Orientador: Luiz Francisco Prata / Banca: Ana Maria Centola Vidal Martins / Banca: Iucif Abrão Nascif Júnior / Resumo: Objetivou-se determinar os fatores epidemiológicos envolvidos com a ocorrência da cisticercose em propriedades fornecedoras de bovinos para um abatedouro-frigorífico exportador do Estado de São Paulo, Brasil, verificar o cumprimento quanto à adoção das Boas Práticas Agropecuárias (BPA) pelas propriedades aptas a exportação de carne bovina à União Europeia e realizar a estimativa de perda econômica aos pecuaristas devido às penalizações impostas pela indústria. Para isso, foram utilizados dados do Sistema de Inspeção Federal (SIF) de ocorrência da enfermidade, de acordo com origem da propriedade fornecedora durante o ano de 2012, avaliados estatisticamente pelos métodos do qui-quadrado ou teste exato de Fisher. Também foram elaborados mapas epidemiológicos da ocorrência da enfermidade em 106 propriedades através do Software Google Earth®. Ainda, através de um estudo do tipo caso-controle com aplicação de questionários em 48 propriedades, foram determinados os fatores de risco através da odds-ratio e seus limites, testados estatisticamente pelo teste exato de Fisher a 5% de significância. Determinou-se frequência de cisticercose em 2,26% entre o total de 190.903 bovinos abatidos, dos quais 34,54% dos cisticercos se apresentavam vivos. Foi estimada uma perda econômica de 709.533,00 reais aos pecuaristas. Observou-se diferença estatisticamente significativa entre os animais oriundos dos Estados de São Paulo (2,92%), Minas Gerais (1,81%), Goiás (0,71%) e Mato Grosso do Sul (1,11%). Pode-se determinar que os animais eram oriundos de 164 municípios e 556 propriedades, dos quais 81,71% (134/164) e 58,45% (325/556) respectivamente, registraram a enfermidade, demonstrando a ampla dispersão dessa zoonose. As propriedades habilitadas à exportação para a União Europeia apresentaram menor ocorrência com diferença estatística comparativamente àquelas não habilitadas ... / Abstract: This study aimed to determine the epidemiological factors involved with the cysticercosis occurrence in cattle farms suppliers to an exporter slaughterhouse, located in São Paulo State, Brazil, check the enforcement of Good Agricultural Practices (GAP) adoption by the farms authorized to export for European Union and estimate the economic losses by the farmers due industries penalization. Was utilized data of the disease occurrence, from Federal Inspection Service (SIF) by the origin of the supplier farm during 2012, tested statistically by Chi Square Method or Fisher's exact test. Was elaborated epidemiological maps of the disease occurrence in 106 farms by the Software Google Earth®. Also, by a case-control study with questionnaires interviews in 48 farms, was determined the epidemiological factors by the odds-ratio and corresponding limits, tested statistically by Fisher's exact test at 5% significance. Was determined the cysticercosis frequency of 2.26% among the 190.903 bovines slaughtered in the period, which 34.54% were live. The economical lost estimated was 709.533,00 reals to the farmers at the study period. Significant statistical difference was observed among the animals from São Paulo (2.92%), Minas Gerais (1.81%), Goiás (0.71%) e Mato Grosso do Sul (1.11%) States. Could be determined that the animals were from 164 county and 556 farms, which 81.71% (134/64) and 58.45% (325/556) respectively, registered the disease, demonstrating the cysticercosis wide dispersion. The European Union apt farms evidenced fewer occurrence with statistical difference comparatively to those inapt to this market, demonstrating that prophylactic measures are better implanted. Through epidemiological maps was observed a farm with high occurrence concentration next the Represa de Promissão (Rio Tietê), Represa de Água Vermelha (Rio Grande) e Represa de Itumbiara (Rio Paranaíba), regions known ... / Mestre

Orientador: Germano Francisco Biondi / Coorientador: Elenice Deffune / Banca: Cáris Maroni Nunes / Banca: Márjorie de Assis Golim / Banca: Marli Leite de Moraes / Banca: Milton Hissashi Yamamura / Resumo: A cisticercose bovina é uma zoonose cosmopolita e presente nos rebanhos bovinos de corte no Brasil, que ocorre em países em desenvolvimento, onde a infraestrutura sanitária inadequada e as más práticas na criação de gado permitem a contaminação de pastagem e água com fezes humanas contendo ovos do parasita. Os prejuízos financeiros decorrem da condenação ou tratamento (salga ou da congelação) das carcaças infectadas, dependendo da intensidade da infecção. O diagnóstico da cisticercose bovina é realizado durante o abate, pela inspeção das carcaças e realização de cortes em locais de predileção do parasita como a língua, masseter, coração e diafragma. Assim, a fim de promover o diagnóstico ante-mortem e permitir o tratamento adequado de animais infectados, muitos estudos foram realizados utilizando-se técnicas de detecção de anticorpos ou antígenos em amostras de soro bovino. O teste ELISA baseado em anticorpos monoclonais (MAbs) para a detecção de antígeno circulante (Ag-ELISA) tem sido estudado, mas apresenta baixa sensibilidade em animais com infecção leve, e permite a sua realização apenas em laboratórios bem equipados. O uso de biossensores em medicina tem crescido nos últimos anos, permitindo a detecção e quantificação de metabólitos, bem como o uso de diversos biopolímeros como matriz de imobilização como quitosana e fibroína da seda. Imunossensores são biossensores cuja resposta bioquímica relaciona-se à interação antígeno-anticorpo, que podem ser utilizados para detectar anticorpos ou antígenos, tendo sido utilizados no diagnóstico de enfermidades. Nesta pesquisa, desenvolveu-se o primeiro imunossensor para o diagnóstico da cisticercose bovina, com filmes produzidos camada por camada (LbL) contendo um MAb dirigido contra antígeno bruto de metacestódeos de T. saginata (TAEB) e fibroína de seda (SF), imobilizados, que mostrou-se promissor ... / Abstract: Bovine cysticercosis is a cosmopolitan zoonosis and very widespread in the Brazilian beef cattle. Cysticercosis usually occurs in developing countries, where poor sanitation and bad raising cattle practices allows the contamination of the pasture and water with human feces containing eggs. The financial losses are due to condemnation or treatment (salting or freezing) of infected carcasses, depending on the intensity of infection. Diagnosis of bovine cysticercosis is routinely done during slaughter by meat inspection of carcasses and incisions in predicted sites of muscles such as tongue, masseter, heart and diaphragm. Thus, in order to promote the ante-mortem diagnosis and allow appropriate treatment of infected animals, many studies have been performed using techniques to detect antibodies or antigens in bovine serum. ELISA using monoclonal antibodies (MAbs) for the detection of circulating antigen (Ag-ELISA) has been studied, but presents low sensitivity in animals with low parasite burden, and allows its realization only in well-equipped laboratories. The use of biosensors in medicine has grown in recent years, allowing detection and quantification of numerous metabolites, such as immobilization matrix having the most diverse biopolymers such as chitosan and silk fibroin. Immunosensors are biosensors which biochemical response is related to antigen-antibody interaction and can be used to detect antibodies or antigens, and has been tested for diseases diagnosis. In this research, we developed the first immunosensor for bovine cysticercosis diagnosis, produced with layer-by-layer (LbL) films containing a monoclonal antibody against crude Taenia saginata metacestode antigens (TAEB) and silk fibroin (SF) immobilized. Immunosensor showed to be a promising tool for further application in the ante-mortem bovine cysticercosis diagnosis / Doutor

Resumo: Taenia saginata representa uma ameaça à segurança alimentar e à saúde pública devido à infecção pela ingestão de carne mal cozida e contaminada. Esta zoonose está amplamente distribuída, afetando humanos, os hospedeiros definitivos, e bovinos, hospedeiros intermediários. Além disto, a cisticercose bovina é responsável por perdas econômicas significativas devido à condenação de carcaças infectadas. A estratégia fundamental para o controle do complexo teníase-cisticercose consiste em interromper o ciclo evolutivo do parasita, evitando assim a infecção nos animais e no homem. Assim, a principal medida praticada no Brasil tem sido a inspeção de carcaças durante o abate, a qual é também a forma mais comum de diagnóstico. A insuficiente informação molecular de T. saginata tem dificultado o avanço das pesquisas para o aprimoramento de testes diagnósticos, o desenvolvimento de vacinas e a identificação de novas drogas para tratamento. Com o intuito de adquirir informação sobre o estágio de desenvolvimento metacestóide do parasita, foi utilizada a tecnologia de RNAseq para a montagem do transcriptoma de metacestóide de T. saginata. Estes dados serão úteis para estudos futuros envolvendo triagem para diagnóstico e marcadores imunoprofiláticos para a cisticercose bovina / Abstract:Taenia saginata represents a threat to food security and public health in consequence of human infection by ingestion of contaminated undercooked meat. This zoonosis is worldwide distributed, affecting human, definitive host, and bovine, intermediate host. Besides, bovine cysticercosis is responsible for significant economic losses due to the condemnation of infected carcasses. The main strategy to control taeniasis-cysticercosis complex consists of interrupting the parasite's biological cycle, thus preventing human and animal infection. Therefore, in Brasil the main control measure has been the carcass inspection during the slaughter, which is also the most common diagnostic practice. Insufficient T. saginata molecular information makes difficult consistent advances to the improvement of diagnostic tests, vaccine development and the identification of new drugs for treatment. In order to gain insights about the parasite's metacestode developmental stage, RNAseq technology was used to assemble the whole transcriptome of a T. saginata metacestode. These data will also be useful for the next generation screening studies of diagnostic and immunoprophylatic markers for bovine cysticercosis / Orientador:Cáris Maroni Nunes / Banca:Adam Taiti Harth Utsunomiya / Banca:Flávia Lombardi Lopes / Banca:Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Daniel Guariz Pinheiro / Banca:Marcelo Vasconcelos Meireles / Doutor

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-06T11:51:20Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929936 bytes, checksum: a92c4c289b141c7d1bcc147b944ab7c6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T11:51:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 929936 bytes, checksum: a92c4c289b141c7d1bcc147b944ab7c6 (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A cisticercose bovina é uma enfermidade de distribuição cosmopolita e de caráter zoonótico, causada pela forma larval Taenia saginata. A prevalência dessa zoonose em estabelecimentos de abate é responsável por consideráveis perdas econômicas para o país devido à condenação e ao aumento do custo de processamento das carcaças submetidas a aproveitamento condicional de bovinos infectados. Apesar da importância da cisticercose bovina para a saúde pública, para a saúde animal e para economia, a realidade epidemiológica da ocorrência dessa zoonose no Brasil é pouco conhecida. Dessa forma, esta pesquisa teve por objetivo realizar um levantamento epidemiológico e avaliar os principais fatores de risco relacionados com a transmissão da cisticercose bovina em animais enviados para abate provenientes de propriedades localizadas na região do Triângulo Mineiro, com base no rastreamento dos casos de cisticercose bovina detectados em um estabelecimento de abate do município de Uberlândia-MG. Foi realizado um estudo de corte transversal em 87 propriedades. A partir da Guia de Trânsito Animal (GTA) foram obtidos os endereços das propriedades incluídas no estudo e realizadas as coletas de sangue de 1024 bovinos. O diagnóstico sorológico realizado por triagem pelo teste Elisa indireto e Immunoblot para confirmação. Foi aplicado também um questionário epidemiológico sobre as condições sanitárias das propriedades, em relação ao sistema de criação animal, como por exemplo, manejo, origem dos animais, atividade predominante, fonte de abastecimento de água, higiene pessoal, padrão de alimentação e moradia das propriedades, a fim de determinar os possíveis fatores de risco associados a transmissão T. saginata. A prevalência encontrada foi de 5,1% (IC 95%= 3,74-6,42). Os fatores de risco identificados na área de estudo foram a origem dos bovinos (RC= 4,9 IC 95%= 1,5 – 15,8), sistema de pastejo (RC= 6,4 IC 95%= 2,0-20,2) e destino do esgoto das propriedades (RC= 3,6 IC 95%= 2,3-5,6). A partir da análise espacial foi identificado um aglomerado na região de estudo, com risco de infecção 2,85 vezes maior nas propriedades localizados dentro desse aglomerado quando comparado com as propriedades localizadas fora dessa área. Esses resultados mostram que a região do Triângulo mineiro é endêmica para a doença e medidas preventivas devem ser aplicadas em relação ao sistema de manejo e a estrutura infra sanitária das propriedades. / Bovine cysticercosis is a zoonotic, cosmopolitan disease caused by the larval form of Taenia saginata. The prevalence of this zoonosis in slaughterhouses is responsible for considerable economic losses to the country due to the condemnation and increase of the cost of processing the carcasses subject to the conditional use of infected cattle. Despite the importance of bovine cysticercosis to public health, animal health and economics, the epidemiological reality of the occurrence of this zoonosis in Brazil is poorly understood. Thus, this research aimed to carry out an epidemiological survey and evaluate the main risk factors related to the transmission of bovine cysticercosis in animals sent to slaughter from farms located in the Triângulo Mineiro region, based on the tracing of cases of bovine cysticercosis detected in a slaughter establishment in the municipalitiy of Uberlândia-MG. Conducted a cross-sectional epidemiological study on 87 farms. From the Animal Transit Guide (GTA), obtained the addresses of the farms included in the study and blood samples collected from 1024 cattle. The serological diagnosis performed by screening by the indirect Elisa test and Immunoblot for confirmation. Was also applied an epidemiological questionnaire on the sanitary conditions of farms, in relation to the animal husbandry system, such as management, origin of animals, predominant activity, source of water supply, personal hygiene, and feeding pattern and housing of the farms, in order to determine the possible risk factors associated with the transmission of T. saginata. The prevalence was 5.1% (95% CI = 3.74-6.42). The risk factors identified in the study area were the cattle origin (OR= 4.9/ 95% CI = 1.5 – 15.8), grazing system (OR= 6.4/ 95% CI = 2.0-20.2) and the destination of the farms' sewage (OR= 3,6/ 95% CI = 2.3-5.6). From the spatial analysis, in the study region identified a cluster, with a risk of infection 2.85 times higher in farms located inside this cluster when compared to farms located elsewhere. These results show that the Triângulo Mineiro region is endemic to the disease and preventive measures should be applied in relation to the management system and the infra-sanitary structure of the farms.

Orientador: Germano Francisco Biondi / Resumo: A cisticercose bovina é resultante da ingestão de ovos de T. saginata proveniente de pastagens e águas contaminadas fornecidas aos animais. É causa de preocupações na área de saúde pública por ocasionar a teníase em humanos, mas causa sérios prejuízos na indústria agropecuária e aos pecuaristas, devido às condenações ou tratamentos de frio ou salga pelas quais as carcaças consideradas positivas são submetidas. O método de diagnóstico rotineiramente utilizado para a cisticercose bovina tem sido a inspeção post-mortem. Muitos pesquisadores têm desenvolvido métodos de diagnóstico antemortem, com especificidade e sensibilidade variadas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a aplicação da amplificação de DNA circulante de T. saginata, através da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), como ferramenta diagnóstica para cisticercose bovina. Para a realização da pesquisa foram utilizadas amostras de sangue de bovinos abatidos em frigoríficos sob S.I.F., segundo apresentarem ou não cisticercose. Inicialmente avaliaram-se cinco pares de oligonucleotídeos iniciadores através da determinação do limiar de detecção da PCR de cada um deles. Objetivou-se ainda estabelecer qual a fração do sangue experimentalmente contaminado resultaria em amplificação de fragmentos de DNA através da PCR, para posteriormente avaliar a aplicabilidade da PCR em amostras de sangue de bovinos naturalmente infectados com T. saginata. O melhor limiar de detecção foi observado com o uso do par de oligonucleotídeos iniciadores SCAR K, nas frações de sangue denominadas pellet e sobrenadante. As amostras de sangue de animais positivos para cisticercose na inspeção de rotina e submetidos a PCR não resultaram em amplificação do fragmento de DNA desejado, sugerindo que a baixa carga parasitária possa ter influenciado os resultados. / Abstract: Bovine cysticercosis is caused by the ingestion of T. saginata eggs from contaminated pastures and water provided to animals. It is a public health problem by causing the taeniasis in human beings, but it also causes serious damages in the agro-cattle industry and to the cattle raisers by de condemnation or treatment by coldness or salting of carcass detected as positive. Routinely bovine cysticercosis diagnosis has been the post-mortem inspection. Several researchers have developed ante-mortem diagnosis methods, with variable specificity and sensitivity. The present study aimed at evaluating the amplification of circulating DNA of T. saginata, by the Polymerase Chain Reaction (PCR), as a diagnostic tool to bovine cysticercosis. Blood samples from bovines slaughtered under Federal Meat Inspection abattoirs were taken according to the presence or absence of cyst forms. Initially, we evaluated five primers and established which blood fraction experimentally contaminated resulted in DNA fragment amplification by PCR. The best detection limit was observed with the use of the SCAR K primers, in the blood fractions denominated "pellet" and "supernatant". Blood samples of naturally infected animals considered positive in the routine inspection didn't result in the desired DNA fragment amplification by PCR. / Mestre

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:07:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-16T13:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Juliana Soaris de Souza - 2016.pdf: 2234438 bytes, checksum: 7ea39739a499e174ae4502af4bafbfaa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Abstract: Toxoplasma gondii is a pathogenic agente capable o causing both local and systemic disease in immunocompetent and immunocompromised individuals. It can be agressive inducing lesions in the central nervous system, viscera, eye globe and/or lymohatic ganglia. Neurocysticercosis is the most severe form of cysticercosis. It is the one of the main helminthiasis of the central nervous system leasing to varied symptoms. During toxoplasmosis infection the inflammatory response is typically pro-inflammatory. When there is co-infection between these two agents, this typical pro-inflammatory response may lead to the death of the parasites resulting in the release of antigens. Therefore an experimental model using T. gondii cysts and T. crassiceps antigens was developed. The aim of this study was to evaluate the influence of T. crassiceps cysticerci antigens in the modulation of the inflammatory response of the experimental neurotoxoplasmosis. BALB/c mice were inoculated with T. gondii cysts and/or T. crassiceps cysticerci antigens. The animals were euthanized 60 or 90 days after the inoculation. The histopathologic analysis and the cytokine dosage from spleen cell culture were performed. The animals from the neurotoxoplasmosis group at 90 DAI (NT90) presented greater intensity of the lesions such as vasculitis, meningitis and microgliosis alongside with a Th1 immune profile with high dosages of IFNγ. While in the neurocysticercosis group at 60 DAI (NCC60) the lesions were more discrete with high dosages of IL4 displaying a Th2 immune profile. In the co-infected group the parenchyma lesions were more discrete. Also in the co-infected group there were lower dosages of IFNγ and higher dosages of IL4 in comparison to the NT90 group. It is possible to conclude that the T. crassiceps cysticerci antigens decreased the intensity of the lesions caused by the T. gondii infection inducing a Th2 immune response. / Resumo: O Toxoplasma gondii é um agente patogênico que pode causar doença sistêmica e local em indivíduos imunocompetentes e imunossuprimidos, podendo se mostrar agressivo, causando lesões no sistema nervoso central, órgãos viscerais, olhos e/ou gânglios linfáticos. A Neurocisticercose é a forma mais grave de cisticercose, sendo uma das principais helmintoses do sistema nervoso central, e podendo causar sintomas variados. Na infecção pela toxoplasmose, a resposta imunológica é tipicamente pró-inflamatória. Durante a coinfecção, este tipo de resposta pode causar a morte do parasito, causando a liberação dos antígenos. Desta forma, tornou-se necessário o desenvolvimento de um modelo experimental utilizando o T. gondii e os antígenos de cisticerco de T. crassiceps. O objetivo deste trabalho foi avaliar influência dos antígenos do cisticerco de Taenia crassiceps na modulação da resposta inflamatória na neurotoxoplasmose experimental. Para isso camundongos BALB/c foram inoculados com cistos de T. gondii e/ou antígenos de cisticercos e eutanasiados aos 60 ou 90 dias após a inoculação. Foi realizada análise histopatológica dos encéfalos e dosagem de citocinas a partir de cultura de células do baço. Os animais do grupo neurotoxoplasmose aos 90DAI (NT90) apresentaram maior intensidade de lesões, como vasculite, meningite e microgliose e perfil imune do tipo Th1, com dosagens elevadas de IFNγ, enquanto que o grupo neurocisticercose aos 60DAI (NCC60), as lesões foram mais discretas e dosagens elevadas de IL4, revelando perfil imune do tipo Th2. No grupo de animais coinfectados as lesões no parênquima foram mais discretas. Além disso, o grupo co-inoculado NT e NCC (COINF) apresentou dosagens baixas de IFNγ e aumentadas de IL4 em relação ao grupo NT90. Conclui-se que a inoculação de antígenos de T. crassiceps amenizou as lesões causadas pelo T. gondii induzindo uma resposta imunológica do tipo Th2.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-03T18:19:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vânia Beatriz Lopes Moura - 2010.pdf: 929596 bytes, checksum: 432fcdfb3a382e721d28d0a4c6c4642d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-03T20:38:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vânia Beatriz Lopes Moura - 2010.pdf: 929596 bytes, checksum: 432fcdfb3a382e721d28d0a4c6c4642d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-03T20:38:21Z (GMT). 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The iNOS uses the same substrate to synthesize nitric oxide (NO), which is a highly microbicide compound responsible for the cysticerci control. To observe if there is an association between macrophages expressing arginase and an increase of the susceptibility to T. crassiceps, BALB/c mice were infected IP with 10 cysticerci and followed up by 84 days. It was measured the number and stages of the cysticerci, profile of systemic cytokines, profile of the macrophages in inflamed tissue and collagen deposition over the peritoneum. Besides, infected mice were treated with arginase inhibitor or L-arginine and followed up by 56 days. The parasitic load was observed, which increased significantly after the 30th day. At the end of experimental period number of cysticerci was 1022 (±230). The serum interferon- (IFN-) of infected animals was higher than controls at the 28th day after infection and IL-4 at the 42th day. Macrophages were the major cells observed at the infected site, and the polimorphonuclear cells (PMN) picked at the 14th day after the infection, returning to the normal values at the 42th day. Cells carrying the marker CD301, present on AAMø, and high arginase activity increased in the early phase after infection. The presence of collagen in the peritoneum of infected animals decreased until 14th day after the infection, however, in the latest phases the collagen increases and become superior to the control. The treatment with the arginase inhibitor or L-arginine did not alter the profile of the infection; however the arginase inhibitor inhibited the deposition of collagen in the peritoneum. These results suggest that the enzyme arginase does not interfere with the control of the cysticerci during experimental infection with T. crassiceps cysticerci, but it is important for the formation of fibrosis in cysticercosis. / A infecção murina por cisticercos de Taenia crassiceps vem sendo utilizada como um modelo experimental para estudo da cisticercose humana e animal. Nesta infecção encontram-se parasitos presentes em um infiltrado inflamatório rico em macrófagos. Estes macrófagos podem ser divididos em alternativamente ativados (AAMØ), que expressam uma grande quantidade da enzima arginase ou classicamente ativados (CMØ,) que expressam uma grande quantidade da enzima óxido nítrico sintase induzida (iNOS). A arginase utiliza o substrato L-arginina para produção de ornitina, favorecendo a proliferação celular e a síntese de colágeno. A iNOS utiliza o mesmo substrato para síntese de óxido nítrico (NO) que é um gás microbicida responsável pelo controle dos cisticercos. Para observar se há uma associação entre a presença de macrófagos expressando arginase com aumento da susceptibilidade à infecção por T. crassiceps, camundongos BALB/c foram infectados IP com 10 cisticercos e acompanhados diariamente por 84 dias. Foi avaliado o número dos cisticercos, o perfil sistêmico de citocinas, o perfil dos macrófagos do infiltrado e a deposição de colágeno no peritônio ao longo da infecção. Adicionalmente, os camundongos infectados foram tratados com inibidor de arginase ou com L-arginina. A carga parasitária aumentou significativamente após o 30º dia, atingindo 1022 (±230) cisticercos no final do período experimental. O interferon γ (IFNγ) sérico dos animais infectados foi superior ao dos controles no 28o dia após a infecção e a IL-4 no 42o dia. Os macrófagos foram predominantes durante todo período experimental e os polimorfonucleares (PMN) apresentaram um pico no 14o dia após a infecção, retornando aos valores normais no 42o dia. Células portando o marcador CD301 presente em AAMø e com alta atividade da enzima arginase aumentaram nas duas primeiras semanas após a infecção mantendo-se alta por todo período experimental. A presença de colágeno no peritônio dos animais infectados diminuiu até 14o dia após a infecção, porém, nas fases mais tardias o colágeno aumentou tornando-se superior ao dos controles. O tratamento com o inibidor da arginase ou L-arginina não alterou o perfil da infecção, porém, o inibidor de arginase inibiu a deposição de colágeno no peritônio. Estes resultados sugerem que a enzima arginase não interfere no controle dos cisticercos durante a infecção experimental por cisticercos de T. crassiceps, mas ela é importante na formação de fibrose característica da cisticercose.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Echinococcosis is a zoonotic infection caused by a metacestóide belonging to the family Taeniidae genus Echinococcus. The larval stage (hydatid cyst) of the parasite causes serious public health problems, and achieves several species of animals, including livestock production, leading to economic losses to the meat industry. Echinococcosis is considered endemic in many countries and in South America the most affected countries are Argentina, Uruguay, Peru, Bolivia, Chile and southern part of Brazil. In the State of Rio Grande do Sul (RS), especially border regions with Argentina and Uruguay, there is a higher prevalence of cases affecting mainly sheep and cattle, consisting Echinococcus granulosus the most prevalent specie. The parasite control should be based on adequate knowledge of the transmission cycle and taxonomy of the parasite. It is essential to predictive epidemiological surveillance, in cases of disease, the determination of appropriate treatment actions. The identification of species and strains within the genus, as well as recognition of the geographical area infested by the parasite is essential for the establishment of programs to control equinococosis. Molecular tools are used in the identification and characterization of this parasite due to be quick, efficient and safe techniques, favoring an accurate diagnosis of the disease and assisting in the development of control programs, as well as in the prevention of cystic echinococcosis. Given the importance of epidemiological data of cystic echinococcosis in the state of RS, this study aimed to perform the identification and molecular characterization of cysts in swine viscera, in order to identify sources of cystic echinococcosis in rural properties belonging to the central / north areas of Rio Grande do Sul, as well as characterize the species and strains present in the hydatid cysts evaluated. For that, the present work analyzed viscera of swines from a slaughterhouse located in the central/north region of RS. A total of 3,101,992 swines were slaughtered from January 2008 to January 2012 in its facilities. Of these, 58 animals presented cysts, which had morphology compatible with hydatid cyst. Molecular and macroscopic analyses of the cysts were carried out. To perform the PCR (polymerase chain reaction), a gene fragment of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COX-I) was used. Macroscopic analysis showed cysts of varying sizes and shapes. Molecular characterization showed up: Echinococcus spp. (10.3%), Taenia hydatigena (56.9%) and inconclusive (32.8%). For molecular analysis, the neighbor-joining method was used, which identified two distinct groups characterized within species Echinococcus granulosus sensu lato. E. granulosus sensu stricto G1 strain was identified in 2 samples and E. canadensis strain G7 in 3 samples. With this results stands out the epidemiological role of swines, acting as an intermediate host of Echinococcus spp. and their potential for transmission of strains to humans in southern Brazil. Thus, it is necessary a constantly vigilance and an accurate identification of cysts, avoiding then, unreliable results, and allowing to follow up the spread of cystic echinococcosis in the State of RS. / Equinococose é uma infecção zoonótica causada por um metacestóide pertencente à família Taeniidae e gênero Echinococcus. O estágio larvario (cisto hidático) do parasito causa sérios problemas de saúde pública, além de atingir várias espécies de animais, acarretando prejuísos econômicos à indústria de carnes. A equinococose é considerada endêmica em alguns países, sendo que na América do Sul os países mais acometidos são Argentina, Uruguai, Peru, Bolívia, Chile e parte sul do Brasil. No Rio Grande do Sul (RS), principalmente em regiões de fronteira com Argentina e Uruguai, há uma ocorrencia maior de casos, acometendo preferencialmente ovinos e bovinos, sendo que a espécie prevalênte no estado é o Echinococcus granulosus. O controle do parasito deve ser baseado no adequado conhecimento do ciclo de transmissão e de sua taxonomia, sendo essencial à vigilância epidemiológica preditiva. A identificação da espécies e cepas dentro do gênero Echinococcus, assim como o reconhecimento de áreas geográficas contaminadas pelo parasito é essencial para o estabelecimento de programas de controle da equinococose. As ferramentas moleculares são utilizadas na identificação e caracterização deste parasito com rapidez, eficácia e segurança, favorecendo um diagnóstico preciso desta enfermidade. Diante da importância de dados epidemiológicos acerca da equinococose cística no estado de RS, este estudo teve como objetivo, realizar a identificação e a caracterização molecular de cistos em vísceras suínas, a fim de localizar possíveis focos da equinococose cística em propriedades rurais na região centro/norte do Rio Grande do Sul, bem como caracterizar a espécie e cepa presente nos cistos hidáticos. Neste trabalho foram analisadas vísceras suínas oriundas de frigoríficos da região centro/norte do RS. Um total de 3.101.992 suínos foram abatidos na região estudada no período de janeiro de 2008 a 2012, destes, 58 animais continham cistos, apresentando morfologia compatível com cisto hidático. Foram realizadas análises macroscópicas e moleculares em todos os cistos encontrados. Para a realização da PCR (reação em cadeia da polimerase) utilizou-se um fragmento do gene mitocondrial citocromo c oxidase subunidade I (cox-I). Análise macroscópica constatou cistos de formas e tamanhos variados. Na caracterização molecular, evidenciou-se Echinococcus spp. (10,3%), Taenia hydatigena (56,9%) e inconclusivos (32,8%). Para análise molecular empregou-se o método de Neighbor-Joining, onde identificou-se dois grupos distintos caracterizados dentro da espécie Echinococcus granulosus sensu lato. O E. granulosus stricto sensu cepa G1 foi identificado em 2 amostras e E. canadensis cepa G7 em 3 amostras. Os resultados evidenciam o papel epidemiológico dos suínos, atuando como hospedeiro intermediário de Echinococcus granulosus sensu lato e seu potencial na transmissão de cepas infectantes para humanos no sul do Brasil. Desta forma é necessário uma monitorização constante e rigorosa identificação de cistos, evitando resultados não fidedignos, a fim de monitorar a propagação da equinococose cística no estado do RS.

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The objective of this work was to describe the general pathological processes and the profile of systemic and in situ cytokines in C57BL / 6 mice after intracranial inoculation of viable cysticerci of T. crassiceps. Three experimental groups were used: healthy control, surgical control and infected group. After 90 days of infection, mice were euthanized and histopathological analysis of the brain, spleen cell culture, homogenate production and ELISA for IL-4, IL10 and IFN-γ were performed. The histopathological analysis of the encephalus allowed to verify the presence of cysticercus in the lateral ventricles or in the extraparenchymal region, presence of mononuclear inflammatory infiltrate (MN) around the parasite, microgliosis and meningitis. The analysis of the systemic and in situ immune profiles of the infected mice showed a predominance of Th2-type response, with high IL-4 concentration, low IFN-γ and IL-10 levels modulating the two responses, but mainly Th1. The in situ cytokine dosage was similar between the experimental groups, which leads us to conclude that the cysticercus exerts immunomodulation for its survival, in addition to which it also benefits from the cerebral immunoprivilege. In conclusion, correlating the immune and histological aspects described after the analysis, we can suggest that T. crassiceps cysticercosis infection in C57BL / 6 mice triggers an inflammatory response, a predominance of Th2 type profile with MN inflammatory infiltrate presence, Meningitis and microgliosis. / A neurocisticercose (NCC) é uma das doenças negligenciadas pela Organização Mundial de Saúde (OMS), e a infecção parasitária que mais acomete o Sistema Nervoso Central (SNC) em todo o mundo. Dessa forma, faz-se necessário aprofundar os conhecimentos quanto a sua imunopatogênese e fisiopatologia com o intuito de elucidar mecanismos pelos quais a NCC provoca lesão tecidual nos pacientes infectados. Com o advento desta necessidade a busca por formas de facilitar o estudo experimental desta doença surgiram, e hoje, a utilização da espécie de cisticercos de Taenia crassiceps está bem difundida no meio científico. O objetivo deste trabalho foi descrever os processos patológicos gerais e o perfil de citocinas sistêmicas e in situ em camundongos C57BL/6, após inoculação intracraniana de cisticercos viáveis de T. crassiceps. Para isso foram utilizados três grupos experimentais: controle saudável, controle cirúrgico e grupo infectado. Após 90 dias de infecção foi realizada eutanásia dos camundongos e posteriormente foi realizada análise histopatológica dos encéfalos, cultura de células do baço, produção de homogenato e ELISA para dosagem de IL-4, IL10 e IFN-γ. A análise histopatológica dos encéfalos permitiu comprovar a presença do cisticerco, nos ventrículos laterais ou na região extraparenquimal, presença de infiltrado inflamatório mononuclear (MN) ao redor do parasito, microgliose e meningite discretas. As análises dos perfis imunes sistêmico e in situ dos camundongos infectados não apresentou diferenças estatisticamente significativas entre os grupos analisados, o que nos fazer deduzir que o cisticerco exerce imunomodulação buscando sua sobrevivência, além do que se beneficia também do imunoprivilégio cerebral. Em conclusão, correlacionando os aspectos imunes e histológicos descritos após as análises realizadas, podemos sugerir que a infecção por cisticercos de T. crassiceps em camundongos C57BL/6, desencadeia resposta inflamatória com a presença infiltrado inflamatório MN, meningite e microgliose.

Neurocisticercose (NC) é a doença parasitária mais comum do SNC, representando grave problema de saúde pública em nosso país. O diagnóstico da NC é baseado em dados clínicos e epidemiológicos, reações sorológicas no soro e LCR, além de exames de neuroimagem. A detecção de antígenos de Taenia através de teste de ELISA, mediante a utilização de anticorpos altamente purificados, constitui metodologia recente capaz de informar sobre a vigência de atividade clínica da doença. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre a dosagem de antígenos de Taenia mo LCR com as imagens obtidas através da RM, em pacientes com o diagnóstico definido de NC segundo os critérios diagnósticos atuais. Sessenta e três pacientes foram submetidos a exame detalhado do LCR, além de pesquisa de antígeno de Taenia através de teste de ELISA, utilizando anticorpos de soro de coelhos imunizados com líquido vesicular de Taenia crassiceps. Uma amostra de sangue foi colhida simultaneamente à coleta do LCR, e um exame de RM encefálica foi realizado em todos os pacientes. Observamos relação significativa entre a detecção de antígenos de Taenia e o número total de lesões e do número de cistos íntegros detectados pela RM. Quando comparados dois ou mais cistos em degeneração com apenas um cisto, observamos detecção significativamente mais alta no primeiro grupo. Encontramos também detecção de antígenos significativamente mais alta quando as lesões se localizavam na profundidade dos hemisférios cererbrais, mas não na presença de cistos calcificados. Os resultados demonstram que a detecção de antígenos de Taenia se mostra congruente com os achados de neuroimagem. Algumas outras variáveis estudadas no LCR, como número de células, teor de globulinas gama e teste de ELISA, também se mostraram concordantes, demonstrando que a resposta inflamatória na NC mobiliza tanto a imunidade celular quanto a imunidade humoral. / Neurocysticercosis (NC) is the most common parasitic infection of the nervous system, remaining a serious public health in our country. NC diagnosis is supported by clinical and epidemiological data, specific serological reactions in the blood and CSF, and neuroimaging findings. Detection of anti-Taenia antigens using ELISA techniques is a recent methodology that provides information about clinical activity of the disease. The objective of the study was to determine relationship between Taenia antigen detection in the CSF and MRI in patients with definite diagnosis of NC according to current diagnostic criteria. Sixty-three patients were submitted to a thorough CSF examination and Taenia antigen research. Antigens were detected in CSF samples by ELISA assay obtained from rabbit sera antibodies immunized with Taenia crassiceps cysticerci vesicular fluid. A blood sample was simultaneously collected and a MRI was performed in every patient. We observed a significant relationship between Taenia antigen detection and the total number of lesions and intact cysts detected by MRI. When comparing two or more degenerating cysts with only one we observed a significant higher antigen detection in the first group. We also found a significant higher antigen detection when cysts were deeply located in the cerebral hemispheres, but not in the presence of calcified cysts. Results demonstrate that Taenia antigen detection is congruent with neuroimaging findings. Some CSF characteristics, like number of cells, gamma globulin concentration and ELISA assay were also concordant with Taenia antigen detection, indicating that inflammatory reaction in NC comprise cellular and humoral immunological factors.