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Avaliação da atividade antifúngica e mecanismo de ação de compostos naturais e sintéticos em leveduras do complexo Cryptococcus neoformans / Evaluation of antifungal activity and mechanism of action of natural and synthetic compounds in yeast Cryptococcus neoformans complexSilva, Kamila Pereira da 14 May 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-14 / Fungal infections caused by yeasts of Cryptococcus neoformans complex have increased considerably among immunosuppressed especially in patients infected with human immunodeficiency virus (HIV). Antifungal drugs available to treat these infections have a wide spectrum of action, but the high costs, side effects, besides the acquisition of resistance of fungi make their limited effectiveness. In these circumstances, the search for new drugs is needed. In the present study, we evaluated the antifungal activity of tamoxifen, bisabolol, indinavir, didanosine, UFMG, Labiocon 241, solasodine, Labiocon 237, Clonazepam, semicarbonado Benzaldehyde, Cardanol, AB 36 and three natural extracts of Psychotria spp, Sclerolobium paniculatum, Hymenaea courbaril and cell viability and mechanism of action of the compound showed antifungal activity of 20 isolates of Cryptococcus neoformans. To evaluate the antifungal activity , we used the in vitro susceptibility to yeast broth microdilution protocol M27 - A3 ( CLSI 2008) and to verify the mechanism of action, flow cytometry was performed with the cellular marker Propidium Iodide ( PI ) and cell viability assay with MTT salt. Among the compounds analyzed, only tamoxifen and olanzapine showed inhibitory action on fungal samples at concentrations 128-256 μg/mL. Analysis by flow cytometry was performed with tamoxifen and showed that the compound did not alter the cell membrane of Cryptococcus neoformans ATCC 28957 , however, the cell viability test showed that tamoxifen was able to inhibit the metabolism of the fungus in different concentrations ranging 4-1024 μg/mL. / As infecções fúngicas causadas por leveduras do complexo Cryptococcus neoformans tem sido reduzida entre os imunossuprimidos principalmente nos pacientes infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Os antifúngicos disponíveis para o tratamento destas infecções apresentam um amplo espectro de ação, porém os altos custos, efeitos colaterais, além da aquisição de resistência dos fungos tornam sua eficácia limitada. Nestas circunstâncias, a busca por novos fármacos é necessária. No presente trabalho, foi avaliada a atividade antifúngica de tamoxifeno, bisabolol, indinavir, didanosina, Olanzapina, UFMG, Labiocon 241, Solasodina, Labiocon 237, Clonazepam, Benzaldeído semicarbonado, Cardanol, AB 36 e três extratos naturais obtidos de Psychotria spp, Sclerolobium paniculatum, Hymenaea courbaril. A viabilidade celular e o mecanismo de ação do composto que apresentou ação antifúngica sobre 20 isolados de Cryptococcus neoformans formam determinados. A atividade antifúngica foi realizada utilizando-se o método microdiluição em caldo para leveduras. Para verificar do mecanismo de ação, foi realizada a citometria de fluxo com o marcador celular Iodeto de Propídio (PI), enquanto que o teste da viabilidade celular foi obtido usando-se o sal MTT. Dentre os compostos analisados, apenas o tamoxifeno e olanzapina apresentaram ação inibitória sobre as amostras fúngicas, em concentrações de 128 a 256 μg/mL. Pela análise por citometria de fluxo com o tamoxifeno não se verificou alteração da membrana celular de Cryptococcus neoformans ATCC 28957. Entretanto, o tamoxifeno inibiu o metabolismo do fungo em diferentes concentrações, variando de 4 a 1024 μg/mL verificado pelo teste da viabilidade celular.
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Caracterização de espécies de Candida provenientes de infecção da mucosa vulvovaginal de mulheres atendidas no Hospital das Clínicas em Goiânia-GO / Characterization of Candida species from vulvovaginal mucosa infection of women attended at the Hospital das Clínicas in Goiânia-GOSantos, Andressa Santana 28 February 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Introduction:Vulvovaginal candidiasis (VVC) is characterized as the second most common
infection among infections affecting this region. Candida yeasts, such as C. albicans, C.
parapsilosis, C. topicalis, C. glabrata, C. krusei and C. guilliermondii, are the main causes of
this pathology and can be identified by phenotypic and molecular methods. Objectives:This
study determines the predictive value (PPV) of the clinical diagnosis of VVC in comparison to
the culture, characterizes Candida species isolated from the vaginal mucosa through
phenotypic and molecular methods, and verifies the production of hydrolytic enzymes and the
susceptibility profile in vitro to antifungal agents used in VVC therapy. Methods: the
phenotypic methods used were based on morphological and biochemical aspects, while
molecular tests were performed using the polymerase chain reaction with primes specific for
each species. In order to verify the activity of the enzymes protease, phospholipase and
hemolysin, yeast growth was carried out in media containing bovine albumin, egg yolk and
blood, and the reading was determined by the precipitation zone (PZ). Adherence of Candida
to epithelial cells was determined by light microscopy by counting the number of cells adhered
to 100 epithelial cells. In vitro susceptibility of Candida isolates to fluconazole, itraconazole,
voriconazole, nystatin, and amphotericin B was performed using the broth dilution assay to
determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of the antifungal. Results: the VPP of
clinical diagnosis against the gold standard of 61.8% (34/55). Among the 55 samples
collected, 36 isolates identified as C. albicans(27), C. glabrata (5) and C. topicalis (4) were
obtained. All isolates were enzyme producers with average adherence to 100 oral epithelial
cells for the C. albicans, C. glabrata and C. tropicalis species were respectively 402.5, 236.2
and 58. High resistance to fluconazole (38.8%), high susceptibility to amphotericin B (94.4%)
and low MIC values for nystatin (8 μg / mL at > 16 μg/mL) were observed for the isolates.
Conclusions: the culture is essential for the diagnosis of CVV and confirm that C. albicans
continues the predominant species as CVV agent. All species presented a high pathogenic
power. Hydrolytic enzymes were produced by all the isolates. This study allow suggest to the
clinician that the in vitro susceptibility tests prior to antifungal prescription would bring higher
therapeutic success. / Introdução: a candidíase vulvovaginal (CVV) é caracterizada como a segunda infecção mais
comum entre as infecções que acometem esta região. As leveduras do gênero Candida, como
C. albicans, C. parapsilosis, C. topicalis, C. glabrata, C. krusei e C. guilliermondii são as
principais causadoras desta patologia, podendo ser identificadas por métodos fenotípicos e
moleculares. Objetivos: determinar o valor preditivo (VPP), do diagnóstico clínico de CVV em
comparação à cultura, realiza a caracterização das espécies de Candida isoladas da mucosa
vaginal através de métodos fenotípicos e moleculares, verifica a produção de enzimas
hidrolíticas e o perfil de suscetibilidade in vitro aos antifúngicos usados na terapia da CVV.
Metódos: Os métodos fenotípicos usados foram baseados em aspectos morfológicos e
bioquímicos, enquanto os testes moleculares foram realizados usando–se a reação em cadeia
da polimerase com oligonucleotídeos específicos para cada espécie. Para a verificação da
atividade das enzimas proteinase, fosfolipase e hemolisina, foi realizado respectivamente, o
crescimento das leveduras em meios contendo albumina bovina, gema de ovo e sangue,
sendo a leitura determinada pela zona de precipitação (PZ). A aderência de Candida às células
epiteliais foi determinada por microscopia óptica pela contagem do número de células
aderidas a 100 células epiteliais. A suscetibilidade in vitro dos isolados de Candida para
fluconazol, itraconazol, voriconazol, nistatina e anfotericina B foi realizada usando-se o teste
de diluição em caldo visando á determinação da concentração inibitória mínima (CIM) do
antifúngico. Resultados: o VPP do diagnóstico clínico frente ao padrão-ouro de 61,8%
(34/55). Dentre as 55 amostras coletadas foram obtidos 36 isolados identificados como C.
albicans (27), C. glabrata (5) e C. tropicalis (4). Todos os isolados foram produtores de
enzimas, a média de aderência à 100 células epiteliais bucais para as espécies de C. albicans,
C. glabrata e C. tropicalis foi respectivamente de 402,5, 236,2 e 58. Alta resistência ao
fluconazol (38,8%), elevada suscetibilidade a anfotericina B (94,4%) e baixos valores de MIC
para nistatina (8 μg/mL a > 16 μg/mL) foram observados para os isolados.Conclusões: a
cultura é fundamental para o diagnóstico de CVV e confirmam que C. albicans continua a
espécie predominante como agente de CVV. Todas as espécies apresentam um alto poder
patogênico visto a liberação de enzimas por todos os isolados. Este estudo permite sugerir ao
clínico que a realização de testes de suscetibilidade in vitro anterior a prescrição do
antifúngico traria maior êxito terapêutico.
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Identificação das espécies de Candida, avaliação da ultraestrutura e perfil de suscetibilidade de biofilmes aos antifúngicos / Identification of Candida species, evaluation of the ultrastructure and susceptibility profile of biofilms to antifungal agentsMarreto, Lais Carneiro Naziasene Lima 08 May 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The increase in the number of fungal infections by Candida species, as a result of the
significant increase of immunocompromised patients emphasizes the importance of
studies associated to this genre. The resistance of these strains to antifungal drugs is
observe in specific isolates, as well as infections associated with biofilm formation
(BF). The aim of this study was to compare the susceptibility profile of sessile and
planktonic cells of different Candida isolates, differentiating species by multiplex
qPCR and scanning electron microscopy. The sample consisted of 10 C. albicans, 10
C. parapsilosis and 1 C. tropicalis. The genetic material was extracted by phenolchloroform
extraction of the sample C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) and
ATCC 22019 (C. parapsilosis) for use in a species-specific multiplex qPCR assay with
analysis of differences in the curve fusion. Microdilution plate test and reduction of the
tetrazolium salt for 21 isolates were performed for the susceptibility of sessile and free
cells, respectively. The evaluation of the ultrastructure of the biofilm was performed
on strips of polyurethane with visualization by scanning electron microscopy. The
amplified products from C. albicans obtained three melting peaks with values of 75,2
°C, 76,8 °C and 79,8 °C, while C. tropicalis and C. parapsilosis showed one peak with
values 73,5 °C and 78,5 °C, respectively. The identification test showed to be reliable
for the identification of the most common species in the study. All of Candida yeasts
were able to form biofilm with own organization of each specie. The in vitro
susceptibility test of planktonic cells demonstrated that amphotericin B and
caspofungin showed better activity compared to fluconazole and voriconazole who
obtained 19% of resistant strains, all C. albicans. In assessing of the CIMs50% and
CIMs80% of sessile cells, we observed an increase of at least 60 times the values of
planktonic cells. It was observed a high percentage of BF that demonstrates the need
for diagnosis and combat against this biomass formed by Candida species. The BF
is a virulence factor determinant for decrease of susceptibility to antifungal agents
thus compromising antifungal therapy. / O aumento no número de infecções fúngicas por espécies de Candida, como
resultado do expressivo aumento de pacientes imunocomprometidos destaca a
importância de estudos relacionados a esse gênero. A resistência destas leveduras
aos fármacos antifúngicos é observada em isolados específicos, assim como em
infecções associadas com a formação de biofilme (FB). O objetivo deste estudo foi
comparar o perfil de suscetibilidade in vitro de células sésseis e planctônicas de
diferentes isolados de Candida, diferenciando as espécies por qPCR multiplex e
microscopia eletrônica de varredura. A amostra foi composta de 10 C. albicans, 10
C. parapsilosis e 1 C. tropicalis. O material genético foi extraído pelo método de
extração fenol-clorofórmio da amostra de C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) e
ATCC 22019 (C. parapsilosis) para utilização no ensaio espécie-específico qPCR
multiplex com avaliação das diferenças na curva de fusão. Foram realizados teste de
microdiluição em placa e redução do sal tetrazólio para 21 isolados a fim de
determinar a suscetibilidade de células livres e sésseis, respectivamente. A avaliação
da ultraestrutura do biofilme foi realizada em tiras de poliuretano com visualização
por microscopia eletrônica de varredura. Os produtos amplificados de C. albicans,
obtiveram três picos de fusão com valores de 75,2°C, 76,8°C e 79,8°C, enquanto C.
parapsilosis e C. tropicalis mostraram um pico de valores 73,5°C e 78,5°C,
respectivamente. O teste de identificação apresentou-se confiável para a
identificação das espécies mais comuns no estudo. Todas as leveduras de Candida
foram capazes de formar biofilme com organização própria de cada espécie. O teste
de suscetibilidade in vitro das células planctônicas demonstrou que anfotericina B e
caspofungina apresentaram melhor atividade em comparação com o fluconazol e
voriconazol que obtiveram 19% das amostras resistentes, sendo todas C. albicans.
Na avaliação da CIMs50% e CIMs80% das células sésseis, observou-se um aumento
de pelo menos 60 vezes dos valores das células planctônicas. Foi observada
porcentagem elevada de FB que demonstra a necessidade do diagnóstico e combate
à essa biomassa formada pelas espécies de Candida, pois é um fator de virulência
determinante para a diminuição da suscetibilidade aos antifúngicos comprometendo
assim a terapêutica antifúngica.
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