Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / Las enfermedades de la madera de la vid se han transformado en unas de las más importantes a nivel mundial, debido a la agresividad que estas han evidenciado al reducir la productividad, calidad y longevidad de las plantas. Paralelamente, la necesidad de disminuir el uso de productos químicos en el manejo agronómico de huertos y cultivos, frente a la preocupación colectiva por la salud humana y la sustentabilidad ambiental, insta a incursionar en métodos de control alternativos que sean efectivos y amigables con el medio ambiente. Frente a este escenario, surge este estudio en el que se realizaron dos ensayos bajo condiciones de laboratorio utilizando sarmientos no enraizados de vid del cv. Thompson Seedless. En estos se aplicaron, previa realización de una herida de 0,5 cm en el centro de cada entrenudo, cinco bioantagonistas, dos de origen fungoso (Closea 1 y Trichonativa, producto comercial en base a Trichoderma spp.) y tres de origen bacteriano (Ballus 1, Ballus 2 y Actinovate, producto comercial a base de Streptomyces lydicus como ingrediente activo), con el fin de determinar la efectividad de cada uno de estos en el control de Neofusicoccum aesculi, patógeno asociado a la enfermedad del brazo muerto de la vid. Además, se dispuso de un control químico (Benomilo + Mancozeb) y de dos testigos (uno inoculado y otro sin inocular). Se utilizaron dos tiempos de inoculación del patógeno, a 60 minutos y 96 horas (tiempo 1 y tiempo 2) post tratamiento con los bioantagonistas y control químico. Luego de ello, los sarmientos tratados se almacenaron en cámaras húmedas y se mantuvieron en un recinto a temperatura controlada. Transcurridos 30 días se midió la lesión necrótica de cada estaca, producida por N. aesculi y se determinaron los índices de inhibición para cada tratamiento. Los resultados obtenidos indican que los tratamientos de mayor y menor efectividad para el tiempo 1 correspondieron al control químico y Ballus 1, y para el tiempo 2, a Actinovate y Closea 1, respectivamente.

As espécies de Trichoderma incluem muitos isolados com importância agronômica empregados principalmente como agentes de controle biológico. Pesquisas recentes vêm demonstrando a capacidade de alguns isolados atuarem na promoção de crescimento e na indução de resistência em diferentes culturas. Este trabalho teve como objetivo avaliar isolados de Trichoderma spp. no desenvolvimento das plantas de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Isolados de três espécies de Trichoderma (T. asperellum, T. harzianum e T. viride) foram testados verificando a atividade destes isolados no controle de Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli e Sclerotinia sclerotiorum, e a capacidade destes em: produzir ácido indol acético (AIA), sideróforos e solubilizar fosfato in vitro, bem como interagir com um inoculante de rizóbio na promoção do crescimento em casa de vegetação e atuarem na imunização das plantas tratadas. Todos os isolados produziram metabólitos voláteis, enzimas hidrolíticas, AIA, sideróforos e solubilizaram fosfato in vitro. Trichoderma spp. aumentou a porcentagem de germinação e vigor das sementes tratadas, entretanto o efeito na promoção de crescimento não foi comprovado. A atividade enzimática de peroxidase, polifenoloxidase e fenilalanina amônia-liase foi maior em plantas tratadas com Trichoderma spp. Os resultados demonstram que a seleção pode direcionar aqueles isolados que podem ser empregados na agricultura de acordo com suas características e pode ser uma solução para garantir o sucesso da aplicação no campo. / Trichoderma species includes many important agricultural isolates, mainly deployed as biological control agents. Recent researches has demonstrated the ability of some isolates to act in growth promotion and immunity induction in different crops. This work aimed to evaluate Trichoderma spp. isolates in common bean plants (Phaseolus vulgaris L.) development. Strains of three Trichoderma species (T. asperellum, T. harzianum and T. viride) were tested by verifying the activity of these strains on Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli and Sclerotinia sclerotiorum control and their abilities on indol acetic acid (IAA) and siderophores production and phosphate in vitro solubilization. Their interacting with rhizobia inoculant in growth promotion in greenhouse condition and acting in treated plants immunization was also evaluated. All strains produced volatile metabolites, hydrolytic enzymes, IAA, siderophores and they solubilized phosphate in vitro. Trichoderma spp. increased the percentage of germination and vigor in treated seeds. However, the effect in growth promotion was not proven. The enzymatic activity of peroxidase, polyphenoloxidase and phenylalanine ammonia lyase was higher in plants treated with Trichoderma spp. The results demonstrated that selection can target those strains that can be deployed in agriculture in according to their characteristics and can be a solution to ensure the success on field application.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-30Bitstream added on 2014-06-13T20:56:18Z : No. of bitstreams: 1 albano_m_me_sjrp.pdf: 899652 bytes, checksum: 0556dccccf431c3b93be161fdeeb9b15 (MD5) / O interesse mundial pelo aproveitamento de resíduos agroindustriais como fonte renovável para produção de alimentos e biocombustíveis tem aumentado cada vez mais. Os materiais lignocelulósicos (MLCs) são uma fonte rica em polissacarídeos, celulose e hemicelulose, utilizados para o desenvolvimento de tecnologias na produção de álcool, xilose, xilitol, xilooligossacarídeos (XOS), entre outros. Fermentações submersas (FSm) e em estado sólido (FES) foram realizadas utilizando como substrato apenas bagaço de cana-de-açúcar ou suplementado com farelo de trigo, com o objetivo de produzir celulases (CMCase e Avicelase) e xilanases (β-1,4-xilanase e β-xilosidase) por seis fungos filamentosos isolados de bagaço de cana-de-açúcar em trabalhos anteriores. Dentre os estudados, a fermentação submersa (FSm) foi o melhor processo para a produção de xilanases e celulases. Para a produção de β-xilosidase o processo mais eficiente foi a fermentação em estado sólido (FES) . Dentre os microrganismos estudados para a produção de endoglucanases, destacaram-se os fungos filamentosos: U2370 (25,7 U/g), U19 (19,4 U/g) e Aspergillus fumigatus M51 (17,4 U/g), valores bem superiores aos encontrados na FES, cujos maiores destaques foram FS09 e U19 com aproximadamente 13 U/g. Para a produção de avicelase, os destaques foram: U19 (4,6 U/g) em FSM, T. reesei (3,0 U/g) e U2370 (3,8 U/g) todos em FSm. Para a produção de xilanase também os destaques foram todos em FSm: A. fumigatus M51 (1.263 U/g), N51 (1.247 U/g), FS 09 (1.133 U/g) e U 19 (1.129 U/g). Apenas a linhagem 100P (1.000 U/g) foi expressiva em FES. Já a enzima β-xilosidase foi produzida de forma bem mais expressiva apenas pela linhagem N51 (6,6 U/g) em FES. Nessa pesquisa apenas o fungo U19 se destacou para as três atividades (avicelase, xilanase e CMCase), o U2370... / The worldwide interest in the use of agro-industrial residues as a renewable source for food and biofuels production has increased even more. The lignocellulosic materials (MLCs) are a rich source of polysaccharides, cellulose and hemicelluloses, used in developing technology for the production of alcohol, xylose, xylitol and xilooligossacarids (XOS). Submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF were performed using only bagasse cane sugar or supplemented with wheat bran) as substrate, with the goal of producing cellulases (CMCase and Avicelase) and xylanases (β-1, 4-xylanase and β-xylosidase) for six filamentous fungi isolated from crushed sugar cane in previous works. Among the studies, the submerged fermentation (SmF) was the best method for the production of xylanases and cellulases. For the production of β-xylosidase the most efficient process was the solid state fermentation (SSF). Among the microorganisms studied for producing endoglucanases, the most important filamentous fungi is: U2370 (25.7 U/ g), U19 (19.4 U/g) and Aspergillus fumigatus M51 (17.4 U/g), values much higher than those found in FES, whose major activities were FS09 and U19, with approximately 13 U/g. For the production of avicelase, activities were U19 (4.6 U/g) in FSm, T. reesei CCT 2768 (3.0 U/g) and U2370 (3.8 U/g) all in SmF. For the production of xilanases, the best activities were also all in SmF: A. fumigatus M51 (1263 U/g), N51 (1247 U/g), FS 09 (1133 U/g) and U19 (1,129 U/g). Only the strain 100P (1000 U/g) was significant in FES. The enzyme β-xylosidase was produced in a much more expressive only by strain N51 (6.6 U / g) in FES. In this study only the fungus U19 stood out for all three activities (avicelase, xylanase and CMCase), the U2370 is noted only as cellulolytic (avicelase and CMCase), and the N51 was the best producer... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6489.pdf: 6160107 bytes, checksum: 81c1fddd8e696b53fe5fd98c9174ba24 (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / Financiadora de Estudos e Projetos / The depletion of fossil fuels, the growing energy demand and the great need to reduce carbon emissions gradually increased the demand for new sources of renewable and clean energy. Bioethanol is obtained from the fermentation of lignocellulosic biomass, for example sugar cane, and can be considered a viable alternative. For this biomass can be used it is necessary to degrade the constituent molecules of the cell wall to fermentable sugars through the enzymes called cellulases. Among them there are three classes with different functions: the cellobiohydrolases, endoglucanases and β-glucosidases. In order to contribute to the viability and deployment of ethanol production technologies, purification of two β- glucosidases of the fungus Trichoderma harzianum was performed, named in this work as ThBgl1 e ThBgl2, as well as their biophysical and biochemical characterization. Clones in study were obtained by a cloning platform, expression and purification of recombinant proteins in high performance and expressed in bacteria Escherichia coli. Through the functional characterization of proteins under study it was found that they had the optimum pH in the range of 5.5 and optimum temperature around 40ºC. Results of enzyme kinetics showed that ThBgl1 has higher preference (specificity) by cellobiose, while in ThBgl2 cellobiose is a substrate having low specificity. In ThBgl2 specificity is higher by fucosideos. Furthermore, it was observed the occurrence of transglycosylation catalyzed by β-glucosidases in study and the action of some inhibitors on its enzymatic activity. The three-dimensional analysis of these proteins revealed the presence of the barrel tim typical of family 1 of glycoside hydrolases. / O esgotamento das fontes de combustíveis fósseis, a crescente demanda energética e a grande necessidade de redução da emissão de carbono fizeram com que aumentasse gradativamente a procura por novas fontes de energia renováveis e limpas. O bioetanol obtido da fermentação de biomassas lignocelulósicas, como o bagaço de cana-de-açúcar, pode ser considerado uma alternativa viável. Para que essa biomassa possa ser utilizada, faz-se necessário a degradação das moléculas constituintes da parede celular a açúcares fermentáveis por meio das enzimas chamadas celulases. Dentre elas existem três classes com diferentes funções: as celobiohidrolases, as endoglucanases e as β-glicosidades. Com o objetivo de contribuir para a viabilização e implantação de tecnologias de produção de etanol, foi realizada a purificação de duas β-glicosidases do fungo Trichoderma harzianum, denominadas nesse trabalho como ThBgl1 e ThBgl2, bem como sua caracterização bioquímica e biofísica. Os clones em estudo foram obtidos por meio de uma plataforma de clonagem, expressão e purificação de proteínas recombinantes em alto desempenho e expressos na bactéria Escherichia coli. Através da caracterização funcional das proteínas em estudo, verificou-se que elas apresentaram o pH ótimo na faixa de 5,5 e temperatura ótima em torno de 40ºC. Os resultados de cinética enzimática mostraram que ThBgl1 tem maior preferência (especificidade) por celobiose, enquanto na ThBgl2 a celobiose é um substrato com baixa especificidade. Na ThBgl2 a especificidade é maior por fucosídeos. Além disso, constatou-se a ocorrência de transglicosilação catalisada pelas β-glicosidases em estudo e a ação de alguns inibidores em sua atividade enzimática. A análise tridimensional dessas proteínas revelou a presença de um barril tim típico das hidrolases de glicosídeos da família 1.

Orientador: Pedro de Oliva Neto / Coorientador: Ana Flávia Azevedo Carvalho / Banca: Lucinéia dos Santos / Banca: Ary Fernandes Júnior / Resumo: O interesse mundial pelo aproveitamento de resíduos agroindustriais como fonte renovável para produção de alimentos e biocombustíveis tem aumentado cada vez mais. Os materiais lignocelulósicos (MLCs) são uma fonte rica em polissacarídeos, celulose e hemicelulose, utilizados para o desenvolvimento de tecnologias na produção de álcool, xilose, xilitol, xilooligossacarídeos (XOS), entre outros. Fermentações submersas (FSm) e em estado sólido (FES) foram realizadas utilizando como substrato apenas bagaço de cana-de-açúcar ou suplementado com farelo de trigo, com o objetivo de produzir celulases (CMCase e Avicelase) e xilanases (β-1,4-xilanase e β-xilosidase) por seis fungos filamentosos isolados de bagaço de cana-de-açúcar em trabalhos anteriores. Dentre os estudados, a fermentação submersa (FSm) foi o melhor processo para a produção de xilanases e celulases. Para a produção de β-xilosidase o processo mais eficiente foi a fermentação em estado sólido (FES) . Dentre os microrganismos estudados para a produção de endoglucanases, destacaram-se os fungos filamentosos: U2370 (25,7 U/g), U19 (19,4 U/g) e Aspergillus fumigatus M51 (17,4 U/g), valores bem superiores aos encontrados na FES, cujos maiores destaques foram FS09 e U19 com aproximadamente 13 U/g. Para a produção de avicelase, os destaques foram: U19 (4,6 U/g) em FSM, T. reesei (3,0 U/g) e U2370 (3,8 U/g) todos em FSm. Para a produção de xilanase também os destaques foram todos em FSm: A. fumigatus M51 (1.263 U/g), N51 (1.247 U/g), FS 09 (1.133 U/g) e U 19 (1.129 U/g). Apenas a linhagem 100P (1.000 U/g) foi expressiva em FES. Já a enzima β-xilosidase foi produzida de forma bem mais expressiva apenas pela linhagem N51 (6,6 U/g) em FES. Nessa pesquisa apenas o fungo U19 se destacou para as três atividades (avicelase, xilanase e CMCase), o U2370... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The worldwide interest in the use of agro-industrial residues as a renewable source for food and biofuels production has increased even more. The lignocellulosic materials (MLCs) are a rich source of polysaccharides, cellulose and hemicelluloses, used in developing technology for the production of alcohol, xylose, xylitol and xilooligossacarids (XOS). Submerged fermentation (SmF) and solid state fermentation (SSF were performed using only bagasse cane sugar or supplemented with wheat bran) as substrate, with the goal of producing cellulases (CMCase and Avicelase) and xylanases (β-1, 4-xylanase and β-xylosidase) for six filamentous fungi isolated from crushed sugar cane in previous works. Among the studies, the submerged fermentation (SmF) was the best method for the production of xylanases and cellulases. For the production of β-xylosidase the most efficient process was the solid state fermentation (SSF). Among the microorganisms studied for producing endoglucanases, the most important filamentous fungi is: U2370 (25.7 U/ g), U19 (19.4 U/g) and Aspergillus fumigatus M51 (17.4 U/g), values much higher than those found in FES, whose major activities were FS09 and U19, with approximately 13 U/g. For the production of avicelase, activities were U19 (4.6 U/g) in FSm, T. reesei CCT 2768 (3.0 U/g) and U2370 (3.8 U/g) all in SmF. For the production of xilanases, the best activities were also all in SmF: A. fumigatus M51 (1263 U/g), N51 (1247 U/g), FS 09 (1133 U/g) and U19 (1,129 U/g). Only the strain 100P (1000 U/g) was significant in FES. The enzyme β-xylosidase was produced in a much more expressive only by strain N51 (6.6 U / g) in FES. In this study only the fungus U19 stood out for all three activities (avicelase, xylanase and CMCase), the U2370 is noted only as cellulolytic (avicelase and CMCase), and the N51 was the best producer... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As espécies de Trichoderma incluem muitos isolados com importância agronômica empregados principalmente como agentes de controle biológico. Pesquisas recentes vêm demonstrando a capacidade de alguns isolados atuarem na promoção de crescimento e na indução de resistência em diferentes culturas. Este trabalho teve como objetivo avaliar isolados de Trichoderma spp. no desenvolvimento das plantas de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Isolados de três espécies de Trichoderma (T. asperellum, T. harzianum e T. viride) foram testados verificando a atividade destes isolados no controle de Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli e Sclerotinia sclerotiorum, e a capacidade destes em: produzir ácido indol acético (AIA), sideróforos e solubilizar fosfato in vitro, bem como interagir com um inoculante de rizóbio na promoção do crescimento em casa de vegetação e atuarem na imunização das plantas tratadas. Todos os isolados produziram metabólitos voláteis, enzimas hidrolíticas, AIA, sideróforos e solubilizaram fosfato in vitro. Trichoderma spp. aumentou a porcentagem de germinação e vigor das sementes tratadas, entretanto o efeito na promoção de crescimento não foi comprovado. A atividade enzimática de peroxidase, polifenoloxidase e fenilalanina amônia-liase foi maior em plantas tratadas com Trichoderma spp. Os resultados demonstram que a seleção pode direcionar aqueles isolados que podem ser empregados na agricultura de acordo com suas características e pode ser uma solução para garantir o sucesso da aplicação no campo. / Trichoderma species includes many important agricultural isolates, mainly deployed as biological control agents. Recent researches has demonstrated the ability of some isolates to act in growth promotion and immunity induction in different crops. This work aimed to evaluate Trichoderma spp. isolates in common bean plants (Phaseolus vulgaris L.) development. Strains of three Trichoderma species (T. asperellum, T. harzianum and T. viride) were tested by verifying the activity of these strains on Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli and Sclerotinia sclerotiorum control and their abilities on indol acetic acid (IAA) and siderophores production and phosphate in vitro solubilization. Their interacting with rhizobia inoculant in growth promotion in greenhouse condition and acting in treated plants immunization was also evaluated. All strains produced volatile metabolites, hydrolytic enzymes, IAA, siderophores and they solubilized phosphate in vitro. Trichoderma spp. increased the percentage of germination and vigor in treated seeds. However, the effect in growth promotion was not proven. The enzymatic activity of peroxidase, polyphenoloxidase and phenylalanine ammonia lyase was higher in plants treated with Trichoderma spp. The results demonstrated that selection can target those strains that can be deployed in agriculture in according to their characteristics and can be a solution to ensure the success on field application.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Gomes Neide (neide@bce.unb.br) on 2014-07-03T16:05:56Z No. of bitstreams: 1 2012_BrunoBenolielRocha.pdf: 6758229 bytes, checksum: 54ff8a4fee8a06cc51e9b37706664923 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-07-07T11:26:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_BrunoBenolielRocha.pdf: 6758229 bytes, checksum: 54ff8a4fee8a06cc51e9b37706664923 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-07T11:26:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_BrunoBenolielRocha.pdf: 6758229 bytes, checksum: 54ff8a4fee8a06cc51e9b37706664923 (MD5) / O Brasil é um grande produtor de resíduos agroindustriais, como o bagaço de cana. Esse substrato poderia ser usado como matéria-prima para produção microbiana de celulases com a finalidade de desenvolver processos sustentáveis como a produção de etanol de segunda geração. Para isso, este trabalho teve como objetivo a triagem de cepas fúngicas isoladas do Cerrado brasileiro com atividades celulolíticas. Entre os 13 isolados analisados o Trichoderma harzianum (L04) foi identificado como um promissor candidato para a produção de celulase quando cultivado em bagaço de cana in natura. A linhagem L04 revelou um complexo celulolítico bem equilibrado, apresentando uma rápida cinética de produção de endoglucanases, exoglucanases e β-glucosidases, obtendo valores máximos de atividades de 4022 UL - 1 (72 h), 1228 UL - 1 (120 h) e 1968 UL - 1 (48 h), respectivamente. Cerca de 60 % de rendimento de glicose foram obtidos a partir do bagaço de cana após 18 horas de hidrólise. Esta nova linhagem representa um candidato em potencial para a produção de celulases utilizando bagaço de cana como fonte de carbono. __________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Brazil is a major producer of agro-industrial residues, such as sugarcane bagasse, which could be used as raw material for microbial production of cellulases as an important strategy for the development of sustainable processes of second generation ethanol production. For this purpose, this work aimed at screening for glycosyl hydrolase activities of fungal strains isolated from the Brazilian Cerrado. Among 13 isolates, a Trichoderma harzianum strain (L04) was identified as a promising candidate for cellulase production when cultured on in natura sugarcane bagasse. Strain L04 revealed a well-balanced cellulolytic complex, presenting fast kinetic production of endoglucanases, exoglucanases and β-glucosidases, achieving 4,022, U.L-1 (72 h), 1,228 U.L-1 (120 h) and 1,968 U.L-1 (48 h) as the highest activities, respectively. About 60% glucose yields were obtained from sugarcane bagasse after 18 hours hydrolysis. This new strain represents a potential candidate for on-site enzyme production using sugarcane bagasse as carbon source.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2014. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T19:08:21Z No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-10-16T19:09:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-16T19:09:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FrancileneLopesdaSilva.pdf: 2838227 bytes, checksum: 2ba894041194431b0f5e7d4cf0cf231e (MD5) / Algumas espécies de Trichoderma quando em íntima associação com plantas hospedeiras podem desencadear sua resposta de defesa e, desta forma, induzir resistência contra subsequentes infecções fúngicas. No presente trabalho foi analisado a expressão dos genes codificadores de proteínas de defesa (Glu, Chit 1, LOX, PER e PAL) em feijoeiro comum, Phaseolus vulgaris, em resposta à asssociação com os isolados das espécies T. asperellum (468/02) e T. harzianum (475/2 e 303/2), após 24, 48 e 72 horas de interação; Além disso, foi analisado o secretoma da interação entre o feijoeiro comum e o isolado 303/02 visando mapear proteínas com papel na interação entre T. harzianum e feijoeiro comum em um sistema hidropônico. A presença do T. asperellum 468/02 e T. harzianum 457/02 aumentaram a expressão dos genes de defesa do feijoeiro Chit, Glu e PAL durante as primeiras 24h de interação. Um aumento mais tardio, com 72 h, foi observado na expressão desses mesmos genes de defesa em feijoeiro na presença T.harzianum 303/02. O gene PER teve sua expressão aumentada com 48 h de interação para os três isolados. O aumento na expressão do gene LOX foi baixa para os isolados 468/02 e 457/02 e não foi observado aumento para o isolado 303/02. A análise por LC-MS/MS do secretoma de T. harzianum 303/02 crescido na ausência da planta hospedeira permitiu a identificação de 185 proteínas, identificadas principalmente com enzimas hidróliticas (27 %), como as α ou β-1,3-, 1,4 e 1,6 glicanase, quitinases, e algumas poteases (16,5 %) como as serina e aspartato proteases. Uma cerato-platanina e uma alginato liase também foram identificadas nesta condição. A análise do secretoma da condição Co-cultivo (Feijoeiro comum/ T. harzianum) permitiu a identificação de 165 proteínas, sendo também a maioria formada por glicosil hidrolases (quitinase and glicanases). Estas mesmas sequências foram pareadas com o banco de dados de Phaseolus vulgaris, resultando na identificação de 7 proteínas de plantas: 2 glicosil hidrolases (famílias 17 e 18) proteínas relacionadas a patogênese e inibitores de proteases. Em ambas as condições foram encontradas muitas proteínas sem anotação no banco de dados. Não foram identificadas proteínas no secretoma da planta crescida sozinha. Os resultados obtidos sugerem que os isolados T. harzianum 457 e 303/02 e T. asperellum 468/02 agem como moduladores de resposta de defesa da planta. Provavelmente, eles desencadeiam a expressão de genes de defesa ou genes que codificam enzimas que participam da produção de compostos secundários envolvidas na resposta de defesa da planta. Estudos futuros serão realizados para confirmar a capacidade desses fungos de modular a resposta de defesa do feijoeiro comum bem como para mapear proteínas fúngicas envolvidas nesta interação. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Trichoderma species may trigger their defense responses and induce resistance against subsequent fungal infections. In the present work, the expression pattern of genes encoding defense proteins (Chit, Glu, LOX, PER and PAL) in common bean, Phaseolus vulgaris, was evaluated in response to association with T. asperellum (strain 468/02) and T. harzianum (strains 457/02 and 303/02) after 24, 48 and 72 hours of interaction. In addition, the secretome of this interaction was analyzed to mapp proteins playing a role in the association between T. harzianum and bean in a hydroponic system. The presence of T. asperellum 468/02 and T. harzianum 457/02 increased the expression of defense genes Chit, Glu and PAL in common bean during the first 24 hours of interaction. By contrast, a late increase, with 72 h, in the expression of these same defense genes in common bean was observed in the presence of T. harzianum 303/02. PER gene expression was increased with 48 h of interaction for all isolates. The increase in LOX gene expression was low for 468/02 and 457/02 strains and no increased was observed for 303/02 strain. LC-MS/MS analysis of the secretome T. harzianum 303/02 grown in the absence of the host plant led to the detection of 185 proteins, mostly identified as hydrolytic enzymes (27%), such as α or β-1,3-, 1,4 and 1,6 glucanases, chitinases, and some proteases (16.5%), such as serine and aspartate proteases. A cerato-platanin and an alginate lyase were also identified on this condition. Secretome analysis of the co-culture condition (common bean/T. harzianum 303/02 isolate) led to the detection of 165 proteins, mostly identified as glycosyl hydrolases (chitinases and glucanases). These sequences were mapped to P. vulgaris database, resulting in the identification of 7 plant proteins, 2 glycoside hydrolases (family 17 and 18), pathogenesis-related proteins and protease inhibitors. No proteins were identified when the plants were grown in the absence of T. harzianum 303/02. The results obtained suggested that T. asperellum 468/02 and T. harzianum (457/02 and 303/02) act as inducers of defense common bean. Probably, they triggered the expression of defense genes or genes encoding enzymes pertaining to secondary compounds pathways with roles in plant defense. T. harzianum 303/02 secreted mainly hydrolases (glycosyl hydrolases and proteases) in the absence or presence of the host plant. Further studies will be carried out to confirm their ability to modulate common bean defense response as well as to map fungal proteins presenting role in this association.

As espécies de Trichoderma incluem muitos isolados com importância agronômica empregados principalmente como agentes de controle biológico. Pesquisas recentes vêm demonstrando a capacidade de alguns isolados atuarem na promoção de crescimento e na indução de resistência em diferentes culturas. Este trabalho teve como objetivo avaliar isolados de Trichoderma spp. no desenvolvimento das plantas de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Isolados de três espécies de Trichoderma (T. asperellum, T. harzianum e T. viride) foram testados verificando a atividade destes isolados no controle de Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli e Sclerotinia sclerotiorum, e a capacidade destes em: produzir ácido indol acético (AIA), sideróforos e solubilizar fosfato in vitro, bem como interagir com um inoculante de rizóbio na promoção do crescimento em casa de vegetação e atuarem na imunização das plantas tratadas. Todos os isolados produziram metabólitos voláteis, enzimas hidrolíticas, AIA, sideróforos e solubilizaram fosfato in vitro. Trichoderma spp. aumentou a porcentagem de germinação e vigor das sementes tratadas, entretanto o efeito na promoção de crescimento não foi comprovado. A atividade enzimática de peroxidase, polifenoloxidase e fenilalanina amônia-liase foi maior em plantas tratadas com Trichoderma spp. Os resultados demonstram que a seleção pode direcionar aqueles isolados que podem ser empregados na agricultura de acordo com suas características e pode ser uma solução para garantir o sucesso da aplicação no campo. / Trichoderma species includes many important agricultural isolates, mainly deployed as biological control agents. Recent researches has demonstrated the ability of some isolates to act in growth promotion and immunity induction in different crops. This work aimed to evaluate Trichoderma spp. isolates in common bean plants (Phaseolus vulgaris L.) development. Strains of three Trichoderma species (T. asperellum, T. harzianum and T. viride) were tested by verifying the activity of these strains on Fusarium oxysporum f.sp. phaseoli and Sclerotinia sclerotiorum control and their abilities on indol acetic acid (IAA) and siderophores production and phosphate in vitro solubilization. Their interacting with rhizobia inoculant in growth promotion in greenhouse condition and acting in treated plants immunization was also evaluated. All strains produced volatile metabolites, hydrolytic enzymes, IAA, siderophores and they solubilized phosphate in vitro. Trichoderma spp. increased the percentage of germination and vigor in treated seeds. However, the effect in growth promotion was not proven. The enzymatic activity of peroxidase, polyphenoloxidase and phenylalanine ammonia lyase was higher in plants treated with Trichoderma spp. The results demonstrated that selection can target those strains that can be deployed in agriculture in according to their characteristics and can be a solution to ensure the success on field application.

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo Mención: Sanidad Vegetal / El presente trabajo tuvo como objetivo determinar la capacidad biocontroladora de cepas mejoradas de Trichoderma spp. obtenidas a través de fusión de protoplastos y aplicación de N-metil-N-nitro-N-Nitrosoguanidinio (NG) en cepas silvestres previamente caracterizadas y seleccionadas por su buena capacidad biocontroladora en Rhizoctonia solani. Se evaluó su efecto in vitro a través de antagonismo directo en cultivos duales, metabolitos volátiles y metabolitos difusibles en dos cepas de Rhizoctonia solani (509 (GA 2-1) y 618 (GA 4)). Las pruebas de antagonismo se realizaron a la temperatura y pH óptimo de crecimiento del patógeno. Las cepas ThF 2-1, ThF 2-18, ThF 3-3, ThF 4-15 y la cepa ThF 5-8, presentaron los mejores porcentajes de inhibición. También se evaluó la capacidad biocontroladora de las cepas antes indicadas, bajo condiciones de invernadero en plántulas de tomate de los cultivares 92.95 y Góndola susceptibles. En la prueba de inocuidad se evaluó altura, peso fresco y seco de las plántulas. Todas las cepas resultaron inocuas. Para evaluar la capacidad biocontroladora, las cepas se aplicaron en forma de pellets de alginato de sodio (1,7 g pellet/ L suelo) al suelo en macetas, previamente inoculado con el fitopatógeno en suelo estéril y se compararon con un tratamiento testigo (sólo Rhizoctonia solani) y con un tratamiento a base del fungicida pencycuron. Se evaluó peso fresco y seco de las plantas, cancrosis, desarrollo radical y mortalidad. La cepa mejorada ThF 4-15 fue el mejor agente de biocontrol en el cultivar de tomate Góndola, cuando se evaluó el nivel de cancrosis comparado con sus genotipos silvestres. En cuanto al desarrollo radical de las plantas los tratamientos que incluyeron a las cepas mejoradas, no tuvieron diferencias. También se estudió la viabilidad y sobrevivencia de las cepas bioantagonistas formulados como pellets en dos suelos (Antumapu y La Palma) a tres temperaturas de almacenaje (22ºC, 5ºC y temperatura ambiental de laboratorio (18,6-25°C)) determinándose su capacidad antagónica sobre el fitopatógeno a los 30, 60 y 90 días, observándose que las cepas biocontroladoras se mantuvieron viables en los suelos Antumapu y La Palma, al menos hasta los 90 días a las temperaturas estudiadas. Se determinó también que ellos conservan su capacidad antagónica