Embora seja na obesidade onde se observa hipertrofia e hiperplasia dos adipócitos e aumento da síntese e liberação de adipocinas, condição associada com resistência à insulina e disfunção endotelial, é de suma importância entender os efeitos biológicos de adipocinas, mais especificamente da adipocina chemerin, em condições não patológicas. Os mecanismos pelos quais as citocinas liberadas pelo tecido adiposo podem interferir na função vascular ainda não estão totalmente esclarecidos. Além disso, praticamente não se conhecem os efeitos da citocina/adipocina chemerin sobre a função vascular. Levando-se em consideração que o receptor para chemerin está presente no músculo liso vascular e no endotélio, este trabalho avaliou a atividade biológica e celular desta adipocina sobre a vasculatura de animais não obesos. Investigou-se os efeitos produzidos por esta citocina na reatividade vascular, bem como os mecanismos pelos quais ela modifica a função vascular em animais não obesos. A hipótese deste trabalho é que chemerin aumenta a reatividade vascular a estímulos constritores de endotelina-1 (ET-1) e fenilefrina (PhE) e diminui a vasodilatação induzida pela acetilcolina (ACh) e nitroprussitao de sódio (NPS). Nossos objetivos específicos incluíram determinar: 1) se chemerin promove alterações na reatividade vascular; 2) se as alterações de reatividade vascular promovidas por chemerin são mediadas por modificações da função das células endoteliais ou células de músculo liso vascular; 3) quais vias de sinalização (foco na via das MAPKs) estão sendo modificadas por chemerin e como elas contribuem para as alterações de reatividade vascular produzidas por esta citocina. Nosso estudo demonstrou que a adipocina chemerin possui atividade biológica e celular em aortas de ratos não obesos. Chemerin aumentou respostas vasculares a estímulos contráteis (ET-1 e PhE), atuando tanto no endotélio quanto diretamente em células do músculo liso vascular. O aumento da resposta a estímulos contráteis à ET-1 e PhE foi mediado pela via MEK-ERK1/2, COX-1 e COX-2 e aumento da expressão dos receptores para ET-1, ETA e ETB. Além disso, esta adipocina diminuiu a vasodilatação induzida pela ACh, por meio do desacoplamento da eNOS e aparente envolvimento de estresse oxidativo, e pelo NPS, através de ação sobre a guanilato ciclase. Nossos estudos poderão contribuir para um melhor entendimento sobre o papel dos fatores liberados pelo tecido adiposo visceral sobre a função vascular e, consequentemente, sobre as alterações vasculares presentes na obesidade e patologias associadas. / Although hypertrophy and hyperplasia of adipocytes as well as increased synthesis and release of adipokines are commonly observed in obesity, a condition associated with insulin resistance and endothelial dysfunction, it is extremely important to understand the biological effects of adipokines, or more specifically of the adipokine chemerin, in non-pathological conditions,. The mechanisms by which cytokines released by the adipose tissue may interfere with vascular function are not yet fully understood. Furthermore, the effects of the cytokine/adipokine chemerin on vascular function are not known. Considering that the chemerin receptor is expressed by vascular smooth muscle and endothelial cells, this study investigated the effects produced by this cytokine in vascular reactivity, as well as the mechanisms by which it modifies vascular function in non-obese animals. Our working hypothesis is that chemerin enhances vascular reactivity to constrictor stimuli, such as endothelin-1(ET-1) and phenylephrine (Phe), and decreases the vasodilation induced by acetylcholine (ACh) and sodium nitroprussiate (SNP). Our specific aims were to determine: 1) whether chemerin induces changes in vascular reactivity, 2) if the alterations of vascular reactivity induced by chemerin are mediated by changes in the function of endothelial cells or vascular smooth muscle cells, 3) which signaling pathways (focus on the MAPKs pathway) are being modified by chemerin and how they contribute to changes in vascular reactivity produced by this cytokine. Our study showed that the adipokine chemerin has biological and cellular activity in aortas from non-obese rats. Chemerin increased vascular responses to contractile stimuli (ET-1 and PhE), producing effects both in the endothelial and vascular smooth muscle cells. The increased contractile responses to ET-1 and PhE were mediated via activation of MEK-ERK1/2, COX-1 and COX-2 and increased expression of the ETA and ETB receptors. Furthermore, this adipokine reduced the vasodilation induced by ACh via eNOS uncoupling and oxidative stress, and by SNP, via effects in the enzyme guanylate cyclase. Our studies may contribute to a better understanding of the role of factors released by the visceral adipose tissue on vascular function and, consequently, on the vascular lesions in obesity and obesity-associated diseases.

O exercício físico é intervenção de primeira linha e parece melhorar os sintomas da síndrome dos ovários policísticos (SOP). Porém, os mecanismos dessas alterações ainda são pouco entendidos. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos do exercício voluntário sobre os aspectos metabólicos e reprodutivos de modelos murinos de SOP induzida por dihidrotestosterona (DHT) ou letrozol (LET). Péletes de DHT ou LET foram utilizados para a indução de SOP experimental em camundongas pré-puberes. Os camundongos controles receberam péletes sem substância ativa. Cinco semanas após a exposição aos compostos teve início o exercício voluntário em rodas de corrida. Foram avaliados peso, composição corporal, tolerância à insulina e à glicose e o ciclo estral. Os grupos experimentais foram: controle (n=9), DHT (n=10), LET (n=9), DHT+exercício (EX) (n=9) e LET+EX (n=10). Após 4-5 semanas de exercício, os animais foram eutanasiados e os tecidos adiposos inguinal e mesentérico foram utilizados para análises morfológicas e moleculares. O grupo DHT apresentou aumento do peso corporal, aumento da proporção de grandes adipócitos mesentéricos e ciclo estral anormal. O grupo LET apresentou aumento do peso corporal e massa gorda, diminuição da sensibilidade à insulina, aumento da população de adipócitos pequenos, aumento da expressão de genes relacionados à lipólise na gordura mesentérica e ciclo estral anormal. O exercício reduziu a massa gorda e a expressão de genes da via NOTCH no tecido adiposo inguinal e mesentérico, e restaurou a morfologia alterada dos adipócitos mesentéricos, e a expressão de genes da via do NOTCH foi negativamente correlacionada com a expressão de genes da via de browning (transformação da gordura branca em gordura de fenótipo marrom) nos grupos DHT+EX e LET+EX. Em conclusão, o exercício restaurou a morfologia dos adipócitos mesentéricos em modelos animais de SOP induzida por DHT e LET, melhorou a sensibilidade à insulina, aumentou a expressão mesentérica de genes relacionados à lipólise e melhorou o ciclo estral em modelo animal de SOP induzida por LET. Esses benefícios podem ser atribuídos, pelo menos em parte, pela inibição de genes da via do NOTCH e pela modulação das vias de browning e lipólise no tecido adiposo / Exercise is the first line treatment and it seems to improve the symptoms of polycystic ovary syndrome (PCOS), but the mechanisms of these alterations are still poorly understood. The objective of this study was to evaluate the effects of voluntary exercise on metabolic and reproductive aspects of PCOS mouse models induced by dihydrotestosterone (DHT) or letrozole (LET). DHT or LET pellets were used for the induction of experimental PCOS in prepubertal mice. Control mice received placebo pellets. Five weeks after exposure to the substances, voluntary exercise on running wheels began. Body weight, body composition, insulin and glucose tolerance, and estrous cycle were evaluated. The experimental groups were control (n = 9), DHT (n = 10), LET (n = 9), DHT+exercise (EX) (n = 9) and LET+EX (n = 10). After 4-5 weeks of exercise, the animals were euthanized and the inguinal and mesenteric fat depots were collected for morphological and molecular analyzes. The DHT group showed increased body weight, increased proportion of large mesenteric adipocytes and abnormal estrous cycle. The LET group presented increased body weight and fat mass, decreased insulin sensitivity, increased population of small adipocytes, increased expression of genes related to lipolysis in mesenteric fat and abnormal estrous cycle. Exercise reduced fat mass and NOTCH pathway gene expression in inguinal and mesenteric adipose tissue, and restored the altered morphology of mesenteric adipocytes, and NOTCH pathway gene expression was negatively correlated with gene expression of the browning (transformation from white fat to brown-like fat) markers in both DHT+EX and LET+EX groups. In conclusion, the exercise restored the mesenteric adipocyte morphology in the DHT- and LET-induced PCOS mouse models, and the insulin sensitivity, the mesenteric expression of genes related to lipolysis, and improved the estrous cycle in the LET-induced PCOS mouse model. These benefits may be attributed, at least in part, to the inhibition of NOTCH pathway genes and the modulation of browning and lipolysis pathways in the adipose tissue

A caracterização fenotípica e o isolamento de células-tronco hematopoiéticas (CTH) podem fornecer informações relevantes quanto ao desenvolvimento biológico do sistema hematopoiético. A habilidade em detectar e purificar essas células implica no desenvolvimento de condições para manutenção e expansão dessas células em culturas in vitro. Na medicina veterinária, a purificação de células-tronco hematopoiéticas caninas (CTHc) vem de encontro com interesses em estabelecer métodos para o desenvolvimento de terapias celulares, principalmente em doenças que levam à aplasia medular ou anemia aplástica nesta espécie animal. Neste cenário, a escassez de informação acerca da caracterização fenotípica bem como sobre a capacidade de proliferação e pluripotência celular de CTHc precisa ser superada. O presente projeto visou o isolamento, a caracterização e a expansão, por meio da análise imunofenotípica e de ensaios CFU de células-tronco/progenitoras hematopoiéticas provenientes da fração estromal vascular (FEV) do tecido adiposo de cães. Os resultados demonstraram que o painel de imunofenotipagem CD45-/CD117+/CD34+constitui uma melhor estratégia de isolamento destas células em comparação ao painel CD45-/CD38-/low/CD34+. Além disso, a detecção da atividade da enzima aldeído desidrogenase (ALDH) também pode representar uma grande aliada no enriquecimento desta fração celular. Por meio das técnicas empregadas no presente projeto foi possível verificar que a freqüência de CTH é baixa em tecido adiposo canino. / Phenotypic characterization and isolation of hematopoietic stem cells (HSC) provide relevant information to allow us to elucidate the biological development of the hematopoietic system. The ability to detect and purify these cells involves the development of conditions for maintenance and expansion of these cells in in vitro cultures. In veterinary medicine, purification of canine hematopoietic stem cells (CTHc) is of interesting to provide methods for the development of cell-based therapies, particularly in diseases causing bone marrow aplasia or aplastic anemia in this species. In this scenario, the lack of information about the phenotypic characterization as well as on the ability of cell proliferation and pluripotency of CTHc needs to be overcome. The present study aimed at the isolation, characterization, and expansion, by means of immunophenotyping and CFU assays of stem cells/ progenitor hematopoietic from stromal vascular fraction (SVF) from adipose tissue of dogs. The results showed that immunophenotyping panel CD45-/CD117+/CD34+ is a better strategy for isolation of these cells compared to CD45-/CD38&#X2d/low/CD34+. Furthermore, the detection of the enzyme aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity may also represent a great enrichment coupled to this cell fraction. By the techniques employed in this project we found that the frequency of CTH is low in canine adipose tissue.

A obesidade é um sério problema de saúde pública. Este estudo teve como objetivo avaliar o crescimento de camundongos fêmeas Swiss, oriundas do biotério do Departamento de Patologia da FMVZ-USP, que se tornam espontaneamente obesas, tentando identificar em que período se iniciam estas características de obesidade. Para isso, foram realizados dois experimentos: Exp. 1 - as fêmeas foram acompanhadas do dia pós-natal 303 (DPN 303) até o DPN 491; Exp. 2 - as fêmeas foram acompanhadas do DPN 1 até o DPN 240. No Exp. 1, os animais foram divididos em dois grupos: obesas (OB) e não obesas (NOB), todas receberam dieta padrão. No Exp. 2, ao completarem 21 dias de vida, as fêmeas foram divididas em 4 grupos: dieta padrão (DP), grupos DP-OB e DP-NOB e dieta hiperlipídica (DHF), grupos DHF-OB e DHF-NOB; receberam DHF somente durante a peripuberdade (DPN 21-DPN 60). Em ambos os experimentos foram realizados acompanhamento de peso corporal, acompanhamento de ingestão alimentar, medição de comprimento corporal e medição de circunferência abdominal. No DPN 470, foi realizado o teste de tolerância à insulina (TTI) e no DPN 472 o teste de tolerância oral à glicose (TTOG) nas fêmeas do Exp. 1 e da mesma forma nos DPN 230 e 232 nas fêmeas do Exp. 2. Foi realizado teste de suspensão pela cauda (TSC) nos animais do Exp. 2. Ao final dos experimentos foram realizadas dosagens séricas de triglicérides, colesterol total, AST, leptina e insulina, além das pesagens dos órgãos: gorduras gonadal e retroperitoneal, fígado, rim com adrenal e útero com ovários. Os resultados obtidos em cada experimento foram avaliados por meio de ANOVA de duas vias seguida do teste de Bonferroni e t Student, p<0,05. Em ambos os experimentos os animais obesos apresentaram maior comprimento corporal e circunferência abdominal, além de pesagem elevada dos órgãos fígado, rim e gorduras. As dosagens de leptina foram significantes para todos os animais obesos e as dosagens de triglicérides foram significantes nos grupos OB e DP-OB. No Exp. 1, houve diferença significante na resposta à insulina entre os grupos OB e NOB (TTI) e as fêmeas OB tiveram maior pico de glicemia aos 20 minutos de teste e permaneceram por mais tempo com os níveis glicêmicos elevados (TTOG); os animais do grupo OB tiveram aumento significante do ganho de peso corporal ao longo do tempo, atingindo 70g; as dosagens de AST foram significantes nos animais OB. No Exp. 2, os animais do grupo DP-OB tiveram aumento significante do ganho de peso corporal ao longo do tempo, mostrando ganho de peso elevado após o DPN 81; as dosagens de insulina foram significantes no grupo DP-OB em relação ao grupo DP-NOB; TSC não apresentou resultados significantes. Portanto, as alterações de ganho de peso elevado, maior crescimento corporal e maior circunferência abdominal podem ser observadas nas fêmeas DP-OB já no início da vida adulta. Entretanto, as alterações metabólicas aparecem somente em idade avançada (Exp. 1). Assim, mais estudos são necessários a fim de que se possa elucidar a origem das alterações fenotípicas encontradas / Obesity is a serious public health problem. This study aimed to evaluate Swiss female mice growth that were born in the Department of Pathology (FMVZ-USP) and became obesa spontaneously, trying to identify in which period these obesity signs start. Therefore, two experiments were conducted: Exp. 1 females were observed from post-natal day 303 (PND 303) to PND 491; Exp. 2 females were observed from PND 1 to PND 240. In the Exp. 1, animals were assigned to either one of two groups: obese (OB) and non-obese (NOB), where both groups received standard chow. In the Exp. 2, when females were 21 days old, they were assigned to either: standard chow (DP), DP-OB or DP-NOB groups, and high fat diet (DHF), DHF-OB and DHF-NOB groups; these animals received DHF only in the peripuberty period (PND 21- PND 60). Body weight gain, food intake, body length and abdominal circunference were measured in both experiments. In PND 470, insulin tolerance test (ITT) and PND 472 the oral glucose tolerance test (OGTT) were performed in the females from Exp. 1, and in PND 230 and PND 232, respectively, in the animals from Exp. 2. The tail suspension test (TST) was performed in the animals from Exp. 2. In the end of experiments, blood levels of triglycerides, total colesterol, AST, leptin and insulin were evaluated and the following organs were weighted: gonadal fat pad, retroperitoneal fat pad, liver, kidney including adrenals and uterus with ovaries. Results were analysed by two-way ANOVA with Bonferroni post-test and t Student test, p<0.05. Obese animals in both experiments showed bigger body length and abdominal circunference, including heavier organs such as liver, kidney and fat pads. Leptin levels were significant higher in all obese animals and triglycerides levels were significant in OB and DP-OB groups. In the Exp. 1, there was a significant diference in the response to insulin injection in between groups OB and NOB (ITT) and OB females reached higher glicemic levels 20 min after the glucose administration, keeping these levels high longer (OGTT); OB females showed a significant increase in the body weight gain over time, reaching 70g; AST levels were significant in OB animals. In the Exp. 2, animals from DP-OB group had significant higher body weight significant in the DP-OB group comparing to DP-NOB; there was no significant results in the TST. Therefore, heavier body weights, bigger body length and bigger abdominal circunference were observed in DP-OB females in the beginning of adult life. However, metabolic alterations can be detected only in late adult life (Exp. 1). Thus, more studies need to be done aiming to clarify the origin of the phenotypic alterations found here

A depleção de tecido adiposo é um marcador da caquexia. Neste contexto, o aumento na lipólise decorrente do aumento na expressão da lipase hormônio-sensível (LHS) parece ser o fator-chave. Entretanto, a contribuição das novas proteínas relacionadas à lipólise [adipose triglyceride lipase (ATGL), comparative gene identification 58 (CGI-58) e perilipina] ainda é controversa. Caracterizamos a expressão destas proteínas e de adipocinas na caquexia. Pacientes com câncer caquéticos foram investigados. Um modelo experimental foi também estudado utilizando animais portadores de tumor sacrificados no 7º (TB7) e no 14º dia (TB14) após a inoculação tumoral e controles. Foram analisados no tecido adiposo os aspectos morfológicos, morfométricos e moleculares. Verificamos nos pacientes um aumento na expressão de LHS e ATGL, concomitantemente à redução da perilipina. Nos animais TB7 verificou-se um desequilíbrio na secreção de fatores anti e pró-inflamatórios e no grupo TB14 houve redução na expressão das proteínas analisadas sugerindo comprometimento da função celular. / Loss of fat mass is a hallmark of cachexia. It seems that an increase in lipolysis due to increased expression of hormone-sensitive lipase (HSL) is the key factor behind this effect. However, the contribution of novel proteins related to lipolysis [adipose triglyceride lipase (ATGL), comparative gene identification - 58 (CGI-58) and perilipin 1] is still controversial. We characterized the expression of those proteins and adipokines in cachexia. Subcutaneous adipose tissue from cachetic cancer patients and epidydimal pad from tumour-bearing rats was analysed. Morphological, morphometric and molecular aspects were examined. We found an increased HSL and ATGL expression and reduction in perilipin 1 content in cachectic patients. In rats, at the intermediate stage of the syndrome, there was an imbalance in the secretion of pro and anti-inflammatory factors. In terminal cachexia the expression of almost all proteins analysed was reduced in the animals, suggesting impairment of cellular function.

O consumo crônico de etanol é um importante fator de risco no desenvolvimento de doenças cardiovasculares induzindo elevação da pressão arterial, inflamação, disfunção vascular e aumento do estresse oxidativo em vários tecidos. Além disso, o consumo crônico de etanol induz aumento dos níveis de Fator de necrose tumoral-? (TNF-?). O tecido adiposo perivascular (Perivascular adipose tissue - PVAT) é reconhecido como uma importante fonte de adipocinas e citocinas pró-inflamatórias e esse tecido está envolvido na fisiopatologia de diferentes doenças cardiovasculares. A hipótese deste trabalho é a de que o consumo crônico de etanol estimule a produção de TNF-? no tecido vascular, que por sua vez, induzirá um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), redução da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), inflamação vascular, prejuízo na função do PVAT, alteração da reatividade vascular e aumento da pressão arterial. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do TNF-? nas disfunções vasculares induzidas pelo consumo de etanol e avaliar o papel do PVAT em tais danos. O trabalho mostra que o consumo crônico de etanol por 12 semanas induziu aumento da pressão arterial sistólica (PAS) em camundongos machos C57BL/6 (Wild Type -WT) e este aumento foi menor nos animais nocautes para os receptores R1 do TNF-? (TNFR1-/-). O tratamento com etanol não alterou o relaxamento vascular induzido por acetilcolina e nitroprussiato de sódio (NPS). O consumo de etanol induziu aumento da geração de ânion superóxido (O2-), aumento das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e redução dos níveis de peróxido de hidrogênio (H2O2) em aortas com e sem PVAT (PVAT+ e PVAT-, respectivamente) de animais WT, mas não em camundongos TNFR1-/-. Houve aumento da atividade da catalase (CAT) e da superóxido dismutase (SOD) em aorta PVAT- e PVAT+ e redução dos níveis plasmáticos da glutationa reduzida (GSH) em animais WT, mas não em TNFR1-/-, após o consumo crônico de etanol. Não houve alteração na atividade da glutationa peroxidase (GPx) na aorta dos grupos estudados após o consumo de etanol. Observou-se redução dos níveis de nitrato/nitrito (NOx) em aortas de animais WT após o consumo de etanol, porém não em camundongos TNFR1-/-. O consumo de etanol gerou aumento tecidual das citocinas TNF-? e IL-6 e aumento da atividade da mieloperoxidase (MPO), evidenciando uma exacerbada inflamação vascular e indicando migração de neutrófilos para o tecido aórtico. Tais alterações não foram observadas em animais TNFR1-/-. Os resultados mostram pela primeira vez a participação do TNF-? no aumento da pressão arterial, no aumento do estresse oxidativo e nos prejuízos vasculares induzidos pelo consumo crônico de etanol. O tecido adiposo perivascular não apresentou qualquer efeito benéfico nas alterações supracitadas. / Chronic ethanol consumption is an important risk factor in the development of cardiovascular diseases, inducing increased blood pressure, inflammation, vascular dysfunction and enhanced oxidative stress in several tissues. Furthermore, chronic ethanol consumption induces the production of Tumor necrosis factor-? (TNF-?). Perivascular adipose tissue (PVAT) is known as an important source of adipokines and proinflammatory cytokines. This tissue is involved in the pathophysiology of different cardiovascular diseases. The hypothesis of this work is that the chronic ethanol consumption stimulates the production of TNF-?, which in turn, will induce an increase in reactive oxygen species (ROS) generation, nitric oxide (NO) reduction, vascular inflammation, impairment of PVAT function, alterations of vascular reactivity and increased blood pressure. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of TNF-? in chronic ethanol consumption-induced vascular dysfunctions and to evaluate the role of PVAT in such damages. This study demonstrated that chronic ethanol consumption for 12 weeks induced an increase in systolic blood pressure (SBP) in C57BL/6 mice (wild type-WT) and this increase was blunted in TNF-? receptor 1 knockout mice (TNFR1-/-). There was no change in vascular relaxation induced by acetylcholine and sodium nitroprusside (NPS). Ethanol consumption increased the superoxide anion (O2-) generation, thiobarbituric acid reactive species (TBARS) and reduction of hydrogen peroxide (H2O2) levels in aorta without and with PVAT (PVAT- and PVAT+, respectively) from WT animals, but not from TNFR1-/- mice. There was an increase in catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) activities in aorta PVAT- and PVAT+, decrease on plasma reduced-glutathione (GSH) levels from ethanol-treated WT but not in TNFR1-/-. Ethanol consumption did not change glutathione peroxidase (GPx) activity in any group. Nitrate/nitrite (NOx) aortic levels were decreased in WT animals, but not in TNFR1-/- after chronic ethanol consumption. Ethanol consumption increased TNF-?, IL-6 cytokines and myeloperoxidase activity (MPO) which suggest a strong vascular inflammation and migration of neutrophils into the aortic tissue. Such changes were not observed in TNFR1-/- mice. The results show for the first time the participation of TNF-? in the increase of blood pressure, increase of oxidative stress and vascular dysfunction induced by the chronic ethanol consumption. The perivascular adipose tissue had no beneficial effect on these changes.

Pubertal development is an outcome of genes\' interaction producing molecular signals that rule physiological mechanisms. Understanding the genetic changes surrounding the peripubertal period in Nellore heifers could unveil certain differences in age at puberty because they reach sexual maturity much later than European heifers. The adipose tissue regulates energy metabolism and is an endocrine organ with active participation in reproductive processes .The present study aimed at understanding the functions of the adipose tissue around pubertal time in Nellore heifers. Our strategy was to search for differences in gene expression between prepubertal and pubertal animals. We quantified gene expression in the adipose tissue for Nellore heifers who reached puberty according to either the early or late pattern. This research was done on 30 Nellore heifers monitored weekly from 230 kg bodyweight until the onset of puberty through gynaecological ultrasound examination. The onset of puberty was defined by the presence of corpus luteum in the ovary and blood progesterone > 1 ng/ml. Adipose tissue was collected through subcutaneous biopsy; the first biopsy was done when heifers reached 230 kilos bodyweight and subsequently once a month until they entered puberty. Biopsies were collected of each heifer that reached puberty alongside its half-sister who had not reached puberty. We analysed samples of six early pubertal heifers and their six late pubertal sisters at two different stages: at the time of ovulation and approximately 50 days before ovulation. The RNA was extracted from the biopsies\' tissue and gene expression quantified through RNA sequencing. There were nine genes differentially expressed in pubertal heifers that have been found previously correlated with reproductive traits and/or processes in mammals on other studies. These genes were APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B and CYP26B1, already found expressed in adipocytes, hypothalamus, ovaries and uterus, corroborating previous knowledge of a link among energy metabolism, reproductive organs and neural influence. By measuring the genetic changes and correlating them with known physiological mechanisms on the nervous system and reproductive organs during puberty, we detected genes expressed here that are related to modifications in the organism as a whole. Therefore the adipose tissue may be regarded as an instrument to indicate what is going on during reproductive processes. The results presented here may aid in a better understanding of genetic changes happening during peripubertal period. / O desenvolvimento púbere é o resultado da interação de genes que produzem sinais moleculares regulando os mecanismos fisiológicos. A compreensão das mudanças genéticas que permeiam o período peripuberal em novilhas Nelore (Bos indicus) poderia desvendar o porquê das diferenças em idade a puberdade, pois elas atingem a maturidade sexual mais tarde que o gado europeu (Bos taurus). O tecido adiposo regula o metabolismo de energia e é um órgão endócrino que tem participação ativa em processos reprodutivos. O presente estudo teve como objetivo entender as funções do tecido adiposo na época peripubertal em novilhas Nelore. Nossa estratégia foi procurar diferenças em expressão gênica entre animais pré-púberes e púberes. Nós quantificamos a expressão gênica no tecido adiposo de novilhas Nelores precoces ou tardias. A pesquisa foi feita em 30 novilhas Nelore, monitoradas semanalmente a partir do momento em que atingiram 230 kg de peso até a manifestação da puberdade por exame de ultrassom ginecológico. O momento da puberdade foi definido pela presença de corpo lúteo no ovário e concentração sanguínea de progesterona maior que > 1 ng/ml. O tecido adiposo foi coletado por biópsia subcutânea; a primeira biópsia foi feita quando as novilhas alcançaram 230 quilos de peso e subsequentemente uma vez por mês ate que elas entrassem em puberdade. As biópsias foram coletadas de cada novilha que atingiu a puberdade e de sua meia-irmã que não tinha atingido a puberdade. Nós analisamos amostras de seis novilhas púberes precoces e de seis novilhas púberes tardias em dois estágios diferentes: no momento da ovulação e aproximadamente 50 dias antes da ovulação. O RNA foi extraído do tecido das biopsias e a expressão genica quantificada através de sequenciamento de RNA. Encontramos nove genes diferencialmente expressos em novilhas púberes que foram previamente relacionados com características e/ou processos reprodutivos de mamíferos em outros estudos. Esses genes foram APOD, CYP17A1, DNMT3B, AKR1C4, TENM1/ODZ3, HPSE, SMPD3, FAM134B e CYP26B1, já encontrados expressos em adipócitos, hipotálamo, ovários e útero, comprovando conhecimento prévio da conexão existente entre metabolismo de energia, órgãos reprodutivos e influencia neural. Ao medir as mudanças genéticas e correlacioná-las com mecanismos fisiológicos conhecidos em sistema nervoso e órgãos reprodutivos durante a puberdade, nós conseguimos identificar genes expressos em adiposo que são relacionados a modificações no organismo como um todo. Sendo assim, o tecido adiposo pode ser considerado um instrumento para indicar o que está acontecendo durante os processos reprodutivos. .Os resultados apresentados aqui podem ajudar na melhor compreensão de mudanças genéticas durante o período peripuberal.

Os hormônios tireoidianos exercem um reconhecido e potente efeito lipolítico no Tecido Adiposo Branco (TAB); no entanto pouco se conhece acerca dos mecanismos moleculares envolvidos nessas ações. Sabe-se que os principais efetores da ação lipolítica nesse tecido são a lipase hormônio sensível (LHS) e a lipase dos triglicerídeos específica dos adipócitos (ATGL), as quais hidrolisam os triglicérides em ácidos graxos e glicerol. Outros componentes envolvidos na atividade lipolítica são os receptores beta adrenérgicos, que ao reconhecerem os seus ligantes, elevam o conteúdo de AMPc intracelular, com subseqüente aumento da atividade da PKA, e as perilipinas, proteínas que envolvem a gota de gordura, formando uma barreira protetora contra a ação da LHS e ATGL, de modo que precisa ser hidrolisada para que a LHS e ATGL possam exercer seu efeito lipolítico. Considerando a importância do tecido adiposo na homeostase energética e que as ações lipolíticas dos HT têm sido pouco exploradas, é objetivo deste estudo e investigar se os HT interferem com a expressão das mesmas. / Thyroid hormones exert a recognized and potent lipolytic effect in white adipose tissue (TAB), yet little is known about the molecular mechanisms involved in these actions. It is known that the main effectors of the lipolytic action in this tissue is hormone-sensitive lipase (HSL) and lipase specific adipocyte triglycerides (ATGL), which hydrolyze triglycerides into fatty acids and glycerol. Other components involved in the lipolytic activity are the beta adrenergic receptors, which recognize their ligands to elevate intracellular cAMP content, with subsequent increased activity of PKA, and perilipin, proteins involving the fat droplet, forming a protective barrier against the action of HSL and ATGL, so that must be hydrolyzed to the HSL and ATGL lipolytic may exert its effect. Considering the importance of body fat for energy homeostasis and that the lipolytic actions of HT have been little explored, and purpose of this study is to investigate whether HT interfere with the expression of the same.

A gestação é um momento marcado por intensas alterações no organismo materno. Com o intuito de amenizar essas mudanças e diminuir o ganho de peso, algumas mulheres utilizam de dietas nutricionalmente desbalanceadas, sendo frequente a maior ingestão de determinadas substancias e a diminuição de outras. Porém, o uso desse artifício para controle de peso durante a gestação culmina em problemas não bem elucidados pela comunidade acadêmica, visto que o estado nutricional adequado da mãe é essencial para uma gestação saudável. Objetivando verificar uma possível influência da ingestão de uma dieta hiperproteica (HP) na prenhez de camundongos swiss e no desenvolvimento inicial da prole, o regime alimentar das fêmeas prenhes foi alterado para uma dieta contendo 42% de proteína, sem perda dos demais nutrientes. A dieta foi alterada por todo o período de prenhez, sendo a ingestão alimentar e o ganho de peso das fêmeas acompanhados diariamente. Os animais foram organizados em quatro grupos experimentais, sendo que em dois deles a prenhez foi interrompida no 19º. dia de gestação (ddg), para coleta de rim fetal e placentas (Controle-19 e HP-19). Nos demais grupos (controle e HP), a gestação chegou a termo e foi analisado o desenvolvimento físico e neurológico inicial dos filhotes durante o primeiro mês de vida, bem como seu crescimento e ganho de peso. No 32º dia pós-nascimento, os filhotes foram eutanasiados, via deslocamento cervical, juntamente com as mães, para avaliação morfológica e morfométrica do tecido adiposo marrom, tecido adiposo branco e rim. Análises de peroxidação lipídica renal e hepática foram realizadas em tecidos maternos, fetais e dos filhotes. Todos os dados foram analisados quanto à normalidade e seguidos para testes específicos, dentre eles Teste T, Mann Whitney e ANOVA Two-Way seguido de pós-teste Bonferroni. A ingestão e o ganho de peso materno durante a gestação foi menor/// em mães alimentadas com dieta HP, assim como a área média dos adipócitos brancos, número de glomérulos renais e quantidade de proteína nos rins. Filhotes fêmeas e machos de mães HP tiveram a abertura de olho tardia, o que ocorreu também com a abertura da vagina em filhotes fêmeas. A proporção rim/tíbia dos filhotes foi alterada de maneira contrária em filhotes machos e fêmeas. O ganho de peso em filhotes fêmeas e o crescimento naso-caudal de filhotes machos também sofreram alterações. A área média de adipócitos marrons apresentou-se menor em filhotes do sexo masculino, concomitantemente com um aumento da área em adipócitos brancos. A dieta não alterou a quantidade de proteína no tecido renal e hepático de fetos e neonatos, porém evidenciou uma diminuição da peroxidação lipídica renal e em placentas de 19o. ddg. O tratamento materno com a dieta HP não provocou alterações na placentação ou na morfologia deste órgão. Em conclusão, os dados apontam que a dieta HP pode afetar o organismo materno, a homeostase gestacional e o desenvolvimento inicial dos filhotes, podendo, possivelmente, acarretar maiores problemas a longo prazo na vida destes animais. / Pregnancy is a period of intense changes in the mother's body. In order to minimize these changes and decrease weight gain pregnant women can use nutritionally unbalanced diets. However, this kind of diet during pregnancy can generate several problems to the mother and fetus, as an appropriate nutritional status of the mother is essential to maintaining the homeostasis during pregnancy. Here we aim to evaluate the influence of the high-protein diet intake (HP) on Swiss mice pregnancy, as well in the initial development of the puppies. Thus we have used a diet containing 42% protein, without loss of other nutrients, throughout the gestational period, measuring the food intake and maternal weight gain. The animals were randomized in four experimental groups and in two of them the gestation was interrupted on the 19th. gestational day (gd) to fetus, kidney and placenta dissection (Control-19 and HP-19). On further goups (Control and HP) gestational period was concluded and during first month of life of the puppies, their physical and neurological development were analyzed, as well as, their growth rate and weight gain. At 32 days post-birth, the puppies and mothers were euthanized, through cervical dislocation, for morphological and morphometric evaluations of brown adipose tissue, white adipose tissue and kidney. Analyses of renal and hepatic lipid peroxidation were conducted on mothers, fetal and puppies tissues. All data were analyzed for normality and by specific tests, including t-test, Mann Whitney and ANOVA Two-Way followed by Bonferroni post-test. The intake and body weight gain during pregnancy was lower in mothers fed with HP diet, as well as the white adipocytes average size, number of glomeruli and protein amount in the kidneys. Females and males puppies of HP mothers had the eye opening later than the controls, which also occurred with the vagina opening on females. The kidney/tibia proportion was altered in an opposite way between male and female puppies. The weight gain on female puppies and the nose/tail growth in male puppies have also changed. Brown adipocytes average area was also lower in male puppies, differently to the area increased of white adipocytes. The diet did not alter the amount of protein in renal and hepatic tissues of pups and fetuses, but showed a decrease of the lipid peroxidation in female kidney and 19th. gd placenta. Maternal treatment with HP diet did not alter the placenta morphology. In conclusion, these data indicate that the HP diet has effect on mother's organism, gestational homeostasis and initial development of puppies can possibly leading to greater long-term problems in the lives of these animals. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG / Programa Institucional de Bolsas de Pós-Graduação - PIB-PÓS

O desenvolvimento de adipócitos termogênicos/bege no tecido adiposo branco (TAB) pode reduzir os efeitos adversos da obesidade e melhorar a saúde metabólica. Certos agentes farmacológicos e nutricionais podem promover esses efeitos ativando fatores de transcrição ou vias regulatórias, promovendo o browning do TAB. Como suplemento nutricional ou dietético, os compostos presentes no chá verde (CV) têm demonstrado fortes correlações entre o metabolismo energético e a perda de peso corporal (PC), no entanto, sua potencial contribuição para o desenvolvimento de células termogênicas/bege foram fracamente investigadas. O objetivo principal deste estudo foi avaliar a relação entre as alterações metabólicas induzidas por uma dieta obesogênica e a indução de células termogênicas/bege em camundongos obesos tratados com CV. Além disso, foi avaliado o efeito de uma mistura contendo as principais catequinas do CV (EGCG (2 <font face = \"symbol\">mM), EGC (1 <font face = \"symbol\">mM), ECG (0,6 <font face = \"symbol\">mM) e EC (0,4 <font face = \"symbol\">mM)) (Sigma) em uma concentração final de 4 <font face = \"symbol\">mM e o extrato de CV a 0,19% na indução de fenótipo bege in vitro (pré-adipócitos 3T3-F442A). Nós demonstramos que os camundongos induzidos à obesidade (dieta de cafeteria/16 semanas) e tratados com CV (500 mg/kg de PC) durante 12 semanas mostraram uma redução significativa nos indicadores de obesidade, ganho de peso, depósitos de gordura, hiperlipidemia e incremento nos níveis plasmáticos de adiponectina sem alteração na ingestão alimentar. A taxa metabólica basal foi aumentada, assim como, os genes envolvidos na oxidação de AG, termogênese e marcadores de células bege no TA subcutâneo de animais obesos tratados com CV. O CV também diminuiu a inflamação e o estresse de retículo endoplasmático induzido pela dieta e a resistência à insulina (RI). Nós também sugerimos pela primeira vez que o tratamento com CV induz um ciclo fútil que envolve a de novo lipogênese para ativação da via termogênica in vivo e in vitro. A mistura de catequinas e o extrato de CV demonstraram redução significativa no acúmulo de lipídios, além de induzir a expressão de marcadores termogênicos relacionados à oxidação de AG e ativação mitocondrial, bem como o consumo de oxigênio. O efeito termogênico do CV e do mix de catequinas ocorre de maneira autônoma e dependente da modulação temporal de fatores adipogênicos como o PPAR<font face = \"symbol\">g. Nosso estudo identificou que as alterações metabólicas promovidas pela ingestão de CV induzem o gasto energético e comprometem o destino final da célula adiposa, ainda em etapas iniciais do processo de adipogênese, com modulações que envolvem a via do PPAR<font face = \"symbol\">g, associado à ativação de um ciclo fútil e indução do fenótipo bege. Essas alterações culminam em uma estratégia terapêutica eficiente de combate à obesidade e suas co-morbidades. / The development of thermogenic/beige adipocytes in white adipose tissue (WAT) might reduce the adverse effects of obesity and could help to improve metabolic health. Certain pharmacological and nutritional agents can promote those effects by activating transcription factors or regulatory signaling pathways furthering WAT browning. As a nutritional or dietary supplement, compounds present in green tea (GT) has demonstrated remarkable correlations between energy metabolism and body weight (BW) loss, however, their potential contributions to the development of thermogenic/beige cells have been scarcely investigated. The aims of this study were to evaluate the relationship between metabolic alterations induced by an obesogenic diet and the induction of thermogenic/beige cells in GT-treated obese mice. We also evaluated the effect of a mix containing the main catechins found in GT (EGCG (2<font face = \"symbol\">mM), EGC (1<font face = \"symbol\">mM), ECG (0.6<font face = \"symbol\">mM) and EC (0.4<font face = \"symbol\">mM)) (Sigma) in a final concentration of 4<font face = \"symbol\">mM and a GT extract at 0.19%.in the induction of beige phenotype in vitro (3T3-F442A preadipocytes). Here, we show that obese-induced mice (cafeteria diet/16 weeks) that were treated with GT (500 mg/kg of BW) for 12 weeks showed a significant reduction in indicators of obesity such as BW gain, fat depots, hyperlipidemia and an increment in plasma adiponectin levels without alteration in food intake. The basal metabolic rate was increased as well as genes involved in FA oxidation, thermogenesis and beige cells markers in the subcutaneous AT of obese animals treated with GT. GT also decreased inflammation and endoplasmic reticulum stress induced by the diet and relief insulin resistance (IR). We also find that our treatment was able to induce a futile cycle through de novo lipogenesis to activate the thermogenic pathway in vivo and in vitro. The mix of catechins or the GT showed significant reduction of lipid accumulation and upregulated the expression of thermogenic markers related to FA oxidation and mitochondrial activation, as well as, oxygen consumption. The effects of GT and the mix of catechins occur in an autonomous manner and seems to be dependent on initial mechanism in adipogenesis through PPAR<font face = \"symbol\">g participation. Our study identified that the metabolic alterations caused by GT ingestion induce energetic expenditure and compromise the final commitment of adipose cell, still in the initial stages of the adipogenesis process, with modulations involving the PPAR<font face = \"symbol\">g pathway, associated to the activation of the futile cycle and induction of beige phenotype. These alterations culminate in an effective therapeutic strategy to combat obesity and its comorbidities.