Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-10T18:14:26Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO_Jossana Pereira de Sousa.pdf: 2333444 bytes, checksum: 07238084c9e55d4782c66f5d6bb0ac60 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T18:14:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO_Jossana Pereira de Sousa.pdf: 2333444 bytes, checksum: 07238084c9e55d4782c66f5d6bb0ac60 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-03 / CNPq / O consumo de hortaliças minimamente processadas tem aumentado em âmbito mundial nas ultimas décadas, mas quando processadas sob condições higiênico-sanitárias insatisfatórias representam risco microbiológico e por isso a sanitização torna-se etapa crítica do processamento. No entanto, os produtos permitidos para uso em vegetais têm sido citados como responsáveis por efeitos indesejáveis. Como alternativa natural surge os óleos essenciais de plantas, cujo potencial antimicrobiano é atribuído principalmente aos seus compostos terpênicos majoritários. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar o potencial de aplicação dos fitoconstituintes carvacrol e 1,8-cineol como sanitizantes naturais em hortaliças folhosas minimamente processadas. Foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) dos compostos para os micro-organismos teste (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila INCQS 7966 e Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), a Concentração Inibitória Fracional (CIF) e a influência de sua aplicação na inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias contaminantes de hortaliças minimamente processadas. Além disso, realizou-se avaliação sensorial das hortaliças tratadas com os compostos e investigação dos possíveis danos causados à célula bacteriana. Em todos os ensaios, frascos isentos dos fitoconstituintes foram utilizados como controle. Os valores de CIM do carvacrol e do 1,8-cineol variaram de 0,6 a 2,5 e 5 a 20 μL/mL, respectivamente. Os índices de CIF foram 0,25, sugerindo uma interação sinérgica. No ensaio de viabilidade das cepas em caldo vegetal verificou-se diferença significativa (p < 0,05) entre os tratamentos e o frasco controle ao longo de 24 h. A exposição das hortaliças aos fitoconstituintes por apenas 5 min provocou redução significativa (p < 0,05) nas contagens de micro-organismos pertencentes a microbiota das hortaliças. Estes resultados mostram considerável poder de inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias associadas a hortaliças minimamente processadas. Quanto aos aspectos sensoriais, as hortaliças tratadas com a combinação dos fitoconstituintes, em concentrações subinibitórias, obtiveram notas superiores (p < 0,05) para os atributos aparência, sabor e percepção geral, após 48 h de armazenamento refrigerado. As observações da morfologia da célula bacteriana sugerem ainda que os compostos carvacrol e 1,8-cineol, isolados e combinados em concentrações subinibitórias, ocasionam danos à membrana citoplasmática e à parede celular da bactéria, o que pode causar lise e morte celular, inclusive em concentrações subinibitórias. Estes achados reforçam a idéia de que quando aplicados em combinação constituintes de óleos essenciais podem substituir sanitizantes sintéticos clássicos alcançando equilíbrio entre a demanda pela segurança microbiológica e a aceitabilidade organoléptica de hortaliças minimamente processadas.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-11T14:29:38Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Talita Gomes Calaça Menezes.pdf: 1231976 bytes, checksum: 91cc807014e048a87337c8b9ec973630 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T14:29:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Talita Gomes Calaça Menezes.pdf: 1231976 bytes, checksum: 91cc807014e048a87337c8b9ec973630 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-03-17 / O surgimento e disseminação de bactérias multirresistentes consistem em relevantes problemas de saúde pública. Infecções ocasionadas por Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) multirresistente podem apresentar elevada morbimortalidade. Considerando que a vancomicina consiste no fármaco referência da terapêutica de infecções por MRSA multirresistentes, ela deve ser alvo de estudos que visem a melhoria da sua eficácia. Nesse âmbito, moléculas de origem naturais como o ácido úsnico (AU) e a β-lapachona (β-lap) possuem ação antimicrobiana frente a S. aureus. Por outro lado, a encapsulação de fármacos em sistemas nanoestruturados apresenta diversas vantagens decorrentes da liberação controlada do fármaco, dentre as quais aumento da eficácia e diminuição de toxicidade. O objetivo deste estudo consistiu em formular e caracterizar lipossomas contendo vancomicina (VAN-lipo), avaliar a atividade antimicrobiana frente a isolados clínicos de MRSA e verificar o sinergismo com AU e β-lap. Os lipossomas contendo vancomicina foram obtidos pelo método modificado de desidratação-reidratação. Os ensaios de susceptibilidade microbiana foram realizados por microdiluição em caldo de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Para avaliar o sinergismo entre as moléculas livres e os lipossomas foram utilizados o método checkerboard e o teste epsilométrico modificado (E-test). Os VAN-lipo apresentaram tamanho de partícula de 136 ± 0,246 nm e eficiência de encapsulação de 36,15 %. Os resultados obtidos sugerem que a interação in vitro entre VAN e AU é do tipo aditiva (FICI = 0,515), porém, a encapsulação do AU em lipossomas (AU-lipo) acarretou em sinergismo com a VAN (FICI = 0,276). A interação entre VAN e β-lap foi sinérgica (FICI = 0,453) e a encapsulação da β-lap em lipossomas melhorou o nível da interação com VAN (FICI = 0,358). β-lap e AU também apresentaram interação do tipo sinérgica. Os ensaios de sinergismo empregando o método E-test reproduziram os resultados obtidos com o método checkerboard em cerca de 82% dos ensaios. O presente estudo demonstrou que a VAN combinada com AU-lipo ou com β-lap ou β-lap-lipo inibe sinergicamente isolados MRSA multirresistentes. Diante disto, conclui-se que a β-lap e o AU, assim como os lipossomas contendo estas moléculas, podem ser importantes promotores da melhoria da atividade antibacteriana da vancomicina, com potencial aplicação na terapêutica de infecções por MRSA multirresistentes.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T12:33:45Z No. of bitstreams: 2 TESE Cleideana Bezerra da Silva.pdf: 2910577 bytes, checksum: 96efaed65209c09ef30d897d8a4a7d76 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T12:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Cleideana Bezerra da Silva.pdf: 2910577 bytes, checksum: 96efaed65209c09ef30d897d8a4a7d76 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Indigofera suffruticosa Mill (Fabaceae), é um arbusto conhecido como anil. É uma planta com distribuição mundial, e é utilizada na medicina popular contra diversos problemas de saúde. No presente estudo, folhas de I. suffruticosa de duas localidades do Estado de Pernambuco, Municípios de São Caetano e Cabo de Santo Agostinho, foram coletadas para extração de óleos essenciais por hidrodestilação e extração com solventes para obtenção de extratos orgânicos (folhas coletadas no Município de São Caetano). O óleo essencial hidrodestilado foi caracterizado de acordo com suas propriedades físico-químicas e biológicas. A análise de CG e CG-EM dos constituintes químicos do óleo essencial do Município de São Caetano revelou a presença de fenilpropanóides (89,9%), sesquiterpenos (6,4%), e monoterpeno (1,4%). Este estudo avaliou a ação acaricida do óleo essencial por fumigação sobre o Tetranychus urticae, e exibiu uma LC50 de 0.90 μL L-1 de ar, bem como, a sua atividade antimicrobiana e potencial citotóxico contra cinco linhagens de células cancerígenas humanas. Além disso, foram também obtidos dados de atividade antimicrobiana de extratos orgânicos e sua ação sinérgica combinada com eritromicina em Staphylococcus aureus resistentes a antibióticos. O extrato clorofórmico apresentou melhor efeito sinérgico (FIC = 0,2). A atividade antimicrobiana foi determinada pelo método de difusão em disco e pelo método de microdiluição, contra bactérias Gram-(+), Gram-(-) e fungos e a citotoxicidade foi analizadas pelo ensaio de MTT. Os óleos essenciais investigados mostraram fraca atividade contra bactérias gram-negativas, mas, revelou de moderada a alta atividade contra bactérias gram-positivas (CIM de 64,5 μg/mL a 1000 μg/mL). Os óleos também revelaram atividade citotóxica nas linhagens de células cancerígenas: HL-60 (leucemia pró-mielocítica humano), NCI-H292 (carcinoma do pulmão humano), HEP-2 (carcinoma da laringe humano) e HT29 (carcinoma do cólon humano), MCF-7 (carcinoma da mama). As células tumorais HL-60 e HEP-2 exibiram alta susceptibilidade aos óleos essenciais das duas localidades (IC50 de 2,0 μg/mL a 5,4 μg/mL). Neste estudo, também foi demonstrado que os extratos orgânicos de folhas de I. suffruticosa tem atividade antimicrobiana. Os óleos essenciais e extratos orgânicos de folhas de I. suffruticosa investigados neste trabalho exibiram significantes atividade, indicando que esta planta possui potencial biológico.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-17T12:11:54Z No. of bitstreams: 2 Tese Dewson Pereira.pdf: 2434638 bytes, checksum: 7654476b56a86b806d79d80bc97a8fbd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:11:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Dewson Pereira.pdf: 2434638 bytes, checksum: 7654476b56a86b806d79d80bc97a8fbd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-04-29 / Lectinas são proteínas de origem não imune que se ligam de forma reversível e não covalente a carboidratos e glicoconjugados. A espécie Indigofera suffruticosa Mill., encontrada na região do Semi-Árido Pernambucano, é utilizada popularmente como antiespasmódico, sedativo, diurético e purgativo. O objetivo deste estudo foi isolar, caracterizar e avaliar o potencial biológico de uma proteína de I. suffruticosa. Uma proteína de folhas de I. suffruticosa foi obtida por cromatografia de afinidade em coluna de quitina e demonstrou ser uma glicoproteína ácida com massa molecular de 35 kDa e 3,6 % de carboidratos neutros. Esta proteína apresentou maior atividade hemaglutinante específica para eritrócitos humanos do tipo A e foi inibida por glicoproteínas e monossacarídeos, demonstrando ser uma lectina que foi denominada IsuLL. Sua atividade hemaglutinante foi estável na faixa de pH entre 6,5 a 7,0, termoresistente e não foi alterada por cations divalentes. A espectroscopia de infravermelho revelou que IsuLL possui um maior percentual de estruturas do tipo folhas . Espectroscopia de fluorescência intrínseca e extrínseca da estrutura molecular de IsuLL demonstrou a presença de resíduos triptófano e tirosina expostos na superfície da molécula e regiões hidrofóbicas parcialmente internalizadas. A estrutura de IsuLL revelou alta estabilidade térmica (T=200 ºC), avaliada pela curva de Termogravimetria. Esta lectina demonstrou atividade antioxidante (52 %) pela redução do radical DPPH . IsuLL foi tóxica para larvas de Artemia salina com CL50 de 207.87±2 μg/mL, indicando toxicidade ambiental moderada e não reduziu, significativamente, a proliferação celular das linhagens humanas de nasofaringe (HeLa) e leucêmicas (KG1). IsuLL inibiu o crescimento de Candida albicans (MIC=64 μg mL-1), C. tropicalis (MIC=16 μg.ml-1) e C. krusei (MIC=8 μg mL-1) e Staphylococcus aureus (MIC=15 μg mL-1). O estudo do efeito de IsuLL sobre S. aureus revelou modificação na parede celular, utilizando técnicas de Microscopia Eletrônica de Transmissão, captação do cristal violeta e liberação de material genético. A associação de IsuLL com antibióticos (ampicilina e cifoxitina) foi sinérgica contra S. aureus. Os resultados indicam que IsuLL, isolada de folhas de I. suffruticosa, é uma nova lectina de estrutura estável com atividade antimicrobiana e antioxidante, de potencial aplicação biotecnológica.

Pseudomonas aeruginosa é um patógeno multirresistente capaz de produzir um biofilme protetor contra antibacterianos (ATB). O presente estudo avaliou estratégias terapêuticas contra biofilmes de cepas multirresistentes de P. aeruginosa representativas de clones e/ou genótipos de resistência endêmicos no Brasil. Os biofilmes foram formados in vitro utilizando um modelo adaptado do MBEC Assay e as estratégias terapêuticas utilizaram bacteriófagos líticos, combinação de ATB e/ou uso de força iônica alta (meio FIA). A aplicação de bacteriófagos líticos (&phi;SPM-1) e a combinação de Aztreonam (ATM) e Piperacilina/Tazobactam (PPT), não foram capazes de eliminar o biofilme. Biofilme formado em meio FIA possui CIM similar ao modelo planctônico, tanto para ATM (4 mg/mL) quanto para PPT (16 mg/mL). Ambos os ATB apresentaram CIM reduzida (inferior a 2 mg/mL) quando aplicados em conjunto com meio FIA. Dependendo da concentração de NaCl, a aplicação de meio FIA possui efeito bactericida sobre bactérias planctônicas e efeito bacteriostático sobre biofilmes já formados. / Multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa is a pathogen capable of producing a protective biofilm against antibiotics (ATB). The present study evaluated therapeutic strategies against biofilms of multidrug-resistant strains of P. aeruginosa representative of clones and/or exhibiting resistance genotypes endemic in Brazil. Biofilms were formed in vitro using an adapted model of MBEC Assay and the therapeutic strategies used lytic bacteriophages, combination of ATB and/or use of high ionic strength (HIS medium). The application of lytic bacteriophages (&phi;SPM-1) and the combination of Aztreonam (ATM) and Piperacillin / Tazobactam (PPT) were unable to remove the biofilm. The application of HIS during biofilm formation restored the bacteriostatic effect of both ATM (4 mg/mL) and PPT (16 mg/ml). Both ATB showed reduced MIC values (less than 2 mg/mL) when applied in conjunction with HIS medium. It was shown that HIS has a bacteriostatic or bactericidal effect on planktonic growth, which depend on the NaCl concentration, and bacteriostatic activity against mature biofilm.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9591_1.pdf: 2328932 bytes, checksum: 01006dd909889c0c6b8409ac75ede7f5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / O consumo de hortaliças minimamente processadas tem aumentado em âmbito mundial nas ultimas décadas, mas quando processadas sob condições higiênico-sanitárias insatisfatórias representam risco microbiológico e por isso a sanitização torna-se etapa crítica do processamento. No entanto, os produtos permitidos para uso em vegetais têm sido citados como responsáveis por efeitos indesejáveis. Como alternativa natural surge os óleos essenciais de plantas, cujo potencial antimicrobiano é atribuído principalmente aos seus compostos terpênicos majoritários. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar o potencial de aplicação dos fitoconstituintes carvacrol e 1,8-cineol como sanitizantes naturais em hortaliças folhosas minimamente processadas. Foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) dos compostos para os micro-organismos teste (Listeria monocytogenes ATCC 7644, Aeromonas hydrophila INCQS 7966 e Pseudomonas fluorescens ATCC 11253), a Concentração Inibitória Fracional (CIF) e a influência de sua aplicação na inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias contaminantes de hortaliças minimamente processadas. Além disso, realizou-se avaliação sensorial das hortaliças tratadas com os compostos e investigação dos possíveis danos causados à célula bacteriana. Em todos os ensaios, frascos isentos dos fitoconstituintes foram utilizados como controle. Os valores de CIM do carvacrol e do 1,8-cineol variaram de 0,6 a 2,5 e 5 a 20 &#956;L/mL, respectivamente. Os índices de CIF foram 0,25, sugerindo uma interação sinérgica. No ensaio de viabilidade das cepas em caldo vegetal verificou-se diferença significativa (p < 0,05) entre os tratamentos e o frasco controle ao longo de 24 h. A exposição das hortaliças aos fitoconstituintes por apenas 5 min provocou redução significativa (p < 0,05) nas contagens de micro-organismos pertencentes a microbiota das hortaliças. Estes resultados mostram considerável poder de inibição do crescimento e sobrevivência de bactérias associadas a hortaliças minimamente processadas. Quanto aos aspectos sensoriais, as hortaliças tratadas com a combinação dos fitoconstituintes, em concentrações subinibitórias, obtiveram notas superiores (p < 0,05) para os atributos aparência, sabor e percepção geral, após 48 h de armazenamento refrigerado. As observações da morfologia da célula bacteriana sugerem ainda que os compostos carvacrol e 1,8-cineol, isolados e combinados em concentrações subinibitórias, ocasionam danos à membrana citoplasmática e à parede celular da bactéria, o que pode causar lise e morte celular, inclusive em concentrações subinibitórias. Estes achados reforçam a idéia de que quando aplicados em combinação constituintes de óleos essenciais podem substituir sanitizantes sintéticos clássicos alcançando equilíbrio entre a demanda pela segurança microbiológica e a aceitabilidade organoléptica de hortaliças minimamente processadas

Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-04-14T18:46:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Tacilene Luzia Silva.pdf: 1235794 bytes, checksum: f6e18d8a1d865ebf8536ae8b8a1666f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T18:46:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Tacilene Luzia Silva.pdf: 1235794 bytes, checksum: f6e18d8a1d865ebf8536ae8b8a1666f3 (MD5) Previous issue date: 2015-02-13 / CNPq / Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria Gram negativa, oportunista e ubíqua, frequentemente associada a infecções graves em pacientes imunocomprometidos. Em razão do aumento de resistência dessa bactéria aos múltiplos antimicrobianos, surgem à preocupação e a procura por novas alternativas terapêuticas, com as substâncias bioativas de origem natural representando uma importante fonte para obtenção desses medicamentos. O objetivo do presente estudo foi determinar a atividade sinérgica do timol e agentes antimicrobianos frente a cepas de Pseudomonas aeruginosa multirresistentes e avaliar os efeitos dessa interação sobre a biossíntese de biofilme e de piocianina. Para isso, numa primeira etapa foi determinada a concentração inibitória e bactericida mínima do timol e de antimicrobianos (Polimixina B, ceftazidima, piperacilina/tazobactam, cefepima, ciprofloxacino e meropenem) frente a dez cepas de Pseudomonas aeruginosa. O estudo da interação entre o timol e os agentes antimicrobianos foi realizado pelo método do tabuleiro de xadrez. Os critérios utilizados para avaliar a atividade sinérgica foram definidos pelo Índice da Concentração Inibitória Fracionada (FIC índex). A partir dos melhores valores do FIC índex das associações timol/antimicrobiano foram avaliadas a atividade sobre a produção de biofilme e piocianina. Três cepas (LFBM 01, LFBM 02, LFBM 16) apresentaram um perfil de resistência ao meropenem e cefepima e um efeito sinérgico foi observado entre o timol e meropenem ou cefepima sobre essas cepas. A associação timol/cefepima inibiu a biossíntese do biofilme em até 99,76%, e a associação timol/meropenem mostrou ser mais eficaz na inibição da piocianina cujos valores foram de até 84,33%. O timol associado ao meropenem ou cefepima, age sinergicamente, inibindo cepas de Pseudomonas aeruginosa multirresistentes e interferindo na biossíntese de biofilme e piocianina. / Pseudomonas aeruginosa is a Gram negative bacteria, opportunistic and ubiquitous, often associated with severe infections in immunocompromised patients. Due to the increased resistance of the bacteria to multiple antibiotics, there are the concerns and the search for new therapeutic alternatives, with the bioactive substances of natural origin represents an important source for obtaining these drugs. The aim of this study was to determine the synergistic activity of thymol and antimicrobials agents multiresistant Pseudomonas aeruginosa strains and evaluate the effects of this interaction on the biofilm biosynthesis and pyocyanin. For this, a first step was determined and the minimum inhibitory concentration of thymol and bactericidal antibiotics (polymyxin B, ceftazidime, piperacillin / tazobactam, cefepime, ciprofloxacin and meropenem) compared to ten strains of Pseudomonas aeruginosa. The study of the interaction between the thymol and antimicrobial agents was carried out by the checkerboard method. The criteria used to evaluate the synergistic activity were defined by the Index of Fractional Inhibitory Concentration (FIC index). From the best FIC index values of associations thymol / antimicrobial activity were evaluated on the production of biofilm and pyocyanin. Three strains (LFBM 01, LFBM 02, LFBM 16) showed an meropenem resistance profile and cefepime and a synergistic effect was observed between the thymol and meropenem or cefepime on these strains. The thymol / cefepime combination inhibited biofilm biosynthesis up to 99.76%, and thymol association / meropenem was more effective in inhibiting pyocyanin with values of up to 84.33%. The thymol associated with meropenem or cefepime, acts synergistically by inhibiting multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa strains and interfering in the biosynthesis of biofilm and pyocyanin.

A demanda por fontes renováveis de energia juntamente com o esgotamento das reservas de combustíveis fósseis e do aquecimento global tem despertado grande interesse. A degradação da biomassa lignocelulósica para a produção de biocombustíveis tem se revelado uma alternativa viável, contudo tem enfrentado desafios em função de sua recalcitrância. Novos preparados enzimáticos envolvendo não só celulases com mecanismo hidrolítico, mas também proteínas com atividade auxiliares têm sido desenvolvidas e comercializadas. Contudo a adição de enzimas oxidativas nestes coquetéis ainda é passível de desenvolvimento e otimização. Nesse âmbito, o objetivo desse trabalho foi analisar três possíveis abordagens para a resolução desse problema. A primeira através do isolamento de fungos filamentosos de compostagem com o intuito de obter novas enzimas com função oxidativa. A segunda, constituiu o estudo de sinergismo de uma enzima acessória da família GH43 com o coquetel enzimático industrial Accellerase e a terceira no estudo da enzima oxidativa monooxigenases lítica de polissacarídeo (Lpmo) assim como sua interação sinérgica com uma endoglucanase de Trichoderma harzianum. A atividade celulolítica dos fungos foi determinada por análise do halo hidrolítico, assim como por reações enzimáticas utilizando substratos específicos. Os potenciais fungos produtores de enzimas oxidativas foram identificados por amplificação e sequenciamento da região ITS3. Dezesseis fungos foram isolados e testados, destes três apresentaram atividade positiva para a enzima lacase. O sequenciamento revelou que todos os fungos pertencem à mesma espécie patogênica Scedosporium prolificans, A enzima BlAbn1 (GH43) foi expressa em células de E. coli (BL21) e purificada para análise do sinergismo com o coquetel enzimático Accellerase em diferentes condições como sinergismo sequencial ou simultâneo, diferentes pH´s, tempo de reação e concentração enzimática. No sinergismo simultâneo e análises em pH 5 e pH 8 a taxa de sinergismo encontrada foi muito baixa apenas 4 %. Contudo no sinergismo sequencial com diferentes tempos e concentrações enzimáticas foi encontrado um aumento de 30 % na liberação de açúcares redutores na reação de 20 horas, mostrando que há ação sinérgica. O estudo da enzima oxidativa Lpmo foi realizado utilizando a enzima purificada após expressão heteróloga em Aspergillus nidulans. Análises com diferentes substratos e doadores de elétrons assim como sinergismo com uma endoglucanases foram realizados. Ácido ascórbico e pirogalol apresentaram-se como doadores de elétrons utilizando celulose amorfa (PASC), xilano e arabinoxilano como substratos. Ação sinérgica entre a endoglucanase e Lpmo foi observada, apresentando um aumento na liberação de açúcares redutores na ordem de 15 %. Em habitats naturais os microrganismos produtores de enzimas hidrolíticas e auxiliares apresentam ação sinérgica como demonstrado para enzimas da família GH43 com coquetéis enzimáticos e de enzimas oxidativas com endoglucanases. Este efeito pode ser explorado e utilizado na melhora da composição dos coquetéis enzimáticos dedicados á produção de biocombustíveis lignocelulósicos. / The demand for renewable energy sources coupled with the depletion of fossil fuel reserves and global warming has aroused great interest. The degradation of lignocellulosic biomass for the production of biofuels has proved to be a viable alternative, however it has faced challenges due to its recalcitrance. New enzymatic preparations involving not only cellulases with a hydrolytic mechanism, but also proteins with an auxiliary activity have been developed and commercialized. However the addition of oxidative enzymes in these cocktails is still amenable to development and optimization. In this context, the objective of this work was to analyze three possible approaches to solve this problem. The first one through the isolation of filamentous fungi from composting in order to obtain new enzymes with oxidative function. The second was the synergism study of an accessory enzyme of the GH43 family with the industrial enzymatic cocktail Accellerase and the third in the study of lytic polysaccharide monooxygenases (Lpmo) oxidative enzyme as well as its synergistic interaction with a Trichoderma harzianum endoglucanase. The cellulolytic activity of the fungi was determined by analysis of the hydrolytic halo, as well as by enzymatic reactions using specific substrates. Potential fungi producing oxidative enzymes were identified by amplification and sequencing of the ITS3 region. Sixteen fungi were isolated and tested, of these three showed positive activity for the lacase enzyme. Sequencing revealed that all fungi belong to the same pathogenic species Scedosporium prolificans. The enzyme BlAbn1 (GH43) was expressed in E. coli cells (BL21) and purified for synergism analysis with the enzymatic cocktail Accellerase under different conditions such as sequential synergism or Different pH, reaction time and enzymatic concentration. In simultaneous synergism and analyzes at pH 5 and pH 8 the synergism rate found was very low, only 4%. However in the sequential synergism with different times and enzymatic concentrations a 30% increase in the release of reducing sugars in the reaction of 20 hours was found, showing that there is synergistic action. The study of the oxidative enzyme Lpmo was performed using the enzyme purified after heterologous expression in Aspergillus nidulans. Analyzes with different substrates and electron donors as well as synergism with an endoglucanase were performed. Ascorbic acid and pyrogallol were presented as electron donors using amorphous cellulose (PASC), xylan and arabino-xylan as substrates. Synergistic action between endoglucanase and Lpmo was observed, with an increase in the release of reducing sugars approximately 15%. In natural habitats, the microorganisms producing hydrolytic and auxiliary enzymes present synergistic action as demonstrated for enzymes of the GH43 family with enzymatic cocktails and oxidative enzymes with endoglucanases. This effect can be exploited and used in improving the composition of the enzymatic cocktails dedicated to the production of lignocellulosic biofuels.

Estudos da atividade biológica de produtos naturais visando suas aplicações no controle de microrganismos são estratégicos e de fundamental importância econômica e social. Considerando o grande potencial da biodiversidade brasileira, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana do xilitol e dos extratos brutos obtidos das folhas das plantas Eugenia uniflora, Psidum guajava, Punica granatum e Syzygium cumini, bem como da associação entre os extratos e entre o xilitol e os extratos. Os extratos foram obtidos de folhas frescas maceradas em uma solução de etanol 95%, filtrada após 72 horas e concentrada em evaporador rotatório sob pressão reduzida. Foi realizada a técnica de macrodiluição em caldo e o crescimento das bactérias Staphylococcus aureus (ATCC 25923) e Escherichia coli (ATCC 25922) foi verificado pela leitura da absorbância dos tubos. O crescimento bacteriano normal foi considerado como 100%. A porcentagem de inibição sobre o crescimento bacteriano foi calculada subtraindo-se de 100% a porcentagem de crescimento na presença do extrato, xilitol ou associações. Todos os extratos inibiram o crescimento bacteriano, no entanto a atividade sobre a bactéria E. coli foi inferior aquela obtida para a bactéria S. aureus. Nos ensaios na presença de xilitol apenas a bactéria S. aureus teve seu crescimento inibido. As associações entre os extratos das folhas das espécies E. uniflora e P. guajava e das espécies E. uniflora e P. granatum promoveram inibições superiores e em concentrações menores sobre o crescimento da bactéria S. aureus quando comparadas com as inibições promovidas pelos extratos isolados, indicando um efeito antimicrobiano sinérgico entre estes extratos. As associações entre o xilitol e os extratos das folhas das espécies E. uniflora ou S. cumini e entre o xilitol e os extratos das folhas das espécies P. guajava ou P. granatum apresentaram um efeito antimicrobiano sinérgico sobre as bactérias S. aureus e E. coli, respectivamente. Os resultados do presente estudo contribuem na busca de novas alternativas terapêuticas antimicrobianas, uma vez que pode servir de subsídio para novos estudos químicos e farmacológicos a partir de fontes naturais brasileiras. / Biological activities studies of natural products aiming their applications in microorganisms control are strategic, economic, and socially important. Considering the Brazilian biodiversity&#8223;s large potential, the purpose of this work was to evaluate antimicrobial activity of xylitol and of crude extracts obtained from leaves of the following plants: Eugenia uniflora, Psidum guajava, Punica granatum and Syzygium cumini, as well as from the association of the extracts and of xylitol with the extracts. The extracts were obtained from fresh leaves macerated in a 95% ethanol solution, filtered after 72 hours and concentrated in spinning evaporator under reduced pressure. The broth macrodilution technique was used and growth of Staphylococcus aureus (ATCC 25923) and Escherichia coli (ATCC 25922) bacteria was observed upon reading of pipes absorption. Regular bacterial growth was considered as 100%. The percentage of inhibition over bacterial growth was calculated by subtracting from 100%, the growth percentage in the presence of the essence, xylitol or associations. All extracts inhibited bacterial growth, but the activity on E. coli bacteria was inferior to the one obtained for S. aureus bacteria. In tests in the presence of xyliol only the S. aureus bacteria had its growth inhibited. Associations between the extracts from leaves of the species E. uniflora and P. guajava and the species E. uniflora and P. granatum promoted superior inhibitions and in inferior concentrations over the growth of S. aureus bacteria in comparison to inhibitions promoted by isolated extracts, indicating a synergetic antimicrobial effect between these extracts. The associations between xylitol and the extracts of E. uniflora or S. cumini species and between xylitol and the extracts from leaves of the species P. guajava or P. granatum presented a synergetic antimicrobial effect over the S. aureus and E. coli bacteria, respectively. The results of the present study contribute in the search of antimicrobial therapeutic alternatives, once it can be used as base for new chemical and pharmacological studies from Brazilian natural sources.

Este estudo teve por objetivos conhecer aspectos da toxicidade de Cu e Cd, separadamente e em combinacao (Cu+Cd) em tilapias (Oreochromis niloticus), verificando possiveis efeitos sinergicos ou antagonicos. Determinou-se nessas situacoes, a bioacumulacao dos metais no tecido muscular, branquias e figado dos especimes, enfase ao potencial bioindicador da especie. Para tanto, ensaios de toxicidade aguda na forma estatica foram conduzidos por um periodo de 96 horas. Previamente a esses, foram realizados testes preliminares com as referidas especies quimicas em concentracoes logaritmicas, com o intuito de se determinar os intervalos onde 100% de mortalidade e 100% de sobrevivencia eram observados para a especie. Atraves desta etapa estabeleceram-se para os ensaios de toxicidade aguda, as concentracoes de 0,0, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0 e 10,0 mg L-1 para Cu e Cu+Cd e de 0,0, 1,0, 5,0, 10,0, 25,0 e 50,0 mg L-1 para Cd. As variaveis temperatura, pH, amonia, oxigenio dissolvido e metais dissolvidos foram aferidas no inicio e a cada 24 horas. A dureza total foi monitorada apenas para os tratamentos controle, no inicio e termino dos experimentos para fins de verificar a qualidade da agua. Para os ensaios cronicos, conduzidos na forma semi-estatica e com duracao de 21 dias, duas concentracoes de cada metal foram utilizadas, onde o criterio de estabelecimento dos valores foi a CL50/10 e a media dos logaritmos das CL50/10 e CL50/100. Amostragens para verificacao da bioacumulacao foram realizadas em 24 e 96 horas, 07, 14 e 21 dias, sendo que durante essas amostragens, as variaveis pH, temperatura, oxigenio dissolvido, amonia e teores de metais nas solucoes foram determinadas. Como nos ensaios anteriores, a dureza total foi determinada no primeiro e ultimo dia para controle de qualidade da agua. As CL50-96h para o cobre, cadmio e cobre+cadmio foram respectivamente 3,53 mg L-1, 20,13 mg L-1 e 1,36 mg L-1 Pode-se observar durante os ensaios preliminar e agudo, uma acentuada precipitacao do Cu principalmente nas maiores concentracoes, isso em decorrencia do produto de solubilidade do hidroxido de cobre formado nas cubas experimentais. 8 Nessas concentracoes, observou-se que o Cd apresentou reducao quando em combinacao, atribuido a co-precipitacao ocorrida com o Cu. No que diz respeito a bioacumulacao dos metais nos orgaos e tecidos, pode-se observar, com algumas excecoes, que o figado, devido as suas funcoes metabolicas, apresentou uma maior acumulacao, seguido das branquias e tecido muscular. A tilapia apresentou maior resistencia ao CdCl2.H2O do que ao CuCl2 tendo a combinacao das duas especies quimicas potencializado a toxicidade de forma sinergica. Esse estudo possibilitou concluir que a afericao das concentracoes efetivas dos elementos de interesse durante ensaios de toxicidade e de relevante importancia, pois a concentracao esperada para as especies quimicas dissolvidas podem diferir daquelas esperadas, em funcao do elemento analisado e do tempo de duracao do experimento / The aim of this work was to assess for the toxicity of Cu and Cd, separately and in combination (Cu+Cd) in tilapias (Oreochromis niloticus), checking for the possible synergical or antagonic effects. In these situations, the bioaccumulation of metals in muscle tissue, gill and liver were determinated, emphasizing the potential bioindicator of the specie. Acute toxicity test in static mode were carried out for a period of 96 hours. Prior to these, preliminary tests were performed with such chemical species in logarithmic concentration, in order to establish the range of concentrations in which 100% mortality and 100% survival were observed for the specie. Through this step, concentrations of 0.0, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 and 10.0 mg L-1 for Cu and Cu+Cd and of 0.0, 1.0, 5.0, 10.0, 25.0 and 50.0 mgL-1 for Cd were defined in acute toxicity assays. Temperature, pH, ammonia, dissolved oxygen and dissolved metals were measured at the beginning and every 24 hours. Total hardness was monitored only for the control treatments, in the beginning and at the end of the experiments to check the water quality. Semi-static chronic assays, were conducted during 21 days, by using two concentrations of each metal. Concentrations were calculated as CL50/10 and average of logarithms of CL50/10 and CL50/100. Samplings for assessing the metals bioaccumulation were performed at 24 and 96 hours, 07, 14 and 21 days. In a mean time, pH, temperature, dissolved oxygen, ammonia and dissolved metals were also determinated. Like in previous assays, total hardness was determined in the first and in the last day. The LC50 for copper, cadmium and copper+cadmium were respectively 3.53 mg L-1, 20.13 mg L-1 and 1.36 mg L-1. A precipitation of copper hydroxide, moreover for the higher concentrations were observed in both, preliminary and acute assays. On these situations, Cd concentration was decreased when combined, assigned to the co-precipitation occurred with Cu. Liver, due to it metabolic functions, showed higher metals accumulation, followed by gills and musclular tissue. It can be concluded that tilapia showed greater resistance to CdCl2.H2O, than to CuCl2 and with the combination of the two chemical species, potentiated the toxicity of synergic form. This study also enabled to conclud that measurement of effective concentrations of the elements of interest during test of toxicity is relevant, because the concentrations obtained may differ to those expected, according to the element and the duration of the experiment