Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Objetivo: avaliar, em voluntÃrios sadios, o comportamento de uma formulaÃÃo teste de minociclina, Minoderm comprimido 100mg, fornecida pelo LaboratÃrio Stiefel Ltda., Brasil, contra uma formulaÃÃo referÃncia de minociclina, MinomaxÂ, comprimido 100mg, fornecida pelo LaboratÃrio Wyeth, Brasil, na ausÃncia e na presenÃa de uma dieta padrÃo especÃfica: 200mL de suco de laranja, 200mL de iogurte de morango, 4 bolachas e 20g de queijo. Desenvolver um mÃtodo preciso e sensÃvel para quantificaÃÃo das duas fÃrmulas de minociclina 100mg utilizando espectrometria de massa (LC-MS-MS).MÃtodo: 24 voluntÃrios sadios, ambos os sexos, foram selecionados para o estudo. Todos concordaram em participar da pesquisa e assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido. O estudo foi aberto, randomizado, cruzado, dose Ãnica e 4 tratamentos. Para quantificaÃÃo da minociclina no plasma humano foi desenvolvido um mÃtodo acurado e sensÃvel utilizando Cromatografia LÃquida Acoplada ao EspectrÃmetro de Massa (LC-MS-MS).Resultados: ambas formulaÃÃes de minociclina foram bem toleradas na dose administrada. A administraÃÃo com dieta padrÃo especÃfica retardou o tempo de absorÃÃo comparada em condiÃÃes de jejum, porÃm sem interferir em Cmax e AUC. AnÃlise estatÃstica das razÃes individuais de AUC(0-96h) e Cmax para as duas formulaÃÃes de minociclina (Minoderm/MinomaxÂ) na ausÃncia e na presenÃa de dieta padrÃo especÃfica foram: AUC em jejum 101,2 e sob dieta 97,2; Cmax em jejum 106,0 e sob dieta 91,2. Os exames clÃnicos e laboratoriais realizados nÃo apresentaram alteraÃÃes de significado clÃnico. ConclusÃo: os parÃmetros farmacocinÃticos da minociclina administrada em jejum ou na presenÃa de dieta padrÃo especÃfica permaneceram inalterados sendo bioequivalentes com um intervalo de confianÃa de 80-125%. O mÃtodo analÃtico desenvolvido mostrou-se adequado para sua quantificaÃÃo

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Cetorolaco de trometamina (Cetorolaco) à um antiinflamatÃrio nÃo esteroidal (AINE) usado no tratamento da dor. O uso da formulaÃÃo sublingual tem diversas vantagens, como por exemplo, aumento da biodisponibilidade e fÃcil administraÃÃo, especialmente em pacientes que tem dificuldades para engolir. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o perfil farmacocinÃtico da formulaÃÃo sublingual do Cetorolaco em voluntÃrios brasileiros do sexo masculino. Este foi um estudo aberto, nÃo randomizado, 01 perÃodo, 01 tratamento, com dose Ãnica de rÃpida absorÃÃo, em que foi administrado um comprimido de 30 mg de Cetorolaco por via sublingual. Foram incluÃdos apenas voluntÃrios brasileiros sadios. ApÃs uma noite internados, os voluntÃrios receberam uma dose Ãnica da formulaÃÃo sublingual. Amostras de plasma foram obtidas em um perÃodo de 24 horas apÃs a administraÃÃo. A concentraÃÃo plasmÃtica de Cetorolaco foi analisada por Cromatrografia LÃquida de Alta EficiÃncia acoplada a um EspectrÃmetro de Massa para anÃlise dos parÃmetros farmacocinÃticos, incluindo o Cmax, ASC0-24, e ASC0-∞. A tolerabilidade foi avaliada pelo monitoramento dos sinais vitais, resultados das anÃlises laboratoriais, anamnese e exame fÃsico com os voluntÃrios. 14 voluntÃrios do sexo masculino foram incluÃdos e completaram o estudo. Os valores dos parÃmetros farmacocinÃticos (mÃdia  desvio padrÃo, exceto mediana para o tempo do Tmax) calculados para a formulaÃÃo foram os seguintes: ASC0-∞ (9682  1908 ng*h/mL); ASC0-24 (9346  1789 ng*h/mL); Cmax (2605  465 ng/mL); Tmax (0,58  0,22 h); t1/2 (5,76  0,69 h) and Ke (0,12  0,02 1/h). A formulaÃÃo do cetorolaco foi bem tolerada na dose administrada e nenhuma reaÃÃo adversa foi observada. A vantagem do uso da formulaÃÃo sublingual de Cetorolaco à sua administraÃÃo prÃtica. Essa pode ser uma escolha para dor moderada e grave, especialmente em pacientes em que a via parenteral à indesejada ou impraticÃvel, ou para aqueles que tenham dificuldade de engolir. Os mÃtodos foram aplicados com sucesso, sendo possÃvel analisar os parÃmetros farmacocinÃticos e avaliar a seguranÃa da formulaÃÃo do comprimido de 30mg do cetorolaco de trometamina administrado por via sublingual em voluntÃrios saudÃveis. / Ketorolac tromethamine (ketorolac) is a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) used in the treatment of pain. The use of a sublingual analgesic has several advantages such as increased bioavailability and ease of administration, especially in patients who have difficulty swallowing. Thus, the aim of this study was to evaluate the pharmacokinetic profile of a formulation of ketorolac in Brazilian male volunteers. This was an open, non-randomized, 01 period, 01 treatment, single dose under fasting conditions study where was administered 30 mg sublingual tablet formulation of ketorolac. Healthy Brazilians male were eligible for inclusion. After an overnight fast, subjects received a single sublingual dose of the formulation. Plasma samples were obtained over a 24-hour period after administration. Plasma ketorolac concentrations were analyzed by High Performance Liquid Chromatography coupled Mass Spectrometry for analysis of pharmacokinetic properties, including Cmax, AUC0-24, and AUC0-∞. Tolerability was assessed by vital sign monitoring, laboratory analysis results, anamnesis and physical examination. A total of 14 male subjects were enrolled and completed the study. The pharmacokinetics parameters values (mean  standard deviation, except median for time to Tmax) calculated for formulation were as follows: AUC0-∞ (9682  1908 ng*h/mL); AUC0-24 (9346  1789 ng*h/mL); Cmax (2605  465 ng/mL); Tmax (0,58  0,22 h); t1/2 (5,76  0,69 h) and Ke (0,12  0,02 1/h). The ketorolac formulation was well tolerated at the administered dose and no adverse reactions were observed. The advantage of the use of the sublingual formulation of ketorolac is its practical administration. It can be the treatment of choice for moderate and severe pain, especially in patients where parenteral route is undesirable or impracticable, or those who have difficulty of swallowing. The methods were successfully applied, it is possible to analyze the pharmacokinetic parameters and assess the safety of the tablet formulation of 30 mg of ketorolac tromethamine administered sublingually in healthy volunteers.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / In the present work, behavioral, neurochemical (determination of monoamines and metabolites levels rat in striatum), histopatological and biochemical (lipoproteins and transaminases) alterations produced by cocaine, ethanol and the association of theses were analyzed. Females Wistar rats (180-200 g) were treated during 7 days with cocaine (Coc 10 and 20 mg/kg, i.p.), ethanol (Et 2 and 4g/kg, p.o.) and the association of theses (Coc 10 mg + Et 2g - low interaction doses; Coc 20 mg + Ethanol 4g - high interaction doses). The results demonstrated that the spontaneous locomotor activity (SLA) was increased after cocaine administration and decreased after ethanol in both doses. It was not observed alterations in the SLA in the association cocaine + ethanol. The treatment with cocaine and ethanol caused an increase in dopamine level. The association cocaine + ethanol in higher doses caused an increase of dopamine and serotonin and decrease of DOPAC levels, suggesting that those drugs would can actuate directly in those systems or, indirectly, across a process of modulation. Cocaine, ethanol and the association of theses, after subcronic administration and in both doses, caused a donwregulation of D2-like receptors, not by recurring alterations in the values of Kd. The values of Bmax and Kd of the M1 + M2-like receptors have not already suffered alterations. In the biochemical study, the administration of cocaine induced an increase the concentrations of TGO and triglycerides, and decrease of the concentrations of TGP, total cholesterol and HDL. The treatment with ethanol decreases the levels of HDL, total cholesterol and triglycerides. The association cocaine + ethanol caused in both doses decrease of triglycerides, HDL, TGP and total cholesterol. All treatments did promote histopatological alterations in cardiac and hepatic woven. Ours results suggest that the association cocaine + ethanol appears to interfere more intense in the systems of neurotransmitters and in the biochemical parameters than the use of the isolated drugs. / No presente trabalho foram estudadas as alteraÃÃes comportamentais, neuroquÃmicas (determinaÃÃes dos nÃveis de monoaminas e metabÃlitos), histopatolÃgicas e bioquÃmicas (lipoproteÃnas e transaminases) em corpo estriado de ratos tratados com cocaÃna e etanol isoladamente ou em associaÃÃo. Foram utilizadas ratas Wistar (180-200 g), que foram tratadas durante 7 dias com cocaÃna (Coc 10 e 20 mg/kg, i.p.), etanol (Et 2 e 4g/kg, v.o.) e a associaÃÃo destes (Coc 10 mg + Et 2g - interaÃÃo baixas doses; Coc 20 mg + Etanol 4g - interaÃÃo altas doses). Os resultados demonstraram que a atividade locomotora espontÃnea (ALE) foi aumentada apÃs administraÃÃo de cocaÃna em ambas as doses e diminuÃda apÃs a administraÃÃo de etanol em ambas as doses. NÃo foram observadas alteraÃÃes na ALE na associaÃÃo cocaÃna + etanol. O tratamento com cocaÃna e etanol causou um aumento de dopamina, sem alteraÃÃes nos demais neurotransmissores e metabÃlitos. A associaÃÃo cocaÃna + etanol em altas doses, promoveu aumento dos nÃveis de dopamina, diminuiÃÃo de DOPAC e aumento dos nÃveis de 5-HT, sugerindo que essas drogas poderiam atuar diretamente nesses sistemas ou, indiretamente, atravÃs de um processo de modulaÃÃo. A cocaÃna, etanol e a associaÃÃo destes, apÃs administraÃÃo sub-crÃnica e em ambas as doses, causou uma downregulation em receptores D2-sÃmile, nÃo ocorrendo alteraÃÃes nos valores de Kd. Os valores de Bmax e Kd dos receptores M1 + M2-sÃmile nÃo sofreram alteraÃÃes. No estudo bioquÃmico, a administraÃÃo de cocaÃna induziu um aumento nas concentraÃÃes de TGO e triglicerÃdeos, e diminuiÃÃo das concentraÃÃes de TGP, colesterol total e HDL. O tratamento com etanol diminuiu os nÃveis de HDL, colesterol total e triglicerÃdeos. A associaÃÃo cocaÃna + etanol promoveu em ambas as doses diminuiÃÃo de trigicerÃdeos, HDL, TGP e colesterol total. Todos os tratamentos promoveram alteraÃÃes histopatolÃgicas em tecido cardÃaco e hepÃtico. Nossos resultados sugerem que a associaÃÃo cocaÃna + etanol parece interferir de maneira mais intensa nos sistemas de neurotransmissÃo e nos parÃmetros bioquÃmicos do que o uso das drogas isoladas.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / O praziquantel (PZQ), um fÃrmaco quiral disponÃvel como racemato, e o albendazol (ABZ), um fÃrmaco biotransformado ao metabÃlito ativo quiral sulfÃxido de abendazol (ASOX), tem sido empregados no tratamento da neurocisticercose humana. O estudo abrange a investigaÃÃo da disposiÃÃo cinÃtica, metabolismo e enantiosseletividade na associaÃÃo ABZ - PZQ em voluntÃrios sadios. O estudo cruzado e aleatÃrio foi desenvolvido em trÃs fases (n=9), sendo que alguns voluntÃrios iniciaram pela FASE 1 (400mg de ABZ), outros pela FASE 2 (1500mg de PZQ) e outros pela FASE 3 (400mg de ABZ + 1500mg de PZQ). O perÃodo de washout foi de no mÃnimo 15 dias (FASE 1 seguida da FASE 2 e FASE 1 seguida da FASE 3) ou 7 dias (FASE 2 seguida de uma das outras FASES). As amostras seriadas de sangue foram coletadas no perÃodo de 0-48h. Os metabÃlitos do ABZ foram analisados por HPLC com detecÃÃo por fluorescÃncia e os enantiÃmeros do PZQ e do trans-4-hidroxipraziquantel (4-OHPZQ) foram analisados por LC-MS-MS. Os parÃmetros farmacocinÃticos foram determinados com auxÃlio do programa WinNonlin. O teste de Wilcoxon (p≤0.05) foi empregado para avaliar as razÃes enantiomÃricas de concentraÃÃes plasmÃticas do ASOX, PZQ e 4-OHPZQ. Os dados estÃo expressos como medianas. A disposiÃÃo cinÃtica do PZQ, 4-OHPZQ e do ASOX Ã enantiosseletiva na situaÃÃo de monoterapia; as razÃes de AUC sÃo de 2,97 para (+)-(S)-PZQ /(-)-(R)-PZQ, 0,78 para (+)-(S)-4OHPZQ /(-)-(R)-4-OHPZQ e 7,08 para (+)-ASOX/(-)-ASOX. A administraÃÃo de PZQ resulta em aumento das concentraÃÃes plasmÃticas do (+)-ASOX em 264% (AUC 980,42 vs 2591,80 ng.h/ml), do (-)-ASOX em 358% (139,59 vs 500,28 ng.h./ml) e do sulfona de albendazol em 187% (170,85 vs 319,50ng.h./ml) sugerindo o PZQ como inibidor da Pgp intestinal. A administraÃÃo de ABZ nÃo altera a disposiÃÃo cinÃtica do (+)-(S)-PZQ e dos metabÃlitos (-)-(R)-4-OHPZQ e (+)-(S)-4OHPZQ, mas resulta em aumento das concentraÃÃes plasmÃticas do (-)-(R)-PZQ em 64,77% (AUC 518,02 vs 853,57ng.h/ml) sugerindo inibiÃÃo enantiosseletiva do metabolismo do ASOX. Os dados permitem sugerir a possibilidade de aumento da eficÃcia terapÃutica na interaÃÃo ABZ-PZQ, embora outros estudos sejam necessÃrios para avaliar a seguranÃa da interaÃÃo. / The praziquantel (PZQ), a chiral drug available as racemic, and the albendazole (ABZ), a drug biotransformed into active metabolic chiral suphoxide of abendazol (ASOX), have been used in the treatment of human neurocysticercosis. The study covers the examination / search of the kinetic disposition, the metabolism, and the enantioselectiveness in the ABZ-PZQ association in healthy volunteers. The crossed and random study was developed in three phases (n=9), in which some volunteers started by PHASE 1 (400 mg of ABZ), others by PHASE 2 (1500mg of PZQ), and others by PHASE 3 (400 mg of ABZ + 1500mg of PZQ). The period of washout was of a minimum of 15 days (PHASE 1 followed by PHASE 2 and PHASE 1 followed by PHASE 3) or of 7 days (PHASE 2 followed by one of the other Phases). The serial blood samples were collected in a period of 0-48 hours. The ABZ metabolics were analised by HPLC with detection by fluorescence and the PZQ enantiomers and the trans-4-hydroxypraziquantel (4-OHPZQ) were analised by LC-MS-MS. The pharmacokinetic patterns were determined with the help of the WinNonlin program. The test of Wilcoxon (p≤0.05) was used to evaluate the enantiomer ratios of plasma concentrations of ASOX, PZQ and 4-OHPZQ. The data are shown as medians. The kinetic disposition of the PZQ, 4-OHPZQ and ASOX is enantioselective in the monotherapy situation; the ratios of AUC are of 2.97 to (+)-(S)-PZQ / (-)-(R)-PZQ, 0.78 to (+)-(S)-4-OHPZQ / (-)-(R)-4-OHPZQ, and 7.08 to (+)-ASOX / (-)-PZQ. The administration of the PZQ results in the increase of the plasma concentrations of the (+)-ASOX in 264% (AUC 980.42 vs 2591.80ng.h./ml), of the (-)-ASOX in 358% (139.59 vs 500.28ng.h./ml), and of the sulphona of albendazole in 187% (170.85 vs 319.50ng.h./ml), suggesting the PZQ as an inhibiting factor of the intestinal Pgp. The administration of the ABZ does not change/ alter the kinetic disposition of the (+)-(S)-PZQ, and of the metabolic (-)-(R)-4-OHPZQ and (+)-(S)-4-OHPZQ, but it results in the increase of the plasma concentrations of the (-)-(R)-PZQ in 64.77% (AUC 518.02 vs 853.57ng.h./ml ), suggesting enantioselective inhibition of the metabolism of the ASOX. The data allow us to suggest the possibility of increase of therapeutic efficacy in the ABZ-PZQ interaction; although, other studies are necessary to evaluate the safety of the interaction.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A rapid, specific and highly sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was developed to determine nimodipine in human plasma using dibucaine as the internal standard (IS) is described. The analyte (m/z 418,6 > 342,6) and IS (m/z 344,2 > 271,0) were extracted from plasma samples by liquid-liquid extraction using hexane-ethyl acetate (1:1v/v). Chromatography was performed on a Varian Polaris C18 analytical column (3 micrometer, 50 x 2,0 mm) and pre-column SecurityguardTM C18 (4,0 x 3,0 mm). The phase mobile consisted of Acetonitrile-Ammonium acetate 0.02 ml/L (80:20v/v). The method had a chromatographic run time of 4.5 min and linear calibration curve over the range 0.1- 40 ng/mL (r2 > 0.9938). The limit of quantification (LQ) was 0.1 ng/mL. The intra-day precision for the limit quantification was 0.00% (batch 01), 5.71% (batch 02) and 5.27% (batch 03); for the quality controls low (QCL), middle (QCM) and high (QCH) the results were respectively 8.57, 0.81 and 1.37%. The inter-day precision for LQ and QCL, QCM and QCH were respectively: 7% and 5.46, 4.12 and 3.37%. The intra-day accuracy for LQ was 110, 96 and 104%; for QCL, QCM and QCH the results were100.67, 109.09 and 109.72% respectively. The results of the inter-day accuracy for LQ, QCL, QCM and QCH were respectively and 110.0, 96.0, 104.0% for the limit of quantification and 8.57, 0.81, 1.37% and 100.67, 109.09, 109.72% respectively: 103% e 102.89, 106.60, 109.69%. This validated method was successfully applied for the pharmacokinetic profiles of nimodipine tablets administered to 24 healthy volunteerâs participant of bioavailability comparative study. Geometric mean of Test formulation/Refernce formulation individual percent ratio was 104,56% for AUC0-48h and 55,73% for Cmax. The 90% for the confidence intervals (CI) were 94,80-115,32% e 44,73-69,42%, respectively. The values of half-life and Cmax for test formulation and reference formulation were 27,83;32,78h and 9,48;18,76ng/mL, respectively. The values of Tmax were 2,34;0,98h for the formulations test and reference respectively. Since the 90% CI for Cmax and AUC0-48h, were within the 80-125% interval proposed by the âFood and Drug Administrationâ and ANVISA, it was concluded that the two formulations of nimodipine 30mg tablets were not bioequivalent, according to the rate of absorption after single dose administration. / Um mÃtodo rÃpido, sensÃvel e especÃfico de Cromatografia LÃquida de Alta EficiÃncia acoplada à Espectrometria de Massa (LC-MS-MS) foi desenvolvido para determinar nimodipino (analito) em plasma humano usando dibucaÃna como padrÃo interno (PI). O analito (m/z 418,6 > 342,6) e o PI (m/z 344,2 > 271,0) foram extraÃdos de amostras de plasma atravÃs de extraÃÃo lÃquido-lÃquido utilizando hexano-acetato de etila (1:1v/v). As corridas cromatogrÃficas foram executadas utilizando-se uma coluna analÃtica Varian Polaris C18 (3 micrÃmetros, 50 x 2,0 mm) e uma prÃ-coluna SecurityguardTM C18 (4,0 x 3,0 mm). A fase mÃvel consistiu de acetonitrila-soluÃÃo de acetato de amÃnio 0,02 mol/L (80:20v/v). O mÃtodo teve um tempo total de corrida de 4,5 min e uma curva de calibraÃÃo linear que variou de 0,1-40 ng/mL. O limite de quantificaÃÃo de 0,1 ng/mL. A precisÃo intra-ensaio para o limite de quantificaÃÃo (LQ) foi 0,00% (lote 01), 5,71% (lote 02) e 5,27% (lote 03); para os controles de qualidade baixo (CQB), mÃdio (CQM) e alto (CQA) os resultados foram respectivamente: 8,57, 0,81 e 1,37%. A precisÃo interensaio para o LQ e os CQB, CQM e CQA foram respectivamente de: 7% e 5,46, 4,12 e 3,37%. A exatidÃo intra-ensaio para o LQ foi 110, 96 e 104%; para CQB, CQM e CQA os resultados foram 100,67, 109,09 e 109,72% respectivamente. Os resultados da exatidÃo interensaio para o LQ, CQB, CQM e CQA foram respectivamente de: 103% e 102,89, 106,6, 109,69%. Este mÃtodo foi aplicado para a avaliaÃÃo do perfil farmacocinÃtico do nimodipino administrado em 24 voluntÃrios sadios participantes de um estudo de biodisponibilidade comparativa. A mÃdia geomÃtrica da FormulaÃÃo teste/FormulaÃÃo referÃncia para as porcentagens individuais foi 104,56% para ASC0-48h e 55,73% para Cmax. Os intervalos obtidos a partir do intervalo de confianÃa (IC) de 90% foram 94,80-115,32% e 44,73-69,42% respectivamente. Os valores de meia-vida e Cmax para as formulaÃÃes teste e referÃncia foram de 27,83;32,78h e 9,48;18,76ng/mL, respectivamente. Os valores de Tmax foram de 2,34;0,98h para as formulaÃÃes teste e referÃncia, respectivamente. Considerando o IC de 90% para Cmax e ASC0-48h dentro da variaÃÃo de 80-125% proposto pelo Food and Drug Administration e ANVISA, as duas formulaÃÃes de nimodipino 30mg nÃo sÃo bioequivalentes quanto à taxa de absorÃÃo (Cmax) apÃs uma Ãnica administraÃÃo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / DisfunÃÃo erÃtil (DE) à definida como uma inabilidade para conseguir e manter uma ereÃÃo para satisfaÃÃo sexual. A fentolamina um antagonista a-adrenÃrgico tem sido usado para tratar DE desde 1994, principalmente em combinaÃÃo com outros agentes vasoativos. Mais recentemente uma formulaÃÃo oral mesilato de fentolamina foi desenvolvida para a doenÃa. A droga relaxa corpo cavernoso peniano inibindo a-adrenÃrgicos receptores. Desde o artigo de Traish (1998) se tem especulado que a fentolamina pode relaxar o mÃsculo liso peniano por um mecanismo nÃo adrenÃrgico. O objetivo deste estudo à compreender melhor a farmacocinÃtica da fentolamina (estudo in vivo) usando os dados de um teste de bioequivalÃncia, and investigar sua farmacodinÃmica no corpo cavernoso humano com o propÃsito de dirimir as dÃvidas sobre seu mecanismo nÃo adrenÃrgico neste sÃtio (estudo in vitro). MÃtodos (estudo in vivo): Trinta e seis voluntÃrios sÃos, masculinos, (idade mÃdia 21,5 anos) foram admitidos no estudo cujo desenho consistia de um ensaio duplo cruzado randomizado, com uma Ãnica dose, comparando (regitinaÃ) a uma formulaÃÃo padrÃo de fentolamina (VasomaxÃ). Estudo in vitro: Um total de 64 tiras isoladas de corpo cavernoso humano obtido de 16 doadores cadÃveres masculinos (16 â40 anos de idade) foram investigados. A atividade farmacolÃgica do relaxamento mediado pela fentolamina de fragmentos prÃ-contraÃdos de tecido erÃtil peniano foi estudada em banho de tecidos (meio nÃo adrenÃrgico/nÃo prostanÃide). Resultados (estudo in vivo): a razÃo da mÃdia geomÃtrica de Cmax da formulaÃÃo de Regitinaà 40 mg foi 108.29% (90% CI = 98.58 â 118.96) da formulaÃÃo de Vasomax 40 mg. A razÃo da mÃdia geomÃtrica da [AUC(0-720 min)] da formulaÃÃo de Regitinaà 40 mg foi 102.33 (90% CI = 97.21 â 19= 07.72) da formulaÃÃo de Vasomaxà 40 mg. A mÃdia dos parÃmetros farmacocinÃticos da fentolamina foram Cmax 15,4 ng/mL, Tmax 50 min e t1/2 3 h. (Estudo in vitro): A fentolamina causou relaxamento dependente da concentraÃÃo em tiras de corpo cavernoso humano prÃ-contraÃdas com o agonista a-adrenÃrgico fenilefrina bem como com os agentes nÃo adrenÃrgicos serotonina (10-4 M), prostaglandina F2a (10-4 M) e KCl (60 mM), com a melhor eficÃcia contra a fenilefrina (100% de relaxamento na concentraÃÃo de 10-3 M - IC50 = 1,5 x10-5 M). A Tetrodotoxina (TTX â 10-6 M) (bloqueador de canal de Na+) e atropina (10-5 M) (inibidor do receptor muscarÃnico) nÃo alterou o relaxamento da fentolamina no mÃsculo liso peniano (54,6  4,6% x 48,9 x 6,4%) (52,7  6,5% x 58,6  5,6%) (p > 0,05). O relaxamento da fentolamina nas tiras de corpo cavernoso humano prÃ-contraÃdos com KCl (40 mM) foi significantemente atenuado por NG-nitro-L-arginine L-NAME (10-4 M) ( inibidor da NO sintetase) (59,7  5,8% x 27,8  7,1%) (p < 0,05) e 1H-[1,2,4] Oxadiazole [4,3-a]quinoxalin-1-one ODQ (10-4 M) (inibidor da guanilato ciclase) (62,7  5,1% x 26,8  3,9%) (p < 0,05). O papel dos bloqueadores dos canais de K foram investigados. A glibenclamida (10-4 M) um inibidor do canal de potÃssio ativado por ATP (inibidor do KATP) causou uma inibiÃÃo quase completa (90%) do relaxamento da fentolamina em tiras de corpo cavernoso humano prÃ-contraÃdas com KCl (40 mM) (56,7  6,3% x 11,3  2,3%) (P < 0,05). InvestigaÃÃo com glibenclamida + L-NAME fez o mesmo efeito (54,6  5,6% x 5,7  1,4%) (p < 0,05). Os bloqueadores do canal de potÃssio dependente de CA++ (Kca) Charybdotoxina e apamina nÃo modificaram o relaxamento da fentolamina (54,6  4,6% v 59,3  5,2%) ConclusÃo: Os parÃmetros farmacocinÃticos mÃdios da fentolamina foram similares aos reportados pela literatura cientÃfica. As duas formulaÃÃes da fentolamina foram consideradas semelhantes. Os resultados dos estudos farmacolÃgicos da fentolamina sugerem que ela relaxa o corpo cavernoso de humanos tambÃm por mecanismo nÃo adrenÃrgico-nÃo colinÃrgico, ativando o canal de potÃssio KATP. / Erectile dysfunction (ED) is defined as the Inability to achieve or maintain an erection adequate for sexual satisfaction. Phentolamine an a-adrenergic antagonist has been used to treat ED since 1994, mostly in combination with other vasoactive agents. More recently oral formulation of Phentolamine mesylate were developed for the disease. The drug is thought to relax penile smooth muscle by a inhibition over a-receptors. Since the paper of Traish (1998) has been speculated that phentolamine may also relax penile smooth muscle by a non-adrenergic mechanism. The aim of this study is to understand the pharmacokinetics aspects of Phentolamine (in vivo study) using the data from a bioequivalence test, and to investigate its pharmacodynamics with the purpose to clear its non-adrenergic mechanism in human corpus cavernosum (in vitro study). Methods (In vivo study): Thirty six healthy male volunteers (mean age 21,5 years old) were enrolled in the study that consisted in a single dose, two-way randomized crossover design comparing one phentolamine formulation (regitinaÃ) to one standard phentolamine formulation (VasomaxÃ). In vitro study: A total of 64 isolated human corporeal tissue strips obtained from 16 male donor cadaver (16 â40 years old) were investigate. The pharmacologic activity of phentolamine-mediated relaxation, of pre-contracted erectile tissue strips of human corpus cavernosum were studied in organ bath chambers(non-adrenergic mean). Results: (in vivo study): Regitinaà 40 mg formulation Cmax geometric mean ratio was 108.29% (90% CI = 98.58 â 118.96 of Vasomax 40 mg formulation. Regitineà 40 mg formulation [AUC(0-720 min)] geometric mean ratio was 102.33 (90% CI = 97.21 â 19= 07.72) of Vasomaxà 40 mg formulation. The average phentolamine pharmacokinetics parameters were Cmax 15,4 ng/mL, Tmax 50 min and t1/2 3 h. (In vitro study): Phentolamine caused concentration dependent relaxation in human corpus cavernosum strips pre-contracted with the a-adrenergic agonist phenylephrine as well as with the non-adrenergic serotonin (10-4 M), prostaglandin F2a (10-4 M) and KCl (60 mM) agents, with the best efficacy against phenylephrine (100% of relaxation at 10-3 M - IC50 = 1,5 x10-5M). Tetrodotoxin (TTX â 10-6 M) (Na+ channel blocker) and atropine (10-5 M) (muscarinic receptor inhibitor) did not cause alterations in the phentolamine relaxation of the penile smooth muscle (54,6  4,6% x 48,9 x 6,4%) (52,7  6,5% x 58,6  5,6%) (p > 0,05). The relaxation of phentolamine of the human corpus cavernosum strips pre-contracted with KCl (40 mM) was significantly attenuated by NG-nitro-L-arginine L-NAME (10-4 M) (NO synthase inhibitor) (59,7  5,8% x 27,8  7,1%) (p < 0,05) and 1H-[1,2,4] Oxadiazole [4,3-a]quinoxalin-1-one ODQ (10-4 M) (inibidor da guanilato ciclase (62,7  5,1% x 26,8  3,9%) (p < 0,05). The role of the K channel blockers were investigated. Glibenclamide (10-4 M) an inhibitor of ATP-activated K+ -channels (KATP- inhibitor) caused a almost completely inhibition (90%) of the human corpus cavernosum strips phentolamine relaxation, pre-contracted with KCl (40 mM) (56,7  6,3% x 11,3  2,3%) (P < 0,05). Investigation with Glibenclamide + L-NAME did the same effect (54,6  5,6% x 5,7  1,4%) (p < 0,05). Charybdotoxin and apamin (blockers of CA++-activated K+ channels â Kca) did not alter the phentolamine relaxations (54,6  4,6% v 59,3  5,2%) Conclusion: The average phentolamine pharmacokinetics parameters were similar to the reported by scientific literature. The two drugs are bioequivalents for the rate and extent of absorption. The results from the Pharmacologic studies suggest that Phentolamine relaxes human corpus cavernosum by a nonadrenergic noncholinergic mechanism activating the ATP-activated K+ -channel (KATP).

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / AtravÃs da cromatografia lÃquida de alta eficiÃncia com detecÃÃo por espectrometria de massa no modo MS/MS, desenvolveu-se um mÃtodo sensÃvel e altamente seletivo para determinar os nÃveis de acetato de megestrol no plasma humano, usando a betametasona como padrÃo interno. O analito e o padrÃo interno foram extraÃdos das amostras do plasma atravÃs da soluÃÃo de extraÃÃo hexano-acetato de etila (1:1 v/v), e cromatografados em uma coluna C18. A fase mÃvel consistiu de acetonitrila-Ãgua (80:20 v/v), contendo 0,1% de Ãcido fÃrmico. A detecÃÃo foi realizada em um triplo-quadrupolo, atravÃs de um espectrÃmetro de massa no modo de monitoramento de reaÃÃo mÃltipla via eletrospray. O mÃtodo tem um tempo de corrida de 3 minutos e limite de quantificaÃÃo de 2 ng/mL. As curvas de calibraÃÃo foram obtidas utilizando uma faixa de concentraÃÃo de 2 a 150 ng/mL. As precisÃes intralote foram 3,16%, 4,65% e 2,68%, e a acurÃcia intralote foi de 6,77%, 6,23% e 5,73% para 6, 60 e 120 ng/mL, respectivamente. As precisÃes interlote foram 7,76%, 6,23% e 6,37%, e a acurÃcia interlote foi de 0,08%, 1,55% e 2,11% para as mesmas concentraÃÃes. Este mÃtodo validado foi aplicado com sucesso para a determinaÃÃo dos parÃmetros farmacocinÃticos dos comprimidos de acetato de megestrol administrados a 30 voluntÃrios sadios. / A sensitive and highly selective liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS-MS) method was developed to determine megestrol acetate in human plasma using betamethazone as the internal standard. The analyte and internal standard were extracted from plasma samples by hexane/ethyl acetate (1:1 v/v), and chromatographed on a C18 column. The mobile phase consisted of acetonitrila-water (80:20 v/v) including formic acid 0.1%. Detection was performed on a triple quadropole tandem mass spectrometer by multiple reaction mode via electrospray source. The method has a chromatographic run time of 3 min and a limit of quantification of 2 ng/mL. The linear calibration curves were obtained in the concentration range 2 â 150 ng/mL. The intra-batch precisions were 3.16%, 4.65%, and 2.68%; and the intra-batch accuracy was 6.77%, 6.23%, and 5.73% for 6, 60 and 120 ng/mL, respectively. The inter-batch precision was 7.76%, 6.23%, and 6.37% and the inter-batch accuracy was 0.08%, 1.55%, and 2.11% for the same concentrations. This validated method was successfully applied for the determination of pharmacokinetic profiles of megestrol acetate tablets administered to 30 healthy volunteers.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A caracterizaÃÃo do fenÃtipo acetilador e oxidativo das atividades das enzimas metabolizadoras à de fundamental relevÃncia para avaliaÃÃo da resposta farmacolÃgica aos vÃrios agentes terapÃuticos. Os estudos de fenotipagem e genotipagem tÃm como finalidade detectar e mensurar polimorfismos nestas enzimas. O estudo teve como objetivo determinar o perfil fenotÃpico da atividade metabolizadora das enzimas CYP1A2, CYP2A6, XO e NAT2 em uma amostra de oitenta voluntÃrios saudÃveis da populaÃÃo do estado do CearÃ, utilizando a cafeÃna como fÃrmaco âprobeâ. Os voluntÃrios foram avaliados atravÃs de consulta mÃdica para confirmaÃÃo do estado de higidez; as funÃÃes metabÃlicas, hepÃtica e renal foram avaliadas atravÃs de exames laboratoriais hematolÃgicos e bioquÃmicos. O protocolo clÃnico consistiu de um internamento onde os voluntÃrios receberam um comprimido de 200mg de cafeÃna e coletas de sangue e urina. As amostras de sangue seguiram os seguintes intervalos a partir da administraÃÃo: 0; 0:05; 0:15; 0:25; 0:35; 0:45; 1:00; 1:15; 1:30; 2; 4; 6; 8; 12 e 24 horas. A urina foi colhida em seu volume total durante as 10 horas apÃs a administraÃÃo, o volume urinÃrio total foi quantificado e uma alÃquota foi armazenada para determinaÃÃo dos metabÃlitos. O protocolo analÃtico consistiu de dosagem por HPLC das concentraÃÃes plasmÃticas de cafeÃna e das concentraÃÃes urinÃrias dos cinco principais metabÃlitos da cafeÃna: 1U â Ãcido 1-metilÃrico; 17U â Ãcido 1,7-dimetilÃrico; 1X â metilxantina; 17X â 1,7-dimetilxantina e AFMU â 5-acetilamino-6-formilamino-3-metiluracil. A partir das concentraÃÃes molares urinÃrias dos metabÃlitos foram determinadas as atividades das enzimas: CYP1A2 = (AFMU + 1X + 1U)/ 17U; CYP2A6 = 17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U); NAT2 = AFMU/ (AFMU + 1X + 1U) e XO = 1U/ (1X + 1U). Os valores das atividades enzimÃticas foram submetidos a anÃlise por estatÃstica descritiva (histograma) nÃo apresentando distribuiÃÃo normal. Foram identificados pelo menos trÃs fenÃtipos metabolizadores para as enzimas CYP1A2, NAT2 e XO. Com base na atividade de cada enzima os voluntÃrios foram divididos em dez grupos organizados categoricamente. Os voluntÃrios dos grupos de maior e menor atividade enzimÃtica foram escolhidos para determinaÃÃo dos parÃmetros farmacocinÃticos (ASC; t1/2; ke; Vd/Kg; CL). A comparaÃÃo destes parÃmetros (teste âtâ de Student) entre os dois grupos apresentou diferenÃas significantes (p<0,05). Nossos resultados sugerem a existÃncia de polimorfismo nas enzimas estudadas de acordo com a heterogeneidade das atividades enzimÃticas na amostra da populaÃÃo de voluntÃrios saudÃveis do estado do CearÃ. / Characterization of acetylator and oxidative metabolizers phenotypes is of clinical relevance, as it has been shown that the pharmacological response of several therapeutic agents. The studies of phenotypage and genotipage have as purpose to detect and to mensurar polimorfismos in these enzymes. In this study, we assessed in vivo activities of CYP1A2, CYP2A6, Xantine Oxidase (XO) and NAT2 in sample of 82 volunteers (40 men and 42 women) from Cearà â Brazil using caffeine as probe. The volunteers were free from significant cardiac, hepatic, renal, pulmonary, gastrointestinal and hematological disease, as assessed by physical investigation, ECG and hematological and biochemical tests. The study was open, the volunteers were hospitalized, having already had a normal evening meal, and after an overnight fast they received a single 200 mg dose of caffeine tablet. Blood samples were collected in regular interview ( 0; 5min; 15min; 25min; 35min; 45min; 1h; 1,25h; 1,5h; 2h; 4h; 6h; 8h; 12h and 24 hour) after the administration of caffeine. Urine was harvested in its total volume during the 10 hours after the administration of caffeine, the total urinÃrio volume was quantified and an aliquot one was stored for determination of the metabÃlitos. The caffeine was determined in human plasma and the metabolites were determined in human urinary by HPLC using teobromina as an internal standard. The metabolites assessed were: 1U â 1-methyluric acid; 17U â 1, 7-dimethyluric acid; 1X â 1-methylxantine; 17X â 1, 7-1-dimethylxantine e AFMU â 5-acetylamino-6-formylamino-3methyluracil. The following molar ratios were calculated as an index for CYP1A2 activity [(AFMU + 1X + 1U)/ 17U]; CYP2A6 activity [17U / (AFMU + 1X + 1U + 17X + 17U)]; NAT2 activity [AFMU/ (AFMU + 1X + 1U)] and Xanthine Oxidase activity [1U/ (1X + 1U)]. The enzymatic activities were plotted in histogram. The frequency distributions of the CYP1A2, CYP2A6, XO and NAT2 were not normally distributed, showing three phenotypes. Afterwards the volunteers were classified by enzymatic activities in ten groups, and the lowest and highest metabolizers groups were chosen to determine the following pharmacokinetic parameters: AUC0-24, t1/2, ke, CL and Vd/Kg. The comparison of these parameters (test âtâ de Student) between these two groups it showed significant differences (p<0.05). Our findings may suggest that the heterogeneous population assessed (health volunteers from Cearà - Brazil) has shown polymorphism in the enzymatic activities of the CYP1A2, NAT2, XO and CYP2A6