Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-19T17:38:36Z No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-22T14:39:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-22T14:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EmilyNobregaBorges_orig.pdf: 8024064 bytes, checksum: 49b3d2c0d8fbc875089d66f5ede59c83 (MD5) Previous issue date: 2009 / O presente trabalho teve como objetivo testar diferentes crioprotetores na criopreservação de tecido ovariano suíno. Ovários suínos (n=3) foram coletados em abatedouro local. De cada ovário foram retiradas 10 fatias do córtex ovariano, sendo uma imediatamente fixada (controle) e outra submetida ao cultivo in vitro (Controle CIV). As outras 8 amostras foram criopreservadas, em pares, usando 4 diferentes crioprotetores: DMSO (1,5 M), etilenoglicol (EG 1,5 M), glicerol (GLY 10%) ou propanoglicol (PROH 1,5M) adicionados de 0,4% de sacarose. As amostras foram congeladas pelo método lento e estocadas em nitrogênio líquido por 7 dias. Posteriormente, o tecido ovariano foi descongelado, o crioprotetor foi removido por lavagens sucessivas em meio contendo concentrações decrescentes dos crioprotetores em questão e 0,4% de sacarose. Após a remoção do crioprotetor uma amostra de cada tratamento foi imediatamente fixada e a outra colocada em cultivo in vitro (CIV) com duração de 2 horas e em seguida fixada. As amostras foram processadas para histologia e microscopia eletrônica de transmissão. A porcentagem de folículos morfologicamente normais (FMN) após a criopreservação utilizando DMSO (67,0±4,9), EG (81,8±1,4) e PROH (55,9±9,9) foi significativamente menor (P<0,05) do que a observada no controle fresco (97,7±1,2). Quando o tecido ovariano foi criopreservado com GLY, nenhum folículo morfologicamente normal foi encontrado (0%). Depois do CIV, o tecido criopreservado com PROH (40,1±2,9) apresentou a menor porcentagem de FMN quando comparado aos outros tratamentos e ao controle (85,1±3,3 DMSO CIV; 84,6±3,4 EG CIV; 97,5±1,2 controle CIV). Em geral, a ultraestrutura dos folículos criopreservados com DMSO ou EG, antes e após o cultivo in vitro, foi similar. Apesar de sua ultraestrutura não ter sido muito diferente do controle, algumas alterações leves puderam ser observadas. Em conclusão, a criopreservação de tecido ovariano suíno utilizando DMSO ou EG permite a preservação de um grande número de folículos pré-antrais com morfologia normal. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present work aimed to test different cryoprotectants on cryopreservation of pig ovarian tissue. Pig ovaries (n=3) were collected at a local slaughterhouse. From each ovary 10 cortex slices were taken, and one was immediately fixed (control) and another placed in in vitro culture (IVC control). The other 8 samples were cryopreserved, in pairs, using 4 different cryoprotectants: DMSO (1.5 M), etilene glycol (EG - 1.5 M) glycerol (GLY - 10%) or propanediol (PROH - 1.5 M) with 0.4% sucrose. Samples were slow cooled and stored in liquid nitrogen for 7 days. After thawing and cryoprotectant removing, one sample from each treatment was immediately fixed and the other was placed in in vitro culture (IVC) for 2h and then fixed. Samples were processed for histology and transmission electron microscopy. The percentages of morphologically normal follicles (MNF) in cryopreserved tissue using DMSO (67.0±4.9), EG (81.8±1.4) and PROH (55.9±9.9) were significantly lower (P<0.05) than the observed in fresh control tissue (97.7±1.2). When ovarian tissue was cryopreserved with GLY no morphologically normal follicle could be found (0%). After IVC, PROH (40.1±2.9) presented significantly lower percentage of MNF compared to all other treatments and to the control (85.1±3.3 DMSO IVC; 84.6±3.4 EG IVC; 97.5±1.2 control IVC). In general, the ultrastructure of follicles cryopreserved with DMSO or EG, before and after in vitro culture, was similar. Although their ultrastructure was not very different from control follicles, some alterations could be observed. Signs of advanced degeneration were not observed. In conclusion, the cryopreservation of pig ovarian tissue using DMSO or EG allows a good number of MNF.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-17T12:54:02Z No. of bitstreams: 1 2012_RafaelTrindadeBurtet.pdf: 3462463 bytes, checksum: 89df14649d2036afb70464bb1a7ff07a (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-01-22T21:16:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RafaelTrindadeBurtet.pdf: 3462463 bytes, checksum: 89df14649d2036afb70464bb1a7ff07a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-22T21:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RafaelTrindadeBurtet.pdf: 3462463 bytes, checksum: 89df14649d2036afb70464bb1a7ff07a (MD5) / O transplante de órgãos é uma terapia amplamente utilizada no tratamento de doenças que levam a falência completa de um órgão, mas a rejeição ao aloenxertos devido à resposta do recipiente ainda é um fator limitante para esse tipo de intervenção. Sabe-se ainda que uma parcela dos indivíduos transplantados desenvolve espontaneamente um estado dito tolerância operacional (OT), que garante a sobrevida do enxerto, esse quadro clínico é caracterizado pela função estável do enxerto mesmo sem a utilização de drogas imunossupressoras, diferente dos outros grupos clínicos onde os indivíduos ainda fazem o uso de imunossupressão, os pacientes com doença crônica do enxerto (rejeição crônica - CR) onde existe um quadro inflamatório instaurado no órgão transplantado e pacientes estáveis (ST) onde o quadro inflamatório ainda não se manifestou. Estes diferentes estados de tolerância podem estar associados com determinantes humorais específicos e o seu padrão de reatividade talvez nos permita “ver” o mundo antigênico reconhecido por esses diferentes grupos, além disso, o conjunto de antígenos responsivos a eles podem ser utilizados como um classificador para o seu estado imunitário visando identificar padrões globais de reconhecimento e imunorregulação e contribuir para a compreensão dos mecanismos envolvidos nesses estados de tolerância. Nosso objetivo então é avaliar a reatividade de imunoglobulinas (IgM e IgG) em pacientes renais transplantados a fim de encontrar um padrão na resposta imune humoral destes pacientes que nos levam a um possível marcador imunoregulatório para a progressão ou não para o estado de tolerância dos indivíduos. Nesse sentido foram utilizadas as técnicas de phage display e peptide microarray, ambas apresentando uma matriz aleatória de peptídeos ao repertório de anticorpos dos grupos clínicos estudados na tentativa de encontrar aqueles que caracterizem um determinado grupo pelo seu grau de interação com esses painéis peptídicos. Os peptídeos reativos selecionados por phage display foram obtidos a partir de sua capacidade de se ligar a IgG e IgM adsorvidas na placa de microtitulação. Um protocolo subtrativo foi padronizado para assegurar a seleção diferencial dos peptídeos. Após um único ciclo de seleção entre cada grupo de pacientes, 196 clones de fagos foram isolados e sequenciados: 150 peptídeos foram selecionados a partir de indivíduos saudáveis (74 eluídos e 76 subtraídos), 34 peptídeos foram selecionados a partir de indivíduos tolerantes operacionais (13 eluídos e 21 subtraídos) e 12 peptídeos foram selecionados a partir de indivíduos rejeição crônica (6 eluídos e 6 subtraídos). Os peptídeos reativos selecionados por peptide microarray foram obtidos a partir dos microchips fornecidos pelo grupo da Dra. Michal Orguil, onde cada microarray era dividido em três submatrizes (subarrays) exibindo a mesma biblioteca de 1.000 peptídeos aleatórios (942 15-mers). A média da intensidade de sinal (SI) de cada spot (microambiente ou ponto de incubação do microchip onde ocorre a interação do peptídeo com os anticorpos do plasma ou com os controles) foi lida em R e a médias das SIs das repetiçoes intrachip (n=3) foram calculadas para cada peptídeo (n=942). Para explorar o potencial classificatório das sequência peptídicas presentes nos microchips, foram utilizadas técnicas computacionais de predição baseadas em classificação supervisionada por Potencial Suport Vector Machine (PSVM) e Análise de Componente Principal (PCA). A comparação entre a intensidade de sinal dos peptídeos dos grupos selecionados revelou que a SI das amostras OT tende a ser maior que as amostras CR e ST, mas um pouco menor quando comparada com as amostras HE. A variação da SI é tendencialmente mais baixa nos grupos de estudo sob imunossupressão (ST e CR). A taxa de variação estimada dentro dos grupos ST e CR é em torno de três vezes mais baixa em comparação com OT e HE. As análises de PCA indicam uma variação biológica reduzida nos grupos sob imunossupressão. Embora, os dois primeiros componentes principais encontrados expliquem 77,2% da variação do conjunto de dados, o PCA falhou em separar os grupos de estudo quando todos os grupos eram analisados em conjunto. No entanto, as amostras de pacientes sob imunossupressão (ST e CR) formam um conjunto muito próximo, enquanto as amostras OT e HE estão muito difundidas no biplot. Isso esta de acordo com a variação reduzida na SI dos peptídeos observava nos grupos CR e ST. Na validação cruzada leave-one-out, o classificador discriminou três pares de grupos de estudo (OT vs. CR, ST + CR vs. HE+OT, CR vs. HE) com BACC maior ou igual a 66.0%. Quando as análises foram feitas aos pares (biplot) o algoritmo de P-SVM extraiu 16 características únicas (peptídeos) para o subproblema OT vs. CR (BACC=73.8) respondendo por 91.7% da variância nos dados desses grupos (utilizando o PCA) e 22 características únicas (peptídeos) para o subproblema CR vs. HE (BACC=66%), respondendo por 68.3% da variância nos dados desses grupos (utilizando o PCA). Com isso conseguimos um conjunto de peptídeos randômicos selecionados por P-SVM que discriminaram OT-CR (n=16) ou CR-HE (n=22). _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Organ transplantation is a widely used therapy in the treatment of diseases that lead with complete organ failure but the allograft rejection because of the host response is still a limited factor to this type of intervention. Knows that a host transplant portion spontaneously develop a state called operation tolerance, that guarantee the survival of the graft. This clinical is characterized by the stable function of the graft even without the use of immunosuppressive drugs, different from the others clinical groups where the host still do the use of immunosupression. The patients with chronicle graft disease - a inflammatory picture established into the transplanted organ exist and stable patient - inflammatory picture not yet manifested. These different states of tolerance may be associated with specific humoral determinants, where the reactivity allows us to "observe" the antigens world, and the set of responsive antigens could be used as a ''sorter'' to the immune status in order to identify global patterns of recognition and immunoregulation and to contribute for the understanding of mechanisms of these states. Our aim is to evaluate the reactivity of antibodies (IgG and IgM) in kidney transplant patients in order to find a humoral immune response patterns of these patients that leads to a possible immunoregulatory marker for progression or not to the tolerance status of the individuals. For this purpose we used a phage display and peptide microarray techniques, both presenting a random panel of peptides to the clinical groups repertoire of antibodies in an attempt to find those that characterize a particular group by their level of interaction with these peptide panels. The reactive peptides selected by phage display were obtained by their capacity of binding to patients adsorbed plasma IgM or IgG. A subtractive protocol was used to ensure the differential selection of binding peptides. After a single selection cycle between each group of patients,196 isolated phage clones were sequenced: 150 peptides were selected for healthy patients (76 subtracted and 74 eluted), 34 peptides were selected for operational tolerance patients (21 subtracted and 13 eluted) and 12 peptides were selected for chronic rejection patients (6 subtracted and 6 eluted). No major sequence bias was found among the peptides of each group, but sequences substrings differences were found using odds-ratio. The reactive peptides selected by peptide microarray were obtained from the microchips provided by Dr. Michal Orguil group. Each microarray was split into three subarrays displaying the same library of 1,000 random peptides (942 15-mers). Median spot signal intensity (SI) were read into R using the function readData and the mean SI across subarrays (n=3) was calculated for each peptide (n=942). To explore the potential classification of the peptide sequences present in microchips that was carried out using an R implementation a computational prediction techniques based in supervised data classification algorithm, Potential Support Vector Machine (P-SVM) and Principal Component Analysis (PCA). Comparison of sorted group mean peptide SI revealed that OT samples SI tend to be higher than those in CR and ST but lower than those in HE samples. The variance of peptide SI is tendentially lower in the study groups under immunosuppression (ST and CR). The estimated average variance within the ST and CR groups is about three times lower compared to the OT or HE group. Principal Component Analysis (PCA) indicates reduced biological variability within study groups under immunosuppression. Although the first two principal components were found to explain 77.2% of the data set’s variance, PCA failed to separate individual study groups. However, samples from patients under immunosuppression (ST, CR) form a very tight cluster while OT and HE samples are widespread in the biplot, and agree with the reduced peptide SI variance observed in the CR and ST group. In leave-one-out cross-validation, the classifier was been discriminated three pairs of study groups (OT vs. CR, ST+CR vs. HE+OT, CR vs. HE) with a balanced accuracy (BACC) of more or equal to 66.0%. When the analyses was done in pairs (biplot), the P-SVM algorism extracted 16 unique characteristics (peptides) for the subproblem OT vs. CR (BACC=73.8) answering for 91.7% of the dates variance in those groups (using PCA analysis) and 22 unique characteristics (peptides) for the subproblem CR vs. HE (BACC=66%), answering for 68.3% of the dates variance in those groups (using PCA analysis). Which that we got a set of random peptides selected for P-SVM and PCA that discriminate OT/CR (n=16) and CR/HE (n=20)

Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-11-30T13:53:38Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daniella Mota Silva - 2012.pdf: 3271983 bytes, checksum: 99a6d63c282c21b5c3ced5fe6efe4944 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Rejected by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com), reason: O resumo em português está cortado, olhe no formulário de metadados se está completo. on 2018-12-03T13:12:51Z (GMT) / Submitted by Liliane Ferreira (ljuvencia30@gmail.com) on 2018-12-04T13:07:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Daniella Mota Silva - 2012.pdf: 3271983 bytes, checksum: 99a6d63c282c21b5c3ced5fe6efe4944 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-12-05T09:55:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Daniella Mota Silva - 2012.pdf: 3271983 bytes, checksum: 99a6d63c282c21b5c3ced5fe6efe4944 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-12-05T09:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação - Daniella Mota Silva - 2012.pdf: 3271983 bytes, checksum: 99a6d63c282c21b5c3ced5fe6efe4944 (MD5) Previous issue date: 2012-10-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / CyrtopodiumsaintlegerianumRchb. f is an epiphytic species typical of the Midwest, especially in distributed Brazilian Central Plateau, and has a wide geographical distribution in Brazil. It is usually found in the trunks of palm trees, forming large clumps. It has good features for ornamentation, for the beauty and size of its inflorescence, however, are not found in the literature about its conservation, methods for its spread or that could be used in floriculture and landscaping. Thus, this study aimed to establishing protocols for germination asymbiotic effects of phytohormones and acclimatization and characterization of chromosomal species. In 2010, the establishment of micropropagation protocols, capsules were collected in a pasture area in the municipality of Mossâmedes, GO, then the part previously sterilized seeds were separated and tested in a 1% tetrazolium dye.. For cultivation was tested asymbiotic different culture media and then tested after different concentrations and combinations in treatments BAP 16 / ANA, to finally evaluate the acclimatization substrates combined and fertilized with chemical fertilizers and organic. For the karyotype of the species, the plant material is derived from plants grown in vitro in culture medium. We tested four protocols, with differences in enzyme solution for softening the roots, dyes, anti-mitotic concentration of the solution and hydrolysis, and the use of growth regulators for root induction in vitro. All protocols were in common roots pretreated with anti-mitotic 8-hydroxyquinoline (0.002 M) in refrigerator for 24 hours. Then protocols roots were fixed in Carnoy 3:1 for 18 hours the first and second and third and fourth protocol for 24 hours at room temperature. After stored at -20 º C in the same fixative for further analysis (only the fourth protocol). The roots of the protocols were stained with different dyes: hematoxylin, Schiff, acetic orcein and Giemsarespectively.The results of germination was satisfactory in all culture media. For medium supplemented with auxin / cytokinin combined the best concentrations for variable height were 0.2 mg L-1 NAA and BAP without adding control without addition of regulators. The best means to induce large numbers of shoots were 4 mg L-1 BAP and 4 mg L-1 BAP / 0.2 mg L-1 NAA. The number of leaves was rated best in the concentrations of BAP without NAA at concentrations of 1.0, 2.0 and 4.0 mg L-1. The treatments with the highest number of roots were control without added growth regulators at doses of 0.2, 0.5, 1.0 mg L-1 NAA without addition of BAP, as well as the length of roots was favored by the same treatments. The largest number occurred in callus treatment with concentrations of 1.0 mg L-1 BAP without adding ANA. ForcytogeneticsC. saintlegerianum the best protocol was evaluated with the regulator which was obtained metaphases, however chromosomes were condensed, and the number of chromosomes was found to be 2n = 48. cides. / CyrtopodiumsaintlegerianumRchb. f é espécie epífita da região Centro-Oeste, distribuída no Planalto Central brasileiro, e tem ampla distribuição geográfica no Brasil. É encontrada em de troncos de palmeiras, formando grandes touceiras. Possui características para ornamentação, pela beleza de sua inflorescência, contudo não são encontrados na literatura estudos sobre sua conservação ou propagação. Assim, esse trabalho teve como objetivo o estabelecimento de protocolos para germinação assimbiótica, efeitos de fitohormônios, aclimatização e a caracterização cromossômica da espécie. Em 2010, para o estabelecimento de protocolos para a micropropagação, cápsulas foram coletadas em uma área de pastagem no município de Mossâmedes, GO, foram previamente desifestadas em seguida parte das sementes foram separadas e testadas em corante tetrazólio a 1%. Para o cultivo assimbiótico, foram testados diferentes meios de cultura e diferentes concentrações e combinações de BAP/ANA em 16 tratamentos. Foram testados substratos combinados e adubação com fertilizante químico e orgânico para a aclimatização das plântulas. Para o cariótipo da espécie, o material vegetal foi proveniente de plantas cultivadas in vitro em meio de cultura. Foram testados quatro protocolos, com diferenças quanto a solução enzimática para o amolecimento das raízes, os corantes, concentração do antimitótico e solução de hidrólise, e o uso de regulador de crescimento para indução de raízes in vitro. Todos os protocolos tiveram em comum raízespré-tratadas com anti-mitótico 8- hidroxiquinoleína (0,002M) em geladeira durante 24 horas. Em seguida nos protocolos as raízes foram fixadas em Carnoy 3:1 por 18 horas o primeiro e o segundo protocolo e o terceiro e o quarto por 24 horas em temperatura ambiente. Depois estocados a -20ºC no próprio fixador, para posterior análise (apenas o quarto protocolo). As raízes dos protocolos foram coradas com diferentes corantes: hematoxilina, reativo de Schiff, orceína acética e Giemsa respectivamente. A germinação foi satisfatória em todos os meios de cultura. Para o meio suplementado com auxina/citocinina combinadas as melhores concentrações para a variável altura foi 0,2 mg L-1 de ANA sem adição de BAP e o controle sem adição de reguladores. Os melhores meios que induziram grande número de brotações foram 4 mg L-1 de BAP e 4 mg L-1 de BAP / 0,2 mg L-1 de ANA. O número de folhas foi melhor avaliado nas concentrações de BAP sem ANA nas concentrações 1,0; 2,0 e 4,0 mg L-1. Os tratamentos com maior número de raízes foram o controle sem adição de reguladores de crescimento, e nas dosagens de 0,2, 0,5, 1,0 mg L-1 de ANA sem adição de BAP, assim como o comprimento da maior raiz foi favorecido pelos mesmos tratamentos. O maior número de calos se deu no tratamento com concentrações de 1,0 BAP mg L-1 sem adição de ANA. Para a citogenética de C. saintlegerianumo melhor protocolo avaliado foi com regulador no qual foi obtido metáfases, no entanto os cromossomos se encontravam condensados, e o numero de cromossomos encontrado foi de 2n=48.

A autólise acinar post mortem em glândulas sublinguais humanas é um fenômeno que prejudica a sua análise microscópica. Com o objetivo de esclarecer e prevenir tal ocorrência, a presente investigação foi planejada no sentido de analisar morfometricamente as possíveis influências do intervalo post mortem (IPM) e do volume de fixador histológico (VF) na ocorrência de autólise de ácinos em glândulas sublinguais de ratos. Dos sessenta animais utilizados na investigação, cinqüenta deles o foram no estudo do intervalo post mortem, sendo divididos em 2 grupos: o grupo I (25 animais) foi destinado para as avaliações morfométricas e o grupo II (25 animais) para determinação do fator de retração e densidade da glândula. Os grupos I e II foram subdivididos nos subgrupos: A e A1 (controle - 0 hora), B e B1 (3 horas post mortem), C e C1 (6 horas), D e D1 (12 horas) e E e E1 (24 horas), com 5 animais em cada um. A fixação foi realizada com 20 mL de solução de formol a 10% em tampão fosfato. Os 10 animais remanescentes foram destinados ao estudo da variação de volume do fixador, e foram divididos em 2 grupos iguais: no grupo 2mL, as glândulas dos 5 animais foram fixadas com 2 mL de solução de formol a 10% tamponada, e no grupo 20mL, as glândulas dos outros 5 animais foram fixadas com 20 mL da mesma solução. O tempo de fixação foi de 7 dias para todos. As glândulas foram processadas histologicamente, sendo os cortes histológicos corados com H.E. A análise morfométrica foi realizada em 50 campos histológicos por glândula, selecionados por amostragem sistemática, usando objetiva de 100x e ocular Kpl 8x contendo um retículo de integração constituído por 100 pontos simetricamente distribuídos. A densidade de volume dos ácinos íntegros e autolisados foi avaliada pelo método morfométrico de volumetria relativa de contagem de pontos. Houve diferença estatisticamente significante entre o IPM e a autólise acinar (p< 0,05), enquanto que não houve diferença significante quanto ao VF (p= 0,690). A autólise acinar aumentou significantemente com o aumento do período post mortem (p<0,05). Baseado nos resultados obtidos foi possível concluir que a autólise acinar em glândulas sublinguais de ratos está diretamente relacionada ao intervalo post mortem, não sendo influenciada pelo volume de fixador histológico testado no experimento. / Acinar post mortem autolysis is a phenomenon that difficult the microscopic analysis in human sublingual glands. The aim of the present study is to evaluate the influence of the post mortem interval (PMI) and formalin volume (FV) in the occurrence of acinar autolysis in sublingual glands of rats. Sixty animals were used in this study. Out of them fifty animals were divided in 2 groups for PMI investigation: group I (25 animals) for morphometric quantifications and group II (25 animals) to calculate the retraction factor and the density of the glands. The groups I and II were subdivided in subgroups with 5 animals each: A and A1 (control - 0 hour), B and B1 (3 hours post mortem), C and C1 (6 hours), D and D1 (12 hours) and E and E1 (24 hours). The remaining 10 animals were used for the FV study and were divided in two groups with different volume of formalin, 2mL and 20mL respectively. The fixation period was 7 days. The glands were processed and stained with HE. The morphometric analysis was performed in 50 histological fields, selected by systematic sampling, using lens of 100x and ocular Kpl 8x containing a Zeiss II integration grid with 100 points symmetrically distributed. The volume density of intact and autolysed acini was evaluated by the morphometric method of relative volume of counting of points. There was a statiscally significant difference between volume density acinar autolysis and PMI for all group tested (p=0,0001). The difference was not significant for FV (p = 0,690). We concluded that acinar autolysis in rat sublingual glands increased significantly with the PMI, not being influenced by the FV, as tested.

A bioengenharia de tecidos baseia-se no uso de moléculas bioativas, células-tronco e biomateriais para reparação de tecidos e/ou órgãos. Biomateriais podem ser classificados de acordo com sua origem em sintéticos ou biológicos. Biomateriais biológicos podem ser produzidos por decelularização, que visa a remoção de células da matriz extracelular (MEC), a qual deve manter sua integridade química e física. Placentas são órgãos de grande interesse na bioengenharia de tecidos visto que são descartadas após o parto e possuem grande volume de matriz extracelular. Métodos de decelularização podem ser classificados em químicos, físicos e enzimáticos. Todos conhecidamente causam alterações na MEC, sendo que a associação deles é comumente utilizada. Este trabalho comparou diferentes protocolos e estabeleceu um método mais favorável para a decelularização de placentas caninas, visando a produção de um biomaterial para futuras aplicações clínicas. Inicialmente ambas as porções - materna e fetal - das placentas foram submetidas à 10 protocolos, que avaliaram variáveis como concentração e tempo de incubação em detergentes, diferentes gradientes de temperatura e a influência da perfusão versus imersão das soluções, na MEC remanescente. Com base na transparência do tecido e na ausência de núcleo celular em cortes histológicos, dois protocolos foram selecionados (I e II). Além dos critérios já mencionados, ambos os protocolos foram comparados quanto à quantidade de DNA remanescente na MEC decelularizada e à permanência e distribuição de algumas das proteínas da matriz. O detergente SDS foi o mais eficaz na remoção de células, embora não tenha sido suficiente para promover uma decelularização tecidual completa. O congelamento prévio das placentas requereu um maior tempo de incubação posterior das amostras nos distintos detergentes. Ambos métodos de perfusão e imersão foram eficazes na remoção das células, embora grande concentração de proteínas do citoesqueleto tenham permanecido retidas na matriz. As amostras processadas pelo protocolo I (SDS 1%, 5mM EDTA &#43; 50mM TRIS &#43; 0,5% antibiótico, e Triton X-100 1%) apresentaram maior preservação da organização estrutural da MEC quando comparadas àquelas processadas de acordo com o protocolo II (que diferiu do anterior pela utilização de solução contendo 0,05% tripsina ao invés de 50mM TRIS), esse último método entretanto foi o que melhor removeu as células das placentas, conforme observado em lâminas histológicas e demonstrado pela menor concentração de DNA. Tanto as porções materna quanto fetal submetidas à ambos protocolos, mantiveram as proteínas laminina, fibronectina e colágeno tipo I. O colágeno tipo III foi observado somente na porção fetal. Conclui-se que o protocolo II foi o mais eficaz no processo de decelularização de placentas caninas tendo promovido a remoção do conteúdo celular e diminuição da concentração de DNA na MEC remanescente. No entanto é necessário otimizar o tempo de incubação das placentas em soluções enzimáticas visando maior conservação do arranjo da matriz decelularizada. A análise da capacidade da MEC decelularizada por tal método para ser utilizada em bioengenharia de tecidos ainda deve ser avaliada in vitro e in vivo / Tissue engineering is based on the use of bioactive molecules, stem cells and biomaterials to repair tissues and/organs. Biomaterials can be classified according to their origin in synthetic or biological. Biological biomaterials can be produced by decellularization wich aims at removing cells from the extracellular matrix (ECM), while maintain its chemical and physical integrity. Placentas are organs of great interest in tissue engineering due to the fact that they are discarded after birth and present large amount of ECM. Decellularization methods can be classified into chemical, physical and enzymatic. All of them are known to cause changes on ECM; thus their association has been commonly used. This study compared different protocols and established a more favorable method for decellularization of canine placentas, aiming at the production of a biomaterial for clinical applications. Initially both placental portions maternal and fetal were subjected to ten different protocols that evaluated variables such as concentration and time of incubation in detergents, different temperatures and the influence of perfusion versus immersion of solutions in the remaining ECM were analysed. The analysis of tissue transparence and absence of cellular nuclei in histological slices stained with HE, led to selection of two protocols (I and II). Besides the before mentioned criteria, both protocols were compared according to the amount of DNA that remained in the ECM decelullarized and the distribution of some ECM proteins. SDS was the most effective detergent for cell removal although it was not enough to complete decellularization. The freezing of placentas led to larger periods of samples incubation in different detergents. Both perfusion and immersion methods were capable of removing cells, although large concentration of cytoskeletal proteins remained entrapped in the matrix. Samples subjected to protocol I (1% SDS, 5 mM EDTA &#43; 50 mM TRIS &#43; 0,5% antibiotic, and 1% Triton X-100) better preserved the structural organization of ECM when compared to those subjected to protocol II (wich differed from the first by the use of 0,05% trypsin instead of 50mM TRIS). However, protocol II optimized cell removal as observed in histological slices and decreased the DNA concentration. Both maternal and fetal portions, subjected to both protocols, retained the laminin, fibronectin and collagen type I proteins. Collagen type III was identified only in fetal portion. In conclusion, protocol II was more effective in the decellularization of canine placentas than protocol I; it removed cellular content and decrease the concentration of remaining DNA in remaining ECM. The ability of ECM decellularized by such method to be applied in tissue engineering strategies still need to be evaluated in vitro and in vivo

Resumo não diponível.

A insuficiência hepática aguda resulta da perda súbita das funções vitais do fígado em conseqüência da perda maciça do tecido hepático. Em muitos casos, o transplante de fígado de urgência é o tratamento definitivo, apesar da capacidade regenerativa do fígado. Os mecanismos da regeneração envolvem intricadas vias de regulação, com ativação de fatores de crescimento e citocinas. A terapia celular com hepatócitos e células tronco da medula óssea tem sido proposta como alternativa terapêutica, mas seu emprego permanece no campo experimental. O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da terapia com células imobilizadas em microcápsulas de alginato de sódio na sobrevivência e na regeneração hepática em ratos Wistar machos adultos submetidos à insuficiência hepática aguda. Na primeira fase foi realizada a padronização de modelo de insuficiência hepática aguda por hepatectomia de 85% ou 90% com janela terapêutica adequada ao estudo da terapia celular. A segunda fase teve por objetivo avaliar os efeitos da terapia com células HepG2 e células da medula óssea total (MOT) e fração mononuclear (FM), contidas em microcápsulas de alginato de sódio colocadas no peritônio, sobre os níveis de glicose e lactato sanguíneos e sobre a sobrevida em 10 dias. Na fase 3, foram avaliados os efeitos da terapia celular com MOT e FM sobre a proliferação hepatocitária e os níveis séricos de citocinas e de fatores de crescimento nas primeiras 72 horas após hepatectomia de 90%. Na fase 1, mesmo utilizando ketamina e xilazina como anestésico e independentemente da suplementação de glicose, hepatectomia de 85% resultou em sobrevida de 50% em 72 horas, não adequada a um modelo de insuficiência hepática aguda. Hepatectomia de 90% sob anestesia com ketamina e xilazina determinou aumento da mortalidade, com a maioria dos óbitos ocorrendo nas primeiras 6 horas do pós-operatório. A troca do regime anestésico para isoflurano reduziu o tempo de recuperação anestésica e aumentou a sobrevida imediata permitindo uma janela terapêutica adequada. A sobrevida foi de 26,7% às 72 horas e de 6,7% aos 10 dias. Na fase 2 foram administradas microcápsulas contendo células em ratos submetidos a hepatectomia de 90%. O transplante de células da medula óssea aumentou a sobrevida em 10 dias de forma significativa em relação ao grupo sem células (MOT 1x106 células: 63,6%, P=0,002; FM 1x106: 57,1%, P=0,001 e FM 3x107: 54,5%, P=0,003). A sobrevida (30,8%) dos animais tratados com HepG2 não foi diferente do grupo sem células. Na terceira fase, às 72 horas após a hepatectomia, o grupo sem células apresentou peso dos lobos remanescentes e razão de massa hepática significativamente superiores aos dos animais que receberam MOT (P=0,001 e P=0,020) e FM (P=0,002 e P=0,008). Não houve diferença estatística significativa no número de hepatócitos em mitose e nos níveis de IL-6 entre os grupos em todos os momentos avaliados. Somente às 12 horas houve diferença significativa dos níveis de TGF-beta entre os grupos, sendo maiores no grupo sem células (P=0,036). Os valores do PDGF-BB às 48 horas do grupo sem células foram significativamente inferiores aos dos ratos tratados com FM (P=0,017). Esses resultados nos permitem concluir que hepatectomia de 90% de ratos Wistar anestesiados com isoflurano possibilita janela terapêutica adequada ao estudo da terapia celular. A terapia com células da medula óssea, imobilizadas em microcápsulas de alginato de sódio resulta em aumento da sobrevida de ratos submetidos à hepatectomia de 90%. Essa terapêutica reduziu o ganho de massa dos lobos remanescentes, mas não modificou a regeneração hepatocitária e os níveis de IL-6, de TGF-beta e de PDGF-BB durante as primeiras 72 horas após o procedimento. / Acute liver failure is caused by the sudden loss of liver vital functions due to massive loss of hepatic tissue. In most cases, emergency liver transplant is the curative treatment, despite liver’s regenerative capacity. Mechanisms of liver regeneration involve intricate regulatory pathways, with the recruitment of growth factors and cytokines. Cell therapy, either with hepatocytes or with bone marrow cells, has been proposed as a therapeutic option but remains in the experimental area. The present study aimed to investigate the effects of the therapy with cells immobilized in alginate microcapsules on the survival and hepatic regeneration of adult male Wistar rats with acute liver failure. On the first phase the acute liver failure model by 85% or 90% hepatectomy was standardized to achieve an adequate therapeutic window to study the mechanisms and effects of cell therapy. The second phase aimed to evaluate the effects of therapy using Hep G2 cells and bone marrow cells, either whole bone marrow (WBM) or mononuclear fraction (MF), in alginate microcapsules implanted in the peritoneum, on glucose and lactate levels, and 10-day survival. On phase 3, the effects of cell therapy with WBM and MF on hepatocyte proliferation and serum levels of cytokines and growth factors were evaluated in the first 72 hours after 90% hepatectomy. On phase 1, using ketamine and xylazine as anesthetic, despite glucose supplementation, 85% hepatectomy resulted in 50% survival at 72 hours, which is not adequate for a model of acute liver failure. Ninety-percent hepatectomy under ketamine and xylazine anesthesia resulted in increased mortality, although in the first 6 hours postoperatory. The change in anesthetic regimen for isofluorane reduced recovery time and increased early survival, allowing for an adequate therapeutic window. Survival was 26.7% at 72 hours and 6.7% at 10 days. On phase 2 microcapsules containing cells were implanted in rats after 90% hepatectomy. Bone marrow cell transplantation significantly increased 10-day survival over empty capsules group (WBM 1x106 cells: 63.6%, P=0.002; MF 1x106: 57.1%, P=0.001 and MF 3x107: 54.5%, P=0.003). Survival of animals treated with HepG2 (30.8%) was not different from empty capsules group. On the third phase, 72 hours after hepatectomy, empty capsules group showed significantly increase in the weight of remnant liver lobe and hepatic mass ratio compared to WBM (P=0.001 and P=0.020) and MF (P=0.002 and P=0.008). There was not statistic difference in the number of mitotic hepatocytes and in the serum levels of IL-6 between groups in any of the time points analyzed. Serum levels of TGF-beta were higher in the empty capsules group at 12 hours only (P=0.036). Serum levels of PDGF-BB in this group were significantly lower (P=0.017) than those from the MF group at 48 hours posthepatectomy. These findings suggest that 90% partial hepatectomy in Wistar rats anesthetized with isoflurane provides an adequate therapeutic window to study the effects and mechanisms of cell therapy. Cell therapy with bone marrow cells microencapsulated in alginate beads leads to increased survival in rats with 90% partial hepatectomy. This therapy reduced the weight of remnant lobes but did not changed hepatocyte regeneration and serum levels of IL-6, TGF-beta and PDGF-BB in the first 72 hours after surgery.

A doação de órgãos e tecidos para pesquisa é fundamental para uma melhor compreensão das doenças que afetam o sistema nervoso central. No estudo das doenças mentais, a pesquisa com tecido cerebral humano tem se tornado essencial para a investigação de patologias centrais através de métodos de pesquisa cada vez mais sofisticados. Mesmo assim, pouco se sabe sobre o que as pessoas que sofrem destas doenças pensam sobre a doação de órgãos e tecidos para pesquisa. Portanto, nosso objetivo foi descobrir quais são as opiniões e atitudes de pessoas que sofrem de transtorno bipolar – e seus familiares – sobre a doação de órgãos, especialmente quando a finalidade é pesquisa. Com o objetivo de investigar o que já se sabia sobre o comportamento do brasileiro frente à prática da doação de órgãos e tecidos para pesquisa, a primeira parte deste trabalho compreende uma revisão sistemática sobre o tema nas principais bases de dados (Scopus, Medline, Lilacs, Web of Science). Na segunda, foi conduzido um estudo qualitativo com entrevistas semiestruturadas em profundidade sobre doação de órgãos e tecidos para pesquisa. Os participantes possuíam diagnóstico de transtorno bipolar e estavam sendo tratados em um serviço terciário de saúde no sul do Brasil. Foi utilizada amostragem teórica. Após atingir saturação, dois casos discrepantes e os familiares dos pacientes foram incluídos para controle de qualidade. A grounded theory de Strauss & Corbin foi o método de análise de dados escolhido. Considerando os resultados da revisão sistemática, não foi possível localizar estudos que abordassem atitudes, opiniões ou conhecimento que o brasileiro pudesse ter sobre doação de tecidos e órgãos para pesquisa no Brasil nas principais bases de dados especializadas. Em relação ao estudo qualitativo, embora todos os participantes tivessem conhecimento sobre doação de órgãos para transplante, eles ficavam surpresos com a ideia da doação para pesquisa. Mesmo assim, após conversar sobre o tema e adquirir um melhor entendimento, a maioria se declarou a favor da doação. Mesmo que os participantes não tivessem conhecimento prévio sobre a doação de órgãos e tecidos para pesquisa, eles manifestaram o desejo de saber mais sobre o tema, sendo o desejo de ajudar outras pessoas e ajudar no avanço da medicina as principais razões para considerar uma doação. Acreditamos que facilitar o acesso do público em geral à doação para pesquisa é fundamental para a construção de um processo de doação ético e racional para os estudos post mortem que utilizam amostras biológicas humanas. / Organ and tissue donation for research is fundamental for the comprehension of central nervous system disorders. In mental illness, brain donation is essential for the biological investigation of central pathology through an ever increasing and progressively sophisticated availability of research means. Nevertheless, little is known regarding the thoughts of people with mental disorders regarding organ and tissue donation for research. Here, our objective was to understand attitudes and opinions of people treated for bipolar disorder – and their relatives – regarding donation in general and especially donation for research. The first part of this dissertation is dedicated to a systematic review focusing organ and tissue donation for research purposes in Brazil in main databases. The second part is a qualitative study using in-depth interviews through a semi-structured guide to gather attitudes and opinions regarding organ and tissue donation for research. Participants had a diagnosis of bipolar disorder, for which they were being treated in a tertiary facility in the south of Brazil. Theoretical sampling was used for recruitment. After we reached saturation, two outliers as well as family members of the participants treated for bipolar disorder were recruited for quality control. Strauss & Corbin’s grounded theory was used as framework for content analyses of the interviews. Considering data provided by the systematic review, there were no studies focusing population knowledge, attitudes or opinions about organ and tissue donation for research purposes in Brazil. Reflecting about data provided by the qualitative part of this dissertation, although all participants were aware of organ donation for transplant, they were surprised that tissue could be donated for research. Nevertheless, once they understood the concept they were usually favorable to the notion. While participants demonstrated a general lack of knowledge on donation for research, they were willing to learn more, with the desire to help others and to help further our knowledge about medical science often cited as motives for donation. We speculate that bridging this knowledge gap in the public can be a fundamental step towards a more ethical postmortem tissue donation process and ultimately for the investigation of central nervous system disorders.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-06T12:36:42Z No. of bitstreams: 2 versão definitiva Dissert Lúcio.pdf: 1602747 bytes, checksum: 48f60258930e1a1bb9f8d4df33cd461f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T12:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 versão definitiva Dissert Lúcio.pdf: 1602747 bytes, checksum: 48f60258930e1a1bb9f8d4df33cd461f (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / O objetivo principal desta dissertação é a investigação histórica sobre a Corporação Operária de Camaragibe, associação de caráter misto que reuniu patrões e operários da Fábrica de Tecidos de Camaragibe com o propósito de discutir e encaminhar soluções para os seus respectivos interesses de classe. Fundada no ano de 1900, a Corporação Operária foi considerada o ápice do “plano moral” da fábrica, que consistia na concessão de benefícios materiais e espirituais aos operários daquela empresa pertencente à Companhia Industrial Pernambucana (CIPER). A adoção desse plano moral foi concebida como uma parte integrante e indispensável do plano industrial posto em execução na fábrica e fundamentava-se nos princípios enunciados na Encíclica Rerum Novarum, de 1891, do papa Leão XIII, que pretendia apresentar uma solução religiosa para a questão operária por meio de uma organização cristã do trabalho nas grandes fábricas modernas. A análise abrange as duas primeiras décadas de existência da Fábrica de Tecidos de Camaragibe, mais especificamente entre 1891 e 1908, que correspondem ao período de gestação do seu plano industrial, para o qual colaboraram significativamente os gerentes Carlos Alberto de Menezes e Pierre Collier, que se tornaram personalidades proeminentes da Ação Social Católica de Pernambuco no início do século XX, movimento que assumiu a conformação de “Apostolado dos Patrões”. A pesquisa tem como metodologia a da História Social e possui fundamentação em documentação primária, com caráter exploratório, qualitativo, descritivo, analítico, bibliográfico e sistemático. Visamos, com este trabalho, a contribuir para a recuperação, mesmo que parcial, do discurso operário com relação à experiência da Corporação Operária de Camaragibe, além de analisar os limites e as possibilidades de uma participação efetiva dos operários ou/e de seus representantes no processo decisório de uma associação mista no contexto delimitado. Daí, acreditamos ser essa pesquisa relevante como contribuição para o campo da História Social do Trabalho no Brasil, e, particularmente, de Pernambuco.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-21T20:18:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Wanderberg de Araujo.pdf: 1441120 bytes, checksum: b831a302f5700d512da2f07421f2aec3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-21T20:18:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Wanderberg de Araujo.pdf: 1441120 bytes, checksum: b831a302f5700d512da2f07421f2aec3 (MD5) Previous issue date: 2015-12-15 / FACEPE / A questão ambiental na atualidade já se configura como sendo um dos problemas mais críticos. A produção e o consumo desenfreado vêm sendo um dos grandes fatores que contribuem para essa questão. A indústria de confecção, é um dos setores que costuma destinar os seus resíduos de forma inadequada, contribuindo com a poluição do meio ambiente e causando danos à saúde humana. No entanto, na maioria das vezes tais impactos justificam-se devido ao alto custo de implantar um sistema de gestão de resíduos, visto que não condiz com a realidade orçamentária de muitas dessas empresas. Desta forma, o presente estudo tem como objetivo, analisar a forma de gerenciamento dos resíduos sólidos, com foco em restos de tecidos, das micro e pequenas empresas de confecções do Agreste de Pernambuco, bem como propor formas de prevenção de resíduos na fonte e melhorias em seu gerenciamento. Para isso, foram realizadas entrevistas e aplicação de questionário para identificar o perfil das empresas e as práticas de gerenciamento de seus resíduos de tecidos. Através desta pesquisa, constatou-se que a maioria das empresas de confecções do Agreste de Pernambuco, que foram objeto de estudo na pesquisa, não possui uma política ambiental voltada para o gerenciamento de seus resíduos e, quando essas possuem, foi possível perceber que a maioria delas apenas procura cumprir o que é exigido pela legislação. No entanto, a maioria das empresas consideradas na pesquisa, não procuram por vontade própria meios de gerenciar seus resíduos sólidos de forma sustentável. Dessa forma, foram verificadas e propostas oportunidades de manuseio e produção mais limpa, como forma de prevenção e gerenciamento de resíduos sólidos nas micro e pequenas empresas de confecções do Agreste de Pernambuco. / The environmental issue today is set up be one of the problems that most it requires attention. The Production and rampant consumption has been one of the major factors contributing to this issue. The clothing industry is one of the sectors that normally intended their waste inappropriately, contributing to the pollution of the environment and causing harm to human health. However, in most cases these impacts is justified because of the high cost to implement a waste management system, as it does not reflect the reality of many of these companies. Thus, this study aims to analyze the management of solid waste, focusing on tissue debris, of the micro and small garment enterprises of the Pernambuco, and propose ways of management and prevention of waste generation in source. For this, interviews were conducted and application of questionnaire to identify the profile of the companies and the management practices of their tissue waste. Through research it was found that most of the rough clothing companies Pernambuco that went study the research object, do not have an environmental policy aimed at managing their waste, and when these have, it was revealed that most companies seek only fulfill what is required by legislation. However, do not seek ways to manage their waste in a sustainable manner. Thus, sought proposals and opportunities deployment of cleaner production as a means of prevention and solid waste management in micro and small of clothing companies Pernambuco.