O propósito do presente estudo foi avaliar o efeito da síndrome da caquexia associada ao cancer sobre o balanço de citocinas anti e pró-inflamatórias no tecido adiposo de animais treinados. Animais machos da linhagem wistar (150 +- 200g) foram divididos em seis grupos: sedentário controle (SC), sedentário tumor (ST), sedentário pair-fed ou treinado controle (TC), treinado tumor (TT) e treinado pair-fed (TPF). Os animais forma treinado em esteira rolante (60%VO2máx) por 60min/dia, 5 vezes/semana, durante 8 semans. O tecido adiposo retroperitoneal (TARP) e mesentérico (TAME) foram analisados o mRNA por RT-PCR (TNF-a, IL-1b, IL-10 e PPAR-g). O conteúdo tecidual das citocinas (TNF-a, IL-1b e IL-10) foram analisados por ELISA. No TAME, mRNA TNF-a foi aumentado no ST (p<0.05) em relação ao SC sem alteração no seu conteúdo proteíco. Todas citocinas (TNF-a, IL-1b e IL-10) analisadas no TARP foram aumentadas no ST em relação ao SC e SPF (p<0.05). Esses parâmetros não foram encontrados quando os animais eram submetidos ao protocolo de treinamento aeróbio. Conclusão: A caquexia associada ao cancer afeta o tecido adiposo, direcionando este tecido para um estado pró-inflamatório. A adoção do protocolo de treinamento preveniu esse quadro e o redirecionou para um estado anti-inflamatório. / We tested the influence of a cancer-cachexia upon the balance of anti and pro-inflammatory cytokines production in the adipose tissue of trained rats. Animals were randomly assigned to a sedentary control (SC), sedentary tumour-bearing (ST), sedentary pair-fed (SPF) or trained control (TC), trained tumour-bearing (TT) and trained pair-fed (TPF) groups. Trained rats ran on a treadmill (60%VO2max) for 60min/day, 5 days/week, for 8 weeks. Retroperitoneal (RPAT) and mesenteric (MEAT) adipose tissue mRNA expression was analyzed (TNF-a, IL-1b, IL-10 and PPAR-g) by RT-PCR. The tissue cytokines levels (TNF-a, IL-1b and IL-10) were assessed by ELISA. In MEAT, TNF-a mRNA was increased in ST (p<0.05) in relation SC with no changes in this protein level. Cytokines (TNF-a, IL-1b and IL-10) levels assessed in RPAT was increased in ST in relation SC and SPF (p<0.05). These parameters were restored to control values when the animals were submitted to the training protocol. Conclusion: Walker-256 tumour cachexia affected adipose tissue, pro-inflammatiory-induced state. Endurance training prevents damage in adipose tissue, antiinflammatory-induced state.

Atualmente, a obesidade pode ser classificada como uma pandemia. Com a clonagem do gene ob e do seu receptor, foi descoberta a leptina. Secretada principalmente pelo tecido adiposo, está diretamente correlacionada à quantidade de gordura corporal. Entretanto, diversos fatores influenciam sua expressão e síntese, tais como jejum, atividade simpática, exercício físico e alterações no balanço energético. Os efeitos do treinamento aeróbio sobre este hormônio são ainda contraditórios. Desta forma, este estudo teve como objetivo a verificação dos efeitos do treinamento aeróbio nas concentrações plasmáticas de leptina. Ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: treinado (T) e controle (C). Não houve diferença na ingestão energética e no gasto energético de repouso. Ratos treinados apresentaram menor peso corporal final, conteúdo de gordura corporal, insulinemia e melhora na resposta glicêmica. Houve maior expressão do mRNA da leptina no tecido adiposo visceral do que no subcutâneo nos dois grupos. Não houve, entretanto, diferença na expressão da leptina entre os grupos em ambos os depósitos. A menor concentração de leptina plasmática nos animais treinados ocorreu, principalmente, devido ao menor conteúdo de gordura corporal deste grupo. No entanto, após a correção da concentração de xiii leptina pelo conteúdo de gordura corporal, ainda foi observada diferença significativa entre os grupos, sugerindo que exista(m) outro(s) fator(es) de modulação das concentrações de leptina após o treinamento aeróbio, sendo a principal candidata a tal regulação a insulina / Obesity currently qualifies as a worldwide health epidemic. With the cloning of mouse ob gene and its receptor leptin was discovered. Leptin is expressed and secreted primarily by adipose tissue and is highly correlated to body fat mass. Nevertheless many factors can regulate leptin synthesis and expression, such as fasting, sympathetic activity, insulin, exercise and changes in energy balance. Endurance training effects on leptin are still contradictory. Therefore the aim of the present study was to verify the effects of endurance training on leptin levels. Male Wistar rats were separated in two groups: trained (T) and sedentary control (C). Energy intake and basal energy expenditure were not different between groups. Trained rats had lower final body weight, body fat mass, insulin levels and improved glycemic response. Leptin mRNA expression was higher in visceral than in subcutaneous adipose tissue in both groups. However, no difference in leptin expression between groups in either fat depot was found. Lower leptin levels in trained rats were due primarily to their lower body fat mass. Nonetheless, after correction for body fat mass leptin levels were still lower in exercised rats, suggesting that there might be other regulators of leptin levels in response to endurance training, being insulin the main candidate for such role

A aplicação terapêutica de Células Tronco (CT) em equinos é um campo emergente. Nestes animais, as CT são promissoras para o tratamento de lesões nos tendões e rupturas de ligamentos. Apesar das características e do potencial na restauração de tecidos lesionados, bem como dos efeitos parácrinos destas células, não existem dados a respeito do seu uso no tratamento de desordens sistêmicas que podem acometer os equinos, tais como a endometrose. A endometrose é uma doença progressiva e irreversível que leva a degeneração do endométrio e a formação de um tecido fibroso periglandular, sendo de grande relevância na medicina veterinária, por ser uma das maiores causas de infertilidade. Apesar dos constantes avanços na busca de um tratamento, nenhum obteve sucesso. Levando-se em consideração a importância da doença, o objetivo deste projeto foi utilizar CT, previamente isoladas e caracterizadas pelo nosso grupo, no tratamento da endometrose, visando diminuir o processo inflamatório e a formação do tecido fibroso periglandular. Seis éguas com endometrose foram sincronizadas. Em quatro foram infundidas CT previamente marcadas com Vybrant, e nas outras duas (controle) apenas solução fisiológica. Antes da infusão, foram coletadas biópsias uterinas e amostras para citologia. Após 7, 21 e 61 dias da infusão, foram coletadas novas biópsias e amostras citológicas. Por meio da fluorescência direta observamos a presença das CT marcadas enxertadas tanto no corpo quanto nos cornos uterinos das éguas. Através de análises histológicas observamos uma significativa melhora no aspecto morfológico e na organização do tecido uterino, bem como, das glândulas endometriais, após a infusão das CT, tal resultado foi observado progressivamente ao longo dos dias. Notamos também uma diminuição no processo de fibrose do tecido periglandular. As análises de citologia demonstraram a ausência de inflamação uterina antes e após a infusão das CT. Nossos dados sugerem que existem benefícios na utilização de CT de tecido adiposo de equinos no tratamento do tecido uterino acometido pela endometrose, que clinicamente só poderão ser validados após a prenhez desses animais. / In horses, Stem Cell (SC) therapies are a promising tool to the treatment of many injuries, as tendon lesions and ligaments rupture. Besides the characteristics and the potential in tissue restoration, as well as, paracrine effects of SC, there is no information about the use of them for the treatment of systemic disorders which can commit horses, such as endometrosis. Endometrosis is a progressive and irreversible disease which is defined as active or inactive periglandular and stromal endometrial fibrosis, including glandular alterations within fibrotic foci. Modifications induced by this disease alter the surface of endometrium which, in consequence, led to infertility. Conventional treatments do not reduce the fibrotic process or even help to restore fertility. Considering the importance of this disease, the goal of this project is to use SC, previously isolated and characterized by our group, in the treatment of endometrosis, in order to reduce inflammatory process and periglandular fibrous tissue formation, typical of this disease. Six mares with confirmed endometrosis were synchronized for the use as animal model in this work. In four of animals we infused stem cells previously marked with Vybrant, and the other two (control group) were infused with saline solution. Before the infusion, uterine biopsies and also samples for cytology were collected. After 7, 21 and 61 days of cells infusion new biopsies and cytology samples for analysis were collected. We observed, by direct fluorescence, the presence of marked cells grafted in both body and uterine horns of treated animals. Through histological analysis we observed a significant improvement in morphology and organization of uterine tissue, as well as endometrial glands, after infusion of stem cells, this result was observed progressively throughout the days. Furthermore, we noted a decrease in the process of periglandular tissue fibrosis, after infusion of cells. Cytology analysis showed that the animals have no uterine inflammation before or after infusion of SC. Our data suggest that there are benefits of using stem cells from equine adipose tissue in the treatment of uterus tissue affected by endometriosis, which can only be clinically validated after pregnancy of these animals.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2019-02-25T16:34:11Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1523041 bytes, checksum: 1186acd82ecb29672a2a58cdd37fc14a (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-25T16:34:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1523041 bytes, checksum: 1186acd82ecb29672a2a58cdd37fc14a (MD5) Previous issue date: 2016-07-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A obesidade infantil é considerada um importante agravo de saúde pública global, estando relacionada a diferentes complicações cardiometabólicas, como a resistência à insulina. Com o objetivo de facilitar a identificação de crianças com excesso de gordura corporal/central e resistência à insulina, foram utilizadas diferentes medidas corporais, apesar de serem controversas na população pediátrica. O objetivo deste estudo foi avaliar as medidas corporais na estimativa do excesso de gordura corporal total/central e na predição de resistência à insulina em crianças. Trata-se de um estudo transversal de base populacional realizado com 372 crianças de 8 e 9 anos matriculadas em todas as escolas públicas e particulares do município de Viçosa, Minas Gerais. Foi realizada aferição de medidas antropométricas (peso, estatura, perímetro da cintura, perímetro do quadril, perímetro do pescoço), medidas de dobras cutâneas tricipital e subescapular, composição corporal (Índice de Adiposidade Corporal - IAC, Índice de Adiposidade Corporal Pediátrico - IACp, bioimpedância elétrica bipolar, tetrapolar, equações preditivas de dobras cutâneas, Absorciometria de Raio-X de Dupla Energia - DEXA) e coleta de sangue para avaliação de glicemia e insulina de jejum. Também foram avaliadas medidas de gordura central, como relação cintura-estatura, relação cintura- quadril, índice de conicidade, razão gordura andróide-ginóide, percentuais de gorduras andróide e troncal (obtidos pelo DEXA). A partir dos valores de glicemia e insulina de jejum, foi calculado o Modelo de Avaliação da Homeotase de Resistência à Insulina (HOMA-IR) para avaliar resistência à insulina, utilizando como ponto de corte o percentil 90 da amostra. Foram observados que 42,5% e 9,9% das crianças avaliadas apresentaram excesso de gordura corporal total e resistência à insulina, respectivamente. As análises de concordância de Kappa e Bland & Altman apontaram que o IAC e o IACp apresentaram concordâncias inferiores às equações preditivas de dobras cutâneas e às bioimpedâncias bipolar e tetrapolar em relação ao DEXA. Além disso, pela curva Receiver Operating Characteristic (ROC), foi observado que o perímetro da cintura e a relação cintura-estatura foram os melhores preditores de excesso de gorduras andróide e troncal obtidas pelo DEXA. As análises na curva ROC e na regressão logística demonstraram que todas as medidas de gordura total e central foram capazes de predizer resistência à insulina em crianças, sendo que o IACp, equações preditivas de dobras cutâneas, perímetro da cintura e do pescoço, e relação cintura-estatura apresentaram maiores destaques. Conclui-se que as medidas corporais podem ser utilizadas para avaliar a gordura corporal total (equações preditivas de dobras cutâneas e bioimpedâncias bipolar e tetrapolar) e central (perímetro da cintura e a relação cintura- estatura) de crianças em relação ao DEXA, bem como para triagem da resistência à insulina. Destaca-se que a utilização destas medidas corporais são simples, seguras e não-invasivas, entretanto, sem substituir o diagnóstico por métodos-referência quando disponíveis na prática clínica e em estudos epidemiológicos. / Childhood obesity is considered an important global public health injury, and is related to different cardiometabolic complications such as insulin resistance. In order to facilitate the identification of children with excess body fat/central and insulin resistance, different body measurements were used, despite being controversial in the pediatric population. The aim of this study was to evaluate the body measurements to estimate the excess of total body fat/central and insulin resistance prediction in children. This is a cross-sectional population-based study conducted with 372 children of 8 and 9 years enrolled in all public and private schools in the city of Viçosa, Minas Gerais. Anthropometric measurements was performed (weight, height, waist circumference, hip circumference, neck circumference), skinfolds triceps and subscapularis measurements, body composition (Body Adiposity Index - BAI, Pediatric Body Adiposity Index - BAIp, bipolar and tetrapolar bioelectrical impedance, skinfold predictive equations, Dual Energy X-ray Absorptiometry - DEXA) and blood collection to assess fasting glucose and insulin. We evaluated central fat measures such as waist-height ratio, waist- hip ratio, conicity index, fat android-gynoid ratio, percentage of android and trunk fats (obtained by DEXA). The cutoff points for total body fat percentage and for android and trunk fats were used 90th percentiles of the sample according to age and sex. From the fasting glucose and insulin, the Homeostasis Model Assessment of Insulin Resistance (HOMA-IR) was calculated to assess insulin resistance, using the 90th percentile of the sample as cutoff. We observed that 42,5% and 9,9% of the children had excess total body fat and insulin resistance, respectively. The agreement analyzes of Kappa and Bland & Altman pointed out that the BAI and the BAIp had lower concordances to skinfold predictive equations and bipolar and tetrapolar impedances compared to DEXA. In addition, the curve Receiver Operating Characteristic (ROC), it was observed that waist circumference and waist-to-height ratio were the best predictors of excess android and trunk fats obtained by DEXA. Analyses on the ROC curve and logistic regression showed that all total and central fat measures were able to predict insulin resistance in children, and the BAIp, skinfold predictive equations, waist and neck circumferences, and waist-height ratio presented highlights. We conclude that the body measurements can be used to assess total body fat (skinfold predictive equations and bipolar and tetrapolar impedances) and central (waist circumference and waist-to- height ratio) of children in relation to the DEXA and for insulin resistance screening. It is noteworthy that the use of these body measurements are simple, safe and non- invasive, however, without replacing the diagnostic reference methods where available in clinical practice and in epidemiological studies.

As células tronco mesenquimais de tecido adiposo (MSCs-TA) são células progenitoras que residem entre adipócitos e contribuem para o turnover do tecido adiposo. Gangliosídios são glicoensfigolipídios localizados na membrana das células, envolvidos na regulação do crescimento celular, interação de superfície, sinalização transmembrana e diferenciação celular. O gangliosídio neural GD2 foi relatado como um marcador de superfície de células tronco mesenquimais de medula óssea e cordão umbilical, mas existem poucos dados sobre a expressão do GD2 em MSCs-TA indiferenciadas e nas diferenciadas para adipócito ou osteoblasto. Nosso principal objetivo foi estudar a expressão de gangliosídios nas MSCs-TA, em especial o GD2, durante a diferenciação adipogênica e osteogênica. Para isso, as MSCs-TA foram isoladas de lipoaspirado humano, cultivadas e induzidas para diferenciação adipogênica e osteogênica. As análises foram feitas por HPTLC, microscopia confocal, citometria de fluxo e PCR em tempo real. Por HPTLC, as MSCs-TA indiferenciadas e MSCs-TA diferenciadas para adipócitos e osteoblasto mostraram aumento do perfil de gangliosídios complexos. A microscopia confocal evidenciou os gangliosídios GM3, GM1 e GD2 na superfície das células e, por citometria de fluxo, identificamos uma subpopulação de células GD2 positivas nas MSCs-TA e MSCs-TA diferenciadas para adipócito ou osteoblasto. Entretanto, o percentual de células GD2 positivas decresceu com a diferenciação. A expressão do mRNA da GD2 sintase aumentou na diferenciação adipogênica e diminui na diferenciação osteogênica. O GD2 é um substrato para a biosíntese de gangliosídios complexos e o aumento da expressão da GD2 sintase pode estar relacionado com o aumento de gangliosídios complexos que ocorre durante a diferenciação adipogênica. / Mesenchymal Stem Cells from Adipose Tissue (MSCs-TA) are progenitor cells that reside between adipocytes, and contribute to the turnover of adipose tissue. Gangliosides are glycosphingolipids localized in cell membrane, involved in cell growth regulation, surface interaction, transmembrane signaling and differentiation. The neural ganglioside GD2 has been reported as surface marker for MSCs from bone marrow and umbilical cord, but sparse data exist about the expression of GD2 in MSCs-TA and during the differentiation to adipocytes and osteoblast. Our aim was to study the expression of glangliosides, in special of GD2 in MSCs-TA and during the adipogenic and osteogenic differentiation. Thus MSCs-TA were isolated from lipoaspirate, cultured and induced to adipogenic and osteogenic differentiation. Then, we examined the gangliosides expression by HPTLC, confocal microscopy, flow citometry and real-time PCR. By HPTLC, the MSCs-TA and MSCs-TA differentiated into adipocytes and osteoblast demonstrate an increased complex gangliosides profile. The confocal microscopy showed the presence of GM3, GM1, and GD2 on the cell surface. By the flow cytometry, we identified a GD2 positive subpopulation in MSCs-TA and in MSCs-TA differentiated to adipocytes and osteoblast. However, the percentage of GD2 positive cells decreased with the differentiation. The expression of GD2 synthase mRNA increased during the adipogenic differentiation and decreased in osteogenic differentiation. GD2 is a substrate for the complex gangliosides biosynthesis, and the increase in GD2 synthase expression could be related with the increase in complex gangliosides that occurs during the adipogenic differentiation.

O peso corporal dos animais tende a ser relativamente estável durante longos períodos de tempo. Situações de restrição calórica ou aumento na ingestão de calorias levam a alterações fisiológicas compensatórias que resistem aos efeitos destas perturbações. De fato, o gasto energético aumenta em animais submetidos à dieta hipercalórica, a chamada termogênese facultativa, de modo a manter os estoques energéticos constantes. É possível que defeitos na termogênese facultativa estejam envolvidos no desenvolvimento da obesidade. O BAT, o principal sítio de termogênese facultativa, é ativado pela liberação de NE pelo Sistema Nervoso Simpático, que se liga aos receptores adrenérgicos b1, b2 e b3 expressos nos adipócitos marrons. Diversos estudos demonstram que os receptores b são importantes na proteção contra a obesidade, mas ainda não é claro qual o papel de cada isoforma neste processo. Assim sendo, o objetivo do nosso trabalho foi avaliar o papel das isoformas b1 e b2 na mediação da termogênese facultativa induzida pela dieta. Para tanto, nós tratamos camundongos com nocaute para o receptor adrenérgico b1 (KOb1) e camundongos com nocaute para o receptor b2 (KOb2) com dieta hipercalórica por 22 semanas. O peso corporal foi medido diariamente e o consumo de oxigênio foi determinado usando-se um sistema de respirometria aberto ao final do experimento. A composição corporal foi determinada pela análise da carcaça. Animais foram expostos ao frio de 4ºC por 4h e sua temperatura corporal foi medida em vários tempos e a resposta térmica do iBAT foi determinada pela infusão de NE ou agonista b adrenérgico. Além disso, foram determinados os níveis de RNAm das isoformas de receptores adrenérgicos b nos animais nocaute. Os resultados obtidos em nosso estudo mostram que os animais KOb1 e KOb2 tratados com dieta hipercalórica não desenvolvem obesidade mais severa do que os animais selvagens mas não são capazes de aumentar o consumo de oxigênio induzido pela dieta, sugerindo que estes receptores não são relevantes na termogênese induzida pela dieta. Por outro lado, nossos dados indicam que a presença do receptor b1 é exigida para termogênese induzida pelo frio, uma vez que os camundongos KOb1 são sensíveis ao frio e a capacidade termogênica do BAT destes animais em reposta à NE é bastante reduzida quando comparados com animais selvagens. A ausência do receptor b2 não piora a resposta dos animais ao frio sugerindo que esta isoforma não esteja envolvida na termogênese induzida pela dieta ou pelo frio. Os nossos achados indicam que a isoforma do receptor adrenérgico b1 é fundamental na termogênese induzida pelo frio, mas não pela dieta. Além disso, é provável que a termogênese induzida pela dieta seja regulada por mecanismos distintos da termogênese induzida pelo frio. / The body weight of animals tends to be relatively stable over long periods of time. Situations of caloric restriction or increase in intake of calories lead to compensatory physiological changes that resist the effects of these disorders. In fact, the energy expenditure increases in animals treated with diet hypercaloric called facultative thermogenesis, in order to keep to energy stock constant. Defects in this facultative thermogenesis may be related to the development of obesity. Brown adipose tissue is the main site of facultative thermogenesis and is activated by signaling of b1, b2 e b3 adrenergic receptors by Norepinephrine released by Sympathetic Nervous System. Several studies showed that the isoforms b of adrenergic receptors are important in mechanisms involved in obesity and also in promoting cold tolerance. Nonetheless, it is unclear the role of each isoform in these process. Therefore, the purpose of our study was to evaluate the role of isoforms b1 and b2 in mediate the facultative thermogenesis. For that, we fed nocaute mice for the adrenergic receptor b1 (KOb1) and nocaute mice for the adrenergic receptor b2 (KOb2) with high fat diet for 22 weeks. During treatment body weight was determined daily. By the end of the experiment oxygen consumption was measured using a system of open respirometry and body composition was determined by analysis of the carcass. We also exposed KOb1 and KOb2 animals to cold (4C). The thermogenic response of iBAT was evaluated through i.v NE infusion. The results obtained in our study showed that the animals KOb1 and KOb2 treated with high fat diet did not gain more fat when compared to wild type animals, but are unable to increase the oxygen consumption, suggesting that these receptors are not relevant in development of obesity. Furthermore, our data indicate that the presence of the b1 receptor is required for cold-induced thermogenesis, since the KOb1 mice are sensitive to cold and BAT thermogenic response is significantly impaired when compared with animals wild type. The absence of b2 receptor does not worsen the response of animals to cold suggesting that this isoform is not involved in the diet- or cold- induced thermogenesis. In conclusion, our findings indicate that the b1 isoform of the adrenergic receptor is critical in the cold-induced thermogenesis, but not in diet induced thermogenesis. Moreover, it is likely that the diet-induced thermogenesis and cold-induced thermogenesis are regulated by different mechanisms.

Introdução: O número de indivíduos com sobrepeso e obesidade está aumentando, e a busca por entender mecanismo relacionados a esta doença se mostram cada vez mais importantes. O gene FTO foi o primeiro gene associado à obesidade, mas não se sabe muito a respeito de como é regulado e suas vias. MiRs são pequenos RNAs regulatórios que podem estar associados à obesidade, como também na regulação do gene FTO. Dessa forma, pretendemos identificar a relação do gene FTO e do hsamir-150 com sobrepeso/obesidade, perfil lipídico e glicemia de jejum. Métodos: Homens e mulheres (18 anos ou mais), com IMC > 25 kg/m2 participaram do presente estudo e foram analisadas a expressão do gene FTO, expressão do mir-150, parâmetros bioquímicos do sangue e antropometria. Resultados: Observamos a expressão do gene FTO estar relacionada à obesidade, LDL e glicemia de jejum. Conclusão: O gene FTO parece de fato estar relacionado à obesidade, LDL e glicemia de jejum, diferentemente do mir-150 / Introduction: The overweight population is growing in the entire world, and the search for obesity-associated mechanisms is important for a better understanding of this disease. The FTO gene was the first obesity associated gene. Otherwise, its pathways and how it can be regulated remain unknown. MiRs are small no coding RNAs that may be associated to obesity and FTO gene regulation. Thus, the aim of this study was to verify the relationship among the FTO gene and the mir-150 expression with overweight/obesity lipid profile and fast blood glucose. Methods: Men and woman (18 years older or above), with body mass index > 25 Kg/m2, were enrolled in the present work and the FTO gene and mir-150 expression, biochemical parameters of blood and anthropometric measure were analyzed. Results: The results highlight that the FTO gene expression is associated to obesity, LDL and fasting blood glucose. Conclusion: Indeed, the FTO gene seems to be related to obesity, LDL and blood fasting glucose, differently of the mir-150

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Ingestão precoce de dieta enriquecida com óleo de peixe reverte alterações bioquímicas, hepáticas e do tecido adiposo na prole de camundongos submetidos à restrição protéica. 2010. 61 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Humana e Experimental) Instituto de Biologia Roberto Alcântara Gomes, Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2010. Estudos relacionam obesidade na vida adulta com baixo peso ao nascer (programação metabólica). O fígado é um dos órgãos mais afetados pela programação. O óleo de peixe é rico em ácidos graxos poli-insaturados (AGP) da família n-3: ácido eicosapentaenóico (EPA) e docosahexaenóico (DHA). O EPA e DHA são relacionados com redução da pressão arterial sistólica e ação anti-inflamatória. Testar a hipótese que a ingestão precoce de óleo de peixe (FO) pode reverter os efeitos deletérios da programação na prole adulta de camundongos. Fêmeas grávidas foram alimentadas com ração padrão (SC) ou dieta restrita em proteínas (LP) durante a gestação e lactação. Ao desmame, os seguintes grupos foram formados (de acordo com a suplementação com FO): SC-SC e SC-FO, LP-SC e LP-FO. Foram aferidas massa corporal, ingestão e eficiência alimentar, pressão arterial sistólica (PAS), insulina plasmática, glicose, fator de necrose tumoral (TNF)-alfa, colesterol total (CT), triglicerídeos (TG) e alanina aminotransferase (ALT), morfometria dos adipócitos, estereologia do fígado e expressão proteínas SREBP-1c e PPAR-alfa. A prole LP apresentou maior massa corporal, hipercolesterolemia e hiperglicemia Na idade adulta, os animais restritos tornaram-se hipertensos, com esteatose hepática e elevado nível da SREBP-1c. Entretanto, a prole LP com dieta suplementada com FO ocasionou menor ganho e menor massa corporal final. A dieta FO melhorou o metabolismo lipídico, diminuiu a concentração plasmática de CT e TG, reduziu a massa adiposa e o tamanho dos adipócitos. Além disso, LP-FO mostrou níveis reduzidos da ALT, redução da esteatose hepática, baixa expressão da SREBP-1c e aumento da expressão do PPAR-alfa, além de redução da PAS e dos níveis de TNF-alfa. A dieta com FO teve efeitos benéficos revertendo as respostas da programação sobre o metabolismo da glicose e lipídios, estrutura hepática e tecido adiposo na prole adulta programada. / Studies related obesity in adult life with malnutrition in early life, called metabolic programming. The liver seems to be one of the most affected by fetal programming. Fish oil is rich in polyunsaturated fatty acids (PUFA) of n-3 family: eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA). EPA and DHA are related with several biological reactions, like systolic blood pressure reduction and anti-inflammatory properties. We hypothesized that early fish oil (FO) intake would revert the programming responses in adult offspring. Pregnant mice were fed either standard chow (SC) or low-protein diet (LP) throughout pregnancy/lactation. At weaning, the following groups were formed (FO means supplemented with fish oil): SC-SC and SC-FO, LP-SC and LP-FO. We measured body mass, food intake, feed efficiency, blood pressure (BP), levels of plasma insulin, glucose, tumor necrosis factor (TNF-alpha), total cholesterol (TC), triglycerides (TG) and alanine aminotransferase (ALT). We also measured adipocyte morphometry, liver stereology and expression of the SREBP-1 and PPAR-alpha proteins.The LP offspring are predisposed to becoming fat, hypercholesterolemic and hyperglycemic. In addition, during adulthood, they become hypertensive with hepatic steatosis and had high level of SREBP-1. However, LP offspring that were fed FO-enriched diet had decreased body mass gain and lower final body mass. In addition, with FO diet, these mice have improved lipid metabolism with decrease in plasma TC and TG levels, reduced fat pad masses and adipocyte size. Furthermore, LP-FO offspring show low ALT level, reduced liver steatosis with low SREBP-1 protein expression and high PPAR-alpha expression, and improvement of BP and TNF-alpha level. Early fish oil intake has beneficial effects reversing the programming responses that control body mass, glucose and lipid metabolism, and liver and adipose tissue structure in adult programmed offspring.

O objetivo deste trabalho foi o de averiguar se o exercício físico somado a suplementação com melatonina em animais pós-púberes, modifica a adiposidade e a regulação da atividade lipolítica, nos tecidos adiposos das regiões subcutânea inguinal e retroperitoneal, além de verificar possíveis efeitos antigonadotróficos decorrentes do tratamento com melatonina. A concomitância do treinamento físico e da suplementação com melatonina durante 8 semanas em ratos Wistar, foi mais eficiente em promover reduções no diâmetro dos adipócitos e, consequentemente, na adiposidade do que o uso isolado do treinamento físico ou da suplementação com melatonina. Entretanto, não foram observadas alterações na atividade lipolítica, e nem na lipogênese, medidas em adipócitos isolados das regiões estudadas. A suplementação promoveu hipogonadismo com consequente redução da testosteronemia, além de uma redução da massa do músculo extensor digital longo. evidenciando assim a necessidade de se aprofundar os estudos sobre os impactos do uso de melatonina sobre o eixo hipófise-hipotálamo-gônadas. / Hence, the purpose of this study was to investigate whether the physical exercise plus supplementation with melatonin in postpubertal animals modify adiposity and regulation of lipolysis in the inguinal subcutaneous and retroperitoneal adipose tissues, away from assessing the possible antigonadotropic effects resulting from melatonin treatment. The concomitance of physical training and melatonin supplementation for 8 weeks in rats were more efficient in promoting reductions in adipocyte size and hence in adiposity than physical training or melatonin supplementation alone. However, no changes were observed in lipolysis or in lipogenesis, measured in isolated adipocytes from investigated the fat depots. We also showed that, even at this low dose, melatonin promoted hypogonadism with consequent reduction of the testosteronemia and a reduction in extensor digitorum longus muscle mass, thus evidencing that further studies on the impacts of the use of melatonin the hypothalamic-pituitary-gonadal axis are actually needed.

A hiperglicemia crônica no diabetes está relacionada com distúrbios nas vias de sinalização da insulina e do mTOR, e com o desbalanço na secreção de adipocinas pelo tecido adiposo branco (TAB). Em longo prazo, esta disfunção metabólica pode causar uma perda severa de massa adiposa, o que agrava a resistência à insulina (RI). Estudos têm destacado o potencial efeito da suplementação com leucina no tratamento de doenças metabólicas como o diabetes tipo 2 e obesidade. No entanto, os efeitos da leucina sobre a homeostase glicêmica e a sensibilidade à insulina em doenças em que ocorre perda severa de gordura ainda necessitam melhores esclarecimentos. Portanto, foi investigado se a suplementação crônica com leucina pode afetar a adiposidade de ratos diabéticos com perda intensa de TAB, e melhorar a RI e outras desordens metabólicas relacionadas com TAB. Ratos recém-desmamados foram distribuídos em 3 grupos: i) Grupo controle (C) - não diabético e recebiam ração controle; ii) Grupo diabetes (D) - diabético e recebiam ração controle; iii) Grupo diabetes Leucina (DL) - diabético e recebiam ração suplementada com 5% de L-leucina. Após 8 semanas, foram analisados: glicemia e insulinemia de jejum, HOMAIR, citocinas pro- e anti-inflamatórias no soro e tecido adiposo branco, expressão de proteínas (mTOR, p-MTOR, p70S6K1, p-p70S6K1, PPAR&#947, C/EBP&#945;, ACC1, FAS, AKT, p-AKT) nos tecidos adiposos subcutâneo (SC) e retroperitoneal (RP), bem como a expressão de RNAm da adiponectina e leptina no TAB. In vivo, foram realizados testes de tolerância oral à glicose (OGTT) e de sensibilidade à insulina (ITT), glicemia pós prandial e consumo de ração. O tratamento crônico com leucina reverteu a perda de massa adiposa dos coxins subcutâneo e viscerais neste modelo experimental, o que pode ser explicado pelo aumento da expressão da p-p70S6K1, PPAR&#947;, ACC1 e FAS, proteínas que estimulam a adipogênese e lipogênese de novo nos adipócitos. Além disso, houve um aumento da expressão de AKT total no coxim SC no grupo DL, mas não foi alterada no coxim RP, indicando que a leucina também pode melhorar a resistência à insulina por ativar a AKT, que é considerada enzima limitante da cascata de fosforilação da insulina. Por outro lado, a leucina melhorou o perfil de adipocinas secretadas pelo coxim RP, pois aumentou a secreção de adiponectina e IL-10. Estas citocinas, direta ou indiretamente, reduzem a RI em tecidos como fígado, TAB e músculo esquelético. Isto sugere que a ação da leucina sobre a sensibilidade à insulina no coxim subcutâneo parece estar mais relacionada com a recuperação da via de sinalização da insulina, ao passo que, no coxim RP está indiretamente relacionada com a melhora do perfil de adipocinas secretadas por este tecido. Estes dados corroboram com os resultados de HOMAIR, glicemia de jejum e pós prandial, OGTT e ITT, nos quais foi observada uma significativa melhora do quadro de intolerância à glicose e resistência à insulina em ratos diabéticos tratados com leucina. Em conclusão, a suplementação crônica com leucina aumentou a adiposidade corporal em ratos diabéticos induzido por estreptozotocina no período neonatal, o que foi relacionado com a melhora da intolerância à glicose e da resistência à insulina. Isto demonstra que a recuperação trófica do tecido adiposo branco é fundamental para a melhora dos distúrbios metabólicos relacionados ao metabolismo da glicose neste modelo experimental. / The chronic hyperglycemia in diabetes is associated with disturbances in insulin and in mTOR pathways, and changes in adipokine secretion in white adipose tissue (WAT). Long-term, this metabolic dysfunction can cause a severe loss of fat mass, which increases insulin resistance (IR). Studies have highlighted the effect of leucine supplementation in treatment of metabolic diseases as type 2 diabetes and obesity. However, the effects of leucine on glucose homeostasis and insulin sensitivity in diseases with intense fat loss remain unknown. Therefore, was investigated whether chronic leucine supplementation can affect the adiposity of diabetic rats with severe adipose tissue loss, and to improve the IR and other metabolic disorders associated with WAT. After weaning, rats were distributed in 3 groups: i) control group (C) - no diabetic and received control chow ; ii) diabetes group (D) - diabetic and received control chow; iii) Leucine Diabetes Group (DL) - diabetic and received diet supplemented with 5% L-leucine. After 8 weeks, were analyzed: fasting glycaemia and insulin, HOMA>IR, antiinflammatory and proinflammatory cytokines in serum and in WAT, protein expression of mTOR, p-MTOR, p70S6K1, p-p70S6K1, PPAR&#947;, C/EBP&#945;, ACC1, FAS, AKT, p-AKT in subcutaneous (SC) and retroperitoneal adipose tissue, as well as the RNAm expression of adiponectin and leptin in WAT. In vivo, were realized oral glucose tolerance test (OGTT) and insulin sensitivity test (ITT), postprandial glycaemia and chow ingestion. O chronic treatment with leucine recovered the adipose mass in subcutaneous and visceral fat pad in this experimental model, this was explicated by increase of protein expression of p-p70S6K1, PPAR&#947;, ACC1 and FAS that stimulate the adipogenesis and de novo lipogenesis in adipocytes. Moreover, had an increase of protein expression of total AkT in subcutaneous fat pad in group DL, but don\'t change in RP fat pad, indicating that the leucine can to activate the AKT, which is limiting enzyme of phosphorylation cascade of insulin, and improve the insulin resistance. On the other hand, leucine improved the profile of adipokines secreted in RP fat pad, because increased the secretion of adiponectin and IL-10. This cytokines reduced the insulin resistance in tissues as liver, WAT and skeletal muscle. This suggest that action of leucine on insulin sensitivity in subcutaneous fat pad is more related to recovery of insulin signaling, and in RP fat pad is indirectly related to improve of profile of adipokines secretion in this tissue. This data corroborates with results of HOMAIR, postprandial and fasting glycaemia, OGTT and ITT, which showed significant improve of glucose intolerance and insulin resistance in diabetic rats treated with leucine. In conclusion, the chronic leucine supplementation increased adiposity in streptozotocin-induced diabetic rats in neonatal period, which was related to improve of glucose intolerance and insulin resistance. This show that trophic recovery of white adipose tissue is important for improve of metabolic disturbances related to glucose metabolism in this experimental model.