Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-29Bitstream added on 2014-06-13T19:27:37Z : No. of bitstreams: 1 souza_be_me_jabo.pdf: 761249 bytes, checksum: d4605eba9bcf738bd4d794a1e0b76819 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A motilidade espermática é um fator chave para a determinação da qualidade do sêmen e sua capacidade de fertilização. Vários fatores influenciam a motilidade espermática como: espécie estudada, qualidade dos gametas, tipo, volume, temperatura e pH da solução ativadora. Assim sendo, o presente trabalho objetivou avaliar o efeito que a temperatura da solução ativadora e, a relação volume de sêmen:água exercem sob a duração da motilidade espermática. Foram utilizados 12 machos de curimbatá, Prochilodus lineatus com peso e comprimento padrão médio de 405,83 ± 134,20 g, 25,63 ± 3,19cm, respectivamente. Os reprodutores receberam duas doses de extrato de hipófise de carpa (dose inicial de 0,5 mg.kg-1 e final de 5,0 mg.kg-1). Do sêmen dos 12 machos foi realizado um “pool” e, analisada a concentração e o índice de sobrevivência espermática, bem como, a duração da motilidade espermática. Para o primeiro ensaio foi utilizado um delineamento experimental inteiramente casualizado e os tratamentos foram compostos pelos volumes de sêmen provenientes do “pool” e a água nas proporções de: 1:1, 1:2, 1:20, 1:200, 1:2000, 1:20000 e 1:100000SL, respectivamente. O segundo ensaio utilizou um delineamento experimental inteiramente casualizado os tratamentos foram constituídos por alíquotas de 5μL do “pool” de sêmen e, adicionadas a 200μL de solução ativadora nas seguintes temperaturas: 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50°C. A duração da motilidade espermática do curimbatá, P. lineatus teve um comportamento linear ascendente em função do aumento da diluição a partir de 1:2SL sêmen:água (23,04s), até atingir o valor máximo estudado que foi de 1:100.000SL sêmen:água, com a duração da motilidade espermática de 28,83s Os melhores resultados de duração da motilidade espermática em função da temperatura da solução ativadora foram obtidos... / Sperm motility is a key element to qualify semen and its fertilization capacity. Several factors act on sperm motility such as studied species, gametes quality, kind, volume, temperature and pH of activation swimming solution. That way, this study had as a goal evaluate the efect that the temperature of active solution and semen:water volume roll exert on the sperm motility duration. Twelve male curimbatás, Prochilodus lineatus with average weight and medium standard length of 405,83 ± 134,20 g, 25,63 ± 3,19cm, respectively were used. Reproducers got two doses of pituitary extract from carp (initial dose of 0,5 mg.kg-1 and final of 5,0 mg.kg- 1). Whit the semen of those 12 male animals was made a pool and analysed its concentration and spermatic survival index and also sperm motility duration. For the first analysis it was utilized an experimental design entirely randomized and treatments were compound by semen volume deriving from that pool and the water on the proportion of 1:1, 1:2, 1:20, 1:200, 1:2000, 1:20000 e 1:100000SL, respectively. The second analysis utilized an experimental delineation entirely randomized, treatment were composed by 5μL from the pool of the semen and added to a 200μL active solution on the following temperatures: 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50°C. Sperm motility duration of “curimbatá”, P. lineatus had an ascendent linear behavior in function of dilution increasing from 1:2SL semen:water (23,04s), until it gets the maximum studied value that was 1:100.000SL semen:water with the sperm motility duration of 28,83s. Best results of sperm motility duration in function of active solution temperature were gotten in temperature of 20°C wich provided a medium duration of motility of 22,51 ± 0,79 seconds.

Orientador: Elizabeth Romagosa / Banca: Antonio Fernando Gervásio Lenardo / Banca: Newton Castagnolli / Resumo: A motilidade espermática é um fator chave para a determinação da qualidade do sêmen e sua capacidade de fertilização. Vários fatores influenciam a motilidade espermática como: espécie estudada, qualidade dos gametas, tipo, volume, temperatura e pH da solução ativadora. Assim sendo, o presente trabalho objetivou avaliar o efeito que a temperatura da solução ativadora e, a relação volume de sêmen:água exercem sob a duração da motilidade espermática. Foram utilizados 12 machos de curimbatá, Prochilodus lineatus com peso e comprimento padrão médio de 405,83 ± 134,20 g, 25,63 ± 3,19cm, respectivamente. Os reprodutores receberam duas doses de extrato de hipófise de carpa (dose inicial de 0,5 mg.kg-1 e final de 5,0 mg.kg-1). Do sêmen dos 12 machos foi realizado um "pool" e, analisada a concentração e o índice de sobrevivência espermática, bem como, a duração da motilidade espermática. Para o primeiro ensaio foi utilizado um delineamento experimental inteiramente casualizado e os tratamentos foram compostos pelos volumes de sêmen provenientes do "pool" e a água nas proporções de: 1:1, 1:2, 1:20, 1:200, 1:2000, 1:20000 e 1:100000SL, respectivamente. O segundo ensaio utilizou um delineamento experimental inteiramente casualizado os tratamentos foram constituídos por alíquotas de 5μL do "pool" de sêmen e, adicionadas a 200μL de solução ativadora nas seguintes temperaturas: 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50°C. A duração da motilidade espermática do curimbatá, P. lineatus teve um comportamento linear ascendente em função do aumento da diluição a partir de 1:2SL sêmen:água (23,04s), até atingir o valor máximo estudado que foi de 1:100.000SL sêmen:água, com a duração da motilidade espermática de 28,83s Os melhores resultados de duração da motilidade espermática em função da temperatura da solução ativadora foram obtidos ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sperm motility is a key element to qualify semen and its fertilization capacity. Several factors act on sperm motility such as studied species, gametes quality, kind, volume, temperature and pH of activation swimming solution. That way, this study had as a goal evaluate the efect that the temperature of active solution and semen:water volume roll exert on the sperm motility duration. Twelve male curimbatás, Prochilodus lineatus with average weight and medium standard length of 405,83 ± 134,20 g, 25,63 ± 3,19cm, respectively were used. Reproducers got two doses of pituitary extract from carp (initial dose of 0,5 mg.kg-1 and final of 5,0 mg.kg- 1). Whit the semen of those 12 male animals was made a pool and analysed its concentration and spermatic survival index and also sperm motility duration. For the first analysis it was utilized an experimental design entirely randomized and treatments were compound by semen volume deriving from that pool and the water on the proportion of 1:1, 1:2, 1:20, 1:200, 1:2000, 1:20000 e 1:100000SL, respectively. The second analysis utilized an experimental delineation entirely randomized, treatment were composed by 5μL from the pool of the semen and added to a 200μL active solution on the following temperatures: 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 e 50°C. Sperm motility duration of "curimbatá", P. lineatus had an ascendent linear behavior in function of dilution increasing from 1:2SL semen:water (23,04s), until it gets the maximum studied value that was 1:100.000SL semen:water with the sperm motility duration of 28,83s. Best results of sperm motility duration in function of active solution temperature were gotten in temperature of 20°C wich provided a medium duration of motility of 22,51 ± 0,79 seconds. / Mestre

Ultrastructure, biochemistry and 5S rRNA sequences link tracheophytes, bryophytes and charalean green algae, but the precise interrelationships between these groups remain unclear. Further major clarification now awaits primary sequence data. These are also needed to determine directionality in possible evolutionary trends within the bryophytes, but are unlikely to overturn current schemes of classification or phylogeny. Comparative ultrastructural studies of spermatogenesis, sporogenesis, the cytoskeleton and plastids reinforce biochemical and morphogenetic evidence for the wide phyletic discontinuities between mosses, hepatics and hornworts, and also rule out direct lines of descent between them. Direct ancestral lineages from charalean algae to bryophytes and to tracheophytes are also unlikely. EM studies of gametophyte/sporophyte junctions, plus immunological investigations of bryophyte cytoskeletons, are likely to accentuate the differences between mosses, hepatirs and hornworts. Other priorities for systematics include elucidation of oil body ultrastructure, analysis of the changes in nuclear proteins during spermatogenesis and a detailed comparison of bryophyte and charalean plastids. The combined evidence from ultrastrueture, biochemistry, morphology and morphogenesis warrants general acceptance of the polyphyletic origin of the bryophytes. Ultrastructural attributes should be more widely used in bryophyte systematics.

Na cascavel Crotalus durissus terrificus ocorre o armazenamento de longo prazo do esperma (LTSS), no trato genital da fêmea, durante o intervalo entre a cópula (outono) e a ovulação (primavera). Peptídeos e peptidases estão entre os principais componentes que influenciam a atividade espermática em mamíferos. O presente estudo objetivou caracterizar a presença de peptidases em C. d. terrificus, com esta função reconhecida em mamíferos e/ou que clivam peptídeos atuantes nesta função, bem como avaliar a hipótese do envolvimento destas peptidases na preservação dos espermatozóides desta serpente. O aspecto morfo-funcional dos espermatozóides foi comparado na presença dos peptídeos angiotensina II (AngII), arginina vasotocina (AVT), bradicinina (BK), peptídeo promotor da fecundação (FPP) e hormônio liberador de tireotrofina (TRH). Caracterizamos os efeitos de agentes quelante, tiol-redutor, cofator e inibidores, bem como dos peptídeos supracitados, sobre as atividades enzimáticas relacionadas, quais sejam: aminopeptidases ácida (APA), básica (APB), alanil sensível (APN-PS) e insensível à puromicina (APN-PI), cistil (CAP), dipeptidil-peptidase IV (DPPIV), piroglutamil tipo 1 (PAP-I) e prolil-imino- (PIP), bem como da prolil endopeptidase (POP), em frações solúvel (FS) e/ou de membrana solubilizada (FM) do sêmen proveniente do ducto deferente, assim como deste próprio tecido e dos tecidos uterino e vaginal de C. d. terrificus, ou seja, tecidos por onde passam ou armazenam-se os espermatozóides. Verificamos a variação sazonal destas mesmas atividades, nestes tecidos, incluindo o sêmen armazenado no útero durante o LTSS. O sêmen coletado do ducto deferente foi fracionado para avaliação da distribuição destas atividades peptidásicas. Nossos dados mostraram características de liquefação do sêmen e movimento dos espermatozóides da cascavel que os diferenciam do padrão humano. FPP com cálcio e BK melhoraram a preservação da viabilidade espermática, similarmente ao que ocorre em mamíferos. Em todos os tecidos e no sêmen as atividades APB, PIP e POP foram detectadas apenas da FS, enquanto as demais estão presentes em FS e FM, seguindo um padrão de distribuição observado na maioria dos tecidos de mamíferos. Amastatina e bestatina inibiram APB e APN, enquanto a diprotina A foi o inibidor mais eficiente para a DPPIV em FM. PAP-I e PIP foram inibidas, respectivamente, por bestatina e puromicina. Este perfil de inibição também é similar ao encontrado para as aminopeptidases em tecidos de mamíferos. Todas as atividades peptidásicas foram influenciadas por algum dos peptídeos estudados, sugerindo que tais peptídeos são substratos potenciais e/ou moduladores destas atividades na cascavel. As atividades APB e APN foram caracterizadas como metalopeptidases. APB, CAP e DPPIV foram inibidas por MnCl2. CAP e PAP-I foram caracterizadas como enzimas sulfidril-dependentes. As atividades APB, APN-PI e APN-PS predominaram, em relação às demais peptidases, em todas as estações e na maioria dos tecidos e no sêmen, sugerindo sua maior relevância na fisiologia reprodutiva da C. d. terrificus. Os níveis de todas as atividades peptidásicas estudadas variaram sazonalmente, sugerindo que sua ação moduladora sobre peptídeos susceptíveis está integrada ao ciclo reprodutivo desta serpente. O fracionamento do sêmen do ducto deferente revelou a presença de fluido seminal e espermatozóides, bem como de uma estrutura prostassoma-símile, até então somente identificada em mamíferos. Em todas estas frações há atividade peptidásica, predominando a APN-PI no prostassoma-símile e no fluido seminal, e APN-PS e APN-PI na FS e FM dos espermatozóides, caracterizando um envolvimento com a redução da motilidade espermática, tal qual ocorre em mamíferos. Concluimos que as atividades peptidásicas estudadas apresentam características sazonais e tecido-específicas que sugerem uma atuação relevante na preservação dos espermatozóides de C.d. terrificus. / In the rattlesnake Crotalus durissus terrificus occurs the long-term sperm storage (LTSS), in the female tract, during the interval between mating (autumn) and ovulation (spring). Peptides and peptidases are among the main components that influence the spermatic activity in mammals. The present study aimed to characterize the presence of peptidases in C. d. terrificus, that are well-recognized to exert this function and/or that have the ability to hydrolyze peptides that exert this function in mammals, as well to evaluate whether these peptidases are related to the preservation of spermatozoids in this snake. The morphological and functional characteristics of spermatozoids were compared in the presence of angiotensin II (AngII), arginine-vasotocin (AVT), bradykinin (BK), fertilization promoting peptide (FPP) and thyrotropin-releasing hormone (TRH). We have checked the effect of chelating and thiol-reducing agents, cofactor and inhibitors, as well the effect of aforementionated peptides on related enzyme activities such as acid (APA), basic (APB), puromycin-sensitive (APN-PS) and puromycin-insensitive alanyl (APN-PI), cystyl (CAP), pyroglutamyl type 1 (PAP-I) and prolyl-imino (PIP) aminopeptidases, and dipeptidyl-peptidase IV (DPPIV), as well as on prolyl endopeptidase (POP), in soluble (FS) and/or solubilized membrane-bound (FM) fractions of semen from vas deferens, of this own tissue, and vagina and uterus tissues of C. d. terrificus, i.e. tissues where spermatozoids pass through or where they are stored. The seasonal variation of these peptidase activities, in all tissues, including the semen stored in uterus during the LTSS, were evaluated. The semen from vas deferens was fractioned in order to know the distribution of these peptidase activities. The features of seminal liquefaction and movement of spermatozoids were different between the rattlesnake and human. Similar to mammals, FPP plus calcium and BK improved the preservation of the viability of spermatozoids from C. d. terrificus. In all tissues and semen, the APB, PIP and POP activities were detected only in FS, while others peptidases were present in FS and FM, following a similar pattern of distribution usually observed in mammalian tissues. Amastatin and bestatin inhibited APB and APN activities, while diprotin A was the most efficient inhibitor of DPPIV in FM. PAP-I and PIP activities were inhibited by bestatin and puromycin, respectively. This inhibition profile was similar to that of mammalian tissues. All peptidase activities were influenced at least by one of the peptides under study, suggesting these peptides as potential substrates and/or modulators for these peptidases of the rattlesnake. The APB and APN activities were characterized as metallopeptidases. APB, CAP and DPPIV were inhibited by MnCl2. CAP and PAP-I were characterized as sulfhydryl-dependent enzymes. The APB, APN-PI and APN-PS activities were predominant, in relation to the other examined peptidases, in all seasons and in most tissues and semen, suggesting their great relevance in the reproductive physiology of the C. d. terrificus. The levels of all studied peptidase activities were seasonally variable, suggesting that their modulator actions on susceptible peptides are integrated to the reproductive cycle of this snake. The fractionation of C. d. terrificus semen revealed the presence of seminal fluid and spermatozoids, as well a prostasome-like structure, until then identified only in mammals. In all of these fractions, there are peptidase activities, predominating the APN-PI in prostasome and seminal fluid, and the APN-PS and APN-PI in FS and FM of spermatozoids, suggesting their involvement in the reduction of the spermatic mobility, such as in mammals. In conclusion, the studied peptidase activities present seasonal and tissue-specific characteristics, which suggest a relevant role in the preservation of the spermatozoids of C. d. terrificus.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A torção testicular (TT) é uma afecção de relativa frequência, alvo de muitos estudos clínicos e experimentais ao longo dos anos. Pode acometer qualquer idade, no entanto é mais incidente em pacientes com menos de 21 anos de idade. Sua distribuição ocorre em dois picos: um no período neonatal e outro ao redor dos 13 anos de idade. A taxa dessa morbidade em jovens com menos de 25 anos é na ordem de 1/4000. A TT resulta em rotação do cordão espermático, que gera um comprometimento do suprimento sanguíneo testicular, considerada uma urgência urológica. Depois da TT, a artéria testicular e o plexo pampiniforme sofrem oclusão, interrompem o suprimento arterial e a drenagem venosa do testículo, diminuindo o aporte de nutrientes e oxigênio aos tecidos e células, levando à isquemia testicular. Esta condição afeta a produção de espermatozóides do testículo torcido podendo comprometer a fertilidade do indivíduo. Este presente estudo avaliou a função reprodutiva, alguns parâmetros espermáticos e morfologia dos testículos de ratos adultos submetidos à torção testicular antes, durante e após a puberdade, e também o efeito do tratamento com resveratrol. Os testículos direitos dos ratos foram torcidos a 720 por quatro horas em todos os grupos, exceto no grupo controle. A TT foi realizada durante os períodos pré-púbere (4 semanas de idade), púbere (6 semanas de idade) e adulto jovem (9 semanas de idade). Para cada grupo, houve um outro grupo que os animais foram submetidos ao mesmo procedimento e foram tratados com resveratrol, 30 mg/kg resveratrol foi injetado por via intraperitonel, 30 minutos antes da destorção, seguido por gavage por 7 dias. Cada rato na idade adulta acasalou com três fêmeas adultas com 12 semanas de idade para avaliar parâmetros de fertilidade. Todos os animais foram mortos com 14 semanas de idade e os testículos foram removidos para análise de concentração, motilidade e viabilidade dos espermatozóides de amostras colhidas da cauda dos epidídimos. Os parâmetros morfológicos foram avaliados por métodos estereológicos macro e microscópicos. A função reprodutiva dos animais nas diferentes idades não foi afetada pela TT, no entanto, após o tratamento os ratos operados com 4 e 6 semanas de idades tiveram maior potência e os ratos operados com 9 semanas de idade apresentaram maior taxa de fecundidade na idade adulta.. Os parâmetros morfológicos foram afetados em todos os testículos torcidos em todas as idades. Alguns desses parâmetros melhoram após o tratamento com resveratrol, e o efeito adjuvante foi maior nos ratos submetidos à TT com 4 semanas de idade. Entretanto, o resveratrol recuperou o epitélio seminífero no grupo que sofreu TT com 9 semanas de idade, os quais não apresentaram nenhum epitélio após a TT. Os parâmetros espermáticos dos testículos torcidos decresceram em todas as idades, e o resveratrol não foi efetivo, embora tenha recuperado a produção de espermatozóides no grupo que foi submetido à TT com 9 semanas de idade, em que todos os animais foram aspermatogênicos após a TTNão houve nenhum dano nos testículos contralaterais. O resveratrol promoveu efeito protetor para TT, principalmente quando os animais foram submetidos à TT em idade prépúbere. / Testicular torsion (TT) is a disease relatively frequent, which was assessed in many experimental and clinical studies over the years. TT can occur in any age, but is more common in patients under 21 years old, mostly in neonatal period and around 13 years old. The rate of this disease in youths under 25 years is about 1/400. The TT also twists the spermatic cord, which generates an impairment of the testicular blood supply and is considered a urological emergency. After TT, the testicular artery and pampiniform plexus become occluded, disrupting arterial supply and venous drainage of the testis, decreasing provision of nutrients and oxygen for tissues and cells, leading to testicular ischemia. This condition affects sperm production of the twisted testicle and may impair the fertility. This study assessed reproductive function, some morphological and spermatic parameters in adult rats which underwent experimental TT before, during and after puberty and also the effect of the treatment with resveratrol. Right testicles of rats were twisted 720 for 4 hours in all groups except the control group. TT was done during the prepubertal period (4 weeks old), puberty (6 weeks old) and young adult period (9 weeks old). For each group, there was another group which animals underwent the same procedure and were treated with resveratrol, 30 mg/kg resveratrol was injected by an intraperitoneal route, 30 minutes before detorsion, followed by gavage for 7 days. Each rat in adulthood was mated with three adult females at 12 weeks old, in order to assess parameters of fertility. All animals were killed at 14 weeks old and testes were removed for analyses Concentration, motility and viability of spermatozoids were evaluated on samples taken from the tail of the epididymis. Morphological parameters were evaluated by macroscopic and microscopic stereological methods. Reproductive function of animals at different ages was not affected by TT, however, after treatment with resveratrol, rats operated at 4 and 6 weeks old presented greater potency and animals operated at 9 weeks old showed higher fertility rate in adulthood. Morphological parameters were affected in all twisted testes at all ages. Some of these parameters improved after treatment with resveratrol and the adjuvant effect was greater in rats which underwent TT at 4 weeks old. However, resveratrol recovered the seminiferous epithelium in the group that suffered TT at 9 weeks of age, which did not show any epithelium after TT. The spermatic parameters decreased in all ages and the resveratrol did not affect it, despite it has recovered sperm production in group that underwent TT with 9 weeks old, once all animals were azoospermic after the TT. There was almost no damage in the contralateral testis. Resveratrol promoted protective effect for TT, mainly when animals underwent TT at prepubertal age.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A torção testicular (TT) é uma afecção de relativa frequência, alvo de muitos estudos clínicos e experimentais ao longo dos anos. Pode acometer qualquer idade, no entanto é mais incidente em pacientes com menos de 21 anos de idade. Sua distribuição ocorre em dois picos: um no período neonatal e outro ao redor dos 13 anos de idade. A taxa dessa morbidade em jovens com menos de 25 anos é na ordem de 1/4000. A TT resulta em rotação do cordão espermático, que gera um comprometimento do suprimento sanguíneo testicular, considerada uma urgência urológica. Depois da TT, a artéria testicular e o plexo pampiniforme sofrem oclusão, interrompem o suprimento arterial e a drenagem venosa do testículo, diminuindo o aporte de nutrientes e oxigênio aos tecidos e células, levando à isquemia testicular. Esta condição afeta a produção de espermatozóides do testículo torcido podendo comprometer a fertilidade do indivíduo. Este presente estudo avaliou a função reprodutiva, alguns parâmetros espermáticos e morfologia dos testículos de ratos adultos submetidos à torção testicular antes, durante e após a puberdade, e também o efeito do tratamento com resveratrol. Os testículos direitos dos ratos foram torcidos a 720 por quatro horas em todos os grupos, exceto no grupo controle. A TT foi realizada durante os períodos pré-púbere (4 semanas de idade), púbere (6 semanas de idade) e adulto jovem (9 semanas de idade). Para cada grupo, houve um outro grupo que os animais foram submetidos ao mesmo procedimento e foram tratados com resveratrol, 30 mg/kg resveratrol foi injetado por via intraperitonel, 30 minutos antes da destorção, seguido por gavage por 7 dias. Cada rato na idade adulta acasalou com três fêmeas adultas com 12 semanas de idade para avaliar parâmetros de fertilidade. Todos os animais foram mortos com 14 semanas de idade e os testículos foram removidos para análise de concentração, motilidade e viabilidade dos espermatozóides de amostras colhidas da cauda dos epidídimos. Os parâmetros morfológicos foram avaliados por métodos estereológicos macro e microscópicos. A função reprodutiva dos animais nas diferentes idades não foi afetada pela TT, no entanto, após o tratamento os ratos operados com 4 e 6 semanas de idades tiveram maior potência e os ratos operados com 9 semanas de idade apresentaram maior taxa de fecundidade na idade adulta.. Os parâmetros morfológicos foram afetados em todos os testículos torcidos em todas as idades. Alguns desses parâmetros melhoram após o tratamento com resveratrol, e o efeito adjuvante foi maior nos ratos submetidos à TT com 4 semanas de idade. Entretanto, o resveratrol recuperou o epitélio seminífero no grupo que sofreu TT com 9 semanas de idade, os quais não apresentaram nenhum epitélio após a TT. Os parâmetros espermáticos dos testículos torcidos decresceram em todas as idades, e o resveratrol não foi efetivo, embora tenha recuperado a produção de espermatozóides no grupo que foi submetido à TT com 9 semanas de idade, em que todos os animais foram aspermatogênicos após a TTNão houve nenhum dano nos testículos contralaterais. O resveratrol promoveu efeito protetor para TT, principalmente quando os animais foram submetidos à TT em idade prépúbere. / Testicular torsion (TT) is a disease relatively frequent, which was assessed in many experimental and clinical studies over the years. TT can occur in any age, but is more common in patients under 21 years old, mostly in neonatal period and around 13 years old. The rate of this disease in youths under 25 years is about 1/400. The TT also twists the spermatic cord, which generates an impairment of the testicular blood supply and is considered a urological emergency. After TT, the testicular artery and pampiniform plexus become occluded, disrupting arterial supply and venous drainage of the testis, decreasing provision of nutrients and oxygen for tissues and cells, leading to testicular ischemia. This condition affects sperm production of the twisted testicle and may impair the fertility. This study assessed reproductive function, some morphological and spermatic parameters in adult rats which underwent experimental TT before, during and after puberty and also the effect of the treatment with resveratrol. Right testicles of rats were twisted 720 for 4 hours in all groups except the control group. TT was done during the prepubertal period (4 weeks old), puberty (6 weeks old) and young adult period (9 weeks old). For each group, there was another group which animals underwent the same procedure and were treated with resveratrol, 30 mg/kg resveratrol was injected by an intraperitoneal route, 30 minutes before detorsion, followed by gavage for 7 days. Each rat in adulthood was mated with three adult females at 12 weeks old, in order to assess parameters of fertility. All animals were killed at 14 weeks old and testes were removed for analyses Concentration, motility and viability of spermatozoids were evaluated on samples taken from the tail of the epididymis. Morphological parameters were evaluated by macroscopic and microscopic stereological methods. Reproductive function of animals at different ages was not affected by TT, however, after treatment with resveratrol, rats operated at 4 and 6 weeks old presented greater potency and animals operated at 9 weeks old showed higher fertility rate in adulthood. Morphological parameters were affected in all twisted testes at all ages. Some of these parameters improved after treatment with resveratrol and the adjuvant effect was greater in rats which underwent TT at 4 weeks old. However, resveratrol recovered the seminiferous epithelium in the group that suffered TT at 9 weeks of age, which did not show any epithelium after TT. The spermatic parameters decreased in all ages and the resveratrol did not affect it, despite it has recovered sperm production in group that underwent TT with 9 weeks old, once all animals were azoospermic after the TT. There was almost no damage in the contralateral testis. Resveratrol promoted protective effect for TT, mainly when animals underwent TT at prepubertal age.

Na cascavel Crotalus durissus terrificus ocorre o armazenamento de longo prazo do esperma (LTSS), no trato genital da fêmea, durante o intervalo entre a cópula (outono) e a ovulação (primavera). Peptídeos e peptidases estão entre os principais componentes que influenciam a atividade espermática em mamíferos. O presente estudo objetivou caracterizar a presença de peptidases em C. d. terrificus, com esta função reconhecida em mamíferos e/ou que clivam peptídeos atuantes nesta função, bem como avaliar a hipótese do envolvimento destas peptidases na preservação dos espermatozóides desta serpente. O aspecto morfo-funcional dos espermatozóides foi comparado na presença dos peptídeos angiotensina II (AngII), arginina vasotocina (AVT), bradicinina (BK), peptídeo promotor da fecundação (FPP) e hormônio liberador de tireotrofina (TRH). Caracterizamos os efeitos de agentes quelante, tiol-redutor, cofator e inibidores, bem como dos peptídeos supracitados, sobre as atividades enzimáticas relacionadas, quais sejam: aminopeptidases ácida (APA), básica (APB), alanil sensível (APN-PS) e insensível à puromicina (APN-PI), cistil (CAP), dipeptidil-peptidase IV (DPPIV), piroglutamil tipo 1 (PAP-I) e prolil-imino- (PIP), bem como da prolil endopeptidase (POP), em frações solúvel (FS) e/ou de membrana solubilizada (FM) do sêmen proveniente do ducto deferente, assim como deste próprio tecido e dos tecidos uterino e vaginal de C. d. terrificus, ou seja, tecidos por onde passam ou armazenam-se os espermatozóides. Verificamos a variação sazonal destas mesmas atividades, nestes tecidos, incluindo o sêmen armazenado no útero durante o LTSS. O sêmen coletado do ducto deferente foi fracionado para avaliação da distribuição destas atividades peptidásicas. Nossos dados mostraram características de liquefação do sêmen e movimento dos espermatozóides da cascavel que os diferenciam do padrão humano. FPP com cálcio e BK melhoraram a preservação da viabilidade espermática, similarmente ao que ocorre em mamíferos. Em todos os tecidos e no sêmen as atividades APB, PIP e POP foram detectadas apenas da FS, enquanto as demais estão presentes em FS e FM, seguindo um padrão de distribuição observado na maioria dos tecidos de mamíferos. Amastatina e bestatina inibiram APB e APN, enquanto a diprotina A foi o inibidor mais eficiente para a DPPIV em FM. PAP-I e PIP foram inibidas, respectivamente, por bestatina e puromicina. Este perfil de inibição também é similar ao encontrado para as aminopeptidases em tecidos de mamíferos. Todas as atividades peptidásicas foram influenciadas por algum dos peptídeos estudados, sugerindo que tais peptídeos são substratos potenciais e/ou moduladores destas atividades na cascavel. As atividades APB e APN foram caracterizadas como metalopeptidases. APB, CAP e DPPIV foram inibidas por MnCl2. CAP e PAP-I foram caracterizadas como enzimas sulfidril-dependentes. As atividades APB, APN-PI e APN-PS predominaram, em relação às demais peptidases, em todas as estações e na maioria dos tecidos e no sêmen, sugerindo sua maior relevância na fisiologia reprodutiva da C. d. terrificus. Os níveis de todas as atividades peptidásicas estudadas variaram sazonalmente, sugerindo que sua ação moduladora sobre peptídeos susceptíveis está integrada ao ciclo reprodutivo desta serpente. O fracionamento do sêmen do ducto deferente revelou a presença de fluido seminal e espermatozóides, bem como de uma estrutura prostassoma-símile, até então somente identificada em mamíferos. Em todas estas frações há atividade peptidásica, predominando a APN-PI no prostassoma-símile e no fluido seminal, e APN-PS e APN-PI na FS e FM dos espermatozóides, caracterizando um envolvimento com a redução da motilidade espermática, tal qual ocorre em mamíferos. Concluimos que as atividades peptidásicas estudadas apresentam características sazonais e tecido-específicas que sugerem uma atuação relevante na preservação dos espermatozóides de C.d. terrificus. / In the rattlesnake Crotalus durissus terrificus occurs the long-term sperm storage (LTSS), in the female tract, during the interval between mating (autumn) and ovulation (spring). Peptides and peptidases are among the main components that influence the spermatic activity in mammals. The present study aimed to characterize the presence of peptidases in C. d. terrificus, that are well-recognized to exert this function and/or that have the ability to hydrolyze peptides that exert this function in mammals, as well to evaluate whether these peptidases are related to the preservation of spermatozoids in this snake. The morphological and functional characteristics of spermatozoids were compared in the presence of angiotensin II (AngII), arginine-vasotocin (AVT), bradykinin (BK), fertilization promoting peptide (FPP) and thyrotropin-releasing hormone (TRH). We have checked the effect of chelating and thiol-reducing agents, cofactor and inhibitors, as well the effect of aforementionated peptides on related enzyme activities such as acid (APA), basic (APB), puromycin-sensitive (APN-PS) and puromycin-insensitive alanyl (APN-PI), cystyl (CAP), pyroglutamyl type 1 (PAP-I) and prolyl-imino (PIP) aminopeptidases, and dipeptidyl-peptidase IV (DPPIV), as well as on prolyl endopeptidase (POP), in soluble (FS) and/or solubilized membrane-bound (FM) fractions of semen from vas deferens, of this own tissue, and vagina and uterus tissues of C. d. terrificus, i.e. tissues where spermatozoids pass through or where they are stored. The seasonal variation of these peptidase activities, in all tissues, including the semen stored in uterus during the LTSS, were evaluated. The semen from vas deferens was fractioned in order to know the distribution of these peptidase activities. The features of seminal liquefaction and movement of spermatozoids were different between the rattlesnake and human. Similar to mammals, FPP plus calcium and BK improved the preservation of the viability of spermatozoids from C. d. terrificus. In all tissues and semen, the APB, PIP and POP activities were detected only in FS, while others peptidases were present in FS and FM, following a similar pattern of distribution usually observed in mammalian tissues. Amastatin and bestatin inhibited APB and APN activities, while diprotin A was the most efficient inhibitor of DPPIV in FM. PAP-I and PIP activities were inhibited by bestatin and puromycin, respectively. This inhibition profile was similar to that of mammalian tissues. All peptidase activities were influenced at least by one of the peptides under study, suggesting these peptides as potential substrates and/or modulators for these peptidases of the rattlesnake. The APB and APN activities were characterized as metallopeptidases. APB, CAP and DPPIV were inhibited by MnCl2. CAP and PAP-I were characterized as sulfhydryl-dependent enzymes. The APB, APN-PI and APN-PS activities were predominant, in relation to the other examined peptidases, in all seasons and in most tissues and semen, suggesting their great relevance in the reproductive physiology of the C. d. terrificus. The levels of all studied peptidase activities were seasonally variable, suggesting that their modulator actions on susceptible peptides are integrated to the reproductive cycle of this snake. The fractionation of C. d. terrificus semen revealed the presence of seminal fluid and spermatozoids, as well a prostasome-like structure, until then identified only in mammals. In all of these fractions, there are peptidase activities, predominating the APN-PI in prostasome and seminal fluid, and the APN-PS and APN-PI in FS and FM of spermatozoids, suggesting their involvement in the reduction of the spermatic mobility, such as in mammals. In conclusion, the studied peptidase activities present seasonal and tissue-specific characteristics, which suggest a relevant role in the preservation of the spermatozoids of C. d. terrificus.