Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T00:59:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:45:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327071.pdf: 10727675 bytes, checksum: 7885ff7ed16785edf9c7164f271b1a5b (MD5) / A 1a,25-diidroxivitamina D3 (1,25-D3) é o metabólito ativo da vitaminaD3. A 1,25-D3 é crítica para a manutenção da reprodução, já que aredução da fertilidade foi observada em ratos machos deficientes devitamina D. Este hormônio exerce ações via receptor nuclear (VDRn) eatravés de vias de respostas rápidas associadas a um receptor presente namembrana plasmática (VDRmem). As células de Sertoli são o principalcomponente estrutural do túbulo seminífero, e são responsáveis pelaregulação do fluxo de nutrientes para as células germinativas emdesenvolvimento. Dois fatores importantes no metabolismo das célulasde Sertoli são a atividade da enzima gama-glutamil transpeptidase(GGT) e a secreção de lactato para a nutrição das células germinativas.O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito e o mecanismo de ação da1,25-D3 na atividade da enzima GGT e no metabolismo energéticoatravés da secreção de lactato e captação de glicose em células de Sertolide ratos de 30 dias de idade. Neste trabalho foi demonstrado que a 1,25-D3 aumentou a atividade da GGT em 6 h através da interação com oreceptor VDRmem e possível ativação da proteína cinase A (PKA), eem tempos mais prolongados o bloqueio da síntese proteica inibiu oefeito do hormônio, sugerindo que a regulação da atividade da GGT pela1,25-D3 também esteja relacionada à expressão da enzima. Como a GGTparticipa na regeneração da glutationa (GSH), os níveis de GSH foramestudados nas células de Sertoli, porém não houve alteração destesníveis no tratamento com a 1,25-D3. O lactato é o substrato energéticopreferencial das células germinativas, e foi verificado que o tratamentodas células de Sertoli com a 1,25-D3 estimulou a liberação de lactato,além de aumentar a captação de [14-C]-2-Deoxi-d-glicose (14C-DG) e aatividade intracelular da enzima lactato desidrogenase (LDH). Afosforilação oxidativa foi verificada nas células de Sertoli através derespirometria de alta resolução, e foi observado que a respiraçãomitocondrial não foi alterada nas células tratadas com a 1,25-D3corroborando com o aumento da produção de lactato pelas células deSertoli. Neste ensaio também foi observada uma diminuiçãosignificativa na produção de espécies reativas de oxigênio. Foi medida aatividade da enzima LDH extracelular, onde foi demonstrado que a1,25-D3 não possui capacidade citotóxica. Como conclusão destetrabalho, a 1,25-D3 aumenta a atividade da GGT e secreção de lactato,parâmetros importantes da função das células de Sertoli, o que sugereque este hormônio representa um dos fatores importantes na regulaçãodo metabolismo das células de Sertoli, destinado a aumentar ofornecimento de nutrientes e melhorar os mecanismos de defesaantioxidantes para o desenvolvimento normal e completo da ondaespermatogênica.<br> / Abstract: 1a,25-diidroxivitamin D3 (1,25-D3) is the biologically active metaboliteof vitamin D3. 1,25-D3 is critical for the maintenance of normalreproduction since reduced fertility is observed in vitamin D-deficientmale rats. This hormone acts through a nuclear receptor (VDRn) and viarapid response pathways associated to a putative membrane receptor(VDRmem). Sertoli cells are the most important structural component ofseminiferous tubules, and they are responsible for regulating the nutrientinflux for germ cells development. Two important factors in Sertoli cellmetabolism regulation are the gamma-glutamyl transpeptidase (GGT)enzime activity and lactate secretion for germ cell nutrition. The aim ofthe present work was to study the effect and mechanism of action of1,25-D3 on GGT activity and on metabolic activity through lactatesecretion and glucose uptake in 30-day-old rat Sertoli cells. The resultsshow that 1,25-D3 increased GGT activity in 6 h through interactionwith VDRmem and possibly with protein kinase A (PKA) activation,and in longer incubations the protein synthesis inibition prevented thehormone effect, suggesting that the GGT activity regulation by the 1,25-D3 is also related to enzyme synthesis. As GGT is also related togluthatione (GSH) regeneration, the GSH levels in Sertoli cells wereverified, but no alteration was observed in cells incubated with 1,25-D3.Lactate is the preferred energetic substract of germ cells, and it wasobserved that Sertoli cells treatment with 1,25-D3 increased the lactaterelease, and also [14-C]-2-Deoxy-d-glucose (14C-DG) uptake and lactatedehydrogenase (LDH) intracellular activity. The oxidativephosphorylation in Sertoli cells was verified through high resolutionrespirometry, and it was observed that mitochondrial respiration was notaltered in cells treated with 1,25-D3, although the increased lactaterelease in these cells. In this essay it was also observed a decrease inoxygen reactive species production. The extracellular LDH activity wasmeasured and it was demonstrated that 1,25-D3 doesn?t have citotoxiccapacity. From this work, it is concluded that 1,25-D3 regulates GGTactivity and lactate release, significant parameters of Sertoli cellfunction, suggesting that this hormone represents an important factor inthe regulation of Sertoli cell metabolism. Also, 1,25-D3 improvescellular antioxidant defenses to the ongoing spermatogenesis.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:18Z : No. of bitstreams: 1 000848861.pdf: 11169241 bytes, checksum: eacb67ad77e7ad2c6ee24ec1bda84e14 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / The study of gonadal development allows to understand some factores that can interfere in its development and futurely, in animal reproductive profile, in adult life. Considering the cows body condition and physiological influences on the development of fetal organs during the pregnancy, This experiment aimed to evaluate the fetal testicular and ovarian morphological development in beef cattle of Nelore breed and compare it to maternal body condition (carcass weight - CW, carcass yield grade - CYG, age and antral follicle counts - ACF). There were collected 372 bovines fetus from Nellore cows (210 females and 162 males), aging between 3 and 8 months, obtained from a slaughterhouse in Araçatuba region - SP. Blood samples from the cows were collected to leptin, insulin and progesterone plasmatic quantification. The gonadal weight (g) and volume (mm³) were measured. The fetal gonads were submitted to classical histology proceedings and 3 μm thickness were cut, in 210 μm intervals. During gestation, both fetus ovarian weight and volume were correlated with the number of ovarian follicles (NOF) (r=0,78, p<0,0001 and r=0,80, p<0,0001) and in male, both testicular weight and volume were correlated with Sertoli cells count (CS; r=0,84, p<0,0001 and r=0,92, p<0,0001), Leydig cells count (LC; r=0,80, p<0,0001 and r=0,90, p<0,0001) and germ cells count (GC; r=0,84, p=<0,0001 and r=0,93, p<0,0001). Maternal age was correlated with primary follicles count (r=0,14, p=0,05) in the fetal ovaries...(Complet4 abstract click eletronic acess below)

Made available in DSpace on 2016-09-27T13:40:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-04-12. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-27T13:45:23Z : No. of bitstreams: 1 000178132.pdf: 1208797 bytes, checksum: 13414d12b43a559456935af3c18cd62e (MD5) / A literatura foi revisada em relação à célula de Sertoli de peixes teleósteos, levando em conta seus aspectos morfofuncionais, sua importância, a terminologia e a interação entre ela e outras células do testículo. No universo de 76 trabalhos pesquisados, foi notado que as células de Sertoli têm função de fagocitose, nutrição das células germinativas, esteroidogênese, participa na formação do cisto de células germinativas, e na formação da barreira hemotesticular. Além dessas funções, nos peixes teleósteos com fertilização interna a célula de Sertoli participa na formação dos dúctulos eferentes e das estruturas especializadas para levar grupos de espermatozóides para dentro do oviduto. A despeito da diferença entre a morfologia e a localização das células de Sertoli de mamíferos, a célula encontrada nos teleósteos foi considerada homóloga à mesma, devido à similaridade de funções / The literature was reviewed around the Sertoli cells in teleost fish, regarding their morphological and functional aspects, importance, terminology and interaction with other testis cells. In the 76 reports searched, it was observed that the Sertoli cells have these functions: phagocytose, nutrition of germinative cells, take part in development of germinative cists, development of the hemotesticular barrier and efferent ducts, and formation of the specialized structures to carry the cluster of sperm in the female oviduct of teleost species that have internal fertilization. In spite of the morphological differences and localization of the Sertoli cells of mammals, the cell found in the teleost was considered homologs to this one, because its similarity in functions

Orientador: Rafael Henrique Nóbrega / Coorientador: Emanuel R. M. Martinez / Banca: Breno Henrique Caneguim / Banca: Maria Inês Borella / Resumo: Neste estudo, caracterizamos o nicho espermatogonial em carpa avaliando a expressão do amh em testículos com alta ou baixa expressão. Para tanto, vinte carpas comum adultas receberam pulsos de BrdU (5-bromo-2'-deoxiuridina), durante 3 dias consecutivos (2 injeções intraperitoneal/dia), e os testículo foram amostrados 4 horas, 1, 2 e 3 semanas após o último pulso. As espermatogônias do tipo A indiferenciada foram as únicas células germinativas capazes de reter BrdU após 3 semanas. Curiosamente, o BrdU diluiu mais rapidamente entre as espermatogônias tronco"ativa" enquanto que nas espermatogônias tronco"reserva", manteve-se estável. As espermatogônias tronco ―reserva‖ foram localizados próximas do interstício, enquanto as espermatogônias tronco ―ativa‖ foram encontrados na região intertubular. Algumas células de Sertoli foram BrdU-positivas depois de 3 semanas de pulso. Entre as células de Sertoli BrdU-positivas, ~ 30-40% estão "livres", enquanto que ~ 60-70% estão associadas com células germinativas. Isto sugere a existência de células de Sertoli tronco, que estão localizados no nicho espermatogonial. O gene amh foi clonado e caracterizado em carpa comum e sua expressão ocorre nas células de Sertoli que envolvem espermatogônias indiferenciadas. Os hormônios folículo-estimulante e estrógeno diminuem a expressão do amh. Em animais que possuem alta expressão de amh, possuem pouca atividade proliferativa, já com elevada proliferação, os níveis de amh diminuem significativamente. Desta forma, sugere-se que a dimunuição do amh, cria uma condição permissiva para proliferação e diferenciação das espermatogônias em carpa. Tais resultados servirão de base para aplicar este conhecimento para mediar a puberdade precoce em espécies nativas/exóticas de importância econômica na aquicultura / Abstract: In this study, we start characterizing the spermatogonial niche in carp by evaluating amh expression in testes with high or low proliferative activity. 20 adult carp received pulses of BrdU (5-Bromo-2'-deoxyuridine), during 3 consecutive days (2 intraperitoneal injections/day), and testis was sample dafter 4 hours, and 1, 2 and 3 weeks after the last pulse. Type Aund were the only germ cells able to retain BrdU after a long period of chase (3 weeks). Interestingly, BrdU disappeared more quickly from ―active‖ stem cell while in ―reserve‖ stem cell, it remained stable. The ―reserve‖ stem cell label-retaining cells were located near the interstitium, while ―active‖ stem cell were found in the intertubular area. Some Sertoli cells were BrdU-positive after 3 weeks of pulse. Among the slow-dividing, BrdU-positive Sertoli cells, ~30-40% are ―free‖, and ~60-70% associated with germ cells. This suggests the existence of Sertoli stem cells which are located in the spermatogonial niche. The amh gene was cloned and characterized in common carp, and the amh is expressed in Sertoli cells involving undifferentiated spermatogonia. The follicle stimulating hormone and estrogen decrease amh expression. It was also shown that animals with high expression of amh, have low proliferative activity. When the testes with high proliferation, amh levels decrease significantly. Thus, it is suggested that counts down the amh creates a permissive condition for proliferation and differentiation of spermatogonial in carp. These results provide a basis for applying this knowledge to mediate early puberty in exotic/native species economically important in aquaculture / Mestre

Orientadora: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Resumo: A literatura foi revisada em relação à célula de Sertoli de peixes teleósteos, levando em conta seus aspectos morfofuncionais, sua importância, a terminologia e a interação entre ela e outras células do testículo. No universo de 76 trabalhos pesquisados, foi notado que as células de Sertoli têm função de fagocitose, nutrição das células germinativas, esteroidogênese, participa na formação do cisto de células germinativas, e na formação da barreira hemotesticular. Além dessas funções, nos peixes teleósteos com fertilização interna a célula de Sertoli participa na formação dos dúctulos eferentes e das estruturas especializadas para levar grupos de espermatozóides para dentro do oviduto. A despeito da diferença entre a morfologia e a localização das células de Sertoli de mamíferos, a célula encontrada nos teleósteos foi considerada homóloga à mesma, devido à similaridade de funções / Abstract: The literature was reviewed around the Sertoli cells in teleost fish, regarding their morphological and functional aspects, importance, terminology and interaction with other testis cells. In the 76 reports searched, it was observed that the Sertoli cells have these functions: phagocytose, nutrition of germinative cells, take part in development of germinative cists, development of the hemotesticular barrier and efferent ducts, and formation of the specialized structures to carry the cluster of sperm in the female oviduct of teleost species that have internal fertilization. In spite of the morphological differences and localization of the Sertoli cells of mammals, the cell found in the teleost was considered homologs to this one, because its similarity in functions / Mestre

Orientador: Merielen Garcia Nascimento e Pontes / Resumo: Criptorquidia, ou não descida testicular, é uma das anormalidades urogenitais mais comum em meninos recém-nascidos e um dos principais fatores de risco para a infertilidade e câncer testicular. Tem sido proposto que o criptorquidismo, baixa qualidade espermática, hipospádia e tumor testicular de células germinativas (TTCG) compreendem a síndrome de disgenesia testicular (SDT), que tem origem comum durante a vida fetal. A criptorquidia induz degeneração do epitélio seminífero com depleção de células germinativas, distúrbios em células de Leydig e de Sertoli e diminuição do diâmetro dos túbulos seminíferos. A correcção cirúrgica da criptorquidia (orquidopexia) tem sido utilizada a fim de diminuir o risco de infertilidade e câncer testicular. No entanto, o melhor tempo para realizar esta cirurgia, a fim de obter os melhores resultados tem sido uma preocupação. Além disso, não existe um modelo experimental disponível na literatura que explore alterações morfológicas testiculares associadas à criptorquidia e orquidopexia. Neste estudo, criptorquidismo foi induzido em ratos Sprague-Dawley com 3 semanas de vida; orquidopexia foi realizada em três momentos diferentes (3, 5 e 9 semanas após a cirurgia de criptorquidia), e os animais de cada grupo foram sacrificados após 3 e 8 semanas de recuperação. As análises histológicas e estimativas quantitativas como a média do diâmetro do túbulo seminífero (MSTD), incidência de vacúolos no epitélio, e o número de células de Sertoli por túbulo, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptorchidism, or undescended testis, is one of the most common urogenital abnormalities in newborn boys and one of the main risk factors for infertility and testicular cancer. It has been proposed that cryptorchidism, low sperm quality, hypospadia and testicular germ cell tumor (TGCT) comprise the testicular dysgenesis syndrome (TDS) and that they have a common origin during the fetal life. Cryptorchidism induces seminiferous epithelium degeneration with germ cell depletion, Leydig and Sertoli cell disorders and decreased tubule diameter. The surgical correction of cryptorchidism (orchidopexy) has been applied in order to decrease the risk for infertility and testicular cancer. However, the best moment to perform this surgery in order to obtain successful results has been a concern. Moreover, there is no experimental model available in the literature that explores comprehensively testicular morphological alterations associated to cryptorchidism and orchidopexy. In this study, cryptorchidism was induced in 3-week old Sprague-Dawley rats; orchidopexy was performed at three different moments (3, 5 and 9 weeks after cryptorchidism surgery), and the animals of each group were sacrificed after 3 and 8 weeks of recovery. Histological analyses, and quantitative estimates such as seminiferous tubule diameter (MSTD), incidence of vacuoles in the tubules, and number of Sertoli cells per tubule, and immunohistochemistry for cytokeratin 18 were performed to evaluate testicular alteratio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Ana Paula Alves Favareto / Banca: Patricia Fernanda Felipe Pinheiro / Resumo: As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Abstract: Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334702.pdf: 1926534 bytes, checksum: e711854e530b3173555ba9ad179c9cfd (MD5) Previous issue date: 2015 / O glifosato é um herbicida utilizado para inibir o crescimento de plantas daninhas. Este herbicida é solúvel em água e, quando aplicado em sistemas terrestres, infiltra no solo atingindo os ecossistemas aquáticos e consequentemente, afetando organismos não-alvo. O objetivo deste estudo foi caracterizar os efeitos de 65 µg/L glifosato sobre a organização estrutural e ultraestrutural das células somáticas e germinativas durante a espermatogênese de Danio rerio. A concentração de glifosato utilizada corresponde ao limite máximo estabelecido pelo CONAMA para águas de abastecimento par consumo humano. Os resultados mostram aumento significativo de micronúcleos, além de aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) nos machos expostos por 360 h. A análise estrutural permitiu o reconhecimento em todos grupos de três estágios de cistos germinativos organizados próximos a parede dos testículos, que correspondem aqueles compostos por: (i) espermatogônias, (ii) espermatócitos, (iii) espermátides (iniciais e tardias); além da presença de espermatozoides no lúmen do túbulo seminífero. Na análise ultraestrutural observou-se alterações nas células de Sertoli, com perda da densidade do citoplasma e das organelas, bem como o aparecimento de estruturas com aspecto vesicular. Além dessas, foram observadas alterações das interações entre células de Sertoli e células germinativas e perda das pontes citoplasmáticas entre as células germinativas. Na análise de expressão da proteína envolvida no estresse celular foi observado no grupo exposto por 144 h, aumento significativo de HSP70 induzível, a qual não foi mais observado em 360 h. Na quantificação de FASL, envolvida na indução à apoptose, observou-se aumento significativo nos machos expostos por 360 h. Embora neste estudo, tenha sido reconhecido uma aumento de FASL, não foram observadas modificações na expressão nenhuma das proteínas de ativação à apoptose investigadas (BCL2, BAK e caspase 3). Os efeitos adversos do glifosato sobre os testículos, principalmente sobre células de Sertoli, são um importante indicativo sobre as consequências na reprodução de peixes, que podem abranger desde o nível celular, sistêmico e populacional. Por fim, este estudo demonstrou a importância de se investigar a toxicidade do glifosato sobre a reprodução masculina, utilizando testículos de peixe como modelo experimental.<br> / Abstract : Glyphosate is herbicide used to inhibit the growth of weeds. This herbicide is soluble in water, and when applied in terrestrial systems, glyphosate infiltrates into the soil, reaching aquatic ecosystems and consequently affecting nontarget organisms. The aim of this study was to characterize the effect of 65 µg/L glyphosate on the structural and ultrastructural organization of somatic and germ cells during Danio rerio spermatogenesis. Glyphosate concentration used corresponds to the maximum level stated by CONAMA for waters for human consumption. Our results showed significant increase of the micronuclei, as well as, significant increase in GSI on males exposed to glyphosate for 360 h. Structural analysis allowed the recognition in all groups of three germ cysts stages, organized near to the testes wall, that correspond to those that contains: (i) spermatogonia, (ii) spermatocytes (iii) spermatids (early and late), and the presence of sperm in the lumen of the seminiferous tubule. On the ultrastructural analysis, alterations were observed in Sertoli cells, with density loss of the cytoplasm and organelles, as well as, the appearence of structures with vesicular aspect. Moreover, alterations on interactions between Sertoli and germ cells and loss of cytoplasmic bridges between the germ cells. On the analysis of protein expression involved in cell stress, was observed after 144 h a significant increase in the inducible HSP70 protein, which is no observed at 360 h. In the quantification of FASL, involved in apoptosis induction, there was a significant increase in males exposed for 360 h. Although in this study has been recognized a FASL increasing, there was no observed modifications on expression of the investigated proteins that activate apoptosis (BCL2, BAK and Caspase 3). The adverse effects of glyphosate on the testicles, mainly on Sertoli cells, are an important indicative of the consequences on fish reproduction, which may include from the cellular, systemic and population levels. Finally, this study demonstrated the importance of investigating the glyphosate toxicity on male reproduction, using fish testicles as experimental model.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:00Z : No. of bitstreams: 1 000847999.pdf: 2110688 bytes, checksum: 3cfbc2629db1b4c973c6917a12690b53 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As células de Sertoli, encontradas no epitélio seminífero, formam a barreira hematotesticular através de suas junções comunicantes e de oclusão, responsável por proporcionar um ambiente protegido e coordenar o processo espermatogênico, fundamental para a manutenção da fertilidade masculina. A dinâmica de formação da barreira hematotesticular está diretamente relacionada com o equilíbrio entre síntese e degradação de moléculas especializadas, e sofre influência através de regulação androgênica e de fatores de crescimento específicos como o TGF-β2, sendo particularmente sensível aos fatores ambientais. A exposição à desreguladores endócrinos (DEs), capazes de interferir na modulação da barreira, pode levar a infertilidade. Atualmente o fator masculino pode ser responsável por 30-50% dos casos de infertilidade, sendo de grande importância o estabelecimento da relação entre a exposição aos DEs e o processo de formação dos gametas. Este estudo objetivou correlacionar a ação de dois desreguladores endócrinos, o Monobutil ftalato (MBP) e o Bisfenol A (BPA), em diferentes períodos de exposição, a partir de uma dose de baixa toxicidade, sobre a linhagem HSec de células de Sertoli humanas (in vitro) e sua possível ação sobre proteínas da barreira hematotesticular e proteínas regulatórias envolvidas na modulação da degradação e síntese dessa barreira. Para tal, as células da linhagem HSec foram cultivadas em meio específico para a expansão e submetidas à exposição ao MBP e ao BPA em baixas doses por 6 e 48 horas. Em seguida, as células foram isoladas e submetidas à extração de proteínas. Foram analisadas as proteínas: Ocludina, Ncaderina, β-catenina e Receptor de Andrógeno (AR) por Western Blot. Os resultados foram comparados para os dois agentes nos diferentes períodos de exposição em relação às células não expostas, mostrando que os dois agentes foram capazes de reduzir a... / Sertoli cells, found in the seminiferous epithelium, form the blood-testis barrier via their gap and tight junctions, responsible for providing a protected environment and coordinate the spermatogenic process, essential for male fertility maintenance. The dynamics of the blood-testis barrier formation is directly related to the balance between synthesis and degradation of specialized molecules, and is influenced by androgen regulation and specific growth factors such as TGF-β2, being particularly sensitive to environmental factors. Exposure to endocrine disruptors (EDs), which interfere in the barrier modulation, can lead to infertility. Currently the male factor may be responsible for 30-50% of infertility cases, being the establishment of the relationship between exposure to EDs and the process of gametes formation of great importance. This study aimed to correlate the action of two EDs, monobutyl phthalate (MBP) and bisphenol A (BPA) in different periods of exposure, from a dose of low toxicity on the HSec lineage of human Sertoli cells (in vitro) and its possible action on proteins of blood-testis barrier and regulatory proteins involved in modulation of degradation and synthesis of this barrier. To this end, cells were cultured in HSec lineage specific medium and exposed to MBP and BPA in low doses for 6 and 48 hours. Then, cells were isolated and subjected to protein extraction. Proteins analyzed were: occludin, Ncadherin, β-catenin and Androgen Receptor (AR) by Western blot. The results were compared for the two agents in different exposure times to non-treated cells, showing that both agents were able to reduce the expression of important BTB proteins, presenting potential for disrupting the structure and maintenance of the barrier and, consequently, sperm production and male fertility