Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:19Z : No. of bitstreams: 1 Publico-154.pdf: 1362092 bytes, checksum: b56e51cd61b6e0026e1f047e7ce95328 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Staphylococcus coagulase negativo (SCoN) são importantes agentes etiológicos responsáveis por infecções relacionadas à assistência à saúde (IrAS) em infecções da corrente sanguínea. Em estudo retrospectivo foram avaliados SCoN isolados de pacientes com IrAS da corrente sanguínea em dois hospitais gerais da cidade de São Paulo no período de agosto de 2005 à agosto de 2007.Os isolados foram caracterizados a nível de espécies e testes de suscetibilidade aos antimicrobianos pelo Vitek® system e Vitek® 2. A presença do gene mecA e o tipo de SCCmec foram determinados por PCR multiplex. Staphylococcus epidermidis foi a espécie predominante seguido de S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis e S. auricularis. Observou-se 88,2% de resistência à oxacilina nos isolados com 100% de concordância entre os discos de oxacilina e cefoxitina confirmados pelo gene mecA. Todos isolados foram suscetíveis à vancomicina e quatro isolados apresentaram resistência intermediária à teicoplanina pelo Etest®. Um S. epidermidis mostrou-se resistente à linezolida. O tipo de SCCmec predominante foi o tipo III seguido pelos tipos IV, I, II e V. Em 26,9% dos isolados mecA positivo não foram caracterizados nenhum tipo de SCCmec pelo protocolo utilizado. / Coagulase negative staphylococci (CoNS) are important etiologic agents responsible for healthcare related infection (HCRI) in bloodstream infections. In a retrospective study we evaluate CoNS isolated from patients with HCRI in bloodstream infections admitted to two general hospitals at São Paulo city, from August 2005 to August 2007. The isolates were characterized at species level and antimicrobial susceptibility tested by the Vitek® system and ViteK® 2. Oxacillin resistance was evaluated by oxacillin and cefoxitin discs. The presence of mecA gene and the SCCmec type were determined by multiplex PCR. Staphylococcus epidermidis was the predominant specie followed by S. hominis, S. haemolyticus, S. simulans, S. warneri, S. capitis and S. auricularis. Oxacillin resistance was observed in 88.2% of the isolates with 100% concordance between oxacilin and cefoxitin discs confirmed by mecA gene. All isolates were susceptible to vancomycin and four isolates revealed intermediate resistance to teicoplanin by Etest®. One S. epidermidis showed resistance to linezolide. The predominant SCC type was the type III followed by the types IV, I, II and V. In 26.9% positive mecA isolates we did not characterize the SCCmec type by the molecular protocol utilized. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

LIMA, Ariosvana Fernandes. Staphylocuccus coagulase positiva e enterotoxinas em queijo coalho. 2005. 86 f. : Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Pós-Graduação em Tecnologia de Alimentos, centro de Ciências Agrárias, Fortaleza-CE, 2005 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-05-31T14:31:59Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_aflima.pdf: 437390 bytes, checksum: 94e4d09d0ebbe08770c52247fd964a5d (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-05-31T14:32:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_aflima.pdf: 437390 bytes, checksum: 94e4d09d0ebbe08770c52247fd964a5d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-31T14:32:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_aflima.pdf: 437390 bytes, checksum: 94e4d09d0ebbe08770c52247fd964a5d (MD5) Previous issue date: 2005 / It was evaluated the incidence of Staphylococcus sp. and Staphylococcus positivecoagulase in 80 samples of industrialized and artisanal “coalho” cheese commercialized in several selling points in Fortaleza-Ceará, as well the detection of staphylococcal enterotoxins in “coalho” cheese samples and in the isolated strains of Staphylococcus positive-coagulase. From the 80 samples of “coalho” cheese analysed, 44 (55%) were artisanal produced, being 33 (41,25%) samples of Ceará and 11 (13,75%) from other states; 13 (16,25%) industrialized with State Inspection Service (SIE) register and 23 (28,75%) industrialized with Federal Inspection Service (SIF) register. The incidence of Staphylococcus sp. in the analyzed samples of artisanal “coalho” cheese from Ceará, from other states and in the samples of industrialized “coalho” cheese with SIE, was of 100%; except for one unique (4,35%) industrialized “coalho” cheese sample with SIF register, which didn’t presented count of Staphylococcus sp. The incidence of samples with Staphylococcus sp. occurred in: 33 Ceará artisanal samples, varying from 6,0x104 to 8,9x107 UFC/g; in 11 samples of artisanal cheese from other states, varying from de 2,2 x 105 a 8,9 x 107 UFC/g; in 13 samples of industrialized cheese with SIE, varying from 9,0 x 104 a 4,3 x 107 UFC/g. These results showed a significative percentage (95,65%) of Staphylococcus sp. To the industrialized cheese. However, the contamination levels of Staphylococcus positive-coagulase in the analyzed “coalho” cheese were of: 23 (53,49%) artisanal Ceará cheese samples, with counts from 1,2 x 105 to 5,9 x 107 UFC/g; 7 (16,28%) artisanal samples from other states with counts from 6,9 x 105 to 2,6 x 107 UFC/g; 9 (20,93%) samples to the industrialized SIE register cheeses, with counts from 4,4 x 104 to 1,7 x 107 UFC/g; 4 (9,30%) samples to the industrialized “coalho” with SIF with counts from 4,7 x 105 to 2,7 x 106 UFC/g. From the 43 samples of “coalho” cheese contaminated with Staphylococcus positive-coagulase, the majority (21 samples) presented counts from 1 x 106 to 1 x 107 UFC/g. The high incidence of Staphylococcus positive-coagulase puts the consumer’s health in risk. For the staphylococcal enterotoxins analysis, there were obtained 43 extracts from the “coalho” cheese contaminated samples and 12 extracts of selected strain pools of Staphylococcus positive-coagulase, to be submitted to the detection of staphylococcal enterotoxins by the ELFA method in the VIDAS® system of bioMérieux. Inspite the high counts of Staphylococcus positive-coagulase, no staphylococcal enterotoxins were detected in any of the 43 samples of industrialized and artisanal “coalho” cheese. From the 12 strains pools of Staphylococcus positivecoagulase submitted to the detection of enterotoxins, only one strain pool (8,33%) was able to produce staphylococcal enterotoxins. These results indicate the need to orient the producers concerning to the raw material’s quality, suitable hygienic conditions and manipulation in the manufacturing of artisanal cheese; and a greater attention and fiscalization by the responsable organs, in order to practice the implementation of more rigid actions in the processing of this product, including Good Manufacturing Practices in the whole production chain for the guaranty of the products’ quality offered to the consumer and for the maintenance of the public health. / Avaliou-se a incidência de Staphylococcus sp. e Staphylococcus coagulase positiva em 80 amostras de queijos de coalho artesanal e industrial, comercializados em diversos pontos de venda em Fortaleza-Ceará, bem como a detecção de enterotoxinas estafilocócicas em queijos de coalho e nas cepas isoladas de Staphylococcus coagulase positiva. Das 80 amostras de queijos de coalho analisadas, 44 (55%) foram de produção artesanal, sendo 33 (41,25%) amostras do Ceará e 11 (13,75%) de outros estados; 13 (16,25%) industrializados com registro do SIE e 23 (28,75%) industrializados com registro do SIF. A incidência de Staphylococcus sp. nas amostras analisadas de queijos de coalho artesanais do Ceará, de outros estados e nas amostras de queijos de coalho industriais com registro do SIE, foi de 100%; com exceção de apenas uma (4,35%) amostra de queijo de coalho industrializado com registro do SIF que não apresentou contagem de Staphylococcus sp. A incidência de amostras com Staphylococcus sp. Ocorreu em: 33 amostras artesanais do Ceará, variando de 6,0 x 104 UFC/g a 8,9 x 107 UFC/g; em 11 amostras de queijos artesanais de outros estados, variando de 2,2 x 105 a 8,9 x 107 UFC/g; em 13 amostras de queijos industriais com SIE, variando de 2,2 x 105 a 1,9 x 107 UFC/g; em 22 amostras de queijos industriais com SIF, variando de 9,0 x 104 a 4,3 x 107 UFC/g. Esses resultados mostram uma porcentagem significativa (95,65%) de Staphylococcus sp. para os queijos industrializados. No entanto, os níveis de contaminação para Staphylococcus coagulase positiva nos queijos de coalho analisados foram de: 23 (53,49%) amostras artesanais do Ceará, com contagens entre 1,2 x 105 a 5,9 x 107 UFC/g; 7 (16,28%) amostras artesanais de outros estados com contagens entre 6,9 x 105 a 2,6 x 107 UFC/g; 9 (20,93%) amostras para queijos industriais com SIE, com contagens entre 4,4 x 104 a 1,7 x 107 UFC/g; 4 (9,30%) amostras para queijos de coalho industriais com SIF com contagens entre 4,7 x 105 a 2,7 x 106 UFC/g. Das 43 amostras de queijos de coalho contaminados com Staphylococcus coagulase positiva, a maioria (21 amostras) apresentou contagem entre 1 x 106 a 1 x 107 UFC/g. A alta incidência de Staphylococcus coagulase positiva colocam em risco a saúde do consumidor. Para as análises de enterotoxinas estafilocócicas, foram obtidos 43 extratos das amostras de queijos de coalho contaminadas e 12 extratos de “pools” de cepas selecionadas de Staphylococcus coagulase positiva, para serem submetidas à detecção de enterotoxinas estafilocócicas pelo método ELFA no sistema VIDAS® da bioMérieux. Não foram detectadas enterotoxinas estafilocócicas em nenhuma das 43 amostras de queijos de coalho artesanal e industrial, apesar das elevadas contagens de Staphylococcus coagulase positiva. Dos 12 pools de cepas de Staphylococcus coagulase positiva submetidos à detecção de enterotoxinas, somente um pool (8,33%) de cepas foi capaz de produzir enterotoxinas estafilocócicas. Esses resultados evidenciam a necessidade de orientação aos produtores com relação à qualidade da matéria-prima, condições adequadas de higiene e manipulação na fabricação de queijo artesanal; e uma maior atenção e fiscalização por parte dos órgãos responsáveis, no sentido de implementar medidas mais rígidas de controle no processamento desse produto, incluindo Boas Práticas de Fabricação em toda a cadeia de produção para a garantia da qualidade dos produtos oferecidos ao consumidor e para manutenção da saúde pública.

A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina. / The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89,7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.

A pesquisa de Staphylococcus spp. coagulase negativa (CNS) em alimentos não é prevista na legislação, entretanto, estas bactérias têm emergido como patógenos oportunistas e sua capacidade enterotoxigênica já foi documentada. O queijo destaca-se entre os principais derivados lácteos associados a intoxicações alimentares e a presença de cepas enterotoxigênicas do gênero Staphylococcus neste alimento representa um risco ao consumidor. O queijo colonial, tradicionalmente consumido pelos gaúchos, não possui regulamento técnico específico e poucos são os estudos relacionados ao risco do consumo desse alimento, bem como, à identificação de micro-organismos presentes nessa matriz. Sendo assim, os objetivos do presente estudo foram: (i) identificar as espécies de Staphylococcus spp. coagulase negativa, presentes em queijo colonial inspecionado; (ii) pesquisar a presença de genes codificadores de enterotoxinas clássicas (SE), bem como de resistência à penicilina e à meticilina nas cepas isoladas desta matriz. Para tanto, no período de novembro de 2014 a maio de 2015, foram analisadas 205 amostras de queijos coloniais inspecionados, sendo 121 adquiridas em Feiras Modelo e 84 em bancas do Mercado Público de Porto Alegre, compreendendo 17 marcas distintas. O isolamento inicial de Staphylococcus spp. foi realizado de acordo com o protocolo ISO 6888-1:1999, adicionado da triagem fenotípica para CNS. A identificação genotípica dos isolados foi realizada pela amplificação da região V1-V2 do gene 16S rRNA, seguida de sequenciamento e comparação das sequências obtidas no GenBank. A pesquisa de genes de enterotoxinas clássicas foi realizada por amplificação dos genes sea, seb, sec, sed e see. A determinação de resistência à penicilina foi avaliada a partir da amplificação do gene blaZ. Para resistência à meticilina, foi realizado teste de triagem frente à cefoxitina, e confirmação pela pesquisa do gene mecA. O armazenamento sob refrigeração foi observado em quase 90% das amostras coletadas. Entre as 179 colônias retiradas do ágar Baird-Parker, 59 apresentaram-se fenotipicamente compatíveis com CNS e foram identificadas genotipicamente. Treze espécies foram identificadas, sendo Macrococcus caseolyticus (40%) a mais frequente. Das 35 cepas confirmadas como CNS, S. equorum e S. vitulinus foram as espécies predominantes seguidas de S. hyicus, S. saprophyticus e S. epidermidis. O gene blaZ foi detectado em cinco cepas de CNS e em uma cepa de M. caseolyticus, sendo relativamente mais frequente em S. hyicus e S. epidermidis. O gene mecA não foi detectado. Oito cepas de CNS amplificaram algum gene para SE, sendo seb o mais frequente, seguido por sed, sea e see. O gene para enterotoxina C não foi detectado. Onze cepas apresentaram pelo menos um dos genes investigados, das quais, seis cepas apresentaram genes para SE e blaZ, concomitantemente. Os perfis seb/blaZ (n=4) e blaZ (n=3) foram os mais frequentes. Foi possível confirmar a diversidade de Staphylococcus spp. coagulase negativa em queijos coloniais inspecionados, além da baixa frequência de cepas carreadoras de genes para enterotoxinas clássicas e resistência à penicilina e à meticilina. / The investigation of coagulase-negative Staphylococcus spp. (CNS) is not included in food monitoring; although these bacteria have emerged as significant opportunistic pathogens and their toxigenic capacity has been documented. Among the dairy products, cheese features as one of the most involved in food poisoning outbreaks. The presence of enterotoxigenic strains of Staphylococcus in this food therefore represents a hazard for the consumers. Colonial cheese, which is a traditionally consumed cheese type in Rio Grande do Sul, does not have a specific technical regulation, and there are few studies targeting the risk for consumers, or aiming to identify its typical microbiota. Thus, the objectives of this study were: (i) to identify coagulase-negative Staphylococcus spp. species in inspected colonial cheese (ii) to investigate the presence of genes encoding classical enterotoxins (SE), and resistance to penicillin and methicillin in strains obtained from this food. For this purpose, from November 2014 to May 2015, 205 cheese samples were analyzed, 121 of which were acquired in street fairs and 84 in Central Market. The samples belonged to 17 different brands. The isolation of Staphylococcus spp. was performed according to the ISO 6888-1: 1999 protocol, followed by the phenotypic screening of CNS. The genotype identification of the isolates was performed by amplification of the V1-V2 region of the 16S rRNA gene, followed by sequencing and the sequences comparison with the GenBank database. Classical enterotoxin genes were investigated by amplification of sea, seb, sec, sed and see genes. The determination of penicillin resistance was evaluated by the amplification of blaZ gene. For methicillin resistance, a screening test with cefoxitin was conducted followed by confirmation through the mecA amplification. The majority (89,7%) of the collected samples were stored under refrigeration. Among the 179 atypical colonies obtained from Baird-Parker agar, 59 were phenotypically compatible with CNS and were further subjected to genotyping. Thirteen bacterial species were identified, being Macrococcus caseolyticus the most frequent (40%). Thirty-five strains were confirmed as CNS, being S. equorum and S. vitulinus the most prevalent followed by S. hyicus, S. saprophyticus and S. epidermidis. The gene blaZ was detected in five strains of CNS and in one strain of M. caseolyticus, being relatively more frequent in S. hyicus and S. warneri. The mecA gene was not detected. Eight CNS strains amplified SE gene: SEB was the most frequent, followed by SED, SEA and SEE. There was no enterotoxin C gene detected. Eleven strains carried at least one of the genes investigated; six strains presented genes for SE and blaZ, concomitantly. The profiles SEB/blaZ (n = 4) and blaZ (n = 3) were the most frequent. The diversity of CNS in inspected colonial cheeses was confirmed. In addition, the low frequency of strains carrying genes for enterotoxins and resistance to penicillin and methicillin was observed.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Avaliou-se a incidÃncia de Staphylococcus sp. e Staphylococcus coagulase positiva em 80 amostras de queijos de coalho artesanal e industrial, comercializados em diversos pontos de venda em Fortaleza-CearÃ, bem como a detecÃÃo de enterotoxinas estafilocÃcicas em queijos de coalho e nas cepas isoladas de Staphylococcus coagulase positiva. Das 80 amostras de queijos de coalho analisadas, 44 (55%) foram de produÃÃo artesanal, sendo 33 (41,25%) amostras do Cearà e 11 (13,75%) de outros estados; 13 (16,25%) industrializados com registro do SIE e 23 (28,75%) industrializados com registro do SIF. A incidÃncia de Staphylococcus sp. nas amostras analisadas de queijos de coalho artesanais do CearÃ, de outros estados e nas amostras de queijos de coalho industriais com registro do SIE, foi de 100%; com exceÃÃo de apenas uma (4,35%) amostra de queijo de coalho industrializado com registro do SIF que nÃo apresentou contagem de Staphylococcus sp. A incidÃncia de amostras com Staphylococcus sp. Ocorreu em: 33 amostras artesanais do CearÃ, variando de 6,0 x 104 UFC/g a 8,9 x 107 UFC/g; em 11 amostras de queijos artesanais de outros estados, variando de 2,2 x 105 a 8,9 x 107 UFC/g; em 13 amostras de queijos industriais com SIE, variando de 2,2 x 105 a 1,9 x 107 UFC/g; em 22 amostras de queijos industriais com SIF, variando de 9,0 x 104 a 4,3 x 107 UFC/g. Esses resultados mostram uma porcentagem significativa (95,65%) de Staphylococcus sp. para os queijos industrializados. No entanto, os nÃveis de contaminaÃÃo para Staphylococcus coagulase positiva nos queijos de coalho analisados foram de: 23 (53,49%) amostras artesanais do CearÃ, com contagens entre 1,2 x 105 a 5,9 x 107 UFC/g; 7 (16,28%) amostras artesanais de outros estados com contagens entre 6,9 x 105 a 2,6 x 107 UFC/g; 9 (20,93%) amostras para queijos industriais com SIE, com contagens entre 4,4 x 104 a 1,7 x 107 UFC/g; 4 (9,30%) amostras para queijos de coalho industriais com SIF com contagens entre 4,7 x 105 a 2,7 x 106 UFC/g. Das 43 amostras de queijos de coalho contaminados com Staphylococcus coagulase positiva, a maioria (21 amostras) apresentou contagem entre 1 x 106 a 1 x 107 UFC/g. A alta incidÃncia de Staphylococcus coagulase positiva colocam em risco a saÃde do consumidor. Para as anÃlises de enterotoxinas estafilocÃcicas, foram obtidos 43 extratos das amostras de queijos de coalho contaminadas e 12 extratos de âpoolsâ de cepas selecionadas de Staphylococcus coagulase positiva, para serem submetidas à detecÃÃo de enterotoxinas estafilocÃcicas pelo mÃtodo ELFA no sistema VIDAS da bioMÃrieux. NÃo foram detectadas enterotoxinas estafilocÃcicas em nenhuma das 43 amostras de queijos de coalho artesanal e industrial, apesar das elevadas contagens de Staphylococcus coagulase positiva. Dos 12 pools de cepas de Staphylococcus coagulase positiva submetidos à detecÃÃo de enterotoxinas, somente um pool (8,33%) de cepas foi capaz de produzir enterotoxinas estafilocÃcicas. Esses resultados evidenciam a necessidade de orientaÃÃo aos produtores com relaÃÃo à qualidade da matÃria-prima, condiÃÃes adequadas de higiene e manipulaÃÃo na fabricaÃÃo de queijo artesanal; e uma maior atenÃÃo e fiscalizaÃÃo por parte dos ÃrgÃos responsÃveis, no sentido de implementar medidas mais rÃgidas de controle no processamento desse produto, incluindo Boas PrÃticas de FabricaÃÃo em toda a cadeia de produÃÃo para a garantia da qualidade dos produtos oferecidos ao consumidor e para manutenÃÃo da saÃde pÃblica. / It was evaluated the incidence of Staphylococcus sp. and Staphylococcus positivecoagulase in 80 samples of industrialized and artisanal âcoalhoâ cheese commercialized in several selling points in Fortaleza-CearÃ, as well the detection of staphylococcal enterotoxins in âcoalhoâ cheese samples and in the isolated strains of Staphylococcus positive-coagulase. From the 80 samples of âcoalhoâ cheese analysed, 44 (55%) were artisanal produced, being 33 (41,25%) samples of Cearà and 11 (13,75%) from other states; 13 (16,25%) industrialized with State Inspection Service (SIE) register and 23 (28,75%) industrialized with Federal Inspection Service (SIF) register. The incidence of Staphylococcus sp. in the analyzed samples of artisanal âcoalhoâ cheese from CearÃ, from other states and in the samples of industrialized âcoalhoâ cheese with SIE, was of 100%; except for one unique (4,35%) industrialized âcoalhoâ cheese sample with SIF register, which didnât presented count of Staphylococcus sp. The incidence of samples with Staphylococcus sp. occurred in: 33 Cearà artisanal samples, varying from 6,0x104 to 8,9x107 UFC/g; in 11 samples of artisanal cheese from other states, varying from de 2,2 x 105 a 8,9 x 107 UFC/g; in 13 samples of industrialized cheese with SIE, varying from 9,0 x 104 a 4,3 x 107 UFC/g. These results showed a significative percentage (95,65%) of Staphylococcus sp. To the industrialized cheese. However, the contamination levels of Staphylococcus positive-coagulase in the analyzed âcoalhoâ cheese were of: 23 (53,49%) artisanal Cearà cheese samples, with counts from 1,2 x 105 to 5,9 x 107 UFC/g; 7 (16,28%) artisanal samples from other states with counts from 6,9 x 105 to 2,6 x 107 UFC/g; 9 (20,93%) samples to the industrialized SIE register cheeses, with counts from 4,4 x 104 to 1,7 x 107 UFC/g; 4 (9,30%) samples to the industrialized âcoalhoâ with SIF with counts from 4,7 x 105 to 2,7 x 106 UFC/g. From the 43 samples of âcoalhoâ cheese contaminated with Staphylococcus positive-coagulase, the majority (21 samples) presented counts from 1 x 106 to 1 x 107 UFC/g. The high incidence of Staphylococcus positive-coagulase puts the consumerâs health in risk. For the staphylococcal enterotoxins analysis, there were obtained 43 extracts from the âcoalhoâ cheese contaminated samples and 12 extracts of selected strain pools of Staphylococcus positive-coagulase, to be submitted to the detection of staphylococcal enterotoxins by the ELFA method in the VIDAS system of bioMÃrieux. Inspite the high counts of Staphylococcus positive-coagulase, no staphylococcal enterotoxins were detected in any of the 43 samples of industrialized and artisanal âcoalhoâ cheese. From the 12 strains pools of Staphylococcus positivecoagulase submitted to the detection of enterotoxins, only one strain pool (8,33%) was able to produce staphylococcal enterotoxins. These results indicate the need to orient the producers concerning to the raw materialâs quality, suitable hygienic conditions and manipulation in the manufacturing of artisanal cheese; and a greater attention and fiscalization by the responsable organs, in order to practice the implementation of more rigid actions in the processing of this product, including Good Manufacturing Practices in the whole production chain for the guaranty of the productsâ quality offered to the consumer and for the maintenance of the public health.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-07-04T10:49:24Z No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-08T13:57:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T13:57:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thiagocesarnascimento.pdf: 6704668 bytes, checksum: 0e0db297bca1e923e15facfe0e7b0aa7 (MD5) Previous issue date: 2009-08-31 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Acredita-se que os resíduos de serviços de saúde (RSS) possam atuar como veículos de disseminação de microrganismos potencialmente patogênicos e de marcadores de resistência a drogas antimicrobianas. Assim, considerando-se os riscos para saúde humana e ambiental associados ao fenômeno da resistência microbiana a drogas, nossos objetivos foram identificar linhagens de Staphylococcus coagulase negativo (SCN) isoladas do chorume percolado dos RSS no aterro sanitário de Juiz de Fora, MG, determinar o seu perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de interesse clínico-microbiológico e detectar o marcado molecular mecA. Linhagens bacterianas presuntivamente caracterizadas como SCN (n=109) foram identificadas utilizando-se sistema comercial semiautomatizado e o seu perfil de susceptibilidade a antimicrobianos, determinado pela técnica de diluição em ágar, de acordo com as recomendações do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Apenas 26,6% das amostras de SCN foram identificadas pelo sistema comercial, distribuídas em S. sciuri (31%), S. epidermidis (27,6%), S. lentus (20,7%), S. vitulinus (10,3%) S. saprophyticus (6,9%), S. haemolyticus (3,5%). As outras linhagens foram identificadas como Staphylococcus spp. (73,4%). Entre os antimicrobianos avaliados, a penicilina e a oxacilina foram as drogas menos efetivas (61,4% de resistência), seguidas pela eritromicina e azitromicina (27,3% e 22,7% de resistência respectivamente). Os antimicrobianos mais eficazes foram a gentamicina e levofloxacina, para os quais apenas resistência intermediária foi observada (21,6% e 1,1% respectivamente). Todas as amostras foram susceptíveis à vancomicina. Considerando as linhagens resistentes 14 (25,9%) amplificaram o gene específico, enquanto que 40 (74,1%) mostraram-se resistentes à oxacilina por outros mecanismos. Nossos resultados suscitam reflexões relacionadas à sobrevivência de microrganismos potencialmente patogênicos e linhagens resistentes aos antimicrobianos, carreando importantes marcadores de resistência e sua possível disseminação via RSS, contribuindo para seu trânsito intra-hospitalar. / It is accepted that health-care waste may act as vehicle for spreading potentially pathogenic microorganisms and their genetic resistance markers. Thus, considering the risks for human and environmental health associated with the phenomenon of microbial drug resistance, our objectives were to identify Coagulase-negative Staphylococcus (CoNS) strains isolated from the sanitary landfill disposal of healthcare waste of Juiz de Fora, MG; to determine the antimicrobial susceptibility patterns against antimicrobials of clinical and microbiological relevance; and to evaluate the occurrence of mecA gene. Bacterial strains presumptively characterized as CoNS (n= 109) were identified using a commercial system and the antimicrobial susceptibility patterns determined by the agar dilution technique, according to the recommendations of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Only 26.6% of the bacterial samples were identified as follows: S. sciuri (31%), S. epidermidis (27.6%), S. lentus (20.7%), S. vitulinus (10.3%) S. saprophyticus (6.9%), S. haemolyticus (3.5%). The other strains were identified as Staphylococcus spp. (73.4%). Considering the minimal inhibitory concentrations of the antimicrobials, penicillin and oxacillin drugs were the less effective drugs (61.4% resistance) followed by erythromycin and azithromycin (27.3 and 22.7% resistance, respectively). The most effective antimicrobials were gentamicin and levofloxacin, for which only intermediate resistance was observed (21.6 and 1.1% respectively). All samples were susceptible to vancomycin. Considering the resistant strains, 14 (25,9%) showed to harbour mecA gene and in 40 (74,1%) were resistant to oxacillin by other mechanisms. Our results raise considerations related to the survival of potentially pathogenic microorganisms and strains resistant to antibiotics harboring genetic markers. It is possible that these bacteria might spread via health-care waste, contributing dissemination into hospitals.

Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T13:41:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Aline_de_Oliveira_Rodrigues.pdf: 787004 bytes, checksum: 42043083bf6f4a2ee9080a2164a23e88 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T20:21:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Aline_de_Oliveira_Rodrigues.pdf: 787004 bytes, checksum: 42043083bf6f4a2ee9080a2164a23e88 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-05-16T20:21:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Aline_de_Oliveira_Rodrigues.pdf: 787004 bytes, checksum: 42043083bf6f4a2ee9080a2164a23e88 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T20:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Aline_de_Oliveira_Rodrigues.pdf: 787004 bytes, checksum: 42043083bf6f4a2ee9080a2164a23e88 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / Sem bolsa / O setor hoteleiro vem se expandindo mundialmente a cada ano e dentre os serviços oferecidos, a gastronomia é um dos mais requisitados, através da qual busca-se a satisfação do cliente, oferecendo produtos seguros e de qualidade. Paralelamente ao incremento do turismo, a incidência de doenças de origem alimentar está crescendo em todo mundo. Acredita-se que o consumo de alimentos contaminados seja a principal causa de doenças em turistas. Neste contexto o objetivo deste estudo foi avaliar a aplicação das boas práticas em restaurantes hoteleiros da cidade de Pelotas/RS e Rio Grande/RS e relacioná-las com a qualidade microbiológica dos alimentos oferecidos, além de identificar fontes de contaminação. O setor de alimentos e bebidas (A&B) de quatro hotéis foi avaliado quanto às condições higiênicossanitárias em duas visitas, com intervalo mínimo de 30 dias, através de aplicação de check list fundamentado na norma da RDC 216/2004, e de análises microbiológicas de amostras coletadas no local. Foram realizadas coletas de amostras de superfícies de utensílios, equipamentos e mãos de manipuladores para contagem de Staphylococcus coagulase positiva e de coliformes termotolerantes. Isolados obtidos das culturas dessas contagens foram comparados através de perfis de genéticos obtidos por rep-PCR. Considerando as não conformidades observadas no check list, na primeira visita apenas um hotel foi classificado como ótimo, dois foram classificados como bons e um recebeu a classificação ruim. Entretanto, na segunda visita o hotel classificado como ruim passou para bom, devido à realização de melhorias no restaurante. Alguns resultados das análises microbiológicas apresentaram limite acima do permitido para a contagem dos micro-organismos analisados, identificando falha na aplicação das boas práticas. Através da técnica de rep-PCR, foi identificada uma mesma cepa em amostras de queijo e mãos, manteiga e tábua de corte, queijo e tábua de corte e salada de frutas e mãos, evidenciando contaminação cruzada devido falhas no processo de higiene e manipulação dos alimentos. / The hotel industry has been expanding every year and among the services offered, the cuisine is one of the most requested, which seeks customer satisfaction by offering safe and quality products. Parallel to the tourism development, the incidence of foodborne diseases is growing worldwide. It is believed that the consumption of contaminated food is the major cause of disease in tourists. This study goal was to evaluate the application of best practices in hotel restaurants in the cities of Pelotas/RS and Rio Grande/RS and relate it to the microbiological quality of the food offered, besides to identify sources of contamination. The sector of food and beverages (F&B) of four hotels was evaluated in two visits with an interval of 30 days regarding hygiene-sanitary conditions, by application of check list and microbiological analyzes of samples collected on site. Surface, utensils, equipment and hands handlers samples have been collected for counting coagulase positive Staphylococcus and thermotolerant coliform. Isolates obtained from these counting cultures were compared by bands profiles obtained by rep-PCR. According to the non-conformity observed in the check list on the first visit, only one hotel was rated as great, two were classified as good and one received a bad rating. However, on the second visit, the one considered bad got a good rate due to improvements in its unit. Some microbiological analysis showed a limit above the allowed for the count of analyzed microorganisms, identifying failure in the hygiene-sanitary process. By rep-PCR, was identified the same strain in samples of cheese and hands, butter and cutting board, cutting board and cheese and fruit salad and hands, showing cross-contamination due to flaws in the process of care and handling of food.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:42:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_ Caroline_Peixoto_ Bastos.pdf: 482424 bytes, checksum: 0f1a1fb787f50f0f7f89d2501df4b4db (MD5) Previous issue date: 2008-07-02 / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius are species of genus Staphylococcus capable of producing enterotoxins, as well as the enzymes termonuclease and coagulase, and are called Staphylococcus Coagulase Positive (SCP). They show very similar biochemical and morphological characteristics, this fact, makes their differentiation and they identification in food by phenotypic techniques very difficult. In this way, the aim of this work was the development of a Multiplex PCR (mPCR), targetting the nuc gene (encoding for thermonuclease) as target, for the identification of S. aureus, S. intermedius, and S. hyicus. Initially, the mPCR was standartizeted using reference strains of S. aureus, S. warneri, S. lugdunensis and Listeria monocytogenes and isolates of S. hyicus and S. intermedius, affer words it was tested with 16 isolates of the three species of SCP. The primers annealing to each of the three species, the conditions for mPCR, the suitability of the Internal Amplification Control (IAC) for the genus Staphylococcus, and the sequences obtained through the amplification by PCR were evaluated. After this, the results were compared with those achieved by biochemical tests for differentiation of SCP. Primers NUC1-NUC2 (for sequences of the S. aureus nuc gene), NUC5-NUC6 (for sequences of the S. intermedius nuc gene), NUC7-NUC8 (for sequences of the S. hyicus nuc gene) and, as IAC, the primers 16S1 16S2 (for sequences of the 16S of rRNA gene) were used. The mPCR proposed enable the identification of S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, and the IAC was suitable for the genus. The sequences obtained in PCR showed a high degree of similarity with the sequences of the thermonuclease gene deposited in GenBank. The mPCR showed greater discriminatory power that the biochemical tests for identification the vii S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, as well as reduced the time required for the identification of ECP (reduction of 24h) or identification of specie (reduction of 72h). / Staphylococcus aureus, Staphylococcus hyicus e Staphylococcus intermedius são espécies do gênero Staphylococcus com capacidade de produzir enterotoxinas, bem como as enzimas termonuclease e coagulase, sendo denominadas de Estafilococos Coagulase Positiva (ECP). Apresentam características morfológicas e bioquímicas extremamente semelhantes, o que torna difícil sua diferenciação assim como sua identificação em alimentos através de técnicas fenotípicas de análise microbiológica. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um Multiplex PCR (mPCR), tendo-se como alvo o gene nuc (codifica para a termonuclease), para a identificação de S. aureus, S. intermedius e S. hyicus. Inicialmente, o mPCR foi padronizado utilizando-se cepas padrão de S. aureus, S. warneri, S. lugdunensis e Listeria monocytogenes e isolados de S. hyicus e S. intermedius, e, posteriormente, foi testado em 16 isolados das três espécies de ECP. Foram avaliadas a sensibilidade dos primers para cada uma das três espécies, as condições da mPCR, a sensibilidade do Controle Interno de Amplificação (IAC) para o gênero Estafilococos, e as seqüências obtidas através da amplificação por PCR. Posteriormente, os resultados foram comparados aos obtidos com testes bioquímicos de diferenciação de ECP. Foram utilizados os primers NUC1-NUC2 (para seqüências do gene nuc de S. aureus), NUC5-NUC6 (para seqüências do gene nuc de S. intermedius), NUC7-NUC8 (para seqüências do gene nuc de S. hyicus) e, para amplificação do IAC, os primers 16S1 16S2 (para seqüências do gene 16S do rRNA). O mPCR proposto possibilitou a identificação das espécies S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como o IAC utilizado apresentou sensibilidade para o gênero. As seqüências obtidas na PCR apresentaram elevado v grau de similaridade com as seqüências do gene da termonuclease depositadas no GenBank. A mPCR apresentou maior poder discriminatório que os testes bioquímicos para identificação de S. aureus, S. hyicus e S. intermedius, bem como reduziu significativamente o tempo necessário para a identificação de ECP (redução de 24h) ou de identificação em nível de espécie (redução de 72h).

The mozzarella cheese is a product of high consumption, but very susceptible to microbiological contamination. Therefore, this study aimed to evaluate the microbiological and physical-chemistry of sliced mozzarella cheese in bulk and vacuum-packed, sold in supermarkets in the Northwest region of Rio Grande do Sul State. We evaluated five marks (50 samples) of vacuum-packed mozzarella cheese (A, B, C, D and E) and a mark (25 samples) sold in bulk (F). Microbiological tests were performed according to Normative Instruction 62, August 26th, 2003: fecal coliform counts (45ºC), Salmonella sp. and coagulase positive Staphylococcus in two different periods during the validity period (period I) and after the expiration of the samples (period II). Were also conducted analysis of pH, fat and moisture, according to the Normative Instruction 68, December 12th, 2006. The physicochemical parameters classified the samples as fat cheese and medium humidity and all attended the legal parameters established by the Brazilian legislation. The microbiological results showed that all samples were within the standards for fecal coliform and coagulase positive Staphylococcus in both periods of analysis. However, in period I detected the presence of Salmonella sp. in one of the marks (16.67 %), being improper for human consumption. / O queijo Mussarela é um produto de elevado consumo, porém muito susceptível à contaminação microbiológica. Portanto, este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade microbiológica e físico-química do queijo Mussarela fatiado à granel e embalado à vácuo, comercializado em supermercados da região Noroeste do estado do Rio Grande do Sul. Foram avaliadas 5 marcas de queijo Mussarela embalado à vácuo (A, B, C, D e E), totalizando 50 amostras, e uma marca comercializada à granel (F), totalizando 25 amostras. As análises microbiológicas realizadas foram: contagem de coliformes termotolerantes (45°C), Salmonella sp. e Staphylococcus coagulase positiva, em dois diferentes períodos, durante o prazo de validade (período I) e após o vencimento das amostras (período II). Também foram realizadas as análises de pH, teor de gordura e umidade. Os parâmetros físico-químicos classificaram as amostras como sendo queijos gordos e de média umidade e atenderam os padrões exigidos pela legislação brasileira. Os resultados microbiológicos mostraram que todas as amostras apresentaram-se dentro dos padrões para coliformes termotolerantes e Staphylococcus coagulase positiva, nos dois períodos de análise, porém, no período I, foi detectada a presença de Salmonella sp. em uma das marcas (16,67 %), encontrando-se imprópria para o consumo humano.