Disease-specific compounds (biomarkers) are analyzed in clinical laboratories to assist with diagnosing diseases. This thesis describes development and validation of liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) based tests for diagnosing a diverse group of endocrine and metabolic diseases. The analytical methods used on-line and off-line sample extraction and analytical derivatization as means of enhancing the analytical sensitivity, specificity and clinical utility. All developed methods were extensively validated and reference intervals for the biomarker concentrations were established in blood samples of healthy adults and children. Advantages of the LC-MS/MS as an analytical technique include possibility of simultaneous measurement of multiple analytes and ability of confirming their identity. In this thesis we proposed and evaluated approaches for the assessment of the specificity of analysis in the methods that use tandem mass spectrometry detection. To enhance throughput of the LC-MS/MS tests for the biomarkers that have endogenous or exogenous isomers an approach was developed for quantitation of isomers from unresolved chromatographic peaks. Using methods developed in this thesis we performed a study of the steroidogenesis in ovarian follicles of healthy women and women with polycystic ovary syndrome (PCOS). Obtained data on the steroid concentrations and associations between the steroid metabolites in the pathway would be helpful for better understanding of the ovarian pathophysiology. Potential biomarkers of PCOS were identified in the thesis; further studies will be necessary to confirm their clinical utility.

Tez (Tıpta Uzmanlık) - Süleyman Demirel Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Biyokimya Anabilim Dalı, 2006. / Bibliyografya var.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 5 uppsatser.

Thesis (Ph.D. in Experimental Pathology, Program in Cancer Biology) -- University of Colorado Denver, 2007. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 144-158). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-09-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:00Z : No. of bitstreams: 1 Publico-120.pdf: 952558 bytes, checksum: 1bf84fc7ff3623ea692faec0f6256685 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: investigar a associação do polimorfismo do CYP 17 com leiomioma uterino, uma vez que os hormônios esteróides têm papel na patogênese dessa doença e a enzima codificada pelo CYP 17 está envolvida na biossíntese desses hormônios. Casuística e métodos: foram comparadas, em estudo caso-controle, 121 mulheres com leiomioma uterino sintomático que se submeteram a tratamento cirúrgico (Caso) e 120 mulheres na peri ou na pós-menopausa, sem diagnóstico prévio ou atual de leiomioma (Controle). Os grupos foram analisados quanto à presença do polimorfismo do gene CYP 17. A genotipagem do CYP 17 foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase com polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (PCR-RFLP) com a enzima de restrição Mspa1. Nas mulheres com a doença, o DNA foi proveniente de material de histerectomia e, nos controles, por meio de sangue coletado em punção venosa periférica. Para a análise estatística, foi realizado o teste do qui-quadrado seguido de regressão logística. O nível de significância adotado foi de 5% (p<0,05) e o intervalo de confiança foi de 95% (95% IC). Finalmente, confirmou-se o equilíbrio de Hardy-Weinberg para as amostras. Resultados: comparando-se mulheres com leiomiomas uterino e controles, notamos ausência de diferença significativa na distribuição do genótipo do CYP 17 (p 0,165) entre os dois grupos. Conclusões: não houve associação do polimorfismo do CYP 17 com a ocorrência de leiomioma uterino na população estudada. / Objective: Uterine leiomyoma is the most common pelvic tumor in women of reproductive age. It has been well established that endogenous sex hormones are involved in the pathogenesis of the disease, and polymorphisms in genes encoding for enzymes that act in the steroid hormones metabolism, as the CYP17, may therefore play a role in the genesis of fibroids. Variations in this gene have been thought to be candidates influencing the susceptibility to hormone-related diseases. A single nucleotide polymorphism (T→C) [rs1042386] in the promoter region of CYP17 is speculated to alter its transcription. The present study was conducted to investigate the association between this polymorphism and the presence of uterine leiomyoma in Brazilian women. Methods: Genotyping of the CYP17 was performed in 121 uterine fibroid patients and 120 unaffected women using polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis. Results: No significant difference in the CYP17 genotype distribution was noted between cases and controls (p=0.165) Conclusion: These findings suggest that the CYP17 gene polymorphism studied is unlikely to be associated with risk for uterine leiomyoma in Brazilian women. / FAPESP: 03/04533-1 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of the present study was to determine the action of gestagens and estradiol benzoate (EB) on the mechanism of premature regression of the first corpus luteum (CL) after parturition, and to develop an efficient artificial insemination system for suckling beef cows. The effect of pre-exposure to gestagens and EB on the expression of the alpha (ERα) and beta (ERß) estrogen receptors and progesterone receptor (PR) in the endometrium and CL was evaluated after the first postpartum ovulation. Thirty days after calving, ten anestrous cows were divided into a control group (AN) and a treatment group (AN+MAP). On day 0, animals of the treatment group received 250 mg medroxyprogesterone (MAP) in a vaginal device for 7 days and 5 mg EB. In both groups, the follicular wave was monitored and ovulation was induced for the formation of a CL. Luteal and endometrial tissues were collected after 7 days. The samples were submitted to the analysis of gene expression by RT-PCR and endometrial and luteal histological evaluation. Preexposure to gestagen during the first postpartum estrous cycle resulted in a higher endometrial expression of the PR (AN+MAP group; P<0.05) and inhibition of ERß expression in endometrial tissue (P<0.05). The height of the endometrial glandular epithelium and the total number of large luteal cells were higher in the AN+MAP group than in the AN group. In order to promote follicular growth compatible with the ovulatory response in postpartum cows, we analyzed the follicular dynamics to determine the best time for the application of eCG and EB in combination with MAP. The cows received MAP for 7 days and EB on day 0 or 1, followed by eCG on day 6 (B0E6 or B1E6) or 7 (B0E7 or B1E7). In two groups, the animals were not injected with eCG but received EB on day 0 (B0) or 1 (B1). All cows received a GnRH agonist 45 h after removal of the vaginal device. Animals of the B0E6 group maintained a mean follicular diameter of 8 mm until eCG application and reached a mean diameter of 13 mm at the time of GnRH agonist injection (45 h after MAP removal), showing an ovulation rate of 80%. Covariance analysis showed a difference in this curve (P=0.0001) compared to the other groups, which reached a mean final follicular diameter of 7 to 12 mm and ovulation rate of 40%. Based on these results, we investigated an ovulation and estrus reinduction for a mixed system of estrus detection and fixed-time artificial insemination (ETAI) in postpartum suckling cows. A total of 553 animals was divided into the following groups: hormonal induction (HI; day 0 = EB and MAP for 7 days, day 6 = eCG, PGF2α and temporary weaning), early weaning at 60 days, and natural breeding. No difference in pregnancy rates (85%) was observed among groups. However, at 7 months of age, calves of the HI group had reached a 38 kg higher mean weight than those weaned at 60 days. In order to adjust the eCG dose to the HI system, doses of 300, 400 or 500 IU eCG were tested. No difference in the pregnancy rates (78.7%) was observed. In conclusion, MAP and EB regulate steroid receptors in the endometrium and CL, indicating an important role for these hormones in the mechanism of premature postpartum luteolysis. In addition, steroids participate in the postpartum restructuring of the endometrium and CL and, when applied 60 days after calving together with eCG administered one day before removal of the vaginal implant, increase the reproductive efficacy of beef cows. / O objetivo do presente estudo foi de elucidar a ação dos gestágenos e benzoato de estradiol (BE) no mecanismo de regressão prematura do primeiro corpo lúteo (CL) pós-parto, e desenvolver um sistema eficaz de inseminação artificial para vacas de corte amamentando. O efeito da pré-exposição a gestágenos e BE na expressão de receptor de estrógeno alfa (REα), beta (REβ) e receptor de progesterona (RP) no endométrio e CL foi avaliado após a primeira ovulação pós-parto. Dez vacas em anestro, 30 dias após o parto, foram divididas em grupo controle (AN) e tratamento (AN+MAP). No dia 0, os animais do grupo tratamento receberam 250 mg de medroxiprogesterona (MAP) em pessário vaginal por 7 dias e 5 mg de BE. Em ambos os grupos, a onda folicular foi acompanhada e a ovulação induzida para formação de um CL. Após 7 dias, foram obtidos tecidos luteal e endometrial. As amostras foram destinadas a expressão gênica (RT-PCR) e avaliação histológica endometrial e luteínica. A pré-exposição ao gestágeno no primeiro ciclo estral pós-parto resultou em uma maior expressão endometrial do RP (grupo AN+MAP; P<0,05) e um bloqueio da expressão dos REβ no tecido endometrial (P<0,05). No grupo AN+MAP, a altura do epitélio glandular endometrial e número total de células luteais grandes foram maiores do que no grupo AN. Visando promover o crescimento folicular compatível com resposta ovulatória, em vacas pós-parto, foi avaliada a dinâmica folicular, para determinar o melhor momento de aplicação do eCG e BE em associação ao MAP. As vacas receberam MAP por 7 dias e BE no Dia 0 ou 1, seguido de eCG no Dia 6 (B0E6 ou B1E6) ou 7 (B0E7 ou B1E7). Em dois grupos, os animais não foram injetados com eCG, mas com BE no Dia 0 (B0) ou no Dia 1 (B1). Todas as fêmeas receberam agonista de GnRH 45 h após remoção do implante vaginal. Os animais do grupo B0E6 mantiveram um diâmetro folicular médio de 8 mm até a aplicação do eCG e atingiram a média de 13 mm no momento do GnRH, com taxa de ovulação de 80%. Por análise de covariança, essa curva diferiu (P=0.0001) das demais, as quais atingiram média folicular final entre 8 e 12 mm e taxa de ovulação de 40%. A partir desses resultados, foi investigado um sistema de reindução de ovulação e estro e inseminação artificial em um processo misto de observação de estro e tempo fixo (IAETF) para vacas amamentando no período pós-parto. Um total de 553 animais foi dividido em indução hormonal (IH; Dia 0= BE e MAP por 7 dias, Dia 6= eCG, PGF2α e desmame temporário), desmame precoce aos 60 dias e monta natural. Não foi observada diferença nos índices de prenhez (85,0%) entre os grupos. No entanto, os terneiros do grupo IH, aos sete meses de idade, atingiram a média de 38 kg a mais do que os desmamados aos 60 dias. Com o objetivo de adequar a dose da gonadotrofina no sistema de IH, foram utilizadas 300, 400 ou 500 UI de eCG, não havendo diferença nos índices de prenhez (78,7%). Em conclusão, o MAP e BE regulam os receptores esteróides no endométrio e CL, evidenciando uma importante participação no mecanismo de luteólise prematura pós-parto. Além disso, esses esteróides participam da reestruturação pós-parto do endométrio e CL e, aplicados aos 60 dias pós-parto, associados ao eCG um dia antes da retirada do implante vaginal, resultam em maior eficácia reprodutiva em vacas de corte.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Vincristine sulphate is antitumor agent widely used in small animal clinical oncology; therefore it can cause a number of adverse effects including marrow and neuronal cytotoxicity. Nandrolone decanoate, an anabolic-androgenic steroid (AAS), has been used in association with vincristine in order to ease effects such as moderate myelosuppression. The present dissertation presents data related to the isolated or associated employment of vincristine sulphate and nandrolone decanoate, as well as their effects on the cholinergic system and oxidative profile of Wistar rats. The animals were submitted to four different doses of AAS for three weeks and its action on acetylcholinesterase (AChE) activity in four different structures of brain tissue (cerebellum, hippocampus, striatum and cerebral cortex) was studied. The second experiment shows the effects of vincristine and/or nandrolone decanoate in the brain (same parts studied previously) and blood through measurement of brain and red blood cell AChE (RBC-AChE) enzyme activity as well as brain and blood serum lipid peroxidation of rats treated for two weeks. Results show that the two highest doses used in the first experiment increased enzyme activity, suggesting interference in the cholinergical system of the striatum and cerebellum. The results obtained in the latter experiment demonstrate that the isolated use of this AAS and its association with vincristine sulphate altered brain and RBC-AChE action, both in a stimulatory and inhibitory fashion. Lipid peroxidation, in the brain and blood, increased due to the isolated use of both vincristine and nandrolone decanoate, as well as to their associated use at the highest dose of ester used. Furthermore, the data show that the association between the therapeutic dose of nandrolone decanoate and vincristine is capable of neutralizing the free radical production induced by their isolated use in brain and blood serum. Serum RBC-AChE activity and the oxidative profile presented in this study are similar to those exhibited for brain tissue. Based on these data, it can be concluded that nandrolone decanoate is capable of interfering in AChE activity, affecting the cholinergic system, which could cause an alteration of its neurotransmitter, as well as a low or high stimulation of post-synaptic receptors. Therefore, the use of the therapeutic dose of AAS studied here in association with vincristine has been shown to be beneficial, as it could protect the organism from damaging processes caused by the production of free radicals. / O sulfato de vincristina é um agente anti-tumoral bastante usado na oncologia clínica de pequenos animais, porém seus efeitos colaterais incluem citotoxicidade medular e neuronal. O decanoato de nandrolona, um esteróide anabólico androgênico (EAA), tem sido usado em associação a este medicamento para amenizar alguns de seus efeitos, como a mielossupressão moderada. Esta dissertação apresenta dados referentes ao uso isolado ou associado do sulfato de vincristina e do decanoato de nandrolona, seus efeitos no sistema colinérgico e no perfil oxidativo de ratos Wistar. Primeiramente, verificou-se quatro diferentes doses do EAA, por três semanas, e sua ação sobre a atividade da acetilcolinesterase (AChE) em quatro partes do tecido cerebral (cerebelo, estriado, hipocampo e córtex cerebral). O segundo experimento apresenta grupos tratados durante duas semanas com sulfato de vincristina e/ou decanoato de nandrolona e as ações destes no cérebro (mesmas partes pesquisadas anteriormente) e no sangue, através da mensuração da atividade enzimática da AChE cerebral e eritrocitária (RBC-AChE) e peroxidação lipídica cerebral e sérica. As duas doses mais altas utilizadas no primeiro trabalho aumentam a atividade da enzima, sugerindo que haja interferência no sistema colinérgico, no estriado e no cerebelo. Os resultados obtidos, no estudo posterior, demonstram que o uso isolado deste EAA e suas associações com o sulfato de vincristina alteram a ação da AChE cerebral e RBC-AChE, tanto de forma estimulatória quanto inibitória. A peroxidação lipídica, cerebral e sangüínea, aumenta devido ao uso isolado da vincristina e do decanoato de nandrolona, e na associação do quimioterápico com a dose mais alta usada do éster. A dose terapêutica do decanoato de nandrolona e a vincristina utilizadas são capazes de neutralizar a produção de radicais livres tanto no cérebro quanto no soro sangüíneo. A atividade da RBC-AChE e o valor do perfil oxidativo do soro apresentados nesta pesquisa são similares àqueles exibidos pelo tecido cerebral. Diante destes dados, pode-se concluir que o decanoato de nandrolona é capaz de influenciar a atividade da AChE, afetando o sistema colinérgico, o que poderia ocasionar em uma ação alterada do seu neurotransmissor, além de uma baixa ou alta estimulação dos receptores póssinápticos. Entretanto, o uso da dose terapêutica estudada deste EAA associada à vincristina mostra-se benéfico, pois poderia proteger o organismo de processos prejudiciais relacionados a produção de radicais livres.

A hiperplasia adrenal congênita (HAC), mais comumente causada por deficiência da 21-hidroxilase (21OH), apresenta um espectro de manifestações clínicas, que varia desde virilização da genitália externa de fetos femininos com perda de sal neonatal até manifestações hiperandrogênicas que se iniciam tardiamente. A forma clássica, de maior gravidade, é subdividida em perdedora de sal (PS) e virilizante simples (VS). A doença é elegível para inclusão em programas de triagem neonatal, e o principal problema enfrentado é a taxa elevada de resultados falso-positivos (FP), de até 1%. Cerca de 50-70% destes são atribuídos ao estresse neonatal por doença, à prematuridade e ao baixo peso ao nascimento (PN). Em 7-17% dos FP, a dosagem da 17OHP no teste confirmatório pelo método de radioimunoensaio (RIE) no soro, um dos mais utilizados em nosso país, permanece alterada. A adição da dosagem de outros esteroides como o 21-deoxicorisol (21-DF) e, sobretudo, a utilização de metodologia mais específica, como a cromatografia líquida com detecção por espectrometria de massas (CL-MS/MS), pode aumentar o valor preditivo positivo (VPP). O estudo molecular do gene CYP21A2 também pode ser útil na confirmação diagnóstica, porém com maior custo e complexidade. No final de 2013, a triagem da HAC-21OH foi incluída no Programa Nacional de Triagem Neonatal (PNTN). A eficácia de dosagens hormonais no soro por diferentes metodologias como teste confirmatório não tem sido estudada na literatura. Objetivos: determinar o esteroide adrenal cuja dosagem oferece maior especificidade como teste confirmatório na triagem neonatal da HAC. Determinar os valores de referência da 17OHP e do 21-DF na população brasileira por CL-MS/MS. Casuística: 708.437 recém-nascidos (RN) submetidos à triagem no laboratório da APAE-São Paulo de janeiro de 2014 a dezembro de 2015. Métodos: os RNs que apresentaram 17OHP neonatal acima do valor de referência para o P99,5 para o PN foram convocados para dosagem dos esteroides no soro (RIE e CL-MS/MS). Os RNs com resultados 17OHP >= 10 ng/ml (CL-MS/MS) no soro foram convocados para estudo molecular do CYP21A2. Resultados: O VPP do teste de triagem no papel de filtro (P99,5) foi 3% e a taxa de FP de 0,037%; 65/252 (25%) resultados permaneceram alterados na dosagem 17OHP/RIE (VPP 30%) e 32/289 (11%) continuaram alterados após o teste confirmatório 17OHP/CL-MS/MS (VPP 49%); 58 casos de HAC clássica foram diagnosticados (47PS; 11VS), 57 pela triagem e 1 falso-negativo (forma VS), resultando em incidência de 1:12.200. Outros 32 casos assintomáticos e com 17OHP/CL-MS/MS elevada (indeterminados) foram acompanhados até normalização ou confirmação diagnóstica da forma não clássica da HAC pelo genótipo do CYP21A2. A relação (17OHP+delta4)/cortisol foi a que apresentou maior área sob a curva ROC, e o ponto de corte >= 9,7 detectou todos os portadores de forma clássica (S=100%). Valores entre 9,7 e 24,8 compreenderam pacientes com a forma VS, forma não clássica (NC) e não afetados e o ponto de corte >= 24,9 apresentou VPP de 100% (E=100%) para as formas clássicas da HAC. Em 10 casos com resultados indeterminados da 17OHP, o estudo molecular permitiu a alta do seguimento neonatal (4 portadores da forma NC; 4 sem mutações identificadas e 2 heterozigotos). Conclusão: A dosagem no soro da 17OHP por CL-MS/MS foi superior à dosagem por RIE. A aplicação dos pontos de corte obtidos pela curva ROC dos diferentes testes confirmatórios no soro permitiria a resolução de 30/32 indeterminados, sendo que a relação (17OHP+delta4)/cortisol foi especialmente útil nestes casos. O estudo molecular foi importante, sobretudo, para elucidação dos casos indeterminados / Congenital adrenal hyperplasia (CAH) is most commonly caused by 21- hydroxylase deficiency and clinical presentation depends on the degree of enzyme activity impairment, varying from virilization of external genitalia in females and neonatal salt loss and hyperandrogenic signs in both genders. The classical form is subdivided in salt-wasting (SW) and simple virilizing (SV). The disease is suitable for neonatal screening programs. The high false-positive (FP) result rate, up to 1%, is the main issue, in most cases attributed to either prematurity or neonatal stress caused by coexistence of stress conditions. In serum confirmatory tests, 17-hydroxy-progesterone (17OHP) levels by radioimmunoassay (RIA), one of the main methodologies performed in our country, remains elevated in 7-17% of cases. The addition of other steroids, such as 21-deoxycortisol (21-DF), and the use of a more specific methodology, liquid chromatography followed by tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), increase de positive predictive value (PPV) of confirmatory tests. The CYP21A2 genotyping is also useful in diagnosing CAH, although its higher cost and complexity are potential limitations. Objectives: to determine the adrenal steroid with higher specificity to confirm CAH diagnosis in the newborn screening. To determine the reference values of serum 17OHP and 21-DF by LC-MS/MS in the Brazilian population in neonatal period. Patients: 708,437 newborns (NBs) screened in Laboratório da APAE SÃO PAULO between January 2014 and December 2015. Methods: NBs with neonatal 17OHP (N17OHP) on filter paper above the 99.5th percentile were recalled to serum sample collection and steroids dosage by RIA and LC-MS/MS; Molecular CYP21A2 analysis was offered to those with 17OHP >= 10 ng/ml (LC-MS/MS). Results: FP rate on filter paper was 0.037% and these NBs were recalled for serum tests: 65/252 (25%) results of 17OHP by RIA and 32/289 (11%) of 17OHP by LC-MS/MS remained altered. PPV of RIA and LC-MS/MS were 30% and 49%, respectively. Fifty-eight CAH classical cases were diagnosed (47SW;11SV) and other 32 asymptomatic NBs presented increased serum 17OHP by LC-MS/MS and were followed until diagnostic elucidation. In the ROC curves analyses between false and true-positives, 17OHP/LC-MS/MS had the highest accuracy as a single steroid measurement, for which the 48.3 ng/ml cutoff had 100% sensitivity for classical forms. Serum 21DF was not superior than 17OHP/LC-MS/MS. The product of (17OHP+delta4)/cortisol ratio presented the highest accuracy: the cutoff of 24.9 had a PPV of 100% to detect saltwasting form, while values between 9.7-24.8 comprised FP, NC and SV patients and molecular tests could be useful for differential diagnosis in this latter group. Conclusions: Serum 17OHP by LC-MS/MS was superior than 17OHP by RIA. The efficacy of confirmatory tests was improved using 17OHP by LC-MS/MS and, for the asymptomatic NBs with undetermined results, the (17OHP+delta4)/cortisol ratio presented the highest diagnostic efficacy. The CYP21A2 genotyping was particularly useful in asymptomatic NBs with persistently increased serum 17OHP

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A caracterizaÃÃo do fenÃtipo acetilador e oxidativo das atividades das enzimas metabolizadoras à de fundamental relevÃncia para avaliaÃÃo da resposta farmacolÃgica aos vÃrios agentes terapÃuticos. Os estudos de fenotipagem e genotipagem tÃm como finalidade detectar e mensurar polimorfismos nestas enzimas. O estudo teve como objetivo determinar o perfil fenotÃpico da atividade metabolizadora das enzimas CYP1A2, CYP2A6, XO e NAT2 em uma amostra de oitenta voluntÃrios saudÃveis da populaÃÃo do estado do CearÃ, utilizando a cafeÃna como fÃrmaco âprobeâ. Os voluntÃrios foram avaliados atravÃs de consulta mÃdica para confirmaÃÃo do estado de higidez; as funÃÃes metabÃlicas, hepÃtica e renal foram avaliadas atravÃs de exames laboratoriais hematolÃgicos e bioquÃmicos. O protocolo clÃnico consistiu de um internamento onde os voluntÃrios receberam um comprimido de 200mg de cafeÃna e coletas de sangue e urina. As amostras de sangue seguiram os seguintes intervalos a partir da administraÃÃo: 0; 0:05; 0:15; 0:25; 0:35; 0:45; 1:00; 1:15; 1:30; 2; 4; 6; 8; 12 e 24 horas. A urina foi colhida em seu volume total durante as 10 horas apÃs a administraÃÃo, o volume urinÃrio total foi quantificado e uma alÃquota foi armazenada para determinaÃÃo dos metabÃlitos. O protocolo analÃtico consistiu de dosagem por HPLC das concentraÃÃes plasmÃticas de cafeÃna e das concentraÃÃes urinÃrias dos cinco principais metabÃlitos da cafeÃna: 1U â Ãcido 1-metilÃrico; 17U â Ãcido 1,7-dimetilÃrico; 1X â metilxantina; 17X â 1,7-dimetilxantina e AFMU â 5-acetilamino-6-formilamino-3-metiluracil. A partir das concentraÃÃes molares urinÃrias dos metabÃlitos foram determinadas as atividades das enzimas: CYP1A2 = (AFMU + 1X + 1U)/ 17U; CYP2A6 = 17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U); NAT2 = AFMU/ (AFMU + 1X + 1U) e XO = 1U/ (1X + 1U). Os valores das atividades enzimÃticas foram submetidos a anÃlise por estatÃstica descritiva (histograma) nÃo apresentando distribuiÃÃo normal. Foram identificados pelo menos trÃs fenÃtipos metabolizadores para as enzimas CYP1A2, NAT2 e XO. Com base na atividade de cada enzima os voluntÃrios foram divididos em dez grupos organizados categoricamente. Os voluntÃrios dos grupos de maior e menor atividade enzimÃtica foram escolhidos para determinaÃÃo dos parÃmetros farmacocinÃticos (ASC; t1/2; ke; Vd/Kg; CL). A comparaÃÃo destes parÃmetros (teste âtâ de Student) entre os dois grupos apresentou diferenÃas significantes (p<0,05). Nossos resultados sugerem a existÃncia de polimorfismo nas enzimas estudadas de acordo com a heterogeneidade das atividades enzimÃticas na amostra da populaÃÃo de voluntÃrios saudÃveis do estado do CearÃ. / Characterization of acetylator and oxidative metabolizers phenotypes is of clinical relevance, as it has been shown that the pharmacological response of several therapeutic agents. The studies of phenotypage and genotipage have as purpose to detect and to mensurar polimorfismos in these enzymes. In this study, we assessed in vivo activities of CYP1A2, CYP2A6, Xantine Oxidase (XO) and NAT2 in sample of 82 volunteers (40 men and 42 women) from Cearà â Brazil using caffeine as probe. The volunteers were free from significant cardiac, hepatic, renal, pulmonary, gastrointestinal and hematological disease, as assessed by physical investigation, ECG and hematological and biochemical tests. The study was open, the volunteers were hospitalized, having already had a normal evening meal, and after an overnight fast they received a single 200 mg dose of caffeine tablet. Blood samples were collected in regular interview ( 0; 5min; 15min; 25min; 35min; 45min; 1h; 1,25h; 1,5h; 2h; 4h; 6h; 8h; 12h and 24 hour) after the administration of caffeine. Urine was harvested in its total volume during the 10 hours after the administration of caffeine, the total urinÃrio volume was quantified and an aliquot one was stored for determination of the metabÃlitos. The caffeine was determined in human plasma and the metabolites were determined in human urinary by HPLC using teobromina as an internal standard. The metabolites assessed were: 1U â 1-methyluric acid; 17U â 1, 7-dimethyluric acid; 1X â 1-methylxantine; 17X â 1, 7-1-dimethylxantine e AFMU â 5-acetylamino-6-formylamino-3methyluracil. The following molar ratios were calculated as an index for CYP1A2 activity [(AFMU + 1X + 1U)/ 17U]; CYP2A6 activity [17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U)]; NAT2 activity [AFMU/ (AFMU + 1X + 1U)] and Xanthine Oxidase activity [1U/ (1X + 1U)]. The enzymatic activities were plotted in histogram. The frequency distributions of the CYP1A2, CYP2A6, XO and NAT2 were not normally distributed, showing three phenotypes. Afterwards the volunteers were classified by enzymatic activities in ten groups, and the lowest and highest metabolizers groups were chosen to determine the following pharmacokinetic parameters: AUC0-24, t1/2, ke, CL and Vd/Kg. The comparison of these parameters (test âtâ de Student) between these two groups it showed significant differences (p<0.05). Our findings may suggest that the heterogeneous population assessed (health volunteers from Cearà - Brazil) has shown polymorphism in the enzymatic activities of the CYP1A2, NAT2, XO and CYP2A6

O uso de esteróide anabolizante é cada vez maior por pessoas que praticam exercícios como forma de lazer, sem se importarem com os possíveis efeitos colaterais, o que vem se tornando um importante problema de saúde pública. Dentre os seus principais efeitos colaterais, destacamos a hipertrofia cardíaca, que parece ser ainda mais pronunciada quando associado ao treinamento físico, sendo esta relacionada a maior atividade da enzima conversora de angiotensina cardíaca. Tendo em vista esse cenário, o presente trabalho visa verificar a participação do sistema renina angiotensina aldosterona sobre a hipertrofia cardíaca e síntese de colágeno induzida pelo esteróide anabolizante, associado ao treinamento físico por natação em ratos, por meio do bloqueio de receptores AT1 com Losartan e dos receptores de mineralocorticóides com Espironolactona. Resultados mostram que a administração de esteróide anabolizante aumenta a ativação do sistema renina angiotensina aldosterona cardíaco, o qual está diretamente relacionado aos seus efeitos colaterais, visto que o bloqueio dos receptores AT1 ou dos RM inibiu esses efeitos. Sendo mostrado pela primeira vez, os efeitos do esteróide anabolizante sobre o aumento na expressão do gene da aldosterona sintase e da enzima 11-HSD2, sugerindo os efeitos dos esteróides anabolizantes sobre o aumento da síntese e atividade da aldosterona cardíaca / The anabolic steroid use is growing by recreational exercise practitioners, without worried about the possible collateral effects, becoming an important problem of public health. Among its deleterious effects we detach the cardiac hypertrophy, that looks to be still bigger when the swimming training was associated, being is related to bigger activity of the cardiac angiotensin converter enzime. With that, the present work is going to verify the renin angiotensin aldosteron system participation about the cardiac hypertrophy and collagen synthesis prompted by the anabolic steroid and the association with the swimming training in rat by means of the AT1 receivers blockade with Losartan and of the mineralocorticoids receivers blockade with Espironolacton. Our results show that the anabolic steroid administration increased the cardiac rennin angiotensin aldosteron system activity, that is straightly related to its deleterious effects, seen that the AT1 receivers blockade or the mineracorticoids receivers blockade inhibited those effects. Being shown by the first time the anabolic steroids effects about the increase of the aldosterone sintase gene expression and of the 11-HSD2 enzyme, suggesting the anabolic steroids effects about the cardiac aldosterone synthesis and activity increase