia of S. sclerotiorum in untreated and pasteurized soils, it markedly reduced sclerotia viability in the autoclaved soil. The low competitiveness of C. rosea, and consequently its low efficiency in parasitism, is credited to the absence of external nutrient sources to support its establishment in both untreated and pasteurized soils. New studies to evaluate the effectiveness of these sources, particularly in soils under natural conditions, are suggested. / Sclerotinia sclerotiorum causa o mofo branco, podridão da haste, podridão aquosa ou podridão branca, doença importante em várias culturas como feijão, soja, algodão, tomate e ervilha. O patógeno produz escleródios que podem sobreviver no campo por vários anos, o que dificulta seu controle. Na perspectiva de avaliar o biocontrole no manejo do mofo branco, testou-se a eficiência de Clonostachys rosea, em parasitar escleródios do patógeno e reduzir a viabilidade dos mesmos. Estudou-sein vitro a sobrevivência de escleródios dormentes e condicionados para germinação miceliogênica, em solo natural, pasteurizado e autoclavado, em diferentes níveis de umidade e temperatura, e infestados com concentrações variadas de conídios de C. rosea. A temperatura, umidade, estádios do escleródio e concentração de conídios do antagonista não interferiram na germinação dos escleródios. Clonostachys rosea inibiu a germinação dos escleródios apenas no solo autoclavado, independentemente do fator estudado. Não se detectou interferência da umidade, temperatura do solo e concentração de conídios em recuperar o antagonista do solo. Apesar de C. rosea não haver afetado a viabilidade de escleródios de S. sclerotiorum em solos natural e pasteurizado, reduziu marcantemente a viabilidade em solo autoclavado. Credita-se abaixa competitividade do antagonista, e consequentemente baixa eficiência no parasitismo, à inexistência de fonte externa de nutrientes para auxiliar seu estabelecimento nos solos natural e pasteurizado. Sugerem-se novos trabalhos, para se avaliar a eficácia dessas fontes, principalmente em solos em condições naturais.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-19T11:06:39Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Santos Marques - 2014.pdf: 4633133 bytes, checksum: 8058e7f850a7ea713f7c77b0ad35cc32 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-05-19T11:08:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jacqueline Santos Marques - 2014.pdf: 4633133 bytes, checksum: 8058e7f850a7ea713f7c77b0ad35cc32 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T11:08:30Z (GMT). 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And on the pathossystem Phaseolus vulgaris-Sclerotinia sclerotiorum was evaluated biochemical and molecular aspects (RT-qPCR) involved in the mechanism of plant defense, into a kinetic treatment and infection (12, 24 e 48 hours). The data show that the tested compounds were significantly relevant (P<0.01) to growth inhibition pathogen’s mycelium and cell viability in vitro and in the formation of sclerotia of the pathogen a positive correlation between percent inhibition and the concentration of active compounds applied was observed. The minimum inhibitory concentration (MIC) for S. sclerotiorum was 0.6% (v/v) ethanol extract of leaves from E. uniflora and the 100 ppm of the essential oil. In Bioassays in plants, the treatment with ethanol extract or essential oil from Eugenia uniflora and rutin inhibited the formation of necrotic area in common bean leaves 48 hours after inoculation. Biochemical analysis showed that the compounds induced 12 hours after treatment the activation of key proteins related to plant defense, chitinases, β-1,3- glucanase, phenylalanine ammonia lyase, peroxidases and polyphenoloxidases. Molecular analysis showed that treatment with ethanolic extract, quercetin and rutin in healthy plants activated pathogenesis-related genes (PRs) at different times into the kinetic treatment, and that these genes are highly expressed in plants infected compared to the pretreated and infected plants. The results of this research suggest that the effects of the ethanol extract, flavonoids and oil from Eugenia uniflora are potential bioactive molecules to reduce the severity of disease white mold in bean leaves. / Os extratos e óleos essenciais de plantas são moléculas bioativas de grande interesse para a indução de resistência em plantas e no controle de fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do extrato etanólico e óleo essencial de folhas de E. uniflora e duas frações flavonoides comerciais, quercetina e rutina como compostos bioativos para o controle de mofo branco, causado pelo fungo Sclerotinia sclerotiorum, em feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Os compostos foram testados sobre patógeno através do crescimento micelial, viabilidade celular, esclerogênese, morfologia celular e aspectos bioquímicos. E sobre o patossistema Phaseolus vulgaris-Sclerotinia sclerotiorum foi avaliado aspectos bioquímicos e moleculares (RT-qPCR) envolvidos no mecanismo de defesa da planta, dentro de uma cinética de tratamento e infecção (12, 24 e 48 horas). Os dados mostram que os compostos testados foram significantemente (P<0.01) relevantes na inibição do desenvolvimento e viabilidade celular in vitro do micélio e na formação de escleródios do patógeno, sendo observada uma correlação positiva entre percentual de inibição e as concentrações dos compostos avaliadas. A concentração inibitória mínima (MIC) para o S. sclerotiorum foi de 0.6% (v/v) do extrato etanólico de folhas de E. uniflora e de 100 ppm do óleo essencial. Nos bioensaios em plantas, o tratamento com extrato etanólico ou óleo essencial de folhas de Eugenia uniflora e rutina inibiram a formação de necrose em folhas de feijoeiro comum com 48 horas ápos inoculação. A análise bioquímica mostrou que os compostos induzem com 12 horas após tratamento a ativação das principais proteínas relacionadas à defesa da planta, quitinases, β-1,3- glucanase, fenilalanina amônia-liase, peroxidases, e polifenoloxidases. A análise molecular mostrou que o tratamento com extrato etanólico, quercetina e rutina em plantas sadias ativaram genes relacionados à patogênese (PRs) em diferentes tempos dentro da cinética de tratamento, e que tais genes são altamente expressos em plantas infectadas em comparação as plantas pré tratadas e infectadas. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que o extrato etanólico, flavonoides e o óleo essencial de folhas de Eugenia uniflora são moléculas bioativas potenciais para reduzir a severidade da doença mofo branco em plantas de feijoeiro comum.