A produção da soja em escala comercial tem sido viabilizada técnica e economicamente, entre outros fatores, devido a fixação biológica do N2 por estirpes de Bradyrhizobium que podem suprir a demanda de nitrogênio desta leguminosa. No entanto, a variabilidade existente nas estirpes de Bradyrhizobium spp recomendadas para inoculação da soja tem comprometido o processo simbiótico. Variantes espontâneos isolados a partir das estirpes de B. japonicum (SEMIA 5079 e SEMIA 5080) e B. elkanii (SEMIA 587 e SEMIA 5019) foram avaliados quanto ao desempenho simbiótico (eficiência, nodulação em diferentes hospedeiros e competitividade), indução de clorose foliar em diferentes hospedeiros, morfologia colonial, habilidade de metabolização de carboidratos e tolerância à salinidade em diferentes temperaturas de incubação. Nas etapas de eficiência simbiótica e competitividade foi usada a cultivar de soja BR-16 e na avaliação da nodulação e indução de clorose foliar foram usados os seguintes hospedeiros: soja (Glycine max) (cultivares Clark e Peking), caupi (Vigna unguiculata) e guandu (Cajanus cajan). A caracterização genotípica foi realizada através da reação em cadeia da polimerase (PCR), com os oligonucleotídeos iniciadores BOX A 1-R, ERIC e RP01 Os resultados obtidos demonstraram que variantes e estirpes originais diferem quanto a características fenotípicas, e que diferenças nos perfis eletroforéticos de DNA analisados através da amplificação com os oligonucleotídeos iniciadores testados, evidenciaram a variabilidade genética presente entre as estirpes originais e os variantes selecionados. A cultivar de soja Clark, assim como caupi e guandu foram susceptíveis à rizobiotoxina produzida por estirpes e variantes de B. elkanii. Embora não se tenha verificado diferenças na nodulação em diferentes hospedeiros quando variantes ou estirpes de B. japonicum e B. elkanii foram inoculados em soja, caupi e guandu, foi observado uma simbiose eficiente para a soja (cultivares BR 16, Clark e Peking). A partir da variabilidade existente nas estirpes SEMIA 587, SEMIA 5019, SEMIA 5079 e SEMIA 5080 foram selecionados variantes eficientes e competitivos quanto à fixação de N2 em soja.

Os Fungos Micorrízicos Arbusculares (FMAs) desempenham importante papel nos agroecossistemas. Quando bem manejados podem auxiliar na manutenção da qualidade do solo bem como promover melhor desenvolvimento e saúde aos vegetais. Em função disso os FMAs apresentam um grande potencial biotecnológico, mas para que seu emprego seja bem sucedido é necessário conhecermos como esses organismos respondem às práticas agrícolas. Com o objetivo de verificar a interação das comunidades de FMAs com diferentes sistemas produtivos, efetuou-se um levantamento em pomares e viveiros de citros com manejo convencional e orgânico no município de Montenegro/RS. O estudo foi realizado nos meses de agosto/2001, outubro/2001, março/2002 e agosto/2002. Foram coletadas um total de 88 unidades amostrais. Avaliou-se a colonização radicular, as estruturas presentes nas raízes e a ocorrência de espécies de FMAs, bem como, as características químicas do solo adjacente às raízes de citros. As comunidades de FMAs não diferiram em relação aos tipos de manejo, apesar das alterações químicas determinadas pela aplicações de adubos orgânicos, que elevou os valores de pH, MO, Ca e Mg. Porém o tempo de implantação e as regiões onde se localizaram os pomares e viveiros influenciaram as comunidades de FMAs. Isso se deve principalmente a estabilidade dos pomares mais antigos e as características evolutivas de cada local. Entre os elementos do solo a umidade afetou consideravelmente a micorrização. Os pomares localizados na várzea apresentaram baixos índices de estruturas e colonização por FMAs. Os demais pomares apresentaram altos índices de estruturas e colonização, independente dos teores de P que foram elevados em todos os pomares e viveiros.

Orientador: André Rodrigues / Coorientador: Maurício Bacci Junior / Banca: Juliana de Oliveira Augustin / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Resumo: Ninhos de formigas Attini são conhecidos por abrigar uma diversa e complexa microbiota. Esses insetos possuem uma relação de mutualismo com seu fungo simbionte, utilizado como fonte de alimento. Porém, muitos micro-organismos também são encontrados nos ninho dessas formigas. Dentre eles, destacam-se fungos do gênero Escovopsis, considerados parasitas específicos do fungo cultivado por esses insetos. Somente encontrado associado aos ninhos de formigas Attini, Escovopsis coevoluiu com as formigas e seus fungos mutualistas em uma relação tripartida. Apesar dos diversos estudos voltados para entender a variedade genética de Escovopsis realizados na América Central (especialmente Panamá), não há relatos de grandes amostragens do parasita presente na América do Sul. São também escassos trabalhos taxonômicos para esse grupo de fungo; como resultado, após mais de duas décadas da descrição da primeira espécie do gênero, até o presente trabalho, apenas seis espécies foram formalmente descritas. Nesse contexto, estudamos a filogenia e evolução de Escovopsis e separamos nossos resultados em dois capítulos. No primeiro deles, descrevemos uma nova espécie, E. kreiselii, primeira a ser descrita pertencente ao clado das formigas Attini basais. Discutimos também a evolução do fungo, indicando que parece haver correlação entre filogenia e características morfológias, com linhagens menos derivadas apresentando ausência de vesícula (célula que suporta as fiálides, produtoras de conídios). Já no segundo capítulo, exploramos a diversidade filogenética de Escovopsis associados às formigas Attini derivadas, em diferentes países do continente Americano, especialmente o Brasil. Contrariamente ao que foi previamente proposto, nossos resultados sugerem que as formigas Attini derivadas podem compartilhar linhagens de Escovopsis, indicando ausência de co-cladogênese estrita entre formiga-Escovopsis-fungo mutualista. A... / Abstract: Attine ant nests harbor a diverse and complex microbiota. Such insects have a mutualistic relationship with mutualistic fungus, cultured as food source. However, several microorganisms are also present in attine nests. Within this microbiota, fungi in the genus Escovopsis are considered specific parasites of the mutualistic fungus. Escovopsis is only reported associated with attine ant nests. Furthermore, this parasite coevolved with attine ants and their mutualistic fungi in a tripartite relationship (tripartite coevolution model). Although several studies aimed to understand the genetic diversity of Escovopsis in Central America (mostly Panama), no comprehensive reports considering large Escovopsis samples are known from South America. There is also few taxonomic work onr this fungus; as a result, after two decades of the description of the first species, up to the present work, only six Escovopsis species have been formally described. In this study, we investigated the systematics, phylogeny and evolution of Escovopsis and separated our results in two chapters. In the first part, we describe a new species, E. kreiselii, first species belonging to basal attine ants. We also discuss the evolution of Escovopsis, indicating a correlation between phylogeny and morphological characters, where less derived strains shows absence of vesicles (structures supporting spore bearing-cells). In the second chapter, we exploit the phylogenetic diversity of Escovopsis associated with higher-attine ants in different countries of the American continent, especially Brazil. Contrary to previous resports, we show that higher attine ants share Escovopsis infections, indicating no strict co-cladogenesis between ant-cultivar-Escovopsis. The description of a new species and the extensive Escovopsis phylogeny presented here provide a first step towards a better understanding of the evolution and taxonomy of this group of fungi, which has potential for biological ... / Mestre

Associações simbióticas, comensais e parasitárias são amplamente relatadas em insetos. Pelo fato de larvas de culicídeos e amebas de vida livre (AVL) habitarem meios aquáticos similares, objetivou-se verificar a prevalência de Acanthamoeba spp. em populações silvestres de Aedes aegypti. Esta AVL foi investigada em 60 pools contendo 10 larvas de A. aegypti, as quais foram coletadas através de ovitrampas instaladas em diversos bairros da cidade de Porto Alegre (RS, Brasil). Os isolados de Acanthamoeba spp. foram caracterizados morfologicamente e submetidos à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmação do gênero. Ademais, realizouse análise genotípica e testes presuntivos de patogenicidade para algumas cepas. Entre os pools, 54 (90%) foram positivos para AVL, dos quais 47 (87%) isolados eram pertencentes ao gênero Acanthamoeba. Os grupos genotípicos T4, T3 e T5 foram identificados, correspondendo a 14 (53,8%), 10 (38,5%) e dois (7,7%) isolados, respectivamente. De acordo com testes fisiológicos empregados para 14 cepas, 12 (85,7%) foram consideradas não patogênicas e duas (14,3%) foram consideradas com baixo potencial patogênico. Estes resultados servem como base para um maior conhecimento acerca da interação entre estes protozoários e mosquitos vetores, em seu habitat natural. Além disso, é o primeiro estudo dedicado ao isolamento de Acanthamoeba spp. a partir de culicídeos coletados do ambiente. / Symbiotic, commensal and parasitic associations are widely reported in insects. By the fact of mosquito larvae and free-living amoebae (FLA) occupy the similar aquatic sites, the aim of this study was to determine the prevalence of Acanthamoeba spp. in Aedes aegypti larvae collected in the environment. The amoebae were investigated in 60 pools, each containing 10 larvae of A. aegypti which were collected by using larvitraps installed in various districts of Porto Alegre (RS, Brazil). Acanthamoeba isolates were morphologically characterized and submitted to Polymerase Chain Reaction technique to confirm the genus. In addition, genotype analyses as well as presumptive tests for pathogenicity in some samples were performed. Among the pools, 54 (90%) were positive for FLA. From those isolates, 47 (87%) belong to the genus Acanthamoeba. The genotype groups T4, T3 and T5 have been identified corresponding to 14 (53.8%), 10 (38.5%) and two (7.7%) isolates respectively. The physiological tests performed in 14 strains showed that 12 (85.7%) were non pathogenic, while two (14.3%) were considered with low pathogenic potential. These results provide a basis for a better understanding between these protozoan and mosquitoes interaction in their natural habitat. Moreover, this study is the first to report isolation of Acanthamoeba spp. from mosquitoes collected in the environment.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O feijÃo-caupi à uma cultura amplamente produzida nas regiÃes norte e nordeste do Brasil, e bastante adaptada à condiÃÃes edafoclimÃticas adversas. Entretanto, o feijÃo-caupi ainda à uma cultura com baixa produtividade, principalmente pelo baixo nÃvel tecnolÃgico empregado. Nesse aspecto a FixaÃÃo BiolÃgica de NitrogÃnio (FBN) à uma alternativa viÃvel para o fornecimento de nitrogÃnio de forma barata, porÃm à importante selecionar variedades de feijÃo-caupi mais eficientes e adaptadas ao processo de FBN. Objetivou-se com esse trabalho, testar a capacidade de estirpes de rizÃbios nativos de regiÃes semiÃridas, em gerar ganhos na produÃÃo do feijÃo-caupi, capazes de se equiparar a cultura adubada e verificar a existÃncia de interaÃÃo entre o feijÃo-caupi e os rizÃbios. Foram testados 21 genÃtipos obtidos do banco de germoplasma da UFC e quatro estirpes de rizÃbios nativas do semiÃrido obtidas da coleÃÃo de culturas do laboratÃrio de microbiologia ambiental da UFC. Foram realizados quatro experimentos em delineamento de blocos ao acaso no esquema fatorial 6X8 sendo seis genÃtipos de feijÃo-caupi, oito fontes de nitrogÃnio e trÃs repetiÃÃes. As fontes de nitrogÃnio foram compostas por quatro estirpes nativas mais duas estirpes padrÃes e a testemunha adubada mais o controle sem inoculaÃÃo (sem adubo e sem rizÃbio). O genÃtipo CE-930 foi repetido em todos ensaios. Os experimentos foram realizados em casa de vegetaÃÃo da UFC e os genÃtipos semeados em vasos do tipo âLeonardâ, com substrato estÃril e inerte composto por areia e vermiculita. ApÃs 35 a 40 dias do plantio realizou-se a coleta de dados para anÃlise. NÃo foi encontrada interaÃÃo significativa entre os genÃtipos e as estirpes de rizÃbios. NÃo houve variaÃÃo de resposta quanto ao nitrogÃnio total entre nenhum dos genÃtipos avaliados nos quatro experimentos, todos foram estatisticamente iguais, porÃm quanto as demais variÃveis houveram valores bem diferentes em alguns casos. Quando se analisou as fontes de nitrogÃnio, nos quatro ensaios todas as estirpes com exceÃÃo da LAMAB-8 geraram aumento de produÃÃo quase sempre similar a testemunha nitrogenada. Os genÃtipos de feijÃo-caupi nÃo influenciaram as respostas das estirpes de rizÃbios, nÃo sendo revelada interaÃÃo entre ambos. As estirpes LAMAB-40, LAMAB-48 e LAMAB-65 expressaram capacidade de fixar nitrogÃnio de forma equiparada as estirpes jà recomendadas para a cultura e quando adubada quimicamente. / Cowpea is a crop widely produced in the North and Northeast of Brazil, and quite adapted to adverse environmental conditions. However, the cowpea is still a culture with low productivity, mainly by low technological level employee. In this respect Biological Nitrogen Fixation (BNF) is a viable option for the supply of nitrogen on the cheap alternative, but it is important to select cowpea varieties most efficient and adapted to the FBN process. The objective of this work was to test the ability of strains of rhizobia and semiarid regions, generating gains in the production of cowpea, able to match the fertilized crop and verify the existence of interaction between cowpea and rhizobia. 21 genotypes obtained from the germplasm bank of the UFC and four strains of native rhizobia obtained semiarid from the culture collection of the laboratory of environmental microbiology at UFC were tested. Four experiments were conducted in a randomized block design in a factorial 6X8 being six genotypes of cowpea, eight sources of nitrogen and three replications. The nitrogen sources were composed of four native strains plus two standard strains and fertilized witness over the uninoculated control (without fertilizer and without rhizobia). The CE-930 genotype was repeated for all trials. The experiments were conducted in a greenhouse of the UFC and genotypes was sown in pots such as "Leonard", with sterile and inert substrate composed of sand and vermiculite. After 35-40 days of planting was carried out collect data for analysis. No significant interaction was found between genotypes and strains of rhizobia. There was no response variation for total nitrogen between any of the genotypes in the four experiments, all were statistically equal, but as the other variables there were very different values in some cases. When we analyzed the sources of nitrogen in the four tests all strains except LAMAB-8 generated increased production almost always similar nitrogen witness. The genotypes of cowpea did not influence the responses of strains of rhizobia, not being revealed interaction between them. The LAMAB-40, LAMAB-48 and LAMAB-65 strains expressed ability to fix nitrogen assimilated form already strains recommended for culture and when chemically fertilized.

Associações simbióticas, comensais e parasitárias são amplamente relatadas em insetos. Pelo fato de larvas de culicídeos e amebas de vida livre (AVL) habitarem meios aquáticos similares, objetivou-se verificar a prevalência de Acanthamoeba spp. em populações silvestres de Aedes aegypti. Esta AVL foi investigada em 60 pools contendo 10 larvas de A. aegypti, as quais foram coletadas através de ovitrampas instaladas em diversos bairros da cidade de Porto Alegre (RS, Brasil). Os isolados de Acanthamoeba spp. foram caracterizados morfologicamente e submetidos à técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para confirmação do gênero. Ademais, realizouse análise genotípica e testes presuntivos de patogenicidade para algumas cepas. Entre os pools, 54 (90%) foram positivos para AVL, dos quais 47 (87%) isolados eram pertencentes ao gênero Acanthamoeba. Os grupos genotípicos T4, T3 e T5 foram identificados, correspondendo a 14 (53,8%), 10 (38,5%) e dois (7,7%) isolados, respectivamente. De acordo com testes fisiológicos empregados para 14 cepas, 12 (85,7%) foram consideradas não patogênicas e duas (14,3%) foram consideradas com baixo potencial patogênico. Estes resultados servem como base para um maior conhecimento acerca da interação entre estes protozoários e mosquitos vetores, em seu habitat natural. Além disso, é o primeiro estudo dedicado ao isolamento de Acanthamoeba spp. a partir de culicídeos coletados do ambiente. / Symbiotic, commensal and parasitic associations are widely reported in insects. By the fact of mosquito larvae and free-living amoebae (FLA) occupy the similar aquatic sites, the aim of this study was to determine the prevalence of Acanthamoeba spp. in Aedes aegypti larvae collected in the environment. The amoebae were investigated in 60 pools, each containing 10 larvae of A. aegypti which were collected by using larvitraps installed in various districts of Porto Alegre (RS, Brazil). Acanthamoeba isolates were morphologically characterized and submitted to Polymerase Chain Reaction technique to confirm the genus. In addition, genotype analyses as well as presumptive tests for pathogenicity in some samples were performed. Among the pools, 54 (90%) were positive for FLA. From those isolates, 47 (87%) belong to the genus Acanthamoeba. The genotype groups T4, T3 and T5 have been identified corresponding to 14 (53.8%), 10 (38.5%) and two (7.7%) isolates respectively. The physiological tests performed in 14 strains showed that 12 (85.7%) were non pathogenic, while two (14.3%) were considered with low pathogenic potential. These results provide a basis for a better understanding between these protozoan and mosquitoes interaction in their natural habitat. Moreover, this study is the first to report isolation of Acanthamoeba spp. from mosquitoes collected in the environment.

Os Fungos Micorrízicos Arbusculares (FMAs) desempenham importante papel nos agroecossistemas. Quando bem manejados podem auxiliar na manutenção da qualidade do solo bem como promover melhor desenvolvimento e saúde aos vegetais. Em função disso os FMAs apresentam um grande potencial biotecnológico, mas para que seu emprego seja bem sucedido é necessário conhecermos como esses organismos respondem às práticas agrícolas. Com o objetivo de verificar a interação das comunidades de FMAs com diferentes sistemas produtivos, efetuou-se um levantamento em pomares e viveiros de citros com manejo convencional e orgânico no município de Montenegro/RS. O estudo foi realizado nos meses de agosto/2001, outubro/2001, março/2002 e agosto/2002. Foram coletadas um total de 88 unidades amostrais. Avaliou-se a colonização radicular, as estruturas presentes nas raízes e a ocorrência de espécies de FMAs, bem como, as características químicas do solo adjacente às raízes de citros. As comunidades de FMAs não diferiram em relação aos tipos de manejo, apesar das alterações químicas determinadas pela aplicações de adubos orgânicos, que elevou os valores de pH, MO, Ca e Mg. Porém o tempo de implantação e as regiões onde se localizaram os pomares e viveiros influenciaram as comunidades de FMAs. Isso se deve principalmente a estabilidade dos pomares mais antigos e as características evolutivas de cada local. Entre os elementos do solo a umidade afetou consideravelmente a micorrização. Os pomares localizados na várzea apresentaram baixos índices de estruturas e colonização por FMAs. Os demais pomares apresentaram altos índices de estruturas e colonização, independente dos teores de P que foram elevados em todos os pomares e viveiros.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6506_1.pdf: 1303562 bytes, checksum: 762b52076d825e4670c862275fa8ebbf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A simbiose ectomicorrízica resulta da expressão de vários genes cujas seqüências e funções devem ser conhecidas para uma melhor exploração desta simbiose. Utilizando microarranjos de cDNA para observar o padrão de transcrição fúngica nos estágios inicias da colonização, identificou-se o gene PtSRR1, cuja porção 3 foi parcialmente seqüenciada e caracterizada. Esta EST de função desconhecida é similar a uma seqüência do fungo Pisolithus microcarpus, obtida aos 21 dias de interação com Eucalyptus e depositada no GenBank. O peptídeo putativo traduzido (75 Aa) corresponde a uma molécula de origem fúngica sobrexpressa em baixa disponibilidade de nitrogênio. Este trabalho teve como objetivos a obtenção da ORF mais provável do gene PtSRR1, através da técnica RACE 5 e a caracterização in silico da proteína codificada por este gene. Para tal, discos de meio cobertos de micélio de P. tinctorius foram repicados em meio MNM líquido e após obtenção da biomassa o RNA total foi extraído e submetido à RACE 5 . O maior fragmento (~400 pb) foi selecionado, purificado e clonado. Os produtos de PCR dos clones foram seqüenciados utilizando-se iniciadores específicos para as regiões que flanqueiam o sítio de clonagem. A seqüência consenso obtida pela junção da nova seqüência (porção 5 ) com a previamente conhecida (porção 3 ) gerou um novo fragmento de 636 pb. O peptídeo traduzido da ORF mais viável (127 Aa) foi analisado através de ferramentas de bioinformática. A análise estrutural preliminar revelou quatro locais potenciais de alterações póstraducionais: dois sítios de N-glicosilação e dois sítios de fosforilação, aliados a uma forte probabilidade de que a proteína PtSRR1 seja transmembranar, composta por uma alfa-hélice hidrofóbica e uma região predominantemente hidrofílica com seis fitas-beta intercaladas por loops. Dado que o peptídeo não possui domínios conservados clássicos de proteínas previamente caracterizadas e que não há estrutura cristalizada similar depositada em bancos de dados, não foi possível prever a estrutura tridimensional da PtSRR1. Os resultados apontam para a necessidade de estudos adicionais sobre o gene da PtSRR1 como um possível controlador/marcador de desenvolvimento fúngico durante os estágios iniciais da interação ectomicorrízica

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-12T14:41:49Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_LorenaNacifMarçal_PARCIAL..pdf: 1427616 bytes, checksum: c2179520b18319664c19031d35bc7acb (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-04-12T14:42:04Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_LorenaNacifMarçal_PARCIAL..pdf: 1427616 bytes, checksum: c2179520b18319664c19031d35bc7acb (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T14:42:04Z (GMT). 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Considering that: i) there are few studies on the microbiota of wild bees, in constrast with the available literature of exotic bees Apis mellifera; ii) the knowledge about the symbiotic microorganisms contribute to the understanding of the ecological relationship that guarantee the colony homeostasis and it also provides tools for the prospection of products of biotechnological interest; iii) the fermentative production of bee pollen, the main food of the colony, is a little known process regardless its fundamental importance to the social colonies development; the objective of this work was to elucidate the bacterial communities associated with the bee gut and food supplies based on pollen of the Amazonian bee Melipona seminigra, with the purpose of knowing better the microorganisms associated to this bee and the process of storage and preservation of the bee pollen in the colony, glimpsing biotechnological applications. The experiments were carried out in three phases, starting with the description of the bacterial microbiota present in the pollen supply of Melipona seminigra bee, using independent culture methods (direct sequencing of microbial DNA samples) and culture-dependent methods ( Bacterial culture). Bacterial isolates obtained by pollen and larval food cultivation were evaluated for their hydrolytic enzyme production. Finally, the study of the Melipona seminigra gut microbiota was carried out based on cloning and sequencing of the 16SrRNA gene. It was identified 26 bacterial genera associated to pollen provisions of Melipona seminigra, many of which are of environmental in origin and related to natural and / or industrial fermentation processes. Changes in the bacterial composition of pollen from its collection until maturation suggest that the production of this food is mediated by a microbial succession process. Most of the bacteria isolated from pollen produce lipases, amylases, proteases and cellulases with high enzymatic indexes, indicating the potential of them for the bioprospection of enzymes of industrial interest. Regarding to the gut microbiota it was demonstrated that the bacterial populations colonize differentially the morphofunctional parts of gut, being the greater diversity of bacteria found in the middle and posterior intestines. This work resulted in unprecedented data on M. seminigra microbiota, which largely contribute to a better understanding of the complex and fascinating symbiotic relationships between social bees and microorganisms. / As abelhas, assim como outros insetos sociais, apresentam complexas interações simbióticas com microrganismos, que vão desde o nível do indivíduo (abelha) até os diferentes microambientes do ninho/colônia. Estas relações afetam diretamente a imunidade e o potencial nutricional das abelhas bem como influenciam processos produtivos dentro da colônia, como a produção e armazenamento de alimentos. Considerando que: i) são escassos os estudos sobre a microbiota de abelhas silvestres, sendo grande parte da literatura voltada para as abelhas exóticas Apis mellifera; ii) o conhecimento dos microrganismos simbióticos contribue para o entendimento das relações ecológicas que garantem a homeostase da colônia bem como fornece ferramentas para a prospecção de produtos de interesse biotecnológico; iii) a produção fermentativa do pólen, principal alimento da colônia, é um processo pouco conhecido embora fundamental para o desenvolvimento das colônias de abelhas sociais; o objetivo deste trabalho foi elucidar as comunidades bacterianas associadas às provisões alimentares à base de pólen da abelha amazônica Melipona seminigra e ao seu intestino, com a finalidade de se conhecer melhor os microrganismos associados à esta abelha e ao armazenamento e preservação do pólen na colônia, vislumbrando aplicações biotecnológicas. Os experimentos deste trabalho foram realizados em três fases, iniciando-se com a descrição da microbiota bacteriana presente em potes e células de alimento da abelha Melipona seminigra, por meio de métodos independentes de cultivo (sequenciamento direto de DNA microbiano das amostras) e métodos dependentes de cultivo (cultivo bacteriano). Os isolados bacterianos obtidos pelo cultivo do pólen e alimento larval foram avaliados quanto ao seu potencial de produção de enzimas hidrolíticas e, por fim, realizou-se o estudo da microbiota bacteriana intestinal, a partir da clonagem gênica e sequenciamento do gene 16S rRNA. Foram identificados 26 gêneros bacterianos associados às provisões polínicas de Melipona seminigra, muitos dos quais são de origem ambiental e relacionados com processos fermentativos naturais e/ou industriais. Mudanças na composição bacteriana do pólen, desde a sua coleta até sua maturação sugerem que a produção deste alimento é mediada por um processo de sucessão microbiana. Grande parte das bactérias isoladas do pólen produz lipases, amilases, proteases e celulases com altos índices enzimáticos, indicando o potencial dessas bactérias para a bioprospecção de enzimas de interesse industrial. Em relação à microbiota intestinal, demonstrou-se que as populações bacterianas colonizam diferencialmente as partes morfofuncionais do intestino, sendo a maior diversidade de bactérias encontradas nos intestinos médios e posteriores. Este trabalho resultou em dados inéditos acerca da microbiota associada a abelhas M. seminigra, que contribuem para o melhor entendimento das complexas e fascinantes relações simbióticas entre abelhas sociais e microrganismos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A simbiose com micro-organismos à bem conhecida em diversos tÃxons de invertebrados marinhos. No entanto, pouca ou quase nenhuma informaÃÃo hà sobre essa interaÃÃo para os animais do litoral brasileiro. Micro-organismos tem sido apontados ainda como os responsÃveis pela produÃÃo de compostos com atividades biolÃgicas interessantes presentes em animais como as ascÃdias. Diante disso, o objetivo da presente pesquisa foi o de estudar a microbiota associada a superfÃcie externa de ascÃdias coloniais, com Ãnfase em cianobactÃrias simbiontes, classificando, conhecendo o perfil de diversidade da comunidade e identificando associaÃÃes especÃficas entre componentes da microbiota e ascÃdias hospedeiras. O estudo foi realizado com duas espÃcies de ascÃdias: Didemnum galacteum e Cystodytes sp., coletadas na regiÃo oeste do Estado do Cearà (Brasil), na praia dos Dois Coqueiros e Porto do PecÃm, respectivamente. A microbiota foi analisada inicialmente por meio da microscopia Ãtica e posteriormente por tÃcnicas moleculares como: eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE) e biblioteca do 16S rRNA. A anÃlise microscÃpica evidenciou uma comunidade composta por cianobactÃrias e diatomÃceas. Os resultados do DGGE mostraram o perfil da comunidade em termos de Unidades TaxonÃmicas Operacionais (UTOs), com a maior diversidade de UTOs apontada na ascÃdia Didemnum galacteum. A microbiota presente na Ãgua do mar onde os espÃcimes foram coletados foi comparada com a microbiota da superfÃcie da tÃnica da ascÃdia, e os resultados evidenciaram que o nÃmero de UTOs à maior na Ãgua do mar e que a ascÃdia apresenta uma microbiota especÃfica. A comunidade microbiana analisada pela biblioteca do 16S rRNA revelou a dominÃncia de bactÃrias nas duas bibliotecas analisadas. Dentre as bactÃrias o tÃxon dominante em todos os casos foi Proteobacteria, com Alphaproteobacteria para a ascÃdia Didemnum galacteum e Gammaproteobacteria para a ascÃdia Cystodytes sp. Outros representantes como Bacteroidetes, Planctomycetes, Actinobacteria, Cyanobacteria e BactÃrias nÃo cultivÃveis foram evidenciadas na microbiota de Didemnum galacteum, porÃm em menor proporÃÃo / The symbiosis with microorganisms is well known for many marine invertebrate taxa. Despite that, information about these interactions along the Brazilian coast are scanty or even nonexistent. Microorganisms have also recognized as the real producers of interesting natural compounds extracted from marine invertebrates, such as ascidians. With that in mind, the goal of the present study was to evaluate the microbiota associated to colonial ascidians, focusing on symbiotic cyanobacterias, then classifying, estimating the community diversity, and identifying specific interactions between the microbiota and its hosts. This study assessed two ascidians species Didemnum galacteum and Cystodytes sp. collected in the west coast of Ceara state (Brazil), at Dois Coqueiros beach and port of PecÃm, respectively. The microbiota was analyzed initially through optical microscopy and subsequently by molecular techniques such as denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) and 16S rRNA library. The microscopic analysis showed a community comprising cyanobacteria and diatoms. DGGE results presented the community profile in terms of Operational Taxonomic Units (OTUs), pointing out Didemnum galacteum as the most diverse. The microbiota in the seawater where specimens were collected was compared to that from the ascidiansâ tunic surfaces, and results showed higher number of OTUs in the water, and a more specific microbiota in ascidians. The microbiota community studied by 16S rRNA library revealed dominance of bacteria in both libraries assessed, in which Proteobacteria taxon prevailed with either Alphaproteobaccteria in Didemnum galacteum, and Gammaproteobacteria in Cystodytes sp. Others, such as Bacteroidetes, Planctomycetes, Actinobacteria, Cyanobacteria and uncultured bacteria were evident in Didemnum galacteum, but in a lesser proportion