Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-02-09T11:45:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamila Pereira da Silva - 2014.pdf: 1336089 bytes, checksum: 2658c99debc59b350392edc7239568d9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-20T10:55:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamila Pereira da Silva - 2014.pdf: 1336089 bytes, checksum: 2658c99debc59b350392edc7239568d9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T10:55:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Kamila Pereira da Silva - 2014.pdf: 1336089 bytes, checksum: 2658c99debc59b350392edc7239568d9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-05-14 / Fungal infections caused by yeasts of Cryptococcus neoformans complex have increased considerably among immunosuppressed especially in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV). Antifungal drugs available to treat these infections have a wide spectrum of action, but the high costs, side effects, besides the acquisition of resistance of fungi make their limited effectiveness. In these circumstances, the search for new drugs is needed. In the present study, we evaluated the antifungal activity of tamoxifen, bisabolol, indinavir, didanosine, UFMG, Labiocon 241, solasodine, Labiocon 237, Clonazepam, semicarbonado Benzaldehyde, Cardanol, AB 36 and three natural extracts of Psychotria spp, Sclerolobium paniculatum, Hymenaea courbaril and cell viability and mechanism of action of the compound showed antifungal activity of 20 isolates of Cryptococcus neoformans. To evaluate the antifungal activity , we used the in vitro susceptibility to yeast broth microdilution protocol M27 - A3 ( CLSI 2008) and to verify the mechanism of action, flow cytometry was performed with the cellular marker Propidium Iodide ( PI ) and cell viability assay with MTT salt. Among the compounds analyzed, only tamoxifen and olanzapine showed inhibitory action on fungal samples at concentrations 128-256 μg/mL. Analysis by flow cytometry was performed with tamoxifen and showed that the compound did not alter the cell membrane of Cryptococcus neoformans ATCC 28957 , however, the cell viability test showed that tamoxifen was able to inhibit the metabolism of the fungus in different concentrations ranging 4-1024 μg/mL. / As infecções fúngicas causadas por leveduras do complexo Cryptococcus neoformans tem sido reduzida entre os imunossuprimidos principalmente nos pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Os antifúngicos disponíveis para o tratamento destas infecções apresentam um amplo espectro de ação, porém os altos custos, efeitos colaterais, além da aquisição de resistência dos fungos tornam sua eficácia limitada. Nestas circunstâncias, a busca por novos fármacos é necessária. No presente trabalho, foi avaliada a atividade antifúngica de tamoxifeno, bisabolol, indinavir, didanosina, Olanzapina, UFMG, Labiocon 241, Solasodina, Labiocon 237, Clonazepam, Benzaldeído semicarbonado, Cardanol, AB 36 e três extratos naturais obtidos de Psychotria spp, Sclerolobium paniculatum, Hymenaea courbaril. A viabilidade celular e o mecanismo de ação do composto que apresentou ação antifúngica sobre 20 isolados de Cryptococcus neoformans formam determinados. A atividade antifúngica foi realizada utilizando-se o método microdiluição em caldo para leveduras. Para verificar do mecanismo de ação, foi realizada a citometria de fluxo com o marcador celular Iodeto de Propídio (PI), enquanto que o teste da viabilidade celular foi obtido usando-se o sal MTT. Dentre os compostos analisados, apenas o tamoxifeno e olanzapina apresentaram ação inibitória sobre as amostras fúngicas, em concentrações de 128 a 256 μg/mL. Pela análise por citometria de fluxo com o tamoxifeno não se verificou alteração da membrana celular de Cryptococcus neoformans ATCC 28957. Entretanto, o tamoxifeno inibiu o metabolismo do fungo em diferentes concentrações, variando de 4 a 1024 μg/mL verificado pelo teste da viabilidade celular.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-03-14T10:52:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andressa Santana Santos - 2018.pdf: 1959070 bytes, checksum: d90ba29af15d78161810fe1b557cd44c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-03-14T10:53:11Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andressa Santana Santos - 2018.pdf: 1959070 bytes, checksum: d90ba29af15d78161810fe1b557cd44c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-14T10:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andressa Santana Santos - 2018.pdf: 1959070 bytes, checksum: d90ba29af15d78161810fe1b557cd44c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Introduction:Vulvovaginal candidiasis (VVC) is characterized as the second most common infection among infections affecting this region. Candida yeasts, such as C. albicans, C. parapsilosis, C. topicalis, C. glabrata, C. krusei and C. guilliermondii, are the main causes of this pathology and can be identified by phenotypic and molecular methods. Objectives:This study determines the predictive value (PPV) of the clinical diagnosis of VVC in comparison to the culture, characterizes Candida species isolated from the vaginal mucosa through phenotypic and molecular methods, and verifies the production of hydrolytic enzymes and the susceptibility profile in vitro to antifungal agents used in VVC therapy. Methods: the phenotypic methods used were based on morphological and biochemical aspects, while molecular tests were performed using the polymerase chain reaction with primes specific for each species. In order to verify the activity of the enzymes protease, phospholipase and hemolysin, yeast growth was carried out in media containing bovine albumin, egg yolk and blood, and the reading was determined by the precipitation zone (PZ). Adherence of Candida to epithelial cells was determined by light microscopy by counting the number of cells adhered to 100 epithelial cells. In vitro susceptibility of Candida isolates to fluconazole, itraconazole, voriconazole, nystatin, and amphotericin B was performed using the broth dilution assay to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the antifungal. Results: the VPP of clinical diagnosis against the gold standard of 61.8% (34/55). Among the 55 samples collected, 36 isolates identified as C. albicans(27), C. glabrata (5) and C. topicalis (4) were obtained. All isolates were enzyme producers with average adherence to 100 oral epithelial cells for the C. albicans, C. glabrata and C. tropicalis species were respectively 402.5, 236.2 and 58. High resistance to fluconazole (38.8%), high susceptibility to amphotericin B (94.4%) and low MIC values for nystatin (8 μg / mL at > 16 μg/mL) were observed for the isolates. Conclusions: the culture is essential for the diagnosis of CVV and confirm that C. albicans continues the predominant species as CVV agent. All species presented a high pathogenic power. Hydrolytic enzymes were produced by all the isolates. This study allow suggest to the clinician that the in vitro susceptibility tests prior to antifungal prescription would bring higher therapeutic success. / Introdução: a candidíase vulvovaginal (CVV) é caracterizada como a segunda infecção mais comum entre as infecções que acometem esta região. As leveduras do gênero Candida, como C. albicans, C. parapsilosis, C. topicalis, C. glabrata, C. krusei e C. guilliermondii são as principais causadoras desta patologia, podendo ser identificadas por métodos fenotípicos e moleculares. Objetivos: determinar o valor preditivo (VPP), do diagnóstico clínico de CVV em comparação à cultura, realiza a caracterização das espécies de Candida isoladas da mucosa vaginal através de métodos fenotípicos e moleculares, verifica a produção de enzimas hidrolíticas e o perfil de suscetibilidade in vitro aos antifúngicos usados na terapia da CVV. Metódos: Os métodos fenotípicos usados foram baseados em aspectos morfológicos e bioquímicos, enquanto os testes moleculares foram realizados usando–se a reação em cadeia da polimerase com oligonucleotídeos específicos para cada espécie. Para a verificação da atividade das enzimas proteinase, fosfolipase e hemolisina, foi realizado respectivamente, o crescimento das leveduras em meios contendo albumina bovina, gema de ovo e sangue, sendo a leitura determinada pela zona de precipitação (PZ). A aderência de Candida às células epiteliais foi determinada por microscopia óptica pela contagem do número de células aderidas a 100 células epiteliais. A suscetibilidade in vitro dos isolados de Candida para fluconazol, itraconazol, voriconazol, nistatina e anfotericina B foi realizada usando-se o teste de diluição em caldo visando á determinação da concentração inibitória mínima (CIM) do antifúngico. Resultados: o VPP do diagnóstico clínico frente ao padrão-ouro de 61,8% (34/55). Dentre as 55 amostras coletadas foram obtidos 36 isolados identificados como C. albicans (27), C. glabrata (5) e C. tropicalis (4). Todos os isolados foram produtores de enzimas, a média de aderência à 100 células epiteliais bucais para as espécies de C. albicans, C. glabrata e C. tropicalis foi respectivamente de 402,5, 236,2 e 58. Alta resistência ao fluconazol (38,8%), elevada suscetibilidade a anfotericina B (94,4%) e baixos valores de MIC para nistatina (8 μg/mL a > 16 μg/mL) foram observados para os isolados.Conclusões: a cultura é fundamental para o diagnóstico de CVV e confirmam que C. albicans continua a espécie predominante como agente de CVV. Todas as espécies apresentam um alto poder patogênico visto a liberação de enzimas por todos os isolados. Este estudo permite sugerir ao clínico que a realização de testes de suscetibilidade in vitro anterior a prescrição do antifúngico traria maior êxito terapêutico.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T15:47:31Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-05T10:40:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T10:40:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Carneiro Naziasene Lima - 2014.pdf: 3242345 bytes, checksum: d0ace95b026350f2bf41251459258252 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-05-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The increase in the number of fungal infections by Candida species, as a result of the significant increase of immunocompromised patients emphasizes the importance of studies associated to this genre. The resistance of these strains to antifungal drugs is observe in specific isolates, as well as infections associated with biofilm formation (BF). The aim of this study was to compare the susceptibility profile of sessile and planktonic cells of different Candida isolates, differentiating species by multiplex qPCR and scanning electron microscopy. The sample consisted of 10 C. albicans, 10 C. parapsilosis and 1 C. tropicalis. The genetic material was extracted by phenolchloroform extraction of the sample C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) and ATCC 22019 (C. parapsilosis) for use in a species-specific multiplex qPCR assay with analysis of differences in the curve fusion. Microdilution plate test and reduction of the tetrazolium salt for 21 isolates were performed for the susceptibility of sessile and free cells, respectively. The evaluation of the ultrastructure of the biofilm was performed on strips of polyurethane with visualization by scanning electron microscopy. The amplified products from C. albicans obtained three melting peaks with values of 75,2 °C, 76,8 °C and 79,8 °C, while C. tropicalis and C. parapsilosis showed one peak with values 73,5 °C and 78,5 °C, respectively. The identification test showed to be reliable for the identification of the most common species in the study. All of Candida yeasts were able to form biofilm with own organization of each specie. The in vitro susceptibility test of planktonic cells demonstrated that amphotericin B and caspofungin showed better activity compared to fluconazole and voriconazole who obtained 19% of resistant strains, all C. albicans. In assessing of the CIMs50% and CIMs80% of sessile cells, we observed an increase of at least 60 times the values of planktonic cells. It was observed a high percentage of BF that demonstrates the need for diagnosis and combat against this biomass formed by Candida species. The BF is a virulence factor determinant for decrease of susceptibility to antifungal agents thus compromising antifungal therapy. / O aumento no número de infecções fúngicas por espécies de Candida, como resultado do expressivo aumento de pacientes imunocomprometidos destaca a importância de estudos relacionados a esse gênero. A resistência destas leveduras aos fármacos antifúngicos é observada em isolados específicos, assim como em infecções associadas com a formação de biofilme (FB). O objetivo deste estudo foi comparar o perfil de suscetibilidade in vitro de células sésseis e planctônicas de diferentes isolados de Candida, diferenciando as espécies por qPCR multiplex e microscopia eletrônica de varredura. A amostra foi composta de 10 C. albicans, 10 C. parapsilosis e 1 C. tropicalis. O material genético foi extraído pelo método de extração fenol-clorofórmio da amostra de C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) e ATCC 22019 (C. parapsilosis) para utilização no ensaio espécie-específico qPCR multiplex com avaliação das diferenças na curva de fusão. Foram realizados teste de microdiluição em placa e redução do sal tetrazólio para 21 isolados a fim de determinar a suscetibilidade de células livres e sésseis, respectivamente. A avaliação da ultraestrutura do biofilme foi realizada em tiras de poliuretano com visualização por microscopia eletrônica de varredura. Os produtos amplificados de C. albicans, obtiveram três picos de fusão com valores de 75,2°C, 76,8°C e 79,8°C, enquanto C. parapsilosis e C. tropicalis mostraram um pico de valores 73,5°C e 78,5°C, respectivamente. O teste de identificação apresentou-se confiável para a identificação das espécies mais comuns no estudo. Todas as leveduras de Candida foram capazes de formar biofilme com organização própria de cada espécie. O teste de suscetibilidade in vitro das células planctônicas demonstrou que anfotericina B e caspofungina apresentaram melhor atividade em comparação com o fluconazol e voriconazol que obtiveram 19% das amostras resistentes, sendo todas C. albicans. Na avaliação da CIMs50% e CIMs80% das células sésseis, observou-se um aumento de pelo menos 60 vezes dos valores das células planctônicas. Foi observada porcentagem elevada de FB que demonstra a necessidade do diagnóstico e combate à essa biomassa formada pelas espécies de Candida, pois é um fator de virulência determinante para a diminuição da suscetibilidade aos antifúngicos comprometendo assim a terapêutica antifúngica.