Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Made available in DSpace on 2014-05-29T12:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69483.pdf: 23322936 bytes, checksum: da546ea400de59d62ce689a1527ed801 (MD5) 69483.pdf.txt: 321680 bytes, checksum: 6370ce3e181189c675b71fee7ec4e25c (MD5) 69483.pdf.jpg: 1479 bytes, checksum: bb823fd956b9bef3d685e4e511e60e9a (MD5) Previous issue date: 2014-05-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A tuberculose (TB) é a principal causa de morbi-mortalidade por doença infecciosa no mundo. A cada ano ocorrem cerca de 9 milhões de novos casos com aproximadamente 2 milhões de mortes, sendo que, somente 1 em cada 10 indivíduos desenvolvem a doença. Fatores genéticos do hospedeiro podem influenciar no controle da susceptibilidade à doença. Desta forma, este trabalho teve como objetivo a caracterização de polimorfismos genéticos associados à imunopatogênese da TB. Para tanto, foram incluídos 172 pacientes com TB pulmonar ativa e 173 indivíduos controle sadios. Foi realizada a extração de DNA em todos os participantes deste estudo e os polimorfismos foram caracterizados para: NOS2A (-954G\2192C), IFNG (+874T\2192A), receptor de vitamina D (VDR) (TaqI, FokI, BsmI e ApaI) e proteína transportadora da vitamina D (DBP) (HaeIII e StyI). Não foi possível determinar nenhuma associação com o desenvolvimento da TB em relação aos polimortismos genéticos descritos neste estudo No entanto, quando ajustamos a casuística em relação ao sexo e raça podemos verificar que o polimorfismo no gene VDR determinado pela enzima de restrição TaqI foi associado com o desenvolvimento da TB em nossa população. Apesar de não observarmos significância estatística em relação aos outros polimorfismos deste gene VDR (FokI, BsmI e ApaI), foi possível obervar que cinco das dezesseis possíveis combinações genéticas foram consideradas raras, sendo seis delas encontrados em cerca de 74,8%, tanto nos pacientes com TB quanto nos indivíduos controle. Apesar de não terem sido observadas diferenças estatísticas nos polimorfismos dos genes avaliados neste estudo, estes devem ser considerados de extrema importância na compreensão da ação do sistema imune bem como a expressão de seus produtos no desenvolvimento da TB, em células infectadas ou não pelo Mtb. Desta forma, análises funcionais em relação a estes genes e seus produtos estão em andamento para tentarmos esclarecer esta associação e possivelmente assegurar seu papel no desenvolvimento da tuberculose em nossa população / Tuberculosis (TB) is the main cause of morbid-mortality by an infection disease worldwide. Each year 9 million new cases occur with approximately 2 million deaths, and among them, only 1 in each 10 persons will develop the disease. Host genetic factors can influence the control of the disease susceptibility, thus, the objective of this study was to characterize the genetic polymorphisms associated with the immunopathogenesis of TB. We included 172 active TB patients and 173 health control individuals. The DNA extraction was carried out in all the participants of this study and the polymorphisms were characterized for: NOS2 (-954G→C), IFNG (+874T→A), vitamin D receptor (VDR) (TaqI, FokI, BsmI e ApaI) and vitamin D binding protein (DBP) (HaeIII and StyI). It was not possible to demonstrate any association with the development of the TB regarding the genetic polymorphisms described in this study. However, when we adjusted the cases and healthy controls by matching sex and race we could verify statistical significance in the TaqI restriction site in the VDR gene, meaning that this restriction site may be associated with TB susceptibility in our population. Besides the lack of association among the other polymorphisms sites in theVDR gene (FokI, BsmI e ApaI), we could observe that five of sixteen genotype combinations were rare, although, six of them were found in aproximatelly 74,8% of TB cases and control individuals. Regardless of statistical differences among the evaluated polymorphisms in this study not being observed, those genes must be considered of extreme importance to understand the immune system actions as well as its product expression on TB development, in cells infected or not by Mtb. Thereby, studies in our population are in progress to try to identify the functional role of IFNG, NOS2A, VDR e DBP SNPs since their secreted products are relevant to the innate and adaptive immune response against Mycobacterium tuberculosis.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:47:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 nathalia_correia_ioc_mest_2015.pdf: 2323287 bytes, checksum: cd639a3b9f983d6d6bdd5bea1e8bcf4d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Triatoma b. brasiliensis, considerado um dos principais vetores da doença de Chagas nas áreas do semiárido nordestino brasileiro, faz parte de um complexo de espécies proposto por estudos multidisciplinares. Atualmente, neste complexo estão incluídos Triatoma b. macromelasoma e Triatoma juazeirensis, apresentando um padrão de distribuição parapátrico nos estados de Pernambuco e Bahia, respectivamente. Todas as espécies do complexo T. Brasiliensis foram encontradas infectadas naturalmente por Trypanosoma cruzi e podem invadir e/ou colonizar as habitações demonstrando diferentes graus de adaptação aos ecótopos artificiais. Em laboratório, estas espécies podem se reproduzir e gerar obtidos híbridos férteis. Assim, a hipótese de existirem híbridos naturais foi testada porestudos morfométricos comparativos das asas e também do padrão cromático do pronoto. Os resultados sugeriram a existência de uma área de hibridação natural no estado de Pernambuco onde posteriormente uma alta variabilidade fenotípica foi registrada,corroborando a hipótese levantada. Pernambuco apresenta altos índices de infestação domiciliar por triatomíneos os quais podem ser encontrados em ecótopos naturais, portanto, os riscos de transmissão do agente etiológico e as possibilidades de reinfestação das casas demandam um constante monitoramento e controle dos vetores nas áreas habitadas. Este trabalho teve por objetivo comparar parâmetros relacionados à competência vetorial de ninfas de 5º estádio de T. b. Brasiliensis e T. juazeirensis e de seus híbridos experimentais(Hjb -\2640T. Juazeirensis x \2642T. b. Brasiliensis e Hbj -\2640T. b. Brasiliensis x \2642T. juazeirensis), obtidos por cruzamentos recíprocos entre as espécies. A suscetibilidade dos híbridos e parentais à infecção por T. cruzi foi analisada pela alimentação artificial com a cepa TcI 0354, e posteriormente dissecados nos períodos de 10, 20 e 30 dias Os comportamentos alimentar e de defecação foram analisados comparativamente pelo:1-registro do tempo de início do repasto sanguíneo em camundongos,2-tempo de duração da alimentação, 3-tempo do término da alimentação e tempo e comportamento de defecação. Os insetos foram pesados antes e após a alimentação nos dois experimentos. Híbridos e parentais apresentaram-se infectados por T. cruzi durante os 30 dias após a alimentação infectante, predominantemente com epimastigotas. A quantidade de epimastigotas no estômago e no intestino de T. Juazeirensis foi significativamente menor do que híbridos e T. b. brasiliensis. A população de tripomastigota metacíclica foi significativamente maior em híbridos no intestino e ampola retal. Os híbridos demonstraram-se mais suscetíveis à infecção por apresentarem estatisticamente um padrão da infecção ao longo do tempo mais homogêneo do que seus parentais. Não foi encontrada relação entre volume de sangue ingerido e taxa de infecção. Híbridos e parentais apresentaram voracidade, pois procuraram avidamente a fonte alimentar nas primeiras semanas. Após a segunda semana, os híbridos levaram mais tempo para iniciarem o repasto sanguíneo e ainda na primeira semana levaram mais tempo para defecar após a alimentação quando comparados aos parentais. T. b. brasiliensis, apresentou as menores médias de tempo para se aproximar da fonte alimentar e iniciar a alimentação, porém não foi estatisticamente diferente de T. juazeirensis. Todos os grupos defecaram próximo do camundongo,T. b. brasiliensis defecou mais vezes em menos de um minuto Este trabalho ressalta a importância epidemiológica desta área em que são encontrados os fenótipos de T. b. brasiliensis, pois híbridos e parentais apresentaram características de bons vetores, sendo os híbridos mais suscetíveis à infecção pela cepa 0354 do que as espécies parentais, enquanto que os parentais apresentaram melhor comportamento alimentar e de defecação / Triatoma b. brasiliensisis consider one of the main vectors of Chagas disease in the Northeast Region of Brazil and belongs to a species complex proposed by multidisciplinar studies. In this species complex, is also included Triatoma b. macromelasoma and Triatoma juazeirensis, geographically distributed in a parapatric form in Pernambuco and Bahia States, respectively. All species of Triatoma brasiliensis complex can be found infected by Trypanosoma cruzi in nature and invading and/or colonizing human habitations with different degrees of adaptation to each artificial ecotope. Since experimental crossings between all of those species can result in fertile hybrids, there was a question whether those hybrids could naturally exist that was tested by morphometric comparisons of the wings and chromatic pattern of pronotum. It was latter suggested the existence of a natural hybridization zone in Pernambuco State in which there is a high phenotypic variability, in corroboration with the hypothesis raised. There are high rates of house infestation by triatomine in Pernambuco State, and it is also find insects in natural ecotopes, therefore there is a high risk of transmission of the etiological agent caused by the possibility of domiciliary reinfestations by insect vector, which demands constant monitoring and control of vectors. This study aimed to compare some of the parameters related to the vector competence of T. b. brasiliensis, T. juazeirensis and their experimental hybrids(Hjb -\2640T. juazeirensis x \2642T. b. brasiliensis and Hbj -\2640T. b. brasiliensis x \2642T. juazeirensis) in the5thnymphal stage, obtained through reciprocal crosses. It was analyzed their susceptibility to infection with T. cruzi through artificial feeding with TcI 0354strain, and then dissected in the10th, 20th and 30th days after infection The feeding and defecation behaviors were comparatively analyzed by the parameters: 1-the elapsed time for the insect to start feeding in mice, 2-the elapsed time between the end of feeding, 3-the defecation time and behavior were registered. We weighed the insects before and after both feeding experiments. Hybrids and parental species maintained infected with the 0354 strain of T. cruzi in the 30 days after the infective of experiment and the epimastigote was the most found form of the parasite. It was significantly lower the number of epimastigotes in the stomach and intestine of T. juazeirensis in comparison to hybrids and T. b. brasiliensis. It was detected a significantly higher percentage of metacyclic trypomastigotes in the intestine and rectum of hybrids. These hybrids demonstrated higher susceptibility to this strain because they present statistically a homogenous pattern of infection. It wasn\2019t found any relationship between ingested blood volume and rates of infection. Hybrids and parental species showed feeding voraciously as they eagerly sought food source in the first weeks of feeding. After two weeks, hybrid stook longer time to begin the blood meal. In addition, in the first week of observation the hybrids took more time for defecation after feeding when compared with parental species. T. b. brasiliensis showed the lowest average time to approach the food source and start feeding, but it was not statistically different from T. juazeirensis All groups of insects defecated near or directly in the mouse but T. b. brasiliensis did it more times in less than 1 minute. This work stress the epidemiological importance in this geographical area of the phenotypes of T. b. brasiliensis, since either hybrids and their parental species presented vector capacity, although hybrids seem to be more susceptible to infection with 0354 T. cruzi strain than parental species, the latter presented better feeding and defecation behavior

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:04:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 sandy_pereira_ioc_mest_2015.pdf: 4606163 bytes, checksum: dd466130d43a2f24db28ac921bec5343 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os macrófagos são um dos principais fagócitos do sistema imunológico atuando tanto na resposta imune inata quanto na adaptativa. Na infecção por Leishmania são as principais células infectadas nos hospedeiros vertebrados, tendo, portanto, a função de controlar ou favorecer a proliferação do parasito. Diferentes espécies do parasito produzem diferentes manifestações clínicas, mas o perfil genético assim como a resposta imunológica do hospedeiro pode modular o desenvolvimento da doença. Para melhor compreensão da biologia das leishmanioses, utilizam-se modelos de infecção experimental em camundongos como ferramenta para estudo da imunologia, resistência e suscetibilidade ao parasito. Neste trabalho estudamos a infecção por Leishmania amazonensis em macrófagos de três linhagens de camundongos com diferentes graus de suscetibilidade ao parasito. Para isso macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c, C57BL/10 e C3H/He foram infectados com promastigotas de L. amazonensis para avaliação da multiplicação de amastigotas intracelulares, produção de óxido nítrico (NO) e produção de citocinas. Macrófagos de C3H/He infectados por 2 MOI de L. amazonensis apresentaram número de amastigotas e taxa de infecção similares a células de BALB/c e C57BL/10 nas primeiras 48h de infecção. No entanto, a partir de 72 horas a taxa de infecção e número total de amastigotas foi menor quando comparadas com células de origem BALB/c. Quando as células foram estimuladas com LPS e IFN-!, a carga parasitária dos macrófagos das três linhagens foram reduzidas, porém os macrófagos BALB/c permaneceram com carga parasitária maior do que os de origem C3H/He A produção de NO pelas células infectadas só foi diferente sob estimulação, quando os macrófagos de origem BALB/c produziram menos NO do que os C3H/He e C57BL/10. A dosagem de citocinas no sobrenadante das culturas sem estimulo mostrou que os macrófagos de C3H/He apresentaram altos níveis de IFN-!, IL-12 e IL-10, sendo este último exacerbado pela infecção, quando comparados as demais linhagens. A estimulação por LPS e IFN-! aumentou a produção de citocinas dos macrófagos de BALB/c e C57BL/10. Já as células de origem C3H/He quando estimuladas mostraram pouca ou nenhuma produção de IL-1", IL12 e IL-10 e uma estimulação moderada de TNF e IL-6. Finalmente, a inibição da iNOS pela aminoguanidina não foi capaz de diminuir a resistência dos macrófagos de C3H/He. Podemos, portanto, concluir que macrófagos de camundongos C3H/He são menos suscetíveis a infecção por L. amazonensis, mas essa sua resistência não é dependente da produção de óxido nítrico e nem de uma resposta do tipo Th1 / Macrophages are the main phagocytes of the imune system, participating on the inate and adaptative responses. They are the main host cell during Leishmania infection, participating on the control or multiplication of the parasite.Different species of the parasite produce different clinical manifestations, but the genetic background and the imune response of the host may modulate the development of the disease. In order to understand the biology of the leishmaniasis the mouse experimental model is used as a tool for the study of immunology and resistance/susceptibility to the parasite. In this work we have studied Leishmania amazonensis infection in macrophages obtained from three different inbred mouse strains, presenting different degrees of susceptibility to infection. Therefore, peritoneal macrophages of BALB/c, C57BL/10 and C3H/He mice were infected with L. amazonensis promastigotes in order to evaluate the number of intracelular amastigotes and infection rate. C3H/He macrophages infected with 2 MOI of L. amazonensis presented similar number of amastigotes and infection rate as BALB/c and C57BL/10 cells on the first 48 hours after infection. However, after 72 hours infection rate and number of amastigotes per cells were higher in BALB/c cells. When cells were stimulated with LPS and IFN-!, parasite load of all three inbred strains was reduced, but macrophages from BALB/c remained with a higher parasite load than C3H/He. Nitric oxide production by infected macrophages was only different under stimulation, when macrophages from BALB/c produced less NO than C3H/He and C57BL/10. Cytokine dosage of culture supernatants showed that all non-stimulated cultures produced of macrophages from C3H/He produced high levels of IFN-!, IL-12 and IL-10, the later being further exacerbated by infection, when compared with the others stains. Stimulation by LPS and IFN-! enhanced cytokine production by BALB/c and C57BL/10 macrophages. C3H/He cells when stimulated showed low or no production of IL1 ", IL-12 and IL-10 and a moderate enhancement of TNF and IL-6. Finally, iNOS inhibition by aminoguanidine was not able to reduce the resistance of C3H/He macrophages. We can then conclude that macrophages from C3H/He are less susceptible to L. amazonensis infection, but resistance is not dependent on nitric oxide production of a Th1 response. / 2016-12-17

Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Novas formas terapêuticas e o progresso da medicina proporcionaram a emergência de infecções por Rhodotorula mucilaginosa em pacientes imunocomprometidos. Este estudo tem o objetivo de avaliar a suscetibilidade dos isolados de R. mucilaginosa aos antifúngicos convencionais, verificar a habilidade destes em modificar seu perfil de suscetibilidade após exposição a crescentes concentrações de anfotericina B (AMB) e comparar a atividade antifúngica de AMB ou voriconazol (VCR) em combinação com fármacos diversos frente aos dois grupos de R. mucilaginosa. Trinta e cinco isolados de R. mucilaginosa proveniente de pacientes foram estudados. Os isolados foram identificados baseado em métodos microbiológicos e moleculares. Definimos como grupo I os isolados fúngicos originais e grupo II como estes mesmos isolados após serem submetidos a crescentes concentrações de AMB. A exposição à AMB foi realizada segundo Fekete-Forgács et al., com algumas modificações. Os testes de susceptibilidade foram realizados de acordo com a técnica de microdiluição em caldo (CLSI M27-A3). AMB, caspofungina, fluconazol e VRC foram testadas isoladamente e ciprofloxacino, levofloxacino, anlodipino, ciclosporina A, fluoxetina, ibuprofeno, sinvastatina e varfarina foram testadas em combinação com AMB ou VRC, utilizando a técnica de microdiluição em caldo “checkerboard”. Os isolados do grupo I foram suscetíveis a baixas concentrações de AMB. A suscetibilidade ao VCR foi muito reduzida. Fluconazol e caspofungina não exibiram atividade frente a R. mucilaginosa. A exposição prolongada à AMB modificou a suscetibilidade dos isolados. Os testes de suscetibilidade com os isolados do grupo II mostraram elevadas Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) para AMB e a inibição pelo VCR requisitou CIMs mais elevadas. No grupo I, a combinação de AMB + ibuprofeno mostrou o maior número de interações sinérgicas. No grupo II, a combinação com o maior número de interações sinérgicas foi AMB + sinvastatina. No grupo I, quando VCR foi combinado com levofloxacino, um potente sinergismo foi observado frente a isolados de R. mucilaginosa. No grupo II, combinação de VRC + ciclosporina A mostrou um potente sinergismo. Os tratamentos para infecção por R. mucilaginosa são restritos e a terapia combinada pode ser uma alternativa quando novos fármacos são combinados com aqueles já disponíveis no mercado. / New therapies and medical progress have led to emerging fungal infections by Rhodotorula mucilaginosa in immunocompromised patients. The objectives of this study were to evaluate the susceptibility profile of Rhodotorula mucilaginosa, verify the ability of this species to change its susceptibility profile after exposure to high concentrations of AMB, and compare the antifungal activity of AMB or voriconazole (VCR) plus combinations of non-antifungal medications against the two groups of R. mucilaginosa. Thirty-five strains of R. mucilaginosa isolated from patients were studied. The isolates were identified based on microbiological and molecular methods. We defined group I to be the original strains isolated from patients and group II as the same strains after in vitro exposure to AMB. AMB exposure was assayed according to Fekete-Forgács et al., with some modifications. Susceptibility tests were performed using the broth microdilution method (CLSI M27-A3). AMB, caspofungin, fluconazole (FLC), and VRC were tested alone and ciprofloxacin, levofloxacin, amlodipine, cyclosporine A, fluoxetine, ibuprofen, simvastatin, and warfarin were tested in combination with AMB or VRC, using the broth microdilution checkerboard technique. All group I isolates were susceptible to low concentrations of AMB. Susceptibility to VRC was quite poor. FLC and CAS exhibited no activity against R. mucilaginosa. Prolonged exposure to AMB changed the susceptibility of the isolates. The susceptibility tests with strains from group II showed high minimal inhibitory concentration (MICs) for AMB and the inhibition by VRC required more elevated MICs. In group I, the combination AMB + ibuprofen demonstrated the highest number of synergistic interactions. In group II, the most synergistic interactions was AMB + simvastatin. In group I, When VCR was combined with levofloxacin, a strong synergism was demonstrate against R. mucilaginosa isolates. In group II, VRC + cyclosporine A combination demonstrated a potent synergism. Treatments for R. mucilaginosa are restricted and a multidrug approach seems to be an alternative by administering novel chemical entity drugs with drugs currently on the market simultaneously.

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T19:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortiz_SilviaCollettaBarretodaCosta_M.pdf: 2223480 bytes, checksum: 1e2219d880f15f009d33fae0450e4a34 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Trabalhos descritos anteriormente evidenciam que vários genes estão envolvidos na regulação da resposta imune à infecção experimental pelo Trypanosoma cruzi. O objetivo do presente trabalho foi identificar a região cromossomial que conferisse resistência ou susceptibilidade ao parasita, utilizando linhagens isogênicas de camundongos livres de patogênos específicos como modelo. Foram avaliados os níveis de parasitemia e a taxa de mortalidade de animais inoculados com a cepa "Y" do T cruzi. Desta maneira, as linhagens C57BL/6 e CBA foram caracterizadas como resistentes enquanto que, as linhagens A/J e C3H/HeP foram classificadas como susceptíveis à infecção pelo parasita. Acasalamentos recíprocos entre as linhagens A/J (susceptível) e C57BL/6 (resistente) foram realizados para determinação do tipo de herança e para análise da resistência nos animais híbridos (F1) e segregantes (F2). A análise dos DNAs dos animais resistentes e susceptíveis foi feita através do estudo dos marcadores polimórficos utilizando-se da técnica de PCR ("Polymerase Chain Reaction") nos cromossomos 1, 2, 4 , 8, 10, 13, 15, 16, e 19 dos animais segregantes. Os resultados obtidos não permitiram detectar uma concentração do gene da linhagem parental resistente (C57BL/6), ou da linhagem parental susceptível (A/J), significativamente maior do que seria esperado numa distribuição ao acaso. Entretanto, esses dados experimentais abrem novas perspectivas de pesquisa que permitem dar continuidade ao estudo da genética de resistência, investigando agora os cromossomos restantes / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Helena Stangler Kraemer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biral_AnaCristinaWestphalCheraria_M.pdf: 8667247 bytes, checksum: c127a462b302f100f7038554539e5f28 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Introdução- A psoríase é uma doença de pele crônica, inflamatória com genes envolvidos na predisposição à doença, localizados na região altamente polimórfica do complexo principal de histocompatibilidade, no cromossomo 6p21.3. O objetivo desse estudo foi identificar, avaliar a distribuição e determinar as associações genéticas dos genes HLA de classe I e os microssatélites do Fator de Necrose Tumoral (TNF) em pacientes brasileiros com psoríase. Pacientes e Métodos- As tipagens HLA-A, -B, -C foram realizadas em 92 pacientes com psoríase e 160 indivíduos sadios como grupo-controle através do DNA genômico, utilizando-se o método PCR/SSP. Desses 92 pacientes, com psoríase, foram tipados 70 pacientes e 71 indivíduos sadios para os microssatélites do TNF, classificados de acordo com o número de alelos (TNFa, b, c, d, e) e amplificados através do DNA genômico pela reação em cadeia da polimerase, visualizadosem gel desnaturante de poliacrilamida, em condições específicaspara cada loco. Resultados- Dos 92 pacientes, 43,3% foram HLA-Cw*06 positivo (p<0,0001 e OR=5.3). Os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLAB* 57 Cw*06 e HLA-B*39 Cw*12 mostraram-se aumentados nos pacientes com psoríase, com significânciaestatística (P<0,05), quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Os microssatélites TNFa4, TNFb1, TNFe1 e o haplótipo TNFa2 b1 c2 d4 e1 mostraram-se com fTeqüência diminuída e com significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. O alelo HLA-B*13 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, TNFa11 b4 c1 d3 e3, mostraram-se com freqüências aumentadas e significância estatística (P<0,05) nos pacientes com psoríase tipo TI quando comparados ao grupo-controle de indivíduos sadios. Também foi encontrado na comparação de pacientes psoríase tipo I com o grupo-controle de indivíduos sadios, um haplótipo estendido nessa região cromossômica, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, com signifiQânciaestatística (P<0,05). Conclusões- Esse estudo mostrou uma associação positiva entre os alelos HLA-B*13, HLA-B*57, Cw*06, Cw*12 e os haplótipos HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06, HLAB* 39 Cw*12, TNFa11 b4 c1 d3 e3 e o haplótipo estendido HLA-B*57 Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 e3, dete~~~o susceptibilidade para o desenvolvimento da psoríase. Também foram encontrados os microssatélites TNFa4, TNFbI, TNFel e o haplótipo TNFa2 bl c2 d4 el com associação negativa, sugerindo um fator de proteção na psoriase. Esses resultados apontam para o fato de que a detecção dos polimorfismos do HLA classe I e microssatélites no loco TNF poderiam ser marcadores de susceptibilidade e proteção genética na doença em pacientes brasileiros / Abstract: Introduction - Psoriasis is a genetic chronic inflammatory skin disorder with genes involved in disease predisposition located within the highly polymorphic Major Histocompatibility Complex (MHC) region on the chromosome 6p21.3. The goal of the present study was to identify, evaluate distribution and determine genetic associations of HLA class I genes and Tumor Necrosis Factor (TNF) microsatellites with psoriasis in Brazilian patients. Patients and Methods - HLA-A,-B, -C typingwas carriedout in 92 psoriasispatientsand 160 healthy individuaIs through genomic DNA using the PCR-SSP method. Typing ofTNF microsatellites was carried out in 70 of the 92 psoriasis patients and in 71 healthy controls. TNF microsatellites were classified according to the number of alleles (TNFa, b, c, d, e) amplified through genomic DNA by polymerase chain reaction and visualized in denaturing polyacrylamine gel, in specific conditions for each locus. Results - Of the 92 patients, 43.3% were HLA-Cw*06 positive (p<0.0001 and OR=5.3). HLA-B*13, HLA-B*57, HLA-Cw*12 alleles and HLA-B*13 Cw*06, HLA-B*57 Cw*06 and HLA-B*39 Cw*12 haplotypes were found to be increased in patients with psoriasis, with a statistical significance (p<0.05) when compared to healthy individuaIs. TNFa4, TNFbl, TNFel microsatellites and the TNFa2 bl c2 d4 el haplotype showed a decreased frequency and a statistical significance (p<0.05) in psoriasis patients when compared to healthy individuals. HLA-B*13 allele and HLA-B*13 Cw*06, TNFall b4 c1 d3 e3 haplotypes showed increased frequencies and a statistical significance (p<0.05) in patients with type II psoriasis when compared to healthy individuaIs. We further found an extended haplotype in that chromosomic region, HLA-B*57 HLA-Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 c3, with a statistical significance (p<0.05). Conclusions - This study shows a positive association between the HLA-B*13, HLA-B*57, Cw*06, Cw*12 alleles and the B*13 Cw*06, B*57 Cw*06, B*39 Cw*12, TNFall b4 cl d3 e3 haplotypes and the extended haplotype HLA-B*57 Cw*06 TNFa2 b5 c2 d4 e3, which determines susceptibility to the development ofpsoriasis. We further found TNFa4, TNFbl, TNFel microsatellites and the TNFa2 bl c2 d4 el haplotype with negative association, which suggests a protection factor against psoriasis. Results point to the fact that detection of HLA class I polymorphisms and microsatellites in the TNF locus may be markers of either genetic susceptibility, or protection against the disease in Brazilian patients / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

A vacinação contra a rubéola tem como objetivo único, a proteção de futuras gerações de crianças em desenvolver a rubéola congênita. Gregg40, em 1941, levantou a hipótese de a rubéola ser a causa do nascimento de crianças com graves malformações congênitas. A confirmação etiológica só foi possível em 1962, com o isolamento do vírus, o que permitiu o desenvolvimento da vacina. A vacina foi utilizada, a partir de 1969, nos Estados Unidos e na Inglaterra e, atualmente, faz parte dos programas de vacinação de rotina na maioria dos países desenvolvidos. As experiências de mais de duas décadas no uso da vacina nos programas de controle da SÍNDROME DA RUBÉOLA CONGÊNITA (SRC) mostraram que a epidemiologia da rubéola, assim como a operacionalização das metas propostas para a cobertura vacinal são bastante complexas. As características do vírus, na sua interação com a população humana, determinam um padrão de transmissibilidade que propicia a formação de bolsões de indivíduos suscetíveis na idade adulta. Em condições naturais, a rubéola infecta cerca de 80 por cento a 90 por cento das pessoas até os 20 anos de idade, deixando um resíduo de indivíduos suscetíveis a partir desta idade, que, aparentemente, se mantém mesmo com epidemias sucessivas. O nascimento de crianças com SRC está condicionado à infecção rubeólica durante a gestação das mães destas crianças, portanto, a existência de mulheres suscetíveis à rubéola na idade fértil é uma condição fundamental à ocorrência da doença. O óbito de crianças malformadas detectadas em alguns meses do ano de 1986 chamou a atenção dos epidemiologistas do Município de Bauru para uma possível associação com a epidemia de rubéola ocorrida na cidade em 1985. Conhecer a proporção de suscetibilidade à rubéola entre gestantes é uma das maneiras para se estimar o risco de ocorrência de SRC. Em 1987, 689 gestantes residentes no Município de Bauru foram entrevistadas e submetidas a teste de inibição de hemaglutinação para determinação de suscetibilidade à rubéola. Destas gestantes, 66 (9,7 por cento ) foram consideradas suscetíveis à rubeóla. Não houve diferença estatisticamente significante na proporção de suscetibilidade das gestantes em relação à idade, número de gestações, paridade e idade gestacional, o que de certa forma confirma a dificuldade do vírus da rubéola em infectar todas as pessoas até o início da idade adulta, mesmo após uma epidemia. Este resíduo de suscetibilidade dificilmente seria eliminado naturalmente, como mostram as diferentes experiências nos países que iniciaram um programa de controle da SRC. Seria necessária uma alta cobertura vacinal (cerca de 95 por cento ) de todas as coortes de crianças e adolescentes para se conseguir a quebra na cadeia do processo infeccioso. Concomitantemente, é decisiva a proteção de todas as mulheres em idade fértil até que, estas coortes de indivíduos bem imunizados atinjam a idade fértil. Uma intervenção desta natureza não poderia ser implementada sem o respaldo de um sistema de vigilância epidemiológica fortalecido e atuante, capaz de monitorar não apenas o andamento do programa, mas, fundamentalmente, medir o impacto desta intervenção em termos de incidência de SRC. Considerando as características de polimorfismo da SRC e as dificuldades em se medir a magnitude da infecção congênita, a avaliação de um programa que envolve pelo menos duas gerações de indivíduos é um grande desafio para os administradores de saúde, principalmente, nos países em desenvolvimento. / The vaccination against rubella has as the only objectif to protect the future generations of children from the congenital rubella. Gregg, in 1941, supposed that the rubella should be the cause of birth of children with serious congenital abnormalities. The etiologial confirmation was only possible in 1962, by the isolation of virus, which allowed the development of vaccine. Firstly, utilized in the United States and Great Britain, in 1969, nowadays the vaccine is used in most developed countries. Experiences performed during more than two decades in usage of the vaccines during the Congenital Rubella Syndrome Control Program, showed that the epidemiology of the rubella, as well as, the exequibility of proposed aims for the vaccinal coverture are quite complex. The virus characteristics and its interactions with the population, determine a transmissibility pattern, which provides the formation of susceptible \"cluster\" in the adult age. In natural conditions, the rubella infects about 80 per cent to 90 per cent of people up to the age of twenty, leaving a susceptible remains after this age, which, apparently, it is maintained even with continuous epidemics. As the CRS children birth is connected to the rubella infection during the gestacional age of those mothers, the existence of susceptible childbearing age women is the most important condition for the disease to break out. In 1985, in the City of Bauru (São Paulo), abnormal number of death of congenital abnormalities children was focused by local epidemilogists. This fact was supposed, by the epidemiologists, being associated to a rubella epidemic in the year before. One of the ways to estimate the risk of occurance of RCS is to know the level of susceptibility among pregnant women. In 1987, 689 pregnant women, dwelling in the City of Bauru, were interviewed and went through a haemagglutination-inibition test in order to determine the susceptibility to rubella. Sixty-six out of these pregnant women was considered susceptible to rubella. There was not any difference statistically significant in the susceptible proportion of the pregnant women related to age, number of pregnancies, number of deliveries and gestacional age which somehow confirm the difficult of the rubella virus to infect all people up the beginning of the adult age, even after an epidemic. This susceptible remains would hardly ever be eliminated naturaly, as it is shown in the different experiences in countries, which began the RCS Control Program. The experiences showed that it would possibly, be necessary a high vaccinal coverture (about 95 per cent ) of all generations of children and adolescents in order to get the break of the infection process chain. Concomitantly, the protection of all women in childbearing age is important, until these generations of well vaccinated individuais reach the childbearing age. Such intervention should not be implemented without the agreement of an epidemiological surveillance system, both dynamic and strong, in order to monitore not only, the follow up of the program, but also, to measure the impact of this intervention in terms of RCS incidence. Considering the RCS characterists of polimorfism and the difficulties to evaluate the magnitude of congenital infection, the evaluation of a program that involves, at least, two generations of individuais, is a great challenge for the health administars, specially, in developing countries.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Candidemia persistente tem sido descrita como uma complicacao do quadro de candidemia, caracterizada pelo isolamento de Candida spp. em amostras sequenciais de hemocultura apos o diagnostico inicial, mesmo em pacientes expostos ao tratamento antifungico adequado. Embora fatores predisponentes relacionados ao hospedeiro ja estejam bem estabelecidos, poucos estudos tem analisado os atributos do patogeno envolvidos no desenvolvimento dessa complicacao. O objetivo do presente estudo foi avaliar a ocorrencia de resistencia as equinocandinas em isolados de Candida spp. provenientes de pacientes com candidemia persistente submetidos a terapia antifungica com esta classe de farmaco. As amostras foram identificadas atraves de sequenciamento da regiao ITS do rDNA. O perfil de susceptibilidade in vitro aos antifungicos foi realizado utilizando metodologia de microdiluicao em caldo (CLSI, documento M27-S4). Alem disso, nos avaliamos a ocorrencia de resistencia a partir do sequenciamento do gene FKS1. Dentre 436 pacientes com candidemia, 63 (14,4%) apresentaram quadros de candidemia persistente, desses, 13 atenderam aos criterios de inclusao estabelecidos no presente estudo. Atraves das identificacoes fenotipica e molecular, foi observado 5 dos 13 pacientes (38,5%) foram infectados por isolados de C. parapsilosis (sensu stricto), 3 (23%) por isolados de C. albicans, 2 (15,4%) por isolados de C. krusei, 1 (7,7%) por isolado de C. tropicalis e 1 (7,7%) teve como agente etiologico da candidemia isolados de C. orthopsilosis. Alem disso, um paciente (7,7%) apresentou episodio de infeccao mista com alternancia de isolamento de duas diferentes especies, C. tropicalis e C. parasilosis (sensu stricto). Em relacao ao perfil de susceptibilidade aos antifungicos, a grande maioria dos isolados foi classificada como sensivel a todos os antifungicos testados, com excecao dos cinco isolados de C. krusei provenientes dos pacientes 2 (dois isolados) e 10 (tres isolados), os quais apresentaram resistencia ao fluconazol e a caspofungina, sendo que dois deles foram intermediarios a anidulafungina. Nao foi verificado aumento de valores de CIM entre os isolados sequenciais de um mesmo paciente a despeito do tratamento antifungico utilizado. Nenhum dos isolados apresentou mutacao nas regioes dos HS1 e HS2 do gene FKS1, sendo classificados como selvagens em relacao aos genotipos de resistencia ja descritos. Por outro lado, os isolados de C. krusei apresentaram mutacao nao sinonima em regiao muito proxima ao HS1, o que poderia, ao menos em parte, explicar o desfecho clinico negativo durante tratamento com equinocandinas e os elevados valores de CIM observados para estes isolados. Os dados obtidos no presente estudo mostram que a ocorrencia de resistencia as equinocandinas ainda permanece rara em nosso meio, mesmo quando analisada em coorte de pacientes com risco elevado a ocorrencia de tal fenomeno. Por fim, conclui-se que as caracteristicas clinicas do paciente parecem ter maior relevancia que os mecanismos de resistencia as equinocandinas no que se refere a ocorrencia de candidemia persistente / BV UNIFESP: Teses e dissertações