Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-10-22T19:39:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-10-26T13:01:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_BenznidazolCombinaçãoAlopurinol.pdf: 1210676 bytes, checksum: b86fb203a1ae60b811ad4d83b65ea6ff (MD5) Previous issue date: 2014 / O tratamento da doença de Chagas apresenta limitações relacionadas à sua eficácia variável, particularmente na fase crônica, e aos efeitos adversos frequentes, que podem levar à interrupção do tratamento. A terapia de combinação de fármaco parece ser uma estratégia ideal, já que pode contribuir para o aumento da eficácia do tratamento, diminuição da toxicidade e da probabilidade de desenvolvimento de resistência. No presente estudo foi avaliada a atividade do alopurinol (Al) em combinação com o benznidazol (Bz) na infecção experimental por T. cruzi. Inicialmente, foi verificada a atividade da combinação Bz/Al sobre a infecção de células H9c2 infectadas pela cepa Y de T. cruzi, incubando-as com diferentes concentrações de cada composto isoladamente ou em combinação. Foi utilizado, in vitro, o método de diluição “tabuleiro de dama” (checkerboard) e os resultados foram analisados utilizando índice de combinação (CI) calculado pelo software Calcusyn. A avaliação global dos resultados demonstrou que os CI variaram no intervalo de 0,62 a 1,76, o que sugeriu um efeito aditivo resultante da associação in vitro dos compostos avaliados. Posteriormente, foi realizada a avaliação in vivo da combinação Bz/Al. Para isso, camundongos Swiss fêmeas foram inoculados com 5000 formas tripomastigotas sanguíneos da cepa Y de T. cruzi. O tratamento foi administrado por via oral durante 20 dias consecutivos, iniciado quatro dias após a inoculação. Os animais foram tratados com Bz (100, 75, 50 e 25 mg/kg) ou Al (90, 60 e 30 mg/kg) isoladamente ou em combinação (Bz/Al: 75/90 75/60 75/30, 50/90 , 50/60, 50/30, 25/90 , 25/60 e 25/30 mg/kg ). Os seguintes parâmetros foram utilizados para determinação da cura parasitológica: exame de sangue a fresco durante e até 60 dias após o tratamento e ensaio de PCR em tempo real de amostras de sangue (30 e 180 dias após o tratamento). A análise dos níveis de parasitemia após o tratamento com Bz mostrou um efeito tripanocida dose-dependente. Entretanto, mesmo havendo uma redução significativa do nível de parasitemia após o tratamento, a cura parasitológica foi identificada apenas nos animais tratados com 75 e 100mg de Bz por kg de peso corporal (20 e 70 % de cura, respectivamente). De forma diferente, não foi verificada efeito dose-dependente resultante do tratamento com Al. Além disso, não foi observada redução da parasitemia nem cura entre os animais que receberam diferentes doses desse fármaco. Posteriormente, foi avaliado o efeito das combinações entre Bz/Al, in vivo. O efeito benéfico das combinações dos fármacos foi demonstrado pela redução significativa da parasitemia detectada em todos os animais que receberam a terapia de combinação. Além disso, foi observado um aumento no índice de cura entre os animais tratados com os fármacos em combinação, uma vez que a administração de Bz-75 mg/kg + Al-90 mg/kg ou Bz-75 mg/kg + Al-60 mg/kg induziu 100 % de cura, e a combinação de Bz-75 mg/kg + Al-30 mg/kg ou Bz-50 mg/kg + Al-60 mg/kg induziu, respectivamente, 80 e 20 % de cura. Em conclusão, a combinação de Bz e Al apresentou um efeito benéfico, uma vez que foi identificada cura parasitológica em uma proporção maior de animais tratados com os medicamentos em associação do que naqueles que receberam as mesmas doses de cada fármaco em monoterapia. Nossos resultados reforçam a importância da identificação de combinações de compostos já comercializados que apresentem uma interação positiva no tratamento da infecção por T. cruzi. Esta abordagem pode contribuir para otimizar os custos e tempo investidas na pesquisa relacionada à toxicidade e a biodisponibilidade de novas drogas para o consumo humano. ___________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Current chemotherapy for Chagas disease is unsatisfactory due to its limited and variable efficacy, particularly in chronic phase, and frequent side effects that can lead to treatment discontinuation. Combined therapy is envisioned as an ideal approach since it may improve treatment efficacy and decrease toxicity and resistance likelihood. In this work, we evaluated the activity of the alopurinol (Al) in combination with the benznidazole (Bz) upon T. cruzi infection. First, we investigated the activity of the Bz/Al combination on intracellular parasites of Y stain by incubating T. cruzi-infected H9c2 cells with different concentrations of each compound alone or in combination. In vitro drug interactions were assessed using a “checkerboard method” and the results were analyzed by calculating of the combination index (CI) using Calcusyn software.The overall assessment of the results demonstrated CI (0,62 a 1,76) suggesting an in vitro additive effect between the evaluated drug combination. Subsequently, the in vivo evaluation of the Bz/Al combination was performed in mice infected with 5000 blood tripomastigotes of Y stain. Treatment was administered orally for 20 consecutive days, beginning at 4 days after inoculation. Animals were treated with Bz (100, 75, 50 e 25 mg/kg) or All (90, 60 e 30 mg/kg) alone or in combination (Bz/Al: 75/90, 75/60, 75/30, 50/90, 50/60, 50/30, 25/90, 25/60 e 25/30 mg/kg). The parameters chosen to determine parasitological cure were parasitaemia during and up to 60 days after treatment and blood real time PCR assay (30 and 180 days post treatment). First, the effects of several doses of each drug alone on the evolution of the infection in mice were evaluated. The analysis of parasitemia levels after Bz-treatment showed a dosedependent trypanocidal effect. Although there was significant reduction in the level of parasitemia after treatment, parasitological cure was documented only in animals treated with 75 and100 mg of Bz per kg of body weight (20 and 70 % of cure, respectively). Differently, a dose-dependent effect was not observed among treated animal and the parasitemia reduction or cure was not verified among animals that received different doses of Al. In a second series of data analyses, the activities of the combinations of the Bz/Al were compared. Here the beneficial effect of the drug combinations was demonstrated by a significant reduction of parasitemia detected in all animals that received the combination therapy. Besides increase in rate of cure among animals treated with combination therapy was observed, since the combination of the Bz-75 mg/kg + Al-90 mg/kg or Bz-75 mg/kg + Al-60 mg/kg induced 100% of cure, and the combination of 75 mg/kg + Al-30 mg/kg or Bz-50 mg/kg + Al-60 mg/kg induced, respectively, 80 and 20% of cure. In conclusion, the combination of Bz and Al suggest a beneficial effect, as parasitological cure was observed in a higher proportion of animals treated with the drugs in association than in animals receiving the same dose of each of the drugs in monotherapy. Our results reinforce the importance of identifying alreadymarketed compounds with synergistic effects. This approach may help avoid expensive and time-consuming research on the toxicity and biological availability of drugs for human consumption.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-04-13T19:45:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-04-15T13:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) Previous issue date: 2015 / Na cardiomiopatia Chagásica Crônica a presença do parasito parece ser essencial para a perpetuação da inflamação, entretanto devido à intensidade das lesões com escassos parasitos, o fenômeno de autoimunidade é apontado como importante na indução da miocardite. Dessa forma, o uso de drogas tripanocidas pode alterar a patogênese ao diminuir o parasitismo. No Brasil a droga indicada, o Benznidazol (Bz), gera cura parasitológica somente no tratamento realizado na fase aguda da infecção.O objetivo deste estudo foi quantificar o parasitismo no tecido cardíaco e avaliar a presença de autoanticorpos no soro de cães inoculados com diferentes cepas do T. cruzi e correlacionar a carga parasitária e a autoimunidade com a intensidade das lesões cardíacas. Sessenta cães sem raça definida, nascidos e mantidos no canil da UFOP foram infectados com 2,0x103 tripomastigotas metacíclicos/Kg das cepas Berenice-78, AAS e VL-10 do T.cruzi, e após a confirmação da infecção, metade dos cães foi tratada com Bz e a outra metade mantida sem tratamento. Noventa dias após a infecção, 30 animais foram eutanasiados na fase aguda, sendo os outros 30 na fase crônica da infecção. O átrio direito foi seccionado para análise da intensidade do infiltrado inflamatório por H&E, e utilizado para a quantificação do T.cruzi por qPCR. Além da detecção de autoanticorpos por immunoblotting no soro. Todos os grupos experimentais apresentaram miocardite intensa tanto na fase aguda, quanto na fase crônica. A quantificação do DNA do parasito nos animais infectados e não tratados variou de 5,0x102 a 2,6x106cópias/μL na fase aguda e na fase crônica o pico de quantificação foi de 4,9x105 cópias/μL. O tratamento com Bz reduziu significativamente o parasitismo cardíaco entre os animais infectados com a cepa VL-10 e Berenice-78(p<0.05) durante a fase aguda da infecção. Entretanto,na fase crônica não foi houve redução da carga parasitária entre os cães infectados pela cepa VL-10, não sendo possível avaliar a redução entre as outras duas cepas. A análise entre inflamação cardíaca e o parasitismo revelou uma correlação positiva entre o aumento da quantidade de DNA do parasito com o aumento da inflamação. Em relação à autoimunidade, foi observada maior produção de autoanticorpos durante a fase aguda em relação à fase crônica sem correlação com a miocardite. ___________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : Chagas disease cardiomyopathy in presence of a parasite seems to be essential paragraph perpetuating inflammation, however due to the intensity of the lesions with few parasites, the phenomenon of autoimmunity and pointed how important in the induction of myocarditis. Thus, the use of trypanocidal drugs can change one pathogenesis when decrease parasitism. In Brazil an indicated drug, benznidazole (Bz), generates parasitological cure only unrealized treatment in the acute phase of infection. The aim was to quantify parasitism in tissue heart and evaluate the presence of autoantibodies in dogs serum inoculated with different strains to T. cruzi and correlate the parasite load and autoimmunity with an intensity of cardiac injury. Sixty mongrel dogs, born and kept in the kennel UFOP were infected with metacyclics 2,0x103 / kg of Berenice-78 strains, AAS and VL-10 T. cruzi, and after confirmation of infection, half of the dogs was treated with Bz and another half maintained without treatment. Ninety days after the infection, 30 animals were euthanized in the acute phase, being another 30 Infection in chronic phase. The right atrium was cut for analysis of the intensity of the inflammatory infiltrate by H & E, and a paragraph used quantification of T. cruzi in qPCR. Besides the detection of serum autoantibodies by immunoblotting. All of the experimental groups showed intense myocarditis both in the acute phase, The Chronic phase. The DNA quantification at the parasite infected animals and not treaties ranged from 5,0x102 one 2,6x106 copies / mL in acute and chronic phase peak of the quantification was 4,9x105 copies / mL. Treatment with Bz significantly reduced cardiac parasitism between animals infected with a VL-10 strain and Bernice-78 (p <0.05) during the acute phase of the infection. However, in chronic phase was not there reduction of parasite load between dogs infected for the VL-10 strain, not being possible to assess the reduction between how other two strains. The analysis of cardiac inflammation and parasitism revealed a positive correlation between increasing the amount of DNA of the parasite with increased inflammation. In relation to autoimmunity, it was observed increased autoantibody production during the acute phase in relation to chronic phase without correlation with myocarditis.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:58:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313851.pdf: 12194664 bytes, checksum: a49f2818198bdc12a810d2d30de9730b (MD5) / A distribuição simpátrica e o compartilhamento de hospedeiros e antígenos entre o Trypanosoma rangeli e o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da Doença de Chagas podem levar a erros nos diagnósticos e inferências epidemiológicas destes parasitos. Neste sentido, apresentamos o primeiro estudo proteômico comparativo em grande escala das proteínas solúveis e de superfície da forma tripomastigota de T. rangeli e de T. cruzi, objetivando a identificação de proteínas com potencial aplicação no diagnóstico diferencial destes parasitos. Neste estudo foram identificadas 137 distintas proteínas solúveis da forma tripomastigota de T. rangeli resolvidas no perfil 2-D por espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS). Destas, 76% localizadas no citosol ou mitocôndrias e 26% envolvidas no metabolismo energético ou na resposta ao estresse. Além disto, através de ensaios de immunoblotting 1-D com estas proteínas solúveis e antissoros de animais experimentalmente infectados com estes parasitos, foi verificado que a reatividade sorológica cruzada existente entre estes dois parasitos não é recíproca, pois o reconhecimento de proteínas da forma tripomastigota de T. rangeli é menos intensa do que o reconhecimento de proteínas da forma tripomastigota de T. cruzi pelos antissoros heterólogos. Também observamos que proteínas das formas tripomastigotas de T. rangeli e de T. cruzi na faixa de 70-80kDa são reconhecidas exclusivamente pelos antissoros homólogos. Nos ensaios de immunoblotting 2-D foi observado um forte reconhecimento de proteínas da forma tripomastigota de T. rangeli pelo antissoro homólogo na faixa entre 60-100kDa. Apesar disto, não foi possível identificar marcadores específicos destes parasitos com estes ensaios. Porém, a análise proteômica comparativa das proteínas de superfície das formas epimastigota e tripomastigota de T. rangeli e de T. cruzi permitiu a identificação de potenciais marcadores específicos de T. rangeli. Esta análise foi realizada utilizando duas abordagens, sem (LC-MS-MS/MS) e com o uso de gel (GeLC-ESI-MS/MS), além de ensaios de immunoblotting 1-D, que revelaram um padrão de reconhecimento das proteínas de superfície distinto para cada espécie. Com isto foi possível identificar 138 proteínas de T. rangeli e 343 proteínas de T. cruzi, das quais 42 e 157 proteínas exclusivamente nas formas tripomastigotas de T. rangeli e de T. cruzi, respectivamente. Em particular, as análises de MS/MS revelaram pelo menos duas proteínas de T. rangeli, GP63-relacionada (~70kDa) e FCaBP (~25kDa), como potenciais alvos para o diagnóstico diferencial com T. cruzi. Desta forma, esta análise proteômica em larga escala das proteínas de superfície de T. rangeli, revelou diferenças e semelhanças entre as proteínas de superfície destes parasitos, além de permitir a identificação de novas proteínas de T. rangeli com potencial aplicação no diagnóstico diferencial com T. cruzi.<br> / Abstract : Sympatric distribution and sharing of hosts and antigens by Trypanosoma rangeli and Trypanosoma cruzi the etiological agent of Chagas' disease, often incur in misdiagnosis and improper epidemiological inferences. In order to identify differential antigens with potential application in serological diagnosis we performed the first high-throughput proteomic analysis of soluble and surface proteins (SP) of T. rangeli and T. cruzi trypomastigotes. In this work, 137 non-redundant T. rangeli trypomastigote soluble proteins resolved in 2-D profile were identified by mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Within these 137 non-redundant proteins, 76% are cytosolic or mitochondrial and 26% are involved in energy metabolism or response to stress. Furthermore, 1-D immunoblotting assays with soluble proteins and antisera from animals experimentally infected showed a less intense recognition of T. rangeli trypomastigotes soluble proteins than T. cruzi trypomastigotes proteins by heterologous antisera indicating that serological cross-reactivity between these parasites is not reciprocal. In addition, T. rangeli and T. cruzi trypomastigotes soluble proteins between ~70-80 kDa were exclusively recognized by homologous antisera suggesting specie-specific antigens among the trypomastigote proteins. We also observed a strong recognition of T. rangeli trypomastigotes proteins by homologous antiserum between ~60- 100kDa in 2-D immunoblotting tests. Unfortunately, we were not able to identify specific markers of these parasites through these trials. On the other hand, the comparative proteomic analysis of T. rangeli and T. cruzi epimastigote and trypomastigote SP pointed out potential T. rangeli specific-markers, using gel-free (LC-ESI-MS/MS) and gel-based (GeLC-ESI-MS/MS) proteomic approaches. Besides, immunoblotting revealed distinct recognition profiles of SP for each species. A total of 138 T. rangeli proteins and 343 T. cruzi proteins were identified, of which, 42 and 157 proteins were exclusively identified in T. rangeli or T. cruzi trypomastigotes, respectively. MS/MS analysis of T. rangeli exclusive bands revealed two unique proteins, GP63-related (~70kDa) and flagellar calcium-binding protein (FCaBP) (~25kDa), as potential markers. This highly sensitive proteomic assessment of surface proteins characterized the T. rangeli surfaceome, revealing several differences and similarities between these two parasites and new T. rangeli-specific proteins with promising use in differential diagnosis from T. cruzi.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213571.pdf: 3165886 bytes, checksum: 023dbff8900bec900d8d6b2eea6e15b6 (MD5) / O Trypanosoma vivax é um hemoparasita causador de tripanosomose em

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:00:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339552.pdf: 1776510 bytes, checksum: da1705c78b546bdd9cc227ab480ba339 (MD5) Previous issue date: 2016 / O Trypanosoma rangeli (Kinetoplastida; Trypanosomatidae) é um parasito hemoflagelado que compartilha reservatórios e vetores com o Trypanosoma cruzi, sendo capaz de infectar mamíferos silvestres e domésticos, assim como o ser humano. Dentre as proteínas envolvidas na regulação do metabolismo energético do T. rangeli, avaliamos neste trabalho a expressão e a atividade enzimática da arginina quinase (AK), enzima que possui atividade de fosfotransferase e cataliza a interconversão entre a fosfoarginina e ADP, assim como arginina e ATP, sendo essencial para diferentes processos celulares em tripanosomatídeos, como por exemplo, infecção, multiplicação celular e diferenciação celular. O crescimento dos parasitos em meio LIT foi acompanhado durante nove dias, sendo observada uma menor expressão da AK somente no dia 1, aumentando no dia 2 e mantendo-se estável nos dias subsequentes. A atividade enzimática da AK aumentou progressivamente até o 5º dia de cultivo, decaindo gradativamente nos dias subsequentes. Durante a diferenciação celular de formas epimastigotas para tripomastigotas realizada ao longo de oito dias em meio DMEM, a maior expressão da AK foi detectada nas formas epimastigotas (dia 0) e a maior atividade enzimática nas formas de transição (dia 4). Durante a diferenciação de tripomastigotas em epimastigotas foi observada uma menor expressão da AK somente nos dias 3 e 4, sendo aumentada no dia 5 e mantendo-se estável nos dias subsequentes. A atividade enzimática da AK se manteve constante nos tripomastigotas recém isolados e no primeiro dia de cultivo, aumentando no segundo dia e se mantendo constante até o sexto dia, quando teve um aumento da atividade, que novamente se manteve constante até o nono dia e então decaindo nos últimos dias. Embora estudo prévio tenha demonstrado uma localização flagelar da TrAK a maior parte da atividade da AK foi encontrada na fração citosólica após purificação do citoesqueleto e flagelo. Na comparação entre diferentes espécies e cepas de tripanosomatídeos, a cepa SC 58 de T. rangeli apresentou uma atividade quase duas vezes maior do que a cepa Choachí. A atividade nas cepas de T. cruzi foi praticamente constante quando comparadas entre si e também com a cepa Choachí. Através destes resultados é possível inferir que a atividade da AK parece estar relacionada à multiplicação celular e a adaptação à condições metabólicas adversas (ex. diferenciação celular), sendo influenciada pela demanda energética do parasito.<br> / Abstract : Trypanosoma rangeli (Kinetoplastida; Trypanosomatidae) is a hemoflagellate parasite that infects wild and domestic mammals, as well as humans, sharing reservoirs and vectors with Trypanosoma cruzi. In this work we evaluate the expression and the enzymatic activity of the T. rangeli arginine kinase (AK), an enzyme with phosphotransferase activity that catalyzes the interconversion between phosphoarginine and ATP¸ as the arginine and ATP. AK is essential in trypanosomatids for diferent cellular processes, like infection, cellular multiplication and cellular diferentiation. The AK expression was monitored during the T. rangeli epimastigotes growth in LIT medium for nine days, revealing an increasing expression of AK during the first couple of days and then stabilizing. The enzymatic AK activity have increased up to the fifth day of in vitro culture and then gradually decreased during the subsequent days. During the cellular differentiation in vitro, higher AK expression levels were observed for the epimastigote forms (day 0) but the higher enzymatic activity was detected for the transition forms (day 4). During the in vitro differentiation of bloodstream forms to replicative forms the AK expression have increased up to the fifth day and remained stable up to the ninth day. During this process the AK enzymatic activity revealed a slight increase up to the second day and the stabilised up to the sixth day when a second peak of activity was observed followed by decay up to the ninth day. Although previous studies have demonstrated a flagellar localization for the TrAK, higher AK activity was found on the cytosolic fraction. The AK activity revealed to be distinct among T. rangeli strains, being two times higher for the SC58 strain when compared to the Choachí strain, which revealed similar AK activity as observed for T. cruzi. We conclude that AK activity might be related to the T. rangeli cellular multiplication, differentiation and metabolic adaptation to adverse conditions, being influenced by the parasite?s energetic demands.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:41:54Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_mca_dr_jabo.pdf: 2885202 bytes, checksum: 80086a83bb46ca2cb05bc1ae5ea75a8d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Trypanosoma evansi é patogênico para a maioria dos animais, acometendo bovinos, bubalinos, caprinos, ovinos, suínos, cães, quatis, capivaras, camelos e outras espécies animais em áreas tropicais e subtropicais do globo terrestre sendo, no Brasil, a doença endêmica no pantanal mato-grossense. O presente estudo teve como fito principal estudar a evolução clínica, as alterações hematológicas, bioquímicas sérica, imunológicas e anatomopatológicas de bovinos infectados experimentalmente com T. evansi. Para tal, foram utilizados oito bovinos, clinicamente sadios e sorologicamente negativos para T. evansi. Três foram mantidos como testemunhos e cinco inoculados com T. evansi. Exames físicos, parasitológicos, hematimétricos e bioquímicos séricos (proteínograma, índice ictérico e glicose) e do líquido cefalorraquidiano foram realizados. Nos exames físicos realizados nos bovinos até 525° DAI não foi notada nenhuma anormalidade clínica com relação à temperatura retal, batimentos cardíacos, frequência respiratória, movimentos ruminais, aspectos de membranas mucosas (nasal, conjuntival, oral, vaginal e/ou prepucial) e dos linfonodos externos (mandibulares, maxilares, parotídeos, cervicais superficiais, sublíacos e mamários). A presença de tripomastigotas foi demonstrada através da prova biológica nos bovinos 01, 06 e 08 no15° DAI, bovinos 06 e 07 no 30° DAI, bovinos 01 e 06 no 45° DAI, bovino 06 no 60° DAI, bovino 01 no 75° DAI. As contagens de hemácias, os teores de hemoglobina e os volumes globulares dos bovinos, experimentalmente infectados, variaram dentro dos limites de normalidade para a espécie bovina. O VGM, HGM e CHGM, apresentam alterações pontuais. / Trypanosoma evansi are pathogenic to most of animals, affecting cattle, buffaloes, goats, sheep, pigs, dogs, coatis, capybaras, camels and other animals in tropical and subtropical areas of the globe, and, in Brazil, it causes an endemic disease in the Pantanal Mato Grosso. This study primarily aimed to study the clinical, hematological, biochemical, immunological and pathological alterations in cattle experimentally infected with T. evansi. For this purpose, we used eight animals, clinically healthy and serologically negative for T. evansi. Three animas were kept as evidence and five were inoculated with T. evansi. Physical, parasitological, hematological and serum biochemical (proteins, icteric index and glucose) and cerebrospinal fluid examination were performed. In the physical examination conducted in cattle up to 525th DAI were not observated any clinical abnormality in concerning rectal temperature, heart rate, respiratory rate, ruminal movements, aspects of the mucous membranes (nasal, conjunctival, oral, vaginal and / or specimen) and external nodes (mandibular, maxillary, parotid, superficial cervical, breast and sublíacos). The presence of trypomastigotes was demonstrated by bioassay in cattle 01, 06 and 08 no 15th DAI, cattle 06 and 07 at 30° DAI, cattle 01 and 06 on the 45 th DAI, cattle 06 in 60 th DAI, cattle 01 in 75 th DAI. Red blood cells counts, hemoglobin content and volume cell of experimentally infected cattle were within normal limits for the bovine species. The MCV, MHC and MCHC, showed specific changes. Physical examination of the cerebrospinal fluid did not show alterations in appearance and coloration. Morever, using the Giensa-stained blood smears, buffy coat technique (BCT) and mouse inoculation procedure were negative for T. evansi tripomastigote. Serum protein concentrations, identified 26 proteins with molecular weights ranging from 20 to 245 KD.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-05-24Bitstream added on 2014-06-13T18:07:30Z : No. of bitstreams: 1 silva_ma_dr_arafcf.pdf: 976242 bytes, checksum: 452382843f6dbbd98e65fdd05a72d135 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado causador da doença de Chagas que, segundo estimativas da OMS afeta 16-18 milhões de pessoas na América Latina, causando danos sociais extremamente graves. A doença apresenta formas clínicas variadas que incluem a forma indeterminada, cardiomiopatia e alterações digestivas. Variações intraespecíficas nas diferentes cepas de Trypanosoma cruzi estudadas foram demonstradas em nível morfo-biológico, bioquímico e genético. Essa heterogeneidade poderia explicar a variabilidade nas manifestações clínicas da doença de Chagas e as diferenças regionais de sua morbidade. Com o objetivo de caracterizar quatro cepas de Trypanosoma cruzi isoladas de pacientes chagásicos crônicos, residentes na região de Araraquara - SP, parâmetros biológicos e moleculares foram avaliados. Para estudar o comportamento biológico das cepas, três grupos de camundongos Swiss, não isogênicos, pesando 10-12g foram infectados com formas sangüíneas das cepas em estudo. Foram avaliados os seguintes aspectos: período pré-patente, curvas de parasitemia, morfologia do parasita no sangue periférico, taxas de mortalidade e lesões histopatológicas. Três cepas apresentaram parasitemia patente com períodos pré-patentes variáveis, baixa parasitemia e formas tripomastigotas largas durante todo o curso da infecção. Uma cepa apresentou parasitemia sub-patente. Nenhum animal morreu durante o período do estudo. Exame histopatológico mostrou ninhos de formas amastigotas no coração de animais infectados para duas cepas e inflamação em vários órgãos para todas as cepas. Para a caracterização molecular o DNA do parasita foi extraído de formas epimastigotas mantidas em meio LIT. Parte do espaçador não transcrito do gene de mini-exon foi amplificado por PCR. Todas as cepas geraram produtos com 250 pb. Os dados biológicos e moleculares permitiram a classificação de todas as cepas como T.cruzi II. / Trypanosoma cruzi is a flagellate protozoan agent of Chagas disease that, according to the OMS estimation, affect 16-18 milion of people in Latin America, making serious social damage. The illness shows varied clinicals forms that include indeterminate form, cardiomiopathy and digestive alterations. Intra-specific variations among differents Trypanosoma cruzi strains studied have been demonstrated on morpho-biological, genetic and biochemical levels. Such heterogeneity can explain the variability of Chagas disease in clinical manifestations and in the regional differences of the morbidity rate. This research has the objective to characterize four strains of Trypanosoma cruzi isolated from humans patients, residents in Araraquara - SP region, by evaluating biological and molecular parameters. In order to study the biological behavior of Trypanosoma cruzi strains, three groups of albino Swiss mice, weighting 10-12g were intraperitoneally inoculated with bloodstreams forms of the strains in study. Pre-patent period, parasitaemia patterns, tripomastigote morphology, mortality rate and tissue distribution of the protozoan were analysed. Three strains showed patent parasitemy with variable pre-patent period, low parasitemy and broad forms during the whole infection period. One strain showed sub-patent parasitemy. Mortality rates were null. Histopathological analysis showed amastigotes forms in heart for two strains and inflamatory process in several organs for all the strains. For the molecular characterization, the parasite DNA was extracted from epimastigotes forms kept in LIT medium. Part of the non-transcribed spacer of the mini-exon gene was amplified by PCR. All the strains generated products with 250 pb. The molecular and biological informations allowed to classify all the strains as T.cruzi II.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-23Bitstream added on 2014-06-13T19:05:15Z : No. of bitstreams: 1 serafim_eop_dr_araiq.pdf: 749200 bytes, checksum: c1178ed8d941599b66d9365618867d60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas, descoberta por Carlos Chagas há aproximadamente 100 anos, ainda constitui um grave problema de Saúde Pública. É considerada doença extremamente negligenciada, uma vez que afeta exclusivamente as populações dos países em desenvolvimento. Os pacientes dessa doença são, em sua maioria, de baixa renda e, não representando mercado, ficam excluídos do escopo e dos esforços de Pesquisa e Desenvolvimento das Indústrias Farmacêuticas. Estima-se que entre 18 e 20 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença e de, aproximadamente, 120 milhões, a população em risco de contaminação na América Latina. O tratamento da doença de Chagas continua sendo um desafio, pois apenas dois fármacos nitro-heterocíclicos são comercializados no mundo: nifurtimox (Lampit8, Bayer) e benznidazol (Rochagan8, Roche), sendo este último, o único fármaco disponível no mercado brasileiro. Dentre os compostos potencialmente antichagásicos em estudo, o hidroximetilnitrofural (NFOH) mostrou maior atividade tripanomicida e menor mutagenicidade do que o nitrofural (composto matriz) em todos estágios de desenvolvimento de um fármaco. Em 2006, os estudos pré-clínicos de toxicidade mostraram que o NFOH apresentou DL50 >2000 mg em ratos, dose considerada segura pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e promissor para a continuidade dos ensaios. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a conversão in vitro e in vivo do NFOH em NF. Assim, metodologia analítica foi desenvolvida e validada para a determinação de NF e NFOH em matriz de plasma humano e rato e foram realizados estudos de conversão in vitro (pH 1,2 e 7,4) e ensaios in vivo (farmacocinéticos) em ratos. Os resultados mostraram que o NFOH apresenta estabilidade in vitro, é metabolizado em plasma (humano e de ratos) e também,... / Chagas disease, discovered by Carlos Chagas about a century ago and also known as American trypanosomiasis, is still a serious Public Health problem. The disease is considered extremely neglected because it afflicts exclusively populations in developing countries. Most Chagas’ disease patients fall within the low income bracket and, being economically insignificant, are excluded from the research and development scope and efforts of the Pharmaceutical Industry. It is estimated that 18 and 20 million people in Latin America are infected with Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of the disease, and that approximately 120 million people are at risk of contamination in the continent. Chagas’ disease treatment is a challenge because only two nitroheterocyclic drugs are market worldwide, namely nifurtimox (Lampit8, Bayer) and benznidazol (Rochagan8, Roche), and the latter is the only drug available in the Brazilian market. Among the potentially anti-Chagas compounds under study, hydroxymethyl nitrofural (NFOH) has shown higher tripanomicide activity and lower mutagenicity than nitrofural (active compound) in all stages of development of the parasite. In 2006, preclinical toxicity studies showed that NFOH presented LD50 higher than 2000 mg in rats. This value is considered safe by the World Health Organization (WHO) and promising for continuing test. In this context, the purpose of this work was to investigate the in vivo stability of NFOH. To this end, an analytical methodology was designed and validated for the determination of NF and NFOH in human and rat blood plasma. Conversion studies were carried out in vitro (pH 1.2 and 7.4) and in vivo (pharmacokinetic studies) with rats. The results indicated that NFOH presents in vitro stability, and is converted in plasma (human and rat) and in the liver. The NFOH displayed a profile ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:35Z : No. of bitstreams: 1 000846312_20160306.pdf: 239587 bytes, checksum: b1f2e76e8c9a7873f1639495d4a98291 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-07T11:06:13Z: 000846312_20160306.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T11:07:05Z : No. of bitstreams: 1 000846312.pdf: 1580888 bytes, checksum: 23f06c39472ed8cdca51d4cd4418f516 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os insetos da subfamília Triatominae, também conhecidos como barbeiros, possuem uma grande importância na parasitologia humana, pois são vetores do Trypanosoma cruzi, protozoário causador da doença de Chagas. Além da importância médicosanitária, esses insetos destacam-se na citogenética, por apresentarem características peculiares como cromossomos holocêntricos, e uma meiose incomum, na qual os autossomos segregam-se de maneira regular, enquanto que os cromossomos sexuais apresentam a primeira divisão equacional e a segunda reducional. Além disso, diversos estudos são realizados para identificar os efeitos do estresse fisiológico no organismo desses insetos. Entretanto, não há estudos avaliando a influência da contaminação de triatomíneos pelo Trypanosoma cruzi na reprodução desses indivíduos. Para isso foram analisadas as características citogenéticas durante a espermatogênese de três espécies de triatomíneos: Triatoma brasiliensis, Rhodnius neglectus e Panstrongylus megistus, que foram infectadas em laboratório, pelo T. cruzi. Posteriormente, foram confeccionadas lâminas com os testículos desses insetos e coradas por técnica citogenéticas convencionais e, também, realizada contagem celular para verificar quantitativamente as células presentes nos testículos. Foi possível observar um aumento no tamanho celular dos núcleos poliploides, células nutritivas presentes nos túbulos seminíferos, e de todas as células durante a espermatogênese, além de uma desorganização no material nuclear e nucleolar durante a divisão celular. Além disso, foi observado um decréscimo nas quantidades celulares de indivíduos contaminados, com aumento no número de núcleos poliploides e células em intérfase, e uma diminuição de células em divisão. Essas alterações podem ter ocorrido devido ao estresse fisiológico que a infecção por T.cruzi causou ao organismo desses... / The insects of the Triatominae, also known as barbers, have a great importance in human parasitology, as are vectors of Trypanosoma cruzi protozoan that causes Chagas disease. In addition to medical and health importance, these insects stand out in cytogenetics, due to peculiar characteristics as holocentric chromosomes, and an unusual meiosis, in which the autosomes segregate regularly, while the sex chromosomes present the first equational division and the second reductive. In addition, several studies are conducted to identify the effects of physiological stress in the body of these insects. However, there are no studies evaluating the influence of contamination of insects Trypanosoma cruzi in the reproduction of these individuals. For this, we analyzed the cytogenetic characteristics during spermatogenesis three triatomine species: Triatoma brasiliensis, Rhodnius neglectus and Panstrongylus megistus, which were infected in the laboratory with T. cruzi. Later blades were made with the testicles of these insects and stained by conventional cytogenetic technique and performed cell counts to quantitatively determine these cells in the testes. It was possible to observe an increase in cell size of polyploid nuclei, nutritional cells present in the seminiferous tubules and all cells during spermatogenesis, plus a disruption in nuclear and nucleolar during cell division. Furthermore, there was a decrease in cell quantities given infected individuals, an increase in the number of polyploid cells and nuclei in interphase, and a decrease in cell division. These changes may be due to physiological stress that infection with T. cruzi caused to the body of these insects. In addition, cells in interphase and early chromosome condensation had higher heteropycnotic corpuscles in contaminated than in those who were free of protozoan that causes Chagas disease showing that the physiological stress organisms may be the main reason for this change in...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-22T17:38:21Z No. of bitstreams: 1 2015_HialyCristinaCamargosPoli.pdf: 1606339 bytes, checksum: ad09dfd2eb11ded44e751e88caf91e5a (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-24T21:11:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_HialyCristinaCamargosPoli.pdf: 1606339 bytes, checksum: ad09dfd2eb11ded44e751e88caf91e5a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-24T21:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_HialyCristinaCamargosPoli.pdf: 1606339 bytes, checksum: ad09dfd2eb11ded44e751e88caf91e5a (MD5) / A Doença de Chagas é considerada uma doença negligenciada, endêmica na América Latina. e com tratamento ainda ineficaz. Estima-se que existam atualmente entre 6 e 7 milhões de pessoas infectadas pelo Trypanosoma cruzi (agente causador da doença) em todo o mundo. Esforços têm sido feitos na busca da produção de medicamentos efetivos e seguros além da necessidade na produção de uma vacina, tendo em vista a dificuldade do diagnóstico. Durante a transmissão vetorial, mais comum em regiões endêmicas Triatomíneos liberam formas tripomastigotas na corrente sanguínea que logo após contato com vários tipos celulares, inicia um processo de interação e infecção celular. Essa fase inicial é fundamental para a continuidade do ciclo biológico do parasito e instalação da doença. Dada a importância dessa fase, e pouco conhecimento sobre a modulação da célula hospedeira, o presente estudo realizou uma análise da célula hospedeira após interação inicial, utilizando para isso uma abordagem proteômica. Para essa investigação foi realizada análise comparativa por LC-MS/MS do extrato proteico de células HeLa (não fagocíticas) controle com extrato proteico de células HeLa após uma hora em contato com formas tripomastigotas (forma infectiva). Nossos resultados mostraram alteração em proteínas já conhecidas como por exemplo, proteínas de ligação ao cálcio e ao citoesqueleto. Ao se observar de forma detalhada proteínas com diminuição na abundância, foram encontradas proteínas constituintes do fator de histocompatibilidade de classe 1 (MHC1), subunidades importantes na montagem e função catalítica do proteassoma. Foram encontradas proteínas até então não descritas na literatura como moduladas pelo T. cruzi. Uma delas foi o aumento da Rpn11, uma subunidade do proteassoma com função de desubiquitinase, e a diminuição da cullina associada a NEDD8, uma proteína envolvida na identificação e ubiquitinação de proteínas que devem ser degradas. O processo de interação do T. cruzi com células HeLa também propiciou a modulação de proteínas participantes de outros processos celulares, como metabolismo, ligação ao DNA e chaperonas. / Chagas disease is regarded as a neglected illness endemic from Latin Americ and, furthermore, available drugs have limited efficacy and high toxicity. It is estimated that 6 to 7 milion people worldwide are infected by Trypanosoma cruzi (the etiologic agent of the disease). Nonetheless, efforts toward more effective treatment have been made as well as a vaccine is being pursued. In the vectorial transmission of the parasite, the most common in endemic regions, triatominean bugs release trypomastigotes in the lood stream. The parasites through the contact with several host cell types initiate biochemical processes for cell interaction and infection. This early stage is Given its importance, and the limited information available regarding the modulation of the host cell, this study analyzed the T. cruzi infection effects in mammalian host cells at the early stages of the process through high-throughput proteomic approach. Therefore, a comparative quantitative proteome analysis by means of LCMS/ MS was carried out between Hela cells which were incubated or not with trypomastigote forms (the main infective life form) The resulting list of regulated proteins showed known proteins, e.g calcium and cytoskeleton binding proteins. Regarding proteins with decreased expression, there were Major Histocompatibility Complex I proteins and subunits of the proteasome machinery important to its assembly and catalytic functions. This also corroborates with recent studies demonstrating its relevance on escaping the immune system’s surveillance by jeopardizing the host cell antigen presentation. Also there were proteins related to the ubiquitination process. And among those with no expression modulation reported so far, here we observed an increase in Rpn11, a proteasome subunit with deubiquitinase function, and decrease in cullin associated to NEDD8, a protein involved recognition and ubiquitination of proteins to be degraded. The interaction process between T. cruzi and HeLa cells also caused the modulation of proteins involved in metabolism, DNA binding and chaperones. This work underlines the need for further studies on processes of ubiquitination , degradation and targeting of T. cruzi proteins to MHC1 by host cells , which may be used by the immune system for the elimination of the parasite.